血小板聚集率的检测方法及其应用和血液检测流水线与流程

血小板聚集率的检测方法及其应用和血液检测流水线
【技术领域】
1.本发明涉及血小板聚集率检测技术领域，尤其涉及一种血小板聚集率的检测方法及其应用和血液检测流水线。


背景技术：

2.血小板聚集率的大小可以用于医学诊断，如血小板聚集率降低，可用于辅助诊断尿毒症、肝硬化、原发性血小板减少性紫癫、急性白血病、mds等；而血小板聚集率升高则可以用于辅助诊断心肌梗死、心绞痛、脑梗塞死、糖尿病、深部静脉血栓形成、高β-脂蛋白血病、弥散性血管内凝血早期等。因此，血小板的聚集率的获得具有重要的临床指导意义。
3.目前血小板聚集率的测量方法一般包括光电比浊法或阻抗法，其中光电比浊法首先对全血样本进行低速离心处理，然后取上清液作为富血小板血浆(prp)，再对剩余样本进行高速离心，取其上清液作为贫血小板血浆(ppp)。prp中被认为富含一定数量的血小板，而ppp中因高速离心导致血小板沉降到下层被认为不含血小板。因此，虽然采用光电比浊法可在一定程度上反应血小板的聚集功能。但是，光电比浊法需要对样本进行离心处理以去除红细胞与白细胞对光信号的干扰，这会使得整个检测时长在30分钟以上，且去除红白细胞后的prp难以体现血小板的真实状态。而阻抗法则是使连续的单个血细胞粒子经过一个狭窄的电阻测试口，不同体积的血细胞粒子经过该检测口会得到不同的电阻峰值。检测该过程可以得到每个细胞粒子的阻抗峰位，从而根据峰值与峰位数量测试出细胞粒子的体积和数量。此种方法可以直接对全血样本进行测试。通过测试血小板聚集前后的体积变化、数量变化计算出对应检测时间点的血小板聚集率。但是，阻抗法由于是对全血样本进行直接检测，易存在红、白细胞对血小板体积测量及计数的干扰，误差较大。


技术实现要素：

4.本发明实施例的目的之一在于提供一种血小板聚集率的检测方法，以解决现有采用血小板聚集率检测效率低以及可靠性较差的问题。
5.为实现上述技术目标，采用如下的技术方案：
6.一种血小板聚集率的检测方法，包括如下的步骤：
7.向全血样本中加入抗凝剂、混匀，得到样液；
8.向所述样液中加入血小板染色液以对所述样液进行染色，得到第一待测样本；
9.取部分所述第一待测样本进行血小板检测，获取所述第一待测样本中细胞粒子的散点图和血小板浓度；
10.向剩余的所述第一待测样本中加入致聚液，以获得第二待测样本，每间隔一定时间取一部分所述第二待测样本进行血小板检测，以获取每个时间点所对应的所述第二待测样本的细胞粒子的散点图和血小板浓度；
11.根据上述检测结果，计算血小板的聚集率。
12.优选地，所述计算血小板聚集率，其预设计算公式为：
[0013][0014]
其中，p表示血小板聚集率，a0表示第一待测样本检测对应的血小板浓度检测值，an表示所述第二待测样本检测对应的第n次检测对应的血小板浓度检测值，其中n为大于等于3的自然数。
[0015]
优选地，所述第n次检测对应血小板浓度的检测值为：第n-2次、第n-1次、第n次检测血小板浓度检测相同或趋于相同时的第n次检测的血小板浓度检测数量值。优选地，所述预设计算公式为：
[0016][0017]
其中，p表示血小板聚集率检测值，a0表示所述第一次检测对应的血小板浓度检测值，a
x
表示第n-2次、第n-1次、第n次检测血小板浓度检测值相同或趋于相同时的第n-2次、第n-1次、第n次血小板浓度检测值的平均值。
[0018]
优选地，所述血小板染色液中包含血小板染色剂，其结构通式i为：
[0019][0020]
式中r1、r2、r6、r7、r8、r9选自氢原子、c
1-c
18
烷基、c
1-c
18
烷基coor
10
、c
1-c
18
烷基cor
10
、c
1-c
18
烷基cnr
10r10
、c
1-c
18
烷基or
10
中的任一种；r3、r4、r5、r
10
选自c
1-c8烷基中的任一种；
[0021]
x-选自卤素离子、硫酸根离子、磷酸根离子、卤化硼离子中的任一种；a选自c
1-c
18
烷基、ch2o、ch2ch2o中的至少一种；n选自2-20的任一数值。
[0022]
优选地，所述血小板染色液还包括缓冲剂、渗透压调节剂；
[0023]
所述缓冲剂包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲液、咪唑、磷酸盐、柠檬酸盐缓冲液中的至少一种；
[0024]
所述渗透压调节剂包括卤素盐、硫酸盐、碳酸盐、有机酸的碱金属盐、甘油、甘露醇、葡萄糖中的至少一种。
