一种嵌合型银基纳米溶菌酶、制备方法及其应用与流程

1.本发明属于纳米溶菌酶制备技术领域，具体涉及一种嵌合型银基纳米溶菌酶、制备方法及其应用。


背景技术：

2.近年来，耐药性问题日趋严峻，已经发展为全球范围内的重大公共卫生安全问题，严重危害人类健康与生存。目前，临床常见的重要耐药革兰阳性菌有耐甲氧西林葡萄球菌(mrsa)、对青霉素耐药的肺炎球菌(prsp)和万古霉素耐药的肠球菌(vre)。我国各地报道耐中氧西林金葡菌(mrsa)感染发生率在20％～80％之间，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(mrcns)引起的感染也明显增多。耐药革兰阴性杆菌主要有：产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrum betalactamases，esbls)的肺炎克雷伯杆菌、大肠杆菌，具有多重耐药特性的铜绿假单胞菌、不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌，此外，耐氟康唑的念珠菌、耐药的结核杆菌的比例也在增加。另外，畜牧业大量使用糖肽类药物，使得多种动物产生vre，间接影响人类健康。为攻克耐药菌问题，一条较为有效的途径是：研制新型卫生消毒产品，加强环境、物表、空气、皮肤、手等的洁净卫生，将致病性微生物隔绝于人体可触及范围之外。现有消毒剂由于存在刺激强、不稳定、毒性大等问题，因此急需研制经济、高效、安全、环保的新型产品，其中一个重要研发方向是开发抗菌抗病毒的新型溶菌酶。
3.溶菌酶是一种糖苷水解酶，能催化水解粘多糖的n-乙酰氨基葡萄糖(nag)与n-乙酰胞壁酸(nam)间的β-1，4糖苷键。研究表明，部分纳米酶对致病性微生物具有一定类似的抑制效果，可以用生物医学、公共卫生等领域用于对致病性和耐药性微生物的防控。2007年，中科院生物物理研究所阎锡蕴院士团队在nature nanotechnology杂志中首次提出纳米酶(nanozyme)概念，指出纳米酶是一类类酶活性的新型纳米材料，具有和天然酶类似的催化活性和酶促反应动力学。其中，纳米溶菌酶(nanomlysozyme)是一类对致病性微生物具有抑制或杀灭活性、具有溶菌酶酶学特性的纳米酶，具有全新的拟酶结构的功能性材料。其抗菌机理是：通过合理结构设计的纳米酶，具有调控环境中ros活性氧自由基的能力，破坏其顽固性生物膜，能高效杀死多种致病性革兰氏阳性菌和阴性菌，从而达到抗感染作用。因此，纳米溶菌酶可用于对传染性和致病性微生物的消杀及感染防控。cn113975459a公开了一种纳米酶水凝胶片的制备方法及在创可贴中的应用，核心材料具有ta-cds/agnps纳米酶和cu，fe-n-c纳米酶的复合结构，该结构的纳米酶表现出很高的抗菌催化活性，可用于制备创可贴类产品。cn111742941a公开了一种纳米酶制剂-稀土类复合抗菌剂及其应用，该纳米酶与生物酶协同作用，能有效地提高植物的生根效果，在保证植物生长的前提下，又能杀灭栽种基质菌株，为植物的生长提供良好的环境。因此，与天然溶菌酶相比，纳米溶菌酶具有制备简单、可大规模生产、环境耐受性强、制备及储存成本低廉和可重复使用等优势。
4.目前，部分专利利用天然产物制备纳米溶菌酶，其合成反应速度较快，合成条件简单，适合工业化生产。然而，天然产物化学成分包含有机酸、生物碱、多糖、蛋白质、类黄酮、萜类、甾体、皂甙和鞣质等物质，组成相当复杂，得到的纳米银颗粒，即agnps纳米溶菌酶的
结构可控性较差。相关分析如下：
5.cn109702218a公开了一种利用余甘果提取液制备纳米银颗粒的方法；利用余甘果提取液与agno3溶液在加热搅拌条件下反应制得纳米银颗粒，制得的纳米银颗粒结构稳定且对水稻细菌性褐条病病原物rs-2具有较强的抑菌作用。
6.cn107671305a公开了一种利用小叶女贞果实提取液快速制备纳米银抑菌剂的方法，包括，采集成熟的小叶女贞果实，通过加热回流等步骤制备小叶女贞果实提取液；使小叶女贞果实提取液与agno3溶液混合后超声处理，同时予以阳光照射，得到纳米银抑菌剂。
