担载乳铁蛋白的生理用品的制作方法

of endometrial microbiota by 16s ribosomal rna gene sequencing among infertile patients:a single-center pilot study.


技术实现要素：

12.发明所要解决的课题
13.本发明以提供月经中的阴道内菌群紊乱的改善方法作为目的。
14.用于解决课题的手段
15.本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现，通过在月经中向阴道内直接施与乳铁蛋白，可以预防、或改善阴道内菌群的恶化，从而完成了本发明。即，本发明通过使用担载乳铁蛋白、或包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物的生理用品，使作为铁结合性蛋白质的乳铁蛋白阻碍在月经时产生的需铁菌的增殖，从而防止月经期间中的阴道内菌群的紊乱，进行阴道内菌群的改善。
16.根据本发明，提供以下方案。
17.[1]一种生理用品，其担载有乳铁蛋白、或包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物。
[0018]
[2]根据上述[1]所述的生理用品，生理用品为卫生棉条或卫生巾。
[0019]
[3]根据上述[1]或[2]所述的生理用品，组合物为粉末剂、油性液剂、或油性半固体剂的形态。
[0020]
[4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的生理用品，其特征在于，组合物中的乳铁蛋白的量为组合物的重量的0.1～99.9重量％。
[0021]
[5]根据上述[1]～[4]中任一项所述的生理用品，其特征在于，组合物中的乳铁蛋白的量为组合物的重量的1～99重量％。
[0022]
[6]根据上述[1]～[5]中任一项所述的生理用品，其特征在于，组合物中的乳铁蛋白的量为组合物的重量的10～90重量％。
[0023]
[7]根据上述[1]～[6]中任一项所述的生理用品，其特征在于，被担载于生理用品的乳铁蛋白的量为5～1,000mg/个。
[0024]
[8]根据上述[1]～[7]中任一项所述的生理用品，其特征在于，被担载于生理用品的乳铁蛋白的量为10～500mg/个。
[0025]
[9]根据上述[1]～[8]中任一项所述的生理用品，其特征在于，被担载于生理用品的乳铁蛋白的量为20～200mg/个。
[0026]
[10]一种套装，其包含生理用品、以及乳铁蛋白、或包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物。
[0027]
[11]根据上述[10]所述的套装，生理用品为卫生棉条或卫生巾。
[0028]
[12]一种月经中的阴道内菌群紊乱的改善方法，其使用上述[1]～[9]中任一项所述的生理用品。
[0029]
发明的效果
[0030]
通过本发明的生理用品，可以使月经中的阴道内菌群紊乱迅速地正常化。
附图说明
[0031]
图1为显示通过将乳铁蛋白、或包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物在生理用品的
成形阶段内包于吸收体部分的薄层间从而制备本发明的生理用品的方案的图。
[0032]
图2为显示通过将乳铁蛋白、或包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物在生理用品的成形阶段内包于吸收体部分的薄层间从而制备本发明的生理用品的方案的图。
[0033]
图3为显示通过使包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物滴加或喷雾到已成形的生理用品的吸收体部分使其含浸从而制备本发明的生理用品的方案的图。
[0034]
图4为显示通过使包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物滴加或喷雾到已成形的生理用品的吸收体部分使其含浸从而制备本发明的生理用品的方案的图。
[0035]
图5为显示通过使包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物在生理用品即将使用前含浸于吸收体从而制备本发明的生理用品的方案的图。
[0036]
图6为显示通过使包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物在生理用品即将使用前含浸于吸收体从而制备本发明的生理用品的方案的图。
[0037]
图7为显示通过将包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物在生理用品即将使用前涂布于吸收体从而制备本发明的生理用品的方案的图。
[0038]
