一种青龙虾离体孵化方法与流程

1.本发明涉及水产养殖领域，特别涉及一种青龙虾离体孵化方法。


背景技术：

2.青龙虾一般指波纹龙虾(panulirus homarus)隶属于节肢动物门(arthropoda)甲壳纲(crustacea)十足目(decapoda)龙虾科(palinuridae)龙虾属。波纹龙虾是热带和亚热带重要经济虾类，养殖潜力巨大，但资源匮乏，育苗还没有取得成功，因此，需要开展人工繁殖研究以保护和增殖资源，但是目前人工离体孵化过程中，青龙虾受精卵离体孵化时间过长，孵化过程易被感染，导致孵不出幼体或孵化率低等问题。


技术实现要素：

3.鉴于此，本发明提出一种青龙虾离体孵化方法，解决上述问题。
4.本发明的技术方案是这样实现的：一种青龙虾离体孵化方法：包括以下步骤：
5.s1、挑选种虾：挑选体长大于35cm，绝对抱卵量为15000粒以上，体格健壮、肢体齐全的雌性青龙虾作为母本；
6.s2、培育：将抱卵青龙虾放在过滤循环水池，以珊瑚骨作为底沙，养殖抱卵数量为3～7只/m3，设定ph7-9，温度28-30℃，含氧量为3-5mg/l，每周换水一次，换水量为总水体的0.2～0.4倍，每天早晚投喂饵料，投喂量为抱卵青龙虾的体重的1～3倍，并观察抱卵青龙虾的受精卵发育情况；通过调节抱卵龙虾母体培育条件，提高母体的质量，建立较好的育卵环境；
7.s3、孵化管理：取出抱卵青龙虾，在无菌环境下将脱卵剂浇在脱卵部位，待虾卵脱离母体后，将虾卵转移到无菌器皿中，加入0.3～0.4％wt的氯化钠溶液，浸泡8～15min；在脱卵部位浇上脱卵剂有助于母体与虾卵顺利脱离，解决因外力脱卵导致破卵、坏卵等现象；氯化钠溶液浸泡虾卵起到较好的杀菌作用；
8.s4、将多串黏连的虾卵分开成单串，按照15～20万粒卵/m3的密度将虾卵放入玻璃缸桶中，加入孵化水，调节进出水量，保持水体涌动，待虾卵孵化出膜。
9.进一步的，所述s2培育步骤中循环水池尺寸为300
×
100
×
60cm，水高度为100-110cm。
10.进一步的，所述s2的饵料包括以下重量份原料海参维生素5～10份、卤虫1～3份、免疫多糖4～8份、1～3份松针粉、2～4份椰子粕。
11.进一步的，所述s3的脱卵剂质量体积比g/ml为3～10:1～3:0.3～0.8:0.8～1.2的葡萄糖、茶多酚、hepes缓冲盐、胰蛋白酶；通过选用脱卵剂，调整配比，脱卵剂中的葡萄糖、茶多酚可以帮助虾卵自身产生的激素调节，再经胰蛋白酶的作用起到化学反应，hepes缓冲盐能够使虾卵和母体粘连部位渗透扩张，变的软薄易于脱粘，利用脱卵剂能减少自然脱卵造成的破损等问题，使脱卵达到较好的效果。
12.进一步的，所述s4的孵化水质量体积比g/ml为2～9:3～5:10～40:400～1000的青
霉素、丙酮酸钠、pbs缓冲液、灭菌海水；加入青霉素减少病菌侵害，丙酮酸钠增强虾卵的耐受性，在杀害病原体的同时，不影响孵化率。
13.进一步的，所述s4的进水量为8～20l/min，出水量为3～5l/min。
14.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
