嘧啶衍生物、其制备方法及其在医药上的应用与流程

1.本公开属于医药领域，涉及一种嘧啶衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。特别地，本公开涉及通式(i)所示的嘧啶衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物，以及其作为cdk7抑制剂在治疗cdk7活性相关的疾病或病症的用途。


背景技术：

2.细胞周期蛋白激酶(cdk)是激酶中的一个重要类别，并且在癌细胞的分裂增殖和致癌基因转录调控中具有重要的作用，目前发现的细胞周期蛋白激酶(cdk)具有超过20个亚型，由于cdk家族成员激酶结构域的序列和结构相似性，因此，对各个亚型进行选择性地精准调控是一个重要挑战。
3.细胞周期蛋白依赖性激酶7(cdk7)是一种cdk家族的特殊成员，在细胞分裂调控和转录调控中具有双重功能。cdk7与细胞周期蛋白h和mat1结合形成三聚化细胞周期蛋白活化激酶(cak)，该激酶通过对细胞周期控制的相关cdk(包括cdk1,cdk2,cdk4,cdk6)进行磷酸化来激活相应cdk激酶的活性完成对细胞周期的调控。cdk7也作为常见转录因子ii h(tfiih)的组成部分参与转录的辅助调节，它通过rna聚合酶ii(rnapii)的rbp1亚单位的磷酸化牵涉转录起始过程，然后通过对cdk9复合物的磷酸化可以调控转录的延伸。
4.癌症的重要特征是细胞增殖不受控制和转录失调，因此同时抑制转录和细胞周期进程的cdk7抑制剂是治疗癌症理论上比较可行的作用靶点，目前尚未有该靶点选择性调控的药物上市。我们设想发展一种高选择性的cdk7抑制剂来治疗cdk7活性相关的疾病。
5.公开的cdk7抑制剂专利申请包括wo2016058544a1、wo2018013867a1、wo2019143719a1、wo2019143730a1、wo2019099298a1、wo2020093006a1和wo2020093011a1等。


技术实现要素：

6.本公开的目的在于提供一种通式(i)所示的化合物或其可药用的盐：
[0007][0008]
其中：
[0009]
g为cr
1d
或n原子；
[0010]r1d
选自-p(o)r
mrn
、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、羟基和羟烷基；
[0011]rm
和rn相同或不同，且各自独立地为甲基或乙基；
[0012]
y为cr
2a
或n原子；
[0013]r1a
、r
1b
和r
1c
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0014]
r2选自氢原子、烷基、卤代烷基、羟烷基、环烷基和杂环基；
[0015]r2a
选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基和杂环基；
[0016]
r3选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基和杂环基；
[0017]
r4选自羟基、烷氧基和nr
srt
；
[0018]rs
和r
t
相同或不同，且各自独立地为氢原子或烷基；
[0019]
r6、r7、r
12
和r
13
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0020]
r5、r8、r9、r
10
和r
11
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0021]
或者r4和r5、r4和r6、r4和r8、r8和r9、r9和r
10
、r
10
和r
11
中的一对与其相连的碳原子形成环烷基或杂环基，所述的环烷基或杂环基各自独立地任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、羟基和羟烷基中的一个或多个所取代。
[0022]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中g为cr
1d
；r
1d
为-p(o)r
mrn
；rm和rn如通式(i)中所定义。
[0023]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中y为cr
2a
；r
2a
选自氢原子、c
1-6
烷基和c
1-6
卤代烷基；优选地，r
2a
为氢原子。
[0024]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中r2选自氢原子、c
1-6
烷基和c
1-6
卤代烷基；优选地，r2为氢原子。
[0025]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中y为cr
2a
；r
2a
选自氢原子、c
1-6
烷基和c
1-6
卤代烷基；和/或，r2选自氢原子、c
1-6
烷基和c
1-6
卤代烷基。
[0026]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中r6、r7、r
10
、r
11
、r
12
和r
13
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
卤代烷氧基、羟基和c
1-6
羟烷基；优选地，r6、r7、r
10
、r
11
、r
12
和r
13
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素和c
1-6
烷基；更优选，r6、r7、r
10
、r
11
、r
12
和r
13
均为氢原子。
[0027]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其为通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐：
[0028][0029]
其中：
[0030]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(i)中所定义。
[0031]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)或通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐，其为通式(ii-1)所示的化合物或其可药用的盐：
[0032][0033]
其中：
[0034]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(i)中所定义。
[0035]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)或通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐，其为通式(ii-2)所示的化合物或其可药用的盐：
[0036][0037]
其中：
[0038]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(i)中所定义。
[0039]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)和通式(ii-1)所示的化合物或其可药用的盐，其为通式(iii-1)或通式(iii-2)所示的化合物或其可药用的盐，
[0040][0041]
其中：
[0042]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(i)中所定义；条件为，r4和r5不同。
[0043]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)和通式(ii-2)所示的化合物或其可药用的盐，其为通式(iv-1)或通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，
[0044][0045]
其中：
[0046]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(i)中所定义；条件为，r4和r5不同。
[0047]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)和通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，其中r4为羟基。
[0048]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)和通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，其中r5为氢原子。
[0049]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)和通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，其中r4为羟基；且r5为氢原子。
[0050]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)和通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，其中r4和r5与其相连的碳原子形成3至8元环烷基或3至8元杂环基，所述的3至8元环烷基或3至8元杂环基各自独立地任选被选自卤素、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
卤代烷氧基、氰基、氨基、羟基和c
1-6
羟烷基中的一个或多个所取代；优选地，r4和r5与其相连的碳原子形成3至8元杂环基；更优选，r4和r5与其相连的碳原子形成3至8元含有1个氮原子的杂环基。
[0051]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)和通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，其中rm和rn为甲基。
[0052]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)和通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，其中r
1a
为氰基。
[0053]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)和通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，其中r
1b
和r
1c
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素和c
1-6
烷基；优选地，r
1b
和r
1c
均为氢原子。
[0054]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)和通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，其中r
1a
为氰基；且r
1b
和r
1c
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素和c
1-6
烷基；优选地，r
1a
为氰基；且r
1b
和r
1c
均为氢原子。
[0055]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)和通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，其中r3为c
1-6
烷基或c
1-6
卤代烷基；优选地，r3为c
1-6
卤代烷基；更优选地，r3为三氟甲基。
[0056]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)和通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，其中r8和r9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素和c
1-6
烷基；优选地，r8和r9相同或不同，且各自独立地为氢原子或甲基；更优选地，r8和r9均为氢原子。
[0057]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中：g为cr
1d
；r
1d
为-p(o)r
mrn
；rm和rn为甲基；y为cr
2a
；r
2a
选自氢原子、c
1-6
烷基和c
1-6
卤代烷基；r
