用于增强免疫及肿瘤治疗的方法与流程

用于增强免疫及肿瘤治疗的方法
1.相关申请案
2.本技术案主张2019年12月6日提交的题为“用于增强免疫及肿瘤治疗的方法(methods for enhancing immunity and tumor treatment)”的美国临时申请第62/945,053号的优先权，该案内容以全文引用的方式并入。
技术领域
3.本发明涉及用于治疗患有肿瘤、病变或癌症的个体的组合物、组合以及方法及用途。在一些方面中，该方法及用途包括向该个体给予结合pd-l1的靶向分子与诸如ir700的酞菁染料的偶联物。在一些方面中，在给予该靶向分子-酞菁染料偶联物之后，用适于活化该偶联物中的酞菁染料的光波长照射目标区域。在一些方面中，该照射引起表达pd-l1的细胞的细胞杀伤。所提供的实施方式引起包括转移性肿瘤细胞、侵袭性肿瘤细胞、异质肿瘤及/或对其他疗法具有抗性的肿瘤在内的肿瘤、病变或癌症的生长抑制、体积减小及消除。本发明还涉及用于增强免疫反应，诸如抗肿瘤或抗癌免疫反应、用于针对肿瘤生长的反应及有效治疗肿瘤、病变或癌症的组合物、组合、方法及用途。
现有技术
4.每年会开发出许多用于治疗癌症的治疗剂，包括免疫检查点抑制剂、小分子靶向疗法及其他抗癌治疗剂。然而，一些患者对该治疗剂无反应，且大部分癌症患者最终将在其治疗过程期间对其所接受的治疗剂不产生反应或产生抗性，导致疾病进展及癌症相关死亡。迫切地需要解决这些临床难题的新颖组合物及方法。


技术实现要素：

5.本文提供通过活化免疫细胞反应来治疗个体的肿瘤或病变的方法及用途，其涉及给予有肿瘤或病变的个体偶联物，该偶联物包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料。在任何实施方式中的一些中，该偶联物包含结合至pd-l1的抗体及酞菁染料ir700。在任何实施方式中的一些中，该方法亦涉及照射表达pd-l1的细胞所在的目标部位。举例而言，在任何实施方式中的一些中，目标区域是在或在约600nm至或至约850nm的波长下以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射。在任何实施方式中的一些中，该方法及用途引起或导致表达pd-l1的细胞的杀伤。在任何实施方式中的一些中，该方法及用途引起或导致该肿瘤或该病变的生长减少或抑制，及/或肿瘤转移及/或新产生的肿瘤的减少或抑制。
6.本文还提供通过活化免疫细胞反应来治疗个体的肿瘤或病变的方法及用途，其涉及：给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域。在任何实施方式中的一些中，该方法或用途引起表达pd-l1的免疫细胞的杀伤且由此抑
制该肿瘤或该病变的生长。
7.本文还提供用于治疗个体的肿瘤或病变的方法及用途，其涉及：给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物，该肿瘤或病变包含对免疫检查点抑制剂治疗的敏感性降低的肿瘤细胞；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该个体中该肿瘤或病变所在的目标区域；其中在该照射之后，该肿瘤或病变的生长、大小或活力减小或受抑制。
8.本文还提供用于治疗肿瘤或病变的方法及用途，其涉及：给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物，该肿瘤或病变对先前免疫疗法具有低反应、无反应、具有抗性、用先前免疫疗法难以治疗、无法对先前免疫疗法起反应或在先前免疫疗法之后复发；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该肿瘤或病变所在的目标区域。在任何实施方式中的一些中，该方法及用途引起该目标区域中表达pd-l1的细胞的杀伤。
9.本文还提供用于治疗对用于肿瘤或病变的先前免疫疗法具有低反应或无反应的个体的方法及用途。在任何实施方式中的一些中，该方法及用途涉及：鉴别对用于肿瘤或病变的先前免疫疗法具有低反应或无反应的个体；(b)向对先前免疫疗法具有低反应或无反应的有肿瘤或病变的个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及(c)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的细胞所在的目标区域。在任何实施方式中的一些中，该方法或用途引起表达pd-l1的细胞的杀伤且由此增加肿瘤中及/或肿瘤微环境中免疫细胞的数量或活性。
10.本文还提供用于治疗对用于肿瘤或病变的先前免疫疗法具有低反应或无反应的个体的方法及用途，其涉及：鉴别对用于肿瘤或病变的先前免疫疗法具有低反应、无反应、具有抗性/用该先前免疫疗法难以治疗、无法对该先前免疫疗法起反应或在该先前免疫疗法之后复发的个体；向对先前免疫疗法具有低反应、无反应、具有抗性/用该先前免疫疗法难以治疗、无法对该先前免疫疗法起反应或在该先前免疫疗法之后复发的有肿瘤或病变的个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及照射表达pd-l1的细胞所在的目标区域。在任何实施方式中的一些中，该照射是在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量进行。在任何实施方式中的一些中，该方法或用途引起表达pd-l1的细胞的杀伤且由此增加肿瘤中及/或肿瘤微环境中免疫细胞的数量或活性。
11.本文还提供用于增强有肿瘤或病变的个体对抗癌剂的反应的方法及用途，其涉及：给予有肿瘤或病变的个体抗癌剂；向该个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域；其中相较于由单独该抗癌剂治疗引起的抑制作用，该方法或用途引起对该肿瘤或该病变的生长的较强抑制作用。
12.本文还提供用于增强有肿瘤或病变的个体对抗癌剂的反应的方法及用途，其涉
及：向该个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域，其中该个体已被给予抗癌剂，且其中相较于由单独该抗癌剂治疗引起的抑制作用，该方法或用途引起对该肿瘤或该病变的生长的较强抑制作用。
13.本文还提供用于增强有肿瘤或病变的个体对抗癌剂的反应的方法及用途，其涉及：向个体给予抗癌剂；其中该个体已接受治疗，该治疗包含向该个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域，且其中相较于由单独该抗癌剂治疗引起的抑制作用，该方法或用途引起对该肿瘤或该病变的生长的较强抑制作用。
14.本文还提供用于对患有第一肿瘤或病变的个体免疫接种的方法及用途，其涉及：给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及照射该第一肿瘤或病变内的目标区域。在任何实施方式中的一些中，该照射是在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量进行。在任何实施方式中的一些中，其中该第一肿瘤或病变的生长受抑制及/或大小减小；且位于经治疗的第一肿瘤或病变远端的一或多个第二肿瘤或病变的出现、生长或建立得到抑制、延迟或防止。
15.本文还提供用于增强有肿瘤或病变的个体的先天性免疫反应的方法及用途，其涉及：向该个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该个体中该肿瘤或病变所在的目标区域。在任何实施方式中的一些中，该个体的先天性免疫反应增强。
16.本文还提供用于增加肿瘤或病变中免疫细胞的数量或量的方法及用途，其涉及：给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该个体中该肿瘤或病变所在的目标区域。在任何实施方式中的一些中，该个体的肿瘤或病变中免疫细胞的数量或量增加。
17.本文还提供用于治疗异质肿瘤或病变的方法及用途，其涉及：给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该个体中该肿瘤或病变所在的目标区域。在任何实施方式中的一些中，该个体的异质肿瘤或病变经治疗。在任何实施方式中的一些中，该肿瘤或病变含有复数个不同类型的肿瘤细胞或来自复数个不同来源的肿瘤细胞。
18.本文还提供治疗免疫抑制性肿瘤或病变的方法，其涉及：给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该个体中该肿瘤或病变所在的目标区域。在任何实施方式中的一些中，该个体的免疫抑制性肿瘤或病变经治疗。
19.本文还提供用于对个体疫苗接种以使其产生抗癌免疫反应的方法及用途，其涉及：向个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及照射目标区域；其中该方法或用途引起抗癌反应，该抗癌反应选自该个体中肿瘤的出现或生长的延迟或抑制、或肿瘤附近t记忆细胞的出现或增加。在任何实施方式中的一些中，该照射是在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量进行。在任何实施方式中的一些中，该方法或用途引起表达pd-l1的细胞或表达pd-l1的免疫细胞的杀伤。
20.本文还提供用于给予偶联物的方法及用途，其涉及：向个体给予连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料，该个体未用免疫检查点抑制剂治疗或先前未曾接受免疫检查点抑制剂治疗；以及照射该个体中肿瘤或病变所在的目标区域。在任何实施方式中的一些中，该照射是在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量进行。在任何实施方式中的一些中，在该照射之后，该肿瘤或病变的生长、大小或活力减小或受抑制。
21.在任何实施方式中的一些中，该目标区域包含表达pd-l1的细胞。在任何实施方式中的一些中，该表达pd-l1的细胞是免疫细胞。在任何实施方式中的一些中，该目标区域包含表达pd-l1的免疫细胞。在任何实施方式中的一些中，该表达pd-l1的细胞是免疫细胞。
22.在任何实施方式中的一些中，该增强先天性免疫反应包含活化树突细胞(dc)或抗原递呈树突细胞增加。在任何实施方式中的一些中，该活化dc展现cd80 及/或cd40 的细胞表面表型。在任何实施方式中的一些中，该抗原递呈树突细胞展现cd11b cd103 cd11c 的细胞表面表型。
23.在任何实施方式中的一些中，该免疫细胞是肿瘤内嗜中性粒细胞。在任何实施方式中的一些中，该肿瘤内嗜中性粒细胞展现cd11b

