一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和L-赤藓酮糖的方法与流程

一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法
技术领域
1.本发明涉及化妆品测定技术领域，尤其涉及一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法。


背景技术：

[0002]“爱美之心、人皆有之”，随着人民生活水平的提高，大众对美的追求和需求也越来越强烈，免晒美黑产品专门用于想拥有古铜色皮肤,但又不想让自己暴露于有害阳光紫外线的人，它能在没有风险的情况下获得想要的深褐色皮肤颜色。美国皮肤学会表示，可用的最有效产品是含有活性成分1，3-二羟基丙酮(dha)的免晒或仿晒产品。dha是一种无色糖类，能与表皮角质层中的死细胞发生反应。当这种糖类与死皮细胞发生反应时，就会发生颜色变化。这种变化在开始涂抹后通常能持续五至七天，l-赤藓酮糖(dhb)是一种天然酮糖，一般和dha配合使用，使dha颜色加深，分布更为均匀，由于dha和dhb的亲和力很强，不仅可以与任何蛋白质发生化学反应，如除了能与皮肤角质层蛋白质结合外，还能与头发中的角蛋白结合，成为无苯无双氧水的安全染发剂。
[0003]
高效液相色谱法(hplc)直接测定糖类通常选用极性色谱柱，如hilic柱、氨基柱等等，但出峰快、保留时间均较早，且易受化妆品配方中基质的干扰，从而影响其准确定量。实验过程中发现，采用这二种色谱柱，检测结果并不理想，一是保留时间都太早，无法与溶剂峰分离，也无法避免空白基质的干扰。二是dha和dhb结构极其相似(二者化学结构如下)，且极性也极相似，难以分开，为此，我们提出一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法来解决上述提出的问题。
[0004]


技术实现要素：

[0005]
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法。
[0006]
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
[0007]
一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法，采用高效液相色谱法检测，以聚苯乙烯二乙烯苯树脂为填充剂，以4～6mmol/l硫酸溶液为流动相，进行等度洗脱，柱温为40～60℃，流速为每分钟0.4～1.0ml。
[0008]
优选地，所述检测过程中使用220nm的紫外检测波长进行检测。
[0009]
优选地，所述流动相为6mmol/l硫酸溶液。
[0010]
优选地，所述柱温控制在50℃。
[0011]
优选地，所述流速为每分钟0.5ml。
[0012]
一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法，还包括以下步骤：
[0013]
s1、1,3-二羟基丙酮对照品溶液的配制：精密称取1,3-二羟基丙酮对照品2.5g，置于50ml量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，配成浓度为50mg/ml的溶液作为1,3-二羟基丙酮标准储备溶液；再精密量取1ml，置于10ml量瓶中，加纯化水稀释至刻度，即为浓度为5mg/ml的溶液，作为1,3-二羟基丙酮对照品溶液；
[0014]
s2、l-赤藓酮糖对照品溶液的配制：精密称取l-赤藓酮糖对照品1.0g，置于50ml量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，配成浓度为20mg/ml溶液作为l-赤藓酮糖标准储备溶液；再精密量取1ml，置于10ml量瓶中，加纯化水稀释至刻度，即为浓度为2mg/ml的溶液，作为l-赤藓酮糖对照品溶液；
[0015]
s3、对照品溶液的配制：精密量取1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖对照品标准储备液1ml，置于10ml量瓶中，加纯化水稀释至刻度，制成每1ml中含1,3-二羟基丙酮对照品5mg和l-赤藓酮糖对照品2.0mg的溶液，作为对照品溶液。
[0016]
s4、供试品溶液的配制：取样品，精密称取0.5g，置于10ml具塞量瓶中，加入8ml 75％乙醇溶液，涡旋混合器混合2min，超声波处理15min，加入75％乙醇溶液至刻度，摇匀，取上清液微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；
[0017]
s5、样品测定：分别量取对照品溶液和供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算l-赤藓酮糖和1,3-二羟基丙酮的含量