7.上述方法在合成agnps纳米溶菌酶过程中需要用到植物提取物，而植物提取物存在影响因素复杂、操作过程较为繁琐等缺点，且所制纳米银的抑菌效果不稳定。此外，现有技术中公开的可用于合成纳米银颗粒的植物种类较少，另外，植物提取物存在批间重现性差、反应机理多样、难以规模化生产等问题。针对这一问题，急需研制出一种对病源性微生物杀灭效果优异的agnps纳米溶菌酶的简便合成方法。


技术实现要素：

8.本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种嵌合型银基纳米溶菌酶的制备方法、产品及应用。
9.本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种嵌合型银基纳米溶菌酶的制备方法，包括以下步骤：
10.s1、取硝酸银溶液、高分子分散剂溶液进行反应，反应前使用氢氧化铵调节ph值为6～12，反应的溶液颜色变为深黄色即为反应终点；其中，反应的温度为0-100℃；反应过程中需要持续搅拌；
11.其中，所述高分子分散剂溶液中的高分子分散剂包括鞣酸、
ɑ-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-β-环糊精、黄原胶、黄蓍胶、瓜儿胶、阿拉伯胶、桃胶、羧甲基纤维素钠和海藻酸钠中的一种或多种；
12.s2、将步骤s1中得到的深黄色溶液和天然有机小分子化合物溶液混合均匀，即得到含有所述嵌合型银基纳米溶菌酶的溶液。所述混合均匀的方法优选为：室温下搅拌4～48小时。
13.进一步的，步骤s1中，所述硝酸银溶液、高分子分散剂溶液中的硝酸银与高分子分散剂的摩尔比值为1：0.01～10；
14.和/或，步骤s1中，所述硝酸银溶液的浓度为0.01～5％；
15.和/或，步骤s1中，所述高分子分散剂溶液的浓度为0.01～10％。
16.进一步的，步骤s1中，所述氢氧化铵的用量为硝酸银溶液和高分子分散剂溶液体积的0.01～5％。
17.进一步的，步骤s1中，所述氢氧化铵包括十二烷基三甲基氢氧化铵、十六烷基三甲基氢氧化铵、十二烷基二甲基苄基氢氧化铵、十二烷基二甲基苄基氢氧化铵、双十烷基二甲基氢氧化铵、双癸氢氧化铵中的一种或多种。
18.进一步的，步骤s2中，所述天然有机小分子化合物溶液中的天然有机小分子化合物包括青蒿素、黄芩苷、穿心莲内酯、苯甲酸、水杨酸、延胡索酸、松香酸、原儿茶酸、没食子酸、咖啡酸、肉桂酸、绿原酸、迷迭香酸、甘草次酸、麝香草酚、香芹酚和木犀草素中的一种或
多种。
19.进一步的，步骤s2中，所述天然有机小分子化合物溶液和硝酸银溶液中的天然有机小分子化合物与硝酸银的摩尔比值为1：0.01～10；
20.和/或，步骤s2中，所述天然有机小分子化合物溶液的浓度范围为0.01～10％。
21.本发明还提供一种上述的制备方法制备得到的含有所述嵌合型银基纳米溶菌酶的溶液，所述溶液中嵌合型银基纳米溶菌酶的粒径为10～30nm。
22.本发明还提供一种上述的含有所述嵌合型银基纳米溶菌酶的溶液作为消毒剂、抗菌剂或制备消毒、抗菌材料的应用。
23.进一步的，所述消毒剂、抗菌剂可用于人体各部位或器官、医院卫生医疗器械、日常生活用品、公共环境以及生物安全的消毒。
24.进一步的，所述消毒剂、抗菌剂中所述嵌合型银基纳米溶菌酶的浓度为5～200mg/l。
25.本发明的基本原理是：
26.一般情况下，银离子在溶液中被还原后，往往会聚集成大颗粒的银单质粒子，难以得到稳定性高的、分散均匀的丁达尔溶胶。为了促使体系向丁达尔溶胶转化，阻止银单质粒子团聚，在原体系中加入不同结构的高分子分散剂，从而有利于形成结构可控、稳定性高、分散均匀的金属银纳米颗粒。由于高分子分散剂具有不同的亲水部位和疏水部位，其结构单元基本清楚，在空间结构上具有可设计性的特点，从而有利于在不同空间中形成不同空间结构的纳米银颗粒，再利用高分子的疏水基团使纳米颗粒在空间结构上相互隔离，具有很好的分子印痕效应。因此，根据不同高分子模板及其空间的合理化设计，可以得到不同催化特性的纳米材料，即纳米酶，在工业上可以用于多个有机合成反应或生物化学反应，在临床医学诊断等领域具有广阔的应用前景。一般情况下，用银离子制成的纳米酶通常具有抗病原性微生物的活性，在此基础上对其结构进行分子靶点的嵌合化设计，在其母体结构上组装上不同结构的天然有机小分子，从而有利于提高其对病原性微生物的主动攻击能力，从而极大地提高纳米酶的抗微生物活性。由于天然来源的小分子化合物具有与生命体的天然亲合力，且毒副作用小，结合可逆等特点，对原纳米酶的活性具有极大的促进作用。因此，该方案设计的银基纳米溶菌酶对致病性微生物具有比普通溶菌酶更宽的微生物杀灭谱、生物相容性高、生物活性强、稳定性高、可模块化设计等优点。
