BMP9在制备MAFLD、NASH、NASH相关肝纤维化/肝硬化的药物中的用途

bmp9在制备mafld、nash、nash相关肝纤维化/肝硬化的药物中的用途
技术领域
1.本发明属于药物领域，尤其涉及bmp9在制备mafld、nash、nash相关肝纤维化/肝硬化的药物中的用途。


背景技术：

2.非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，nash)是非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，nafld)的关键进程，早期无明显症状和生物学指标异常，可隐匿性进展为肝纤维化、肝硬化、肝癌等终末期肝病，然而其发病机制仍十分模糊，临床上缺乏早期无创诊断指标和治疗药物。
3.骨形态发生蛋白-9(bone morphogenetic protein 9，bmp9)主要由肝星状细胞(hepatic stellate cells，hscs)分泌，能调节糖、脂代谢，肝巨噬细胞有其高亲和力受体。但迄今为止，关于bmp9如何调控nash的进程尚未阐述清楚，因此限制了相关药物的发明。
4.关于bmp9与nash关系，有人采用蛋氨酸胆碱缺乏(methionine choline deficiency，mcd)诱导的模型小鼠做过初步的探索，提示两者的相关性，然而mcd小鼠模型，缺乏代谢紊乱特征且体质量随试验延长明显降低，与人类常见的肥胖所致nash代谢过程明显不同，因此迄今为止，bmp9对肥胖相关nash的影响尚未见报道。
5.公开号为cn113198002a的中国专利申请公开了一种肝细胞因子bmp9在制备延缓和/或治疗非酒精性脂肪肝药物的应用。该发明采用肝脏高亲和性的载体aav8作为药物载体，通过基因治疗，可实现bmp9在肝脏组织的特异性的高效过表达，可减缓脂肪肝的相关症状，以可对脂肪肝进行有效治疗，其为非酒精性脂肪肝的治疗提供了新的治疗思路；且通过研究还发现bmp9在肝脏组织的特异性的高效过表达，还可对bmp9细胞因子低表达或缺失导致的肥胖症状进行有效的缓解。但是该发明针对的是非酒精性脂肪肝，非酒精性脂肪肝也称单纯性脂肪肝，仅见肝细胞脂肪变性，通常来说可以通过饮食结构调整、有氧运动减肥、纠正不良生活习惯等方式改善，一般无需用药，该发明使用的aav8-bmp9仅以一种pparα介导的肝脏脂代谢调控的方式，起到了减轻脂肪肝的效果，而无法实际阐明并应用于脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化等疾病。


技术实现要素：

6.针对现有技术的不足，本发明提供了bmp9在制备mafld、nash、nash相关肝纤维化/肝硬化的药物中的用途。
7.本发明提出如下技术方案：
8.bmp9在制备mafld(代谢相关脂肪性肝病)的药物中的用途。
9.bmp9在制备nash(非酒精性脂肪性肝炎)的药物、nash相关肝纤维化的药物、nash相关肝硬化的药物中的用途。
10.作为一种优选，所述药物通过抑制肝脏中tnf信号通路并下调肝脏中traf3表达缓
解和/或治疗nash、nash相关的肝纤维化、nash相关的肝硬化。
11.作为一种优选，所述bmp9为rhbmp9(重组人骨形态发生蛋白9)。
12.作为一种优选，所述药物为注射剂。
13.有益效果：
14.本发明的代谢相关脂肪性肝病中的非酒精性脂肪肝性肝炎(nash)及其相关肝纤维化、肝硬化，是指大量脂肪沉积导致的肝细胞坏死、炎症细胞浸润、转氨酶升高、中央静脉周围和肝细胞周围纤维化、假小叶及再生结节形成等情况，与现有技术公开的单纯性脂肪肝的发病机制不同。
15.本发明使用的rhbmp9通过抑制肝脏中tnf信号通路并下调肝脏中traf3表达，达到了缓解和/或治疗非酒精性脂肪肝性肝炎(nash)及其相关肝纤维化、肝硬化的效果，进而应用在相关疾病的药物上。
16.应当理解，前述构思以及在下面更加详细地描述的额外构思的所有组合只要在这样的构思不相互矛盾的情况下都可以被视为本发明主题的一部分。
附图说明
17.附图不意在按比例绘制，除非特别说明。在附图中，在各个图中示出的每个相同或近似相同的组成部分可以用相同的标号表示。为了清晰起见，在每个图中，并非每个组成部分均被标记。