ly6c-/低
ly6g

的细胞表面表型。在任何实施方式中的一些中，该免疫细胞是肿瘤内效应t细胞。在任何实施方式中的一些中，该肿瘤内效应t细胞展现cd3

cd8

pd-1-的细胞表面表型。
24.在任何实施方式中的一些中，该先前免疫疗法是免疫检查点抑制剂治疗。在任何实施方式中的一些中，该个体对包含pd-1/pd-l1阻断的先前免疫疗法具有原发抗性或获得性抗性。
25.在任何实施方式中的一些中，免疫抑制性肿瘤或病变包含表达免疫检查点蛋白的肿瘤细胞。在任何实施方式中的一些中，该免疫检查点蛋白是pd-l1、pd-1或ctla-4。
26.在任何实施方式中的一些中，该抗癌剂选自检查点抑制剂、免疫佐剂、化学治疗剂、辐照及包含结合至肿瘤细胞的抗癌靶向分子的生物制剂。在任何实施方式中的一些中，该抗癌剂是抗体偶联物。在任何实施方式中的一些中，该抗体偶联物包含酞菁染料、毒素或tlr激动剂。
27.在任何实施方式中的一些中，向该个体给予抗pd-l1偶联物以治疗第一肿瘤或第一病变及/或抑制其生长；且该方法抑制或延迟一或多个第二肿瘤或病变、或该第一肿瘤或该第一病变的转移的出现。在任何实施方式中的一些中，该一或多个第二肿瘤在表型上及/或基因型上不同于该第一肿瘤。在任何实施方式中的一些中，该一或多个第二肿瘤并非来源于该第一肿瘤的转移。在任何实施方式中的一些中，该治疗延迟该肿瘤或病变的再生长，防止与该肿瘤或病变相关的癌症的复发或延长与该肿瘤或病变相关的癌症的缓解的持续
时间。
28.在任何实施方式中的一些中，该表达pd-l1的免疫细胞选自由以下组成的群：单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(dc)、m2肿瘤相关巨噬细胞(m2 tam)、致耐受性树突细胞(tdc)及骨髓源性抑制性细胞(mdsc)。在任何实施方式中的一些中，该表达pd-l1的免疫细胞是位于肿瘤、肿瘤微环境或淋巴结中。在任何实施方式中的一些中，该肿瘤或该病变包含pd-l1阴性肿瘤细胞。在任何实施方式中的一些中，该肿瘤或该病变中超过或超过约40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％的肿瘤细胞是pd-l1阴性肿瘤细胞。在任何实施方式中的一些中，该肿瘤细胞不被抗pd-l1抗体特异性识别。在任何实施方式中的一些中，该肿瘤细胞不表达免疫检查点蛋白或具有减少的免疫检查点蛋白表达。在任何实施方式中的一些中，该免疫检查点蛋白是选自pd-l1、pd-1及ctla-4。在任何实施方式中的一些中，该肿瘤细胞不响应炎性刺激而表达pd-l1。在任何实施方式中的一些中，该炎性刺激是干扰素。
29.在任何实施方式中的一些中，该肿瘤或病变对抗pd-l1疗法具有抗性。在任何实施方式中的一些中，该抗pd-l1疗法是用抗pd-l1抗体治疗。在任何实施方式中的一些中，相较于抗pd-l1疗法引起的抑制作用，本文所描述的方法涉及或引起对该肿瘤或病变的生长、大小或活力的较强抑制作用。在任何实施方式中的一些中，对该肿瘤或病变的生长的抑制作用及/或表达pd-l1的细胞的杀伤取决于cd8 t细胞的存在。
30.在任何实施方式中的一些中，向该个体给予该偶联物以治疗第一肿瘤或病变及/或抑制其生长及/或减小其大小。在任何实施方式中的一些中，该方法及用途抑制、延迟或防止位于该第一肿瘤或病变远端的一或多个第二肿瘤或病变的出现、生长或建立。
31.在任何实施方式中的一些中，该个体先前已用抗癌疗法及/或免疫检查点抑制剂治疗。在任何实施方式中的一些中，该个体先前已用免疫检查点抑制剂治疗。在任何实施方式中的一些中，该个体对用该抗癌疗法及/或免疫检查点抑制剂的先前治疗具有低反应、无反应、具有抗性/用该先前治疗难以治疗、无法对该先前治疗起反应或在该先前治疗之后复发。在任何实施方式中的一些中，该个体对用该免疫检查点抑制剂的先前治疗具有低反应、无反应、具有抗性/用该先前治疗难以治疗、无法对该先前治疗起反应或在该先前治疗之后复发。在任何实施方式中的一些中，由进行该方法或用途引起的肿瘤生长抑制作用要大于由用该抗癌疗法及/或免疫检查点抑制剂的先前治疗引起的肿瘤生长抑制作用。在任何实施方式中的一些中，由进行该方法或用途引起的肿瘤生长抑制作用要大于由用该免疫检查点抑制剂的先前治疗引起的肿瘤生长抑制作用。
32.在任何实施方式中的一些中，位于经治疗的第一肿瘤或病变的远端的第二肿瘤或病变的生长或建立受到抑制或防止。在任何实施方式中的一些中，该第二肿瘤或病变是该第一肿瘤或病变的转移。在任何实施方式中的一些中，本文所描述的方法涉及或引起该第一肿瘤或病变附近表达pd-l1的细胞的杀伤及/或活化免疫细胞反应，由此抑制或防止该第二肿瘤或病变的生长。在任何实施方式中的一些中，该第二肿瘤或病变在表型上及/或基因型上与该第一肿瘤或病变相同。在任何实施方式中的一些中，该第二肿瘤或病变在表型上及/或基因型上不同于该第一肿瘤或病变。在任何实施方式中的一些中，该一或多个第二肿瘤或第二病变并非来源于该第一肿瘤或病变的转移。
33.在任何实施方式中的一些中，该个体先前已用免疫检查点抑制剂治疗。在任何实施方式中的一些中，该个体对用该免疫检查点抑制剂的先前治疗具有低反应、无反应、具有
抗性/用该先前治疗难以治疗、无法对该先前治疗起反应或在该先前治疗之后复发。在任何实施方式中的一些中，由进行该方法或用途引起的肿瘤生长抑制作用要大于由用该免疫检查点抑制剂的先前治疗引起的肿瘤生长抑制作用。在任何实施方式中的一些中，该免疫检查点抑制剂是抗pd-l1免疫疗法。
34.在任何实施方式中的一些中，该个体未用免疫检查点抑制剂治疗或先前未曾接受用免疫检查点抑制剂的治疗。在任何实施方式中的一些中，该免疫检查点抑制剂是pd-l1、pd-1或ctla-4的抑制剂。
35.在任何实施方式中的一些中，免疫检查点抑制剂是pd-1抑制剂。在任何实施方式中的一些中，该pd-1抑制剂是抗pd-1抗体。在任何实施方式中的一些中，该免疫检查点抑制剂是pd-l1抑制剂。在任何实施方式中的一些中，该pd-l1抑制剂是抗pd-l1抗体。
36.在任何实施方式中的一些中，该个体患有cd8 t细胞浸润数量或量较少的肿瘤或病变。在任何实施方式中的一些中，在给予该偶联物之前，该个体患有cd8 t细胞浸润数量或量较少的肿瘤或病变。在任何实施方式中的一些中，在该给予及该照射之后，该肿瘤或病变中或该肿瘤或病变的微环境中免疫细胞的数量、量或活性增加。在任何实施方式中的一些中，在该给予及该照射之后，该肿瘤或病变中该cd8 t细胞浸润的数量或量增加。在任何实施方式中的一些中，在该给予及该照射之后，该肿瘤或病变附近记忆t细胞的数量或量增加。
37.在任何实施方式中的一些中，该靶向分子是或包含抗体或其抗原结合片段。在任何实施方式中的一些中，该靶向分子是结合pd-l1的抗体、抗体片段或抗体样分子。在任何实施方式中的一些中，该靶向分子是或包含抗pd-l1抗体或其抗原结合片段。
38.在任何实施方式中的一些中，该抗体或抗原结合片段包含来自选自由以下组成的群的抗体的互补决定区(cdr)：阿特珠单抗(atezolizumab)(mpdl3280a、泰圣奇(tecentriq)、rg7446)、阿维鲁单抗(avelumab)(bavencio(bavencio))、bcd-135、bgb-a333、bms-936559(mdx-1105)、cbt-502(tqb-2450)、考昔单抗(cosibelimab)(ck-301)、cs1001(wpb3155)、德瓦鲁单抗(durvalumab)(medi4736、英飞凡(imfinzi))、faz053、hlx20、inbrx-105、kn035、kn046、ldp、ly3300054、ly3415244、m7824(msb0011359c)、mcla-145、msb2311、nm-01、regn3504、shr-1316(hti-1088)、sti-3031(imc-001、sti-a1015)、tg-1501、zkab001(sti-a1014)。在任何实施方式中的一些中，该抗体或抗原结合片段包含来自阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、kn035或ck-301的互补决定区(cdr)。在任何实施方式中的一些中，该抗体或抗原结合片段选自由以下组成的群：阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、kn035、ck-301，或其生物类似药、可互换药(interchangeable)、生物改良药(biobetter)、复制生物制剂(copy biological)或生物仿制药(biogeneric)，或其抗原结合片段。在任何实施方式中的一些中，该抗体或抗原结合片段选自由以下组成的群：阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、kn035、ck-301。
39.在任何实施方式中的一些中，该目标区域在肿瘤或病变附近。在任何实施方式中的一些中，该目标区域是淋巴结或在淋巴结附近。
40.在任何实施方式中的一些中，在该给予及该照射之后，该个体展现持久反应、延长的无进展存活期、降低的复发机率及/或降低的转移机率。
41.在任何实施方式中的一些中，酞菁染料是si-酞菁染料。在任何实施方式中的一些
中，si-酞菁染料是ir700。
42.在任何实施方式中的一些中，该照射是在给予该偶联物之后30分钟与96小时之间进行。在任何实施方式中的一些中，该照射是在给予该偶联物之后24小时
±
4小时进行。在任何实施方式中的一些中，该目标区域是在690
±
40nm的波长下照射。在任何实施方式中的一些中，该目标区域是以或以约50j/cm2或以或以约100j/cm纤维长度的剂量照射。
43.在任何实施方式中的一些中，该肿瘤或病变与选自由以下组成的群的癌症相关：结肠癌、结肠直肠癌、胰脏癌、乳癌、皮肤癌、肺癌、非小细胞肺癌、肾细胞癌、甲状腺癌、前列腺癌、头颈癌、胃肠癌、胃癌、小肠癌、梭状细胞赘生物、肝脏癌瘤、肝癌、周围神经癌症、脑癌、骨骼肌癌症、平滑肌癌症、骨癌、脂肪组织癌症、子宫颈癌、子宫癌、生殖器癌、淋巴瘤及多发性骨髓瘤。
44.在任何所提供的方法中的一些中，重复该方法的一或多个步骤。在任何实施方式中的一些中，将该偶联物的给药重复一或多次。在任何实施方式中的一些中，在每次重复给予该偶联物之后，重复该照射步骤。在任何所提供的方法中的一些中，该方法亦涉及给予额外治疗剂或抗癌疗法。
附图说明
45.图1显示在植入ct26肿瘤的小鼠中的平均肿瘤体积随时间的变化，该小鼠已给予抗pd-l1抗体-ir700偶联物且随后在690nm下以75、100或150j/cm2剂量的光照射(α-pd-l1-ir700 75、100或150j/cm2)、未经历光照射(α-pd-l1-ir700)或给予生理盐水的对照。亦显示实现完全反应(cr)的小鼠的份数及百分比。实现cr的小鼠在图2a-2b中用第二肿瘤攻击。
46.图2a-2b显示图1中已实现cr的小鼠在通过植入第二ct26肿瘤攻击之后的组平均肿瘤体积(图2a)及个别肿瘤体积(图2b)随时间的变化。亦显示实现完全反应(cr)的小鼠的份数。实现cr的小鼠(*：来自α-pd-l1-ir700 100j/cm2组的一只cr小鼠除外)在图3a-3b中用不同类型的第三肿瘤攻击。
47.图3a-3b显示图2a-2b中已实现cr的小鼠在通过植入第三4t1-epcam肿瘤攻击之后的组平均肿瘤体积(图3a)及个别肿瘤体积(图3b)随时间的变化。亦显示实现完全反应(cr)的小鼠的份数及百分比。
48.图4显示植入ct26肿瘤的小鼠中的平均肿瘤体积随时间的变化，该小鼠已给予抗pd-l1抗体-ir700偶联物且随后在690nm下以100j/cm2剂量的光照射(α-pd-l1-ir700 pit)、或亦耗竭cd8细胞(α-pd-l1-ir700 pit cd8 depl.)、或未经历光照射(α-pd-l1-ir700)、未经历光照射且cd8细胞耗竭(α-pd-l1-ir700 cd8 depl.)或给予生理盐水的对照。亦显示实现完全反应(cr)的小鼠的份数及百分比。
49.图5a-5f显示在第一轮ct26肿瘤及抗pd-l1-ir700 pit之后实现cr的小鼠中的组平均肿瘤体积及个别肿瘤体积，该小鼠用第二轮肿瘤攻击如下：(a)ct26(图5a(组平均)及5b(个别小鼠))、(b)4t1.wt(未经工程改造的亲本4t1细胞；图5c(组平均)及5d(个别小鼠))、及(c)renca小鼠肾脏腺癌(图5e(组平均)及5f(个别小鼠))。先前未治疗(未治疗小鼠)组用ct26、4t1.wt或renca肿瘤攻击作为对照(图5a-5f)。组(a)中实现cr的小鼠在图6a-6b中用不同类型的第三肿瘤攻击。
50.图6a-6b显示图5a-5b中已实现cr且排斥ct26肿瘤攻击的小鼠在通过植入第三轮
l1 pit)、给予抗pd-l1-ir700偶联物(抗pd-l1偶联物)且未经历照射、每周两次给予裸抗pd-l1抗体(裸抗pd-l1)或给予生理盐水(对照)(图14b)。
具体实施方式
61.本文提供通过例如活化免疫反应来治疗患有肿瘤、病变或癌症的个体的组合物、组合、方法及用途。在一些方面中，所提供的实施方式涉及向该个体给予偶联物，该偶联物含有与诸如ir700的酞菁染料结合的靶向分子，该靶向分子结合程序性死亡蛋白配体1(pd-l1)。在一些方面中，所提供的实施方式涉及照射目标区域，诸如目标区域，诸如存在或可能存在表达pd-l1的细胞的目标区域。在一些方面中，该照射引起表面上表达pd-l1的细胞的死亡。在任何实施方式中的一些中，所提供的偶联物、组合物、组合、方法及用途是用于治疗患有肿瘤、病变(例如癌性病变)或癌症的个体，该肿瘤、病变或癌症对先前治疗性治疗，诸如先前免疫调节剂治疗及/或先前抗癌治疗性治疗具有低反应或实质上无反应、用该先前治疗性治疗失败、在该先前治疗性治疗之后复发、用该先前治疗性治疗难以治疗及/或对该先前治疗性治疗具有抗性。
62.在一些方面中，将酞菁染料-靶向分子偶联物(例如抗pd-l1与ir700的偶联物)，且在一些情况下，将额外治疗剂用于所提供的组合物、组合、方法及用途中。用途包括该偶联物、组合物及组合在诸如治疗方法的该方法以及诸如治疗方案的治疗中的用途，以及此类偶联物、组合物及组合在制备药物以便进行此类治疗方法及治疗中的用途。还提供用于治疗肿瘤、病变或癌症的此类偶联物、组合物及组合。在一些方面中，此类用途包括执行如本文所描述的方法或治疗，诸如任何治疗方法或治疗方案。在一些实施方式中，该方法及用途亦涉及用光，例如本文所描述的光照射目标区域，诸如该个体中肿瘤、病变或癌症所在的目标区域。在一些实施方式中，该方法及用途由此治疗该肿瘤、病变或癌症。在一些方面中，待治疗的肿瘤、病变或癌症包括诸如个体中的癌症，其包括原发性肿瘤及继发性或转移性肿瘤细胞，例如继发性或转移性癌症。在一些方面中，该肿瘤、病变或癌症可包括一个原发性肿瘤或多个原发性肿瘤以及转移性肿瘤细胞。在一些情况下，经治疗的个体可能具有原发性肿瘤、转移性肿瘤细胞及/或侵袭性肿瘤细胞中的一或多种。
63.在一些方面中，还提供此类偶联物、组合物及组合用于增强、活化、诱导、引起、加强或支持该个体的免疫功能，诸如局部及/或全身免疫性的方法及用途。在一些方面中，所提供的实施方式可靶向肿瘤微环境中的细胞，包括非癌细胞及/或免疫细胞，诸如具有免疫抑制功能的免疫细胞。
64.在治疗癌症患者中的一大难题是癌症对治疗剂缺乏反应性。迫切地需要用于治疗此类癌症的组合物和方法。在一些情况下，所提供的实施方式是基于观察到用酞菁染料-靶向分子偶联物，诸如含有pd-l1靶向分子及酞菁染料(例如ir700)的偶联物治疗且随后光照射(又称为“光免疫疗法”及“pit”)目标区域引起肿瘤生长的显著抑制及/或对治疗的完全反应。
65.在一些方面中，用酞菁染料-pd-l1靶向分子偶联物治疗及光照射可例如藉助于消除免疫抑制性细胞，诸如免疫抑制性骨髓细胞(例如骨髓源性抑制性细胞(mdsc)、致耐受性树突细胞(tdc)、m2肿瘤相关巨噬细胞(m2 tam))活化、诱导、增强或加强免疫反应。在一些方面中，消除免疫抑制性细胞引起免疫反应，诸如抗肿瘤或抗癌免疫反应的活化、诱导、增
强或加强。在一些方面中，所提供的实施方式提供的优点在于，其可应用于许多不同的肿瘤、病变或癌症类型，例如不同来源或表达不同表面抗原的癌症类型，或癌症可共有类似免疫抑制机制。在一些方面中，所提供的实施方式可用于克服此类免疫抑制机制。此外，在一些方面中，所提供的实施方式可提供对异质肿瘤、病变或癌症，例如含有各种不同类型的肿瘤或癌症细胞的肿瘤、病变或癌症的有效治疗。在一些方面中，所提供的实施方式还提供诱导、活化或增强该个体的局部及/或全身免疫活性或全身免疫性的优点，由此允许治疗除供照射的目标区域外在体内别处存在的肿瘤、病变或癌症，诸如转移的肿瘤或癌症、侵袭性肿瘤或癌症、在不同部位的肿瘤或癌症、或不同类型的肿瘤、病变或癌症。其他优点包括治疗转移性癌症及/或侵袭性癌症，无需定位及/或直接照射转移性肿瘤细胞。
66.所提供的实施方式亦可用于治疗对包括抗pd-l1免疫疗法在内的先前治疗性治疗，例如免疫检查点抑制剂、抗癌剂或针对免疫抑制性细胞的分子无反应的肿瘤、病变或癌症。所提供的实施方式亦在癌症治疗中提供其他优点，诸如有效治疗对包括抗pd-l1治疗在内的先前治疗性治疗无反应的癌症。
67.本发明亦在增强个体的抗癌或抗肿瘤免疫性，例如针对可能产生的不同肿瘤或癌症的抗癌或抗肿瘤免疫性方面提供出人意料的特征。在一些情况下，所提供的实施方式是基于观察到用酞菁染料-靶向分子偶联物，诸如抗pd-l1抗体-ir700偶联物治疗癌症且随后照射肿瘤不仅引起对该特定肿瘤的治疗，而且亦引起对随后产生的相同或不同类型的肿瘤的有效治疗。所提供的实施方式还提供对该个体在初始肿瘤治疗后具有完全反应之后引入的肿瘤的有效治疗，指示免疫记忆反应；及/或对在供照射的目标区域远端的肿瘤(例如转移肿瘤或不同位置中存在的肿瘤)的有效治疗。所提供的组合物、组合、方法及用途可增强或改善个体的免疫反应，例如针对癌症的全身免疫反应，包括免疫记忆反应，其可有效针对在治疗之后可能发展的肿瘤。
68.在一些方面中，还提供涉及给予诸如免疫调节剂的额外治疗剂与该酞菁染料-靶向分子偶联物(例如抗pd-l1-ir700偶联物)的组合的方法。
69.在任何所提供的实施方式中的一些实施方式中，抗pd-l1偶联物治疗或给予之后一般用适合光波长照射。除非特定地陈述该方法不执行照射步骤，否则此类照射被视为抗pd-l1偶联物治疗及给予的一部分。在一些情况下，此类照射称为光免疫疗法(pit)。
70.本技术案中所提及的所有公开出版物，包括专利文件、科学论文及数据库均以全文引用的方式并入本文中用于所有目的，其引用的程度如同各个别公开出版物以引用的方式个别地并入一般。若本文所阐述的定义与以引用方式并入本文中的专利、申请案、公开的申请案及其他公开出版物中所述的定义相反或不一致，则以本文所阐述的定义为准，而非以引用方式并入本文中的定义为准。
71.本文所使用的章节标题仅出于组织目的且不应理解为限制所描述的主题。
72.i.用抗pd-l1偶联物治疗的方法及其用途
73.在一些实施方式中，所提供的方法及用途涉及给予抗pd-l1偶联物及用适合与该酞菁染料一起使用的光波长照射目标区域，由此使光激发该染料并引起对表面上表达pd-l1的细胞的杀伤，例如本文所描述。此类方法及用途使得增强、活化、诱导、引起、加强或支持免疫功能，诸如局部及/或全身免疫性；减少或消除病变(例如肿瘤)；减少或抑制肿瘤生长；减少、抑制或消除肿瘤细胞转移，或其任何组合。
74.程序性死亡蛋白配体1(pd-l1)，又称为分化簇247(cd247)或b7-h1，是用作免疫检查点并下调免疫反应的蛋白质受体。pd-l1是b细胞、nk细胞及t细胞中表达的免疫检查点蛋白程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)的配体(shinohara等人,1995,genomics 23:704-6；blank等人,2007,cancer immunol immunother 56:739-45；finger等人,1997,gene 197:177-87；pardoll,2012,nature reviews cancer 12:252-264)。pd-l1在活化t细胞、b细胞、骨髓细胞、巨噬细胞及某些类型的肿瘤细胞上表达。pd-l1在某些免疫细胞，诸如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(dc)、m2肿瘤相关巨噬细胞(m2 tam)、致耐受性树突细胞(tdc)或骨髓源性抑制性细胞(mdsc)、或某些肿瘤细胞上表达，以在肿瘤或肿瘤微环境(tme)附近诱导免疫抑制。
75.pd-1与pd-l1的复合物抑制cd8 t细胞的增殖且减少免疫反应(topalian等人,2012,n engl j med 366:2443-54；brahmer等人,2012,n eng j med 366:2455-65)。pd-1的主要作用是在响应感染而发炎期间限制周边组织中t细胞的活性，以及限制自体免疫(pardoll,2012,nature reviews cancer 12:252-264)。pd-1表达在活化t细胞中被诱导且pd-1与其内源性配体之一，诸如pd-l1的结合通过抑制刺激性激酶而起到抑制t细胞活化的作用(pardoll,2012,nature reviews cancer 12:252-264)。pd-1亦用于抑制tcr“停止信号”(pardoll,2012,nature reviews cancer 12:252-264)。pd-1在调节性t(treg)细胞上大量表达且可在配体存在下增加其增殖(pardoll,2012,nature reviews cancer 12:252-264)。pd-l1与pd-1的结合基于经由免疫受体酪氨酸开关基序(itsm)与磷酸酶(shp-1或shp-2)相互作用来传递抑制信号。
76.抗pd-l1抗体已被用于治疗癌症，诸如非小细胞肺癌、黑素瘤、结肠直肠癌、肾细胞癌、胰脏癌、胃癌、卵巢癌、乳癌及恶性血液病(brahmer等人,n engl j med 366:2455-65；ott等人,2013,clin cancer res 19:5300-9；radvanyi等人,2013,clin cancer res 19:5541；menzies及long,2013,ther adv med oncol 5:278-85；berger等人,2008,clin cancer res 14:13044-51)。在一些方面中，使用抗pd-l1抗体可通过阻止pd-l1与pd-1的结合来降低pd-1/pd-l1的部分免疫抑制作用。
77.然而，在一些方面中，所提供的组合物、方法及用途可通过在用适合于与酞菁染料一起使用的光波长照射目标区域，使得该光激发该染料且引起细胞杀伤之后，杀伤及消除在细胞表面上表达pd-l1的细胞，进一步增强、活化、诱导、引起、加强或支持免疫功能，诸如局部及/或全身免疫。因此，消除或杀伤表面上表达pd-l1的细胞，特别是具有免疫抑制功能的免疫细胞，诸如m2肿瘤相关巨噬细胞(m2 tam)、致耐受性树突细胞(tdc)或骨髓源性抑制性细胞(mdsc)可用以增强、活化、诱导、引起、加强或支持免疫功能，诸如局部及/或全身免疫，诸如抗肿瘤或抗癌免疫。在一些方面中，所提供的方法及用途可增强、活化、诱导、募集或支持淋巴细胞浸润至肿瘤或病变中。在一些实施方式中，所提供的方法及用途活化肿瘤内先天性反应，使得肿瘤内树突细胞(例如活化树突细胞)的活化增加。在一些方面中，所提供的方法及用途活化适应性免疫反应，使得cd8 t细胞的浸润增加。在一些实施方式中，所提供的方法及用途使得肿瘤内耗竭的cd8 t细胞的数量减少。在一些实施方式中，所提供的方法及用途使得新活化的cd8 t细胞的肿瘤内浸润增加。在一些实施方式中，所提供的方法及用途可引起治疗作用的改善，诸如通过选择具有较高含量或数量的非耗竭效应细胞，例如cd8 t细胞的个体进行治疗，及/或通过改善非耗竭效应细胞的活性或反应引起治疗作用
的改善。
78.在一些方面中，所提供的组合物、方法及用途可用于对抗pd-l1免疫疗法具有抗性或用该免疫疗法难以治疗的肿瘤。肿瘤，诸如实体肿瘤，可通过若干机制发展对抗pd-l1疗法的抗性，该机制包括(但不限于)不可逆t细胞耗竭；不足t细胞活化；引起t细胞的补偿性抑制性信号传导上调的肿瘤细胞免疫编辑；产生免疫抑制性肿瘤微环境，诸如通过增加treg、mdsc、肿瘤相关巨噬细胞(例如m2巨噬细胞)的浸润；升高肿瘤源性细胞因子及趋化因子(例如tgf-β、cxcl8)的含量；使th1型趋化因子沉默；吲哚胺2,3-双加氧酶(ido)产生；及过量细胞外腺苷。所提供的组合物、方法及用途可用于克服一些肿瘤所采用的一或多个抗pd-l1抗性机制。
79.此外，给予该偶联物且随后照射亦可引起表达pd-l1的癌细胞的直接杀伤，由此引起肿瘤生长的抑制或减少。pd-l1靶向分子-酞菁偶联物可直接地或间接地影响及杀伤肿瘤或肿瘤的微环境(又称为肿瘤微环境；tme)中存在的一或多个肿瘤细胞，包括在与原发性肿瘤不同的位置处的肿瘤细胞、转移的肿瘤、新产生的肿瘤细胞及/或不同类型或细胞表面抗原表达的肿瘤。因此，所提供的组合物、方法及用途可甚至对不表达细胞表面pd-l1的肿瘤细胞、对先前疗法，诸如先前免疫调节剂疗法具有低反应或实质上无反应、先前疗法已失败、在先前疗法之后复发、用先前疗法难以治疗及/或对先前疗法具有抗性的肿瘤、病变或癌症提供有效治疗。在特定实施方式中，所提供的组合物、方法及用途可治疗对抗pd-l1、抗pd-1及/或抗ctla-4疗法无反应、具有抗性或用该疗法难以治疗的肿瘤或病变。
80.在一些实施方式中，本文所提供的组合物、方法及用途亦有效治疗大小较大的肿瘤且展现比较小肿瘤更大的免疫抑制作用。此类肿瘤可能对其他治疗，诸如用免疫调节剂，诸如用免疫检查点抑制剂的治疗(例如抗pd-l1、抗pd-1及/或抗ctla-4疗法)具有较低反应或无反应。在此类情况下，通过给予本文所描述的抗pd-l1偶联物且随后照射而提供的抗pd-l1光免疫疗法可有效抑制或实质上减少较大肿瘤的生长，该较大肿瘤在一些情况下无法通过其他免疫调节剂疗法及/或抗癌疗法有效地抑制。在一些实施方式中，本文所提供的组合物、方法及用途有效治疗大小较大且对抗pd-l1、抗pd-1及/或抗ctla-4疗法具有抗性的肿瘤。
81.在一些方面中，提供通过活化免疫细胞反应来治疗个体的肿瘤或病变的方法及用途。免疫细胞活化可为直接或间接活化。在一些方面中，提供治疗对用于肿瘤或病变的先前免疫疗法(例如抗pd-l1、抗pd-1及/或抗ctla-4疗法)具有低反应、无反应、具有抗性、用先前免疫疗法难以治疗、无法对先前免疫疗法起反应或在先前免疫疗法之后复发的个体的方法及用途。在一些方面中，该方法涉及给予有肿瘤或病变的个体偶联物，该偶联物包含连接至结合pd-l1的靶向分子(诸如抗pd-l1抗体)的酞菁染料(诸如ir700)。在一些方面中，该方法亦涉及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约以或以约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的细胞，例如表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域，使得该方法可引起表达pd-l1的细胞的杀伤并由此抑制该肿瘤或该病变的生长。在一些方面中，该方法可引起表达pd-l1的细胞的杀伤并由此增加该肿瘤或病变中及/或该肿瘤或病变的微环境中免疫细胞的数量或活性。
82.在一些实施方式中，提供通过活化有肿瘤或病变的个体的免疫细胞反应来治疗个体的肿瘤或病变的方法及用途，该个体已给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染
料的偶联物，且该活化包括在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域；其中该方法引起该表达pd-l1的细胞的杀伤并由此抑制该肿瘤或该病变的生长。在一些实施方式中，该表达pd-l1的细胞是免疫细胞。在一些实施方式中，该表达pd-l1的细胞是肿瘤细胞。
83.在一些实施方式中，提供治疗对用于肿瘤或病变的先前免疫疗法具有低反应、无反应、具有抗性、用先前免疫疗法难以治疗、无法对先前免疫疗法起反应或在先前免疫疗法之后复发的个体的方法及用途，其包含在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射对先前免疫疗法具有低反应或无反应的有肿瘤或病变的个体中表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域，该个体已给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；其中该方法引起表达pd-l1的细胞的杀伤并由此增加该肿瘤中及/或该肿瘤微环境中免疫细胞的数量或活性。在任何实施方式中的一些中，该表达pd-l1的细胞是免疫细胞。
84.在一些实施方式中，提供增强有肿瘤或病变的个体对抗癌剂的反应的方法及用途。在一些方面中，该方法涉及给予有肿瘤或病变的个体抗癌剂。在一些方面中，向该个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物。在一些方面中，在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域引起的对该肿瘤或该病变的生长抑制作用要大于由用单独抗癌剂治疗引起的抑制作用。
85.在一些实施方式中，提供增强有肿瘤或病变的个体对抗癌剂的反应的方法及用途，其涉及：向个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域，其中该个体已给予抗癌剂；引起针对该肿瘤或该病变的生长抑制作用，该抑制作用要大于由单独该抗癌剂治疗引起的抑制作用。
86.在一些实施方式中，提供增强有肿瘤或病变的个体对抗癌剂的反应的方法及用途，其涉及：向个体给予抗癌剂；其中该个体已接受治疗，该治疗包含向该个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域，且其中该抗癌剂的给药及该治疗引起的对该肿瘤或该病变的生长抑制作用要大于用单独抗癌剂引起的抑制作用。
87.在一些实施方式中，提供对个体进行疫苗接种或免疫接种以使其产生抗癌免疫反应的方法及用途。在一些方面中，对个体进行疫苗接种或免疫接种以使其产生抗癌免疫反应可抑制第一肿瘤或病变的生长及/或减小其大小；且亦延迟或防止例如位于经治疗的第一肿瘤或病变远端的一或多个第二肿瘤或病变的出现、生长或建立。在一些方面中，该方法涉及向个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物。在一些方面中，该方法涉及照射目标区域，引起抗癌反应，该抗癌反应选自该个体中肿瘤出现或生长的延迟或抑制、或肿瘤附近t记忆细胞的出现或增加。
88.在一些实施方式中，提供对个体进行疫苗接种或免疫接种以使其产生抗癌免疫反
应的方法及用途，其涉及：照射已给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物的个体中的目标区域；引起抗癌反应，该抗癌反应选自该个体中肿瘤出现或生长的延迟或抑制、或肿瘤附近t记忆细胞的出现或增加。
89.在一些实施方式中，重复该方法的一或多个步骤。在一些实施方式中，将该偶联物的给药重复一或多次，视情况其中在每次重复给予该偶联物之后，重复该照射步骤。在一些实施方式中，进一步包含给予额外治疗剂或抗癌疗法。
90.a.用于刺激或增强抗癌免疫反应的方法
91.在一些方面中，所提供的采用包括抗pd-l1偶联物的组合物的方法及用途可使该个体的免疫反应，诸如全身及/或局部免疫反应增强，该免疫反应增强又可引起对用于肿瘤、病变或癌症的疗法或治疗的反应增强。在一些方面中，本文中的方法及用途包括向该个体给予抗pd-l1偶联物，且在给予该偶联物之后，照射目标区域，诸如存在表达pd-l1的细胞的目标区域，例如肿瘤、肿瘤附近、淋巴结、淋巴结附近或肿瘤微环境。
92.在一些方面中，所提供的实施方式可刺激、增强、活化、诱导、引起、强化、加强或支持患有肿瘤、病变或癌症的个体的免疫反应，诸如全身免疫反应。在一些实施方式中，所提供的方法及用途使得患有肿瘤、病变或癌症的个体的全身免疫反应增强。“全身免疫反应”是指个体的免疫系统以全身方式对一或多个免疫攻击，包括与肿瘤、病变或癌症相关的免疫攻击起反应的能力。全身免疫反应可包括个体的后天免疫系统及/或先天免疫系统的全身反应。全身免疫反应可包括由个体的后天免疫系统及/或先天免疫系统产生的抗肿瘤或抗癌反应。在一些方面中，全身免疫反应包括不同组织中，包括血流、淋巴结、骨髓、脾及/或肿瘤微环境中的免疫反应，且在一些情况下，包括组织及器官以及组织及器官的各种细胞及因子的协调反应。在一些实施方式中，所提供的实施方式可刺激、增强、活化、诱导、引起、强化、加强或支持包括后天免疫系统及/或先天免疫系统在内的个体自身免疫系统的抗癌或抗肿瘤免疫反应。在一些方面中，所提供的方法及用途可使该个体的先天性免疫反应增强。
93.在一些方面中，所提供的实施方式亦可展现远端效应。在一些方面中，“远端效应”是指未直接治疗或远离局部治疗部位的肿瘤，例如远端或转移性肿瘤亦得到治疗，例如肿瘤体积减小的治疗效应。
94.在一些方面中，所提供的实施方式可实现肿瘤免疫。在这些方面中，所提供的实施方式防止或阻碍新肿瘤或转移的生长。在一些实施方式中，由所提供的实施方式实现的肿瘤生长抑制作用引起持久的抗肿瘤反应。在一些实施方式中，由所提供的实施方式实现的肿瘤生长抑制作用使无进展存活期延长。在一些实施方式中，由所提供的实施方式实现的肿瘤生长抑制作用使复发机率减小及/或转移机率减小。在一些方面中，所提供的实施方式可实现对经治疗个体中相同肿瘤类型或不同肿瘤类型的免疫。在一些方面中，所提供的实施方式可抑制来自不同肿瘤谱是的肿瘤，亦即在经治疗个体体内产生或可产生的不同类型肿瘤的生长。
95.在一些方面中，目标区域是包含表达pd-l1的细胞的区域。在一些实施方式中，该表达pd-l1的细胞是免疫细胞。在任何实施方式中的一些中，该方法引起该表达pd-l1的细胞，诸如表达pd-l1的免疫细胞的杀伤。在一些实施方式中，该表达pd-l1的免疫细胞选自由以下组成的群：单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(dc)、m2肿瘤相关巨噬细胞(m2 tam)、致耐受
性树突细胞(tdc)及骨髓源性抑制性细胞(mdsc)。在一些实施方式中，该表达pd-l1的免疫细胞是位于肿瘤、肿瘤微环境或淋巴结中。
96.在一些方面中，拟根据所提供的实施方式照射的目标区域是肿瘤，诸如原发性肿瘤、肿瘤(诸如原发性肿瘤)附近或肿瘤微环境(tme)。在一些实施方式中，目标区域靠近肿瘤或邻近肿瘤、或在肿瘤或肿瘤细胞附近。在一些实施方式中，目标区域是肿瘤。在一些实施方式中，目标区域是原发性肿瘤。在一些实施方式中，目标区域是继发性肿瘤或转移性肿瘤。在一些实施方式中，目标区域是肿瘤微环境。
97.在一些实施方式中，该目标区域是淋巴结或在淋巴结附近。在一些实施方式中，目标区域是淋巴结，例如含有表达pd-l1的细胞的淋巴结，或在该淋巴结附近。在一些实施方式中，目标区域是淋巴结。在一些实施方式中，该目标区域是在淋巴结附近。
98.在一些方面中，所提供的实施方式可刺激或增强针对一或多个原发性肿瘤或病变及/或一或多个第二肿瘤或病变，诸如转移性肿瘤或病变、或不同类型的肿瘤或病变的全身反应，诸如全身免疫反应。
99.在一些方面中，所提供的实施方式在一些情况下通过移除表达pd-l1的免疫细胞，诸如可能具有免疫抑制功能的细胞，诸如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(dc)，包括m2肿瘤相关巨噬细胞(m2 tam)、致耐受性树突细胞(tdc)或骨髓源性抑制性细胞(mdsc)，来刺激或增强个体的免疫反应，诸如个体的抗癌免疫反应。在一些方面中，所提供的实施方式通过杀伤及消除表达pd-l1的免疫抑制性细胞，诸如m2 tam、tdc或mdsc，来刺激或增强个体的免疫反应，诸如靶向肿瘤、病变或癌症的全身及/或局部免疫反应。如本文中的例子所示，在给予pd-l1-酞菁染料偶联物及光照射之后的肿瘤生长抑制作用需要个体的cd8 t细胞的存在及/或活性，因为个体的cd8 t细胞耗竭会引起与给予生理盐水的对照中的生长类似的肿瘤生长。在一些方面中，免疫抑制性细胞，例如m2 tam、tdc或mdsc，诸如表达pd-l1的细胞，抑制个体免疫细胞，诸如cd8 t细胞或自然杀手(nk)细胞的功能及/或活性。藉助于杀伤及消除免疫抑制性细胞，诸如表达pd-l1的免疫抑制性细胞，包括m2 tam、tdc或mdsc，所提供的实施方式可刺激及增强个体的免疫反应。如本文中的例子所示，此类根据所提供的实施方式的治疗引起一或多个原发性肿瘤的生长抑制，诸如对该治疗的完全反应，以及对一或多个第二肿瘤，诸如与原发性肿瘤或病变相同或不同类型及/或来源的第二肿瘤及/或存在于与原发性肿瘤或病变不同的部位处，诸如远端部位的第二肿瘤的生长抑制。
100.在一些方面中，该肿瘤或该病变的生长抑制及/或该表达pd-l1的细胞的杀伤取决于cd8 t细胞的存在。在一些实施方式中，在该给予之前，该个体患有cd8 t细胞浸润数量或量较少的肿瘤或病变。在一些实施方式中，在该给予及该照射之后，该肿瘤中或肿瘤微环境中免疫细胞的数量、量或活性增加。在一些实施方式中，在该给予及该照射之后，该肿瘤或该病变中该cd8 t细胞浸润的数量或量增加。在一些实施方式中，在该给予及该照射之后，该肿瘤附近记忆t细胞的数量增加。
101.在一些方面中，刺激或增强的全身免疫反应包括该个体的全身cd8

