一种适配体功能化磁珠/Au@ZIF-67-ssDNA复合材料的制备及应用

技术特征：
1.一种适配体功能化磁珠/au@zif-67-ssdna复合材料催化剂的制备方法，其特征在于该方法具有以下工艺步骤：（1）au@zif-67-ssdna的制备称取0.05~0.1 g au@zif-67于50 ml离心管中，向该离心管中加入30~50 ml 0.02 mol/l的ph=7.4的磷酸盐缓冲液，然后将50~80 ng/ml ssdna加入到该离心管中；将该离心管在25
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c室温下震荡孵化18~24 h；最后在8000 r/min的转速下离心10 min，移除上清液，得到au@zif-67-ssdna复合材料；（2）适配体功能化磁珠的制备称取0.10~0.20 g 磁珠于50 ml离心管中，加入3~6 ml 的戊二醛孵化2~5 h，然后向该离心管中加入35 ml 0.02 mol/l的ph=7.4的磷酸盐缓冲液，然后将0.02-0.05 mg/ml含有腺苷适配体的dna链加入到该离心管中；将该离心管室温震荡14~18 h，；最后在8000 r/min的转速下离心10 min，移除上清液，得到适配体功能化磁珠复合材料。2.根据权利要求1所述的适配体功能化磁珠/au@zif-67-ssdna复合材料催化剂的制备方法，其特征在于，所述au@zif-67，制备方法如下：将0.20 g zif-67 分散于100 ml 甲醇溶液中，超声15 min，然后在搅拌下将6 ml 氯金酸滴加到zif-67悬浊液中，并保持搅拌6 h，之后将10 ml 硼氢化钠加入到混合溶液中保持搅拌1 h以还原氯金酸，之后将所得沉淀物离心，并用甲醇洗涤，60℃真空干燥得到淡紫色粉末，即为au@zif-67 ；根据权利要求1所述的适配体功能化磁珠/au@zif-67-ssdna复合材料催化剂的制备方法，其特征在于，所述磁珠，制备方法如下：将60 ml 氨水和0.6 ml 正硅酸乙酯添加到含有153 mg的fe3o4, 120 ml 乙醇和18 ml 的水的混合溶液中，然后将混合物在35℃下加热回流4 h，然后向混合溶液中加入0.8 ml 的3-氨丙基三乙氧基硅烷和0.3 ml 氨水，反应6 h，用乙醇洗涤产物，并在60℃真空干燥，得到黑色固体粉末。3.根据权利要求1所述的适配体功能化磁珠/au@zif-67-ssdna复合材料催化剂的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述将戊二醛逐渐加入到0.10~0.20 g 磁珠中，是为了活化磁珠中的氨基，以便能够更好的和含有适配体的dna链结合。4.根据权利要求1所述的适配体功能化磁珠/au@zif-67-ssdna复合材料催化剂的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述适配体功能化磁珠复合材料，是对腺苷分子具有高特异性识别能力的功能化磁珠复合材料。5.根据权利要求1所述的制备方法制备的适配体功能化磁珠复合材料催化剂用于化学发光传感器检测腺苷的应用。6.根据权利要求6所述的用于化学发光传感器检测腺苷的应用，其特征在于，是采用流动注射-化学发光法构建化学发光传感器，步骤如下：（1）适配体功能化磁珠对au@zif-67-ssdna饱和吸附量的确定准确移取8份1 ml浓度为1 mg/ml的适配体功能化磁珠磷酸盐缓冲溶液，分别放入50 ml比色管中，加入不同体积的浓度为2 mg/ml的au@zif-67-ssdna磷酸盐缓冲溶液，用流动注射-化学发光仪测定各比色管中溶液的化学发光强度，根据化学发光强度变化值、适配体浓度及其体积，可计算出适配体功能化磁珠对au@zif-67-ssdna的饱和吸附量q；
（2）适配体功能化磁珠对au@zif-67-ssdna饱和吸附时间的确定准确移取8份1 ml浓度为1 mg/ml的适配体功能化磁珠磷酸盐缓冲溶液，分别放入50 ml比色管中，并加入已知最佳饱和吸附量为1.35
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10-2 mg/ml的au@zif-67-ssdna磷酸盐缓冲溶液，用流动注射-化学发光仪测定不同吸附时间比色管中的化学发光强度，根据化学发光强度变化值以及吸附时间的不同，可得出适配体功能化磁珠对au@zif-67-ssdna的最佳吸附时间;（3）工作曲线绘制配制一系列标准浓度的腺苷磷酸盐缓冲溶液，均加入1 ml浓度为1 mg/ml的适配体功能化磁珠/au@zif-67-ssdna复合材料磷酸盐缓冲溶液，在最佳实验条件下，即最优的主副泵速，最优的鲁米诺、过氧化氢、氢氧化钠溶液浓度下，测定系列标准浓度腺苷的化学发光强度，以腺苷的浓度为横坐标、化学发光强度为纵坐标绘制工作曲线；（4）稳定性研究准确移取1 ml浓度为1 mg/ml的适配体功能化磁珠/au@zif-67-ssdna复合材料磷酸盐缓冲溶液分别放入8个50 ml的比色管中，在氢氧化钠-鲁米诺-过氧化氢的化学发光体系下，用流动注射-化学发光仪测定化学发光强度，检测8个相同样品的化学发光值是否稳定；（5）重现性研究准确移取1 ml浓度为1 mg/ml的适配体功能化磁珠/au@zif-67-ssdna复合材料磷酸盐缓冲溶液放入50 ml的比色管中，在氢氧化钠-鲁米诺-过氧化氢的化学发光体系下，用流动注射-化学发光仪测定化学发光强度，检测311 s的检测过程中出现的化学发光值是否稳定；（6）实际样品检测在最佳实验条件下，对人尿液中的腺苷含量进行检测并且进行加标回收实验，准确移取5.00 ml人尿样品放入10 ml离心管中，在8000 r/min的转速下离心10 min，准确移取1 ml上清液，放入50 ml比色管中定容，测定其中腺苷的含量。

技术总结
本发明公开了一种适配体功能化磁珠/Au@ZIF-67-ssDNA复合材料催化剂的制备及其在化学发光传感器中的应用技术，主要技术特征是：制备了磁珠，并在其表面修饰上含有适配体的DNA链，同时制备了Au@ZIF-67，并在其表面修饰了ssDNA，得到对腺苷分子有着高特异性识别能力的适配体功能化磁珠/Au@ZIF-67-ssDNA复合材料催化剂，制备过程简单，条件易于控制，生产成本低；本发明同时提供了一种检测腺苷的新方法，将适配体功能化磁珠/Au@ZIF-67-ssDNA复合材料应用于化学发光传感器检测腺苷中，具有灵敏度高、选择性好、操作方便、仪器简单等优点，并且成功用于人尿液样品中腺苷的检测，表现出高的准确度和精密度，为应用于实际检测提供了可能，在人类健康方面具有重要的生物学意义。在人类健康方面具有重要的生物学意义。在人类健康方面具有重要的生物学意义。


技术研发人员：罗川南 候亚男 刘善田 王静道 孙元玲 王鹏飞 王喜梅 张少华 方方
受保护的技术使用者：济南大学
技术研发日：2022.05.05
技术公布日：2022/9/6