图8为显示通过将包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物在生理用品即将使用前涂布于吸收体从而制备本发明的生理用品的方案的图。
[0039]
图9为显示通过将包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物在即将使用前注入到作为生理用品的插入辅助工具的填充器和吸收体的空隙从而制备本发明的生理用品的方案的图。
具体实施方式
[0040]
作为在本发明中使用的乳铁蛋白，只要发挥阴道内菌群的改善作用，就可以使用任何乳铁蛋白。乳铁蛋白是分子量为8万左右的高分子，具有与2个3价铁离子形成螯合物的性质，在本发明中使用的“乳铁蛋白”中，包含从无铁离子型到完全被铁离子饱和型的全部。此外在本发明中，无论来源，可以使用所有乳铁蛋白，可以使用例如从人、牛等哺乳动物的乳汁等提取的来源于生物体的乳铁蛋白和通过基因工程制作的基因重组乳铁蛋白或其盐。从市售的牛乳精制的乳铁蛋白能够从森永乳业(日本)、
タチュラ
(澳大利亚)、
タツア
(新西兰)等供应者获得。从牛乳的乳铁蛋白的精制方法例如在美国专利第9115211号(公布2015.8.25)中公开了详细内容，但基本上，可以通过使脱脂乳或乳清所包含的乳铁蛋白吸附脱附于阳离子交换树脂后，经过脱盐、冷冻干燥或喷雾干燥等步骤来容易地精制。
[0041]
在本发明中，乳铁蛋白可以仅使用1种，或也可以组合使用2种以上。
[0042]
在本发明的生理用品中，担载有乳铁蛋白、或包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物。在任何情况下，每1个生理用品的乳铁蛋白的含量都可以为月经中的阴道内菌群紊乱迅速地被正常化的范围的任意的量，但可以优选为5～1,000mg/个，更优选为10～500mg/个，特别优选为20～200mg/个。
[0043]
本发明的被担载于生理用品的组合物中的乳铁蛋白混配量，可以在月经中的阴道内菌群紊乱迅速地被正常化的范围任意选择，可以优选为组合物的重量的0.1～99.9重量％，更优选为组合物的重量的1～99重量％，特别优选为组合物的重量的10～90重量％。
[0044]
作为本发明的被担载于生理用品的组合物所包含的助剂物质，可以使用粉末剂、颗粒剂、油性固体剂、油性半固体剂、油性液剂等形态的助剂物质，作为这样的助剂物质，在不损害本发明的效果的范围可以任意地选择/并用以下例示的成分、添加剂。
[0045]
(1)各种油脂类
[0046]
鳄梨油、甜扁桃油、茴香油、紫苏籽油、橄榄油、甜橙油、大西洋胄胸鲷油、芝麻籽油、可可籽脂、母菊油、胡萝卜油、黄瓜油、牛脂脂肪酸、石栗籽油、红花籽油、牛油果树果脂、液态牛油果树果脂、大豆油、山茶籽油、玉米油、菜籽油、杏仁油、蓖麻油、棉籽油、花生油、海龟油、貂油、蛋黄油、棕榈油、棕榈仁油、木蜡、椰子油、牛脂、猪脂、角鲨烯、角鲨烷、姥鲛烷或这些油脂类的氢化物(硬化油等)等。
[0047]
(2)蜡类
[0048]
蜂蜡、巴西棕榈蜡、鲸蜡、羊毛脂、液态羊毛脂、还原羊毛脂、硬质羊毛脂、小烛树蜡、褐煤蜡、紫虫胶蜡、米糠蜡等。
[0049]
(3)矿物油
[0050]
液体石蜡、矿脂、石蜡、地蜡、纯地蜡、微晶蜡等。
[0051]
(4)脂肪酸类
[0052]
月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、山酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、12-羟基硬脂酸、10-十一碳烯酸、妥尔油、羊毛脂脂肪酸等天然脂肪酸、异壬酸、己酸、2-乙基丁酸、异戊酸、2-甲基戊酸、2-乙基己酸、异戊酸等合成脂肪酸。
[0053]
(5)醇类
[0054]
乙醇、异丙醇、月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇、油醇、羊毛脂醇、胆固醇、植物甾醇、苯氧基乙醇等天然醇、2-己基癸醇、异硬脂醇、2-辛基十二烷醇等合成醇。
[0055]
(6)多元醇类
[0056]
氧化乙烯、乙二醇、二甘醇、三甘醇、乙二醇单乙基醚、乙二醇单丁基醚、二甘醇单甲基醚、二甘醇单乙基醚、聚乙二醇、氧化丙烯、丙二醇、聚丙二醇、1,3-丁二醇、戊二醇、甘油、季戊四醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、半乳糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇等。
[0057]
(7)酯类
[0058]
肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸肉豆蔻基酯、油酸油基酯、油酸癸酯、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯、二甲基辛酸己基癸基酯、乳酸鲸蜡基酯、乳酸肉豆蔻基酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、乙酰化羊毛脂、单硬脂酸乙二醇酯、单硬脂酸丙二醇酯、二油酸丙二醇酯等。
