高度唾液酸化的多聚体结合分子的制作方法

技术特征：
1.一种多聚体结合分子的单克隆群体，每个结合分子包含十个或十二个igm衍生的重链，其中所述igm衍生的重链包含糖基化的igm重链恒定区，所述恒定区各自与特异性结合靶标的结合结构域缔合，其中每个igm重链恒定区包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个或至少五个天冬酰胺(n)连接的糖基化基序，其中n连接的糖基化基序包含氨基酸序列n-x1-s/t，其中n是天冬酰胺，x1是除脯氨酸以外的任何氨基酸，并且s/t是丝氨酸或苏氨酸，其中每个igm重链恒定区上的所述n连接的糖基化基序中的至少一个、至少两个或至少三个由复合聚糖占据，并且其中所述结合分子的单克隆群体包含每摩尔所述结合分子至少三十五(35)、至少40、至少45、至少50、至少55、至少60或至少65摩尔唾液酸。2.如权利要求1所述的结合分子的单克隆群体，其包含每摩尔结合分子约40至约70、约40至约60、约40至约55、约40至约50、约50至约70、约60至约70摩尔唾液酸。3.如权利要求1所述的结合分子的单克隆群体，其中所述igm重链恒定区是人igm重链恒定区或其变体，其包含从对应于seq id no：1(等位基因ighm*03)或seq id no：2(等位基因ighm*04)的氨基酸46(基序n1)、氨基酸209(基序n2)、氨基酸272(基序n3)、氨基酸279(基序n4)和氨基酸440(基序n5)的氨基酸位置处开始的五个n连接的糖基化基序n-x1-s/t。4.如权利要求1所述的结合分子的单克隆群体，其通过细胞系修饰、体外糖工程化或其任何组合的方法产生。5.如权利要求4所述的结合分子的单克隆群体，其中所述细胞系修饰包括用编码唾液酸转移酶的基因转染产生所述结合分子的单克隆群体的细胞系，从而产生过表达所述唾液酸转移酶的经修饰的细胞系。6.如权利要求4所述的结合分子的单克隆群体，其中体外糖工程化包括使所述结合分子的单克隆群体与可溶性唾液酸转移酶和唾液酸底物接触。7.如权利要求6所述的结合分子的单克隆群体，其中所述唾液酸转移酶包括人β-半乳糖苷α-2，6-唾液酸转移酶1(st6gal1)(seq id no：3)的可溶性变体以及/或者所述唾液酸底物包括胞苷单磷酸-n-乙酰基-神经氨酸(cmp-nana)。8.如权利要求6所述的结合分子的单克隆群体，其中结合分子：唾液酸底物的质量比为约1∶4至约40∶1以及/或者结合分子：唾液酸转移酶的质量比为约80∶1至约5000∶1。9.如权利要求6所述的结合分子的单克隆群体，其中所述结合分子的单克隆群体与所述可溶性唾液酸转移酶和所述唾液酸底物的接触包括在约2℃至约40℃下至少30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、24小时、36小时或48小时的接触。10.如权利要求1所述的结合分子的单克隆群体，其中每个结合分子是分别包含五个或六个二价igm结合单元的五聚体或六聚体igm抗体，其中每个结合单元包含两条igm重链(各自包含位于变体igm恒定区的氨基端的vh)以及两条免疫球蛋白轻链(各自包含位于免疫球蛋白轻链恒定区的氨基端的轻链可变结构域(vl))，并且其中所述vh和vl组合形成特异性地结合至所述靶标的抗原结合结构域。11.如权利要求10所述的结合分子的单克隆群体，其中每个结合分子是五聚体并且还包含j链、或其功能片段、或其功能变体。12.如权利要求11所述的结合分子的单克隆群体，其中所述j链是成熟人j链，其包含氨基酸序列seq id no：6或其功能片段、或其功能变体。13.如权利要求11所述的结合分子的单克隆群体，其中所述变体j链或其功能片段在对
应于seq id no：6的野生型成熟人j链的氨基酸y102的氨基酸位置处包含氨基酸取代。14.如权利要求13所述的结合分子的单克隆群体，其中对应于seq id no：6的y102的氨基酸被丙氨酸(a)取代。15.如权利要求14所述的结合分子的单克隆群体，其中所述j链包含氨基酸序列seq id no：7。16.如权利要求11所述的结合分子的单克隆群体，其中所述j链或其片段或变体是还包含异源部分的经修饰的j链，其中所述异源部分与所述j链或其片段或变体融合或缀合。17.如权利要求16所述的结合分子的单克隆群体，其中所述异源部分是与所述j链或其片段或变体融合的多肽。18.