15.本发明青龙虾的离体孵化方法中，通过母本培育，控制循环水池的水质条件，选择特定的饵料进行投喂，配制脱卵剂浇在脱卵部位利于青龙虾的脱卵效果，脱卵剂中的葡萄糖、茶多酚可以帮助虾卵自身产生的激素调节，再经胰蛋白酶的作用起到化学反应，hepes缓冲盐能够使虾卵和母体粘连部位渗透扩张，变的软薄易于脱粘，利用脱卵剂能减少自然脱卵造成的破损等问题，在孵化管理过程中，设置孵化水，加入青霉素减少病菌侵害，丙酮酸钠增强虾卵的耐受性，在杀害病原体的同时，不影响孵化率，调节进出水量，保持水体涌动，激活受精卵的应激能力，提高孵化效率，有效对孵化环境起到灭菌的作用，在较短时间内出膜，提高了虾卵的孵化率和减少感染率。
具体实施方式
16.为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
17.本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
18.本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
19.实施例1
20.一种青龙虾离体孵化方法：包括以下步骤：
21.s1、挑选种虾：挑选体长大于35cm，绝对抱卵量为15000粒以上，体格健壮、肢体齐全的雌性青龙虾作为母本；
22.s2、培育：将抱卵青龙虾放在过滤循环水池，循环水池尺寸为300
×
100
×
60cm，水高度为100cm，以珊瑚骨作为底沙，养殖抱卵数量为3只/m3，设定ph7，温度28℃，含氧量为3mg/l，每周换水一次，换水量为总水体的0.2倍，每天早晚次投喂饵料，饵料包括以下重量份原料海参维生素5份、卤虫1份、免疫多糖4份、松针粉1份、椰子粕2份，投喂量为抱卵青龙虾的体重的1倍，并观察抱卵青龙虾的受精卵发育情况；
23.s3、脱卵处理：取出抱卵青龙虾，在无菌环境下将脱卵剂浇在脱卵部位，质量体积比g/ml为3:1:0.3:0.8的葡萄糖、茶多酚、hepes缓冲盐、胰蛋白酶，待虾卵脱离母体后，将虾卵转移到无菌器皿中，加入0.3％wt的氯化钠溶液，浸泡8min；
24.s4、孵化管理：将多串黏连的虾卵分开成单串，按照15万粒卵/m3的密度将虾卵放入玻璃缸桶中，加入孵化水，孵化水质量体积比g/ml为2:3:10:400的青霉素、丙酮酸钠、pbs缓冲液、灭菌海水，调节进出水量，进水量为8l/min，出水量为3l/min，保持水体涌动，待虾卵孵化出膜。
25.实施例2
26.一种青龙虾离体孵化方法：包括以下步骤：
27.s1、挑选种虾：挑选体长大于35cm，绝对抱卵量为15000粒以上，体格健壮、肢体齐全的雌性青龙虾作为母本；
28.s2、培育：将抱卵青龙虾放在过滤循环水池，循环水池尺寸为300
×
100
×
60cm，水高度为100cm，以珊瑚骨作为底沙，养殖抱卵数量为7只/m3，设定ph9，温度30℃，含氧量为
5mg/l，每周换水一次，换水量为总水体的0.4倍，每天早晚次投喂饵料，饵料包括以下重量份原料海参维生素10份、卤虫3份、免疫多糖8份、松针粉3份、椰子粕4份，投喂量为抱卵青龙虾的体重的1～3倍，并观察抱卵青龙虾的受精卵发育情况；
29.s3、脱卵处理：取出抱卵青龙虾，在无菌环境下将脱卵剂浇在脱卵部位，脱卵剂质量体积比g/ml为10:3:0.8:1.2的葡萄糖、茶多酚、hepes缓冲盐、胰蛋白酶，待虾卵脱离母体后，将虾卵转移到无菌器皿中，加入0.4％wt的氯化钠溶液，浸泡15min；