[0059]
(8)胶质、糖类或高分子化合物
[0060]
阿拉伯树胶、黄原胶、安息香胶、达玛胶、愈创树脂、爱尔兰苔、刺梧桐树胶、黄蓍树胶、角豆树胶、榅桲籽、琼脂、酪蛋白、乳糖、果糖、蔗糖或其酯、海藻糖或其衍生物、糊精、明胶、果胶、淀粉、角叉菜聚糖、羧基甲基壳多糖或脱乙酰壳多糖、加成了氧化乙烯等氧化烯(c2～c4)的羟基烷基(c2～c4)壳多糖或脱乙酰壳多糖、低分子壳多糖或脱乙酰壳多糖、脱乙酰壳多糖盐、硫酸化壳多糖或脱乙酰壳多糖、磷酸化壳多糖或脱乙酰壳多糖、藻酸或其盐、透明质酸或其盐、硫酸软骨素或其盐、肝素、乙基纤维素、甲基纤维素、羧基甲基纤维素、羧基甲基纤维素钠、羧基乙基纤维素、羧基乙基纤维素钠、羟基乙基纤维素、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、硝酸纤维素、结晶纤维素、聚乙烯、聚乙烯醇、聚乙烯基甲基醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸乙烯酯、聚丙烯酸盐、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯等聚氧化烯或其交联聚合物、羧基乙烯基聚合物、聚乙烯亚胺、有机硅、聚硅氧烷等。
[0061]
如上述那样，在本发明的被担载于生理用品的组合物中，可以混配乳铁蛋白和助剂物质，但进一步根据需要，可以将在药品、化妆品中通常使用的任意的各种溶剂、保存剂、助溶剂、稳定剂等以月经中的阴道内菌群紊乱迅速地被正常化的范围的量添加。此外，根据需要，可以添加其它药剂。
[0062]
本发明的被担载于生理用品的组合物，优选为对于阴道内施与而言便利的剂型，例如粉末剂、油性液剂、或油性半固体剂的形态，可以通过将上述乳铁蛋白和助剂物质进行混合、搅拌等来调制。另外，乳铁蛋白由于在高温/多湿下不稳定，因此本组合物优选在干燥状态下调制。
[0063]
本发明的生理用品，可以为能够进行乳铁蛋白向阴道内递送的任意形态的生理用品，可举出例如，卫生棉条和卫生巾。在本发明的生理用品为卫生棉条或卫生巾的情况下，作为该乳铁蛋白的含量，可以为月经中阴道内菌群紊乱迅速地被正常化的范围的任意量，可以优选为5～1,000mg/个，更优选为10～500mg/个，特别优选为20～200mg/个。
[0064]
本发明的生理用品，可以通过使乳铁蛋白、或包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物担载于卫生棉条或卫生巾等生理用品来制备。作为担载的方法，可举出以下方法。以下方法用于说明本发明，不对本发明进行任何限制。
[0065]
1.将乳铁蛋白单独，例如乳铁蛋白0.2g在生理用品的成形阶段气密地内包于吸收体部分的薄层间。(图1)(图2)
[0066]
2.将包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物，例如，包含乳铁蛋白90重量％的粉末剂0.1g在生理用品的成形阶段气密地内包于吸收体部分的薄层间。(图1)(图2)
[0067]
3.将包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物，例如，包含乳铁蛋白20重量％的油性液剂0.5g在生理用品的成形阶段水密地内包于吸收体部分的薄层间。(图1)(图2)
[0068]
4.将包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物，例如，包含乳铁蛋白10重量％的油性液剂1g滴加或喷雾到已成形的生理用品的吸收体部分使其含浸。(图3)(图4)
[0069]
5.使包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物，例如，包含乳铁蛋白20重量％的油性液剂0.2g在生理用品即将使用前含浸于吸收体。(图5)(图6)
[0070]
6.将包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物，例如，包含乳铁蛋白10重量％的油性半固体制剂0.4g在生理用品即将使用前涂布于吸收体。(图7)(图8)
[0071]
7.将包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物，例如，包含乳铁蛋白20重量％的油性液剂或油性半固体剂0.2g在即将使用前注入到作为生理用品的插入辅助工具的填充器与吸收体的空隙。(图9)
[0072]
本发明的担载了乳铁蛋白、或包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物的生理用品，可以根据生理的状态而使用，例如卫生棉条可以1天4～5个，卫生巾可以1天7～18个，贯穿生理期间而使用。