t效应细胞的数量及/或活性增加；如使用ctl分析法，使用来自脾、外周血、骨髓或淋巴结的细胞所量测的针对肿瘤细胞的全身t细胞的细胞毒性增加；原发性或继发性(例如转移性或新)肿瘤或病变中肿瘤内cd8

t效应细胞的数量、活性及/或活化增加；全身cd8

t细胞活化增加；全身树突细胞活化增加；原发性或继发性(例如转移性或新)肿瘤或病变中树突细胞活化增加；原
发性或继发性(例如转移性或新)肿瘤或病变中肿瘤内树突细胞浸润增加；原发性或继发性(例如转移性或新)肿瘤或病变中新t细胞活化增加；原发性或继发性(例如转移性或新)肿瘤或病变中t细胞多样性增加；全身调节性t细胞减少；原发性或继发性(例如转移性或新)肿瘤或病变中调节性t细胞减少；全身骨髓源性抑制性细胞减少；原发性或继发性(例如转移性或新)肿瘤或病变中肿瘤内骨髓源性抑制性细胞减少；原发性或继发性(例如转移性或新)肿瘤或病变中肿瘤相关纤维母细胞或癌症相关纤维母细胞(caf)减少；或其任何组合。在一些情况下，全身反应可通过对来自个体的血液、组织、细胞或其他流体取样并评估促炎性细胞因子的增加、免疫细胞活化标记物及/或t细胞多样性的增加或出现进行评估。在一些方面中，全身反应可通过分析直接地或间接地受该方法影响的细胞来评估。举例而言，可在治疗后第4天与第28天之间或在照射该个体的原发性肿瘤的步骤之后的任何时间，自该个体收集细胞。
102.在一些方面中，所提供的实施方式可刺激、增强、强化、加强或支持患有肿瘤、病变或癌症的个体的免疫反应，诸如局部反应，诸如局部免疫反应。在一些实施方式中，所提供的方法及用途使得患有肿瘤、病变或癌症的个体的局部反应增强。“局部免疫反应”是指组织或器官中针对一或多个免疫攻击，包括与肿瘤、病变或癌症相关的免疫攻击的免疫反应。局部免疫反应可包括后天免疫系统及/或先天免疫系统。在一些方面中，局部免疫包括在不同组织，诸如血流、淋巴结、骨髓、脾及/或肿瘤微环境同时发生的免疫反应。
103.在一些方面中，刺激或增强的局部免疫反应包括该个体的肿瘤内cd8

t效应细胞(例如cd3

cd8

细胞)的数量及/或活性增加、cd8

t效应细胞活化增加、肿瘤内树突状(cd11c

)细胞浸润增加、肿瘤内树突细胞活化(例如cd11c

cd80

及/或cd11c

cd40

)增加、肿瘤内抗原递呈树突细胞(cd11b

cd103

cd11c

)增加、肿瘤内新t细胞活化(例如cd3

cd8

pd1-细胞)增加、肿瘤内t细胞多样性增加、肿瘤内嗜中性粒细胞(cd11b

cy6c-/低
ly6g

细胞)增加、肿瘤内巨噬细胞(例如cd11b

f4/80

细胞)减少、肿瘤内调节性t细胞(treg)减少、肿瘤内骨髓源性抑制性细胞(mdsc；例如cd11b

ly6c

ly6g-细胞)减少、肿瘤内肿瘤相关纤维母细胞或癌症相关纤维母细胞(caf)减少、肿瘤内耗竭性t细胞，诸如耗竭性cd8 t细胞(例如pd-1

ctla-4

cd3

cd8

细胞)的数量及/或活性减小，或其任何组合。在一些方面中，刺激或增强的局部免疫反应是通过所提供的实施方式中的任一个实现。在一些方面中，细胞，诸如指示局部免疫反应或先天性免疫反应的免疫细胞的细胞表面表型是通过用可用于检测表面上标记物的表达的试剂，诸如经标记抗体进行染色来评估。在一些方面中，细胞，诸如指示局部免疫反应或先天性免疫反应的免疫细胞的细胞表面表型是使用流式细胞计数检测。
104.在一些情况下，局部反应，诸如局部免疫反应，可通过自个体取得血液、组织或其他样品并评估肿瘤或tme中抗免疫细胞类型的增加及/或评估局部免疫活化标记物的增加或出现来评估。在一些方面中，局部反应，诸如局部免疫反应，可通过分析直接地或间接地受该方法影响的细胞来评估。举例而言，可在治疗后第4天与第28天之间或在照射该个体的原发性肿瘤的步骤之后的任何时间，自该个体收集细胞。
105.在一些方面中，该方法及用途亦涉及给予额外治疗剂，诸如免疫调节剂，例如免疫检查点抑制剂。该免疫调节剂可在给予该偶联物之前、同时或之后给予。在一些方面中，给予该额外治疗剂，诸如免疫调节剂亦可引起刺激、增强、活化、诱导、加强或支持免疫反应，诸如个体的全身及/或局部免疫反应，包括抗癌或抗肿瘤反应。示例性额外治疗剂、组合物、
组合、方法及用途包括本文所描述者，例如第v部分中所描述者。
106.b.用于抗pd-l1偶联物疗法的肿瘤及病变
107.本文所描述的方法包括给予抗pd-l1偶联物及用活化该偶联物的酞菁染料部分的光波长照射个体中的目标区域，诸如肿瘤或病变、肿瘤附近、淋巴结、淋巴结附近、或肿瘤或病变的肿瘤微环境(tme)，以实现例如表面上表达pd-l1的细胞的细胞杀伤。在一些实施方式中，本文所提供的方法及用途包括治疗具有一或多个肿瘤或病变，诸如一或多个原发性肿瘤或病变(或第一肿瘤或病变)、一或多个继发性肿瘤或病变(或第二肿瘤或病变)、一或多个新产生的肿瘤或病变及/或一或多个转移的肿瘤或病变的个体。个体可具有一个、两个、三个或超过三个肿瘤。此类肿瘤可在一或多个组织或器官中，诸如在一个组织或器官中、两个不同的组织或器官中、三个不同的组织或器官中或超过三个不同的组织或器官中。在一些方面中，待治疗的肿瘤中的一或多个在构成该肿瘤的细胞的表面上表达pd-l1。在一些方面中，待治疗的肿瘤中的一或多个含有不表达pd-l1的细胞，主要由该细胞构成，具有较大数量的该细胞或完全由该细胞构成，具有低pd-l1表达，或呈pd-l1阴性。在一些方面中，待治疗的肿瘤中的一或多个含有对pd1/pd-l1检查点阻断具有减少的反应、具有抗性或变得具有抗性(亦即，获得性抗性)的细胞，主要由该细胞构成，具有较大数量的该细胞，或完全由该细胞构成。
108.在一些方面中，根据所提供的实施方式治疗的肿瘤或病变是免疫检查点抑制剂治疗未治疗的，或先前未曾接受过免疫检查点抑制剂治疗，诸如一或多种抗pd-1、抗pd-l1及/或抗ctla-4疗法未治疗的。在一些实施方式中，该肿瘤或病变未曾接受抗pd-1治疗(未用该治疗进行治疗)。在一些实施方式中，该肿瘤或病变未曾接受抗pd-l1治疗(未用该治疗进行治疗)。在一些实施方式中，该肿瘤或病变未曾接受抗ctla-4治疗(未用该治疗进行治疗)。在一些实施方式中，患有待根据所提供的实施方式治疗的肿瘤或病变的个体是未用免疫检查点抑制剂治疗的个体。在一些实施方式中，待治疗的个体是未用抗pd-1治疗进行治疗的个体。在一些实施方式中，待治疗的个体是未用抗pd-l1治疗进行治疗的个体。在一些实施方式中，待治疗的个体是未用抗ctla-4治疗进行治疗的个体。用免疫检查点抑制剂，诸如抗pd-1抗体治疗个体可引起肿瘤中、其周围及/或全身cd8 效应t细胞耗竭。此可使得cd8 t细胞无法识别并定位至肿瘤，或其可使cd8 t细胞虽然定位至肿瘤或肿瘤附近，但仍无效，由此导致检查点抑制剂(例如pd-1/pd-l1)抗性。因此，在一些情况下，无效或不足的cd8 效应t细胞活性可通过在采用所提供的组合物、方法或用途之前，避免采用免疫检查点抑制剂疗法(例如抗pd-1、抗pd-l1及/或抗ctla-4疗法)来缓解。在一些实施方式中，肿瘤或病变对本文中的治疗的反应是通过在用免疫检查点抑制剂，诸如pd-1、pd-l1及/或ctla-4定向疗法(诸如抗pd-1抗体及抗pd-l1抗体、及/或抗ctla-4抗体)对该肿瘤或病变进行任何治疗之前，先给予抗pd-l1偶联物治疗该肿瘤或病变且随后照射实现。在一些实施方式中，治疗方法包括选择未接受免疫检查点抑制剂(例如抗pd-1、抗pd-l1及/或抗ctla-4)疗法进行的治疗的个体，及用抗pd-l1偶联物治疗此类个体(亦即，此类个体的肿瘤或病变)且随后照射。
109.在一些方面中，根据所提供的实施方式治疗的肿瘤或病变与选自由以下组成的群的癌症相关：结肠癌、结肠直肠癌、胰脏癌、乳癌、皮肤癌、肺癌、非小细胞肺癌、肾细胞癌、甲状腺癌、前列腺癌、头颈癌、胃肠癌、胃癌、小肠癌、梭状细胞赘生物、肝脏癌瘤、肝癌、周围神经癌症、脑癌、骨骼肌癌症、平滑肌癌症、骨癌、脂肪组织癌症、子宫颈癌、子宫癌、生殖器癌
症、淋巴瘤及多发性骨髓瘤。
110.在一些方面中，根据所提供的实施方式治疗的肿瘤或病变包括一或多个原发性(例如第一)肿瘤或病变。在一些方面中，原发性肿瘤或病变可包括个体中的第一或原发性肿瘤或病变。在一些方面中，该个体可具有一或多个原发性肿瘤或病变。在一些实施方式中，一或多个原发性肿瘤可为一或多个实体肿瘤，可为淋巴瘤，或可为白血病。肿瘤可为肺、胃、肝、胰脏、乳房、食道、头颈部、脑、周围神经、皮肤、小肠、结肠、直肠、肛门、卵巢、子宫、膀胱、前列腺、脂肪组织、骨骼肌、平滑肌、血管、骨骼、骨髓、眼睛、舌、淋巴结、脾、肾、子宫颈、雄性生殖器、雌性生殖器、睪丸的肿瘤或未知原发来源的肿瘤。
111.在一些方面中，根据所提供的实施方式治疗的肿瘤或病变包括一或多个第二肿瘤或病变，诸如转移性肿瘤或病变、或新产生的肿瘤或病变。在一些方面中，该一或多个第二肿瘤或病变是来源于该第一肿瘤或病变的转移。在一些实施方式中，该一或多个第二肿瘤或病变是并非来源于该第一肿瘤或病变的转移的肿瘤。在一些方面中，该一或多个第二肿瘤或病变在表型上及/或基因型上不同于该第一肿瘤或病变。在一些方面中，该一或多个第二肿瘤或病变在表型上不同于该第一肿瘤或病变。在一些方面中，该一或多个第二肿瘤或病变在基因型上不同于该第一肿瘤或病变。在一些方面中，该一或多个第二肿瘤或病变是新产生的肿瘤或病变。在一些方面中，该一或多个第二肿瘤或病变是来自与该第一肿瘤或病变不同的来源。在一些方面中，该一或多个第二肿瘤或病变由与该第一肿瘤或病变不同的器官或不同的细胞产生。在一些实施方式中，该一或多个第二肿瘤或病变可为一或多个实体肿瘤，可为淋巴瘤，或可为白血病。该一或多个第二肿瘤或病变可为肺、胃、肝、胰脏、乳房、食道、头颈部、脑、周围神经、皮肤、小肠、结肠、直肠、肛门、卵巢、子宫、膀胱、前列腺、脂肪组织、骨骼肌、平滑肌、血管、骨骼、骨髓、眼睛、舌、淋巴结、脾、肾、子宫颈、雄性生殖器、雌性生殖器、睪丸或未知来源的肿瘤。
112.在一些实施方式中，针对第二肿瘤或病变的免疫是在给予所提供的抗pd-l1偶联物之后照射该第一肿瘤时实现，且该第一肿瘤的体积减小。在此类实施方式中，该第一肿瘤的体积减小至少或至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些实施方式中，该第一肿瘤的体积减小至少或至少约50％。在一些实施方式中，该第一肿瘤的体积减小至少或至少约75％。在一些实施方式中，针对第二肿瘤或病变的免疫是在治疗该第一肿瘤之后，该第一肿瘤实现部分或完全反应(pr或cr)时实现。在一些实施方式中，针对第二肿瘤或病变的免疫是在治疗该第一肿瘤之后，该第一肿瘤实现cr时实现。
113.在一些情况下，供照射的目标区域可为原发性肿瘤或病变，或在该原发性肿瘤或病变附近。在其他情况下，供照射的目标区域并非原发性肿瘤或病变，而是存在表达pd-l1的细胞的不同区域，诸如淋巴结、或继发性肿瘤或病变、或在继发性肿瘤或病变附近。
114.在一些方面中，在根据所提供的实施方式，用抗pd-l1偶联物治疗及光照射进行治疗后，一或多个原发性肿瘤或病变的生长受到抑制，一或多个原发性肿瘤或病变的体积减小，或肿瘤生长及体积均减少。在一些方面中，在根据所提供的实施方式，用抗pd-l1偶联物治疗及光照射进行治疗后，一或多个继发性或转移性肿瘤或病变的生长受到抑制，一或多个继发性或转移性肿瘤或病变的体积减小，或肿瘤生长及体积均减少。在一些方面中，根据所提供的实施方式治疗将延迟肿瘤或病变的再生长，防止癌症(诸如与该肿瘤或病变相关
的癌症)的复发或延长癌症缓解的持续时间，防止或抑制一或多个第二肿瘤或病变，包括与原发性肿瘤或病变类型不同的第二肿瘤或病变的产生及/或生长，及/或防止或抑制转移的产生及/或生长。
115.在一些实施方式中，向该个体给予抗pd-l1偶联物以治疗第一肿瘤或第一病变及/或抑制其生长；且该方法抑制或延迟一或多个第二肿瘤或病变、或该第一肿瘤或该第一病变的转移的出现。
116.在一些方面中，原发性肿瘤或病变含有在表面上表达pd-l1的细胞。在一些方面中，表达pd-l1的细胞是免疫细胞，诸如免疫抑制性细胞，例如m2 tam、tdc或mdsc。在一些方面中，表达pd-l1的细胞是肿瘤相关纤维母细胞或癌症相关纤维母细胞(caf)。在一些情况下，表达pd-l1的细胞是肿瘤细胞或癌细胞。在任何实施方式中的一些中，待治疗的个体具有一或多个表达pd-l1的细胞，诸如一或多个与该肿瘤、病变或癌症相关的表达pd-l1的细胞。
117.在一些实施方式中，待治疗的肿瘤、病变或癌症含有不表达pd-l1的肿瘤或癌症细胞。在一些实施方式中，该肿瘤或该病变包含pd-l1阴性肿瘤细胞。在一些实施方式中，该肿瘤或该病变中超过或超过约40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％的肿瘤细胞是pd-l1阴性肿瘤细胞。在一些方面中，pd-l1阴性肿瘤细胞可以指在表面上不表达可检测量的pd-l1的肿瘤细胞或pd-l1的表达量低于临限值，诸如可检测的临限值的肿瘤细胞。在一些实施方式中，pd-l1阴性肿瘤细胞包括不被抗pd-l1抗体特异性识别的肿瘤细胞。在一些情况下，pd-l1的表达量是由流式细胞计数测定。在一些方面中，所提供的实施方式引起肿瘤细胞或癌细胞之间接杀伤，此是诸如通过消除免疫抑制性细胞，例如m2 tam、tdc或mdsc，并增强免疫系统中效应细胞，诸如cd8 t细胞的功能及/或活性，使其能发挥抗肿瘤或抗癌反应以消除肿瘤细胞或癌细胞来实现。
118.在一些实施方式中，待治疗的肿瘤、病变或癌症含有表达pd-l1的肿瘤或癌症细胞。在一些方面中，给予抗pd-l1偶联物且随后光照射可直接杀伤表达pd-l1的细胞。在一些方面中，所提供的实施方式引起表达pd-l1的肿瘤细胞的直接杀伤。
119.在一些实施方式中，本文所提供的方法及用途包括治疗具有侵袭性肿瘤细胞，诸如当源自原发性肿瘤的细胞侵袭至周围组织中时具有侵袭性肿瘤细胞的个体。该方法包括向具有侵袭性肿瘤细胞的个体给予抗pd-l1偶联物且在给予该偶联物之后，用适于所选酞菁染料的波长照射目标区域。在一些实施方式中，该方法包括在给予该偶联物之前、同时或之后，给予免疫调节剂，诸如免疫检查点抑制剂。在一些方面中，侵袭性肿瘤细胞是指源自原发性肿瘤的细胞且其已侵袭至具有原发性肿瘤的个体中与原发性肿瘤相同的器官或相邻的器官或体腔的周围组织中。
120.在一些情况下，本文所提供的方法及用途包括照射目标区域。在一些方面中，该目标区域包含一或多个原发性肿瘤，且侵袭性肿瘤细胞中的一些或全部未经照射，且在此类方法中，侵袭性肿瘤细胞的生长被抑制、减少或消除，一或多个侵袭性肿瘤的体积减小或其任何组合。在一些实施方式中，原发性肿瘤的生长亦被抑制、减少或消除，一或多个原发性肿瘤的体积亦减小，以及针对一或多个侵袭性肿瘤细胞的作用。
121.在一些实施方式中，侵袭性肿瘤细胞是包含在实体肿瘤中。在一些实施方式中，侵袭性肿瘤细胞是包含在体液中，包括(但不限于)腹膜液、胸膜液及脑脊髓液中。在一些实施
方式中，侵袭性肿瘤细胞是包含在一或多个体腔积液，包括(但不限于)腹膜积液(腹水)、肋膜积液及心包积液中。
122.在一些实施方式中，本文所提供的方法及用途包括治疗具有一或多个原发性肿瘤以及转移性肿瘤细胞的个体。该方法包括向具有原发性肿瘤及转移性肿瘤细胞的个体给予抗pd-l1偶联物且在给予该偶联物之后，用适于所选酞菁染料的波长照射目标区域。在此类方法中，转移性肿瘤细胞的生长被抑制、减少或消除，一或多个转移性肿瘤的体积减小，或其任何组合。
123.在本文所提供的方法及用途的一些实施方式中，转移性肿瘤细胞在原发性肿瘤的远端且转移性肿瘤细胞中的一些或全部未经照射，例如未直接照射。
124.在该方法及用途的一些实施方式中，仅目标区域，诸如含有淋巴结或原发性肿瘤或病变的目标区域及/或在淋巴结或原发性肿瘤或病变附近的目标区域经照射。在一些方面中，第二肿瘤或病变，诸如转移性肿瘤或病变未经照射。
125.在一些方面中，转移性肿瘤细胞包括源自原发性肿瘤且扩散至远端组织或器官、或源自具有该原发性肿瘤的个体中的远端组织或器官的细胞。该转移性肿瘤细胞可位于肺、胃、肝、胰脏、乳房、食道、头颈部、脑、周围神经、皮肤、小肠、结肠、直肠、肛门、卵巢、子宫、膀胱、前列腺、脂肪组织、骨骼肌、平滑肌、血管、骨骼、骨髓、眼睛、舌、淋巴结、脾、肾、子宫颈、雄性生殖器、雌性生殖器、睪丸、血液、骨髓、脑脊髓液或任何其他组织器官中的一或多个位置。在一些实施方式中，转移性肿瘤细胞是包含在实体肿瘤中。在一些实施方式中，转移性肿瘤细胞是循环肿瘤细胞或与肿块无关。
126.在一些实施方式中，该方法及用途包括在给予该偶联物之前、同时或之后，给予免疫调节剂，诸如检查点抑制剂。在一些实施方式中，该方法及用途包括给予第二偶联物，诸如第二免疫偶联物，随后在给予刚刚提供的偶联物的同时、之前或之后进行照射。在一些实施方式中，该方法及用途包括给予一或多种额外抗癌治疗，诸如化学疗法、抗血管生成疗法、激酶抑制剂、辐照疗法、小分子疗法或其他治疗中的一或多种，诸如本文题为“组合疗法”的部分中所描述的任何治疗。
127.c.用于治疗对先前治疗性治疗具有较低反应、先前治疗性治疗难以治疗或对先前治疗性治疗无反应的肿瘤或肿瘤细胞的方法及组合物
128.在一些实施方式中，提供含有抗pd-l1偶联物，亦即酞菁染料-靶向分子偶联物的组合物，其中该靶向分子结合至pd-l1(例如抗pd-l1抗体-ir700偶联物)；以及涉及该抗pd-l1偶联物用于肿瘤或癌症疗法或治疗的方法及用途，该肿瘤或癌症用一或多种先前治疗，诸如免疫调节剂，诸如免疫检查点抑制剂及/或抗癌剂，诸如直接靶向肿瘤或癌症细胞的抗癌剂治疗失败，对该一或多种先前治疗具有较低反应，用该一或多种先前治疗未实现所希望水平的反应，该一或多种先前治疗实现低于所希望水平的反应(例如对该一或多种先前治疗具有较差反应或该一或多种先前治疗无法有效治疗)或对该一或多种先前治疗无反应。在一些实施方式中，肿瘤或癌症对抗pd-l1、抗pd-1及/或抗ctla-4疗法实现低于所希望水平的反应或预测会对该疗法具有抗性。在一些实施方式中，肿瘤或癌症对抗pd-l1疗法实现低于所希望水平的反应或预测会对该疗法具有抗性。在一些实施方式中，肿瘤或癌症实现低于所希望程度的反应或预测会对抗pd-1疗法具有抗性。在一些实施方式中，肿瘤或癌症对抗ctla-4疗法实现低于所希望水平的反应或预测会对该疗法具有抗性。
129.该癌症包括一个原发性肿瘤或多个原发性肿瘤以及转移性肿瘤细胞，例如转移性癌症；新产生的肿瘤或癌症；包括一个原发性肿瘤或多个原发性肿瘤的癌症；及/或侵袭性肿瘤细胞，例如侵袭性癌症。在一些方面中，所提供的组合物、方法、用途及组合亦可使冷肿瘤，包括原发性冷肿瘤及继发性冷肿瘤(例如转移性肿瘤)对免疫调节剂或其他抗癌疗法敏感。
130.此类方法及用途包括例如向具有肿瘤或肿瘤细胞的个体给予抗pd-l1偶联物，随后使用适于酞菁染料的光波长及剂量照射目标区域(例如存在表达pd-l1的细胞的部位)。在一些方面中，照射引起在表面上表达目标分子(例如pd-l1)的细胞的照射依赖性裂解及死亡，由此产生癌症的治疗作用或治疗。在一些情况下，表达pd-l1的细胞，诸如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(dc)、m2肿瘤相关巨噬细胞(m2 tam)、致耐受性树突细胞(tdc)或骨髓源性抑制性细胞(mdsc)、或某些肿瘤细胞经杀伤且由此迅速地耗竭。因此，可发生肿瘤细胞的坏死。
131.在一些方面中，根据所提供的实施方式治疗的肿瘤、病变或癌症包括用一或多种先前治疗，诸如免疫调节剂，例如免疫检查点抑制剂及/或抗癌剂，诸如抗pd-l1、抗pd-1或抗ctla-4疗法失败、对该一或多种先前治疗具有低反应或实质上无反应，对该一或多种先前治疗具有较低反应，用该一或多种先前治疗未实现所希望水平的反应，对该一或多种先前治疗实现低于所希望水平的反应(例如对该一或多种先前治疗具有较差反应或用该一或多种先前治疗无法有效治疗)，在该一或多种先前治疗之后复发，用该一或多种先前治疗难以治疗及/或对该一或多种先前治疗具有抗性。
132.在一些实施方式中，根据所提供的实施方式治疗的个体先前曾用抗癌疗法及/或免疫检查点抑制剂治疗。在一些实施方式中，根据所提供的实施方式治疗的个体先前曾用免疫检查点抑制剂治疗。在一些实施方式中，根据所提供的实施方式治疗的个体先前用抗癌疗法及/或免疫检查点抑制剂治疗失败或在该治疗之后复发。在一些实施方式中，根据所提供的实施方式治疗的个体先前用免疫检查点抑制剂治疗失败或在该治疗之后复发。
133.在一些实施方式中，由进行该方法引起的肿瘤生长抑制作用要大于由先前用抗癌疗法及/或免疫检查点抑制剂(例如抗pd-l1、抗pd-1及/或抗ctla-4疗法)治疗引起的肿瘤生长抑制作用。在一些实施方式中，由进行该方法引起的肿瘤生长抑制作用要大于由先前用免疫检查点抑制剂(例如抗pd-l1、抗pd-1及/或抗ctla-4疗法)治疗引起的肿瘤生长抑制作用。
134.在一些方面中，不能引起癌症的反应的该一或多种先前治疗性治疗包括使用抗癌剂。先前抗癌剂可为以下一或多种：化学治疗剂、抗体治疗及/或辐照治疗剂。在一些实施方式中，先前疗法是利用选自以下的抗癌剂的疗法：检查点抑制剂、免疫佐剂、化学治疗剂、辐照及包含结合至肿瘤细胞的抗癌靶向分子的生物制剂。在一些实施方式中，先前疗法是用抗癌剂的疗法，该抗癌剂是抗体偶联物。在一些实施方式中，先前疗法是用包含酞菁染料、毒素或tlr激动剂的抗体偶联物的疗法。
135.在一些方面中，癌症、肿瘤或肿瘤细胞无反应的一或多种先前治疗性治疗可为用免疫检查点抑制剂(又称为免疫检查点阻断疗法)的治疗。先前免疫检查点抑制剂可为pd-1抑制剂、pd-l1抑制剂、ctla-4抑制剂或其组合。先前免疫检查点抑制剂可为小分子抑制剂、抗体抑制剂、或结合并抑制免疫检查点蛋白，诸如pd-1或pd-l1的其他分子。针对pd-1的示
例性抗体抑制剂包括(但不限于)以下任一种：派姆单抗(pembrolizumab)(mk-3475、克珠达(keytruda))、纳武单抗(nivolumab)(opdivo)、切米普单抗(cemiplimab)(libtayo)、特瑞普利单抗(toripalimab)(js001)、hx008、sg001、gls-010、多斯利单抗(dostarlimab)(tsr-042)、迪赛利珠单抗(tislelizumab)(bgb-a317)、西利单抗(cetrelimab)(jnj-63723283)、皮立珠单抗(pidilizumab)(ct-011)、杰诺珠单抗(genolimzumab)(apl-501、gb226)、bcd-100、切米普单抗(regn2810)、f520、斯迪利单抗(sintilimab)(ibi308)、gls-010、cs1003、lzm009、坎立珠单抗(camrelizumab)(shr-1210)、sct-i10a、mga012、ak105、pf-06801591、amp-224、ab122、amg 404、bi 754091、hlx10、jtx-4014、medi0680、sym021、mgd019、mgd013、ak104、xmab20717、ro7121661、cx-188及斯巴达珠单抗(spartalizumab)。针对pd-l1的示例性抗体抑制剂包括(但不限于)以下任一种：阿特珠单抗(mpdl3280a、泰圣奇)、阿维鲁单抗(bavencio)、德瓦鲁单抗(medi4736、英飞凡)、ldp、nm-01、sti-3031、kn035、ly3300054、m7824(msb0011359c)、bms-936559、msb2311、bcd-135、bgb-a333、cbt-502、考昔单抗(ck-301)、cs1001、faz053、mdx-1105、shr-1316、tg-1501、zkab001、inbrx-105、mcla-145、kn046、ly3415244、regn3504及hlx20。
136.在一些方面中，待治疗的肿瘤、病变或癌症包括对抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体治疗具有抗性、用该治疗难以治疗或对该治疗无反应的肿瘤或癌症。在一些方面中，待治疗的肿瘤、病变或癌症包括对抗pd-l1抗体治疗具有抗性、用该治疗难以治疗或对该治疗无反应，或预测会对抗pd-l1抗体治疗无反应、对该治疗具有抗性或用该治疗难以治疗的肿瘤或癌症。在一些方面中，待治疗的肿瘤、病变或癌症包括对抗pd-1抗体治疗具有抗性、用该治疗难以治疗或对该治疗无反应，或预测会对抗pd-1抗体治疗无反应、对该治疗具有抗性或用该治疗难以治疗的肿瘤或癌症。
137.在一些方面中，该先前治疗是用抗ctla-4抗体，诸如伊匹单抗(ipilimumab)(yervoy)、曲美木单抗(tremelimumab)、agen1181、agen1884、adu-1064、bcd-145及bcd-217治疗。在一些方面中，待治疗的肿瘤、病变或癌症包括对抗ctla-4抗体治疗具有抗性、用该治疗难以治疗或对该治疗无反应，或预测会对抗ctla-4抗体治疗无反应、对该治疗具有抗性或用该治疗难以治疗的肿瘤或癌症。
138.在一些方面中，不能引起癌症、肿瘤或肿瘤细胞的反应的一或多种先前治疗性治疗可为用免疫调节剂的治疗，该免疫调节剂诸如细胞因子，例如阿地白介素(aldesleukin)(proleukin)、干扰素α-2a、干扰素α-2b(intron a)、聚乙二醇化干扰素α-2b(sylatron/peg-intron)或靶向ifnar1/2路径、il-2/il-2r路径的细胞因子，或诸如佐剂，例如聚iclc(hiltonol/咪喹莫特(imiquimod))、4-1bb(cd137；tnfrs9)、ox40(cd134)ox40-配体(ox40l)、toll样受体(toll-like receptor)2激动剂sup3、toll样受体tlr3及tlr4激动剂，以及靶向toll样受体7(tlr7)路径、tnfr及tnf超家族的其他成员的佐剂、其他tlr2激动剂、tlr3激动剂及tlr4激动剂。
139.在一些方面中，不能引起癌症的反应的一或多种先前治疗性治疗包括使用靶向免疫抑制性细胞的治疗剂。该治疗剂可为靶向调节性t细胞的抗体，例如抗cd25抗体，诸如巴利昔单抗(basiliximab)达利珠单抗(daclizumab)或pc61；小分子抑制剂；或其组合。免疫抑制性细胞包括调节性t细胞、m2巨噬细胞、肿瘤相关纤维母细胞或癌症相关纤维母细胞(caf)，或其组合。
140.在一些情况下，根据所提供的实施方式治疗的肿瘤、病变或癌症包括“冷肿瘤”或“冷癌症”，诸如具有免疫抑制表型的肿瘤。此类冷肿瘤可具有诸多特征，包括(但不限于)肿瘤内cd8