[0018]
优选地，所述含有1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖化妆品包括水剂、乳剂和膏霜剂。
[0019]
优选地，所述测定样品需要采用乙醇溶液提取，且乙醇浓度为75％。
[0020]
优选地，所述测定样品加入乙醇溶液涡旋混合后进行15min超声波处理。
[0021]
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0022]
1、本发明通过建立高效液相色谱方法，可同时对化妆品中含有的dha和dhb进行测定，操作简便、快速、重现性好，并且通过对样品预处理进行筛选优化，使建立的方法适用性更强；
[0023]
2、本发明为了更好地同时检测不同化妆品如水剂、乳剂、膏霜剂中dha和dhb的含量，本发明通过筛选和优化得到化妆品样品的预处理方法。虽然dha和dhb均易溶于水，理论上均可直接用水提取样品中的有效成分，但是，常用的化妆品既有水剂，更多的是乳剂、膏霜剂等等，直接用水提取很难提取被包裹或吸附的活性成分，必须对样品进行破乳等预处理。
附图说明
[0024]
图1为本发明提出的一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法的对照品溶液高效液相色谱图(流动相为4mmol/l硫酸溶液)；
[0025]
图2为本发明提出的一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法的对照品溶液高效液相色谱图(流动相为5mmol/l硫酸溶液)；
[0026]
图3为本发明提出的一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法的对照品溶液高效液相色谱图(流动相为6mmol/l硫酸溶液)；
[0027]
图4为本发明提出的一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法的dha对照品溶液高效液相色谱图；
[0028]
图5为本发明提出的一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法的dhb对照品溶液高效液相色谱图；
[0029]
图6为本发明提出的一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法的dha和dhb对照品混合溶液高效液相色谱图；
[0030]
图7为本发明提出的一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法市售水剂样品高效液相色谱图。
具体实施方式
[0031]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0032]
参照图1-7，一种同时测定化妆品中的1,3-二羟基丙酮和l-赤藓酮糖的方法，包括以下步骤。
[0033]
s1、试剂及材料
[0034]
dha对照品(含量：99.8％)；dhb对照品(含量：85.0％)；硫酸，纯化水，空白基质均由南京spk有限公司配方应用中心提供；美黑产品由市场直接购买。
[0035]
s2、主要仪器
[0036]
waters-e2695型高效液相色谱仪，me204e电子天平，hy-2旋涡混匀仪，kq3200超声波清洗器。
[0037]
s3、色谱条件：
[0038]
色谱柱：bio-rad aminex hpx-87h(300mm
×
7.8mm，9um)糖分析色谱柱；流动相：6mmol/l硫酸溶液；流速：0.5ml/min；柱温：50℃；波长：220nm；进样量：20μl。
[0039]
s4、测定步骤：
[0040]
dha对照品溶液的配制：精密称取dha对照品2.5g，置于50ml量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，配成浓度为50mg/ml的溶液作为dha标准储备溶液；再精密量取1ml，置于10ml量瓶中，加纯化水稀释至刻度，即为浓度为5mg/ml的溶液，作为dha对照品溶液；
[0041]
dhb对照品溶液的配制：精密称取dhb对照品1.0g，置于50ml量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，配成浓度为20mg/ml溶液作为dhb标准储备溶液；再精密量取1ml，置于10ml量瓶中，加纯化水稀释至刻度，即为浓度为2mg/ml的溶液，作为dhb对照品溶液；
[0042]
对照品溶液的配制：分别精密量取dha和dhb标准储备液1ml，置于10ml量瓶中，加纯化水稀释至刻度，制成每1ml中含dha 5mg和dhb2.0mg的溶液，作为对照品溶液；