1a
为氰基；r
1b
和r
1c
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素和c
1-6
烷基；r2为氢原子；r3为c
1-6
卤代烷基；r4为羟基；r5为氢原子；r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
和r
13
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素和c
1-6
烷基。
[0058]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中：g为cr
1d
；r
1d
为-p(o)r
mrn
；rm和rn为甲基；y为cr
2a
；r
2a
选自氢原子、c
1-6
烷基和c
1-6
卤代烷基；r
1a
为氰基；r
1b
和r
1c
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素和c
1-6
烷基；r2为氢原子；r3为c
1-6
卤代烷基；r4和r5与其相连的碳原子形成3至8元含有1个氮原子的杂环基；r6、r7、r8、r9、r
10
、r
11
、r
12
和r
13
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素和c
1-6
烷基。
[0059]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)或通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，其中：rm和rn为甲基；r
1a
为氰基；r
1b
和r
1c
均为氢原子；r3为c
1-6
卤代烷基；r4为羟基；r5为氢原子；r8和r9均为氢原子。
[0060]
表a 本公开的典型化合物包括但不限于：
[0061]
[0062][0063]
本公开的另一方面涉及通式(ia)所示的化合物或其盐：
[0064][0065]
其中：
[0066]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0067]
y、r
1a
、r
1b
、r
1c
和r2至r
13
如通式(i)中所定义。其为制备通式(i)所示的化合物的中间体。
[0068]
本公开的另一方面涉及通式(iia)所示的化合物或其盐：
[0069][0070]
其中：
[0071]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0072]r1a
、r
1b
、r
1c
、r3、r4、r5、r8和r9如通式(ii)中所定义。其为制备通式(ii)所示的化合物的中间体。
[0073]
本公开的另一方面涉及通式(ii-1a)所示的化合物或其盐：
[0074][0075]
其中：
[0076]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0077]r1a
、r
1b
、r
1c
、r3、r4、r5、r8和r9如通式(ii-1)中所定义。其为制备通式(ii-1)所示的化合物的中间体。
[0078]
本公开的另一方面涉及通式(ii-2a)所示的化合物或其盐：
[0079][0080]
其中：
[0081]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0082]r1a
、r
1b
、r
1c
、r3、r4、r5、r8和r9如通式(ii-2)中所定义。其为制备通式(ii-2)所示的化合物的中间体。
[0083]
本公开的另一方面涉及通式(iii-1a)所示的化合物或其盐：
[0084][0085]
其中：
[0086]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0087]r1a
、r
1b
、r
1c
、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iii-1)中所定义。其为制备通式(iii-1)所示的化合物的中间体。
[0088]
本公开的另一方面涉及通式(iii-2a)所示的化合物或其盐：
[0089][0090]
其中：
[0091]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0092]r1a
、r
1b
、r
1c
、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iii-2)中所定义。其为制备通式(iii-2)所示的化合物的中间体。
[0093]
本公开的另一方面涉及通式(iv-1a)所示的化合物或其盐：
[0094][0095]
其中：
[0096]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0097]r1a
、r
1b
、r
1c
、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iv-1)中所定义。其为制备通式(iv-1)所示的化合物的中间体。
[0098]
本公开的另一方面涉及通式(iv-2a)所示的化合物或其盐：
[0099][0100]
其中：
[0101]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0102]r1a
、r
1b
、r
1c
、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iv-2)中所定义。其为制备通式(iv-2)所示的化合物的中间体。
[0103]
表b 本公开的典型中间体化合物包括但不限于：
[0104]
[0105]
[0106][0107]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(i)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
[0108][0109]
通式(ia)所示的化合物或其盐与r
1d-h发生偶联反应，得到通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，
[0110]
其中：
[0111]
g为cr
1d
；
[0112]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0113]
y、r
1a
、r
1b
、r
1c
、r
1d
和r2至r
13
如通式(i)中所定义。
[0114]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
[0115][0116]
通式(iia)所示的化合物或其盐与r
1d-h发生偶联反应，得到通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐，
[0117]
其中：
[0118]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0119]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(ii)中所定义。
[0120]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(ii-1)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
[0121][0122]
通式(ii-1a)所示的化合物或其盐与r
1d-h发生偶联反应，得到通式(ii-1)所示的化合物或其可药用的盐，
[0123]
其中：
[0124]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0125]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(ii-1)中所定义。
[0126]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(ii-2)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
[0127][0128]
通式(ii-2a)所示的化合物或其盐与r
1d-h发生偶联反应，得到通式(ii-2)所示的化合物或其可药用的盐，
[0129]
其中：
[0130]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0131]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(ii-2)中所定义。
[0132]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(iii-1)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
[0133][0134]
通式(iii-1a)所示的化合物或其盐与r
1d-h发生偶联反应，得到通式(iii-1)所示的化合物或其可药用的盐，
[0135]
其中：
[0136]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0137]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iii-1)中所定义。
[0138]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(iii-2)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
[0139][0140]
通式(iii-2a)所示的化合物或其盐与r
1d-h发生偶联反应，得到通式(iii-2)所示的化合物或其可药用的盐，
[0141]
其中：
[0142]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0143]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iii-2)中所定义。
[0144]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(iv-1)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
[0145][0146]
通式(iv-1a)所示的化合物或其盐与r
1d-h发生偶联反应，得到通式(iv-1)所示的化合物或其可药用的盐，
[0147]
其中：
[0148]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0149]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iv-1)中所定义。
[0150]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐的方法，该方法包括：
[0151][0152]
通式(iv-2a)所示的化合物或其盐与r
1d-h发生偶联反应，得到通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，
[0153]
其中：
[0154]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0155]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iv-2)中所定义。
[0156]
本公开的另一方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物含有本公开通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)、通式(iv-2)和表a中所示的化合物或其可药用的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形
剂。
[0157]
本公开进一步涉及通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)、通式(iv-2)和表a中所示的化合物或其可药用的盐、或包括其的药物组合物在制备用于抑制cdk的药物中的用途；优选地，其中所述的cdk为cdk7。
[0158]
