植物油的脱胶和精制方法与流程

技术特征：
1.一种精制含有磷脂的植物油的方法，该方法包括通过在促进磷脂水解的条件下使该植物油与一种或多种磷脂降解酶接触，使磷脂进行酶促水解，然后对该植物油进行化学精制。2.根据权利要求1所述的方法，其中磷脂的该酶促水解在第一反应容器中进行，并且该化学精制在第二反应容器中进行，这两个反应容器流体连接和/或连接以允许从该第一反应容器到该第二反应容器的液体通道。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中磷脂的该酶促水解在第一反应容器中进行，并且该化学精制在第二反应容器中进行，其中这些反应容器之间的流体连接或从该第一反应容器到该第二反应容器的液体通道不经由分离装置，例如离心机。4.根据权利要求1所述的方法，其中磷脂的该酶促水解和该化学精制在同一反应容器中进行。5.根据权利要求3或4所述的方法，其中该酶促水解后立即进行该化学精制；优选地，以连续方法操作进行。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中-该酶促水解在包含重相和轻相的反应混合物中进行，以及-在所述化学精制之前，没有减少或没有显著减少重相体积或将胶质/重相与油分离。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，该方法包括：i)提供包含所述植物油和一种或多种具有磷脂降解活性的酶的反应混合物，例如权利要求2定义的反应混合物；ii)使该反应混合物经受允许酶促水解油中磷脂的条件，以提供所述植物油的经反应的混合物；以及iii)使所述植物油的经反应的混合物经受化学精制。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，该方法还包括酸化步骤，其在酶促水解之后和化学精制之前进行。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，该方法包括：在将该植物油与一种或多种磷脂降解酶接触之前对该植物油进行水脱胶。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该植物油选自由以下组成的组：巴西莓油、杏仁油、巴巴苏油、黑加仑籽油、琉璃苣籽油、菜籽油、腰果油、蓖麻油、椰子油、芫荽油、玉米油、棉籽油、海甘蓝油、亚麻籽油、葡萄籽油、榛子油、大麻籽油、麻风树油、荷荷芭油、亚麻仁油、澳洲坚果油、芒果仁油、白池花油、芥子油、牛脚油、橄榄油、棕榈油、棕榈仁油、棕榈油精、花生油/落花生油、美洲山核桃油、松子油、开心果油、罂粟籽油、菜籽油、米糠油、红花油、油茶油、芝麻油、牛油树脂、大豆油、向日葵籽油、妥尔油、山茶油和胡桃油。11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该植物油选自由以下组成的组：菜籽油、大豆油、向日葵籽油、棕榈油、椰子油、米糠油和花生油/落花生油。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中与所述一种或多种磷脂降解酶接触的植物油是粗制植物油。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，该方法包括：在使该植物油与该一种或多种磷脂降解酶接触之前使该植物油与一种或多种能够络合ca和/或mg离子的螯合剂接触。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法从一定量的粗制油提供一
定量的精制油，该精制油的量比在其中相同量的所述粗制油经受化学精制而不事先酶促水解存在于所述粗制油中的磷脂的方法中提供的精制油的量高至少0.2％(w/w)。15.根据权利要求6-14中任一项所述的方法，其中该反应混合物的ph的范围为1.5-12，例如范围为1.5-7。16.根据权利要求6-15中任一项所述的方法，其中该反应混合物的水含量的范围为0.5％-10％(w/w)，例如范围为1％-10％(w/w)，范围为1％-5％(w/w)或例如范围为0.5％-5％(w/w)。17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该植物油与该一种或多种磷脂降解酶在范围为45℃-90℃的温度下接触。18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中磷脂的所述酶促水解具有6小时或更短的持续时间，例如4小时或更短的持续时间，例如0.5-6小时的持续时间，或0.5-4小时的持续时间，或例如5分钟-4小时的持续时间，例如5分钟至2小时的持续时间，5分钟至1小时的持续时间或例如5-30分钟的持续时间。19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种具有磷脂降解活性的酶以相当于0.1mg-30mg酶蛋白的总量给予。20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该植物油在使得在该酶促水解过程中整体磷脂分子的数量减少30％-100％的条件下与一种或多种磷脂降解酶接触。21.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该植物油在如下条件下与一种或多种磷脂降解酶接触，这些条件使得酶反应导致该油中pc pe pi pa含量降低至少10％，例如至少25％，或该油中pc pe pi pa含量降低至少40％。22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该植物油在当已经经受化学精制时含有相当于20ppm磷或更少磷的量的磷脂。23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该植物油和所述一种或多种具有磷脂降解活性的酶在一组条件下孵育0.1-6小时，该组条件包括a)温度范围为45℃-90℃；b)ph范围为约1.5至约12.0c)搅拌或混合，例如通过剪切混合、高剪切混合、空化混合或超声波进行。