[0025]
优选地，所述血小板染色液中还能包含红细胞核酸染色剂，所述红细胞核酸染色剂结构通式ii为：
[0026][0027]
其中，r
11
、r
12
分别表示碳原子数为1～3的烷基；y表示氯离子或硫酸根离子。
[0028]
优选地，所述致聚液包括活性剂、盐和第三溶剂；
[0029]
所述活性剂包括二磷酸腺苷、胶原、花生四烯酸、凝血酶、肾上腺素、前列腺素g2、前列腺素h2、血栓烷a2中的至少一种；
[0030]
所述致聚液中所述活性剂的浓度为0.3mmol/l～3.5mmol/l；
[0031]
每毫升所述待测液中所述活性剂的添加量为2.425
×
10-6
mmol～3.5
×
10-5
mmol。
[0032]
相对于现有技术而言，本发明实施例提供的血小板聚集率的检测方法，直接对全血样本进行检测，而不需要离心、分离等步骤，不仅有效地保证了血小板的真实形态，检测过程无红细胞、白细胞对血小板的体积或者数量造成干扰，并且可以在10min之内完成检测，因此本发明实施例的检测方法具有检测效率高、检测结果可靠性好等特点。
[0033]
本发明实施例的目的之二是提供上述血小板聚集率的检测方法在血细胞分析仪上的应用，所述血细胞分析仪包括采样模块、试剂添加模块、反应模块、输送模块、检测模块和控制器：
[0034]
所述采样模块用于采集所述样液并分配至所述反应模块；
[0035]
所述试剂添加模块，用于向所述反应模块中添加血小板染色液进行染色，得到所述第一待测样本；
[0036]
所述输送模块，用于将部分所述第一待测样本送入所述检测模块进行检测；
[0037]
所述试剂添加模块，还用于向所述反应模块中剩余的所述第一待测样本添加所述致聚液，以获得所述第二待测样本；
[0038]
所述输送模块，还用于将部分所述第二待测样本按照预设时间送入所述检测模块进行检测；
[0039]
所述检测模块，包括流动室、光学单元，所述流动室与所述输送模块连接，所述输送模块用于将部分所述第一待测样本和部分所述第二待测样本按照预设时间先后分别注入所述流动室，以使得所述部分所述第一待测样本和部分所述第二待测样本分别在所述流动室形成对应的样本流，所述光学单元用于对所述样本流进行光学检测以输出检测信号，所述检测信号为细胞粒子的散点图；
[0040]
所述第一控制器获取所述检测信号，并根据所述检测信号计算血小板的聚集率。
[0041]
在一些实施方式中，所述血细胞分析仪还包括信息输出模块；所述第一控制器将获取的所述检测信号传输至所述信息输出模块，所述信息输出模块输出血小板浓度变化曲线，所述血小板浓度变化曲线的纵坐标为血小板浓度值，横坐标为时间。
[0042]
在一些实施方式中，当所述血小板浓度趋于稳定时，所述血细胞分析仪停止将所述第二待测样本注入所述流动室中。
[0043]
在一些实施方式中，所述血细胞分析仪包括血常规检测模式和血小板聚集率检测模式，当所述第一控制器接收到所述血常规检测模式信息时，所述第一控制器控制所述试剂添加模块向所述反应模块中添加血小板染色液进行染色，得到所述第一待测样本，所述输送模块将部分所述第一待测样本输送至所述检测模块进行检测，以获得血常规检测结果；当所述第一控制器接收到所述血小板聚集率检测模块信息时，所述第一控制器控制所述试剂添加模块向剩余的所述第一待测样本中添加所述致聚液，得到所述第二待测样本，所述输送模块每间隔一定时间将部分所述第二待测样本输送至所述检测模块中进行检测，以获取每个时间点所对应的检测结果，并计算血小板的聚集率。
[0044]
在一些实施方式中，当所述血小板聚集率不在30％～70％的范围时，所述第一控
制器输出检测异常信息。
[0045]
本发明实施例的目的之三在于提供上述血小板聚集率的检测方法在辅助诊断尿毒症、肝硬化、原发性血小板减少性紫癫、急性白血病、mds、心肌梗死、心绞痛、脑梗塞死、糖尿病、深部静脉血栓形成、高β-脂蛋白血病、弥散性血管内凝血早期的应用。
[0046]
本发明实施例的目的之四是提供一种血液检测流水线，包括如上所述的血细胞分析仪、凝血分析仪、拼机轨道、显示器和第二控制器；当所述血细胞分析仪计算获得的所述血小板聚集率不在30％～70％的范围时，所述显示器输出检测异常信息；所述第二控制器根据所述检测异常信息控制所述拼机轨道上的样本输送至所述凝血分析仪上进行所述样本的血小板的功能检测。
【附图说明】
[0047]
图1为本发明实施例提供的血小板聚集率的检测方法的简化流程示意图；