18.图1所示为nash小鼠及nash患者体内bmp9水平对比图。
19.图2所示为外源性补充rhbmp9影响hfd小鼠肝脏脂肪变性及nash进展对比图。
20.图3所示为rhbmp9对油酸(oa)诱导的肝细胞脂肪变性的影响对比图。
21.图4所示为rhbmp9影响肝脏tnf信号通路并影响肝脏中traf3表达对比图。
22.图5所示为rhbmp9影响hfd模型组小鼠肝脏巨噬细胞浸润对比图。
23.图6所示为rhbmp9调控小鼠肝脏巨噬细胞m1、m2的极化及体外巨噬细胞系细胞因子分泌对比图。
24.图7所示为实时荧光定量pcr中所述的引物。
具体实施方式
25.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。显然,所描述的实施例是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。基于所描述的本发明的实施例,本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。除非另作定义,此处使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。
26.本发明说明书以及权利要求书中使用的“第一”、“第二”以及类似的词语并不表示任何顺序、数量或者重要性,而只是用来区分不同的组成部分。同样,除非上下文清楚地指明其它情况，否则单数形式的“一个”“一”或者“该”等类似词语也不表示数量限制,而是表示存在至少一个。“包括”或者“包含”等类似的词语意指出现在“包括”或者“包含”前面的元件或者物件涵盖出现在“包括”或者“包含”后面列举的特征、整体、步骤、操作、元素和/或组件,并不排除一个或多个其它特征、整体、步骤、操作、元素、组件和/或其集合的存在或添
加。“上”“下”“左”“右”等仅用于表示相对位置关系，当被描述对象的绝对位置改变后,则该相对位置关系也可能相应地改变。
27.虽然现有技术公开了bmp9在制备延缓或/和治疗非酒精性脂肪肝药物的应用，但是该现有技术和本发明的作用位点、药理作用、改善症状等治疗机理不同，这种机理的不同使得非酒精性脂肪肝药物和代谢相关脂肪性肝病之间有了实质性的差异。具体体现在：
28.既往发明针对的是非酒精性脂肪肝，非酒精性脂肪肝也称单纯性脂肪肝，仅见肝细胞脂肪变性，通常来说可以通过饮食结构调整、有氧运动减肥、纠正不良生活习惯等方式改善，一般无需用药，该发明使用的aav8-bmp9仅以一种pparα介导的肝脏脂代谢调控的方式，起到了减轻脂肪肝的效果，而无法实际阐明并应用于脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化等疾病。而本发明的重点在于代谢相关脂肪性肝病中的非酒精性脂肪肝性肝炎(nash)及其相关肝纤维化、肝硬化，是指大量脂肪沉积导致的肝细胞坏死、炎症细胞浸润、转氨酶升高、中央静脉周围和肝细胞周围纤维化、假小叶及再生结节形成等情况。与单纯性脂肪肝的发病机制不同。本发明使用的rhbmp9通过抑制肝脏中tnf信号通路并下调肝脏中traf3表达，达到了缓解和/或治疗非酒精性脂肪肝性肝炎(nash)及其相关肝纤维化、肝硬化的效果。
29.虽然非酒精性脂肪肝和代谢相关脂肪性肝病字面差别不大，但是这是两种不同机理诱发的，可表现出区分的症状。非酒精性脂肪肝仅是代谢相关脂肪性肝病中症状最轻的一环，仅见肝细胞脂肪变性。而代谢相关脂肪性肝病中的脂肪性肝炎，是在脂肪变性的基础上伴有肝细胞变性坏死和炎症细胞浸润，可伴有mallory小体和纤维化。随后继发的肝纤维化，在脂肪性肝炎的基础上出现中央静脉周围和肝细胞周围纤维化，甚至汇管区纤维化和中央汇管区纤维分隔连接。最终形成的肝硬化为继发于脂肪肝的肝小叶结构改建，假小叶及再生结节形成。由于非酒精性脂肪肝和代谢相关脂肪性肝病的发病机制不同，因此可以分别通过给予不同的药物来治疗。
30.下面通过具体的实验方法及结果来进一步详细介绍本发明的作用机理以及治疗效果。
31.本实施例的实验方法及分析如下：
32.实验患者分组：
33.健康对照组者(n＝67)、nafl(n＝75)及nash(n＝26)，收集患者的血清检测bmp9浓度。患者均来自上海市东方医院，经上海市东方医院伦理委员会审批。n表示样本数。
