无定形磷酸钙复合材料及其制备方法、在口腔中的应用

1.本发明涉及生物材料领域，具体涉及无定形磷酸钙复合材料及其制备方法、在口腔中的应用。


背景技术：

2.龋齿可由细菌感染、外伤或其他因素引起，并且在大多数情况下，龋齿造成的损害不可逆转。作为龋齿的一种，牙本质龋齿可由牙釉质龋齿、牙骨质龋齿或直接由细菌发酵膳食碳水化合物产生的酸性副产物引起。牙本质的化学组成和组织结构与牙釉质有很大的不同，牙本质含有20％的有机物，以胶原为主，并有牙本质小管结构。牙本质的小管结构内容易聚集细菌代谢的酸性副产物，导致化学脱矿和物理破坏，进而造成牙本质龋齿迅速扩散，暴露本应被牙本质小管覆盖的神经，出现疼痛、炎症等临床症状。
3.近年来，利用天冬氨酸、谷氨酸这类酸性氨基酸稳定无定形碳酸钙进而封堵牙本质小管，使牙本质再矿化的研究已非常成熟。专利cn 201610893275.1公开了一种粘接辅助的生物矿化材料，其将氯化钙溶液、磷酸二氢钠和非胶原蛋白类似物混合溶液混合反应，利用聚丙烯酸、聚天冬氨酸，谷氨酸等非胶原蛋白类似物维持无定形磷酸钙(acp)的亚稳态，避免其自发地相变成热力学更稳定的结晶态hap。专利cn201510730463.8公开了一种快速修复脱矿牙本质的方法，其采用聚丙烯酸作为无定形磷酸钙的稳定剂，谷氨酸溶液作为再矿化促进剂以稳定acp并促进再矿化脱矿牙本质。
4.但是，现有的无定形磷酸钙作为封堵牙本质小管的材料，自身并不具备抗菌能力，使得口腔中产酸菌数量过多易导致牙本质修复失败，因此，再矿化的同时进行抗菌处理是非常有必要的。


技术实现要素：

5.本发明的一个目的在于提供可载药的无定形磷酸钙复合材料，其利用聚酰胺-胺型树枝状高分子(pamam)与谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐(glu(obzl)-nca)合成的树枝状聚谷氨酸负载白屈菜红碱，并使负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸稳定其表面的无定形磷酸钙，不仅不会影响聚谷氨酸对无定形磷酸钙的稳定作用、确保再矿化效果，而且在封堵牙本质小管的过程中持续地释放白屈菜红碱，显著地降低了牙本质小管内的细菌，实现了牙本质脱矿后的抗菌、再矿化双重功能。
6.上述目的通过下述技术方案实现：
7.无定形磷酸钙复合材料，所述复合材料的原料包括以下组分：谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐、g2.0聚酰胺-胺型树枝状高分子、硝酸钙、磷酸氢二钾、白屈菜红碱，其中，所述谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐与g2.0聚酰胺-胺型树枝状高分子反应得到用于负载、自组装所述白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸，所述树枝状聚谷氨酸具有式i所示的结构：
[0008][0009]
式i中，n＝10～70。
[0010]
本技术方案中，无定形磷酸钙复合材料的主要原料中，谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐(glu(obzl)-nca)与g2.0聚酰胺-胺型树枝状高分子(g2.0 pamam)反应得到具有式i所示结构式的化合物，该化合物经脱饱和、沉淀、抽滤、真空干燥等后处理后得到树枝状聚谷氨酸。
[0011]
树枝状聚谷氨酸能够利用聚酰胺-胺型树枝状高分子内部的疏水空腔进行载药，负载一定量的白屈菜红碱，并在再矿化牙本质小管的过程中持续释放白屈菜红碱进行杀菌。同时，硝酸钙和磷酸氢二钾在负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸表面形成无定形磷酸钙后，树枝状聚谷氨酸上聚合的谷氨酸具有稳定无定形磷酸钙的作用，并且，更重要的是，负载了白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸不会影响聚谷氨酸对无定形磷酸钙的稳定效果。因此，树枝状聚谷氨酸在负载白屈菜红碱的同时能够稳定无定形磷酸钙，实现了牙本质脱矿后的抗菌、再矿化双重功能。
[0012]