30.s4、孵化管理：将多串黏连的虾卵分开成单串，按照20万粒卵/m3的密度将虾卵放入玻璃缸桶中，加入孵化水，孵化水质量体积比g/ml为9:5:40:1000的青霉素、丙酮酸钠、pbs缓冲液、灭菌海水，调节进出水量，进水量为20l/min，出水量为5l/min，保持水体涌动，每日光照8-12h，光照强度为500lux，待虾卵孵化出膜。
31.实施例3
32.一种青龙虾离体孵化方法：包括以下步骤：
33.s1、挑选种虾：挑选体长大于35cm，绝对抱卵量为15000粒以上，体格健壮、肢体齐全的雌性青龙虾作为母本；
34.s2、培育：将抱卵青龙虾放在过滤循环水池，循环水池尺寸为300
×
100
×
60cm，水高度为100cm，以珊瑚骨作为底沙，养殖抱卵数量为5只/m3，设定ph8，温度29℃，含氧量为4mg/l，每周换水一次，换水量为总水体的0.3倍，每天早晚投喂饵料，饵料包括以下重量份原料海参维生素8份、卤虫2份、免疫多糖6份、松针粉2份、椰子粕3份，投喂量为抱卵青龙虾的体重的2倍，并观察抱卵青龙虾的受精卵发育情况；
35.s3、脱卵处理：取出抱卵青龙虾，在无菌环境下将脱卵剂浇在脱卵部位，脱卵剂为质量体积比g/ml为7:2:0.5:1的葡萄糖、茶多酚、hepes缓冲盐、胰蛋白酶待虾卵脱离母体后，将虾卵转移到无菌器皿中，加入0.3％的氯化钠溶液，浸泡12min；
36.s4、孵化管理：将多串黏连的虾卵分开成单串，按照18万粒卵/m3的密度将虾卵放入玻璃缸桶中，加入孵化水，孵化水质量体积比g/ml为5:4:30:700的青霉素、丙酮酸钠、pbs缓冲液、灭菌海水，调节进出水量，进水量为14l/min，出水量为4l/min，保持水体涌动，每日光照10h，光照强度为300lux，待虾卵孵化出膜。
37.实施例4
38.本实施例与实施例3的区别在，饵料包括以下重量份原料海参维生素2份、卤虫5份、免疫多糖2份、松针粉5份、椰子粕1份；
39.具体为一种青龙虾离体孵化方法：包括以下步骤：
40.s1、挑选种虾：挑选体长大于35cm，绝对抱卵量为15000粒以上，体格健壮、肢体齐全的雌性青龙虾作为母本；
41.s2、培育：将抱卵青龙虾放在过滤循环水池，循环水池尺寸为300
×
100
×
60cm，水高度为100cm，以珊瑚骨作为底沙，养殖抱卵数量为5只/m3，设定ph8，温度29℃，含氧量为4mg/l，每周换水一次，换水量为总水体的0.3倍，每天早晚次投喂饵料，饵料包括以下重量份原料海参维生素2份、卤虫5份、免疫多糖2份、松针粉5份、椰子粕1份，投喂量为抱卵青龙虾的体重的2倍，并观察抱卵青龙虾的受精卵发育情况；
42.s3、孵化管理：取出抱卵青龙虾，在无菌环境下将脱卵剂浇在脱卵部位，脱卵剂为质量体积比g/ml为7:2:0.5:1的葡萄糖、茶多酚、hepes缓冲盐，待虾卵脱离母体后，将虾卵
转移到无菌器皿中，加入0.3％wt的氯化钠溶液，浸泡12min；
43.s4、孵化管理：将多串黏连的虾卵分开成单串，按照18万粒卵/m3的密度将虾卵放入玻璃缸桶中，加入孵化水，孵化水质量体积比g/ml为5:4:30:700的青霉素、丙酮酸钠、pbs缓冲液、灭菌海水，调节进出水量，进水量为14l/min，出水量为4l/min，保持水体涌动，每日光照10h，光照强度为300lux，待虾卵孵化出膜。
44.实施例5
45.本实施例与实施例3的区别在于，脱卵剂质量体积比g/ml为2:5:0.2:0.7的葡萄糖、茶多酚、hepes缓冲盐、胰蛋白酶；
46.具体为一种青龙虾离体孵化方法：包括以下步骤：