34.实验动物分组：
35.6周龄雄性c57bl/6小鼠(16～18g)购自上海吉汇实验动物有限公司(上海)。动物饲养在第二军医大学实验动物中心。所有动物实验均经第二军医大学科学调查委员会批准。
36.随机分为三组：high-fat diet(hfd)组(n＝8)、hfd bmp9组(n＝8)和对照组(n＝6)。
37.hfd组：饲喂高脂饲料hfd(蛋白质14.1％；脂肪60％；碳水化合物25.9％)，腹腔注射聚丁二酸丁二醇酯(pbs)每日1次，连续4周。
38.hfd bmp9组：饲喂hfd，腹腔注射重组骨形态发生蛋白9(rhbmp9，peprotect，批号：553204)，剂量为200ng/只，每日1次，连续4周。
39.对照组：饲喂普通饲料，腹腔注射pbs每日1次，连续4周。
40.12周后，处死所有小鼠，并收集肝脏、血清和内脏脂肪组织(vat)。本实施例的bmp9为rhbmp9。
41.组织学分析：
42.将肝脏和vat固定在10％福尔马林和4％多聚甲醛中，然后按照标准程序包埋在石蜡中或冷冻。肝脏切片用苏木精和h&e，天狼星红和油红o染色。nafld的程度是通过nafld活动评分(nas)估计的。使用图像分析软件(image-pro plus 6.0；media cybernetics,rockville,md,united states)计算脂肪变性的强度，即油红o染色在肝组织相应区域的阳性面积的百分比。
43.免疫组化染色：
44.在固定在缓冲福尔马林中的组织的4μm厚石蜡切片上进行免疫组织化学染色。切片在二甲苯中脱蜡，并在分级酒精中复水化。用3％的h2o2阻断内源性过氧化物酶，然后进行抗原检索。将切片与一抗在4℃下孵育过夜，并与二抗在室温下孵育60分钟。使用了以下一级抗体。bmp9(sc514211,santa cruz)和f4/80(70,076,cell signaling technologies)。使用envision detection rabbit/mouse kit(gk500710，genetech，上海，中国)进行染色。
45.甘油三酯(tg)和胆固醇(chol)的测定：
46.使用商业试剂盒测量小鼠肝脏中tg和chol的含量(tg：a0-10017；chol：a111-2-1，建城公司，南京，中国)。
47.实时荧光定量pcr：
48.用trizol(invitrogen,carlsbad,ca,united states)提取肝组织的总rna。用sybr green pcr试剂盒(takara,tokyo,japan)通过实时逆转录聚合酶链反应(rt-pcr)检测转录水平。
49.附图7所示为qrt-pcr的引物序列。
50.蛋白质印迹分析：
51.组织和细胞在裂解缓冲液(125mm tris-hcl ph 6.8，25％甘油，5％sds)中裂解，辅以蛋白酶抑制剂(roche，瑞士)。裂解物在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶上分离，并转移到甲醇激活的硝酸纤维素膜(hahy00010；millipore,merck kgaa,darmstadt,germany)。膜在含有1％tween-20和5％牛奶的pbs中阻断1小时，并在4℃下与第一抗体孵育过夜。用驴抗小鼠或驴抗兔二抗(irdye 800；li-cor biosciences,lincoln,ne,united states)孵育1小时后，用odyssey红外成像系统(li-cor biosciences)在700/800nm波长下对信号进行成像。使用的主要抗体是。srebp1(ab96777，abcam；sc-557036，santacruz)、磷酸化akt(4060，cell signaling technologies)、akt(40d4，cell signaling technologies)和gapdh(ym3029，immunoway)。
52.生物化学分析:
53.血清生化指标是在东方肝胆外科研究所的临床免疫科用自动分析仪测量的。
54.rna测序(rna-seq):