本技术方案中，采用第二代聚酰胺-胺型树枝状高分子作为聚合谷氨酸的树枝状高分子。聚酰胺-胺型树枝状高分子是一类具有明确空间结构的聚合物，随着代数增加其内部疏水空腔增加，0代和1代pamam由于其内部疏水空腔较少，导致载药率过低，2代(g2.0)的pamam的载药率可达到5～10％，而代数更高的pamam内部的疏水空腔更多，载药率更大。但是，虽然载药率更大，由于其外端分支结构的影响，导致树枝状聚谷氨酸的局部羧基浓度下降，螯合钙离子的能力将降低，最终造成稳定无定形磷酸钙的性能减弱。所以，综合考虑载药率和无定形磷酸钙的稳定能力，本技术方案中采用g2.0 pamam。
[0013]
本技术方案中，树枝状聚谷氨酸表面富含的羧基基团除了能够提高无定形磷酸钙的稳定性，还可以提高白屈菜红碱在酸性环境的释药效果。具体地，白屈菜红碱能够在溶液中电离出带正电的季铵盐，部分白屈菜红碱可以与羧基形成静电相互作用。而在口腔龋病这类酸性环境下，白屈菜红碱与树枝状聚谷氨酸之间的静电相互作用将减弱，因此，在药物释放初期，树枝状聚谷氨酸能够增加白屈菜红碱在酸性环境下的释放速度，在早期释放更多的白屈菜红碱以达到更好的抗菌效果。
[0014]
本技术方案中，通过实验发现，白屈菜红碱在负载于树枝状聚谷氨酸的疏水空腔中时，一小部分白屈菜红碱还能够与树枝状聚谷氨酸自组装，这使得无定形磷酸钙复合材料在再矿化牙本质小管的过程中，不仅有大部分的白屈菜红碱释放杀菌，而且小部分的白屈菜红碱能够随着树枝状聚谷氨酸在再矿化过程中进一步杀菌，不仅提高了树枝状聚谷氨酸的载药率，而且能够提供更加持久的杀菌能力。
[0015]
进一步地，树枝状聚谷氨酸的结构中，聚谷氨酸的聚合度n＝20～30。谷氨酸具有
稳定无定形磷酸钙的能力，随着聚合度的升高，聚谷氨酸螯合钙离子的能力增强，其稳定无定形磷酸钙的能力也会增强，将聚谷氨酸接枝到聚酰胺-胺型树枝状高分子端基上后，其稳定能力依然随着聚合度升高而升高。但是，由于聚谷氨酸和白屈菜红碱存在一定的静电相互作用，聚谷氨酸聚合度升高，两者之间结合能力升高，最终有可能导致外部结合的白屈菜红碱暴释，影响了其抗菌性能。因此，本技术方案中，聚谷氨酸的聚合度为20～30，优选地，聚谷氨酸的聚合度为20～25，进一步优选地，聚谷氨酸的聚合度为20。
[0016]
进一步地，所述树枝状聚谷氨酸和白屈菜红碱的质量比为1:2～1:10。本技术方案中，采用的g2.0 pamam的载药率为5～10％，考虑到载药率，以及部分白屈菜红碱和树枝状聚谷氨酸自组装的作用，将树枝状聚谷氨酸和白屈菜红碱的质量比设置为1:2～1:10。
[0017]
进一步地，所述硝酸钙与所述磷酸氢二钾的质量比为3:2。为避免由于钙离子过量或者磷酸根过量生成磷酸八钙或者磷酸氢钙，造成生成的无定形磷酸钙量较少，本技术方案中硝酸钙与磷酸氢二钾的质量比优选采用3:2，使得硝酸钙与磷酸氢二钾能够在负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸上生成更多的无定形磷酸钙。
[0018]
本发明的另一个目的在于提供前述任一种无定形磷酸钙复合材料的制备方法，该制备方法操作简便、条件温和、成本低，易于实现工业化生产。
[0019]
上述目的通过下述技术方案实现：
[0020]
一种无定形磷酸钙复合材料的制备方法，所述制备方法具体包括以下步骤：
[0021]
(a)谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶液和g2.0聚酰胺-胺型树枝状高分子溶液反应得到树枝状聚谷氨酸；
[0022]
(b)混合搅拌所述树枝状聚谷氨酸与白屈菜红碱，透析后得到负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸；
[0023]
(c)向所述负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸中加入硝酸钙、磷酸氢二钾，得到所述无定形磷酸钙复合材料。
[0024]