t效应细胞的数量及/或活性显著降低或不存在、及/或肿瘤内免疫抑制性细胞的数量及/或活性显著增加。在一些情况下，冷肿瘤或癌症具有高肿瘤突变负荷(tmb)、指示低免疫反应性的免疫分数、可指示低免疫反应性的程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)或程序性死亡蛋白配体1(pd-l1)标记物状态(例如细胞表面表达)。在一些情况下，冷肿瘤或癌症不对pd-1或pd-l1抑制剂单药疗法起反应。
141.在一些实施方式中，如本文所描述，冷肿瘤或癌症可用抗pd-l1偶联物治疗，随后照射。在一些实施方式中，利用抗pd-l1偶联物且随后照射与诸如免疫检查点抑制剂的免疫调节剂的组合治疗使得对经照射原发性肿瘤及远端肿瘤两者的生长的抑制作用增强。
142.另外，对于对免疫调节疗法治疗，诸如免疫检查点抑制剂治疗具有抗性的肿瘤，利用抗pd-l1偶联物且随后光照射及/或与免疫检查点抑制剂的组合的治疗可使得对经照射原发性肿瘤及远端肿瘤、原发性肿瘤及新产生的肿瘤及/或原发性肿瘤及不同类型的继发性肿瘤的生长的抑制作用增强，表明在治疗癌症及肿瘤细胞时抗pd-l1光免疫疗法对免疫检查点抑制剂具有敏化作用。
143.ii.用于该方法的偶联物及组合物
144.在一些方面中，提供采用抗pd-l1偶联物的组合物、组合、方法或用途，该偶联物包括连接至酞菁染料的结合pd-l1的靶向分子。在一些方面中，结合pd-l1的靶向分子是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，靶向分子结合pd-l1，诸如在细胞表面上，例如在免疫抑制性细胞，例如m2 tam、tdc或mdsc及/或某些肿瘤细胞的表面上表达的pd-l1。还提供含有偶联物，诸如本文所描述的抗pd-l1偶联物中的任一种的组合物，诸如医药组合物，以及含有此类组合物或此类抗pd-l1偶联物的组合。在一些方面中，此类偶联物、组合物及组合是用于根据本文所提供的实施方式的疗法或治疗中。
145.在一些方面中，“抗pd-l1偶联物”包括具有连接至酞菁染料的pd-l1结合分子的偶联物。pd-l1结合分子可包括抗pd-l1抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)、或结合至pd-l1的其他蛋白质、肽或小分子。在一些方面中，示例性抗pd-l1偶联物包含抗体或其抗原结合片段。示例性抗pd-l1偶联物包括si-酞菁染料，诸如ir700染料。
146.在一些实施方式中，pd-l1靶向分子是靶向或结合pd-l1的抗体或其抗原结合片段，诸如抗pd-l1抗体或其抗原结合片段。在一些方面中，靶向或结合至pd-l1的示例性抗体包括(但不限于)阿特珠单抗(mpdl3280a、泰圣奇、rg7446))、阿维鲁单抗(bavencio)、bcd-135、bgb-a333、bms-936559(mdx-1105)、cbt-502(tqb-2450)、考昔单抗(ck-301)、cs1001(wpb3155)、德瓦鲁单抗(medi4736、英飞凡)、faz053、hlx20、inbrx-105、kn035、kn046、ldp、ly3300054、ly3415244、m7824(msb0011359c)、mcla-145、msb2311、nm-01、regn3504、shr-1316(hti-1088)、sti-3031(imc-001、sti-a1015)、tg-1501、zkab001(sti-a1014)及其任何抗原结合片段。示例性抗pd-l1抗体包括mdx-1105(medarex)、medi4736(medimmune)、mpdl3280a(genentech)、bms-935559(bristol-myers squibb)及msb0010718c，及前述任一者的抗原结合片段。
147.在一些实施方式中，该靶向分子可为包括抗pd-l1抗体，诸如所述抗体或其抗原结合片段中的任一种的“互补决定区”或“cdr”的抗体或抗体片段。cdr通常负责结合至抗原的
表位。各链的cdr通常自n末端开始依序编号而称为cdr1、cdr2及cdr3，且一般亦通过特定cdr所在的链标识。因此，重链可变区(vh)cdr3位于发现其的抗体的重链的可变域中，而轻链可变区(v
l
)cdr1是来自发现其的抗体的轻链的可变域的cdr1。具有不同特异性，诸如针对不同抗原的不同组合位点的抗体具有不同cdr。虽然不同抗体的cdr不同，但cdr内仅有限数目个氨基酸位置直接参与抗原结合。cdr内的这些位置称为特异性决定残基(sdr)。
148.给定cdr或构架区(fr，即重链及轻链可变区的非cdr部分)的精确氨基酸序列边界可使用多种已知方案中的任一种，包括以下所描述的方案确定：kabat等人(1991),“sequences of proteins of immunological interest”,第5版public health service,national institutes of health,bethesda,md(“kabat”编号方案)；al-lazikani等人(1997)jmb 273,927-948(“chothia”编号方案)；maccallum等人,j.mol.biol.262:732-745(1996),“antibody-antigen interactions:contact analysis and binding site topography”,j.mol.biol.262,732-745.”(“contact”编号方案)；lefranc mp等人,“imgt unique numbering for immunoglobulin and t cell receptor variable domains and ig superfamily v-like domains”,dev comp immunol,2003,27(1):55-77(“imgt”编号方案)；honegger a及pl
ü
ckthun a,“yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains:an automatic modeling and analysis tool”,j mol biol,2001,309(3):657-70,(“aho”编号方案)；及martin等人,“modeling antibody hypervariable loops:a combined algorithm”,pnas,1989,86(23):9268-9272,(“abm”编号方案)。
149.在一些实施方式中，靶向分子可为抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体中结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的实例包括(但不限于)fv、fab、fab'、fab'-sh、f(ab')2、双功能抗体、线性抗体、单链抗体分子(例如scfv)、仅重链可变区(vhh)的单域抗体以及由抗体片段形成的多特异性抗体。其他抗体片段或由抗体片段形成的多特异性抗体包括多价scfv、双特异性scfv或scfv-ch3二聚体。抗体片段可通过各种技术制得，包括(但不限于)完整抗体的蛋白水解消化以及由重组宿主细胞产生。
150.在一些实施方式中，抗pd-l1偶联物包括含选自由以下组成的群的抗体的互补决定区(cdr)的抗体或其抗原结合片段：阿特珠单抗(mpdl3280a、泰圣奇、rg7446))、阿维鲁单抗(bavencio)、bcd-135、bgb-a333、bms-936559(mdx-1105)、cbt-502(tqb-2450)、考昔单抗(ck-301)、cs1001(wpb3155)、德瓦鲁单抗(medi4736、英飞凡)、faz053、hlx20、inbrx-105、kn035、kn046、ldp、ly3300054、ly3415244、m7824(msb0011359c)、mcla-145、msb2311、nm-01、regn3504、shr-1316(hti-1088)、sti-3031(imc-001、sti-a1015)、tg-1501及zkab001(sti-a1014)。在一些实施方式中，抗pd-l1偶联物包括含选自以下的抗体的cdr的抗体或其抗原结合片段：阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、kn035或ck-301。
151.在任何实施方式中的一些中，抗pd-l1偶联物包含选自以下的抗体：阿特珠单抗(mpdl3280a、泰圣奇、rg7446))、阿维鲁单抗(bavencio)、bcd-135、bgb-a333、bms-936559(mdx-1105)、cbt-502(tqb-2450)、考昔单抗(ck-301)、cs1001(wpb3155)、德瓦鲁单抗(medi4736、英飞凡)、faz053、hlx20、inbrx-105、kn035、kn046、ldp、ly3300054、ly3415244、m7824(msb0011359c)、mcla-145、msb2311、nm-01、regn3504、shr-1316(hti-1088)、sti-3031(imc-001、sti-a1015)、tg-1501、zkab001(sti-a1014)及其任何抗原结合片段。示例性
抗pd-l1抗体包括mdx-1105(medarex)、medi4736(medimmune)、mpdl3280a(genentech)、bms-935559(bristol-myers squibb)及msb0010718c，或其抗原结合片段。在一些实施方式中，抗pd-l1偶联物包含选自以下的抗体：阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、kn035及ck-301，或其抗原结合片段。
152.在一些实施方式中，该偶联物中的抗体是本文所描述的抗pd-l1抗体中的任一种，例如阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、kn035或ck-301的生物类似药、可互换药或生物改良药，或其抗原结合片段。此类抗体亦包括本文所描述的抗pd-l1抗体中的任一种，例如阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、kn035或ck-301的复制生物制剂及生物仿制药，或其抗原结合片段。
153.在一些实施方式中，抗pd-l1抗体的靶向分子包含功能性fc区。在一些实施方式中，靶向分子，亦即抗pd-l1抗体，不包含功能性fc区。在一些实施方式中，靶向分子，亦即抗pd-l1抗体，是人源化抗体。在一些实施方式中，靶向分子，亦即抗pd-l1抗体，是完全人类抗体。
154.在一些方面中，所提供的实施方式中采用的抗pd-l1偶联物包括酞菁染料。在一些实施方式中，酞菁染料是具有硅配位金属的酞菁染料(si-酞菁染料)。在一些实施方式中，酞菁染料包含下式：
[0155][0156]
其中：
[0157]
l是接头；
[0158]
q是用于将染料连接至靶向分子的反应性基团；
[0159]
r2、r3、r7及r8各自独立地选自视情况经取代的烷基及视情况经取代的芳基；
[0160]
r4、r5、r6、r9、r
10
及r
11
各自独立地选自氢、视情况经取代的烷基、视情况经取代的烷酰基、视情况经取代的烷氧羰基、视情况经取代的烷基氨甲酰基及螯合配位体，其中r4、r5、r6、r9、r
10
及r
11
中的至少一者包含水溶性基团；
[0161]r12
、r
13
、r
14
、r
15
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、r
20
、r
21
、r
22
及r
23
各自独立地选自氢、卤素、视情况
经取代的烷硫基、视情况经取代的烷基氨基及视情况经取代的烷氧基；且
[0162]
x2及x3各自独立地为视情况间杂有杂原子的c
1-c
10
亚烷基。
[0163]
在一些实施方式中，酞菁染料包含下式：
[0164][0165]
其中：
[0166]
x1及x4各自独立地为视情况间杂有杂原子的c
1-c
10
亚烷基；
[0167]
r2、r3、r7及r8各自独立地选自视情况经取代的烷基及视情况经取代的芳基；
[0168]
r4、r5、r6、r9、r
10
及r
11
各自独立地选自氢、视情况经取代的烷基、视情况经取代的烷酰基、视情况经取代的烷氧羰基、视情况经取代的烷基氨甲酰基及螯合配位体，其中r4、r5、r6、r9、r
10
及r
11
中的至少一者包含水溶性基团；且
[0169]r16
、r
17
、r
18
及r
19
各自独立地选自氢、卤素、视情况经取代的烷硫基、视情况经取代的烷基氨基及视情况经取代的烷氧基。
[0170]
在本文所提供的方法及用途的一些实施方式中，si-酞菁染料是irdye 700dx(ir700)。在一些实施方式中，含有反应性基团的酞菁染料为ir700 nhs酯，诸如irdye 700dx nhs酯(licor 929-70010，929-70011)。在一些实施方式中，该染料是具有下式的化合物：
[0171][0172]
化学式：c
74h96n12
na4o
27
s6si3[0173]
精确质量：1952.37
[0174]
分子量：1954.22
[0175]
irdye 700dx nhs酯
[0176]
出于本文的目的，当染料例如经由反应性基团诸如与抗体结合时，术语“ir700”、“irdye 700”或“irdye 700dx”包括上式。
[0177]
在一些实施方式中，用于本文的方法中的偶联物包括抗pd-l1偶联物，其包含连接至结合pd-l1的靶向分子的si-酞菁染料。在一些实施方式中，该偶联物是抗pd-l1抗体-si-酞菁染料偶联物。在一些实施方式中，该偶联物是抗pd-l1抗体-ir700偶联物。在一些实施方式中，该偶联物是抗pd-l1抗体-ir700偶联物，其中该抗体是阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、kn035或ck-301，或其抗原结合片段。在一些实施方式中，该偶联物是阿特珠单抗-ir700偶联物。在一些实施方式中，该偶联物是阿维鲁单抗-ir700偶联物。在一些实施方式中，该偶联物是德瓦鲁单抗-ir700偶联物。在一些实施方式中，该偶联物是kn035-ir700偶联物。在一些实施方式中，该偶联物是ck-301-ir700偶联物。
[0178]
iii.给药方法及配方
[0179]
在一些实施方式中，抗pd-l1偶联物可全身性或局部给予至待治疗的器官或组织。示例性给药途径包括(但不限于)表面、注射(诸如皮下、肌肉内、皮内、腹膜内、肿瘤内及静脉内)、经口、舌下、经直肠、经皮、鼻内、经阴道及吸入途径。在一些实施方式中，抗pd-l1偶联物是经静脉内给予。在一些实施方式中，抗pd-l1偶联物是非经肠给予。在一些实施方式中，抗pd-l1偶联物是经肠给予。在一些实施方式中，该偶联物是通过局部注射给予。在一些实施方式中，该偶联物是以表面施用的方式给予。
[0180]
包含抗pd-l1偶联物的组合物可使用此项技术中已知的任何方法，局部或全身性给予至例如患有肿瘤，诸如患有癌症的个体，或先前已例如经由手术移除肿瘤的个体。尽管提供具体实例，但本领域技术人员应了解可使用所公开的试剂的替代性给予方法。此类方法可包括例如使用导管或可植入泵经数小时至数天的时间向需要治疗的个体中提供连续
输注。
[0181]
在一些实施方式中，抗pd-l1偶联物是通过非经肠手段给予，包括直接注射或输注至肿瘤中，诸如肿瘤内给予。在一些实施方式中，抗pd-l1偶联物是通过将试剂施加至肿瘤，例如通过将肿瘤浸于含有抗pd-l1偶联物的溶液中或通过将试剂倾倒至肿瘤上来向肿瘤给予。
[0182]
另外或替代地，抗pd-l1偶联物可全身性给予，例如经静脉内、肌肉内、皮下、皮内、腹膜内、皮下或经口给予至患有肿瘤，诸如患有癌症的个体。
[0183]
本文还提供含有抗pd-l1偶联物的组合物，诸如医药组合物，以及此类组合物的用途，诸如治疗用途及/或作为药物的用途。在一些方面中，该组合物包含抗pd-l1偶联物及医药学上可接受的载剂。在一些实施方式中，含有该抗pd-l1偶联物的组合物是用于根据所提供的实施方式中的任一个的治疗或疗法中，诸如用于给予患有疾病或病况的个体、用于治疗该疾病或病况。拟给予个体的抗pd-l1偶联物的剂量并无绝对限值，而是将取决于该组合物及其活性成分的性质以及其不想要的副作用，诸如针对该试剂的免疫反应、所治疗的个体以及所治疗的病况的类型及给予方式。一般而言，剂量将为治疗有效量，诸如足以实现所希望的生物作用的量，例如有效减小肿瘤大小(诸如体积及/或重量)或衰减肿瘤的进一步生长或减少肿瘤的非所要症状的量。
[0184]
在一些实施方式中，用于给予抗pd-l1偶联物的组合物含有有效量的该试剂以及适合所考虑的给药类型的熟知医药载剂及赋形剂。举例而言，在一些实施方式中，非经肠配方可含有该偶联物的无菌水性溶液或悬浮液。在一些实施方式中，供经肠给予的组合物可含有于水性溶液或悬浮液中的有效量的抗pd-l1偶联物，该水性溶液或悬浮液可视情况包括缓冲剂、界面活性剂、触变剂及调味剂。
[0185]
在一些实施方式中，抗pd-l1偶联物或偶联物与额外治疗剂的组合可在医药学上可接受的缓冲液，诸如含有医药学上可接受的载剂或运载体的医药学上可接受的缓冲液中配制。一般而言，医药学上可接受的载剂或运载体，诸如存在于医药学上可接受的缓冲液中者，可为任何此项技术中已知的医药学上可接受的载剂或运载体。e.w.martin,mack publishing co.,easton,pa.,第19版(1995)的remington's pharmaceutical sciences描述了适于医药学上递送一或多种治疗性化合物的组合物及配方。医药学上可接受的组合物是在管理机构或其他机构的批准下，根据用于动物及人类的公认药典制备。
[0186]
医药组合物可包括与化合物一起给予的载剂，诸如稀释剂、佐剂、赋形剂或运载体。适合医药载剂的实例描述于e.w.martin的“remington's pharmaceutical sciences”中。此类组合物将含有治疗有效量的大体上呈纯化形式的化合物，以及适合量的载剂，以便提供向患者适当给药的形式。此类医药载剂可为无菌液体，诸如水及油，包括石油、动物、蔬菜或合成来源的油，诸如花生油、大豆油、矿物油及芝麻油。当医药组合物是经静脉内给予时，水为典型载剂。亦可使用生理盐水溶液及右旋糖水溶液及甘油溶液作为液体载剂，尤其是对于可注射溶液而言。组合物除活性成分外，亦可含有：稀释剂，诸如乳糖、蔗糖、磷酸二钙或羧甲基纤维素；润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸钙及滑石；及黏合剂，诸如淀粉、天然树胶，诸如阿拉伯胶、明胶、葡萄糖、糖蜜、聚乙烯吡咯啶酮、纤维素及其衍生物、聚维酮(povidone)、交联普维酮(crospovidone)，及本领域技术人员已知的其他此类黏合剂。适合医药赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻谷、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘
油单硬脂酸酯、滑石、氯化钠、脱脂乳粉、甘油、丙烯、乙二醇、水及乙醇。必要时，组合物亦可含有少量润湿剂或乳化剂，或ph缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸钠、环糊精衍生物、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺乙酸钠、三乙醇胺油酸酯及其他此类试剂。
[0187]
在一些实施方式中，医药制剂可呈液体形式，例如呈溶液、糖浆或悬浮液形式。此类液体制剂可通过熟知方式用医药学上可接受的添加剂制备，该添加剂诸如悬浮剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化可食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性运载体(例如杏仁油、油酯、乙醇或分馏植物油)；及防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。在一些情况下，医药制剂可以在使用之前用水或其他适合运载体重建的冻干形式存在。
[0188]
在一些实施方式中，医药学上可接受的缓冲液或载剂的性质取决于所用特定给药模式。举例而言，在一些实施方式中，非经肠配方可包含可注射流体，其包括医药学上及生理上可接受的流体，诸如水、生理盐水、平衡盐溶液、右旋糖水溶液或甘油作为运载体。在一些实施方式中，对于固体组合物，例如粉末、丸剂、锭剂或胶囊形式，无毒固体载剂可包括例如医药级甘露糖醇、乳糖、淀粉或硬脂酸镁。在一些实施方式中，除生物中性载剂外，拟给予的医药组合物可含有少量无毒辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、防腐剂及ph缓冲剂，例如乙酸钠或脱水山梨糖醇单月桂酸酯。
[0189]
化合物可配制成供经口给予的适合医药制剂，诸如溶液、悬浮液、锭剂、可分散锭剂、丸剂、胶囊、粉末、持续释放配方或酏剂，以及配制成经皮贴片制剂及干粉吸入剂。通常，使用此项技术中熟知的技术及程序将化合物配制成医药组合物(参见例如ansel introduction to pharmaceutical dosage forms,第四版,1985,126)。一般而言，配方的模式随给药途径而变化。
[0190]
组合物可配制成通过本领域技术人员已知的任何途径给予，包括肌肉内、静脉内、皮内、病灶内、腹膜内注射、皮下、肿瘤内、硬膜外、经鼻、经口、经阴道、经直肠、表面、局部、经耳、吸入、经颊(例如舌下)及经皮给予或任何途径。亦涵盖其他给予模式。给予可取决于治疗位置而为局部、表面或全身的。局部给予需要治疗的区域可通过例如(但不限于)在手术期间局部输注、表面施用(例如在手术后与伤口敷料一起施用)、通过注射、藉助于导管、藉助于栓剂或藉助于植入物实现。
[0191]