55.使用rneasy mini试剂盒(qiagen，德国)从肝脏样本中分离出总rna。使用rna样品制备试剂盒(illumina，美国)按照rna样品制备指南合成配对端文库。文库构建和测序工作在上海生物技术公司进行。根据每个样品中的fpkm来估计倍数变化。显
著差异表达的基因采用以下筛选标准：p值≤0.05，∣log2fc∣》1。这些数据可以在ncbi-bio项目中获得，登录号为prjna644055。
56.atac-seq：
57.atac-seq是按照以前描述的新鲜肝脏组织进行的(buenrostro等人，2015)。macs2(2.1.1)被用来调用峰值，初始阈值被定义为p《1*10-5
。任何一对atac-seq样本之间的成对spearman相关性是根据所有样本合并的atac-seq峰上的读数/信号计算的。atac-seq峰使用homer的annotate peaks.pl进行注释。使用homer软件(http://homer.ucsd.edu/homer/)鉴定蛋白质结合图案。使用了三个生物重复。这些数据可以在ncbi-bio项目中获得，登录号为prjna644146。
58.统计分析:
59.使用graphpad prism 7.0软件(graphpad软件，la jolla,ca)进行数据分析以评估差异的统计学意义。进行非配对的学生t检验来比较组间差异。所有数据均以平均值和/或sem表示。统计学意义设定为*p≤0.05，**p≤0.01，和***p≤0.001。p值《0.05的差异被认为具有统计学意义。
60.结果如下：
61.实施例1
62.nash小鼠以及nash患者体内bmp9水平变化。
63.hfd诱导的小鼠nafld模型已经初步出现nash的早期病变特征(肝细胞呈气球样变及炎症细胞浸润)，分析小鼠肝脏中bmp9在mrna和蛋白水平表达情况。
64.建立高脂饮食(hfd)诱导的小鼠nafld模型(具有nash早期病理改变)，采集对照及治疗组小鼠肝脏样品，并进行bmp9的表达分析；建立健康对照者、nafl及nash患者研究队列，elisa检测血清bmp9浓度。
65.rt-pcr显示hfd小鼠bmp9 mrna表达较对照组显著下调(图1a)。
66.western blot及免疫组化显示hfd小鼠脂肪肝中bmp9蛋白水平亦显著减少(图1b-e)。
67.此外，免疫组化染色进一步显示hfd小鼠肝脏非实质细胞中的bmp9染色较对照组更浅(图1d-e)。
68.进一步检测了nafld患者及对照人群血清bmp9的浓度，发现了nafl及nash患者血清bmp9水平显著低于对照组，而且nash组和nafl组相比血清bmp9水平也显著下降(图1f)。
69.图1所示为nash小鼠及nash患者体内bmp9水平图，图中，(a)qpcr检测mrna转录水平；(b-c)western blot检测蛋白翻译水平；(d-e)肝脏免疫组化分析bmp9在蛋白翻译水平情况及定位。(f)健康control者、nafl及nash三组血清bmp9浓度。数据表示为mean
±
sem(其中小鼠每组n＝6；健康control者n＝67；nafl者n＝75；nash者n＝26)，对比control组，*p《0.05，***p《0.001；对比nafl组，##p《0.01。所有这些数据都证实nash小鼠以及nash患者体内bmp9水平显著降低，即bmp9在nash中表达降低。
70.实施例2
71.外源性补充rhbmp9对hfd小鼠肝脏脂肪变性及nash进展的影响。
72.图2所示为外源性补充rhbmp9显著改善hfd小鼠肝脏脂肪变性及nash进展。图中，(a-b)肝脏外观及肝湿重；(c-i)油红o染色(c-d)、he染色(e)分析小叶内炎症(f)、脂肪变
(g)、肝细胞气球样变(h)及肝脏nafld活动度评分(i)，标尺100μm；(j)肝内甘油三酯(tg)含量。数据表示为mean
±
sem(n＝8)，对比未建模control组，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001；对比hfd组，
#
p《0.05，
##
p《0.01。