本技术方案中，谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶液和g2.0聚酰胺-胺型树枝状高分子溶液反应得到树枝状聚谷氨酸。之后将树枝状聚谷氨酸及白屈菜红碱溶解后放入透析袋，保持一段时间后取出透析袋中的液体，离心取上清液，冻干后即得到负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸。随后向负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸加入硝酸钙、磷酸氢二钾，在树枝状聚谷氨酸的表面形成无定形磷酸钙，最终得到用于口腔的可载药无定形磷酸钙复合材料。
[0025]
进一步地，所述步骤(a)包括以下步骤：
[0026]
(a1)谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶解于二氯甲烷得到谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶液，g2.0聚酰胺-胺型树枝状高分子溶解于二氯甲烷得到g2.0聚酰胺-胺型树枝状高分子溶液，混合所述谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶液和g2.0聚酰胺-胺型树枝状高分子溶液，反应得到中间产物；
[0027]
(a2)所述中间产物溶解于三氟乙酸得到中间产物溶液，向所述中间产物溶液中添加溴化氢溶液得到第一混合溶液；
[0028]
(a3)采用冰乙醚沉淀抽滤所述第一混合溶液，真空干燥后获得所述树枝状聚谷氨酸。
[0029]
本技术方案中，在将谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐、g2.0聚酰胺-胺型树枝状高分
子用二氯甲烷溶解后，将两种溶液进行混合进行反应，反应结束后旋蒸即得到结构式如式i所示的中间产物。接下来，将中间产物溶于三氟乙酸，再将溴化氢溶于乙酸后添加至中间产物溶液得到第一混合溶液。随后，用并乙醚沉淀抽滤第一混合溶液，真空干燥得到树枝状聚谷氨酸。
[0030]
进一步地，所述步骤(b)包括以下步骤：
[0031]
(b1)树枝状聚谷氨酸溶解于二甲基甲酰胺中得到树枝状聚谷氨酸溶液，白屈菜红碱溶解于二甲基甲酰胺中得到白屈菜红碱溶液；
[0032]
(b2)混合所述树枝状聚谷氨酸溶液和白屈菜红碱溶液得到第二混合溶液；
[0033]
(b3)透析第二混合溶液，对透析得到的液体离心得到上清液；
[0034]
(b4)冻干所述上清液，制得负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸。
[0035]
本技术方案中，将树枝状聚谷氨酸、白屈菜红碱溶解于dmf后，混合树枝状聚谷氨酸溶液和白屈菜红碱溶液，充分搅拌得到第二混合溶液，将第二混合溶液放入透析袋透析，保持一段时间后，取出透析袋中液体，离心取上清液，冻干上清液后得到负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸。将树枝状聚谷氨酸及白屈菜红碱溶于dmf中放入透析后，白屈菜红碱通过内部疏水空腔进行载药，在dmf与水置换过程中，树枝状聚谷氨酸与白屈菜红碱发生了组装过程。
[0036]
进一步地，所述步骤(c)包括以下步骤：
[0037]
(c1)将硝酸钙和负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸溶解于水中得到第三混合溶液；
[0038]
(c2)向所述第三混合溶液中加入磷酸氢二钾水溶液，混匀后得到第四混合溶液；
[0039]
(c3)离心所述第四混合液，去除上清液后烘干，制得所述无定形磷酸钙复合材料。
[0040]
本技术方案中，将硝酸钙和包载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸溶解到水中并充分混合得到第三混合溶液，将磷酸氢二钾加入水中充分振荡得到磷酸氢二钾水溶液，将磷酸氢二钾水溶液缓慢加入至第三混合溶液中充分搅拌得到第四混合溶液，将第四混合溶液离心，去除上清液，烘干，得到用于口腔的可载药无定形磷酸钙复合材料。
[0041]
进一步地，所述负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸与所述硝酸钙的质量比为1:3～1:5。本技术方案中，该比值范围使得溶液中的羧酸根含量更加合适，若负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸的含量过低，不易生成无定形磷酸钙，而会生成部分羟基磷灰石，而负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸含量过高又会造成原料的浪费。