本文中涵盖非经肠给药，其特征一般在于经皮下、肌肉内、肿瘤内、静脉内或皮内注射。可注射剂可制备为熟知形式，如呈液体溶液或悬浮液形式；适合于在注射之前于液体中形成溶液或悬浮液的固体形式；或乳液形式。适合赋形剂是例如水、生理盐水、右旋糖、甘油或乙醇。此外，必要时，拟给予的医药组合物亦可含有呈溶剂形式的活化剂，诸如ph缓冲剂、金属离子盐或其他此类缓冲剂。医药组合物亦可含有其他少量无毒辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、ph缓冲剂、稳定剂、增溶剂，及其他此类试剂，诸如乙酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯及环糊精。本文中还包括缓慢释放或持续释放系统的植入，以便维持恒定的剂量水平(参见例如美国专利第3,710,795号)。此类非经肠组合物中所含活性化合物的百分比在很大程度上取决于其具体性质，以及化合物的活性及个体的需求。
[0192]
可注射剂设计用于局部及全身给予。供非经肠给予的制剂包括可立即用于注射的无菌溶液、临用前可立即与溶剂组合的无菌干燥可溶性产物(诸如冻干粉)(包括皮下锭剂)、可立即用于注射的无菌悬浮液、临用前可立即与运载体组合的无菌干燥不溶性产品，
及无菌乳液。溶液可为水性溶液或非水性溶液。若静脉内给予，则适合的载剂包括生理盐水或磷酸盐缓冲生理盐水(pbs)，及含有增稠剂及增溶剂(诸如葡萄糖、聚乙二醇及聚丙二醇，及其混合物)的溶液。
[0193]
用于非经肠制剂中的医药学上可接受的载剂包括水性运载体、非水性运载体、抗微生物剂、等张剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮剂及分散剂、乳化剂、掩蔽剂或螯合剂，及其他医药学上可接受的物质。水性运载体的实例包括氯化钠注射液、林格氏注射液(ringers injection)、等张右旋糖注射液、无菌水注射液、右旋糖及乳酸化林格氏注射液。非水性非经肠运载体包括植物来源的不挥发性油，棉籽油、玉米油、芝麻油及花生油。可将抑制细菌或抑制真菌浓度的抗微生物剂添加至包装于多剂量容器中的非经肠制剂中，包括苯酚或甲酚、汞剂、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯及对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞(thimerosal)、苯扎氯铵(benzalkonium chloride)及苄索氯铵(benzethonium chloride)。等张剂包括氯化钠及右旋糖。缓冲剂包括磷酸盐及柠檬酸盐。
[0194]
若静脉内给予，则适合的载剂包括生理盐水或磷酸盐缓冲生理盐水(pbs)，及含有增稠剂及增溶剂(诸如葡萄糖、聚乙二醇及聚丙二醇，及其混合物)的溶液。
[0195]
组合物可配制成用于单剂量给予或用于多剂量给予。试剂可调配成供直接给予。组合物可呈液体或冻干配方形式提供。当组合物是以冻干形式提供时，其可在临用前通过适当缓冲液，例如无菌生理盐水溶液重建。
[0196]
组合物亦可与其他生物活性剂一起连续地、间歇地或以同一组合物给予。给予亦可包括控制释放系统，其包括控制释放配方及诸如藉由泵的装置控制释放。
[0197]
在任何给定情况下的最适合途径取决于多种因素，诸如疾病的性质、疾病的进展、疾病的严重程度及所用具体组合物。举例而言，组合物全身性给予，例如经由静脉内给予。亦可使用皮下方法，不过相较于静脉内方法，其可能需要增加吸收时间来确保相当的生物利用率。
[0198]
医药组合物可配制成适合于每一给药途径的剂型。医药及治疗活性化合物及其衍生物通常是以单位剂型或多剂量形式配制及给予。各单位剂量含有足以产生所需疗效的预定量的治疗活性化合物，其与所需医药载剂、运载体或稀释剂结合。单位剂型包括(但不限于)含有适合量的化合物或其医药学上可接受衍生物的锭剂、胶囊、丸剂、粉末、颗粒剂、无菌非经肠溶液或悬浮液及口服溶液或悬浮液、以及油水乳液。单位剂型可含有安瓿及注射器或个别地包装的锭剂或胶囊。单位剂型可以分数份或其倍数份给予。多剂量形式是包装在单一容器中以分离的单位剂型给予的复数个相同单位剂型。多剂量形式的实例包括小瓶、具有锭剂或胶囊的瓶子、或数品脱或数加仑的瓶子。因此，多剂量形式是在包装中未分开的多个单位剂量。一般而言，可制备含有在0.005％至100％范围内的活性成分且其余部分由无毒载剂构成的剂型或组合物。医药组合物可配制成适合于每一给药途径的剂型。
[0199]
医药活性化合物的浓度是调整成使得注射剂提供有效产生所希望药理学作用的量。如本领域所知，确切剂量取决于患者或动物的年龄、体重及病况。单位剂量非经肠制剂包装于安瓿、小瓶或带针注射器中。含有医药活性化合物的液体溶液或重建粉末制剂的体积随待治疗的疾病及选择用于包装的特定制品而变。如本领域所知和实践，供非经肠给予的所有制剂必须为无菌的。在一些实施方式中，组合物可以冻干粉形式提供，其可重建成以溶液、乳液及其他混合物形式给予。其亦可经重建配制成固体或凝胶形式。冻干粉末可由上
述溶液中的任一种制备。
[0200]
无菌冻干粉可藉由将酞菁染料-靶向分子偶联物溶解于缓冲溶液中来制备。缓冲溶液可含有改善粉末或由粉末制备的重建溶液的稳定性或其他药理学组分的赋形剂。
[0201]
在一些实施方式中，随后无菌过滤溶液，接着在本领域技术人员已知的标准条件下冻干，得到所需配方。简言的，冻干粉是藉由将赋形剂，诸如右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他适合试剂溶解于适合缓冲剂，诸如柠檬酸盐、磷酸钠或磷酸钾或本领域技术人员已知的其他此类缓冲剂中来制备。随后，将所选酶添加至所得混合物中，并搅拌直至其溶解。所得混合物经无菌过滤或处理以移除颗粒且确保无菌，并分配至小瓶中冻干。各小瓶可含有单次剂量(1mg-1g，一般为1-100mg，诸如1-5mg)或多次剂量的化合物。冻干粉可在适当条件下，诸如在约4℃至室温下储存。用适当缓冲溶液重建此冻干粉得到一种供非经肠给予的配方。精确量取决于所治疗的适应症及所选化合物。此类量可凭经验确定。
[0202]
在一些实施方式中，组合物的ph值是在或在约6与10之间，诸如在或在约6与8之间，在或在约6.9与7.3之间，诸如为约ph 7.1。在一些实施方式中，医药学上可接受的缓冲液的ph值是至少或至少约5、至少或至少约6、至少或至少约7、至少或至少约8、至少或至少约9、或至少或至少约10，或为7.1。
[0203]
组合物可配制成供单次剂量给予或供多次剂量给予。试剂可配制成供直接给予。
[0204]
在一些实施方式中，本文所提供的组合物是配制成一定量以直接给予抗pd-l1偶联物，该量在或在约0.01mg至或至约3000mg的范围内、在或在约0.01mg至或至约1000mg的范围内、在或在约0.01mg至或至约500mg的范围内、在或在约0.01mg至或至约100mg的范围内、在或在约0.01mg至或至约50mg的范围内、在或在约0.01mg至或至约10mg的范围内、在或在约0.01mg至或至约1mg的范围内、在或在约0.01mg至或至约0.1mg的范围内、在或在约0.1mg至或至约2000mg的范围内、在或在约0.1mg至或至约1000mg的范围内、在或在约0.1mg至或至约500mg的范围内、在或在约0.1mg至或至约100mg的范围内、在或在约0.1mg至或至约50mg的范围内、在或在约0.1mg至或至约10mg的范围内、在或在约0.1mg至或至约1mg的范围内、在或在约1mg至或至约2000mg的范围内、在或在约1mg至或至约1000mg的范围内、在或在约1mg至或至约500mg的范围内、在或在约1mg至或至约100mg的范围内、在或在约1mg至或至约10mg的范围内、在或在约10mg至或至约2000mg的范围内、在或在约10mg至或至约1000mg的范围内、在或在约10mg至或至约500mg的范围内、在或在约10mg至或至约100mg的范围内、在或在约100mg至或至约2000mg的范围内、在或在约100mg至或至约1000mg的范围内、在或在约100mg至或至约500mg的范围内、在或在约500mg至或至约2000mg的范围内、在或在约500mg至或至约1000mg的范围内、及在约1000mg至或至约3000mg的范围内。在一些实施方式中，组合物的体积可为0.5ml至1000ml、诸如0.5ml至100ml、0.5ml至10ml、1ml至500ml、1ml至10ml，诸如至少或至少约0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml、9ml、10ml、15ml、20ml、30ml、40ml、50ml或更大体积。举例而言，该组合物是配制成以在或在约100mg与或与约500mg之间、或在或在约200mg与或与约400mg之间的量单剂量给予。在一些实施方式中，组合物是配制成以在或在约500mg与或与约1500之间、在或在约800mg与或与约1200mg之间或在或在约1000mg与或与约1500mg之间的量单剂量给予。在一些实施方式中，组合物的体积是在或在约10ml与或与约1000ml之间或在或在约50ml与或与约500ml之
间；或该组合物的体积是至少或至少约10ml、20ml、30ml、40ml、50ml、75ml、100ml、150ml、200ml、250ml、300ml、400ml、500ml或1000ml。
[0205]
在一些实施方式中，配方的完整小瓶内含物可经抽取以供给予或可分成复数个剂量以供多次给予。在抽取出一定量供给予的药物后，必要时，该配方可进一步稀释，诸如在水、生理盐水(例如0.9％)或其他生理溶液中稀释。
[0206]
在一些实施方式中，还提供含有额外治疗剂，诸如免疫调节剂或抗癌剂的组合物以根据所提供的实施方式，与抗pd-l1偶联物组合使用。在一些方面中，该额外治疗剂可根据已知或标准配制指导原则，诸如上述指导原则制备。在一些实施方式中，该免疫调节剂、抗癌剂及/或抗pd-l1偶联物是配制为独立组合物形式。在一些实施方式中，该免疫调节剂是以与抗pd-l1偶联物分开的组合物形式提供，且该两种组合物是分开给予的。在一些实施方式中，抗癌剂是以与抗pd-l1偶联物分开的组合物形式提供，且该两种组合物是分开给予的。组合物可配制用于非经肠递送(亦即，用于全身传递)。举例而言，组合物或组合物的组合经配制用于皮下递送或用于静脉内递送。各试剂，诸如抗pd-l1偶联物及免疫调节剂及/或抗癌剂可藉由不同给药途径给予。
[0207]
在一些方面中，示例性额外治疗剂，诸如免疫调节剂可根据关于单药疗法的指导或根据该特定治疗剂的其他给予计划及剂量给予。在涉及给予抗pd-l1偶联物及额外治疗剂的方法及用途的一些实施方式中，该额外治疗剂是以推荐给予剂量及/或计划给予。在一些实施方式中，额外治疗剂在本文的方法中可以低于推荐量的剂量或根据替代性计划给予，诸如当抗pd-l1偶联物使肿瘤或癌症或tme对该额外治疗剂敏感时及/或当抗pd-l1偶联物及额外治疗剂的组合引起协同作用时。
[0208]
iv.用于抗pd-l1偶联物的装置及照射方法
[0209]
在一些方面中，可用于所提供的实施方式的装置包括光漫射装置，其在适合用于染料偶联物组合物，诸如酞菁染料偶联物(例如抗pd-l1偶联物，诸如本文所描述的该偶联物)的光波长的一或多个波长下提供照射(在一些情况下，又称为辐照)。照射装置可包括光源(例如辐照)及将光传送至所关注区域的构件(例如用于照射个体的独立区域、或独立病变或肿瘤的一或多个光纤)。
[0210]
在一些实施方式中，用波长在如下范围内的光照射目标区域，诸如肿瘤、肿瘤附近、淋巴结、淋巴结附近：在或在约400nm至或至约900nm的范围内，诸如在或在约500nm至或至约900nm的范围内，诸如在或在约600nm至或至约850nm的范围内，诸如在或在约600nm至或至约740nm的范围内，诸如在或在约660nm至或至约740nm的范围内、在或在约660nm至或至约710nm的范围内、在或在约660nm至或至约700nm的范围内、在或在约670nm至或至约690nm的范围内、在或在约680nm至或至约740nm的范围内、或在或在约690nm至或至约710nm的范围内。在一些实施方式中，用波长在或在约600nm至或至约850nm，诸如在或在约660nm至或至约740nm的光照射目标区域，诸如肿瘤、肿瘤附近、淋巴结、淋巴结附近或肿瘤微环境。在一些实施方式中，用波长为至少或至少约600nm、620nm、640nm、660nm、680nm、700nm、720nm或740nm，诸如在或在约690
±
50nm或在或在约690
±
40nm，例如在或在约690nm在或在约680nm的光照射目标区域，诸如肿瘤、肿瘤附近、淋巴结、淋巴结附近或肿瘤微环境。
[0211]
在本文所提供的方法及用途的一些实施方式中，照射是使用柱状漫射光纤进行，该柱状漫射光纤包括在或在约0.5cm至或至约10cm的漫射器长度且间隔或间隔约1.8
±
0.2cm。在一些实施方式中，光照射剂量是自或自约20j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度。在一些实施方式中，肿瘤超过或超过约10mm深度或是皮下肿瘤。
[0212]
在一些实施方式中，所提供的方法包括用柱状漫射光纤照射个体中的目标区域，亦即间质性肿瘤，该光纤包括在或在约0.5cm至或至约10cm的漫射器长度且间隔或间隔约1.8
±
0.2cm，且光剂量为或为约100j/cm纤维长度或通量率为或为约400mw/cm。在一些实施方式中，目标区域是深度大于或大于约10mm的肿瘤或是皮下肿瘤。在一些实施方式中，柱状漫射光纤是置放在安置于肿瘤中的导管中，相隔或相隔约1.8
±
0.2cm。在一些实施方式中，导管是光学透明的。
[0213]
在一些实施方式中，用至少或至少约1j/cm2，诸如至少或至少约10j/cm2、至少或至少约30j/cm2、至少或至少约50j/cm2、至少或至少约100j/cm2、或至少或至少约500j/cm2的光剂量照射目标区域，诸如肿瘤、肿瘤附近、淋巴结、淋巴结附近或肿瘤微环境。在一些实施方式中，照射的剂量是自或自约1至或至约j/cm2、自或自约1至或至约500j/cm2、自或自约5至或至约200j/cm2、自或自约10至或至约100j/cm2或自或自约10至或至约50j/cm2。在一些实施方式中，以至少或至少约2j/cm2、5j/cm2、10j/cm2、25j/cm2、50j/cm2、75j/cm2、100j/cm2、150j/cm2、200j/cm2、300j/cm2、400j/cm2或500j/cm2的剂量照射目标区域。
[0214]
在一些实施方式中，目标区域是作为浅表肿瘤的肿瘤。在一些实施方式中，肿瘤的厚度小于10mm。在一些实施方式中，照射是使用供表面照射的顶端为微透镜的光纤进行。在一些实施方式中，光照射剂量是自或自约5j/cm2至或至约200j/cm2。
[0215]
在一些实施方式中，以如下剂量照射目标区域，诸如肿瘤、肿瘤附近、淋巴结、淋巴结附近或肿瘤微环境：至少或至少约1j/cm纤维长度，诸如至少或至少约10j/cm纤维长度、至少或至少约50j/cm纤维长度、至少或至少约100j/cm纤维长度、至少或至少约250j/cm纤维长度、或至少或至少约500j/cm纤维长度。在一些实施方式中，照射的剂量是自或自约1至或至约1000j/cm纤维长度、自或自约1至或至约500j/cm纤维长度、自或自约2至或至约500j/cm纤维长度、自或自约50至或至约300j/cm纤维长度、自或自约10至或至约100j/cm纤维长度、或自或自约10至或至约50j/cm纤维长度。在一些实施方式中，以如下剂量照射目标区域，诸如肿瘤、肿瘤附近、淋巴结、淋巴结附近或肿瘤微环境：至少或至少约2j/cm纤维长度、5j/cm纤维长度、10j/cm纤维长度、25j/cm纤维长度、50j/cm纤维长度、75j/cm纤维长度、100j/cm纤维长度、150j/cm纤维长度、200j/cm纤维长度、250j/cm纤维长度、300j/cm纤维长度、400j/cm纤维长度或500j/cm纤维长度。
[0216]
在一些实施方式中，所提供的方法包括用供表面照射的顶端为微透镜的光纤，以自或自约5j/cm2至或至约200j/cm2的光剂量照射个体中的目标区域，亦即浅表肿瘤。在一些实施方式中，光照射剂量是或是约50j/cm2。
[0217]
在一些情况下，发现在人类个体中实现pit的照射剂量可低于在小鼠中实现pit所需的剂量。举例而言，在一些情况下，在小鼠活体内肿瘤模型中在或在约50j/cm2(50j/cm2)的光剂量测定法对pit无效，此与在临床上用人类患者所能观察到的情况形成对比。
[0218]
在一些实施方式中，在给予包含酞菁染料-靶向分子偶联物的组合物后，照射的剂量在或在约660-740nm的波长下为至少或至少约1j/cm2、或至少或至少约1j/cm纤维长度，例如在或在约660-740nm的波长下为至少或至少约10j/cm2或至少或至少约10j/cm纤维长度、在或在约660-740nm的波长下为至少或至少约50/cm2或至少或至少约50j/cm纤维长度，
或在或在约660-740nm的波长下为至少或至少约100j/cm2或至少或至少约100j/cm纤维长度。在一些实施方式中，波长是660-710nm。在一些实施方式中，在给予包含酞菁染料-靶向分子偶联物的组合物后，照射的剂量在或在约690nm的波长下为至少或至少约1.0j/cm2或至少或至少约1j/cm纤维长度，例如在或在约690nm的波长下为至少或至少约10j/cm2或至少或至少约10j/cm纤维长度、在或在约690nm的波长下为至少或至少约50j/cm2或至少或至少约50j/cm纤维长度、或在或在约690nm的波长下为至少或至少约100j/cm2或至少或至少约100j/cm纤维长度，例如在或在约690nm的波长下为1.0至500j/cm2或1.0至500j/cm纤维长度。在给予本文所提供的偶联物或组合物之后的示例性照射包括在或在约660nm至或至约740nm的波长下，以至少或至少约1j/cm2或至少或至少约1j/cm纤维长度的剂量照射目标区域。
[0219]
在一些实施方式中，照射是在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量进行。在一些实施方式中，该目标区域是在690
±
40nm的波长下照射。在一些实施方式中，该目标区域是以或以约50j/cm2或以或以约100j/cm纤维长度的剂量照射。
[0220]
在一些实施方式中，可将光或辐照施加至染料分子，诸如含有该偶联物的细胞，持续自或自约5秒至或至约5分钟。举例而言，在一些实施方式中，将光或辐照施加或施加约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50或55秒，或在任何两个该值之间的范围内的时间，以活化染料分子。在一些实施方式中，将光或辐照施加或施加约1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5或5分钟或更长时间，或在任何两个该值之间的范围内的时间。在一些实施方式中，施加光或辐照的时间长度可取决于例如光或辐照的能量，诸如瓦数而变化。举例而言，具有较低瓦数的光或激光器可施加较长时间段以便活化染料分子。
[0221]
在一些实施方式中，可在给予该偶联物之后在或在约30分钟至或至约96小时的时候，施加光或辐照。举例而言，在一些实施方式中，在给予该偶联物之后在或在约30、35、40、45、50或55分钟，或在任何两个该值之间的范围内的时间，施加光或辐照。在一些实施方式中，光或辐照是在给予该偶联物之后在或在约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个小时的时候施加，或在约任何两个该值之间的范围内，诸如在或在约20小时至或至约28小时之间，或约24小时
±
4小时内给予。在一些实施方式中，光或辐照是在或在约1与24小时之间，诸如在或在约1与或与约12小时之间、在或在约12与或与约24小时之间、在或在约6与或与约12小时之间施加，或可在给予该偶联物后超过或超过约24小时给予。在一些实施方式中，光或辐照是在给予该偶联物之后在或在约36、48、72或96小时的时候施加。在一些实施方式中，光或辐照是在给予该偶联物之后在或在约24小时
±
4小时的时候施加。
[0222]
在一些实施方式中，目标区域诸如肿瘤、肿瘤附近、淋巴结、淋巴结附近或肿瘤微环境，或个体可经照射一或多次。因此，照射可在一天内完成，或可分多天以相同或不同的剂量重复进行，诸如至少在或在约2个不同时间、3个不同时间、4个不同时间、5个不同时间或10个不同时间照射。在一些实施方式中，重复照射可在同一天、连续数天、或每1-3天、每3-7天、每1-2周、每2-4周、每1-2个月或以甚至更长的时间间隔进行。在一些实施方式中，执行多次照射，诸如至少2次、至少3次或至少4次照射，诸如2、3、4、5、6、7、8、9或10次独立给予。
[0223]
在一些实施方式中，照射的剂量或方法取决于目标区域，诸如肿瘤、肿瘤附近、淋巴结、淋巴结附近的类型或形态而不同。
[0224]
在一些实施方式中，照射采用具有“顶帽”辐照分布型态的装置，诸如wo2018/080952及us20180239074中所述的装置。
[0225]
v.组合疗法
[0226]
在一些实施方式中，还提供包括组合疗法的方法及用途，以及组合，诸如根据组合疗法使用的组合。在一些方面中，该组合包括抗pd-l1偶联物及额外治疗剂，诸如免疫调节剂或抗癌剂。在一些实施方式中，用于此类组合疗法中的抗pd-l1偶联物的靶向分子是抗pd-l1抗体、或结合至pd-l1的抗体片段。在一些实施方式中，该偶联物是连接至si-酞菁染料，诸如ir700染料的抗pd-l1抗体或结合至pd-l1的抗体片段。在一些方面中，该组合疗法包括给予抗pd-l1偶联物及额外治疗剂，例如免疫调节剂或抗癌剂。在此类方法中，原发性肿瘤、新产生的肿瘤、侵袭性肿瘤细胞及转移性肿瘤细胞可对利用额外治疗剂，诸如免疫调节剂或抗癌剂的治疗敏感。在此类方法中，原发性肿瘤、新产生的肿瘤、侵袭性肿瘤细胞及转移性肿瘤细胞的生长可经抑制、减少或消除，及/或一或多个肿瘤的体积减小。
[0227]
由此类组合治疗引起的敏感性增加可包括(但不限于)肿瘤生长减少或抑制、肿瘤细胞侵袭及/或转移减少、肿瘤细胞杀伤增加、全身免疫反应增加、新t细胞活化增加、肿瘤内cd8