73.结果表明：肉眼可见hfd小鼠肝脏颜色明显比对照组苍白，肝湿重明显大于对照组，而rhbmp9治疗后的hfd小鼠肝脏颜色接近对照组，肝湿重也显著减轻(图2a-b)；组织学上，rhbmp9治疗能显著减轻hfd小鼠肝脂肪变性(图2c，d，g)、肝细胞气球样变(图2e，f，h)和非酒精性脂肪性肝病活动度评分(nas)(图2i)；此外，rhbmp9还显著降低hfd小鼠肝内甘油三酯(tg)水平(图2j)。
74.进一步地，通过肝细胞株验证rhbmp9是否抑制肝细胞脂肪变性，利用油酸(oa)诱导hepg2细胞脂肪变模型，观察rhbmp9对其脂肪变的影响。
75.图3为rhbmp9处理显著抑制油酸(oa)诱导的肝细胞脂肪变性。hepg2细胞经oa(0.5mm)诱导产生脂肪变，治疗组同时加入rhbmp9(10ng/ml)处理，48小时后经油红o染色后拍照并统计脂肪变性情况和细胞内甘油三酯(tg)情况。(a-b)各处理组细胞油红o染色阳性区域统计(a)以及代表性图(b)，标尺100μm；(c)各组细胞内甘油三酯(tg)含量测定。数据表示为mean
±
sem(n＝8)，对比control组，**p《0.01，***p《0.001；对比oa组，
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p《0.05，
##
p《0.01。
76.结果表明：油酸可以显著诱导hepg2细胞脂肪变性，加入rhbmp9处理后细胞脂肪变被显著抑制(图3a，b)；同时细胞内甘油三酯水平也显著降低(图3c)。这进一步说明rhbmp9可以抑制肝脏脂肪变。
77.实施例3
78.rhbmp9对肝脏中tnf信号通路的影响。
79.实验：为明确rhbmp9治疗改善hfd小鼠脂肪肝/nash的机制，本发明利用rna-seq检测rhbmp9治疗后hfd小鼠肝脏转录谱改变。
80.图4为rhbmp9显著抑制肝脏tnf信号通路并下调肝脏中traf3表达。取正常control组、hfd模型组、以及bmp9 hfd组小鼠肝脏进行rna-seq分析转录谱，数据分析应用edger进行样本间差异基因分析，得出p-value后进行多重假设检验校正，通过控制fdr(false discovery rate)来决定p-value的阈值，校正后的p-value即q-value。同时，我们根据fpkm值计算差异表达倍数，即fold-change。差异基因筛选条件为q《0.05并且同时fold-change》2。(a)kegg进行信号通路富集分析；(b)rhbmp9治疗组与hfd组差异基因分析；(c)a中筛选出来的tnf及toll信号通路与traf3间的紧密联系。
81.结果表明：和hfd小鼠相比，rhbmp9治疗小鼠肝脏出现189个基因表达下调，130个基因表达上调，进一步分析显示bmp9逆转了118个基因的表达，包括与糖、脂代谢有关的基因以及炎症、免疫反应基因。
82.kegg信号通路富集分析发现，与正常control组相比，tnf及toll信号通路在hfd模型组小鼠中显著上调，该两条通路在经过rhbmp9治疗的小鼠中显著下调(图4a)，提示相关通路参与了rhbmp9治疗作用的可能机制。
83.经分析，traf3是所有下调基因中降低倍数最高的(图4b)，这是由于traf3正好介导了tnf及toll信号通路，因此，rhbmp9极有可能是通过影响traf3及相关信号通路实现其治疗hfd诱导的脂肪肝及早期nash(图4c)。
84.实施例4
85.bmp9调控nash小鼠肝脏巨噬细胞m1/m2的极化及相关炎症因子表达。
86.实验：对肝脏巨噬细胞标记f4/80进行免疫组化(图5a-b)及qpcr分析(图5c)。
87.图5为rhbmp9治疗可减轻hfd模型组小鼠肝脏巨噬细胞浸润。(a-b)各组f4/80免疫组化染色。(c)各组小鼠肝脏中f4/80在mrna水平表达情况。数据表示为mean
±
sem，对比control组，*p《0.05；对比hfd组，
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p《0.05，
###
p《0.001。
88.结果表明：相较于正常对照小鼠，hfd组小鼠肝脏巨噬细胞浸润显著增加，而rhbmp9治疗后巨噬细胞浸润现象被明显抑制。
89.为进一步分析肝脏巨噬细胞m1、m2极化情况，本发明用rt-pcr分析小鼠肝脏m1、m2极化标记基因的转录水平。