如权利要求17所述的结合分子的单克隆群体，其中所述异源多肽通过包含至少5个氨基酸但不超过25个氨基酸的肽接头与所述j链或其片段或变体融合。19.如权利要求17所述的结合分子的单克隆群体，其中所述异源多肽与所述j链或其片段或变体的n端融合、与所述j链或其片段或变体的c端融合、或与所述j链或其片段或变体的n端和c端两者融合，其中所述与n端和c端两者融合的异源多肽可以相同或不同。20.如权利要求17所述的结合分子的单克隆群体，其中所述异源多肽包含scfv片段。21.如权利要求20所述的结合分子的单克隆群体，其中所述异源scfv片段结合至cd3ε。22.一种药物组合物，其包含如权利要求1至21中任一项所述的结合分子的单克隆群体和药学上可接受的赋形剂。23.一种重组宿主细胞，其产生如权利要求1至21中任一项所述的结合分子的单克隆群体。24.一种产生如权利要求1至21中任一项所述的结合分子的单克隆群体的方法，其包括培养如权利要求22所述的宿主细胞，以及恢复所述结合分子的群体。25.一种用于产生高度唾液酸化的多聚体结合分子的单克隆群体的方法，其包括提供表达所述结合分子的单克隆群体的细胞系、培养所述细胞系以及恢复所述结合分子的单克隆群体，其中每个结合分子包含十个或十二个igm衍生的重链，其中所述igm衍生的重链包含糖基化的igm重链恒定区，所述igm重链恒定区各自与特异性地结合至靶标的结合结构域缔合，其中每个igm重链恒定区包含至少三个、至少四个或至少五个天冬酰胺(n)连接的糖基化基序，其中n连接的糖基化基序包含氨基酸序列n-x1-s/t，其中n是天冬酰胺、x1是除脯氨酸以外的任何氨基酸、并且s/t是丝氨酸或苏氨酸，其中平均所述群体中每个igm重链恒定区上的所述n连接的糖基化基序中的至少一个、至少两个或至少三个由复合聚糖占据，并且其中所述细胞系、恢复过程或其组合经优化以富集复合聚糖，所述复合聚糖包含每个聚糖至少一个、两个、三个或四个唾液酸末端单糖。26.如权利要求25所述的方法，其中所述细胞系、恢复过程或其组合经优化以产生的结合分子的单克隆群体包含每摩尔结合分子至少30、至少35、至少40、至少45、至少50、至少60或至少65摩尔唾液酸；或包含每摩尔结合分子约40至约70、约40至约60、约40至约55、约40至约50、约50至约70、约60至约70摩尔唾液酸。27.如权利要求25所述的方法，其中所述igm重链恒定区衍生自人igm重链恒定区，其包括从对应于seq id no：1(等位基因ighm*03)或seq id no：2(等位基因ighm*04)的氨基酸46(基序n1)、氨基酸209(基序n2)、氨基酸272(基序n3)、氨基酸279(基序n4)和氨基酸440
(基序n5)的氨基酸位置处开始的五个n连接的糖基化基序n-x1-s/t。28.如权利要求25所述的方法，其中所提供的细胞系经修饰以过表达唾液酸转移酶。29.如权利要求25所述的方法，其中所述恢复过程包括使所述结合分子的单克隆群体经受体外糖工程化，其中所述体外糖工程化包括使所述结合分子的单克隆群体与可溶性唾液酸转移酶和唾液酸底物接触。30.如权利要求29所述的方法，其中所述唾液酸转移酶包括人β-半乳糖苷α-2，6-唾液酸转移酶1(st6gal1)(seq id no：3)的可溶性变体以及/或者所述唾液酸底物包括胞苷单磷酸(cmp)-n-乙酰基-神经氨酸(cmp-nana)。31.如权利要求29所述的方法，其中结合分子：唾液酸底物的质量比为约1∶4至约40∶1以及/或者结合分子：唾液酸转移酶的质量比为约80∶1至约5000∶1。32.如权利要求29至31中任一项所述的方法，其中所述结合分子的单克隆群体与所述可溶性唾液酸转移酶和所述唾液酸底物的接触包括在约2℃至约40℃下至少30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、24小时、36小时或48小时的接触。

技术总结
本公开提供了一种高度唾液酸化的多聚体结合分子的单克隆群体，其中所述群体包括IgM抗体、IgM样抗体或其他IgM衍生的结合分子，其中所述结合分子的群体具有比见于正常血清IgM更高水平的唾液酸含量。还提供了用于产生这种高度唾液酸化的多聚体结合分子的单克隆群体的方法。的方法。的方法。


技术研发人员：B
受保护的技术使用者：IGM生物科学股份有限公司
技术研发日：2021.01.05
技术公布日：2022/8/26