27.本发明的有益效果是：
28.agnps纳米溶菌酶(agnps nanomlysozyme)表现出优异的抗菌活性，具有产业化应用前景。采用适当的工艺流程，即可制备出不同结构和催化活性的agnps纳米溶菌酶。具体来说，本发明即设计了一种嵌合有天然有机小分子化合物的银基纳米溶菌酶。进一步发现该嵌合型纳米溶菌酶具有较好的抗病原性微生物活性，是一种很大潜力的卫生消毒材料，可用于医疗卫生、环境保护、医学诊断、化学合成等行业领域。
29.1、本发明的制备工艺简单、能量消耗少、原料易获得、无需额外添加还原剂与催化剂，适合大规模生产。
30.2、本发明得到的嵌合型agnps纳米溶菌酶具有“模板高分子——纳米银空腔——天然有机小分子”的结构特点，平均粒径介于10～30nm之间，具有可结构设计、空间结构稳定、平均粒径均匀等优点，对流感病毒h3n2、手足口病毒(肠道病毒71型)、耐甲氧西林金黄色
葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌、肠道致病菌、化脓性球菌、致病性酵母菌及医院感染常见细菌具有很高的杀灭率。
31.3、本发明制备的嵌合型agnps纳米溶菌酶产品具有环境相容性高、安全性高、效果显著的优势，可以作为卫生消毒或抗菌材料应用于防治致病性和传染性疾病中，在医疗、家用消毒剂和卫生用品的生产领域中有着广阔的应用与推广前景。
附图说明
32.图1为嵌合黄芩苷的hp-β-cd agnps纳米溶菌酶的组装流程图；
33.图2为嵌合黄芩苷的hp-β-cd agnps纳米溶菌酶的tem及粒径分布图；
34.图3为嵌合延胡索酸的gt agnps溶菌酶的tem图；
35.图4为嵌合黄芩苷的hp-β-cd agnps纳米溶菌酶的xrd图；
36.图5为嵌合黄芩苷的hp-β-cd agnps纳米溶菌酶的uv-vis吸收曲线。
具体实施方式
37.下面结合附图进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。
38.实施例一
39.取0.8g羟丙基-β-环糊精，加入100ml去离子水，在室温下搅拌24小时，使之充分溶解，即得浓度为8mg/ml的羟丙基-β-环糊精溶液。另取0.18g硝酸银固体，加入100ml去离子水，搅拌使之溶解，即得浓度为1.8mg/ml的硝酸银溶液。将以上硝酸银溶液(1.8mg/ml)以等体积(1:1v/v)添加到羟丙基-β-环糊精溶液中，用10％的十二烷基三甲基氢氧化铵水溶液调ph值至7.26，加热至60℃，于200rpm下搅拌2小时。溶液颜色从无色变为淡黄色，然后变为深黄色来，即得到羟丙基-β-环糊精包裹的纳米银粒子溶液，即hp-β-cd agnps。通过紫外-可见分光光度法测定其表面等离子体共振信号，从而证实hp-β-cd agnps的形成。向上述hp-β-cd agnps溶液中添加10ml浓度为1.0mg/ml的黄芩苷溶液，室温下于200rpm下搅拌24小时，即得到嵌合有黄芩苷的hp-β-cd agnps溶菌酶。
40.实施例二
41.取0.8g阿拉伯胶，加入100ml去离子水，在室温下搅拌24小时，使之充分溶解，过滤除去不溶性物质，即得浓度为8mg/ml的阿拉伯胶溶液。另取0.18g硝酸银固体，加入100ml去离子水，搅拌使之溶解，即得浓度为1.8mg/ml的硝酸银溶液。将以上硝酸银溶液(1.8mg/ml)以等体积(1:1v/v)添加到阿拉伯胶溶液中，用10％的十六烷基三甲基氢氧化铵水溶液调ph值至8.90，加热至60℃，于200rpm下搅拌2小时。溶液颜色从无色变为淡黄色，然后变为深黄色来，即得到阿拉伯胶包裹的纳米银粒子溶液，即ga agnps。通过紫外-可见分光光度计测定其表面等离子体共振，从而证实ga agnps的形成。向上述ga agnps溶液中添加10ml浓度为1.0mg/ml的苯甲酸溶液，室温下于200rpm下搅拌24小时，即得到嵌合有苯甲酸的ga agnps溶菌酶。