[0042]
本发明的又一个目的在于提供前述任一种无定形磷酸钙复合材料在牙本质再矿化和抗菌中的应用。
[0043]
具体地，所述应用包括以下步骤：将所述无定形磷酸钙复合材料溶解于水中得到无定形磷酸钙复合材料溶液，将所述无定形磷酸钙复合材料溶液与酸蚀的牙本质接触，以对酸蚀的牙本质接触进行再矿化，并在再矿化的过程中抗菌。
[0044]
本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
[0045]
1、本发明提供的用于口腔的可载药无定形磷酸钙复合材料能够利用树枝状聚谷氨酸的疏水空腔负载白屈菜红碱，并在再矿化牙本质小管的过程中持续释放白屈菜红碱进行杀菌，同时，树枝状聚谷氨酸的聚谷氨酸能够稳定无定形磷酸钙，且载药后并未影响无定形磷酸钙的矿化效果，实现了牙本质脱矿后的抗菌、再矿化双重功能；
[0046]
2、本发明综合考虑pamam的载药率，以及其外端分支结构对局部羧基浓度的影响易造成稳定无定形磷酸钙的性能减弱的问题，选用2代pamam作为聚合谷氨酸的树枝状高分子；
[0047]
3、本发明能够在口腔龋病这类酸性环境下，在药物释放初期增加白屈菜红碱的释放速度，在早期释放更多的白屈菜红碱以达到更好的抗菌效果，从而能够进一步提高无定形磷酸钙复合材料的再矿化效果；
[0048]
4、本发明的无定形磷酸钙复合材料中，部分白屈菜红碱还能够与树枝状聚谷氨酸自组装，使得再矿化牙本质小管的过程中不仅有大部分的白屈菜红碱释放杀菌，而且小部分的白屈菜红碱能够随着树枝状聚谷氨酸在再矿化过程中进一步杀菌，不仅提高了树枝状聚谷氨酸的载药率，而且能够提供更加持久的杀菌能力；
[0049]
5、本发明提供的无定形磷酸钙复合材料的制备方法操作简便、条件温和、成本低，易于实现工业化生产。
附图说明
[0050]
此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解，构成本技术的一部分，并不构成对本发明实施例的限定。在附图中：
[0051]
图1为本发明具体实施例中合成的树枝状聚谷氨酸的核磁氢谱图；
[0052]
图2为本发明具体实施例中无定形磷酸钙复合材料中白屈菜红碱与树枝状聚谷氨酸自组装的扫描电镜图；
[0053]
图3为本发明具体实施例中无定形磷酸钙复合材料在ph＝5.5和ph＝7.4时的释药曲线；
[0054]
图4示出了本发明具体实施例中(a)未负载白屈菜红碱的无定形磷酸钙复合材料(b)负载有白屈菜红碱的无定形磷酸钙复合材料作用于牙本质表面的抗菌情况；
[0055]
图5示出了本发明具体实施例中(a)酸蚀后的牙本质(b)酸蚀后自然矿化7天后的牙本质(c)采用无定形磷酸钙复合材料处理7天后的牙本质表面矿化情况。
具体实施方式
[0056]
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
[0057]
本发明所有原料，对其来源没有特别限制，在市场上购买的或按照本领域技术人员熟知的常规方法即可制备。
[0058]
本发明所有原料，对其纯度没有特别限制，本发明优选采用分析纯或生物材料领域常规的纯度要求。
[0059]
本发明所有原料，其牌号和简称均属于本领域常规牌号和简称，每个牌号和简称在其相关用途的领域内均是清楚明确的，本领域技术人员根据牌号、简称以及相应的用途，能够从市售中购买得到或者通过常规方法制备得到。
[0060]
实施例1：
[0061]
制备树枝状聚谷氨酸
[0062]
本实施例中，采用谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐与g2.0聚酰胺-胺型树枝状高分子合成聚合度为20的树枝状聚谷氨酸。具体地：
[0063]
(1)在手套箱中，称取2.12g谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐至250ml shlenk管中，管中先放入一个搅拌子，三抽三通，用重蒸的二氯甲烷溶解；
[0064]
(2)取25ml shlenk管中加入搅拌子、81.6mg(nca与氨基比为20)g2.0-pamam树枝状大分子，三抽三通，用重蒸的二氯甲烷溶解后进行转移；