t细胞的多样性增加、肿瘤内cd8

t效应细胞的数量及/或活性增加、肿瘤内调节性t细胞的数量及/或活性减小、肿瘤内骨髓源性抑制性细胞的数量及/或活性减小、肿瘤内肿瘤相关纤维母细胞或癌症相关纤维母细胞(caf)的数量及/或活性减小，或其任何组合。
[0228]
在一些实施方式中。额外治疗剂是抗癌剂。在一些实施方式中，抗癌剂可为以下一或多种：化学治疗剂、抗体治疗及辐照治疗剂。在一些实施方式中，额外治疗剂是选自以下的抗癌剂：检查点抑制剂、免疫佐剂、化学治疗剂、辐照及包含结合至肿瘤细胞的抗癌靶向分子的生物制剂。
[0229]
在一些方面中，该额外治疗剂是免疫调节剂(immunomodulatory agent)(又称为免疫调节试剂(immune modulating agent))，诸如免疫检查点抑制剂。在一些方面中，此类组合是用于治疗肿瘤、病变或癌症。在一些实施方式中，该方法包括在给予抗pd-l1偶联物之前、同时或之后，给予免疫调节剂，诸如免疫检查点抑制剂。
[0230]
在一些实施方式中，本文的此类组合疗法中使用的额外治疗剂，诸如免疫调节剂，可包括佐剂、免疫检查点抑制剂、细胞因子或其任何组合。用于该组合中的细胞因子可为例如阿地白介素(proleukin)、干扰素α-2a、干扰素α-2b(intron a)聚乙二醇化干扰素α-2b(sylatron/peg-intron)或靶向ifnar1/2路径、il-2/il-2r路径的细胞因子。用于该组合中的佐剂可为例如聚iclc(hiltonol/咪喹莫特)、4-1bb(cd137；tnfrs9)、ox40(cd134)ox40-配体(ox40l)、toll样受体2激动剂sup3、toll样受体tlr3及tlr4激动剂，以及靶向toll样受体7(tlr7)路径、tnfr及tnf超家族的其他成员的佐剂、其他tlr2激动剂、tlr3激动剂及tlr4激动剂。
[0231]
在一些实施方式中，该额外治疗剂是免疫检查点抑制剂，亦即pd-1抑制剂，诸如小分子、抗体或抗原结合片段。示例性抗pd-1抗体包括(但不限于)以下派姆单抗(mk-3475、克珠达)、纳武单抗(opdivo)、切米普单抗(libtayo)、特瑞普利单抗(js001)、hx008、sg001、gls-010、多斯利单抗(tsr-042)、迪赛利珠单抗(bgb-a317)、西利单抗(jnj-63723283)、皮
立珠单抗(ct-011)、杰诺珠单抗(apl-501、gb226)、bcd-100、切米普单抗(regn2810)、f520、斯迪利单抗(ibi308)、gls-010、cs1003、lzm009、坎立珠单抗(shr-1210)、sct-i10a、mga012、ak105、pf-06801591、amp-224、ab122、amg 404、bi 754091、hlx10、jtx-4014、medi0680、sym021、mgd019、mgd013、ak104、xmab20717、ro7121661、cx-188及斯巴达珠单抗。
[0232]
在一些实施方式中，该额外治疗剂是免疫检查点抑制剂，亦即ctla-4抑制剂，诸如小分子、抗体或抗原结合片段。在任何实施方式中的一些中，抗ctla-4抗体选自由以下组成的群：伊匹单抗(yervoy)、曲美木单抗、agen1181、agen1884、adu-1064、bcd-145及bcd-217。
[0233]
在一些实施方式中，该额外治疗剂是cd25抑制剂，诸如小分子、抗体或抗原结合片段。在任何实施方式中的一些中，抗cd25抗体选自由以下组成的群：巴利昔单抗达利珠单抗、pc61。
[0234]
额外治疗剂，诸如检查点抑制剂、佐剂或细胞因子的给予可在给予该抗pd-l1偶联物之前、同时或之后给予。举例而言，该方法可包括给予一或多次剂量的免疫检查点抑制剂、给予抗pd-l1偶联物及在给予该偶联物之后，用适合光波长照射目标区域。该方法可包括先给予该偶联物，并在给予该偶联物之后，照射目标区域，且在给予该偶联物之后，或在照射步骤之后，接着给予额外治疗剂，诸如免疫检查点抑制剂。该方法亦可包括在给予该偶联物的同时，给予额外治疗剂，诸如免疫检查点抑制剂，随后照射目标区域。在一些实施方式中，额外治疗剂，诸如免疫检查点抑制剂、佐剂或细胞因子先在给予抗pd-l1偶联物时给予一或多次，随后照射目标区域，且接着再给予一或多次额外治疗剂(相同或不同额外治疗剂)。
[0235]
vi.定义
[0236]
除非另作定义，否则本文所使用的所有技术术语、表示法以及其他技术及科学术语应指具有与所要求的主题所涉领域的一般技术人员通常所理解相同的含义。在一些情况下，为清楚起见及/或为方便参考，在本文中定义具有通常所理解含义的术语，且本文中包括此类定义不必解释为表示与此项技术中通常所理解存在实质性差异。
[0237]
除非本文另外明确规定，否则如本文所使用，单数形式“一个/种(a/an)”及“该”包括复数含义。举例而言，“一个/种(a/an)”指“至少一个/种”或“一或多个/种”。应理解，本文所述的方面及变化形式包括“由方面及变化形式组成”及/或“基本上由方面及变化形式组成”。
[0238]
在本发明通篇，所主张的主题的各种方面均以范围形式呈现。应理解，范围形式中的描述仅为了方便及简洁起见且不应视为对所主张主题的范围的不灵活限制。因此，范围的描述应视为特定地公开所有可能子范围以及该范围内的个别数值。举例而言，在提供值的范围的情况下，应理解，在该范围的上限与下限之间的每一中间值及该所述范围内的任何其他所述值或中间值均包括在所主张的主题内。这些较小范围的上限及下限可独立地包括在较小范围内且亦包括在所主张的主题内，在所陈述范围内受到任何特定排他性限制。在所述范围包括一个或两个限值的情况下，排除该所包括的限值中的任一个或两个的范围亦包括在所主张的主题中。不管范围的广度如何，此均适用。
[0239]
如本文所使用，术语“约”是指本领域技术人员易于知晓的各别值的常见误差范围。本文中提及“约”某一值或参数包括(且描述)针对该值或参数本身的实施方式。举例而言，涉及“约x”的描述包括“x”的描述。
[0240]
如本文所使用，“偶联物”是指直接或间接地连接至光可活化染料的靶向分子，诸如藉由化学偶联物制备的偶联物及藉由任何其他方法制备的偶联物。举例而言，偶联物可以指直接地或间接地连接至一或多个靶向分子，诸如结合至或靶向细胞表面蛋白质的多肽的酞菁染料，诸如硅-酞菁染料(si-酞菁染料)，诸如ir700分子。靶向分子可为肽、多肽、多于一种多肽、抗体、抗体的一部分(诸如抗原结合片段)或化学部分。
[0241]
如本文所使用，“抗pd-l1偶联物”是指具有结合至pd-l1的靶向分子的偶联物。抗pd-l1偶联物可具有结合至pd-l1的靶向分子，亦即抗体、抗原结合片段、小分子、肽、多肽或其他部分。
[0242]
如本文所使用，“抗体”是指包含特异性识别并结合抗原的表位的至少一个轻链或重链免疫球蛋白可变区的多肽，诸如肿瘤特异性蛋白质。抗体由重链及轻链构成，该链各自具有可变区，称为可变重链(vh)区及可变轻链(v
l
)区。vh区及v
l
区一起负责结合由抗体识别的抗原。术语“抗体”亦包括完整抗体及展现抗原结合的抗原结合抗体片段，诸如fab片段、fab'片段、f(ab)'2片段、fab'-sh片段、单链fv蛋白质(“scfv”)、仅重链可变区(vhh)的单域抗体及二硫键稳定的fv蛋白质(“dsfv”)、双功能抗体、线性抗体以及由抗体片段形成的多特异性抗体。其他抗体片段或由抗体片段形成的多特异性抗体包括多价scfv、双特异性scfv或scfv-ch3二聚体。scfv蛋白是免疫球蛋白的轻链可变区与免疫球蛋白的重链可变区经接头结合在一起的融合蛋白，而在dsfv中，该链经突变而引入二硫键以使该链的结合稳定。术语“抗体”亦包括经基因工程改造的形式，诸如免疫球蛋白的经修饰形式；嵌合抗体，例如人源化鼠类抗体；及异结合抗体，诸如双特异性抗体。亦参见pierce catalog and handbook,1994-1995(pierce chemical co.,rockford,ill.)；kuby,j.,immunology,第3版,w.h.freeman&co.,new york,1997。
[0243]
提及“v
h”或“vh”是指免疫球蛋白重链的可变区，包括fv、scfv、dsfv或fab的可变区。提及“v
l”或“vl”是指免疫球蛋白轻链的可变区，包括fv、scfv、dsfv或fab的可变区。
[0244]“单克隆抗体”是藉由b淋巴细胞的单一克隆或藉由已转染单一抗体的轻链及重链基因的细胞产生的抗体。单克隆抗体是藉由本领域技术人员已知的方法产生，例如藉由自骨髓瘤细胞与免疫脾细胞的融合制造杂交抗体形成细胞来产生。单克隆抗体包括人源化单克隆抗体。
[0245]“特异性结合”是指相对于与不相关蛋白质，诸如非肿瘤蛋白质，例如β-肌动蛋白的结合，个别抗体与抗原，诸如pd-l1特异性免疫反应的能力。举例而言，pd-l1特异性结合剂在活体外或活体内实质上仅仅结合pd-l1蛋白。如本文所使用，术语“肿瘤特异性结合剂”包括肿瘤特异性抗体及实质上仅仅结合至该制剂中的肿瘤特异性蛋白的其他试剂。
[0246]“抗体-ir700分子”或“抗体-ir700偶联物”是指包括与ir700结合的抗体，诸如肿瘤特异性抗体的分子。在一些实例中，抗体是特异性结合至癌细胞上的表面蛋白质的人源化抗体(诸如人源化单克隆抗体)。
[0247]“抗原”是指可刺激动物中抗体或t细胞反应的产生的化合物、组合物或物质，包括经注射或吸收至动物体内的组合物(诸如包括肿瘤特异性蛋白质的组合物)。抗原与具有特定体液或细胞免疫性的产物反应，包括由异源抗原，诸如所公开的抗原诱导的产物。“表位”或“抗原决定簇”是指使b细胞及/或t细胞起反应的抗原区域。在一个实施方式中，当表位结合mhc分子一起呈现时，t细胞对表位起反应。表位可由邻接氨基酸或非邻接氨基酸形成，这
些氨基酸因蛋白质的三级折叠而靠近。由相邻氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂时保留，而由三级折叠形成的表位在变性溶剂处理时通常消失。在独特空间构象中，表位通常包括至少3个且更通常至少5个、约9个或约8-10个氨基酸。测定表位的空间构象的方法包括例如x射线结晶学及核磁共振。
[0248]
抗原的实例包括(但不限于)含有抗原决定簇的肽、脂质、多糖及核酸，诸如由免疫细胞识别的肽、脂质、多糖及核酸。在一些实例中，抗原包括肿瘤特异性肽(诸如在癌细胞表面上发现的肿瘤特异性肽)或其免疫原性片段。
[0249]“免疫调节剂”及“免疫调节疗法”分别是指利用调节免疫系统的此类试剂，诸如细胞因子、佐剂及免疫检查点抑制剂的治疗剂及治疗法。
[0250]“免疫检查点抑制剂”是指阻断由一些类型的免疫系统细胞、诸如t细胞及一些癌细胞产生的某些蛋白质的一种类型的药物。这些蛋白质帮助控制免疫反应且可阻止t细胞杀死癌细胞。当这些蛋白质被阻断时，免疫系统上的“制动物(brake)”释放且t细胞能够更佳地杀伤癌细胞。在t细胞或癌细胞上发现的检查点蛋白质的实例包括pd-1/pd-l1及ctla-4/b7-1/b7-2。一些免疫检查点抑制剂被用于治疗癌症。
[0251]
如本文所使用，组合是指两个或更多个对象之间的任何结合。组合可为两个或两个以上独立的对象，诸如两种组合物或两个集合；可为其混合物，诸如两个或两个以上对象的单一混合物；或其任何变化形式。组合的要素一般在功能上相关联或有关。
[0252]
如本文所使用，“组合疗法”是指给予个体两种或两种以上治疗剂，诸如至少两种或至少三种治疗剂，以治疗单一疾病的治疗方法。在一些实施方式中，各疗法可产生独立的医药作用，且一起可产生累加或协同的医药作用。
[0253]
如本文所使用，“治疗”患有疾病或病况的个体指在治疗之后，个体的症状部分或完全缓解或保持不变化。因此，治疗涵盖预防、疗法及/或治愈。预防是指防止潜在疾病及/或防止症状恶化或疾病进展。
[0254]
如本文所使用，“治疗”指改善或以其他方式有益地改变病况、病症或疾病或其他适应症的症状的任何方式。
[0255]
如本文所使用，“治疗作用”指由治疗个体产生的改变、通常改良或改善疾病或病况的症状或治愈疾病或病况的作用。
[0256]
如本文所使用，藉由治疗，诸如藉由给予医药组合物或其他治疗剂改善特定疾病或病症的症状是指可归因于该组合物或治疗剂的给药或与其相关的任何症状减轻，不论是持久的抑或暂时的、持续或短暂的减轻。
[0257]
如本文所使用，术语“个体”是指动物，包括哺乳动物，诸如人类。
[0258]
如本文所使用，“可选的(optional)”或“视情况(optionally)”指随后描述的事件或情形可能发生或不发生，且该描述包括该事件或情形发生的情况及该事件或情形未发生的情况。举例而言，视情况经取代的基团指该基团未经取代或经取代。
[0259]
如本文所使用，“肿瘤”是指当细胞分裂超过其应当分裂的程度时，或当其应当死亡时未死亡而产生的异常组织肿块。肿瘤可为良性的(不为癌症)或恶性的(癌症)。
[0260]
如本文所使用，“病变”是指异常组织区域。病变可为良性的(不为癌症)或恶性的(癌症)。
[0261]
如本文所使用，“抗癌剂”是指用于治疗以停止或防止癌症的任何分子。实例可包
括(但不限于)小化学分子、抗体、抗体偶联物、免疫调节剂或其任何组合。
[0262]
如本文所使用，“抑制性细胞”或“免疫抑制性细胞”是指能够减少或抑制诸如cd8 t效应细胞的类免疫效应细胞的功能的细胞。抑制性细胞的实例可包括(但不限于)调节性t细胞、m2巨噬细胞、骨髓源性抑制性细胞、肿瘤相关纤维母细胞或癌症相关纤维母细胞。
[0263]
如本文所使用，“免疫抑制剂”是指降低身体的免疫反应的试剂。其减弱身体对抗感染及其他疾病，诸如癌症的能力。
[0264]
如本文所使用，“对治疗具有抗性”是指一种疾病或病理性病况对治疗无反应或展现不足的功效，使得此治疗在治疗该疾病或病理性病况无效或未显示出功效，或功效要低于所希望的水平。
[0265]
如本文所使用，“全身免疫反应”是指个体的免疫系统以全身方式对一或多个免疫攻击，包括与肿瘤、病变或癌症相关的免疫攻击起反应的能力。全身免疫反应可包括个体的后天免疫系统及/或先天免疫系统的全身反应。全身免疫反应包括不同组织中，包括血流、淋巴结、骨髓、脾及/或肿瘤微环境中的免疫反应，且在一些情况下，包括组织及器官以及组织及器官的各种细胞及因子的协调反应。
[0266]
如本文所使用，“局部免疫反应”是指组织或器官针对一或多个免疫攻击，包括与肿瘤、病变或癌症相关的免疫攻击的免疫反应。局部免疫反应可包括后天免疫系统及/或先天免疫系统。局部免疫包括在不同组织包括血流、淋巴结、骨髓、脾及/或肿瘤微环境处同时发生的免疫反应。
[0267]
示例性实施方式
[0268]
在所提供的实施方式当中有：
[0269]
1.一种通过活化免疫细胞反应治疗个体的肿瘤或病变的方法，其包含：
[0270]
(a)给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及
[0271]
(b)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域；
[0272]
其中该方法引起该表达pd-l1的免疫细胞的杀伤且由此抑制该肿瘤或该病变的生长。
[0273]
2.一种治疗对用于肿瘤或病变的先前免疫疗法具有低反应或无反应的个体的方法，其包含：
[0274]
(a)鉴别对用于肿瘤或病变的先前免疫疗法具有低反应或无反应的个体；
[0275]
(b)向对先前免疫疗法具有低反应或无反应的有肿瘤或病变的个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及
[0276]
(c)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的细胞所在的目标区域；
[0277]
其中该方法引起表达pd-l1的细胞的杀伤且由此增加该肿瘤中及/或肿瘤微环境中免疫细胞的数量或活性。
[0278]
3.如实施方式2的方法，其中该表达pd-l1的细胞是免疫细胞。
[0279]
4.一种增强有肿瘤或病变的个体针对抗癌剂的反应的方法，其包含：
[0280]
(a)给予有肿瘤或病变的个体抗癌剂；
[0281]
(b)向该个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及
[0282]
(c)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域；
[0283]
其中相较于由用单独该抗癌剂的治疗引起的抑制作用，该方法引起对于该肿瘤或该病变的生长的较高抑制作用。
[0284]
5.一种增强有肿瘤或病变的个体针对抗癌剂的反应的方法，其包含：
[0285]
向该个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域，其中该个体已给予抗癌剂，且
[0286]
其中相较于由用单独该抗癌剂的治疗引起的抑制作用，该方法引起对于该肿瘤或该病变的生长的较强抑制作用。
[0287]
6.一种增强有肿瘤或病变的个体针对抗癌剂的反应的方法，其包含：
[0288]
向个体给予抗癌剂；其中该个体已接受治疗，该治疗包含向该个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射表达pd-l1的免疫细胞所在的目标区域，且
[0289]
其中相较于由用单独该抗癌剂的治疗引起的抑制作用，该方法引起对于该肿瘤或该病变的生长的较强抑制作用。
[0290]
7.如实施方式4至6中任一例的方法，其中该抗癌剂选自检查点抑制剂、免疫佐剂、化学治疗剂、辐照及包含结合至肿瘤细胞的抗癌靶向分子的生物制剂。
[0291]
8.如实施方式4至7中任一例的方法，其中该抗癌剂是抗体偶联物。
[0292]
9.如实施方式7或8的方法，其中该抗体偶联物包含酞菁染料、毒素或tlr激动剂。
[0293]
10.一种对个体进行疫苗接种以使其产生抗癌免疫反应的方法，其包含：
[0294]
(a)向个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及
[0295]
(b)照射目标区域；
[0296]
其中该方法引起抗癌反应，该抗癌反应选自该个体中肿瘤的出现或生长的延迟或抑制、或肿瘤附近t记忆细胞的出现或增加。
[0297]
11.如实施方式10的方法，其中该照射是在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量进行。
[0298]
12.如实施方式10或11的方法，其中该目标区域包含表达pd-l1的细胞。
[0299]
13.如实施方式12的方法，其中该表达pd-l1的细胞是免疫细胞。
[0300]
14.如实施方式1至13中任一例的方法，其中该方法引起该表达pd-l1的细胞或该表达pd-l1的免疫细胞的杀伤。
[0301]
15.如实施方式1至14中任一例的方法，其中向该个体给予该pd-l1偶联物以治疗
第一肿瘤或第一病变及/或抑制其生长；且该方法抑制一或多个第二肿瘤或病变、或该第一肿瘤或该第一病变的转移，或延迟其出现。
[0302]
16.如实施方式15的方法，其中该一或多个第二肿瘤在表型上及/或基因型上不同于该第一肿瘤。
[0303]
17.如实施方式15或16的方法，其中该一或多个第二肿瘤并非来源于该第一肿瘤的转移。
[0304]
18.如实施方式1至17中任一例的方法，其中该治疗延迟该肿瘤或该病变的再生长，防止癌症的复发或延长癌症缓解的持续时间。
[0305]
19.如实施方式1至18中任一例的方法，其中该表达pd-l1的免疫细胞选自由以下组成的群：单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(dc)、m2肿瘤相关巨噬细胞(m2 tam)、致耐受性树突细胞(tdc)及骨髓源性抑制性细胞(mdsc)。
[0306]
20.如实施方式1至19中任一例的方法，其中该表达pd-l1的免疫细胞是位于该肿瘤、该肿瘤微环境或淋巴结中。
[0307]
21.如实施方式1至20中任一例的方法，其中该肿瘤或该病变包含pd-l1阴性肿瘤细胞。
[0308]
22.如实施方式21的方法，其中该肿瘤或该病变中超过或超过约40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％的肿瘤细胞是pd-l1阴性肿瘤细胞。
[0309]
23.如实施方式1至22中任一例的方法，其中该肿瘤或该病变的生长的抑制及/或该表达pd-l1的细胞的杀伤取决于cd8 t细胞的存在。
[0310]
24.如实施方式1至23中任一例的方法，其中该个体先前曾抗癌疗法及/或免疫检查点抑制剂治疗。
[0311]
25.如实施方式1至24中任一例的方法，其中该个体先前曾用免疫检查点抑制剂治疗。
[0312]
26.如实施方式24或25的方法，该个体在用该抗癌疗法及/或免疫检查点抑制剂的先前治疗之后失败或复发。
[0313]
27.如实施方式24至26中任一例的方法，其中该个体在用该免疫检查点抑制剂的先前治疗之后失败或复发。
[0314]
28.如实施方式24至27中任一例的方法，其中由进行该方法引起的肿瘤生长抑制作用要大于由用该抗癌疗法及/或免疫检查点抑制剂的先前治疗引起的肿瘤生长抑制作用。
[0315]
29.如实施方式24至28中任一例的方法，其中由进行该方法引起的肿瘤生长抑制作用要大于由用该免疫检查点抑制剂的先前治疗引起的根据抑制作用。
[0316]
30.如实施方式1至29中任一例的方法，其中在该给予之前，该个体患有具有较低量cd8 t细胞浸润的肿瘤或病变。
[0317]
31.如实施方式1至30中任一例的方法，其中在该给予及该照射之后，该肿瘤中或该肿瘤微环境中免疫细胞的数量、量或活性增加。
[0318]
32.如实施方式1至31的方法，其中在该给予及该照射之后，该肿瘤或该病变中该cd8 t细胞浸润的数量或量增加。
[0319]
33.如实施方式1至32的方法，其中在该给予及该照射之后，该肿瘤附近记忆t细胞
的数量增加。
[0320]
34.一种增强有肿瘤或病变的个体的先天性免疫反应的方法，该方法包含：
[0321]
(a)向该个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及
[0322]
(b)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该个体中该肿瘤或病变所在的目标区域；
[0323]
由此增强该个体的先天性免疫反应。
[0324]
35.如实施方式34的方法，其中增强该先天性免疫反应包含活化树突细胞(dc)或抗原递呈树突细胞增加。
[0325]
36.如实施方式35的方法，其中该活化dc展现cd80 及/或cd40 的细胞表面表型。
[0326]
37.如实施方式35的方法，其中该抗原递呈树突细胞展现cd11b cd103 cd11c 的细胞表面表型。
[0327]
38.一种增加肿瘤或病变中免疫细胞的数量或量的方法，该方法包含：
[0328]
(a)给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及
[0329]
(b)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该个体中该肿瘤或病变所在的目标区域；
[0330]
由此增加该个体的该肿瘤或病变中免疫细胞的数量或量。
[0331]
39.如实施方式38的方法，其中该免疫细胞是肿瘤内嗜中性粒细胞。
[0332]
40.如实施方式39的方法，其中该肿瘤内嗜中性粒细胞展现cd11b