[0048]
图2为本发明实施例提供的血细胞分析仪的简化结构框图；
[0049]
图3为本发明实施例提供的血细胞分析仪的立体结构示意图；
[0050]
图4为本发明实施例提供的血液检测流水线的简化结构框图；
[0051]
图5为本发明实施例一提供的血小板聚集率的检测方法得到的细胞粒子随时间的散点图；
[0052]
图6为本发明实施例一提供的血小板聚集率的检测方法得到的血小板浓度随时间的变化曲线；
[0053]
图7为本发明实施例一提供的血小板聚集率的检测方法得到的血小板聚集率随时间的变化曲线；
[0054]
图8为本发明实施例一提供的血小板聚集率的检测方法与电阻抗法计数得到的血小板浓度散点图和线性拟合曲线；
[0055]
图9为本发明实施例一提供的血小板聚集率的检测方法与显微镜计数得到的血小板浓度散点图和线性拟合曲线；
[0056]
图10为本发明实施例一提供的血小板聚集率的检测方法与显微镜计数得到的未成熟血小板浓度散点图和线性拟合曲线；
[0057]
图11为本发明实施例二提供的血小板聚集率的检测方法得到的细胞粒子随时间的散点图；
[0058]
图12为本发明实施例二提供的血小板聚集率的检测方法得到的血小板浓度随时间的变化曲线；
[0059]
图13为本发明实施例二提供的血小板聚集率的检测方法得到的血小板聚集率随时间的变化曲线；
[0060]
图14为本发明实施例三提供的血小板聚集率的检测方法得到的细胞粒子随时间的散点图；
[0061]
图15为本发明实施例三提供的血小板聚集率的检测方法得到的血小板浓度随时间的变化曲线；
[0062]
图16为本发明实施例三提供的血小板聚集率的检测方法得到的血小板聚集率随时间的变化曲线；
[0063]
图17为本发明实施例四提供的血小板聚集率的检测方法得到的细胞粒子随时间的散点图；
[0064]
图18为本发明实施例四提供的血小板聚集率的检测方法得到的血小板浓度随时间的变化曲线；
[0065]
图19为本发明实施例四提供的血小板聚集率的检测方法得到的血小板聚集率随时间的变化曲线；
[0066]
图20为本发明实施例五提供的血小板聚集率的检测方法得到的细胞粒子随时间的散点图；
[0067]
图21为本发明实施例五提供的血小板聚集率的检测方法得到的血小板浓度随时间的变化曲线；
[0068]
图22为本发明实施例五提供的血小板聚集率的检测方法得到的血小板聚集率随时间的变化曲线。
[0069]
附图标记：
[0070]
10、血细胞分析仪；11、采样模块；12、试剂添加模块；13、反应模块；14、输送模块；15、检测模块；151、流动室；152、光学单元；16、第一控制器；17、信息输出模块；20、血液检测流水线；21、凝血分析仪；22、拼机轨道；23、第二控制器；24、显示器。
【具体实施方式】
[0071]
下面结合附图和实施方式对本发明作进一步说明。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0072]
另外，在本发明中涉及“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。
[0073]
请参阅图1、图2和图3，本发明实施例提供了一种血小板聚集率的检测方法，具体包括以下的步骤：
[0074]
s01、向全血样本中加入抗凝剂、混匀，得到样液。
[0075]
在步骤s01中，全血样本可以从受试者采集，具体通过采集静脉血得到。向全血样本中加入的抗凝剂的量，以能够保证全血样本在测试过程中不发生凝聚即可，抗凝剂的具体添加量可以根据全血样本的使用量进行调整。由于不需要检测血小板的聚集功能，除了枸橼酸钠外，其余的抗凝剂均会对该功能造成不可逆的影响，因此抗凝剂选自枸橼酸钠。
[0076]
s02、向骤s01得到的样液中加入血小板染色液以对所述样液进行染色，得到第一待测样本。
[0077]
在步骤s02中，血小板染色液用于对样液进行稀释并且至少对血小板的核酸进行染色。在一些实施方式中，所述血小板染色液包含血小板染色剂，以实现对血小板核酸的染色。
[0078]
在一些实施方式中，所述血小板染色剂包括结构通式i所示的至少一种血小板染色剂：
[0079][0080]
式中r1、r2、r6、r7、r8、r9选自氢原子、c
1-c
18
烷基、c
1-c
18
烷基coor
10
、c
1-c
18
烷基cor
10
、c
1-c
18
烷基cnr
10r10
、c
1-c
