一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及医学检测技术领域，具体而言，涉及一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液及其制备方法和应用。


背景技术：

2.在病理实验制作切片时，经常会遇到一些含钙组织，由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，且钙十分坚硬，则含钙的组织不能直接制作切片，因此需要对组织进行脱钙处理。脱钙处理是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织的抗原不受破坏，需要对含钙的组织固定之后再使用脱钙液进行脱钙处理，然后再进行常规制片。
3.目前，一般使用的是浓硝酸稀释的单一脱钙液，其对骨髓进行脱钙处理时，会造成对骨髓活检抗原的破坏，从而导致骨髓后续切片染色时，染色质量不佳，且制片成片率不高。


技术实现要素：

4.本发明的第一个目的在于提供一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，其对骨髓组织进行脱钙处理时，会减少对骨髓活检抗原的破坏，使脱钙处理的骨髓组织后续切片染色时，染色质量较好，且制片成片率较高。
5.本发明的第二个目的在于提供一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液的制备方法，通过制备方法制得不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液。
6.本发明的第三个目的在于提供一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液的应用，其可有效应用于骨髓组织切片的骨髓组织前处理。
7.本发明的实施例通过以下技术方案实现：
8.一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，包括以下质量份数的组分：甲酸30～40份，乙酸20～30份，中性甲醛120～140份，氢氧化钠溶液45～55份，edta二钠10～15份，缓冲液25～30份。
9.进一步地，所述中性甲醛为10％中性甲醛，氢氧化钠溶液为4％氢氧化钠溶液。
10.进一步地，混合脱钙液包括以下质量份数的组分：甲酸32～38份，乙酸21～28份，中性甲醛125～135份，氢氧化钠溶液46～52份，edta二钠11～14份，缓冲液26～29份。
11.进一步地，混合脱钙液包括以下质量份数的组分：甲酸34～36份，乙酸25～30份，中性甲醛126～130份，氢氧化钠溶液48～50份，edta二钠12～14份，缓冲液26～28份。
12.一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液的制备方法，包括以下步骤：
13.s1：将甲酸与中性甲醛混合制备预混液a；
14.s2：将乙酸与中性甲醛混合制备预混液b；
15.s3：将预混液a、预混液b、氢氧化钠溶液、edta二钠和缓冲液充分混合均匀，制得混合脱钙液。
16.进一步地，所述步骤s1具体方法为：将30～40份甲酸与55～65份中性甲醛混合制备预混液a。
17.进一步地，所述步骤s2具体方法为：将20～30份乙酸与65～75份中性甲醛混合制备预混液b。
18.进一步地，所述步骤s3中缓冲液为pbs缓冲液。
19.一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液的应用，用于骨髓组织切片的骨髓组织前处理。
20.本发明实施例的技术方案至少具有如下优点和有益效果：
21.1.本发明选用相应的组分及含量配比组成的不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，其对骨髓组织进行脱钙处理时，会减少对骨髓活检抗原的破坏，使脱钙处理的骨髓组织后续切片染色时，染色质量较好，且制片成片率较高。
22.2.本发明采用相应的制备方法可以制得不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液。
23.3.本发明制得的不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，可以应用于骨髓组织切片的骨髓组织前处理。
附图说明
24.图1为实施例1提供的混合脱钙液a处理的标本染色图片；
25.图2为实施例2提供的混合脱钙液b处理的标本染色图片；
26.图3为实施例3提供的混合脱钙液c处理的标本染色图片；
27.图4为实施例4提供的混合脱钙液d处理的标本染色图片；
28.图5为实施例5提供的混合脱钙液e处理的标本染色图片；
29.图6为实施例6提供的混合脱钙液f处理的标本染色图片；
30.图7为实施例7提供的混合脱钙液g处理的标本染色图片；
31.图8为对比例提供的混合脱钙液m处理的标本染色图片。
具体实施方式
32.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
33.下面对本发明实施例提供的一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液及其制备方法和应用进行具体说明。