ly6c-/低
ly6g

的细胞表面表型。
[0333]
41.如实施方式38的方法，其中该免疫细胞是肿瘤内效应t细胞。
[0334]
42.如实施方式41的方法，其中该肿瘤内效应t细胞展现cd3

cd8

pd-1-的细胞表面表型。
[0335]
43.一种治疗异质肿瘤或病变的方法，该方法包含：
[0336]
(a)给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及
[0337]
(b)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该个体中该肿瘤或病变所在的目标区域；
[0338]
由此治疗该个体的异质肿瘤或病变。
[0339]
44.如实施方式43的方法，其中该异质肿瘤或病变包含复数个不同类型的肿瘤细胞或来自复数个不同来源的肿瘤细胞。
[0340]
45.一种治疗免疫抑制性肿瘤或病变的方法，该方法包含：
[0341]
(a)给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及
[0342]
(b)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该个体中该肿瘤或病
变所在的目标区域；
[0343]
由此治疗该个体的免疫抑制性肿瘤或病变。
[0344]
46.如实施方式45的方法，其中该免疫抑制性肿瘤或病变包含表达免疫检查点蛋白的肿瘤细胞。
[0345]
47.如实施方式46的方法，其中该免疫检查点蛋白是pd-l1、pd-1或ctla-4。
[0346]
48.一种治疗肿瘤或病变的方法，该方法包含：
[0347]
(a)给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物，该肿瘤或病变包含对免疫检查点抑制剂治疗的敏感性降低的肿瘤细胞；以及
[0348]
(b)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该个体中该肿瘤或病变所在的目标区域；
[0349]
其中在该照射之后，该肿瘤或病变的生长、大小或活力减小或受抑制。
[0350]
49.一种治疗肿瘤或病变的方法，该方法包含：
[0351]
(a)给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物，该肿瘤或病变对先前免疫疗法具有低反应、无反应、具有抗性、用先前免疫疗法难以治疗、无法对先前免疫疗法起反应或在先前免疫疗法之后复发；以及
[0352]
(b)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该肿瘤或病变所在的目标区域；
[0353]
其中该方法引起该目标区域中表达pd-l1的细胞的杀伤。
[0354]
50.如实施方式2、3、14至33、48及49中任一例的方法，其中该先前免疫疗法是用免疫检查点抑制剂的治疗。
[0355]
51.如实施方式2、3、14至33及48至50中任一例的方法，其中该个体对包含pd-1/pd-l1阻断疗法的先前免疫疗法具有原发抗性或获得性抗性。
[0356]
52.一种治疗肿瘤或病变的方法，该方法包含：
[0357]
(a)向免疫检查点抑制剂未治疗或先前未接受免疫检查点抑制剂治疗的个体给予包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及
[0358]
(b)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该个体中肿瘤或病变所在的目标区域；其中在该照射之后，该肿瘤或病变的生长、大小或活力减小或受抑制。
[0359]
53.如实施方式15至33及48至52中任一例的方法，其中向该个体给予该偶联物以治疗第一肿瘤或病变、抑制其生长及/或减小其大小；且该方法抑制、延迟或防止位于该第一肿瘤或病变远端的一或多个第二肿瘤或病变的出现、生长或建立。
[0360]
54.一种对患有第一肿瘤或病变的个体免疫接种的方法，该方法包含：
[0361]
(a)给予有肿瘤或病变的个体包含连接至结合pd-l1的靶向分子的酞菁染料的偶联物；以及
[0362]
(b)在或在约600nm至或至约850nm的波长下，以自或自约25j/cm2至或至约400j/cm2或自或自约2j/cm纤维长度至或至约500j/cm纤维长度的剂量照射该第一肿瘤或病变内的目标区域；
[0363]
其中该第一肿瘤或病变的生长受抑制及/或大小减小；且位于经治疗的第一肿瘤或病变远端的一或多个第二肿瘤或病变的出现、生长或建立得到抑制、延迟或防止。
[0364]
55.如实施方式15至33、53及54中任一例的方法，其中该第二肿瘤或病变是该第一肿瘤或病变的转移。
[0365]
56.如实施方式15至33及53至55中任一例的方法，其中该方法引起该第一肿瘤或病变附近表达pd-l1的细胞的杀伤及/或活化免疫细胞反应，由此抑制、延迟或防止该第二肿瘤或病变的出现、生长或建立。
[0366]
57.如实施方式15至33及53至56中任一例的方法，其中该第二肿瘤或病变在表型上及/或基因型上与该第一肿瘤或病变相同。
[0367]
58.如实施方式15至33及53至56中任一例的方法，其中该第二肿瘤或病变在表型上及/或基因型上不同于该第一肿瘤或病变。
[0368]
59.如实施方式15至33、53及54中任一例的方法，其中该第二肿瘤或病变并非来源于该第一肿瘤或病变的转移。
[0369]
60.如实施方式1至59中任一例的方法，其中该方法引起该表达pd-l1的细胞或该表达pd-l1的免疫细胞的杀伤。
[0370]
61.如实施方式1至60中任一例的方法，其中该肿瘤或病变包含肿瘤细胞，且该肿瘤细胞不表达免疫检查点蛋白或具有降低的免疫检查点蛋白表达。
[0371]
62.如实施方式61的方法，其中该免疫检查点蛋白是选自pd-l1、pd-1及ctla-4。
[0372]
63.如实施方式7至62中任一例的方法，其中该肿瘤细胞不响应炎症刺激而表达pd-l1。
[0373]
64.如实施方式63的方法，其中该炎性刺激是干扰素。
[0374]
65.如实施方式7至64中任一例的方法，其中该肿瘤细胞不被抗pd-l1抗体特异性识别。
[0375]
66.如实施方式1至65中任一例的方法，其中该肿瘤或病变包含pd-l1阴性肿瘤细胞。
[0376]
67.如实施方式66的方法，其中该肿瘤或病变中至少或至少约40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％的肿瘤细胞是pd-l1阴性肿瘤细胞。
[0377]
68.如实施方式1至67中任一例的方法，其中该治疗延迟该肿瘤或病变的再生长，防止与该肿瘤或病变相关的癌症的复发或延长与该肿瘤或病变相关的癌症的缓解的持续时间。
[0378]
69.如实施方式1至68中任一例的方法，其中该肿瘤或病变的生长的抑制及/或该表达pd-l1的细胞的杀伤取决于cd8 t细胞的存在。
[0379]
70.如实施方式1至69中任一例的方法，其中该个体未用免疫检查点抑制剂治疗或先前未曾接受用免疫检查点抑制剂的治疗。
[0380]
71.如实施方式1至69中任一例的方法，其中该个体先前曾用免疫检查点抑制剂治疗。
[0381]
72.如实施方式71的方法，其中该个体对用该免疫检查点抑制剂的先前治疗具有低反应、无反应、具有抗性、用该免疫检查点抑制剂的先前治疗难以治疗、无法对用该免疫检查点抑制剂的先前治疗起反应或在用该免疫检查点抑制剂的先前治疗之后复发。
[0382]
73.如实施方式71或72的方法，其中由进行该方法引起的对该肿瘤或病变的生长、大小或活力的抑制作用要大于由用该免疫检查点抑制剂的先前治疗引起的抑制作用。
[0383]
74.如实施方式71至73中任一例的方法其中该免疫检查点抑制剂是pd-l1、pd-1或ctla-4的抑制剂。
[0384]
75.如实施方式24至74中任一例的方法，其中免疫检查点抑制剂是pd-1抑制剂。
[0385]
76.如实施方式75的方法，其中该pd-1抑制剂是抗pd-1抗体。
[0386]
77.如实施方式24至74中任一例的方法，其中该免疫检查点抑制剂是pd-l1抑制剂。
[0387]
78.如实施方式77的方法，其中该pd-l1抑制剂是抗pd-l1抗体。
[0388]
79.如实施方式1至78中任一例的方法，其中该方法该肿瘤或病变中及/或该肿瘤或病变的微环境中免疫细胞的数量或活性增加。
[0389]
80.如实施方式1至79中任一例的方法，其中该目标区域包含表达pd-l1的免疫细胞。
[0390]
81.如实施方式2至79中任一例的方法，其中该表达pd-l1的细胞是免疫细胞。
[0391]
82.如实施方式1至81中任一例的方法，其中该免疫细胞选自由以下组成的群：单核细胞、巨噬细胞、树突细胞(dc)、m2肿瘤相关巨噬细胞(m2 tam)、致耐受性树突细胞(tdc)及骨髓源性抑制性细胞(mdsc)。
[0392]
83.如实施方式1至82中任一例的方法，其中该免疫细胞是位于该肿瘤、该肿瘤微环境或淋巴结中。
[0393]
84.如实施方式1至83中任一例的方法，其中在给予该偶联物之前，该个体患有具有较低cd8 t细胞浸润数量或量的肿瘤或病变。
[0394]
85.如实施方式1至84中任一例的方法，其中在该给予及该照射之后，该肿瘤或病变中或该肿瘤或病变的微环境中免疫细胞的数量、量或活性增加。
[0395]
86.如实施方式84或85的方法，其中在该给予及该照射之后，该肿瘤或病变中该cd8 t细胞浸润的数量或量增加。
[0396]
87.如实施方式84至86中任一例的方法，其中在该给予及该照射之后，该肿瘤或病变附近记忆t细胞的数量或量增加。
[0397]
88.如实施方式1至87中任一例的方法，其中该方法增强该个体的先天性免疫反应。
[0398]
89.如实施方式88的方法，其中该增强该先天性免疫反应包含活化树突细胞(dc)或抗原递呈树突细胞增加。
[0399]
90.如实施方式89的方法，其中该活化dc展现cd80 及/或cd40 的细胞表面表型。
[0400]
91.如实施方式89的方法，其中该抗原递呈树突细胞展现cd11b cd103 cd11c 的细胞表面表型。
[0401]
92.如实施方式1至91中任一例的方法，其中该方法增加该个体的该肿瘤或病变中免疫细胞的数量或量。
[0402]
93.如实施方式92的方法，其中该免疫细胞是肿瘤内嗜中性粒细胞。
[0403]
94.如实施方式93的方法，其中该肿瘤内嗜中性粒细胞展现cd11b

ly6c-/低
ly6g

的细胞表面表型。
[0404]
95.如实施方式92的方法，其中该免疫细胞是肿瘤内效应t细胞。
[0405]
96.如实施方式95的方法，其中该肿瘤内效应t细胞展现cd3

cd8

pd-1-的细胞表面表型。
[0406]
97.如实施方式1至96中任一例的方法，其中该方法治疗该个体的异质肿瘤或病变。
[0407]
98.如实施方式97的方法，其中该异质肿瘤或病变包含复数个不同类型的肿瘤细胞或来自复数个不同来源的肿瘤细胞。
[0408]
99.如实施方式1至98中任一例的方法，其中该方法治疗该个体的免疫抑制性肿瘤或病变。
[0409]
100.如实施方式99的方法，其中该免疫抑制性肿瘤或病变包含表达免疫检查点蛋白的肿瘤细胞。
[0410]
101.如实施方式100的方法，其中该免疫检查点蛋白是pd-l1、pd-1或ctla-4。
[0411]
102.如实施方式1至101中任一例的方法，其中该靶向分子是或包含结合pd-l1的抗体、抗原结合抗体片段或抗体样分子。
[0412]
103.如实施方式102的方法，其中该靶向分子是或包含抗pd-l1抗体或其抗原结合片段。
[0413]
104.如实施方式103的方法，其中该抗体或抗原结合片段包含来自选自由以下组成的群的抗体的互补决定区(cdr)：阿特珠单抗(mpdl3280a、泰圣奇、rg7446)、阿维鲁单抗(bavencio)、bcd-135、bgb-a333、bms-936559(mdx-1105)、cbt-502(tqb-2450)、考昔单抗(ck-301)、cs1001(wpb3155)、德瓦鲁单抗(medi4736、英飞凡)、faz053、hlx20、inbrx-105、kn035、kn046、ldp、ly3300054、ly3415244、m7824(msb0011359c)、mcla-145、msb2311、nm-01、regn3504、shr-1316(hti-1088)、sti-3031(imc-001、sti-a1015)、tg-1501及zkab001(sti-a1014)。
[0414]
105.如实施方式103或104的方法，其中该抗体或抗原结合片段包含来自阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、kn035或ck-301的互补决定区(cdr)。
[0415]
106.如实施方式103至105中任一例的方法，其中该抗体或抗原结合片段选自由以下组成的群：阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、kn035及ck-301，或其生物类似药、可互换药、生物改良药、复制生物制剂或生物仿制药，或其抗原结合片段。
[0416]
107.如实施方式103至106中任一例的方法，其中该抗体或抗原结合片段选自由以下组成的群：阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、kn035及ck-301。
[0417]
108.如实施方式1至107中任一例的方法，其中该目标区域是淋巴结或在淋巴结附近。
[0418]
109.如实施方式1至108中任一例的方法，其中在该给予及该照射之后，该个体展现持久反应、延长的无进展存活期、降低的复发机率及/或降低的转移机率。
[0419]
110.如实施方式1至109中任一例的方法，其中该酞菁染料是si-酞菁染料。
[0420]
111.如实施方式110的方法，其中该si-酞菁染料是ir700。
[0421]
112.如实施方式1至111中任一例的方法，其中该照射是在给予该偶联物之后30分钟与96小时之间进行。
[0422]
113.如实施方式1至112中任一例的方法，其中该照射是在给予该偶联物之后24小
时
±
4小时进行。
[0423]
114.如实施方式1至113中任一例的方法，其中该目标区域是在690
±
40nm的波长下照射。
[0424]
115.如实施方式1至114中任一例的方法，其中该目标区域是以或以约50j/cm2或以或以约100j/cm纤维长度的剂量照射。
[0425]
116.如实施方式1至115中任一例的方法，其中该肿瘤或病变与选自由以下组成的群的癌症相关：结肠癌、结肠直肠癌、胰脏癌、乳癌、皮肤癌、肺癌、非小细胞肺癌、肾细胞癌、甲状腺癌、前列腺癌、头颈癌、胃肠癌、胃癌、小肠癌、梭状细胞赘生物、肝脏癌瘤、肝癌、周围神经癌症、脑癌、骨骼肌癌症、平滑肌癌症、骨癌、脂肪组织癌症、子宫颈癌、子宫癌、生殖器癌症、淋巴瘤及多发性骨髓瘤。
[0426]
117.如实施方式1至116中任一例的方法，其中重复该方法的一或多个步骤。
[0427]
118.如实施方式117的方法，其中将该偶联物的给药重复一或多次，视情况其中在每次重复给予该偶联物之后，重复该照射步骤。
[0428]
119.如实施方式1至118中任一例的方法，其进一步包含给予额外治疗剂或抗癌疗法。
[0429]
实施例
[0430]
以下实施例仅出于说明的目的而包括在内且不意欲限制本发明的范围。
[0431]
实施例1：抗pd-l1抗体-irdye 700偶联物的产生
[0432]
本实施例描述一种用于制备含有连接至抗pd-l1抗体10f.9g2的irdye 700dx(ir700)的偶联物，由此制造出10f.9g2-irdye 700dx(抗pd-l1-ir700或α-pd-l1-ir700偶联物)的方法。
[0433]
将10f.9g2单克隆抗体(mab)缓冲液交换成1
×
pbs ph 7.1，接着浓缩至8.2mg/ml。用100mm磷酸钠ph 8.6将mab(16mg)稀释至3mg/ml以获得目标ph 8.0-8.5。将ir700 nhs酯(1mg，ir700；li-cor bioscience,lincoln,ne)溶解于dmso中达到10g/l浓度。接着，将溶解的染料以1mg ir700 nhs酯比16mg mab的目标染料比mab比率添加至mab中。在室温下，将结合保持2小时。通过添加1m甘胺酸达到20mm目标批料浓度的甘胺酸来淬灭反应。在室温下，将淬灭保持1小时。使用millipore 30kda分子量截止amicon离心过滤器，在约3000rpm下通过进行至多3个循环的浓缩及稀释来执行缓冲液交换。
[0434]
使用sephadex g50管柱(pd-10；ge healthcare,piscataway,nj)纯化混合物。利用coomassie plus蛋白质分析套组(pierce biotechnology,rockford,il)，通过用uv-vis系统(8453 value system；agilent technologies,palo alto,ca)量测在595nm下的吸收，来测定蛋白质浓度。通过用uv-vis系统测定吸收来量测ir700的浓度以确定与各抗pd-l1抗体分子结合的荧光团分子的数量。每个抗体的ir700的数量为约3。
[0435]
通过分析型尺寸排阻hplc(se-hplc)确定抗pd-l1-ir700偶联物的纯度。使用装备有由chemstation软件控制的pda检测器的agilent 1100hplc系统(santa clara,ca)执行se-hplc。在shodex kw-803管柱(new yok,ny)上执行se层析，使用磷酸盐缓冲生理盐水(pbs)以1.0ml/min溶离20分钟。如通过se-hplc所测定，抗pd-l1-ir700制剂展现较强缔合且不含可检测的mab聚集体。
[0436]
为测定ir700偶联物的活体外结合特征，使用indo-gen程序执行该偶联物的
125
i标
记。观察到结合ir700的mab的最少损失。如先前所描述，执行免疫反应性分析。简言的，在胰蛋白酶处理之后，使2
×
106个肿瘤细胞再悬浮于含有1％牛血清白蛋白(bsa)的pbs中。添加
125
i-抗pd-l1-ir700(1mci，0.2μg)并在冰上培育1小时。洗涤细胞，使其集结成粒，倾析出上清液，并在2470 wizardγ-计数器(perkin elmer,shelton,ct)中对细胞计数。在过量未标记抗体(200μg未标记抗体)的条件下检查与细胞的非特异性结合。
[0437]
实施例2：抗pd-l1-ir700 pit抑制ct26肿瘤的生长
[0438]
本实施例描述抗pd-l1抗体-ir700结合或不结合光照射针对原发性肿瘤的活性。
[0439]
在6-8周龄balb/c小鼠的右后侧腹中皮下接种1
×
106个ct26鼠类结肠癌细胞。当同种异体移植肿瘤生长至约150mm3大小时(肿瘤植入之后约第6天)，向小鼠给予生理盐水(100μl；对照)或大体上如以上实施例1中所描述产生的抗pd-l1-ir700偶联物(100μg)。给予该偶联物之后二十四小时，在690nm下以75、100或150j/cm2的剂量照射光免疫疗法(pit)组中的肿瘤。观察肿瘤生长24天，且使用下式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝(宽度
×
宽度)
×
长度/2。
[0440]
相较于接受生理盐水或单独抗pd-l1-ir700偶联物且未经历pit的对照小鼠中的肿瘤生长抑制情况，在接受抗pd-l1-ir700(α-pd-l1-ir700)与照射(pit)的组合的小鼠中，肿瘤生长实质上受到抑制(图1；虚线(pit)相对于实线(对照))。接受单独抗pd-l1-ir700偶联物且未经历pit的小鼠亦展现肿瘤生长相较于生理盐水对照小鼠有适度减少(图1；空心圆相对于实心圆)。
[0441]
除检查肿瘤生长之外，亦比较治疗组间的完全反应(cr)率。在本实施例中，cr定义为体积小于100mm3的肿瘤保持至少2周。在肿瘤植入后24天，用抗pd-l1-ir700加100及150j/cm2的pit治疗的小鼠中有至少50％实现cr，而生理盐水对照组中没有动物实现cr。抗pd-l1-ir700 pit治疗组实现cr的数量要大于接受单独抗pd-l1至ir700偶联物且未经历pit的小鼠，该小鼠中仅20％实现cr(图1)。结果显示，抗pd-l1-ir700 pit治疗引起原发性肿瘤的生长的显著抑制，且当接受某些光剂量的照射时，超过半数的小鼠实现cr。
[0442]
实施例3：抗pd-l1-ir700 pit抑制用第二ct26肿瘤攻击的小鼠体内的肿瘤生长
[0443]
本实施例描述在成功抑制第一肿瘤生长之后用相同肿瘤类型的第二肿瘤攻击的动物中先前抗pd-l1-ir700偶联物给予及pit的作用。
[0444]
在初始肿瘤植入后第56天，在来自实施例2的抗pd-l1-偶联物加pit治疗(全部三种光剂量)及单独抗pd-l1-偶联物的治疗组中实现cr的小鼠的对侧侧腹上皮下植入相同类型的第二肿瘤(1
×
106个ct26鼠类结肠癌细胞/小鼠)。以与对照组相同的方式，对一小组未治疗小鼠(未预先治疗)进行植入。观察第二肿瘤的生长约20天，且使用下式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝(宽度
×
宽度)
×
长度/2。
[0445]
相较于未治疗对照小鼠中的肿瘤生长抑制情况，在先前接受抗pd-l1-ir700 pit且接着通过在对侧侧腹上植入第二ct26再攻击的小鼠中，肿瘤的生长实质上受到抑制(图2a描绘平均肿瘤体积；图2b描绘个别小鼠)。
[0446]
除检查肿瘤生长之外，亦比较治疗组间的完全反应(cr)率。在第二肿瘤植入后21天，100％的先前用抗pd-l1-ir700偶联物治疗(利用或不利用预先pit治疗)的动物实现cr。相比之下，未治疗对照小鼠均未实现cr。结果显示，预先用抗pd-l1-ir700偶联物治疗(利用或不利用光照射进行pit)的小鼠成功地排斥相同类型的第二肿瘤。
[0447]
实施例4：抗pd-l1-ir700 pit抑制用不同类型的第三肿瘤攻击的小鼠体内的生长
[0448]
本实施例描述在成功抑制第一肿瘤的生长且排斥类型该第一肿瘤相同的第二肿瘤之后，在用不同肿瘤类型的第三肿瘤攻击的动物中先前抗pd-l1-ir700偶联物给予加pit的作用。
[0449]
在第一肿瘤植入后第104天，对来自实施例3的抗pd-l1-偶联物加pit治疗(全部三种光剂量；在图2a中，*来自α-pd-l1-ir700 100j/cm2组的一只cr小鼠除外)及单独抗pd-l1偶联物的治疗组中实现cr的小鼠皮下植入3
×
106个工程改造成过度表达上皮细胞黏附分子(4t1-epcam)的4t1小鼠乳腺癌细胞(来源于与ct26肿瘤细胞株不同的组织的同基因型balb/c小鼠肿瘤株)。以与对照组相同的方式，对一小组未治疗小鼠(未预先治疗)进行植入。观察第二肿瘤的生长约20天，且使用下式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝(宽度
×
宽度)
×
高度/2。
[0450]
意外地是，相较于先前仅用抗pd-l1-ir700偶联物治疗而未光照射的小鼠或相较于未治疗的对照小鼠，在先前接受抗pd-l1-ir700 pit，排斥相同类型的第二肿瘤且接着用4t1-epcam肿瘤再攻击的小鼠中，肿瘤的生长受到抑制(图3a描绘组平均肿瘤体积；图3b描绘个别小鼠)。甚至更出乎意料地是，在先前用抗pd-l1-ir700偶联物与100或150j/cm2pit的组合治疗的组中超过50％的小鼠实现cr(分别为87％及66％)。先前仅用抗pd-l1 ir700治疗而未经历光照射(无pit治疗)的小鼠及未治疗对照组未产生任何cr。结果显示，意外地是，先前用抗pd-l1-ir700偶联物加光照射(pit)治疗的小鼠成功地排斥不同类型肿瘤的接种。
[0451]
实施例5：pd-l1 pit介导的肿瘤排斥反应需要cd8细胞
[0452]
本实施例描述抗pd-l1-ir700 pit对活体内肿瘤生长的作用取决于功能性cd8