本公开进一步涉及通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)、通式(iv-2)和表a中所示的化合物或其可药用的盐、或包括其的药物组合物在制备用于治疗和/或预防与cdk7异常活性相关的疾病或病症的药物中的用途；优选地，所述的疾病或病症为癌症。
[0159]
本公开进一步涉及通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)、通式(iv-2)和表a中所示的化合物或其可药用的盐、或包括其的药物组合物在制备用于治疗和/或预防疾病或病症的药物中的用途；其中所述的疾病或病症优选为癌症；所述癌症优选选自乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、阴道癌、输卵管癌、宫颈癌、肾癌、膀胱癌、尿路上皮癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸癌、结直肠癌、肉瘤、骨癌、多发性骨髓瘤、白血病、粘液瘤、横纹肌瘤、平滑肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤、畸胎瘤、咽喉癌、鼻咽癌、口腔癌、肺癌、肺泡癌、淋巴瘤、间皮瘤、小肠癌、胃癌、食道癌、胰腺癌、肝癌、胆管癌、神经纤维瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、皮肤癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌、甲状腺癌、头颈癌、唾液腺癌和胃肠道间质瘤。优选地，其中所述的淋巴瘤选自霍奇金氏疾病和非霍奇金淋巴瘤(例如套细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡中心淋巴瘤、边缘区b细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤和外周t细胞淋巴瘤)；其中所述的肺癌为非小细胞肺癌(nsclc)(包括鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌等)或小细胞肺癌(sclc)；其中所述的肾癌选自肾细胞癌、透明细胞和肾嗜酸细胞瘤；其中所述的白血病选自慢性淋巴细胞性白血病(cll)、急性成淋巴细胞性白血病(all)、t-细胞急性成淋巴细胞性白血病(t-all)、慢性髓细胞性白血病(cml)和急性骨髓性白血病(aml)；其中所述的结直肠癌为结肠癌或直肠癌；其中所述的肉瘤为软骨肉瘤。
[0160]
本公开进一步涉及一种抑制cdk的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)、通式(iv-2)和表a所示的化合物或其可药用的盐、或包括其的药物组合物；优选地，其中所述的cdk激酶为cdk7激酶。
[0161]
本公开进一步涉及一种治疗和/或预防与cdk7异常活性相关的疾病或病症的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)、通式(iv-2)和表a所示的化合物或其可药用的盐、或包括其的药物组合物；优选地，所述的疾病或病症为癌症。
[0162]
本公开进一步涉及一种治疗和/或预防疾病或病症的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)、通式(iv-2)和表a所示的化合物或其可药用的盐、或包括其的药物组合物。其中所述的疾病或病症优选为癌症，所述癌症优选选自乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、阴道癌、输卵管癌、宫颈癌、肾癌、膀胱癌、尿路上皮癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸癌、结直肠癌、肉瘤、骨癌、多发性骨髓瘤、白血病、粘液瘤、横纹肌瘤、平滑肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤、畸胎瘤、咽喉癌、鼻咽癌、口腔癌、肺癌、肺泡癌、淋巴瘤、间皮瘤、小肠癌、胃癌、食道癌、胰腺癌、肝癌、胆管癌、神经纤维
瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、皮肤癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌、甲状腺癌、头颈癌、唾液腺癌和胃肠道间质瘤。优选地，其中所述的淋巴瘤选自霍奇金氏疾病和非霍奇金淋巴瘤(例如套细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡中心淋巴瘤、边缘区b细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤和外周t细胞淋巴瘤)；其中所述的肺癌为非小细胞肺癌(nsclc)(包括鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌等)或小细胞肺癌(sclc)；其中所述的肾癌选自肾细胞癌、透明细胞和肾嗜酸细胞瘤；其中所述的白血病选自慢性淋巴细胞性白血病(cll)、急性成淋巴细胞性白血病(all)、t-细胞急性成淋巴细胞性白血病(t-all)、慢性髓细胞性白血病(cml)和急性骨髓性白血病(aml)；其中所述的结直肠癌为结肠癌或直肠癌；其中所述的肉瘤为软骨肉瘤。
[0163]
本公开进一步涉及一种通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)、通式(iv-2)和表a所示的化合物或其可药用的盐、或包括其的药物组合物，其用作药物。
[0164]
本公开进一步涉及一种通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)、通式(iv-2)和表a所示的化合物或其可药用的盐、或包括其的药物组合物，其用作抑制cdk的药物；优选地，其中所述的cdk为cdk7。
[0165]
本公开进一步涉及一种通式(i)、通式(ii)、通式(ii-1)、通式(ii-2)、通式(iii-1)、通式(iii-2)、通式(iv-1)、通式(iv-2)和表a所示的化合物或其可药用的盐、或包括其的药物组合物，其用作治疗和/或预防疾病或病症的药物。其中所述的疾病或病症优选为癌症，所述癌症优选选自乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、阴道癌、输卵管癌、宫颈癌、肾癌、膀胱癌、尿路上皮癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸癌、结直肠癌肉瘤、骨癌、多发性骨髓瘤、白血病、粘液瘤、横纹肌瘤、平滑肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤、畸胎瘤、咽喉癌、鼻咽癌、口腔癌、肺癌、肺泡癌、淋巴瘤、间皮瘤、小肠癌、胃癌、食道癌、胰腺癌、肝癌、胆管癌、神经纤维瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、成神经细胞瘤、黑色素瘤、皮肤癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌、甲状腺癌、头颈癌、唾液腺癌和胃肠道间质瘤。优选地，其中所述的淋巴瘤选自霍奇金氏疾病和非霍奇金淋巴瘤(例如套细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡中心淋巴瘤、边缘区b细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤和外周t细胞淋巴瘤)；其中所述的肺癌为非小细胞肺癌(nsclc)(包括鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌等)或小细胞肺癌(sclc)；其中所述的肾癌选自肾细胞癌、透明细胞和肾嗜酸细胞瘤；其中所述的白血病选自慢性淋巴细胞性白血病(cll)、急性成淋巴细胞性白血病(all)、t-细胞急性成淋巴细胞性白血病(t-all)、慢性髓细胞性白血病(cml)和急性骨髓性白血病(aml)；其中所述的结直肠癌为结肠癌或直肠癌；其中所述的肉瘤为软骨肉瘤。
[0166]
可将活性化合物制成适合于通过任何适当途径给药的形式，通过常规方法使用一种或多种药学上可接受的载体来配制本公开的组合物。因此，本公开的活性化合物可以配制成用于口服给药、注射(例如静脉内、肌肉内或皮下)给药，吸入或吹入给药的各种剂型。本公开的化合物也可以配制成例如片剂、硬或软胶囊、水性或油性混悬液、乳剂、注射液、可分散性粉末或颗粒、栓剂、锭剂或糖浆等剂型。
[0167]
作为一般性指导，活性化合物优选是以单位剂量的方式，或者是以患者可以以单剂自我给药的方式。本公开化合物或组合物的单位剂量的表达方式可以是片剂、胶囊、扁囊剂、瓶装药水、药粉、颗粒剂、锭剂、栓剂、再生药粉或液体制剂。合适的单位剂量可以是0.1
～1000mg。
[0168]
本公开的药物组合物除活性化合物外，可含有一种或多种辅料，所述辅料选自以下成分：填充剂(稀释剂)、粘合剂、润湿剂、崩解剂或赋形剂等。根据给药方法的不同，组合物可含有0.1至99重量％的活性化合物。
[0169]
片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂、造粒剂、崩解剂、粘合剂和润滑剂。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。
[0170]
也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂或其中活性成分与水溶性载体或油溶媒混合的软明胶胶囊提供口服制剂。
[0171]
水混悬液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂、分散剂或湿润剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。
[0172]
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油，或矿物油配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂保存这些组合物。
[0173]
本公开的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油，或矿物油或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。
[0174]
本公开的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本公开化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是delteccadd-plus.tm.5400型静脉注射泵。
[0175]
本公开的药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用任何调和固定油。此外，脂肪酸也可以制备注射剂。
[0176]
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本公开化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。
[0177]
可通过加入水来制备水混悬的可分散粉末和颗粒给予本公开化合物。可通过将活性成分与分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或多种防腐剂混合来制备这些药物组合物。
[0178]
如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、疾病的严重性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
[0179]
术语说明
[0180]
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
[0181]
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团(即c
1-20
烷基)，优选含有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子的烷基(即c
1-12
烷基)，更优选为含有1至6个碳原子的烷基(即c
1-6
烷基)。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，取代基优选选自d原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基中的一个或多个。