18
烷基or
10
中的任一种；r3、r4、r5、r
10
选自c
1-c8烷基中的任一种；x-为选自卤素离子、硫酸根离子、磷酸根离子、卤化硼离子中的任一种；a选自c
1-c
18
烷基、ch2o、ch2ch2o中的至少一种；n选自2-20的任一数值。本实施例中，血小板染色液包括上述的至少一种血小板染色剂，具有结构通式i所示的结构的血小板染色剂具有良好的细胞膜穿透性，可以穿透血小板膜对血小板内的核酸进行染色，而不容易穿透红细胞和白细胞的细胞膜继而不会对红细胞、白细胞进行染色，在此基础上实现较为精准的染色，并且该过程无须去除红细胞和白细胞，因而可以有效提高检测效率，同时又通过染色后的荧光信号筛选出血小板的散点分布，漏检、误检率低，提高了检测结果的可靠性。在一些实施方式中，所述血小板染色液中，所述血小板染色剂的含量为1mg/l～5mg/l。在一些实施方式中，血小板染色液与步骤s01所得样液的混合比例为50:1～100:1。
[0081]
在一些实施方式中，血小板染色液还包括缓冲剂、渗透压调节剂。
[0082]
在一些实施方式中，所述缓冲剂包括三羟甲基氨基甲烷(tris)缓冲液、三(羟甲基)甲基甘氨酸(tricine)缓冲液、咪唑、磷酸盐、柠檬酸盐缓冲液中的至少一种。缓冲剂用于保持ph值，避免过酸或者过碱对血细胞形态、结构以及生理特性等造成完全的破坏，此外，缓冲剂还可以使得血细胞球形化，以便于识别和统计等。
[0083]
在一些实施方式中，所述渗透压调节剂包括卤素盐、硫酸盐、碳酸盐、有机酸的碱金属盐、甘油、甘露醇、葡萄糖中的至少一种。
[0084]
在一些实施方式中，血小板染色液还包括第一溶剂，以用于溶解缓冲剂和渗透压调节剂。具体地，第一溶剂包括去离子水、双蒸水。
[0085]
在一些实施方式中，所述血小板染色液中各组分的含量分别为：所述缓冲剂3g/l～20g/l、所述渗透压调节剂0.02g/l～0.5g/l。在一些实施方式中，所述血小板染色液的ph为8～10，渗透压为160mosm/kg～230mosm/kg。血小板染色液的ph值维持在8-10之间，可以有效地维持血细胞的形态、结构和生理特性在适合检测的范围内，而渗透压可以维持样液中的渗透压低于血细胞在正常状态下的渗透压(300mosm/kg)，从而可以迫使扁平的红细胞和原形态散乱的血小板均适度地吸水胀大成为球形或者类球形而不胀破，从而方便识别和统计。
[0086]
在一些实施方式中，血小板染色液中还含有红细胞核酸染色剂，红细胞染色剂具有如通式ii所示的结构，从而可以分别对血小板、红细胞进行染色，由于不同的细胞经过染色后，产生的荧光强弱不同，从而可以在对血小板进行检测时，也便于检测和统计红细胞的状况。
[0087][0088]
其中，r
11
、r
12
分别表示碳原子数为1～3的烷基；y表示氯离子或硫酸根离子。
[0089]
s03、取步骤s02得到的部分第一待测样本进行血小板检测，获取所述第一待测样本中细胞粒子的散点图和血小板浓度。
[0090]
在步骤s03中，对进行血小板检测时，使用血细胞分析仪10进行检测。
[0091]
具体地，血细胞分析仪10包括采样模块11、试剂添加模块12、反应模块13、输送模块14、检测模块15和第一控制器16。其中，采样模块11用于采集样液并分配至反应模块13；试剂添加模块12用于向反应模块13中添加血小板染色液进行染色，得到第一待测样本；检测模块15包括流动室151、光学单元152，其中，流动室151与输送模块14连接，输送模块14用于将部分第一待测样本送入检测模块15的流动室151中，以形成对应的样本流，并由光学模块对第一待测样本形成的样本流进行光学检测，光学模块还将光学检测得到的检测信号向外输出，第一控制器16获得检测信号，检测信号为细胞粒子的散点图。本发明实施例提供的血细胞分析仪10包括血常规检测模式和血小板聚集率检测模式，当第一控制器16接收到血常规检测模式信息时，第一控制器16控制试剂添加模块12向反应模块13中添加血小板染色液进行染色，得到第一待测样本，输送模块14将部分第一待测样本输送至检测模块15中进行检测，以获得血常规检测结果；而当第一控制器16接收到血小板聚集率检测模块15信息时，第一控制器16控制试剂添加模块12向剩余的第一待测样本中添加致聚液，得到第二待测样本，输送模块14每间隔一定时间将部分第二待测样本输送至检测模块15中进行检测，以获得每个时间点对应的检测结果，并计算血小板的聚集率。
[0092]