42.实施例三
43.取0.8g瓜儿胶，加入100ml去离子水，在室温下搅拌24小时，使之充分溶解，过滤除去不溶性物质，即得浓度为8mg/ml的瓜儿胶溶液。另取0.18g硝酸银固体，加入100ml去离子
水，搅拌使之溶解，即得浓度为1.8mg/ml的硝酸银溶液。将以上硝酸银溶液(1.8mg/ml)以等体积(1:1v/v)添加到瓜儿胶溶液中，用10％的十二烷基二甲基苄基氢氧化铵水溶液调ph值至11.23，加热至60℃，于200rpm下搅拌2小时。溶液颜色从无色变为淡黄色，然后变为深黄色来，即得到瓜儿胶包裹的纳米银粒子溶液，即gg agnps。通过紫外-可见分光光度计测定其表面等离子体共振，从而证实gg agnps的形成。向上述gg agnps溶液中添加10ml浓度为1.0mg/ml的绿原酸溶液，室温下于200rpm下搅拌24小时，即得到嵌合有绿原酸的gg agnps溶菌酶。
44.实施例四
45.取0.8g黄蓍胶，加入100ml去离子水，在室温下搅拌24小时，使之充分溶解，过滤除去不溶性物质，即得浓度为8mg/ml的黄蓍胶溶液。另取0.18g硝酸银固体，加入100ml去离子水，搅拌使之溶解，即得浓度为1.8mg/ml的硝酸银溶液。将以上硝酸银溶液(1.8mg/ml)以等体积(1:1v/v)添加到黄蓍胶溶液中，用10％的十六烷基三甲基氢氧化铵水溶液调ph值至6.92，加热至60℃，于200rpm下搅拌2小时。溶液颜色从无色变为淡黄色，然后变为深黄色来，即得到黄蓍胶包裹的纳米银粒子溶液，即gt agnps。通过紫外-可见分光光度计测定其表面等离子体共振，从而证实gt agnps的形成。向上述gt agnps溶液中添加10ml浓度为1.0mg/ml的延胡索酸溶液，室温下于200rpm下搅拌24小时，即得到嵌合有延胡索酸的gt agnps溶菌酶。
46.实施例五
47.取0.8g黄原胶，加入100ml去离子水，在室温下搅拌24小时，使之充分溶解，过滤除去不溶性物质，即得浓度为8mg/ml的黄原胶溶液。另取0.18g硝酸银固体，加入100ml去离子水，搅拌使之溶解，即得浓度为1.8mg/ml的硝酸银溶液。将以上硝酸银溶液(1.8mg/ml)以等体积(1:1v/v)添加到黄原胶溶液中，用10％的十六烷基三甲基氢氧化铵水溶液调ph值至7.59，加热至60℃，于200rpm下搅拌2小时。溶液颜色从无色变为淡黄色，然后变为深黄色来，即得到黄原胶包裹的纳米银粒子溶液，即gg agnps。通过紫外-可见分光光度计测定其表面等离子体共振，从而证实gg agnps的形成。向上述gt agnps溶液中添加10ml浓度为1.0mg/ml的没食子酸溶液，室温下于200rpm下搅拌24小时，即得到嵌合有没食子酸的gg agnps溶菌酶。
48.实施例六
49.以上各实施例的纳米溶菌酶溶液，可分别用于制备具有消毒功能的医疗用品、家用消毒用品、洗衣液等日化用品等新产品。
50.如：一种含纳米溶菌酶的植物艾纳米银消毒喷雾及其制备方法。
51.取一定量的实施例1制备的纳米溶菌酶溶液；加入迷迭香(rosmarinus officinalis)提取物、厚朴(magnolia officinalis)树皮提取物、艾叶(artemisia argyi)提取物、茶(camellia sinensis)多酚、倒捻子(garcinia mangostana)果皮提取物；置于配料容器中，加入去离子纯化水，使纳米溶菌酶的中银元素的终浓度为50ppm，搅拌使充分溶解，得到澄清溶液，检测纳米溶菌酶含量，合格后罐装，即得。
52.如：一种含纳米溶菌酶的伊洁士牌植物艾宠物除菌除螨喷雾及其制备方法。
53.取一定量的实施例4制备的纳米溶菌酶溶液；加入蒲公英(taraxacum mongolicum)提取物、菊花(chrysanthemum morifolium)提取物、艾叶(artemisia argyi)
