一种药物-鹿血磷脂囊泡的制备方法

1.本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种药物-鹿血磷脂囊泡的制备方法。


背景技术：

2.鹿血磷脂是一种动物磷脂，它具有优异的抗氧化性能，在水中可自组装形成不同形貌的双分子层结构。由于鹿血磷脂是一种天然动物磷脂，生物相容性较高，而且具有很好的抗衰老功效；鹿血磷脂作为天然磷脂的重要组成部分，具有磷脂分子的一些特性，包括作为药物载体材料具有靶向性、长效性、降低药物毒性等突出性质。因此鹿血磷脂可能作为一般脂质体的替代品，作为药物载体材料替代目前临床用的脂质体，例如：注射用紫杉醇脂质体、注射用盐酸多柔比星脂质体、注射用两性霉素b脂质体等。然而目前关于鹿血磷脂作为药物载体材料的制备技术匮乏，因此本发明提供了一种鹿血磷脂包埋药物的实验技术。


技术实现要素：

3.本发明提供一种利用天然鹿血磷脂制备药物-鹿血磷脂囊泡的方法，以鹿血磷脂作为膜材，采用机械分散法和超声技术联用制备药物-鹿血磷脂囊泡，将药物和鹿血磷脂溶解于低毒易挥发的有机相中，然后加入二次蒸馏水，快速振荡，然后超声处理，可得到不同药物包封的囊泡，囊泡粒径分布可从纳米级到微米级。
4.本发明所采取的技术方案具体如下：
5.一种药物-鹿血磷脂囊泡的制备方法，采用鹿血磷脂为膜材，利用鹿血磷脂的抗氧化性能调控药物-鹿血磷脂囊泡的生物学功能，包括以下步骤：将药物和鹿血磷脂溶于有机相中，震荡摇匀，加入二次蒸馏水，然后超声处理得到药物-鹿血磷脂囊泡。
6.进一步的，所述鹿血磷脂与药物的质量比为2:1-20:1。
7.优选的，所述药物为阿霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、羟基喜树碱、顺铂、卟啉化合物中的一种或多种的组合。
8.优选的，所述卟啉化合物包括四羟基苯基卟啉、四氨基苯基卟啉、血卟啉、血红脘中的一种或多种的组合。
9.进一步的，超声处理的功率为300w，超声时间为2-5分钟。
10.进一步的，所述有机相为二氯甲烷、丙酮、乙醇或乙酸乙酯。
11.进一步的，有机相的体积的限定为：在能够完全溶解药物的前提下，尽量减少有机相体积。
12.进一步的，有机相和二次蒸馏水的体积比为1:2-1:10。
13.优选的，所述药物为卟啉。
14.优选的，所述鹿血磷脂与卟啉的最佳质量比为10:1。
15.相对于其他磷脂，鹿血磷脂的抗氧化性，可以调控卟啉类光敏剂的光毒性。
16.本发明相对于现有技术的有益效果：
17.本发明采用超声波和机械分散制备不同粒径药物-鹿血磷脂囊泡，该方法相对于
共价键联的制备技术而言，具有很高的实用性和可调控性，可以通过控制药物-鹿血磷脂膜材的比例，得到理想的药物包封率，通过控制机械分散和超声处理的时间，可以得到不同粒径的复合囊泡，以满足不同的药剂学需求。
附图说明
18.图1：(a)空白鹿血磷脂囊泡与(b)卟啉-鹿血磷脂囊泡示意图；
19.图2：光敏药物卟啉化合物的标准曲线；
20.图3：各浓度四苯基卟啉的二氯甲烷溶液的紫外-可见吸收光谱图；
21.图4：脂药比对卟啉-脂质体包封率的影响；
22.图5：在pbs中抗癌药物阿霉素的标准曲线；
23.图6：纳米鹿血磷脂囊泡的扫描电子显微镜图；
24.图7：图(a)空白鹿血磷脂显微镜像图；(b)卟啉-鹿血磷脂囊泡的显微镜像；
25.图8：卟啉-鹿血磷脂囊泡的荧光显微镜像图。
具体实施方式
26.下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明。但不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。
27.实施例1
28.下面以鹿血磷脂和光敏药物卟啉为例，说明该技术的具体步骤，该技术可适用于包裹抗癌药(阿霉素，紫杉醇，多西紫杉醇，羟基喜树碱，顺铂等类似抗癌药及其卟啉类衍生物等光敏药物)。作为光敏药物的包裹材料，鹿血磷脂可以有效调控光敏药物的光毒性，增加光动力学治疗过程中病人的顺应性。
29.卟啉-脂质体的制备方法