[0073]
实施例
[0074]
以下显示例子更具体地说明本发明。
[0075]
实施例1
[0076]
包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物
[0077]
制造出本发明的被担载于生理用品的各种组合物。以下显示其处方例，但由于通过进行混合、搅拌的方法制造，因此仅显示混配量。将乳铁蛋白(tatura社制，澳大利亚)和
助剂物质(各种油脂类、蜡类、矿物油、脂肪酸类、醇类、多元醇类、酯类、胶质、糖类或高分子化合物等)适量混合。另外，乳铁蛋白设为0.1～90重量％的比例的范围。以下具体显示处方例。
[0078]
(处方例1)油性半固体剂
[0079][0080]
(处方例2)油性半固体剂
[0081]
乳铁蛋白
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
40％
[0082]
矿脂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
60％
[0083]
(处方例3)油性液剂
[0084]
乳铁蛋白
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1％
[0085]
液体石蜡
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
99.9％
[0086]
(处方例4)油性液剂
[0087]
乳铁蛋白
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
20％
[0088]
丁二醇
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
8％
[0089]
甘油
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
72％
[0090]
(处方例5)油性液剂
[0091]
乳铁蛋白
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
30％
[0092]
角鲨烷
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
70％
[0093]
(处方例6)粉末剂
[0094]
乳铁蛋白
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
80％
[0095]
羟基丙基甲基纤维素 20％
[0096]
(处方例7)粉末剂
[0097]
乳铁蛋白
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
90％
[0098]
黄原胶
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
10％
[0099]
实施例2
[0100]
乳铁蛋白、或包含乳铁蛋白和助剂物质的组合物对生理用品的担载
[0101]
(乳铁蛋白)
[0102]
将乳铁蛋白(tatura社制，澳大利亚)0.1g在卫生棉条的成形阶段添加到吸收体部分的薄层间之后，将吸收体部分成形为圆柱形，进行压缩而获得了本发明的卫生棉条。(图1)
[0103]
(乳铁蛋白)
[0104]
将乳铁蛋白(tatura社制，澳大利亚)0.2g在卫生巾的成形阶段添加到吸收体部分的薄层间之后成形而获得了本发明的卫生巾。(图2)
[0105]
(油性液剂)
[0106]
将乳铁蛋白(tatura社制，澳大利亚)20g加入到角鲨烷80g中，进行搅拌，调制出组合物。将组合物0.5g滴加或喷雾到已成形的卫生棉条的吸收体部分而获得了本发明的卫生棉条。(图3)
[0107]
(油性液剂)
[0108]
将乳铁蛋白(tatura社制，澳大利亚)10g加入到液体石蜡90g中，进行搅拌，调制出组合物。将组合物2g滴加或喷雾到已成形的卫生巾的吸收体部分而获得了本发明的卫生巾。(图4)
[0109]
(油性半固体剂)
[0110]
将乳铁蛋白(tatura社制，澳大利亚)10g、纤维素胶8g、聚乙烯6g、果胶1g加入到液体石蜡75g中，进行混合，调制出组合物。在即将使用卫生棉条(带填充器)前，在填充器与吸收体的空隙注入组合物0.38g，获得了本发明的卫生棉条。(图9)
[0111]
实施例3
[0112]
临床试验
[0113]
在临床试验中，采用已同意研究的被检者作为对象，在包含月经周期3次的9周期间，将注入乳铁蛋白的卫生棉条使用前与使用后的相同月经周期时的阴道内菌群进行比较的方法。
[0114]
注入乳铁蛋白的卫生棉条，通过在
ソフィソフトタンポンレギュラー
(
ユニ
·
チャーム