47.s1、挑选种虾：挑选体长大于35cm，绝对抱卵量为15000粒以上，体格健壮、肢体齐全的雌性青龙虾作为母本；
48.s2、培育：将抱卵青龙虾放在过滤循环水池，循环水池尺寸为300
×
100
×
60cm，水高度为100cm，以珊瑚骨作为底沙，养殖抱卵数量为5只/m2，设定ph8，温度29℃，含氧量为4mg/l，每周换水一次，换水量为总水体的0.3倍，每天早晚次投喂饵料，饵料包括以下重量份原料海参维生素8份、卤虫2份、免疫多糖6份、松针粉2份、椰子粕3份，投喂量为抱卵青龙虾的体重的2倍，并观察抱卵青龙虾的受精卵发育情况；
49.s3、脱卵处理：取出抱卵青龙虾，在无菌环境下将脱卵剂浇在脱卵部位，脱卵剂质量体积比g/ml为2:5:0.2:0.7的葡萄糖、茶多酚、hepes缓冲盐、胰蛋白酶，待虾卵脱离母体后，将虾卵转移到无菌器皿中，加入0.3％wt的氯化钠溶液，浸泡12min；
50.s4、孵化管理：将多串黏连的虾卵分开成单串，按照18万粒卵/m3的密度将虾卵放入玻璃缸桶中，加入孵化水，孵化水质量体积比g/ml为5:4:30:700的青霉素、丙酮酸钠、pbs缓冲液、灭菌海水，调节进出水量，进水量为14l/min，出水量为4l/min，保持水体涌动，每日光照10h，光照强度为300lux，待虾卵孵化出膜。
51.实施例6
52.本实施例与实施例3的区别在于，孵化水质量体积比g/ml为2:4:50:1200的青霉素、丙酮酸钠、pbs缓冲液、灭菌海水，
53.具体为一种青龙虾离体孵化方法：包括以下步骤：
54.s1、挑选种虾：挑选体长大于35cm，绝对抱卵量为15000粒以上，体格健壮、肢体齐全的雌性青龙虾作为母本；
55.s2、培育：将抱卵青龙虾放在过滤循环水池，循环水池尺寸为300
×
100
×
60cm，水高度为100cm，以珊瑚骨作为底沙，养殖抱卵数量为5只/m3，设定ph8，温度29℃，含氧量为4mg/l，每周换水一次，换水量为总水体的0.3倍，每天早晚次投喂饵料，饵料包括以下重量份原料海参维生素8份、卤虫2份、免疫多糖6份、松针粉2份、椰子粕3份，投喂量为抱卵青龙虾的体重的2倍，并观察抱卵青龙虾的受精卵发育情况；
56.s3、脱卵处理：取出抱卵青龙虾，在无菌环境下将脱卵剂浇在脱卵部位，脱卵剂为质量体积比g/ml为7:2:0.5:1的葡萄糖、茶多酚、hepes缓冲盐，待虾卵脱离母体后，将虾卵转移到无菌器皿中，加入0.3％wt的氯化钠溶液，浸泡12min；
57.s4、孵化管理：将多串黏连的虾卵分开成单串，按照18万粒卵/m3的密度将虾卵放入玻璃缸桶中，加入孵化水，孵化水质量体积比g/ml为2:4:50:1200的青霉素、丙酮酸钠、
pbs缓冲液、灭菌海水，调节进出水量，进水量为14l/min，出水量为4l/min，保持水体涌动，每日光照10h，光照强度为300lux，30日后，虾卵孵化出膜。
58.一、青龙虾离体孵化情况
59.随机挑选180只抱卵青龙虾分为6组，每组30只，分别按照实施例1～6的离体孵化方法对抱卵青龙虾进行孵化，观察虾卵孵化状态，统计分别统计孵化率、感染率剂出膜时间。
[0060][0061]
由上述结果可知，本发明实施例组的离体孵化方法，其孵化率为86.0-91.3％，感染率较低2.3-5.9％，出膜时间短，为29天，其中实施例3的孵化效果最好。
[0062]
根据实施例3的孵化效果，对其作出下述对照试验，每组养殖30只抱卵青龙虾，具体如下：