[0065]
(3)快速将步骤(2)中所得分散在二氯甲烷中的g2.0-pamam树枝状大分子溶液转移至步骤(1)中所得溶液，反应五小时；
[0066]
(4)实验结束后，抽滤除去注射溶剂时带入的橡胶塞，然后旋蒸除去二氯甲烷真空干燥，得到聚合度为20的树枝状聚谷氨酸g2.0-g-pblg20；
[0067]
(5)将步骤(4)所得g2.0-g-pblg20加入500ml三口瓶中，加入搅拌子，三抽三通后，加入三氟乙酸溶解为黄色透明液体，其中，加入的三氟乙酸的质量为g2.0-g-pblg20的质量的10倍；
[0068]
(6)3min后缓慢加入溴化氢的乙酸溶液至步骤(5)所得黄色透明液体，反应四小时，其中，溴化氢为乙酸的5倍摩尔量；
[0069]
(7)用冰乙醚沉淀并抽滤三次步骤(6)所得溶液，真空干燥得到黄色固体，即为树枝状聚谷氨酸，其中，树枝状聚谷氨酸的结构式如式1所示，其中，n＝20。
[0070][0071]
1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ4.35(s,1h),2.35(s,2h),2.11(d,j＝32.7,2h)
[0072]
实施例2～6：
[0073]
制备无定形磷酸钙复合材料
[0074]
利用实施例1制得的树枝状聚谷氨酸制备无定形磷酸钙复合材料。
[0075]
实施例2：
[0076]
(a)将2mg的白屈菜红碱加入到2ml的二甲基甲酰胺溶液中，用封口胶封口，在磁力搅拌器上搅拌12小时，形成均匀的混合溶液；
[0077]
(b)将4mg的树枝状聚谷氨酸加入到3ml的二甲基甲酰胺溶液中，用封口胶封口，在磁力搅拌器上搅拌12小时，形成均匀的混合溶液；
[0078]
(c)室温下，将3ml步骤(a)形成的均匀混合溶液迅速转移至2ml步骤(b)的混合溶液中，使用1ml的二甲基甲酰胺润洗三次，并在磁力搅拌器上搅拌4小时，充分混合；
[0079]
(d)将8ml步骤(c)得到的混合溶液快速转移至分子量1000的透析袋中，透析8小时，每间隔2小时换透析水，得到透析后的负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸混合溶液；
[0080]
(e)将透析后的负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸混合溶液在10000r/min的转速
下离心三次，取上清液；
[0081]
(f)将步骤(e)所得的上清液冻干，得到负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸；
[0082]
(g)称取15mg步骤(f)所得负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸与66mg硝酸钙溶解至25ml水中；
[0083]
(h)称取26.4mg磷酸氢二钾溶解于25ml水中；
[0084]
(i)将步骤(h)所得水溶液缓慢滴加至步骤(g)所得混合溶液中，充分搅拌；
[0085]
(j)将步骤(i)所得溶液转移至离心管，在3600r/min的转速下离心三次，去除上清液，放入真空干燥箱中烘干，得到负载白屈菜红碱的无定形磷酸钙复合材料。
[0086]
实施例3：
[0087]
(a)将3mg的白屈菜红碱加入到2ml的二甲基甲酰胺溶液中，用封口胶封口，在磁力搅拌器上搅拌12小时，形成均匀的混合溶液；
[0088]
(b)将8mg的树枝状聚谷氨酸加入到3ml的二甲基甲酰胺溶液中，用封口胶封口，在磁力搅拌器上搅拌12小时，形成均匀的混合溶液；
[0089]
(c)室温下，将3ml步骤(a)形成的均匀混合溶液迅速转移至2ml步骤(b)的混合溶液中，使用1ml的二甲基甲酰胺润洗三次，并在磁力搅拌器上搅拌4小时，充分混合；
[0090]
(d)将8ml步骤(c)得到的混合溶液快速转移至分子量1000的透析袋中，透析8小时，每间隔2小时换透析水，得到透析后的负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸混合溶液；
[0091]
(e)将透析后的负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸混合溶液在10000r/min的转速下离心三次，取上清液；