社制)的填充器与吸收体的空隙中注入包含乳铁蛋白(tatura社制，澳大利亚)10重量％的处方例1的油性半固体剂0.38g(相当于乳铁蛋白38mg)来调制。
[0115]
被检者从月经周期第2～3次开始使用注入有乳铁蛋白的卫生棉条，每隔4小时交换卫生棉条。
[0116]
检体的采集方法是，使用阴道内菌群dna采集试剂盒的拭子刷(商品名“omnigene
·
vaginal”(dna genotek inc.,canada))进行了自己采集。采集到的阴道内粘膜液转移到用于菌的失活和稳定化的保存液1ml(商品名“mmb collection tube”(dna genotek inc.,canada))，在常温下保存。
[0117]
对于被检者1，从介入前的第1次的月经开始时极力控制乳酸菌混配食品、发酵食品等饮食，在月经开始第7天采集了检体。然后，在第2周期的月经和第3周期的月经时使用注入有乳铁蛋白的卫生棉条，分别在月经开始第7天采集了检体。其结果，通过使用了注入有乳铁蛋白的卫生棉条，从而在第3周期的阴道内乳杆菌％确认到了增加(表1)。
[0118]
[表1]
[0119]
表1.被检者1中的阴道内乳杆菌％
[0120][0121]
对于被检者2，进一步对其长期效果进行了研究。对于被检者2，从第1周期的月经
起使用注入有乳铁蛋白的卫生棉条，在3周期间，在月经开始第7天采集了检体。其结果，通过使用了注入有乳铁蛋白的卫生棉条3周期间，从而在阴道内乳杆菌％确认到了增加(表2)。
[0122]
[表2]
[0123]
表2.被检者2中的阴道内乳杆菌％
[0124][0125]
在实施例3中，阴道内菌群解析如以下那样实施。
[0126]
将自己采集到的阴道内粘膜液转移到用于菌的失活和稳定化的保存液1ml(商品名“mmb collection tube”(dna genotek inc.,canada))。为了提取菌基因组dna，在保存液中加入蛋白酶k(proteinase k)和溶菌酶(lysozyme)，使菌溶解。基因组dna使用dna提取试剂盒(商品名“agencourt genfind v2 blood&serum dna isolation kit”(beckman coulter inc,usa))进行了提取。提取出的dna的浓度使用商品名“qubit dsdna hs assay kit”(thermofisher scientific k.k.)的试剂盒进行了测定。
[0127]
菌群解析通过使用了新一代测序仪的16s扩增子测序法而实施。基于“earth microbiome project”的规程(非专利文献6)，使用将16s rrna基因的v4区域扩增的序列与illumina nextera xt接头序列连接了的引物进行了菌dna的扩增(非专利文献7)。制作出包含25ng/μl的dna、各200μmol/l的脱氧核糖核苷酸3磷酸、400nmol/l的各引物、2.5u的商品名“faststart hifi polymerase”、20mg/ml bsa(sigma)、0.5mol/l甜菜碱(sigma)和mgcl2的缓冲液(roche)的混合液用于pcr。pcr通过热循环仪(商品名“simpliamp thermal cycler”(thermo fisher))进行，在94℃下改性2分钟后，进行在94℃下20秒、在50℃下30秒、在72℃下1分钟的30循环，最后在72℃下使其反应5分钟。pcr产物用商品名“agencourt ampure xp”(beckman coulter inc,usa)进行了精制。接下来，基于“illumina 16s metagenomic sequencing library preparation protocol”(https://support.illumina.com/documents/documentation/chemistry_docum entation/16s/16s-metagenomic-library-prep-guide-15044223-b.pdf)，使用商品名“nextera xt index kit”(illumina inc.,usa)的试剂盒制作出库。制作出的库使用商品名“miseq reagent kit v3”(illumina k.k.)的试剂盒利用2
×
200-bp的双端测序进行了序列确定。数据解析使用“fastqqc”(https://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/)进行序列整体的质量检测，使用“usearch”(https://www.drive5.com/usearch/)和“qiime”(http://qiime.org/)进行了菌的属水平的鉴定。
[0128]
该申请基于令和2年1月30日申请的日本专利申请、特愿2020-013871，特愿2020-013871的说明书和权利要求书所记载的内容全部包含于该申请说明书。