[0182]
术语“烯基”指分子中含有至少一个碳碳双键的烷基化合物，其中烷基的定义如上所述。优选含有2至12个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子的烯基(即c
2-12
烯基)，更优选含有2至6个碳原子的烯基(即c
2-6
烯基)。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
[0183]
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至14个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14个)碳原子(即3至14元环烷基)，优选包含3至8个碳原子(即3至8元环烷基)，更优选包含3至6个碳原子(即3至6元环烷基)。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环烷基、稠环烷基和桥环烷基。
[0184]
术语“螺环烷基”指5至20元(即5至20元螺环烷基)，单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键。优选为6至14元(即6至14元螺环烷基)，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)(即7至10元螺环烷基)。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基和多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元、5元/6元或6元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：
[0185]
o-、-o-s-或-s-s-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至14个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14个)环原子(即3至14元杂环基)，其中1～4个(例如1、2、3和4个)是杂原子；更优选包含6至14个环原子(例如6、7、8、9、10、11、12、13和14个)(即6至14元杂环基)，其中1-3是杂原子(例如1、2和3个)；更优选包含3至8个环原子(即3至8元杂环基)，其中1-3个(例如1、2和3个)是杂原子；最优选包含5或6个环原子(即5或6元杂环基)，其中1-3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、四氢吡喃基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺杂环基、稠杂环基和桥杂环基。
[0194]
术语“螺杂环基”指5至20元(即5至20元螺杂环基)，单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜)的杂原子，但不包括-o-o-、-o-s-或-s-s-的环部分，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键。优选为6至14元(例如6、7、8、9、10、11、12、13和14元)(即6至14元螺杂环基)，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)(即7至10元螺杂环基)。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基和多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元、5元/6元或6元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：
[0195][0196]
术语“稠杂环基”指5至20元(即5至20元稠杂环基)，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜)的杂原子，但不包括-o-o-、-o-s-或-s-s-的环部分，其余环原子为碳。优选为6至14元(例如6、7、8、9、10、11、12、13和14元)(即6至14元稠杂环基)，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)(即7至10元稠杂环基)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环等多环稠杂环基，优选为双环和三环，更优选为3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、6元/3元、6元/4元、6元/5元和6元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：
[0197][0198]
术语“桥杂环基”指5至20元(即5至20元桥杂环基)，任意两个环共用两个不直接连
接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元(例如6、7、8、9、10、11、12、13和14元)(即6至14元桥杂环基)，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)(即7至10元桥杂环基)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环等多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：
[0199][0200]
所述杂环基环包括如上所述的杂环基(包括单环、螺杂环、稠杂环和桥杂环)稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
[0201]
等。
[0202]
杂环基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，取代基优选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基中的一个或多个。
[0203]
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(稠合多环是共享毗邻碳原子对的环)基团(即6至14元芳基)，优选为6至10元(即6至10元芳基)，例如苯基和萘基。所述芳基环包括如上所述的芳基环稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
[0204][0205]
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，取代基优选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基中的一个或多个。
[0206]
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子(例如1、2、3和4个)、5至14个环原子的杂芳族体系(即5至14元杂芳基)，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元(例如5、6、7、8、9或10元)(即5至10元杂芳基)，更优选为5元或6元(即5或6元杂芳基)，例如呋喃基、噻吩
基、吡啶基、吡咯基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基等。所述杂芳基环包括如上述的杂芳基稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
[0207][0208]
杂芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，取代基优选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基中的一个或多个。
[0209]
上述环烷基、杂环基、芳基和杂芳基具有1个从母体环原子上除去一个氢原子所衍生的残基，或2个从母体的相同环原子或两个不同的环原子上除去两个氢原子所衍生的残基即“亚环烷基”、“亚杂环基”、“亚芳基”、“亚杂芳基”。
[0210]
术语“环烷基氧基”指环烷基-o-，其中环烷基如上所定义。
[0211]
术语“杂环基氧基”指杂环基-o-，其中杂环基如上所定义。
[0212]
术语“烷硫基”指烷基-s-，其中烷基如上所定义。
[0213]
术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。
[0214]
术语“卤代烷氧基”指烷氧基被一个或多个卤素取代，其中烷氧基如上所定义。
[0215]
术语“氘代烷基”指烷基被一个或多个氘原子取代，其中烷基如上所定义。
[0216]
术语“羟烷基”指烷基被一个或多个羟基取代，其中烷基如上所定义。
[0217]
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
[0218]
术语“羟基”指-oh。
[0219]
术语“巯基”指-sh。
[0220]
术语“氨基”指-nh2。
[0221]
术语“氰基”指-cn。
[0222]
术语“硝基”指-no2。
[0223]
术语“氧代基”指“＝o”。
[0224]
术语“羰基”指c＝o。
[0225]
术语“羧基”指-c(o)oh。
[0226]
术语“羧酸酯基”指-c(o)o(烷基)、-c(o)o(环烷基)、(烷基)c(o)o-或(环烷基)c(o)o-，其中烷基和环烷基如上所定义。
[0227]
本公开化合物可以存在特定的立体异构体形式。术语“立体异构体”是指结构相同但原子在空间中的排列不同的异构体。其包括顺式和反式(或z和e)异构体、(-)-和( )-异构体、(r)-和(s)-对映异构体、非对映异构体、(d)-和(l)-异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体及其混合物(如外消旋体、非对映异构体的混合物)。本公开化合物中的取代基可以存在另外的不对称原子。所有这些立体异构体以及它们的混合物，均包括在本公开的范围内。可以通过手性合成、手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(-)-和( )-异构体、(r)-和(s)-对映异构体以及(d)-和(l)-异构体。本公开某化合物的一种异构体，可以通过不对称合成或者手性助剂来制备，或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，得到纯的异构体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过色谱法完成。
[0228]
本公开所述化合物的化学结构中，键表示未指定构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键可以为或者同时包含或者同时包含两种构型。
[0229]
本公开所述化合物的化学结构中，键并未指定构型，即可以为z构型或e构型，或者同时包含两种构型。
[0230]
本公开的化合物可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含在本公开的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指平衡存在并且容易从一种异构形式转化为另一种异构形式的结构异构体。其包括所有可能的互变异构体，即以单一异构体的形式或以所述互变异构体的任意比例的混合物的形式存在。非限制性的实例包括：酮-烯醇、亚胺-烯胺、内酰胺-内酰亚胺等。内酰胺-内酰亚胺平衡实例如下所示：
[0231][0232]
如当提及吡唑基时，应理解为包括如下两种结构中的任何一种或两种互变异构体的混合物：
[0233][0234]
所有的互变异构形式在本公开的范围内，且化合物的命名不排除任何互变异构体。
[0235]
本公开的化合物包括其化合物的所有合适的同位素衍生物。术语“同位素衍生物”是指至少一个原子被具有相同原子序数但原子质量不同的原子替代的化合物。可引入到本公开化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘等的稳定和放射性的同位素，例如分别为2h(氘，d)、3h(氚，t)、
11
c、
13
c、
14
c、
15
n、
17
o、
18
o、
32
p、
33
p、
33