提取物、茶(camellia sinensis)多酚、倒捻子(garcinia mangostana)果皮提取物、植物驱螨提取物；置于配料容器中，加入去离子纯化水，使纳米溶菌酶的中银元素的终浓度为50ppm，搅拌使充分溶解，得到澄清溶液，检测纳米溶菌酶含量，合格后罐装，即得。
54.实验例1
55.取实施例1制备得到的嵌合有黄芩苷的hp-β-cd agnps溶菌酶，经tem分析，得到图2，取实施例4制备得到嵌合有延胡索酸的gt agnps溶菌酶，经tem分析，得到图3，由图可见：这二类嵌合型agnps溶菌酶的粒径大小分布在10～20nm之间，平均粒径为16nm，呈球形，说明本方法制备的agnps溶菌酶在水溶液中能稳定存在，符合预期设计。
56.实验例2
57.取实施例1制备得到的嵌合有黄芩苷的hp-β-cd agnps溶菌酶，经xrd分析，得到图4，图中，20～23
°
为pvp的弥散衍射峰，2θ＝38
°
，44
°
，64.3
°
和77.3
°
处的衍射峰，分别对应于银相(111)、(200)、(220)和(311)的面心立方(fcc)晶面，说明该纳米酶中银粒子的空间结构为面心立方结构，图中无其它明显特征峰，说明无杂质干扰，得到的银粒子纯度较高，性能较为完整。
58.实验例3
59.取实施例1制备得到的嵌合有黄芩苷的hp-β-cd agnps溶菌酶，经uv-vis分析，得到图5。图中分析可知，溶液颜色由浅黄色逐渐加深，说明纳米银得以形成，具体体现在溶液的紫外吸收曲线上，纳米银的最大吸收波长为420nm左右；根据mie理论，该吸收峰是典形的球状纳米银的紫外特征吸收，随着纳米银粒子的形成，该峰的峰形逐渐收窄；半峰宽减小，说明纳米银粒子的尺寸更加均匀，而hp-β-cd在溶液中起到分散、缓冲和空间架构的作用，得到的纳米溶菌酶不易于团聚，在溶液中更稳定。
60.实验例4
61.取实施例6制备得到的含50ppm纳米溶菌酶的伊洁士牌伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾，进行悬液定量杀菌试验，测试其对耐万古霉素肠球菌(atcc 51299)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(atcc 43300)的杀灭效果。
62.检验依据：《消毒技术规范》2002年版2.1.1.5.5、2.1.1.7.4
63.评价依据：《消毒技术规范》2002年版
64.检验结论：
65.(1)中和剂悬液定量鉴定试验：含3％吐温-80、0.5％硫代硫酸钠、0.5％l-组氨酸、0.5％蛋白胨、0.85％氯化钠、1.43％卵磷脂、0.1％半胱氨酸的pbs溶液，可有效中和“伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾”原液的杀灭作用，且中和剂及中和产物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌无不良影响。
66.(2)悬液定量杀菌试验：样品原液，作用15min，试验重复3次，对耐万古霉素肠球菌(atcc 51299)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(atcc 43300)的杀灭对数值均＞5.00，符合《消毒技术规范》2002年版-2.1.1.7.7的评价规定(杀灭对数值≥5.00)，该样品对所测菌株消毒合格。
67.实验结果得到广东省微生物分析检测中心验证。
68.实验例5
69.取实施例6制备得到含50ppm纳米溶菌酶的伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾，检测
其对肠道病毒71型和流感病毒(h3n2)的杀灭活性。
70.检验依据：参考《消毒技术规范》(2002年版)第2.1.1.10.5项和2.1.1.10.7项进行检验。
71.评价依据：依据《消毒技术规范》(2002年版)进行评价。