[0043]
供试品溶液的配制：取样品，精密称取0.5g，置于10ml具塞量瓶中，加入9ml75％乙醇溶液，涡旋混合器混合2min，超声波处理15min，加入75％乙醇溶液至刻度，摇匀，取上清液微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；
[0044]
样品测定：分别量取对照品溶液和供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算dha和dhb的含量。
[0045]
实施例1
[0046]
实施例1给出不同流动相对同时测定dha和dhb的影响。主要通过以下步骤：
[0047]
s1：分别配制三种不同的流动相，即4mmol/l、5mmol和6mmol/l硫酸溶液。
[0048]
s2：保持其它色谱条件不变，更换不同的流动相，分别精密量取对照品溶液20μl,注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果见表1。
[0049]
表1不同流动相对dha和dhb测定的影响
[0050][0051]
从表1实验结果可以看出，随着硫酸溶液浓度的增加，dha和dhb的分离度变好，当硫酸溶液浓度达到6mmol/l时，此色谱条件基本能满足dha和dhb二者同时测定的要求。
[0052]
实施例2
[0053]
实施例2给出不同柱温对同时测定dha和dhb的影响。主要通过以下步骤：
[0054]
s1：配制流动相为6mmol/l硫酸溶液。
[0055]
s2：保持其它色谱条件不变，调节柱温使分别为40℃、50℃和60℃，再分别精密量取对照品溶液20μl,注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果见表2。
[0056]
表2不同柱温对dha和dhb测定的影响
[0057][0058]
从表2实验结果可以看出，随着柱温的升高，dha和dhb的分离度变好，但是，温度升高对色谱柱影响较大，所以最优选的是柱温50℃，此色谱条件基本能满足dha和dhb二者同时测定的要求。
[0059]
实施例3
[0060]
实施例3对本发明所建立的方法进行方法学研究与验证。
[0061]
s1、系统适用性
[0062]
分别量取空白溶剂、dha对照品溶液和dhb对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果发现dha的保留时间为15.427min，而dhb的保留时间为13.835min，二者峰形对称、保留时间适当且空白溶剂对测定无干扰(见图4和图5)。
[0063]
另分别量取dha和dhb对照品溶液适量混合后，量取dha和dhb混合对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果发现dha和dhb的保留时间为13.785min，15.972min，二者峰形良好且达到基线分离，分离度大于1.5符合测定要求(见图6)。
[0064]
s2、线性与范围
[0065]
分别精密量取上述dha标准储备液和dhb标准储备液0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml置10ml量瓶中，用75％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，制成系列标准溶液。依法进样测定，以峰面积(a)对溶液浓度(c)进行线性回归，得标准曲线和相关系数，结果见表3，结果说明dha对照品溶液在1.0～20.0mg/ml，dhb对照品溶液在0.4～8.0mg/ml的浓度范围内均与峰面积线性关系良好。
[0066]
表3 hplc检测方法中dha和dhb的回归方程、范围和相关系数
[0067][0068]
s3、方法精密度试验
[0069]
取上述标准曲线中含有dha浓度为5mg/ml，dhb浓度为2mg/ml的混合溶液，连续进样6次，记录峰面积并计算rsd，结果其rsd均小于2.0％，说明精密度良好。
[0070]
s4、溶液稳定性试验
[0071]
取上述标准曲线中含有dha浓度为5mg/ml，dhb浓度为2mg/ml的混合溶液，分别在室温条件下放置0、1、3、5、7、9、11、13，15h，依法进样测定，结果发现dha和dhb的峰面积几乎无变化，其rsd均小于2.0％，说明其溶液在室温条件下放置15h稳定性良好。
[0072]
s5、准确度试验
[0073]