s、
34
s、
35
s、
36
s、
18
f、
36
cl、
82
br、
123
i、
124
i、
125
i、
129
i和
131
i等，优选氘。
[0236]
相比于未氘代药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本公开的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本公开的范围之内。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换，其中氘的替换可以是部分或完全的，部分氘的替换是指至少一个氢被至少一个氘替换。
[0237]
当一个位置被特别地指定为氘d时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少1000倍的丰度的氘(即至少15％的氘掺入)。示例中化合物的具有大于氘的天然丰度可以是至少1000倍的丰度的氘(即至少15％的氘掺入)、至少2000倍的丰度的氘(即至少30％的氘掺入)、至少3000倍的丰度的氘(即至少45％的氘掺入)、至少3340倍的丰度的氘(即至少50.1％的氘掺入)、至少3500倍的丰度的氘(即至少52.5％的氘掺入)、至少4000倍的丰度的氘(即至少60％的氘掺入)、至少4500倍的丰度的氘(即至少67.5％的氘掺入)、至少5000倍的丰度的氘(即至少75％的氘掺入)、至少5500倍的丰度的氘(即至少82.5％的氘掺入)、至少6000倍的丰度的氘(即至少90％的氘掺入)、至少6333.3倍的丰度的氘(即至少95％的氘掺入)、至少6466.7倍的丰度的氘(即至少97％的氘掺入)、至少6600倍的丰度的氘(即至少99％的氘掺入)、至少6633.3倍的丰度的氘(即至少99.5％的氘掺入)或更高丰度的氘。
[0238]“任选地”或“任选”是指意味着随后所描述的事件或环境可以但不必然发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的情形。例如“任选的被卤素或者氰基取代的c
1-6
烷基”是指卤素或者氰基可以但不必须存在，该说明包括烷基被卤素或者氰基取代的情形和烷基不被卤素或氰基取代的情形。
[0239]“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为1至6个，更优选为1至3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下(通过实验或理论)确定可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
[0240]“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
[0241]“可药用的盐”是指本公开化合物的盐，可选自无机盐或有机盐。这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。可以在化合物的最终分离和纯化过程中，或通过使合适的基团与合适的碱或酸反应来单独制备盐。通常用于形成药学上可接受的盐的碱包括无机碱，例如氢氧化钠和氢氧化钾，以及有机碱，例如氨。通常用于形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸以及有机酸。
[0242]
针对药物或药理学活性剂而言，术语“治疗有效量”是指足以达到或至少部分达到预期效果的药物或药剂的用量。治疗有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的治疗有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
[0243]
本文所用的术语“药学上可接受的”是指这些化合物、材料、组合物和/或剂型，在合理的医学判断范围内，适用于与患者组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，具有合理的获益/风险比，并且对预期的用途是有效。
[0244]
本文所使用的，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数引用，反之亦然，除非
上下文另外明确指出。
[0245]
当将术语“约”应用于诸如ph、浓度、温度等的参数时，表明该参数可以变化
±
10％，并且有时更优选地在
±
5％之内。如本领域技术人员将理解的，当参数不是关键时，通常仅出于说明目的给出数字，而不是限制。
[0246]
本公开化合物的合成方法
[0247]
为了完成本公开的目的，本公开采用如下技术方案：
[0248]
方案一
[0249]
本公开通式(i)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，该方法包括：
[0250][0251]
通式(ia)所示的化合物或其盐与r
1d-h，在碱性条件下，催化剂存在下，在微波或加热条件下，发生偶联反应，得到通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，
[0252]
其中：
[0253]
g为cr
1d
；
[0254]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0255]
y、r
1a
、r
1b
、r
1c
、r
1d
和r2至r
13
如通式(i)中所定义。
[0256]
方案二
[0257]
本公开通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，该方法包括：
[0258][0259]
通式(iia)所示的化合物或其盐与r
1d-h，在碱性条件下，催化剂存在下，在微波或加热条件下，发生偶联反应，得到通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐，
[0260]
其中：
[0261]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0262]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(ii)中所定义。
[0263]
方案三
[0264]
本公开通式(ii-1)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，该方法包括：
[0265][0266]
通式(ii-1a)所示的化合物或其盐与r
1d-h，在碱性条件下，催化剂存在下，在微波或加热条件下，发生偶联反应，得到通式(ii-1)所示的化合物或其可药用的盐，
[0267]
其中：
[0268]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0269]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(ii-1)中所定义。
[0270]
方案四
[0271]
本公开通式(ii-2)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，该方法包括：
[0272][0273]
通式(ii-2a)所示的化合物或其盐与r
1d-h，在碱性条件下，催化剂存在下，在微波或加热条件下，发生偶联反应，得到通式(ii-2)所示的化合物或其可药用的盐，
[0274]
其中：
[0275]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0276]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(ii-2)中所定义。
[0277]
方案五
[0278]
本公开通式(iii-1)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，该方法包括：
[0279][0280]
通式(iii-1a)所示的化合物或其盐与r
1d-h，在碱性条件下，催化剂存在下，在微波或加热条件下，发生偶联反应，得到通式(iii-1)所示的化合物或其可药用的盐，
[0281]
其中：
[0282]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0283]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iii-1)中所定义。
[0284]
方案六
[0285]
本公开通式(iii-2)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，该方法包括：
[0286][0287]
通式(iii-2a)所示的化合物或其盐与r
1d-h，在碱性条件下，催化剂存在下，在微波或加热条件下，发生偶联反应，得到通式(iii-2)所示的化合物或其可药用的盐，
[0288]
其中：
[0289]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0290]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iii-2)中所定义。
[0291]
方案七
[0292]
本公开通式(iv-1)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，该方法包括：
[0293][0294]
通式(iv-1a)所示的化合物或其盐与r
1d-h，在碱性条件下，催化剂存在下，在微波或加热条件下，发生偶联反应，得到通式(iv-1)所示的化合物或其可药用的盐，
[0295]
其中：
[0296]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0297]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iv-1)中所定义。
[0298]
方案八
[0299]
本公开通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，该方法包括：
[0300][0301]
通式(iv-2a)所示的化合物或其盐与r
1d-h，在碱性条件下，催化剂存在下，在微波或加热条件下，发生偶联反应，得到通式(iv-2)所示的化合物或其可药用的盐，
[0302]
其中：
[0303]
x选自br、cl和i；优选地，x为br；
[0304]r1a
、r
1b
、r
1c
、rm、rn、r3、r4、r5、r8和r9如通式(iv-2)中所定义。
[0305]
以上合成方案中提供碱性条件的试剂包括有机碱类和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于三乙胺、吡啶、n,n-二异丙基乙胺、正丁基锂、二异丙基氨基锂、醋酸钠、醋酸钾、叔丁醇钠、叔丁醇钾或1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯；所述的无机碱类包括但不限于氢
化钠、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化锂和氢氧化钾；优选地，提供碱性条件的试剂为磷酸钾。
[0306]
以上合成方案中催化剂包括但不限于醋酸钯、醋酸钯/4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽、四(三苯基膦)钯、二氯化钯、甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii)、1,1
’‑
双(二苄基磷)二氯二戊铁钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、三(二亚苄基丙酮)二钯等，优选为醋酸钯/4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽。
[0307]
上述反应优选在微波条件下进行；所述微波条件为，反应温度100至200℃，反应时间0.5至6小时；优选地，所述微波条件为，反应温度145℃，反应时间1小时。
[0308]
上述步骤的反应优选在溶剂中进行，所用的溶剂包括但不限于：吡啶、乙二醇二甲醚、醋酸、甲醇、乙醇、乙腈、正丁醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、1,2-二溴乙烷及其混合物。
具体实施方式
[0309]
以下结合实施例用于进一步描述本公开，但这些实施例并非限制着本公开的范围。
[0310]
实施例
[0311]
化合物的结构是通过核磁共振(nmr)或/和质谱(ms)来确定的。nmr位移(δ)以10-6