t细胞群。
[0453]
在balb/c小鼠的右后侧腹上皮下接种1
×
106个ct26细胞/小鼠。为耗竭cd8

t细胞，在肿瘤细胞接种后第6天及第9天，通过腹膜内注射向小鼠给予抗cd8a抗体(bioxcell，克隆2.43，目录号bp0061)(每只小鼠100μg)。当同种异体移植肿瘤生长至约150mm3大小时，向小鼠给予抗pd-l1-ir700偶联物(100μg)或生理盐水对照。在第6天给予抗pd-l1至ir700偶联物，并在二十四小时后，在690nm下，以100j/cm2的剂量照射在pit组小鼠右侧腹上的肿瘤。
[0454]
如图4中所示，相较于对照生理盐水或仅抗pd-l1-ir700偶联物且无光照射的动物，在用抗pd-l1-ir700偶联物加光照射(pit)治疗的有免疫能力的小鼠中，肿瘤的生长实质上受到抑制。意外地是，在cd8

t细胞耗竭的小鼠中，抗pd-l1-ir700 pit的肿瘤抑制作用完全消除(图4)，指示抗pd-l1-ir700 pit治疗的作用是由cd8

t细胞介导。此外，在用抗pd-l1-ir700 pit治疗且cd8

t细胞未耗竭的小鼠组中实现cr的小鼠的数量实质上高于用抗pd-l1-ir700 pit治疗且cd8

t细胞耗竭的小鼠中的数量，如相较于cd8

t细胞未耗竭的小鼠(分别为46.7％cr相对于6.7％cr)。结果显示，抗pd-l1-ir700 pit的肿瘤生长抑制作用需要cd8

t细胞。
[0455]
实施例6：抗pd-l1-ir700 pit延迟或排斥用各种肿瘤类型攻击的小鼠体内的肿瘤生长
[0456]
本实施例描述在成功抑制第一肿瘤的生长之后用各种类型的第二肿瘤攻击的动物中给予抗pd-l1-ir700偶联物及pit的作用。
[0457]
第1轮：在6-8周龄balb/c小鼠的右后侧腹上皮下接种1
×
106个ct26细胞/小鼠。当同种异体移植肿瘤生长至约150mm3大小时，向小鼠给予抗pd-l1-ir700偶联物(100μg)。在给予该偶联物之后二十四小时，在690nm下以100j/cm2的剂量照射肿瘤。收集实现cr的用抗pd-l1-ir700 pit治疗的小鼠并分成3个子组进行第二轮肿瘤攻击。
[0458]
第2轮：在该三个子组(“cr”组)中的每一个中，在小鼠的对侧侧腹上植入第二肿瘤。该三个子组各自亦具有先前未治疗并植入与其相配亚组相同的肿瘤细胞的相配的小鼠对照组(“未治疗”对照组)。该三个子组植入如下第二肿瘤：(a)ct26、(b)4t1.wt(未经工程改造的亲本/野生型4t1细胞)及(c)renca小鼠肾脏腺癌。观察第二肿瘤的生长约20天，且使用下式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝(宽度
×
宽度)
×
高度/2。
[0459]
如图5a(组平均)及5b(个别小鼠)中所示，先前在第1轮中用抗pd-l1-ir700 pit治疗且在第2轮中植入ct26肿瘤的动物在第2轮中展现显著的肿瘤生长抑制，其中100％(7/7)的小鼠在第2轮中用ct26肿瘤攻击之后实现cr。比较而言，在未治疗的对照动物中，肿瘤生长未受到抑制。如图5c(组平均)及5d(个别小鼠)中所示，先前在第1轮中用抗pd-l1-ir700 pit治疗且在第2轮中植入4t1.wt肿瘤的动物展现显著的肿瘤生长抑制，其中8只经治疗动物中有6只实现cr。相比之下，在第2轮中植入4t1.wt肿瘤的对照未治疗动物均未实现cr。
[0460]
相较于未治疗的对照组，先前在第1轮中用抗pd-l1-ir700 pit治疗且在第2轮中植入renca的动物(图5e(组平均)及5f(个别小鼠))仅展现极低的肿瘤生长抑制，因为在renca接种之后，相较于8只未治疗动物均未实现cr，抗pd-l1-ir700 pit治疗仅在8只动物中的1只中引起cr。在实现cr之后由各种肿瘤攻击得到的这些结果显示，先前用抗pd-l1-ir700偶联物及光照射(pit)治疗的小鼠成功地排斥相同类型或某些不同肿瘤类型的第二肿瘤。
[0461]
实施例7：抗pd-l1-ir700 pit抑制用第三4t1-epcam肿瘤攻击的小鼠体内的生长
[0462]
对来自实施例6的已在对侧侧腹上植入ct26且展现cr的第2轮亚组中的动物进行第3轮攻击。
[0463]
第3轮：在来自第2轮的ct26组中实现cr的动物的右腋窝上植入4t1-epcam肿瘤。作为对照，在未治疗动物(先前未治疗)的右腋窝上亦植入4t1-epcam肿瘤。观察第三肿瘤的生长约21天，且使用下式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝(宽度
×
宽度)
×
高度/2。
[0464]
如图6a(组平均)及6b(个别小鼠)中所示，动物在第3轮治疗中展现显著的4t1-epcam肿瘤抑制，其中7只动物中有6只展现cr。相比之下，未治疗动物展现较多的肿瘤生长且并无动物实现cr。结果显示，先前用抗pd-l1-ir700偶联物加光照射(pit)治疗的小鼠成功地排斥不同类型的第三肿瘤。
[0465]
实施例8：抗pd-l1-ir700 pit抑制pd-l1基因敲除的ct26肿瘤细胞的生长
[0466]
本实施例描述抗pd-l1抗体-ir700偶联物及光照射(pit)针对由于crispr-cas9介导的基因破坏(基因敲除)而不表达pd-l1的肿瘤细胞的活性。
[0467]
使用靶向pd-l1的向导rna(grna)，通过成簇规律间隔短回文重复序列(crispr)/crispr相关蛋白9(cas9)将在cd274基因(编码pd-l1)处的基因破坏引入至ct26细胞中，以在表型上敲除pd-l1的表达。
[0468]
在存在或不存在pd-l1基因敲除(ko)的ct26细胞中，在不存在(基础量)或存在可诱导细胞中pd-l1表达的干扰素γ(ifnγ)的情况下评估pd-l1表达。如图7a中所示，正如预
ir700 pit对活体内树突细胞活化的作用。
[0479]
对balb/c小鼠接种ct26肿瘤细胞。一旦肿瘤达到150mm3的近似平均体积，即用生理盐水、单独抗pd-l1-ir700偶联物(pdl1 conj.)或抗pd-l1-ir700偶联物加照射(抗pdl1 pit)治疗小鼠。在给予该偶联物之后二十四小时，使照射(pit)组的小鼠的肿瘤暴露于100j/cm2的690nm光。照射后两天，切除肿瘤且加工成单细胞悬浮液。接着，针对细胞标记物，包括cd11b、cd11c、cd40、cd80、cd86、cd103及mhcii，对悬浮细胞染色以鉴别肿瘤内树突细胞(dc)。亦使用同种型对照进行染色。使用流式细胞计数分析染色的细胞。
[0480]
如图10a及10b中所示，如由cd80

(图10a)及cd40

(图10b)标记物所指示，相较于仅给予生理盐水或抗pd-l1-ir700偶联物且未经历照射(pdl1 conj.)的小鼠的肿瘤，用pd-l1-ir700 pit(pdl1 pit)治疗的小鼠的肿瘤含有明显增加的量的活化树突细胞。cd40及cd80是t细胞活化的共刺激分子，其活化原生及记忆t细胞并通过增强细胞因子产生来刺激树突细胞。相较于仅给予生理盐水或抗pd-l1-ir700偶联物(pdl1conj.；不照射)的小鼠的肿瘤，用pd-l1-ir700 pit(pdl1 pit)治疗的小鼠的肿瘤亦含有增加的量的抗原递呈树突细胞(cd103

cd11c

)(图10c)。综合而言，这些资料指示抗pd-l1-ir700 pit活化活体内肿瘤内先天性免疫反应。
[0481]
实施例12：抗pd-l1-ir700 pit增加活体内未耗竭的肿瘤内效应cd8

t淋巴细胞
[0482]
本实施例描述抗pd-l1-ir700 pit对活体内效应cd8 t淋巴细胞扩增的刺激作用。
[0483]
对balb/c小鼠接种ct26肿瘤细胞。一旦肿瘤达到150mm3的近似平均体积，即用生理盐水、单独抗pd-l1-ir700偶联物或抗pd-l1-ir700偶联物加照射(抗pd-l1-ir700 pit)治疗小鼠。在给予该偶联物之后二十四小时，使照射(pit)组的小鼠的肿瘤暴露于100j/cm2的690nm光。照射后八天，切除所有组中的肿瘤且加工成单细胞悬浮液。接着，针对包括cd3、cd45、cd8a及pd1在内的细胞标记物对悬浮细胞染色。亦使用同种型对照进行染色。使用流式细胞计数分析染色的细胞。
[0484]
如图11a中所示，相较于仅给予生理盐水的小鼠的肿瘤，用抗pd-l1偶联物或抗pd-l1-ir700 pit治疗的小鼠的肿瘤中总cd8 t细胞的比例增加(p《0.05)。抗pd-l1-ir700 pit治疗的肿瘤中表达pd1(一种耗竭标记物)的cd8 t细胞的比例要低于来自仅给予生理盐水或抗pd-l1偶联物(无照射)的小鼠的肿瘤中的比例(图11b)。相比之下，相较于来自仅给予生理盐水或抗pd-l1偶联物(无照射)的小鼠的肿瘤，抗pd-l1-ir700 pit治疗的肿瘤中对应于由周边免疫活化得到的新活化的cd8 t细胞的pd1-cd8 t细胞增加(图11c)。这些数据表明抗pd-l1 pit的局部治疗可活化全身后天性免疫反应。
[0485]
实施例13：抗pd-l1 pit诱导远端肿瘤的抗癌反应
[0486]
本实施例描述抗pd-l1 pit对未直接照射的远端肿瘤的生长的抑制作用。
[0487]
在balb/c小鼠的右及左后侧腹上皮下接种1
×
106个ct26鼠类结肠癌细胞/小鼠。当两侧上的同种异体移植肿瘤生长至约150mm3体积时，对小鼠给予生理盐水(100μl)或抗pd-l1-ir700偶联物(100μg)。给予该偶联物之后二十四小时，在690nm下，以100j/cm2的剂量照射抗pd-l1 pit组中右侧腹中的肿瘤，而左侧腹中的肿瘤经遮蔽以防照射。观察未照射肿瘤(远端肿瘤)的生长18天，且使用下式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝(宽度
×
宽度)
×
高度/2。
[0488]
如图12中所示，相较于生理盐水治疗或抗pd-l1-ir700偶联物治疗(无照射)的肿
瘤，在对侧上用抗pd-l1 pit治疗的小鼠的未照射的远端肿瘤展现肿瘤生长抑制。相较于生理盐水对照，给予单独抗pd-l1-ir700偶联物(不照射)的小鼠亦展现远端肿瘤生长，但单独该偶联物在抑制远端肿瘤生长方面不如抗pd-l1-pit有效。这些数据支持以下发现：相较于用单独抗pd-l1-ir700偶联物治疗，抗pd-l1 pit能够诱导全身免疫反应并展现远端效应，例如对远端(未照射)肿瘤生长的抑制作用。
[0489]
实施例14：抗pd-l1 pit使得肿瘤负荷降低相较于多次给予裸抗pd-l1抗体改善
[0490]
大体上如实施例1中所描述，将抗pd-l1抗体阿维鲁单抗(bavencio)与ir700染料结合，该抗体是与小鼠pd-l1交叉反应的人类抗pd-l1抗体。
[0491]
在balb/c小鼠(6-8周龄)的右后侧腹中皮下接种1
×
106个ct26鼠类结肠癌细胞。当同种异体移植肿瘤生长至约250mm3大小时(肿瘤植入之后约第6天)，经眼眶后对小鼠给予生理盐水(100μl；对照)或抗pd-l1-ir700偶联物(抗pd-l1-ir700；100μg)。给予该偶联物之后二十四小时，在690nm下以75j/cm2照射光免疫疗法(pit)组中的肿瘤。出于比较，自植入之后第6天开始，每周两次通过腹膜内注射向另一组小鼠给予10mg/kg裸(未结合)抗pd-l1抗体，总计12剂。随时间监测所有组的肿瘤生长及存活情况。使用下式计算肿瘤体积：肿瘤体积＝(宽度
×
宽度)
×
长度/2。
[0492]
所有组小鼠的平均肿瘤生长随时间的变化标绘于图13a中，且个别小鼠的肿瘤生长情况标绘于图13b中。如图13a及13b中所示，相较于接受生理盐水、单独抗pd-l1-ir700偶联物(无照射)或多次剂量的裸抗pd-l1抗体的对照小鼠的肿瘤生长抑制情况，在接受抗pd-l1-ir700加照射(α-pd-l1 pit)的小鼠中，肿瘤生长实质上受到抑制。接受多次剂量的裸抗pd-l1抗体的小鼠的肿瘤展现与接受单次剂量抗pd-l1-ir700偶联物的小鼠的肿瘤类似的肿瘤生长速率，且其肿瘤生长速率低于生理盐水对照小鼠。
[0493]
除检查肿瘤生长之外，亦比较治疗组间的完全反应(cr)率。在本实施例中，cr定义为体积小于100mm3的肿瘤保持至少2周。到研究结束时，10只用抗pd-l1-ir700 pit治疗的小鼠中的7只、10只用单独抗pd-l1-ir700(无照射)治疗的小鼠中的2只及10只用多次剂量的裸抗pd-l1抗体治疗的小鼠中的1只实现cr，且10只仅用生理盐水治疗的小鼠均未实现cr(图13a)。
[0494]
接受抗pd-l1-ir700 pit的荷瘤小鼠的存活率实现任何治疗组中最高的存活率(70％存活率；图13c)。接受单次剂量的抗pd-l1偶联物(无照射)的荷瘤小鼠的存活率与给予多次剂量的裸抗pd-l1抗体的小鼠的存活率类似(20％相对于30％；图13c)。生理盐水组中没有动物存活超过24天(图13c)。
[0495]
这些结果指示，抗pd-l1-ir700 pit治疗一次在降低肿瘤负荷及促进存活率方面要比给予多个周期的裸抗pd-l1抗体有效。
[0496]
实施例15：抗pd-l1 pit降低免疫抑制性鼠类肿瘤模型中的肿瘤负荷
[0497]
阿维鲁单抗(bavencio)是一种用于治疗人类癌症的抗pd-l1抗体。阿维鲁单抗亦与小鼠pd-l1分子交叉反应及结合。比较抗pd-l1-ir700pit(用阿维鲁单抗-ir700)与单独抗pd-l1-ir700偶联物(无照射)及裸抗pd-l1(阿维鲁单抗)治疗对抗pd-l1治疗具有抗性的肿瘤的作用。
[0498]
在c57bl/6小鼠(6-8周龄)的右后侧腹中皮下接种5
×
105个ll/2鼠类肺癌细胞。当同种异体移植肿瘤生长至约150mm3大小时(植入之后约第8天)，经眼眶后对小鼠给予生理
盐水(100μl；对照)或抗pd-l1-ir700偶联物(抗pd-l1-ir700；100μg)。给予该偶联物之后二十四小时，在690nm下以150j/cm2照射光免疫疗法(pit)组中的肿瘤。出于比较，自植入之后第8天开始，每周两次通过腹膜内注射向另一组小鼠给予10mg/kg裸抗pd-l1抗体，总计6剂。如上文所描述，随时间监测所有组的肿瘤生长情况。
[0499]
在另一实验中，向如上文所描述产生的带有ll/2肿瘤的小鼠(6-8周龄)在第6天、第10天及第14天给予100μg裸抗pd-1抗体；在第6天、第9天、第12天及第15天给予裸抗ctla-4抗体；或给予生理盐水(100μl；对照)。如先前所描述，随时间监测所有组的肿瘤生长情况。
[0500]
如图14a及14b中所示，用裸抗pd-1(图14a；空心正方形)、裸抗ctla-4(图14a；空心三角形)或裸抗pd-l1(图14b；空心菱形)治疗的小鼠的ll/2肿瘤生长与给予生理盐水的小鼠的肿瘤(图14a及14b；空心圆)没有区别，指示这些肿瘤对这些检查点抑制剂疗法具有抗性且具有免疫抑制性。相比之下，如图14b中所示，相较于在接受生理盐水、单独抗pd-l1-ir700偶联物(无照射)或多次剂量的裸抗pd-l1抗体的对照小鼠中所观察到的肿瘤生长情况，对于接受抗pd-l1-ir700加照射(抗pd-l1 pit)的小鼠的肿瘤，免疫抑制性肿瘤的生长实质上受到抑制(实心菱形加虚线分别相对于空心圆、实心菱形及空心菱形加实线)。此外，接受多次剂量的裸抗pd-l1抗体或单次剂量的抗pd-l1-ir700偶联物(无照射)的小鼠的肿瘤与生理盐水治疗的对照小鼠的肿瘤没有区别。
[0501]
综合而言，这些结果指示，抗pd-l1 pit有效治疗对抗pd-l1、抗pd-1及抗ctla-4治疗具有抗性的肿瘤。
[0502]
本发明并不将范围局限于具体公开的实施方式，提供该实施方式是例如用于说明本发明的各种方面。对所述组合物及方法的各种修改将自本文中的描述及教示而变得显而易见。此类变化形式可在不背离本发明的真正范围及精神的情况下实践且将在本发明的范围内。