准确称取9份空白基质(不含dha和dhb的化妆品)0.5g至10ml容量瓶中，依80％、100％、120％高、中、低三种浓度加入dha和dhb，其中3瓶分别加入0.8ml dha和dhb标准储备液；3瓶加入1ml dha和dhb标准储备液；另外3瓶加入1.2ml dha和dhb标准储备液。9瓶溶液分别加入加入8ml75％乙醇溶液，涡旋混合器混合2min，超声波处理15min，加入75％乙醇溶液至刻度，摇匀，取上清液微孔滤膜过滤，取续滤液20μl依法进样测定，记录峰面积，代入标准曲线计算测得量，以测得量除以加入量计算回收率(见表4)。结果发现dha和dhb加样回收率均在90.0％～110.0％之间，rsd均小于3.0％。
[0074]
表4 hplc检测方法中dha和dhb的回收率
[0075][0076][0077]
s6、定量限与检测限
[0078]
分别逐级稀释dha和dhb对照品溶液并注入高效液相色谱仪进行测定，以3倍信噪比对应的样品质量浓度计算检出限，以10倍信噪比对应的样品质量浓度计算定量限。结果dha的检出限为0.25μg/ml，定量限为0.75μg/ml。dhb的检出限为0.20μg/ml，定量下限为0.81μg/ml。
[0079]
实施例4
[0080]
实施例4采用不同浓度的乙醇溶液作为提取溶剂，考察化妆品中dha和dhb的提取效率。
[0081]
市售的含有dha和dhb的化妆品常见的有水剂、乳剂和膏霜剂等，为了考察本发明所建立方法同时测定化妆品中dha和dhb的可行性，本实施例以乳膏为例，对提取溶剂进行筛选。乳膏的制备工艺包括以下步骤：
[0082]
s1、称取硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、液体石蜡、白凡士林及羊毛脂置容器中，于水浴上加热至80℃左右混合熔化，得到a液；
[0083]
s2、另将三乙醇胺、dha、dhb和蒸馏水置容器中，于水浴上亦加热至80℃左右，得到b液；
[0084]
s3、在80℃加温下将b液缓缓倾入a液中，边加边搅拌，直到冷凝，即得乳白色细腻乳膏。
[0085]
其中，含有dha和dhb乳膏的处方如下表所示：
[0086][0087]
具体的，dha和dhb乳膏的测定方法包括：分别精密称取上述含有dha和dhb的乳膏0.5g，各三份，置于10ml具塞量瓶中，精密加入8ml不同浓度的乙醇溶液，涡旋混合器混合2min，再超声波处理15min，加入相应浓度的乙醇溶液至刻度，摇匀，取上清液微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，量取20μl依法进样测定，记录峰面积，按标准曲线计算平行操作的三份样品的平均提取率，结果如表5。
[0088]
表5化妆品乳膏中dha和dhb提取溶剂的优化(n＝3)
[0089]
序号提取溶剂平均提取率150％乙醇溶液78.64％260％乙醇溶液92.53％375％乙醇溶液98.25％490％乙醇溶液97.96％
[0090]
从表5实验结果可以看出，随着提取溶剂中乙醇浓度的提高，样品中dha和dhb的提取率随着增加，但到达75％后不再增加，因此选择75％乙醇溶液作为提取溶剂。
[0091]
实施例5
[0092]
实施例5以乳膏为例，对超声波提取方法的提取时间进行筛选。
[0093]
具体的，含有dha和dhb乳膏的测定方法包括：分别精密称取上述含有dha和dhb的乳膏0.5g，各三份，置于10ml具塞量瓶中，精密加入加入8ml 75％乙醇溶液，涡旋混合器混合2min，再分别用超声波处理10、15和30min，再加入75％乙醇溶液至刻度，摇匀，取上清液微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，量取20μl依法进样测定，记录峰面积，按标准曲线计算平行操作的三份样品的平均提取率，结果如表6：
[0094]
表6化妆品中dha和dhb超声提取时间的优化(n＝3)
[0095]
序号超声波提取时间平均提取率
110min86.93％215min97.58％330min98.27％
[0096]
从实验结果可以看出，随着超声波提取时间的延长，样品中dha和dhb的提取率随着增加，但到达15min后不再增加，因此选择15min作为超声提取时间。
[0097]
实施例6
[0098]
实施例6市场上随机选取3个不同产品配方(美黑凝露、美黑乳液及美黑膏)，采用本发明的上述方法分别进行检测，以dha和dhb对照品溶液保留时间定性，以样品峰面积定量，外标法计算百分含量，具体结果见下表7：
[0099]
表7市售化妆品样品测定结果
[0100]
样品dha含量(％)dhb含量(％)美黑凝露10.823.84美黑乳液3.562.41美黑膏8.771.98
[0101]
从表7实验结果可以看出，dha在化妆产品中应用量相对宽泛，最低为3.56％，最高可多达10.82％，而dhb的添加量分布范围相对小的多，最低为1.98％，最高为3.84％。
[0102]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。