(ppm)的单位给出。nmr的测定是用bruker avance-400核磁仪或bruker avance neo 500m，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(dmso-d6)、氘代氯仿(cdcl3)、氘代甲醇(cd3od)，内标为四甲基硅烷(tms)。
[0312]
ms的测定用agilent 1200/1290 dad-6110/6120 quadrupole ms液质联用仪(生产商：agilent，ms型号：6110/6120 quadrupole ms)、waters acquity uplc-qd/sqd(生产商：waters，ms型号：waters acquity qda detector/waters sq detector)、thermo ultimate 3000-q exactive(生产商：thermo，ms型号：thermo q exactive)。
[0313]
高效液相色谱法(hplc)分析使用agilent hplc 1200dad、agilent hplc 1200vwd和waters hplc e2695-2489高效液相色谱仪。
[0314]
手性hplc分析测定使用agilent 1260dad高效液相色谱仪。
[0315]
高效液相制备使用waters 2545-2767、waters 2767-sq detecor2、shimadzu lc-20ap和gilson gx-281制备型色谱仪。
[0316]
手性制备使用shimadzu lc-20ap制备型色谱仪。
[0317]
combiflash快速制备仪使用combiflash rf200(teledyne isco)。
[0318]
薄层层析硅胶板使用烟台黄海hsgf254或青岛gf254硅胶板，薄层色谱法(tlc)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
[0319]
硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
[0320]
激酶平均抑制率及ic
50
值的测定用novostar酶标仪(德国bmg公司)。
[0321]
本公开的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自abcr gmbh&co.kg，acros organics，aldrich chemical company，j&k，韶远化学科技(accela chembio inc)、上海毕得医药，达瑞化学品等公司。
[0322]
实施例中无特殊说明，反应均能够在氩气氛或氮气氛下进行。
[0323]
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氩气或氮气气球。
[0324]
氢气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氢气气球。
[0325]
加压氢化反应使用parr 3916ekx型氢化仪和清蓝ql-500型氢气发生器或hc2-ss型氢化仪。
[0326]
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
[0327]
微波反应使用cem discover-s 908860型微波反应器。
[0328]
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
[0329]
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
[0330]
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(tlc)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：a：正己烷/乙酸乙酯体系。溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
[0331]
实施例1
[0332]
7-(二甲基磷酰基)-3-(2-(((1s,3r)-3-羟基环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1h-吲哚-6-甲腈1
[0333][0334]
第一步
[0335]
7-溴-3-(2-(((1s,3r)-3-羟基环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1h-吲哚-6-甲腈1c
[0336]
将化合物7-溴-3-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1h-吲哚-6-甲腈1a(100mg，0.25mmol，采用专利申请“wo2020093006a1中说明书第58页的实施例4”公开的方法制备而得)，化合物(1r,3s)-3-氨基环己烷-1-醇盐酸盐1b(45mg，0.30mmol，南京药石)溶于n-甲基吡咯烷酮(6ml)。加入二异丙基乙基胺(160mg，1.24mmol)，将反应加热至140℃反应1小时。将反应冷却至室温，加水(15ml)，反应液用乙酸乙酯萃取(40ml
×
3)，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(50ml
×
3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用柱色谱法以洗脱剂体系a纯化得到标题化合物1c(106mg，产率：89％)。
[0337]
ms m/z(esi)：480.1[m 1]，482.1[m 3]。
[0338]
第二步
[0339]
7-(二甲基磷酰基)-3-(2-(((1s,3r)-3-羟基环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1h-吲哚-6-甲腈1
[0340]
将化合物1c(105mg，0.22mmol)，二甲基氧化膦(34mg，0.44mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(7ml)。加入4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(25mg，0.04mmol)，醋酸钯(4.9mg，0.02mmol)，磷酸钾(69mg，0.328mmol)，微波145℃反应1小时，冷却至室温。反应液减压浓缩，所得残余物经高效液相色谱法(gilson gx-281，洗脱体系：10mmol/l的碳酸氢铵水溶液和乙腈，乙腈的梯度：60％-80％，流速：30ml/min)纯化，得到标题化合物1(40mg，产率：38％)。
[0341]
ms m/z(esi)：478.1[m 1]。
[0342]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.15(s,1h),8.81-8.50(m,2h),8.21(s,1h),8.01(d,1h),7.79-7.64(m,1h),4.78-4.62(m,1h),3.87(s,1h),3.56-3.42(m,1h),2.21-2.10(m,1h),2.05(d,6h),1.95-1.65(m,3h),1.37-1.01(m,4h)。
[0343]
实施例2
[0344]
7-(二甲基磷酰基)-3-(2-(((1s,3s)-3-羟基环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1h-吲哚-6-甲腈2
[0345][0346]
第一步
[0347]
7-溴-3-(2-(((1s,3s)-3-羟基环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1h-吲哚-6-甲腈2c
[0348]
将化合物1a(100mg，0.24mmol，采用专利申请“wo2020093006a1中说明书第58页的实施例4”公开的方法制备而得)，化合物(1s,3s)-3-氨基环己烷-1-醇盐酸盐2b(45mg，0.30mmol，南京药石)溶于n-甲基吡咯烷酮(6ml)。加入二异丙基乙基胺(160mg，1.24mmol)，将反应加热至140℃反应1小时。将反应冷却至室温，加水(15ml)，反应液用乙酸乙酯萃取(40ml
×
3)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(50ml
×
3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用柱色谱法以洗脱剂体系a纯化得到标题化合物2c(105mg，产率：88％)。
[0349]
ms m/z(esi)：480.1[m 1]，482.1[m 3]。
[0350]
第二步
[0351]
7-(二甲基磷酰基)-3-(2-(((1s,3s)-3-羟基环己基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1h-吲哚-6-甲腈2
[0352]
将化合物2c(105mg，0.22mmol)，二甲基氧化磷(34mg，0.44mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(7ml)。加入4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(25mg，0.04mmol)，醋酸钯(4.9mg，0.02mmol)，加入磷酸钾(69mg，0.328mmol)，微波145℃反应1小时，冷却至室温。反应液减压
浓缩，所得残余物经高效液相色谱法(gilson gx-281，洗脱体系：10mmol/l的碳酸氢铵的水溶液和乙腈，乙腈的梯度：60％-80％，流速：30ml/min)纯化，得到标题化合物2(40mg，产率：38％)。
[0353]
ms m/z(esi)：478.1[m 1]。
[0354]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.12(s,1h),8.82-8.67(m,1h),8.65-8.50(m,1h),8.21(s,1h),7.98-7.80(m,1h),7.76-7.56(m,1h),4.56-4.43(m,1h),4.41-4.22(m,1h),4.03(s,1h),2.04(d,6h),1.93-1.78(m,2h),1.76-1.65(m,1h),1.64-1.46(m,3h),1.45-1.27(m,2h)。
[0355]
生物学评价
[0356]
以下结合测试例进一步描述解释本公开，但这些测试例并非意味着限制本公开的范围。
[0357]
测试例1 mda-mb-468增殖实验
[0358]
以下方法用来测定本公开化合物对mda-mb-468细胞增殖的抑制活性。实验方法简述如下：
[0359]
mda-mb-468细胞(atcc，htb-132)用完全培养基即含有10％胎牛血清(gibco，10099-141)的l15培养基(gibco，11415-114)进行培养。实验第一天，使用完全培养基将mda-mb-468细胞以2500个细胞/孔的密度种于96孔板，每孔180μl细胞悬液，放置37℃，5％co2细胞培养箱孵育过夜，第二天在细胞板每孔加入20μl用完全培养基配制的梯度稀释的待测化合物，化合物首先溶解于dmso中，起始浓度为2mm或0.2mm，3倍浓度梯度稀释，共10个浓度点，空白对照为100％dmso。再取5μl溶于dmso的化合物加入到95μl的完全培养基中，即化合物用完全培养基稀释20倍。最终取20μl每孔的稀释于完全培养基中的化合物加入到细胞悬液中，即化合物终浓度为从10μm或1μm开始的进行3倍梯度稀释的10个浓度点，设置含有0.5％dmso的空白对照，放置37℃，5％co2细胞培养箱孵育6天。第七天，取出96孔细胞培养板，每孔加入90μl发光细胞活性检测试剂(promega，g7573)，室温放置10分钟后，使用多功能微孔板酶标仪(bmg labtech，pherastar fs)读取发光信号值，用graphpad prism软件计算化合物抑制活性的ic
50
值见表1。
[0360]
表1 本公开化合物抑制mda-mb-468细胞增殖的活性
[0361]
化合物ic
50
(nm)147.326.6
[0362]
结论：本公开化合物具有很好的抑制mda-mb-468细胞增殖的活性。
[0363]
测试例2 cdk7酶学实验
[0364]
以下方法用来测定本公开化合物对cdk7酶活性的抑制活性。实验方法简述如下：
[0365]
将cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit(cisbio，63adk000cb11peg)中的enzymatic buffer配制成1
×
酶缓冲液：首先将dtt(sigma，d0632)配制成1m母液，再按ddh2o:enzymatic buffer:dtt：mgcl2(sigma，m1028):kcl(sigma，44675)＝689:200:1:10:100的比例配成1
×
酶缓冲液。
[0366]
用1
×
酶缓冲液将cdk7(carna，04-108)酶稀释至10ng/μl，2μl/孔加入到白色384孔板(corning，4513)中，对照孔中只加入2μl酶缓冲液，然后加入用1
×
酶缓冲液梯度稀释
后的待测化合物4μl/孔，化合物首先溶解于dmso中，起始浓度为50μm，3倍浓度梯度稀释，共11个浓度点，空白对照为100％dmso，再取2μl溶于dmso的化合物加入到38μl的1
×
酶缓冲液中，酶和化合物在室温预孵育30分钟。然后加入用1
×
酶缓冲液配制浓度为87.5μm的atp(sigma，a7699)和浓度为1.25μm的cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit中的cdkssubstrate-biotin的混合液4μl/孔，此时反应板孔中cdk7酶浓度为2ng/μl、atp浓度为35μm、cdks substrate-biotin浓度为0.5μm、化合物1μm首浓度3倍梯度稀释11个浓度，空白孔中cdk7酶浓度为2ng/μl、atp浓度为35μm、cdkssubstrate-biotin浓度为0.5μm、化合物0μm，对照空孔中cdk7酶浓度为0ng/μl、atp浓度为35μm、cdks substrate-biotin浓度为0.5μm、化合物0μm。混合均匀后在室温孵育90分钟。然后加入5μl/孔的cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit中用detection buffer稀释100倍的cdks antibody-cryptate，加入5μl/孔的用detection buffer稀释至250nm的streptavidin-xl665，混合均匀后在室温孵育1个小时。使用多功能微孔板酶标仪(bmg labtech，pherastar fs)读取htrf。用graphpad prism 5软件计算化合物抑制活性的ic
50
值见表2。
[0367]
表2 本公开化合物对cdk7酶活性的抑制活性
[0368]
化合物ic
50
(nm)16.322.3
[0369]
结论：本公开化合物具有很好的抑制cdk7的酶活性。
[0370]
测试例3 cdk1酶学实验
[0371]
以下方法用来测定本公开化合物对cdk1酶活性的抑制活性。实验方法简述如下：
[0372]
将cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit(cisbio，63adk000cb11peg)中的enzymatic buffer配制成1
×
酶缓冲液：首先将dtt(sigma，d0632)配制成1m母液，再按ddh2o:enzymatic buffer:dtt：mgcl2(sigma，m1028)＝774:200:1:5的比例配成1
×
酶缓冲液。
[0373]
用1
×
酶缓冲液将cdk1(carna，04-102)酶稀释至5ng/μl，2μl/孔加入到白色384孔板(corning，4513)中，对照孔中只加入2μl酶缓冲液，然后加入用1
×
酶缓冲液梯度稀释后的待测化合物4μl/孔，化合物首先溶解于dmso中，起始浓度为5mm，3倍浓度梯度稀释，共11个浓度点，空白对照为100％dmso，再取2μl溶于dmso的化合物加入到38μl的1
×
酶缓冲液中，酶和化合物在室温预孵育30分钟。然后加入用1
×
酶缓冲液配制浓度为12.5μm的atp(sigma，a7699)和浓度为0.75μm的cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit中的cdks substrate-biotin的混合液4μl/孔，此时反应板孔中cdk1酶浓度为1ng/μl、atp浓度为5μm、cdks substrate-biotin浓度为0.3μm、化合物100μm首浓度3倍梯度稀释11个浓度，空白孔中cdk1酶浓度为1ng/μl、atp浓度为5μm、cdkssubstrate-biotin浓度为0.3μm、化合物0μm，对照空孔中cdk1酶浓度为0ng/μl、atp浓度为5μm、cdks substrate-biotin浓度为0.3μm、化合物0μm。混合均匀后在室温孵育60分钟。然后加入5μl/孔的cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit中用detection buffer稀释100倍的cdks antibody-cryptate，加入5μl/孔的用detection buffer稀释至150nm的streptavidin-xl665，混合均匀后在室温孵育1个小时。使用多功能微孔板酶标仪(bmg labtech，pherastar fs)读取htrf。用graphpad prism 5软件计算化合物抑制活性的ic
50
值见表3。
[0374]
表3 本公开化合物对cdk1酶活性的抑制活性
[0375]
化合物ic
50
(nm)2》100000
[0376]
结论：本公开化合物对cdk1酶活性没有明显抑制作用，结合表2和表3，可见本公开化合物对cdk7的选择性很好(》1000倍)。
[0377]
测试例4 cdk2酶学实验
[0378]
以下方法用来测定本公开化合物对cdk2酶活性的抑制活性。实验方法简述如下：
[0379]
将cdks kinase(cdk2/5)kit(cisbio，63adk000cb12peg)中的enzymatic buffer配制成1
×
酶缓冲液：首先将dtt(sigma，d0632)配制成1m母液，再按ddh2o:enzymatic buffer:dtt：mgcl2(sigma，m1028):mncl2(sigma，m1787)＝793:200:1:5:1的比例配成1
×
酶缓冲液。
[0380]
用1
×
酶缓冲液将cdk2(carna，04-103)酶稀释至10ng/μl，2μl/孔加入到白色384孔板(corning，4513)中，对照孔中只加入2μl酶缓冲液，然后加入用1
×
酶缓冲液梯度稀释后的待测化合物4μl/孔，化合物首先溶解于dmso中，起始浓度为5mm，3倍浓度梯度稀释，共11个浓度点，空白对照为100％dmso，再取2μl溶于dmso的化合物加入到38μl的1
×
酶缓冲液中，酶和化合物在室温预孵育30分钟。然后加入用1
×
酶缓冲液配制浓度为2.5μm的atp(sigma，a7699)和浓度为10μm的cdks kinase(cdk2/5)kit中的cdks substrate-biotin的混合液4μl/孔，此时反应板孔中cdk2酶浓度为2ng/μl、atp浓度为1μm、cdks substrate-biotin浓度为4μm、化合物100μm首浓度3倍梯度稀释11个浓度，空白孔中cdk2酶浓度为2ng/μl、atp浓度为1μm、cdks substrate-biotin浓度为4μm、化合物0μm，对照空孔中cdk2酶浓度为0ng/μl、atp浓度为1μm、cdks substrate-biotin浓度为4μm、化合物0μm。混合均匀后在室温孵育60分钟。然后加入5μl/孔的cdks kinase(cdk2/5)kit中用detection buffer稀释100倍的cdks antibody-cryptate，加入5μl/孔的用detection buffer稀释至1000nm的streptavidin-xl665，混合均匀后在室温孵育1个小时。使用多功能微孔板酶标仪(bmg labtech，pherastar fs)读取htrf。用graphpad prism 5软件计算化合物抑制活性的ic
50
值见表4。
[0381]
表4 本公开化合物对cdk2酶活性的抑制活性
[0382]
化合物ic
50
(nm)28986
[0383]
结论：本公开化合物对cdk2酶活性的抑制作用较弱，结合表2和表4，可见本公开化合物对cdk7的选择性很好(》1000倍)。
[0384]
测试例5 cdk4酶学实验
[0385]
以下方法用来测定本公开化合物对cdk4酶活性的抑制活性。实验方法简述如下：
[0386]
将cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit(cisbio，63adk000cb11peg)中的enzymatic buffer配制成1
×
酶缓冲液：首先将dtt(sigma，d0632)配制成1m母液，再按ddh2o:enzymatic buffer:dtt：mgcl2(sigma，m1028)＝774:200:1:5的比例配成1
×
酶缓冲液。
[0387]
用1
×
酶缓冲液将cdk4(carna，04-105)酶稀释至5ng/μl，2μl/孔加入到白色384孔板(corning，4513)中，对照孔中只加入2μl酶缓冲液，然后加入用1
×
酶缓冲液梯度稀释后
的待测化合物4μl/孔，化合物首先溶解于dmso中，起始浓度为5mm，3倍浓度梯度稀释，共11个浓度点，空白对照为100％dmso，再取2μl溶于dmso的化合物加入到38μl的1
×
酶缓冲液中，酶和化合物在室温预孵育30分钟。然后加入用1
×
酶缓冲液配制浓度为25μm的atp(sigma，a7699)和浓度为0.75μm的cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit中的cdkssubstrate-biotin的混合液4μl/孔，此时反应板孔中cdk4酶浓度为1ng/μl、atp浓度为10μm、cdks substrate-biotin浓度为0.3μm、化合物100μm首浓度3倍梯度稀释11个浓度，空白孔中cdk4酶浓度为1ng/μl、atp浓度为10μm、cdkssubstrate-biotin浓度为0.3μm、化合物0μm，对照空孔中cdk4酶浓度为0ng/μl、atp浓度为10μm、cdks substrate-biotin浓度为0.3μm、化合物0μm。混合均匀后在室温孵育90分钟。然后加入5μl/孔的cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit中用detection buffer稀释100倍的cdks antibody-cryptate，加入5μl/孔的用detection buffer稀释至150nm的streptavidin-xl665，混合均匀后在室温孵育1个小时。使用多功能微孔板酶标仪(bmg labtech，pherastar fs)读取htrf。用graphpad prism 5软件计算化合物抑制活性的ic
50
值见表5。
[0388]
表5 本公开化合物对cdk4酶活性的抑制活性
[0389]
化合物ic
50
(nm)23867
[0390]
结论：本公开化合物对cdk4酶活性的抑制作用较弱，结合表2和表5，可见本公开化合物对cdk7的选择性很好(》1000倍)。
[0391]
测试例6 cdk6酶学实验
[0392]
以下方法用来测定本公开化合物对cdk6酶活性的抑制活性。实验方法简述如下：
[0393]
将cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit(cisbio，63adk000cb11peg)中的enzymatic buffer配制成1
×
酶缓冲液：首先将dtt(sigma，d0632)配制成1m母液，再按ddh2o:enzymatic buffer:dtt：mgcl2(sigma，m1028)＝774:200:1:5的比例配成1
×
酶缓冲液。
[0394]
用1
×
酶缓冲液将cdk6(carna，04-107)酶稀释至12.5ng/μl，2μl/孔加入到白色384孔板(corning，4513)中，对照孔中只加入2μl酶缓冲液，然后加入用1
×
酶缓冲液梯度稀释后的待测化合物4μl/孔，化合物首先溶解于dmso中，起始浓度为5mm，3倍浓度梯度稀释，共11个浓度点，空白对照为100％dmso，再取2μl溶于dmso的化合物加入到38μl的1
×
酶缓冲液中，酶和化合物在室温预孵育30分钟。然后加入用1
×