[0063]
对比例1
[0064]
本对比例与实施例3的区别在于，在s2的培育步骤中投喂的饵料为卤虫、小球藻，投喂量为抱卵青龙虾的体重的2倍。
[0065]
测试结果：
[0066] 抱卵量(粒)孵化数(尾)孵化率％感染率％实施例3176301567191.32.3对比例1176871124371.68.9
[0067]
实施例3与对比例1比较，在亲本培育饵料中的原料对抱卵青龙虾受精卵发育起到一定的影响，加入了免疫多糖和松针粉结合能抑制虾体中的有害菌，净化虾体肠道，提高进食率，有助于增强虾体质，海参维生素、椰子粕能够提供抱卵虾的营养，提升抱卵虾中虾卵的质量，从而提升孵化率。
[0068]
对比例2
[0069]
本对比例与实施例3的区别在于，在s3步骤中未使用脱卵剂；
[0070]
具体为一种青龙虾离体孵化方法：包括以下步骤：
[0071]
s1、挑选种虾：挑选体长大于35cm，绝对抱卵量为15000粒以上，体格健壮、肢体齐全的雌性青龙虾作为母本；
[0072]
s2、培育：将抱卵青龙虾放在过滤循环水池，循环水池尺寸为300
×
100
×
60cm，水
高度为100cm，以珊瑚骨作为底沙，养殖抱卵数量为5只/m3，设定ph8，温度29℃，含氧量为4mg/l，每周换水一次，换水量为总水体的0.3倍，每天早晚次投喂饵料，饵料包括以下重量份原料海参维生素8份、卤虫2份、免疫多糖6份、松针粉2份、椰子粕3份，投喂量为抱卵青龙虾的体重的2倍，并观察抱卵青龙虾的受精卵发育情况；
[0073]
s3、脱卵处理：取出抱卵青龙虾，在无菌环境下将虾卵脱离母体，将虾卵转移到无菌器皿中，加入0.3％的氯化钠溶液，浸泡12min；
[0074]
s4、孵化管理：将多串黏连的虾卵分开成单串，按照18万粒卵/m3的密度将虾卵放入玻璃缸桶中，加入孵化水，孵化水为体积比为700:30:5:4的灭菌海水、青霉素、pbs缓冲液、丙酮酸钠，调节进出水量，进水量为14l/min，出水量为4l/min，保持水体涌动，每日光照10h，光照强度为300lux，30日后，虾卵孵化出膜。
[0075]
测试结果：
[0076] 抱卵量(粒)孵化数(尾)孵化率％感染率％实施例3176301567191.32.3对比例2185491169670.98.4
[0077]
与对比例2比较，说明脱卵剂中的葡萄糖、茶多酚可以帮助虾卵自身产生的激素调节，再经胰蛋白酶的作用起到化学反应，hepes缓冲盐能够使虾卵和母体粘连部位渗透扩张，变的软薄易于脱粘，利用脱卵剂能减少自然脱卵造成的破损等问题，使脱卵达到较好的效果，使用脱卵剂能较好、且完整的将虾卵脱离母体，提高其孵化率。
[0078]
对比例3
[0079]
本对比例与是实施例3的区别在于，所述s4中孵化管理孵化水未加入丙酮酸钠，孵化水为体积比1000:40:9的灭菌海水、青霉素、pbs缓冲液。
[0080] 抱卵量(粒)孵化数(尾)孵化率％感染率％实施例3176301567191.32.3对比例3175611054568.97.8
[0081]
实施例3与对比例3比较，采用特定的孵化水对虾卵进行孵化，加入的青霉素减少病菌侵害，丙酮酸钠增强虾卵的耐受性，在杀害病原体的同时，不影响孵化率，促进虾卵的发育及其脱膜。
[0082]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。