s04、向剩余的第一待测样本中加入致聚液，以获得第二待测样本，每间隔一定时间取一部分第二待测样本进行血小板检测，以获取每个时间点对应的第二待测样本的细胞粒子的散点图和血小板浓度。
[0093]
在步骤s04中，致聚液用于使得剩余的第一待测样本中的细胞发生聚集。在一些实施方式中，致聚液包括活性剂、盐和第二溶剂。在一些实施方式中，所述活性剂包括二磷酸腺苷(adp)、胶原、花生四烯酸、凝血酶、肾上腺素、前列腺素g2、前列腺素h2、血栓烷a2中的至少一种；盐包括氯化钠等；第二溶剂包括去离子水、双蒸水等中的至少一种。在一些实施方式中，致聚液中所述活性剂的浓度为0.3mmol/l～3.5mmol/l。活性剂的浓度不宜过大，如果浓度过大，与样液混合时，血小板直接聚集并达到最大聚集率，导致无法观测和获得聚集过程中各个时间状态下的聚集率。
[0094]
在一些实施方式中，每毫升第一待测样本中所述活性剂的添加量为2.25
×
10-6
mmol～3.5
×
10-5
mmol。所述活性剂的添加量过多，容易直接获得最大聚集率，无法观测到血小板聚集过程，不利于根据聚集过检测全血样本的临床信息。
[0095]
在步骤s04中，利用细胞分析仪中的试剂添加模块12向反应模块13中剩余的第一待测样本添加致聚液，使得致聚液与剩余的第一待测样本发生混合，以获得第二待测样本；随后在预设的时间间隔，利用输送模块14将部分第二待测样本送入检测模块15进行检测；输送模块14每次将第二待测样本按照预设时间注入流动室151，以使得被输送的第二待测
样本在流动室151形成对应的样本流，光学单元152用于对样本流进行光学检测以输出检测信号，检测信号为细胞粒子的散点图；第一控制器16获取检测信号。在一些实施方式中，相邻两次第二待测样本进行检测的预设时间间隔为10s～120s。
[0096]
s05、根据步骤s03和步骤s04的检测结果，计算血小板的聚集率。
[0097]
在步骤s05中，根据步骤s03得到的第一待测样本的检测信号以及步骤s04检测得到的不同时间点的检测信号所对应的血小板浓度，绘制血小板浓度随时间变化的曲线，即可根据曲线计算或者读取血小板的各个时间点的聚集率以及最大聚集率；而根据不同时间点检测结果，得到相应时间点的细胞粒子散点分布图。在一些实施方式中，血细胞分析仪10还包括信息输出模块17；第一控制器16将获取的检测信号传输至信息输出模块17，信息输出模块17输出血小板浓度变化曲线，血小板浓度变化曲线的纵坐标为血小板浓度值，横坐标为时间。
[0098]
在一些实施方式中，血小板聚集率按照以下的预设计算公式进行计算：
[0099][0100]
其中，p表示血小板聚集率，a0表示第一待测样本检测对应的血小板浓度检测值，an表示第二待测样本检测对应的第n次检测对应的血小板浓度检测值，其中n为大于等于3的自然数。在一些实施方式中，所述第n次检测对应血小板浓度的检测值根据以下的结果确定：当进行第n-2次、第n-1次、第n次检测时，血小板浓度检测相同或趋于相同，即为第n次检测的血小板浓度检测数量值，也即可以停止输送模块14向流动室151中输送第二待测样本。
[0101]
在一些实施方式中，血小板聚集率按照以下的预设计算公式进行计算：
[0102][0103]
其中，p表示血小板聚集率检测值，a0表示所述第一次检测对应的血小板浓度检测值，a
x
表示第n-2次、第n-1次、第n次检测血小板浓度检测值相同或趋于相同时的第n-2次、第n-1次、第n次血小板浓度检测值的平均值，亦即a
x
根据第n-2次、第n-1次、第n次血小板浓度检测值的平均值来确定，当第n-2次、第n-1次、第n次检测血小板浓度检测值相同或趋于相同时，第n-2次、第n-1次、第n次检测血小板浓度检测值的平均值即为a
x
的数值。
[0104]
在一些实施方式中，当将第一待测样本检测得到的血小板浓度检测值和预设时间检测得到的多个时间点所对应的第二待测样本的血小板浓度检测值绘制成曲线，曲线出现趋近水平的走势时，输送模块14停止向检测模块15中输送反应模块13中的第二待测样本，并基于曲线趋近水平的点确定得到血小板的最大聚集率。
[0105]
血细胞分析仪10根据上述的检测结果，当获得的血小板聚集率不在30％～70％范围内时，第一控制器16输出检测异常信息。在一些实施方式中，当血小板聚集率不在35％～65％范围内时，第一控制器16输出检测异常信息。并且需要对全血样本的血小板进行血小板凝血功能的检测，以进一步医学分析。