72.检验结论：
73.1、经3次重复试验，所用d/e中和肉汤的中和剂溶液可有效中和伊洁士牌伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾对肠道病毒71型和流感病毒(h3n2)的残留作用，且中和剂和中和产物对肠道病毒71型灭活试验及细胞的生长基本无影响；对流感病毒(h3n2)灭活试验及鸡胚的生长基本无影响。
74.2、经3次重复试验，在20℃恒温试验条件下，应用伊洁士牌伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾作用10.0min，对肠道病毒71型和流感病毒(h3n2)的平均灭活对数值均》4.00，符合《消毒技术规范》(2002年版)消毒合格的规定。
75.实验结果得到“中关村国际医药检验认证科技有限公司”验证。
76.实验例6
77.取实施例6制备得到含50ppm纳米溶菌酶的伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾，检测其常见的理化指标及其对常见致病菌的灭杀效果。
78.检验依据：《化妆品安全技术规范》(2015年版)第四章1.6；《消毒技术规范》(2002年版)2.2.1.4；《消毒技术规范》(2002年版)2.2.3；《消毒技术规范》(2002年版)2.2.4；《消毒技术规范》(2002年版)2.1.1.5.5；《消毒技术规范》(2002年版)2.1.1.7；《消毒技术规范》(2002年版)2.1.1.9；《消毒技术规范》(2002年版)2.1.2.10；《消毒技术规范》(2002年版)2.1.3.4；《消毒技术规范》(2002年版)2.1.3.5；《消毒技术规范》(2002年版)2.3.1；《消毒技术规范》(2002年版)2.3.2；《消毒技术规范》(2002年版)2.3.3；《消毒技术规范》(2002年版)2.3.4；《消毒技术规范》(2002年版)2.3.8.4。
79.评价依据：《消毒技术规范》(2002年版)
80.检验结论：
81.(1)ph值测试：该样品“伊洁士牌伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾”的ph值(25℃)为3.56。
82.(2)银含量试验：该样品“伊洁士牌伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾”的银含量为53.1mg/kg。
83.(3)稳定性试验(银含量)：测得样品中银含量初始含量为5.59mg/kg。样品经37℃条件下存放3个月，其银含量为52.8mg/kg，较存放前下降率为0.6％，符合《消毒技术规范》(2002年版)-2.2.3.2.1中有效成分下降率不得超过10％的要求，可将样品的贮存有效期定为2年。
84.(4)金属腐蚀性实验：伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液对碳钢的平均腐蚀速率0.0042mm/a(基本无腐蚀)，对不锈钢的平均腐蚀速率为0.0016mm/a(基本无腐蚀)，对铜的平均腐蚀速率为0.0301mm/a(轻度腐蚀)，对铝的平均腐蚀速率为0.0092mm/a(基本无腐蚀)。
85.(5)中和剂鉴定试验(细菌)：中和剂鉴定试验表明，d/e中和肉汤能有效中和伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液对大肠杆菌(8099)的杀菌作用，该中和剂及中和产物对大
肠杆菌(8099)及培养基均无不良影响，表明该中和剂适用于大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(atcc 6538)、铜绿假单胞菌(atcc 15442)定量杀灭试验。
86.(6)细菌悬液定量杀灭试验：依据《消毒技术规范》(2002年版)，在实验条件下，伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液作用15min对金黄色葡萄球菌(atcc 6538)、大肠杆菌(8099)、铜绿假单胞菌(atcc 15442)的平均杀灭对数值均》5.00，符合《消毒技术规范》(2002年版)标准要求。
