一种比率型电化学适配体传感器的制备方法

技术特征：
1.一种比率型电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于：设计一种5'端二茂铁（fc）标记的引物，制备电化学功能的纳米复合材料石墨炔-亚甲基蓝（gdy-mb），当卡那霉素（kan）存在时会引起fc和mb两电信号变化，构建比率型电化学适配体传感器，并结合核酸外切酶i（exo i）引起的靶标循环和氧化锡锑和纳米金（ato/aunps）纳米材料导电辅助的双信号放大策略检测牛奶中kan。2.根据权利要求1所述的设计一种5'端fc标记引物的方法，其特征在于：设计部分序列能够与适配体（apt）部分序列杂交形成双链的引物，在引物的5’端标记二茂铁电信号分子，在3’端增加polya短核酸链并在末端腺嘌呤上进行磷酸化修饰防止被exo i剪切，由于双链的刚性结构fc远离电极表面，fc电信号弱，当kan存在时，特异性结合apt释放引物，引物中设计的自身互补部分通过碱基互补配对形成发夹结构，fc接近电极表面，引起fc电信号增加。3.根据权利要求1所述的结合exo i引起的靶标循环的方法，其特征在于：取等体积的apt和其互补引物，使用te缓冲液配置成互补链溶液，然后取互补链，kan，exo i酶缓冲液和exo i酶于离心管中混合孵育，被目标物竞争下来的游离apt被exo i剪切，然后重新释放循环，最后，将混合物加热以终止循环靶标。4.根据权利要求1所述的制备gdy-mb的方法，其特征在于：为了制备具有电化学功能的gdy-mb纳米复合材料，首先制备石墨炔的良好分散液，取石墨炔分散于硫酸和硝酸混合液中，超声至完全溶解，将分散体多次离心并用超纯水洗涤至中性，用超纯水定容，然后取mb溶液和gdy溶液进行超声混合处理，将复合物离心，并分别用乙醇和超纯水洗涤至溶液变成无色，最后定容，mb负载于gdy的gdy-mb纳米复合材料制备完成。5.根据权利要求1所述的制备cs-ato的方法，其特征在于：首先制备壳聚糖溶液作为分散剂和稳定剂，然后称取ato分散于上述制备的壳聚糖溶液中，超声至完全溶解。6.根据权利要求1所述的构建比率型电化学apt传感器的方法，其特征在于：将ato，gdy-mb和aunps逐层滴在金电极上，最后取权利要求3中的循环产物滴加在修饰好的电极表面，等待polya与aunps结合，从而使发夹结构（hp）紧密固定在电极表面，由此，得到比率型电化学适配体传感器。

技术总结
本发明属于生物传感器技术领域，公开了一种可检测牛奶中卡那霉素（KAN）的比率型电化学适配体传感器制备及使用方法。本发明制备的比率型电化学适配体传感器基于二茂铁（Fc）标记引物和石墨炔-亚甲蓝（GDY-MB）纳米复合材料。GDY-MB纳米复合材料修饰在电极上会产生MB电信号，设计5'端标记Fc的引物可以与适配体杂交形成互补双链，当KAN与适配体特异性结合后会释放出游离引物形成发夹结构，导致Fc接近电极表面引起Fc电信号增强。引入核酸外切酶I（Exo I）切割单链适配体以达到目标物循环扩增放大信号作用。引物3'端进行磷酸化修饰以保护发夹结构不被Exo I切割。进一步修饰壳聚糖-氧化锡锑（CS-ATO）和AuNPs起到双重信号放大作用，实现了卡那霉素的高灵敏检测。现了卡那霉素的高灵敏检测。


技术研发人员：李发兰 郜晓琳 孙霞 郭业民 杨青青 张妍妍 孙志聪
受保护的技术使用者：山东理工大学
技术研发日：2022.07.21
技术公布日：2022/10/18