[0106]
由于本发明实施例提供的血小板聚集率的检测方法，具有检测效率高、检测结果准确度可靠，因而可以在辅助诊断尿毒症、肝硬化、原发性血小板减少性紫癫、急性白血病、mds、心肌梗死、心绞痛、脑梗塞死、糖尿病、深部静脉血栓形成、高β-脂蛋白血病、弥散性血
管内凝血早期等的应用。具体应用时，通过静脉采血，获得受试者的全血样本，随后按照步骤s01至步骤s05进行检测，并根据检测结果进行医学分析仪辅助医学诊断受试者是否具有上述病症。
[0107]
请参阅图1至图3以及图4，基于上述血小板聚集率的检测方法，本发明实施例还提供一种血液检测流水线20。具体地，血液检测流水线20包括血细胞分析仪10、凝血分析仪21、拼机轨道22、显示器24和第二控制器23；其中，血细胞分析仪10具有血常规检测模式和血小板聚集率检测模式，当血细胞分析仪10计算获得的血小板聚集率超出30％～70％时，显示器24输出检测异常信息；由第二控制器23根据检测异常信息控制拼机轨道22上的样本输送至凝血分析仪21上进行样本的血小板的功能检测，并由显示器24输出血小板的功能检测的结果，以供进行医学分析。
[0108]
为更好的说明本发明实施方案的技术方案，下面通过多个实施例做进一步的解释说明。
[0109]
实施例一
[0110]
一种血小板聚集率的检测方法，包括以下步骤：
[0111]
(11)、获取受试者静脉血，作为全血样本，向全血样本中加入枸橼酸钠，将两者混匀，得到样液，待用。
[0112]
(12)、取200μl步骤(11)的样液，加入15ml的血小板染色液，充分混匀，以对样液进行稀释和染色，得到第一待测样本。
[0113]
其中，所述血小板染色液中含有3.6g/l的咪唑(缓冲液)、14g/l的柠檬酸三钠(缓冲液)以及2mg/l如下化学式所示的血小板染色剂：
[0114][0115]
加入血小板染色液后，得到的第一待测样本的ph约为8.5；所述血小板染色液中的溶剂为去离子水。
[0116]
(13)、取1ml步骤(12)得到的部分第一待测样本进行血小板检测，获取第一待测样本中细胞粒子的散点图和血小板浓度。
[0117]
(14)、向步骤(12)剩余的第一待测样本中加入致聚液，混匀得到第二待测样本，每间隔60s取1ml第二待测样本进行一次血小板检测，获取不同时间点的血小板浓度和细胞粒子的散点图，结果如表1和图5所示。
[0118]
其中，致聚液为3.28mmol/l的adp-xna生理盐水溶液；并且致聚液的用量为每2ml步骤(12)的第一待测样本中加入1μl的致聚液。
[0119]
表1
[0120][0121]
(15)、根据表1的数据，绘制血小板浓度随时间的变化曲线以及血小板聚集率随时间的变化曲线，结果分别如图6和图7所示。
[0122]
从表1以及图5至图7，可以看出，未添加致聚液时，血小板没有发生聚集，而加入致聚液后，血小板快速的发生聚集，在90s内聚集率达到了一半，而且仅390s，聚集率就达到了80％以上，随后维持稳定状态，说明本实施例中，仅需要不到6.5分钟，就可以获得血小板的最大聚集率，而且也可以清晰观察到血小板聚集的过程，有利于获得全血样本的临床信息。
[0123]
采用电阻抗法对实施例一的样本进行血小板计数(plt)，具体采用bf8001型号的设备进行。将电阻抗法得到的血小板浓度和实施例一得到的血小板浓度绘制成散点图，并进行线性拟合，结果如图8所示。同时采用显微镜计数法对实施例一的样本进行血小板计数和未成熟血小板(ipf)计数，并将显微镜计数得到的血小板浓度和实施例一得到的血小板浓度绘制成散点图，并进行线性拟合，结果如图9所示；将显微镜计数法和实施例一得到的未成熟血小板浓度绘制成散点图并进行线性拟合，结果如图10所示。
[0124]
从图8可以看出，本发明实施例一提供的血小板聚集率的检测方法，检测得到的血小板计数结果与电阻抗法得到的血小板计数结果重合度较高，并且呈较好的线性关系，说明本发明实施例不仅检测过程简单、检测效率高，而且检测结果与电阻抗法的检测结果相当。
[0125]
从图9和图10可以看出，本发明实施例一提供的血小板聚集率的检测方法，检测得到的血小板计数结果与显微镜血小板计数、未成熟血小板计数结果均具有较高重合度，并且呈较好的线性关系，说明本发明实施例不仅检测过程简单、检测效率高，而且检测结果与电阻抗法的检测结果相当。同时还说明了，本发明实施例提供的血小板聚集率的检测方法，比电阻抗法检测更多的血液项目。
[0126]