24.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该化学精制包括提供该植物油与碱的掺和物，例如权利要求4中定义的所述植物油的经反应的混合物与碱的掺和物。25.根据权利要求22所述的方法，其中碱以相对于该油中存在的游离脂肪酸的量大于化学计量的量给予。26.根据权利要求24或25所述的方法，其中在该化学精制中添加的碱量至少占该方法中添加的碱总量的60％。27.根据权利要求24至26中任一项所述的方法，其中该碱选自naoh、koh、碳酸钠及其组合。28.根据权利要求24至27中任一项所述的方法，其中将所述植物油和所述碱的掺和物孵育从1分钟至8小时、例如从1分钟至5小时、从1分钟至2小时、从5分钟至8小时、从5分钟至5小时、从5分钟至2小时、从10分钟至5小时、从10分钟至2小时、从20分钟至5小时或从20分钟至2小时。
29.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该化学精制包括将胶质和/或皂料与油分离。30.根据权利要求24-29中任一项所述的方法，该方法包括将植物油和化学品的掺和物，例如所述植物油的经反应的混合物和化学品的掺和物转移到分离器，优选离心分离器或水平沉降器。31.根据前述权利要求中任一项所述的方法，该方法包括：i)将该植物油或权利要求6中定义的经反应的混合物与碱在20℃-90℃，例如20℃-80℃，例如20℃-40℃的温度下混合，碱的量大于化学计量的量，ii)将植物油和碱的掺和物或经反应的混合物和碱的掺和物在20℃-80℃，例如20℃-40℃的温度下在搅拌下孵育2-15分钟；iii)将该掺和物的温度升至55℃-95℃，例如升至55℃-85℃；以及iv)当温度达到55℃-95℃，例如55℃-85℃时，将该掺和物馈入分离器以将胶质和/或皂料与油分离。32.根据前述权利要求中任一项所述的方法，该方法包括：i)将该植物油和酸或该经反应的混合物和酸与碱混合，碱的量大于化学计量的量，ii)将植物油、酸和碱的掺和物或经反应的混合物、酸和碱的掺和物馈入分离器中以将胶质和/或皂料与油分离。33.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中磷脂的该酶促水解和该化学精制在系统中进行，该系统包括酶给予单元；混合装置；保持部分，例如罐或管，该保持部分安装在植物油精制厂的反应管线或生产线中，例如在化学精制设备的上游或紧邻其上游；根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种具有磷脂降解活性的酶具有磷脂酶活性。34.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种具有磷脂降解活性的酶包括具有磷脂酶a活性的酶、具有磷脂酶c活性的酶、溶血磷脂酶或其混合物。35.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种磷脂降解酶具有以下一种或多种性质：i)解离温度(td)的范围为50℃-95℃，例如60℃-95℃、70℃-95℃、例如范围为70℃-90℃；ii)最佳ph的范围为ph 4-7或ph 3-12，例如范围为ph 3-6，例如3.5-6或4-6，或例如ph的范围5-9，例如6-9或6-8，或例如范围为ph 7-12，例如8-12或8-10；iii)对其中添加了一种或多种能够络合ca和/或mg离子的螯合剂的植物油中的磷脂的反应速率，所述反应速率是该一种或多种磷脂降解酶对其中未添加一种或多种螯合剂的所述植物油中的磷脂的反应速率的至少40％。36.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种磷脂降解酶选自由以下组成的组：a.具有针对磷脂酰肌醇(pi)的特异性的磷脂酶c，b.具有针对磷脂酰胆碱(pc)和磷脂酰乙醇胺(pe)的特异性的磷脂酶c，c.具有针对磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酸(pa)和磷脂酰肌醇(pi)的特异性的磷脂酶c，
d.磷脂酶a和磷脂酶c的组合，该磷脂酶c是例如a)或b)中定义的磷脂酶c，e.磷脂酶a和溶血磷脂酶的组合，f.磷脂酶a，g.a)和b)的组合h.和/或其组合。37.根据权利要求36所述的方法，其中所述磷脂酶a选自由以下组成的组：a.与seq id no:1、4和7中任一个的成熟多肽具有至少60％序列同一性，例如至少75％序列同一性、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的多肽；b.与seq id no:2、5和8中任一所示的多肽具有至少60％序列同一性，例如至少75％序列同一性、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；c.(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有磷脂酶a活性。38.根据权利要求37所述的方法，其中所述一种或多种磷脂降解酶之一是变体或是seq id no:1、4和7中任一个的成熟多肽的变体，或者是seq id no:2、5和8中任一所示的多肽的变体，所述变体包含在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入。39.根据权利要求37或38所述的方法，其中所述一种或多种磷脂降解酶之一包含seq id no:2、5和8中任一所示的序列，基本上由其组成或由其组成。40.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述磷脂酶c选自由以下组成的组：a.与seq id no:9、11、13、15、17、19、22、25、28中任一个的成熟多肽具有至少60％序列同一性，例如至少75％序列同一性、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，b.