90.图6为rhbmp9调控小鼠肝脏巨噬细胞m1、m2的极化及体外巨噬细胞系细胞因子分泌。(a-d)各组小鼠肝脏中m1型巨噬细胞极化基因tnf-α(a)、il-6(b)及m2型巨噬细胞极化基因il-4(c)、arg1(d)的mrna转录水平；(e-f)体外培养的raw 264.7巨噬细胞株在不同处理条件下，上清液中细胞因子tnf-α(e)及il-6(f)浓度。数据表示为mean
±
sem，对比未建模或者溶剂control组，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001；对比hfd或者lps组，
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p《0.05，
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p《0.01，
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p《0.001。
91.结果表明：hfd模型组小鼠中m1型巨噬细胞相关极化基因tnf-α(图6a)、il-6(图6b)mrna表达较正常组显著增高，rhbmp9治疗后则基本回复正常水平(图6a，b)；而m2型巨噬细胞相关基因il-4及arg1的mrna在hfd模型组表达显著降低，用rhbmp9治疗后则能逆转上述变化(图6c，d)。
92.为了研究rhbmp9治疗对m1/m2的极化平衡的影响，本发明进一步采用raw 264.7巨噬细胞株进行研究。
93.结果表明：lps可以显著促进m1巨噬细胞的标志性细胞因子tnf-α、il-6的分泌，呈现典型的m1巨噬细胞特征，rhbmp9处理后可以显著抑制这两个细胞因子的分泌量(图6e，f)。这些初步结果提示nash过程中m1巨噬细胞极化加强，分泌的tnf-α、il-6与活性氧协同促进hscs的活化，从而加剧nash，而rhbmp9干预则通过“bmp9—巨噬细胞极化—肝星状细胞激活分化—bmp9分泌”环路调控并重新恢复内源性bmp9的产生，重建体内的免疫平衡，缓解nash及肝纤维化发生。
94.本发明通过在hfd肥胖小鼠脂肪肝及早期nash模型中，用外源性补充bmp9改善nash，而且能减少肝巨噬细胞浸润；另外，补充bmp9可显著下调小鼠肝脏traf3的表达；而bmp9能够抑制m1极化。因此，外源性补充rhbmp9很有可能具有防治nash及纤维化的作用，且其作用部分是通过调控肝脏巨噬细胞表型和活化，影响巨噬细胞/hscs互作，从而下调traf3，影响hscs增殖、活化和凋亡等实现的。
95.在hfd小鼠脂肪肝模型中，外源性补充rhbmp9不仅能减肥，改善糖、脂代谢，减轻肝细胞脂肪变性，减少巨噬细胞在肝脏浸润，体外细胞培养亦表明rhbmp9可减轻油酸诱导的肝细胞脂肪变，调控油酸诱导的巨噬细胞表型改变，从而引起分泌的tnf-α和tgf-β下降，故外源性补充rhbmp9可能具有防治nash及纤维化的作用。
96.进一步的研究表明，traf3可以介导tnf及toll信号通路，rna-seq实验结果显示，rhbmp9治疗的早期nash模型小鼠肝脏中，显著抑制肝脏中tnf信号通路并下调了肝脏中
traf3表达，说明rhbmp9极有可能通过调控肝脏巨噬细胞表型和活化，影响巨噬细胞/hscs互作，从而下调traf3，影响traf3及其相关信号通路，并影响hscs增殖、活化和凋亡等实现其治疗早期nash及nash相关的肝纤维化、肝硬化。
97.因此，bmp9可能通过作用于巨噬细胞上的特有的受体，抑制m1型巨噬细胞炎症因子tnf-α的分泌，而traf3介导了bmp9的功能，进而阻止hscs的激活和分化，并最终缓解nash，这为制备用于缓解和/或治疗肝炎/肝纤维化/肝硬化药物中提供了新的思路。
98.虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明。本发明所属技术领域中具有通常知识者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作各种的更动与润饰。因此，本发明的保护范围当视权利要求书所界定者为准。