34.实施例1
35.本实施例提供了一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，其制备方法包括以下步骤：
36.s1：将30份甲酸与65份10％中性甲醛混合制备预混液a；
37.s2：将20份乙酸与75份10％中性甲醛混合制备预混液b；
38.s3：将预混液a、预混液b、50份4％氢氧化钠溶液、14份edta二钠和30份pbs缓冲液充分混合均匀，制得混合脱钙液a。
39.实施例2
40.本实施例提供了一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，其制备方法包括以下步骤：
41.s1：将35份甲酸与75份10％中性甲醛混合制备预混液a；
42.s2：将25份乙酸与65份10％中性甲醛混合制备预混液b；
43.s3：将预混液a、预混液b、45份4％氢氧化钠溶液、12份edta二钠和30份pbs缓冲液充分混合均匀，制得混合脱钙液b。
44.实施例3
45.本实施例提供了一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，其制备方法包括以下步骤：
46.s1：将40份甲酸与70份10％中性甲醛混合制备预混液a；
47.s2：将30份乙酸与70份10％中性甲醛混合制备预混液b；
48.s3：将预混液a、预混液b、55份4％氢氧化钠溶液、15份edta二钠和30份pbs缓冲液充分混合均匀，制得混合脱钙液c。
49.实施例4
50.本实施例提供了一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，其制备方法包括以下步骤：
51.s1：将32份甲酸与55份10％中性甲醛混合制备预混液a；
52.s2：将28份乙酸与65份10％中性甲醛混合制备预混液b；
53.s3：将预混液a、预混液b、46份4％氢氧化钠溶液、11份edta二钠和27份pbs缓冲液充分混合均匀，制得混合脱钙液d。
54.实施例5
55.本实施例提供了一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，其制备方法包括以下步骤：
56.s1：将38份甲酸与65份10％中性甲醛混合制备预混液a；
57.s2：将21份乙酸与70份10％中性甲醛混合制备预混液b；
58.s3：将预混液a、预混液b、52份4％氢氧化钠溶液、14份edta二钠和25份pbs缓冲液充分混合均匀，制得混合脱钙液e。
59.实施例6
60.本实施例提供了一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，其制备方法包括以下步骤：
61.s1：将34份甲酸与60份10％中性甲醛混合制备预混液a；
62.s2：将25份乙酸与66份10％中性甲醛混合制备预混液b；
63.s3：将预混液a、预混液b、48份4％氢氧化钠溶液、12份edta二钠和26份pbs缓冲液充分混合均匀，制得混合脱钙液f。
64.实施例7
65.本实施例提供了一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，其制备方法包括以下步骤：
66.s1：将36份甲酸与60份10％中性甲醛混合制备预混液a；
67.s2：将30份乙酸与70份10％中性甲醛混合制备预混液b；
68.s3：将预混液a、预混液b、50份4％氢氧化钠溶液、14份edta二钠和28份pbs缓冲液充分混合均匀，制得混合脱钙液g。
69.对比例
70.本对比例提供了一种脱钙液，包括以下质量份数的组分：硝酸8份，水92份。
71.本对比例还提供了一种脱钙液的制备方法，包括以下步骤：将8份浓硝酸与92份蒸馏水混匀，制得混合脱钙液m。
72.实验例
73.选择骨髓穿刺标本(长1cm，直径0.3～0.5cm)共184例，分为7组实验组(140例)和1组对照组(44例)，将标本放入10ml洁净的玻璃西林瓶内，用10％中性缓冲甲醛液固定240min，倾去固定液；7组实验组分别使用适量的实施例1～7制得的混合脱钙液a～g，脱钙100
±
60min后取出，用蒸馏水冲洗；对照组加入适量的对比例制得的脱钙液m，脱钙100
±
60min后取出，用蒸馏水冲洗；脱钙后的实验组和对照组标本同时常规脱水，石蜡包埋，连续切片3张，厚2μm，分别进行he染色，中性树胶封固，光镜观察。7组实验组的结果分别为图1～图7，对照组的结果为图8。
74.光镜观察结果如下：
75.实验组：由图1～图7可看出，实施例1～7制得的混合脱钙液a～g处理的标本，骨组织结构保持良好，骨髓细胞核呈蓝紫色，胞浆、红细胞呈红色，骨小梁呈淡红色。140例实验组中有3例切片制片不完整(完整率97.9％)，2例染色效果稍欠佳(染色清晰率98.6％)。
76.对照组：由图8可看出，对比例制得的混合脱钙液m处理的标本，骨组织结构不清，胞核、胞浆对比不鲜明，模糊不清，均质红染。16例切片制片不完整(完整率61.9％)，19例染色效果不佳(染色清晰率54.8％)。
77.综上，本技术提供的一种不破坏骨髓活检抗原的混合脱钙液，其对骨髓组织进行脱钙处理时，会减少对骨髓活检抗原的破坏，使脱钙处理的骨髓组织在后续切片染色过程中，染色质量较好，染色成片率较高。
78.以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。