[0092]
(f)将步骤(e)所得的上清液冻干，得到负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸；
[0093]
(g)称取70mg步骤(13)所得负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸与330mg硝酸钙溶解至125ml水中；
[0094]
(h)称取132mg磷酸氢二钾溶解于125ml水中；
[0095]
(i)将步骤(h)所得水溶液缓慢滴加至步骤(g)所得混合溶液中，充分搅拌；
[0096]
(j)将步骤(i)所得溶液转移至离心管，在3600r/min的转速下离心三次，去除上清液，放入真空干燥箱中烘干，得到负载白屈菜红碱的无定形磷酸钙复合材料。
[0097]
实施例4：
[0098]
(a)将5mg的白屈菜红碱加入到5ml的二甲基甲酰胺溶液中，用封口胶封口，在磁力搅拌器上搅拌12小时，形成均匀的混合溶液；
[0099]
(b)将15mg的树枝状聚谷氨酸加入到10ml的二甲基甲酰胺溶液中，用封口胶封口，在磁力搅拌器上搅拌12小时，形成均匀的混合溶液；
[0100]
(c)室温下，将3ml步骤(a)形成的均匀混合溶液迅速转移至2ml步骤(b)的混合溶液中，使用1ml的二甲基甲酰胺润洗三次，并在磁力搅拌器上搅拌4小时，充分混合；
[0101]
(d)将8ml步骤(c)得到的混合溶液快速转移至分子量1000的透析袋中，透析8小时，每间隔2小时换透析水，得到透析后的负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸混合溶液；
[0102]
(e)将透析后的负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸混合溶液在10000r/min的转速下离心三次，取上清液；
[0103]
(f)将步骤(e)所得的上清液冻干，得到负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸；
[0104]
(g)称取400mg步骤(f)所得负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸与1652mg硝酸钙溶
解至250ml水中；
[0105]
(h)称取660mg磷酸氢二钾溶解于250ml水中；
[0106]
(i)将步骤(h)所得水溶液缓慢滴加至步骤(g)所得混合溶液中，充分搅拌；
[0107]
(j)将步骤(i)所得溶液转移至离心管，在3600r/min的转速下离心三次，去除上清液，放入真空干燥箱中烘干，得到负载白屈菜红碱的无定形磷酸钙复合材料。
[0108]
实施例5：
[0109]
(a)将5mg的白屈菜红碱加入到5ml的二甲基甲酰胺溶液中，用封口胶封口，在磁力搅拌器上搅拌12小时，形成均匀的混合溶液；
[0110]
(b)将25mg的树枝状聚谷氨酸加入到10ml的二甲基甲酰胺溶液中，用封口胶封口，在磁力搅拌器上搅拌12小时，形成均匀的混合溶液；
[0111]
(c)室温下，将3ml步骤(a)形成的均匀混合溶液迅速转移至2ml步骤(b)的混合溶液中，使用1ml的二甲基甲酰胺润洗三次，并在磁力搅拌器上搅拌4小时，充分混合；
[0112]
(d)将8ml步骤(c)得到的混合溶液快速转移至分子量1000的透析袋中，透析8小时，每间隔2小时换透析水，得到透析后的负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸混合溶液；
[0113]
(e)将透析后的负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸混合溶液在10000r/min的转速下离心三次，取上清液；
[0114]
(f)将步骤(e)所得的上清液冻干，得到负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸；
[0115]
(g)称取400mg步骤(f)所得负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸与2000mg硝酸钙溶解至300ml水中；