酶缓冲液配制浓度为125μm的atp(sigma，a7699)和浓度为0.75μm的cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit中的cdkssubstrate-biotin的混合液4μl/孔，此时反应板孔中cdk6酶浓度为2.5ng/μl、atp浓度为50μm、cdks substrate-biotin浓度为0.3μm、化合物100μm首浓度3倍梯度稀释11个浓度，空白孔中cdk6酶浓度为2.5ng/μl、atp浓度为50μm、cdks substrate-biotin浓度为0.3μm、化合物0μm，对照空孔中cdk6酶浓度为0ng/μl、atp浓度为50μm、cdks substrate-biotin浓度为0.3μm、化合物0μm。混合均匀后在室温孵育180分钟。然后加入5μl/孔的cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit中用detection buffer稀释100倍的cdks antibody-cryptate，加入5μl/孔的用detection buffer稀释至150nm的streptavidin-xl665，混合均匀后在室温孵育1个小时。使用多功能微孔板酶标仪(bmg labtech，pherastar fs)读取htrf。用graphpad prism 5软件计算化合物抑制活性的ic
50
值见表6。
[0395]
表6 本公开化合物对cdk6酶活性的抑制活性
[0396]
化合物ic
50
(nm)25885
[0397]
结论：本公开化合物对cdk6酶活性的抑制作用较弱，结合表2和表6，可见本公开化合物对cdk7的选择性很好(》1000倍)。
[0398]
测试例7 cdk9酶学实验
[0399]
以下方法用来测定本公开化合物对cdk9酶活性的抑制活性。实验方法简述如下：
[0400]
将cdks kinase(cdk9)kit(cisbio，63adk000cb13peg)中的enzymatic buffer配制成1
×
酶缓冲液：首先将dtt(sigma，d0632)配制成1m母液，再按ddh2o:enzymatic buffer:dtt：mgcl2(sigma，m1028):kcl(sigma，44675)＝694:200:1:5:100的比例配成1
×
酶缓冲液。
[0401]
用1
×
酶缓冲液将cdk9(carna，04-110)酶稀释至5ng/μl，2μl/孔加入到白色384孔板(corning，4513)中，对照孔中只加入2μl酶缓冲液，然后加入用1
×
酶缓冲液梯度稀释后的待测化合物4μl/孔，化合物首先溶解于dmso中，起始浓度为5mm，3倍浓度梯度稀释，共11个浓度点，空白对照为100％dmso，再取2μl溶于dmso的化合物加入到38μl的1
×
酶缓冲液中，酶和化合物在室温预孵育30分钟。然后加入用1
×
酶缓冲液配制浓度为175μm的atp(sigma，a7699)和浓度为2.5μm的cdks kinase(cdk9)kit中的cdks substrate-biotin的混合液4μl/孔，此时反应板孔中cdk9酶浓度为1ng/μl、atp浓度为70μm、cdkssubstrate-biotin浓度为1μm、化合物100μm首浓度3倍梯度稀释11个浓度，空白孔中cdk9酶浓度为1ng/μl、atp浓度为70μm、cdks substrate-biotin浓度为1μm、化合物0μm，对照空孔中cdk9酶浓度为0ng/μl、atp浓度为70μm、cdks substrate-biotin浓度为1μm、化合物0μm。混合均匀后在室温孵育60分钟。然后加入5μl/孔的cdks kinase(cdk9)kit中用detection buffer稀释100倍的cdks antibody-cryptate，加入5μl/孔的用detection buffer稀释至250nm的streptavidin-xl665，混合均匀后在室温孵育1个小时。使用多功能微孔板酶标仪(bmg labtech，pherastar fs)读取htrf。用graphpad prism 5软件计算化合物抑制活性的ic
50
值见表7。
[0402]
表7 本公开化合物对cdk9酶活性的抑制活性
[0403]
化合物ic
50
(nm)28303
[0404]
结论：本公开化合物对cdk9酶活性的抑制作用较弱，结合表2和表7，可见本公开化合物对cdk7的选择性很好(》1000倍)。
[0405]
测试例8 cdk12酶学实验
[0406]
以下方法用来测定本公开化合物对cdk12酶活性的抑制活性。实验方法简述如下：
[0407]
将cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit(cisbio，63adk000cb11peg)中的enzymatic buffer配制成1
×
酶缓冲液：首先将dtt(sigma，d0632)配制成1m母液，再按ddh2o:enzymatic buffer:dtt：mgcl2(sigma，m1028):kcl(sigma，44675)＝694:200:1:5:100的比例配成1
×
酶缓冲液。
[0408]
用1
×
酶缓冲液将cdk12(signalchem，c62-35bg-50)酶稀释至50ng/μl，2μl/孔加入到白色384孔板(corning，4513)中，对照孔中只加入2μl酶缓冲液，然后加入用1
×
酶缓冲
液梯度稀释后的待测化合物4μl/孔，化合物首先溶解于dmso中，起始浓度为5mm，3倍浓度梯度稀释，共11个浓度点，空白对照为100％dmso，再取2μl溶于dmso的化合物加入到38μl的1
×
酶缓冲液中，酶和化合物在室温预孵育30分钟。然后加入用1
×
酶缓冲液配制浓度为75μm的atp(sigma，a7699)和浓度为1.25μm的cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit中的cdkssubstrate-biotin的混合液4μl/孔，此时反应板孔中cdk12酶浓度为10ng/μl、atp浓度为30μm、cdks substrate-biotin浓度为0.5μm、化合物100μm首浓度3倍梯度稀释11个浓度，空白孔中cdk12酶浓度为10ng/μl、atp浓度为30μm、cdks substrate-biotin浓度为0.5μm、化合物0μm，对照空孔中cdk12酶浓度为0ng/μl、atp浓度为30μm、cdks substrate-biotin浓度为0.5μm、化合物0μm。混合均匀后在室温孵育90分钟。然后加入5μl/孔的cdks kinase(cdk1/4/6/7/12)kit中用detection buffer稀释100倍的cdks antibody-cryptate，加入5μl/孔的用detection buffer稀释至250nm的streptavidin-xl665，混合均匀后在室温孵育过夜。使用多功能微孔板酶标仪(bmg labtech，pherastar fs)读取htrf。用graphpad prism 5软件计算化合物抑制活性的ic
50
值见表8。
[0409]
表8 本公开化合物对cdk12酶活性的抑制活性
[0410]
化合物ic
50
(nm)21105
[0411]
结论：本公开化合物对cdk12酶活性的抑制作用较弱，结合表2和表8，可见本公开化合物对cdk7的选择性好(》450倍)。
[0412]
测试例9
[0413]
药代动力学评价
[0414]
一、比格(beagle)犬试验
[0415]
1、摘要
[0416]
以比格犬为受试动物，应用lc/ms/ms法测定了比格犬灌胃(i.g.)/静脉注射(i.v.)给予实施例2化合物和对比例1后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本公开化合物在比格犬体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
[0417]
2、试验方案
[0418]
2.1试验药品
[0419]
实施例2化合物和对比例1(参照专利wo2020093011a1，compound 101)，结构如下：
[0420][0421]
2.2试验动物
[0422]
比格犬16只，雌雄各半，平均分成4组，由苏州国辰生物科技股份有限公司提供。禁食一夜后分别灌胃及静脉注射给药。
[0423]
2.3药物配制
[0424]
称取一定量的实施例2化合物和对比例1，加5％体积dmso 20％体积pg 20％体积peg400 55％体积生理盐水,配制成0.4mg/ml澄明溶液(灌胃给药组)和0.25mg/ml澄明溶液(静脉注射给药组)。
[0425]
2.4给药
[0426]
灌胃给药组：给药剂量为2.0mg/kg，给药体积为5.0ml/kg。
[0427]
静脉注射给药组：给药剂量为0.5mg/kg，给药体积为2.0ml/kg。
[0428]
3.操作
[0429]
灌胃给药组：于给药前及给药后0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0小时，由颈静脉或前肢静脉采血1.0ml，置edta-k2抗凝试管中，10000rpm离心5分钟(4℃)，1小时内分离血浆，-80℃保存待测。采血至离心过程在冰浴条件下操作。给药后3小时进食。
[0430]
静脉注射给药组：于给药前及给药后5分钟，0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24小时采血，处理同灌胃给药组。
[0431]
测定不同浓度的药物给药后比格犬血浆中的待测化合物含量：取给药后各时刻的比格犬血浆样品20μl，每个样品用20μl is(100％meoh)和100μl甲醇淬灭，在1000rmp下涡旋混合10分钟，并在2600g，4℃下离心10分钟。将50.0μl上清液转移到含有150μl30％乙腈中。取1μl上清液进行lc/ms/ms分析。
[0432]
4、药代动力学参数结果
[0433]
表9 本公开化合物的药代动力学参数如下：
[0434][0435]
结论：本公开化合物在比格犬体内具有很好的药代吸收活性，具有药代动力学优势。
[0436]
测试例10
[0437]
本公开化合物对人肝微粒体cyp2d6右美沙芬代谢位点的酶活性的抑制作用
[0438]
本公开化合物对人肝微粒体cyp2d6右美沙芬代谢位点的酶活性采用如下实验方法测定：
[0439]
一、实验材料及仪器
[0440]
1.磷酸缓冲液(20
×
pbs，购买自生工)，
[0441]
2.nadph(acros，a2646-71-1)，
[0442]
3.人肝微粒体(corning gentest，cat no，452161，lot no.9050002,donor,35)，
[0443]
4.abi qtrap 4000液质两用仪(ab sciex)，
[0444]
5.zorbax extend-c18,3
×
50mm,3.5μm(美国安捷伦公司)，
[0445]
6.cyp探针底物(右美沙芬,sigma，cat no.d9684-5g)和阳性对照抑制剂(奎尼丁,sigma,q0750-5g)。
[0446]
二、实验步骤
[0447]
配置100mm的pbs缓冲液，用该缓冲液配制7.5mm的mgcl2和5mm的nadph溶液，然后用该7.5mm的mgcl2配制0.25mg/ml的微粒体溶液，用dmso将浓度为30mm的储备液稀释成浓度为30mm、10mm、3mm、1mm、0.3mm、0.03mm、0.003mm、0mm的系列溶液i，再用磷酸缓冲液(pbs)，将上述系列溶液i稀释200倍得到系列待测溶液ii(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μm)。用pbs稀释至20μm浓度的右美沙芬工作液。
[0448]
分别取配制在7.5mm mgcl2中的0.25mg/ml的微粒体溶液40μl，再分别取15μm的右美沙芬工作液和化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μm)各20μl，混合均匀。阳性对照组用相同浓度的奎尼丁代替化合物。同时将5mm的nadph溶液一起在37℃预孵育5分钟。5分钟之后每个孔中加入20μl nadph，启动反应，孵育30分钟。所有孵育样品设双样本。30分钟后向所有样本中加入250μl含内标的乙腈，混匀，800rpm摇10分钟，然后3700rpm离心10分钟。取100μl的上清液与80μl的超纯水混匀，转移至lc-ms/ms分析。
[0449]
数值经graphpad prism计算得到药物对cyp2d6右美沙芬代谢位点的ic
50
值见表10。
[0450]
表10 本公开化合物对人肝微粒体cyp2d6右美沙芬代谢位点的ic
50
值
[0451]
实施例编号ic
50
(μm)2》30对比例10.23
[0452]
结论：本公开化合物对人肝微粒体cyp2d6右美沙芬代谢位点抑制作用弱，表现出更好的安全性，提示不会发生基于cyp2d6右美沙芬代谢位点的代谢性药物相互作用；且相对于对比例1效果显著。