实施例二
[0127]
一种血小板聚集率的检测方法，包括以下步骤：
[0128]
(21)、获取受试者静脉血，作为全血样本，向全血样本中加入枸橼酸钠，混匀，得到样液，待用。
[0129]
(22)、取200μl步骤(21)的样液，加入20ml血小板染色液中，充分混匀以对样液进行稀释和染色，得到待测液。其中，所述血小板染色液中含有3.6g/l的咪唑、10g/l的碳酸钠以及2mg/l的血小板染色剂，并且所述血小板染色剂的化学式为：
[0130]
[0131]
所述血小板染色液后，得到的第一待测样本的ph约为9.5。
[0132]
所述血小板染色液中的溶剂为去离子水。
[0133]
(23)、取1ml步骤(22)得到的部分第一待测样本进行血小板检测，获取第一待测样本中细胞粒子的散点图和血小板浓度。
[0134]
(24)、向步骤(22)剩余的第一待测样本中加入致聚液，混匀得到第二待测样本，每间隔120s取1ml第二待测样本进行一次血小板检测，以获取不同时间点的血小板浓度和细胞粒子的散点图，检测结果如表2和图11所示。
[0135]
其中，致聚液为3.28mmol/l的adp-xna生理盐水溶液；并且致聚液的用量为每2ml步骤(22)的第一待测样本中加入7.4μl的致聚液。
[0136]
表2
[0137]
时间s0120240360480600720血小板浓度109/l269200173150132124121血小板聚集率％0263644515455
[0138]
(25)、根据表2的数据，绘制血小板浓度随时间的变化曲线以及血小板聚集率随时间的变化曲线，结果分别如图12和图13所示。
[0139]
从表2以及图11至图13，可以看出，未添加致聚液时，血小板没有发生聚集，而加入致聚液后，血小板开始发生聚集，在240s内聚集率达到了一半，480s，聚集率就达到了50％以上，随后维持稳定状态，说明本实施例中，仅需要8分钟左右，就可以获得血小板的最大聚集率，而且也可以清晰观察到血小板聚集的过程，有利于获得全血样本的临床信息。
[0140]
实施例三
[0141]
一种血小板聚集率的检测方法，包括以下步骤：
[0142]
(31)、获取受试者静脉血，作为全血样本，向全血样本中加入枸橼酸钠，混匀，得到样液，待用。
[0143]
(32)、取200μl步骤(31)的样液，加入30ml血小板染色液。
[0144]
其中，所述血小板染色液中含有3.6g/l的甘氨酸、13g/l的柠檬酸钠以及3mg/l的血小板染色剂，并且所述血小板染色剂的化学式为：
[0145][0146]
加入所述血小板染色液后，得到的第一待测样本的ph约为10；血小板染色液中的溶剂为去离子水。
[0147]
(33)、取1ml步骤(32)得到的部分待测液进行血小板检测，获取待测液中细胞粒子的散点图和血小板浓度。
[0148]
(34)、向步骤(32)剩余的待测液中加入致聚液，混匀后，每间隔60s进行一次血小板检测，以获取不同时间点的血小板浓度和细胞粒子的散点图，检测结果如表3和图14所示。
[0149]
其中，致聚液为3.28mmol/l的adp-xna生理盐水溶液；并且致聚液的用量为每2ml
步骤(32)中剩余的第一待测样本中加入10μl的致聚液。
[0150]
表3
[0151]
时间s060120180240300360420血小板浓度109/l10477594537373230血小板聚集率％026435764646971
[0152]
根据表3的数据，绘制血小板浓度随时间的变化曲线以及血小板聚集率随时间的变化曲线，结果分别如图15和图16所示。
[0153]
从表3以及图14和图16，可以看出，未添加致聚液时，血小板没有发生聚集，而加入致聚液后，血小板快速的发生聚集，在120s内聚集率达到了一半，300s，聚集率就达到了64％以上，随后维持稳定状态，说明本实施例中，仅需5分钟，就可以获得血小板的最大聚集率，而且也可以清晰观察到血小板聚集的过程，有利于获得全血样本的临床信息。
[0154]
实施例四
[0155]
一种血小板聚集率的检测方法，包括以下步骤：
[0156]
(41)、获取受试者静脉血，作为全血样本，向全血样本中加入枸橼酸钠，混匀，得到样液，待用。
[0157]
(42)、取200μl步骤(41)的样液和1ml的血小板染色液，依次加入至20ml的血小板稀释液中，充分混匀后得到第一待测样本。
[0158]
