来源于人I型神经纤维瘤病的肿瘤细胞系及其构建方法

技术特征：
1.一种来源于人i型神经纤维瘤病的肿瘤细胞系，其特征在于，所述来源于人i型神经纤维瘤病的肿瘤细胞系保藏于武汉大学保藏中心，保藏中心保藏编号为cctcc no：c2020184。2.根据权利要求1所述的来源于人i型神经纤维瘤病的肿瘤细胞系，其特征在于，所述细胞系标本来源为女性的背部丛状神经纤维瘤。3.一种如权利要求1所述的来源于人i型神经纤维瘤病的肿瘤细胞系的构建方法，其特征在于，所述构建方法是向原代分离的神经纤维瘤细胞转染端粒酶逆转录酶基因和cdk4/m抗原，经单克隆筛选并用dmem培养基传代培养以获得永生化的神经纤维瘤细胞系。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：步骤s1：提供原代神经纤维瘤细胞，对所述原代神经纤维瘤细胞进行培养以得到待转染细胞培养物；步骤s2：以慢病毒悬液和病毒感染增强悬液对待转染细胞培养物进行病毒感染；步骤s3：对经病毒感染后的细胞培养物进行单克隆筛选；步骤s4：对经单克隆筛选后的细胞培养物进行传代培养，以得到永生化的神经纤维瘤细胞系。5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤s1包括：步骤s11：取临床切除的神经纤维瘤组织，制备得到肿瘤细胞悬液；步骤s12：对培养容器进行包被，将所述肿瘤细胞培养在包被后的所述培养容器中；步骤s13：对所述原代肿瘤细胞进行消化传代，以获得待转染细胞培养物。6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤s2包括：步骤s21：以慢病毒悬液和病毒感染增强悬液对所述待转染细胞培养物转染端粒酶逆转录基因，moi值为20～40；步骤s22：再以慢病毒悬液和病毒感染增强悬液对经转染端粒酶逆转录酶基因的细胞培养物转染cdk4/m抗原，moi值为20～40；步骤s23：对经转染cdk4/m抗原的细胞培养物进行培养并传代。7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述病毒感染增强悬液为聚凝胺溶液。8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，所述病毒感染增强悬液工作浓度为5～8μg/ml。9.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤s3包括：步骤s31：将步骤23获得的经培养并传代的细胞培养物以二倍稀释法接种至孔板中，培养后观察孔板中细胞克隆形成的情况，挑选单克隆的细胞孔。10.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤s4包括：步骤s41：每48～72小时更换培养基，细胞长满皿底的70％～80％时进行消化传代。

技术总结
本申请实施例公开了一种来源于人I型神经纤维瘤的肿瘤细胞系及其构建方法。通过向原代分离的神经纤维瘤细胞转染端粒酶逆转录酶基因和CDK4/m抗原，得到具有中国人遗传背景的永生化神经纤维瘤细胞系。生化神经纤维瘤细胞系。生化神经纤维瘤细胞系。


技术研发人员：王智超
受保护的技术使用者：上海交通大学医学院附属第九人民医院
技术研发日：2021.03.01
技术公布日：2022/9/1