一种全合成培养基、制备方法及其用于三孢布拉氏霉菌的培养方法

技术特征：
1.一种全合成培养基，其特征在于：包括碳源、氮源、微生物、无机盐和增稠剂；其中，所述增稠剂为羧甲基纤维素钠1～15g/l，所述羧甲基纤维素钠还作为碳源组分之一，所述碳源的浓度折合葡萄糖计为40～60g/l。2.根据权利要求1所述的一种全合成培养基，其特征在于：所述碳源包括：葡萄糖20～60g/l、甘油2～5g/l、蔗糖5～10g/l、乙酸钠1～3g/l、吐温-801～10g/l、吐温-200.5～5g/l、棕榈酸甲酯5～10g/l、油酸甲酯5～10g/l、亚油酸乙酯2～5g/l、肉豆蔻酸异丙酯1～3g/l中的至少一种与羧甲基纤维素钠1～15g/l的混合物。3.根据权利要求1所述的一种全合成培养基，其特征在于：所述氮源包括：尿素5～10g/l、天冬氨酸2～10g/l、谷氨酸钠2～5g/l、天冬酰胺2～5g/l、组氨酸1～1.5g/l、脯氨酸0.5～1g/l、甲硫氨酸0.1～0.2g/l中的至少一种。4.根据权利要求1所述的一种全合成培养基，其特征在于：所述无机盐包括：硫酸镁0.2～0.5g/l、磷酸氢二钾0.5～1g/l、硫酸亚铁0.05～0.15g/l、氯化锌0.05～0.1g/l、氯化锰0.02～0.06g/l、硫酸铜0.02～0.08g/l、氯化钙0.1～0.2g/l、硫酸镍0.02～0.08g/l、氯化钴0.01～0.03g/l中的至少一种。5.根据权利要求1所述的一种全合成培养基，其特征在于：所述维生素包括：vb10.002～0.01g/l、泛酸钙0.002～0.005g/l、vb
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0.002～0.005g/l、生物素0.003～0.009g/l中的至少一种。6.如权利要求1～5任一项所述一种全合成培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1)使用发酵液体积70％水溶解羧甲基纤维素钠，搅拌状态下使其充分溶解溶胀，形成无色透明溶液；2)使用发酵液体积30％的水溶解葡萄糖、甘油、蔗糖、乙酸钠、氮源、无机盐；3)混合步骤1)和步骤2)的溶液，使用氢氧化钠调节ph至6.9～7.5，采用115～125℃、20～35min进行湿热灭菌，得到灭菌后培养基；4)混合吐温-80、棕榈酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯，采用115～125℃、20～35min进行湿热灭菌，作为酯类流加底物；5)、使用、水-乙醇混合溶液溶解维生素组分，使用0.2μm无菌滤膜过滤除菌；6)、使用灭菌后的磷酸将上述步骤3)中的灭菌后培养基ph调节至6.9～7.1，加入步骤5)中过滤后的维生素组分，制成全合成培养基的主组分。7.如权利要求6方法制备的一种全合成培养基的应用，其特征在于：包括全合成培养基的主组分和酯类流加底物，用于三孢布拉氏霉菌的培养，所述培养包括一级培养、二级培养、发酵培养。8.一种三孢布拉氏霉菌的培养方法，其特征在于：将权利要求1～5任一项所述一种全合成培养基作为发酵培养基进行发酵培养，包括如下步骤：1)菌种活化：无菌条件下将三孢布拉氏霉正、负株接种于商用pda培养基斜面，25℃避光培养6d，待孢子长出后，使用无菌生理盐水将孢子洗下，得到孢子悬液；2)由孢子悬液直接接种于发酵培养基，使负菌孢子浓度以发酵培养基体积计为1.2
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105/l，负菌孢子接种培养16～24h，之后以正菌孢子数量8
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103/l接种于上述发酵培养体系，培养温度22～28℃，培养至168～268h，根据发酵监测状态进行补料；所述补料包括补加
葡萄糖、羧甲基纤维素钠和酯类流加底物。9.一种三孢布拉氏霉菌的培养方法，其特征在于：包括如下步骤：1)菌种活化：无菌条件下将三孢布拉氏霉正、负株接种于商用pda培养基斜面，25℃避光培养6d，待孢子长出后，使用无菌生理盐水将孢子洗下，得到孢子悬液；2)一级种子培养：将孢子进行计数，以一级种子液体积计，按负菌孢子数1.2
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107/l进行接种，22～26℃培养16～24h；之后，以一级种子液体积计，按正菌孢子数8
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105/l向负菌培养液接种，20～25℃培养至36～48h；3)二级种子培养：按照15～25％的接种量将一级种子接种于二级种子培养基，28℃培养12～16h；4)发酵培养：由一级或二级种子按照10～15％的接种量接种至发酵培养基，培养温度22～28℃，培养至168～268h，根据发酵监测状态进行补料；所述发酵培养基采用权利要求1～5任一项所述一种全合成培养基，所述补料包括补加葡萄糖、羧甲基纤维素钠和酯类流加底物。10.根据权利要求9所述的一种三孢布拉氏霉菌的培养方法，其特征在于：所述一级种子培养基或二级种子培养基以计包括以下组分：羧甲基纤维素钠0.5～3.5g/l、葡萄糖20～30g/l、天冬氨酸2～3g/l、天冬酰胺1～2g/l、谷氨酸钠3～5g/l、生物素0.005～0.009g/l、vb10.005g/l，还包括麦芽提取物1g/l，ph 6.9-7.1。

技术总结
本发明公开了一种全合成培养基、制备方法及其用于三孢布拉氏霉菌的培养方法。该全合成培养基包括碳源、氮源、维生素、无机盐和增稠剂；其中，所述增稠剂为羧甲基纤维素钠1～15g/L，所述羧甲基纤维素钠同时作为碳源组分之一和三孢布拉氏霉无法快速降解的增稠剂，能够维持发酵液在一定粘度，通过其他组分的调配促进三孢布拉氏霉的生长，调节其菌丝形态和菌丝球形态，提高发酵体系对溶解氧的利用率。另外，本发明提供了一种基于此培养基对三孢布拉氏霉菌的培养方法，进行发酵培养和积累类胡萝卜素，使用补料的方式、结合菌体生长变化对发酵过程进行调控，使用合成酯类流加底物促进类胡萝卜素在三孢布拉氏霉中的积累。萝卜素在三孢布拉氏霉中的积累。萝卜素在三孢布拉氏霉中的积累。


技术研发人员：卢英华 陈翠雪 段然 陈婷婷
受保护的技术使用者：厦门大学
技术研发日：2022.07.01
技术公布日：2022/11/8