[0116]
(h)称取660mg磷酸氢二钾溶解于250ml水中；
[0117]
(i)将步骤(h)所得水溶液缓慢滴加至步骤(g)所得混合溶液中，充分搅拌；
[0118]
(j)将步骤(i)所得溶液转移至离心管，在3600r/min的转速下离心三次，去除上清液，放入真空干燥箱中烘干，得到负载白屈菜红碱的无定形磷酸钙复合材料。
[0119]
实施例6：
[0120]
(a)将5mg的白屈菜红碱加入到5ml的二甲基甲酰胺溶液中，用封口胶封口，在磁力搅拌器上搅拌12小时，形成均匀的混合溶液；
[0121]
(b)将20mg的树枝状聚谷氨酸加入到10ml的二甲基甲酰胺溶液中，用封口胶封口，在磁力搅拌器上搅拌12小时，形成均匀的混合溶液；
[0122]
(c)室温下，将3ml步骤(a)形成的均匀混合溶液迅速转移至2ml步骤(b)的混合溶液中，使用1ml的二甲基甲酰胺润洗三次，并在磁力搅拌器上搅拌4小时，充分混合；
[0123]
(d)将8ml步骤(c)得到的混合溶液快速转移至分子量1000的透析袋中，透析8小时，每间隔2小时换透析水，得到透析后的负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸混合溶液；
[0124]
(e)将透析后的负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸混合溶液在10000r/min的转速下离心三次，取上清液；
[0125]
(f)将步骤(e)所得的上清液冻干，得到负载有白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸；
[0126]
(g)称取400mg步骤(f)所得负载白屈菜红碱的树枝状聚谷氨酸与1652mg硝酸钙溶解至250ml水中；
[0127]
(h)称取1101mg磷酸氢二钾溶解于250ml水中；
[0128]
(i)将步骤(h)所得水溶液缓慢滴加至步骤(g)所得混合溶液中，充分搅拌；
[0129]
(j)将步骤(i)所得溶液转移至离心管，在3600r/min的转速下离心三次，去除上清液，放入真空干燥箱中烘干，得到负载白屈菜红碱的无定形磷酸钙复合材料。
[0130]
如图2所示，无定形磷酸钙复合材料中，部分白屈菜红碱与树枝状聚谷氨酸进行了自组装。
[0131]
无定形磷酸钙复合材料的性能测试：
[0132]
性能测试中，采用实施例6中制得的无定形磷酸钙复合材料。
[0133]
将0.5mg无定形磷酸钙复合材料溶解至1ml醋酸缓冲液中，放入分子量500的透析袋，将透析袋放入25ml醋酸缓冲液中，间隔4小时取样测定释药曲线。测试结果如图3所示，在10小时内，ph＝5.5的环境下的白屈菜红碱释放率较ph＝7.4的环境下的释放率更高，表明无定形磷酸钙复合材料在口腔龋病这类酸性环境下，能够更快地释放白屈菜红碱以达到更好的抗菌效果。
[0134]
将1mg无定形磷酸钙复合材料溶解于1ml水中，取25μl溶液滴加到牙本质表面，待自然干燥后，扣到含有变异链球菌的培养基表面，24小时后观察抑菌圈，对照样采用未负载白屈菜红碱的无定形碳酸钙复合材料，实验条件相同，于24小时后观察抑菌圈。试验结果如图4(a)和图4(b)所示，在图4(b)中，经无定形磷酸钙复合材料处理后的牙本质周围形成有明显的抑菌圈，而对照样的周围未形成抑菌圈。
[0135]
将1mg无定形磷酸钙复合材料分散于1ml水中，取50μl溶液滴加到牙本质表面，连续处理7天，观察酸蚀后牙本质、酸蚀后自然矿化七天、及无定形磷酸钙处理7天后的矿化情况。如图5(a)至图5(c)所示，经无定形磷酸钙处理7天后，再矿化效果良好，反映出载药的无定形磷酸钙复合材料不仅不会对稳定无定形磷酸钙造成负面影响，而且利用白屈菜红碱在再矿化过程中的杀菌能力，进一步促进了无定形磷酸钙复合材料的再矿化能力。
[0136]
本文中所使用的“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等(例如第一混合溶液、第二混合溶液、第三混合溶液、第四混合溶液等)只是为了描述清楚起见而对相应部件进行区别，不旨在限制任何次序或者强调重要性等。
[0137]
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。