其中，所述血小板稀释液中含有5g/l的tricine、15g/l的柠檬酸钠，所述血小板稀释液中的溶剂为去离子水；血小板染色液的溶剂为乙醇，血小板染色液中血小板染色剂的浓度为2mg/l，血小板染色剂的化学式为：
[0159][0160]
血小板稀释液的ph约为8.5，加入血小板稀释液和血小板染色液后，得到的第一待测样本的ph约为8.5。
[0161]
(43)、取1ml步骤(42)得到的部分第一待测样本进行血小板检测，获取待测液中细胞粒子的散点图和血小板浓度。
[0162]
(44)、向步骤(42)剩余的第一待测样本中加入致聚液，混匀得到第二待测样本，每间隔60s取1ml第二待测样本进行一次血小板检测，以获取不同时间点的血小板浓度和细胞粒子的散点图，检测结果如表4和图17所示。
[0163]
其中，致聚液为3.28mmol/l的adp-xna生理盐水溶液；并且致聚液的用量为每2ml步骤(42)剩余的第一待测样本中加入15μl的致聚液。
[0164]
表4
[0165]
时间s060120180240300360420血小板浓度109/l10477594537373737血小板聚集率％026435764646464
[0166]
(45)根据表4的数据，绘制血小板浓度随时间的变化曲线以及血小板聚集率随时间的变化曲线，结果分别如图18和图19所示。
[0167]
从表4以及图17和图19，可以看出，未添加致聚液时，血小板没有发生聚集，而加入致聚液后，血小板快速的发生聚集，在60s～120s之间聚集率达到了一半，240s聚集率就达到了64％，随后维持稳定状态，说明本实施例中，仅需要4分钟，就可以获得血小板的最大聚集率，而且也可以清晰观察到血小板聚集的过程，有利于获得全血样本的临床信息。
[0168]
实施例五
[0169]
一种血小板聚集率的检测方法，包括以下步骤：
[0170]
(51)、获取受试者静脉血，作为全血样本，向全血样本中加入枸橼酸钠，混匀，得到样液，待用。
[0171]
(52)、取200μl步骤(51)的样液和1ml血小板染色液，依次加入至15ml的血小板稀释液中，充分混匀后获得第一待测样本。
[0172]
其中，血小板稀释液中含有5g/l的tricine、15g/l的柠檬酸钠。加入血小板稀释液以及血小板染色液后，得到的第一待测样本的ph约为8.5。
[0173]
所述血小板染色液含有5mg/l的血小板染色剂以及5mgl的红细胞核酸染料，并且所述血小板染色剂的化学式为：
[0174][0175]
所述红细胞核酸染料的化学式为：
[0176][0177]
所述血小板稀释液中的溶剂为去离子水。所述血小板染色液的溶剂为甲醇和乙醇的混合溶剂，并且甲醇和乙醇的质量比为7:93。
[0178]
(53)、取1ml步骤(52)得到的部分第一待测样本进行血小板检测，获取待测液中细胞粒子的散点图和血小板浓度。
[0179]
(54)、向步骤(52)剩余的第一待测样本中加入致聚液，混匀得到第二待测样本，每间隔60s取1ml第二待测样本进行一次血小板检测，以获取不同时间点的血小板浓度和细胞粒子的散点图，检测结果如表5和图20所示。
[0180]
其中，致聚液为65.6mmol/l的adp-xna生理盐水溶液；并且致聚液的用量为每2ml步骤(52)剩余的第一待测样本中加入10μl的致聚液。
[0181]
表5
[0182]
时间s060120180血小板浓度109/l216141410血小板聚集率％0949495
[0183]
(55)、根据表5的数据，绘制血小板浓度随时间的变化曲线以及血小板聚集率随时间的变化曲线，结果分别如图21和图22所示。
[0184]
从表5以及图20至图22，可以看出，未添加致聚液时，血小板没有发生聚集，而加入致聚液后，血小板快速的发生聚集，在60s内聚集率90％以上，随后维持稳定状态，说明本实施例中，仅需要不到1分钟，就可以获得血小板的最大聚集率，但是聚集率过快，不能对血小板的聚集过程进行有效地观察，不利于获得全血样本的临床信息。
[0185]
综上实施例一至实施例五，可以看出，本发明实施例提供的血小板聚集率的检测方法，不仅可以在10min之内获得血小板的最大聚集率，而且在检测过程中，还能有效地观察血小板的聚集率变化过程，从而为临床医学提供有效的临床数据。
[0186]
以上所述的仅是本发明的实施方式，在此应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出改进，但这些均属于本发明的保护范围。