87.(7)中和剂鉴定试验(真菌)：中和剂鉴定试验表明，d/e中和肉汤能有效中和伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液对白色念珠菌(atcc 10231)的杀菌作用，该中和剂及中和产物对白色念珠菌(atcc 10231)及培养基均无不良影响，表明该中和剂适用于白色念珠菌(atcc 10231)定量杀灭试验。
88.(8)白色念珠菌悬液定量杀灭试验：依据《消毒技术规范》(2002年版)，在实验条件下，伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液作用15min对白色念珠菌(atcc 10231)的平均杀灭对数值》4.00，符合《消毒技术规范》(2002年版)标准要求。
89.(9)消毒剂对物体表面消毒现场鉴定试验(木质表面)：木质物体表面消毒现场试验表明，在实验条件下，伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液作用15min对木质物体表面的自然菌平均杀灭对数值》1.00，符合《消毒技术规范》(2002年版)标准要求。
90.(10)空气消毒效果模拟现场：空气消毒效果模拟现场试验结果表明，在20m3密闭的空间中，在实验条件下，伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液以10ml/m3的浓度喷雾在此密闭空间中作用15min，对白色葡萄球菌的杀灭率3次试验结果均》99.90％，符合《消毒技术规范》(2002年版)消毒合格的要求。
91.(11)空气消毒效果现场试验：在30m3房间中，在实验条件下，伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液以10ml/m3的浓度雾化到空气中，作用15min对空气自然菌的消亡率3次试验结果均》90％，符合《消毒技术规范》(2002年版)标准要求。
92.(12)急性经口毒性试验：本实验条件下，伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液对km小鼠的急性经口毒性ld
50
》5000mg/kg
·
bw，急性经口毒性试验属实际无毒，符合《消毒技术规范》(2002年版)的要求。
93.(13)急性吸入毒性试验：本实验条件下，伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液对km小鼠的急性吸入毒性lc50》10000mg/m3，急性吸入毒性试验属实际无毒，符合《消毒技术规范》(2002年版)的要求。
94.(14)一次完整皮肤刺激试验：本实验条件下，伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液对新西兰兔一次完整皮肤刺激试验的刺激强度属无刺激性，符合《消毒技术规范》(2002年版)的要求。
95.(15)急性眼刺激试验：本实验条件下，伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液对新西兰兔眼刺激的损伤类型为无刺激性，符合《消毒技术规范》(2002年版)的要求。
96.(16)小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：本实验条件下，伊洁士牌植物艾纳米银消毒喷雾原液不会引起km小鼠骨髓微核率升高，故不具有体内染色体损伤作用，属致突变阴性，符合《消毒技术规范》(2002年版)的要求。
97.实验结果得到青岛科创质量检测有限公司的验证。
98.以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的
形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。