与seq id no:10、12、14、16、18、20、23、26、29中任一所示的多肽具有至少60％序列同一性，例如至少75％序列同一性、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；以及c.(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有磷脂酶c活性。41.根据权利要求40所述的方法，其中所述一种或多种磷脂降解酶之一是seq id no:9、11、13、15、17、19、22、25和28中任一个的成熟多肽的变体，或者是seq id no:10、12、14、16、18、20、23、26和29中任一所示的多肽的变体，所述变体包含在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入。42.根据权利要求40或41所述的方法，其中所述一种或多种磷脂降解酶之一包含以下，基本上由以下组成或由以下组成：seq id no:10、12、14、16、18、20、23、26和29中任一所示的序列或其组合。43.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种磷脂降解酶之一具有磷脂酶c活性，并且选自由以下组成的组：i)与seq id no:9的成熟多肽或seq id no:10中所示的多肽具有至少60％序列同一性，例如至少75％序列同一性、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少
93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，ii)i)中定义的多肽的变体，该变体包含在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入，iii)多肽，该多肽包含seq id no:8中所示的序列，基本上由其组成或由其组成。44.磷脂降解酶在植物油中水解磷脂的用途，其中该植物油与该磷脂降解酶接触，并且然后进行化学精制。45.根据权利要求44所述的用途，其中-所述磷脂的酶促水解在包含重相或水相和轻相或油相/疏水相的反应混合物中进行，并且-在所述化学精制之前，没有减少或没有显著减少重相体积或将胶质/重相与油分离。46.一种精制的植物油或皂料，该精制的植物油或皂料通过权利要求1-43中任一项所定义的方法可获得或获得。47.一种分离的或纯化的具有磷脂酶a活性的多肽，该多肽选自由以下组成的组：a.与seq id no:3和5中任一个的成熟多肽具有至少75％序列同一性，例如至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，b.与seq id no:4和6中任一所示的多肽具有至少75％序列同一性，例如至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽；c.(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有磷脂酶a活性。48.根据权利要求47所述的多肽，该多肽是seq id no:1、3和6中任一个的成熟多肽的变体，或者是seq id no:4和6中任一所示的多肽的变体，所述变体包含在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入。49.根据权利要求47所述的多肽，该多肽包含seq id no:4或seq id no:6所示的序列，基本上由其组成或由其组成。50.一种分离的或纯化的具有磷脂酶c活性的多肽，该多肽选自由以下组成的组：i)与seq id no:22、25、28中任一个的成熟多肽具有至少60％序列同一性的多肽，ii)与seq id no:23、26、29中任一所示的多肽具有至少60％序列同一性的多肽，以及iii)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有磷脂酶c活性。51.根据权利要求50所述的多肽，该多肽是seq id no:22、25和28中任一个的成熟多肽的变体，或者是seq id no:23、26和29中任一所示的多肽的变体，所述变体包含在一个或多个位置处的取代、缺失和/或插入。52.根据权利要求50所述的多肽，该多肽包含seq id no:23、26或29所示的序列，基本上由其组成或由其组成。53.一种组合物，该组合物包含权利要求47-52中任一项所述的多肽。54.一种分离的或纯化的多核苷酸，该多核苷酸编码权利要求47-52中任一项所述的多肽。55.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含权利要求54所述的多核苷酸，其中该多核苷酸优选可操作地连接至指导在表达宿主内产生该多肽的一个或多个
控制序列。56.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列的权利要求54所述的多核苷酸，或包含权利要求55所述的核酸构建体或表达载体。57.根据权利要求56所述的重组宿主细胞，其中该多肽对该重组宿主细胞是异源的。58.根据权利要求56或57所述的重组宿主细胞，其中该一个或多个控制序列中的至少一个与编码该多肽的多核苷酸异源。59.一种产生权利要求47-52中任一项所述的多肽的方法，该方法包括在有助于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽。60.根据权利要求59所述的方法，该方法进一步包括回收该多肽。61.一种产生具有磷脂酶a活性的多肽或具有磷脂酶c活性的多肽的方法，该方法包括在有助于产生该多肽的条件下培养权利要求56-58中任一项所述的重组宿主细胞。62.根据权利要求61所述的方法，该方法进一步包括回收该多肽。

技术总结
本发明涉及植物油的精制。本发明提供了使植物油中存在的磷脂水解并随后对该油进行化学精制的方法。学精制的方法。


技术研发人员：H
受保护的技术使用者：诺维信公司
技术研发日：2018.03.19
技术公布日：2022/8/12