30.采用机械分散法和超声技术联用制备卟啉-脂质体：采用鹿血磷脂为膜材，利用鹿血磷脂的抗氧化性能调控药物-鹿血磷脂囊泡的生物学功能，包括以下步骤：将质量比为1:10的四苯基卟啉和鹿血磷脂均溶于有机相二氯甲烷中，震荡摇匀，加入二次蒸馏水，然后超声处理5min，摇匀，得到上层具有微粉色乳光的液体为制备好的卟啉-脂质体，如图1所示，低温，避光保存。其中有机相的体积限定为：在能够完全溶解药物的前提下，尽量减少有机相体积，有机相与二次蒸馏水的体积比为1:5。
31.四苯基卟啉标准曲线的绘制
32.确定四苯基卟啉的二氯甲烷溶液在波长419nm处有紫外吸收最大值。取适量四苯基卟啉标准溶液，分别稀释成质量浓度为2
×
10-4
mg/ml、4
×
10-4
mg/ml、6
×
10-4
mg/ml、8
×
10-4
mg/ml、1
×
10-3
mg/ml的四苯基卟啉溶液，采用紫外-分光光度法，在其紫外吸收最大波长419nm处测定各浓度溶液的紫外吸光值，以吸光值a为纵坐标，四苯基卟啉溶液质量浓度c为横坐标绘制其标准曲线，并拟合得出回归方程，见图2。
33.各浓度梯度的四苯基卟啉溶液在波长419nm处的吸光值如表1所示。相应浓度下四苯基卟啉溶液的紫外吸收光谱图如图3所示。由图3可以得到，λmax＝419nm处的吸光值随溶液浓度的增大而显著增大，具有良好的正相关性。
34.表1各浓度四苯基卟啉的二氯甲烷溶液最大吸光度值
[0035][0036]
包封率测定方法
[0037]
取制备的卟啉-脂质体，使用移液枪吸取下层二氯甲烷溶液，转移至5ml带刻度的离心管中，用少量二氯甲烷冲洗两次，使游离的四苯基卟啉全部溶于二氯甲烷中，定容至3ml，用移液枪吸取1ml置于石英池中，使用紫外-分光光度计进行扫描，测定其在最大吸收波长处的吸光值，代入标准曲线回归方程进行计算，得到游离四苯基卟啉质量，
[0038]
按照公式计算包封率。
[0039]
包封率＝(1-w1/w0)
×
100％
[0040]
式中：w1为游离药物的质量，w0为加入药物的总质量。
[0041]
卟啉-脂质体的脂药比优化
[0042]
卟啉-脂质体复合物的制备受很多相关因素的影响，其中四苯基卟啉的投入量与脂质体制剂的包封率直接相关。实验初步设定了鹿血磷脂与四苯基卟啉的质量比分别为：2:1、6:1、10:1、14:1、16:1、20:1共6个梯度，对制备得到的卟啉-脂质体进行包封率的测定，考察卟啉的投入量对包封率的影响。不同脂药比制备出的卟啉-脂质体的吸光度值与计算得到的包封率如表2所示。根据表2，以脂药比为横坐标，包封率为纵坐标，绘制统计柱形图，结果如图4所示。
[0043]
表2不同药脂比制备出的卟啉-脂质体的包封率
[0044][0045]
从图4中可以看出随着四苯基卟啉投入量的增大，卟啉-脂质体的包封率有所增加，当鹿血磷脂和卟啉比为10:1时，包封率达到最大，为79.23％，随后继续增大卟啉用量，包封率有所降低。这说明，在卟啉用量较小的情况下，其被包载入脂质体的程度较高；当达到一定临界值后，一定用量下的鹿血磷脂并不能将卟啉全部装载，而且随着卟啉浓度的增大，可能对于磷脂囊泡的形成也具有一定的影响，因此包封率随卟啉的用量增加开始降低。将制备出的鹿血磷脂提取物采用机械分散法和超声技术联用制备成鹿血磷脂囊泡，取适量放置于样品台中，通过扫描电子显微镜(sem)对其微观形貌进行分析，鹿血磷脂囊泡的微观
形貌如图6所示。由图6可以看出，鹿血磷脂囊泡粒径分布较均一，粒径约为几十纳米到几十微米，呈四面体和圆形等规则形貌。图7给出抗癌药物盐酸阿霉素的标准曲线，根据鹿血磷脂的特性和药物的特性，该方法也适用于类似于阿霉素抗癌药物-鹿血磷脂囊泡的制备，具体制备流程与卟啉的相同。
[0046]
图8为卟啉-脂质体的荧光显微镜图，卟啉自身具有红色荧光属性，具有良好的定位特征。从图中可以看出，卟啉均匀分布在鹿血磷脂的的膜层，说明卟啉和鹿血磷脂有很好的分子间亲和力。
[0047]
相同的实验程序也适合一些水难溶性抗癌药物的包埋，具体操作见光敏药物卟啉-鹿血磷脂的制备流程。