一种快速鉴别鹿茸种属来源的特征多肽库及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种快速鉴别鹿茸种属来源的特征多肽库，其特征在于，所述特征多肽库为：。2.根据权利要求1所述的特征多肽库，其特征在于，所述特征多肽序列中：肽段7：序列ffehfgdlssadavmgnpk，m为m的氧化翻译后修饰；肽段9：序列ffehfgdlstpdavmgnpk，m为m的氧化翻译后修饰；肽段10：序列vvagvanalahr，n为n的脱酰胺翻译后修饰；肽段11：序列ffehfgdlstadavmgnpk，m为m的氧化翻译后修饰。3.一种利用权利要求1所述的特征多肽库在快速鉴别鹿茸种属来源中的应用，其特征在于，判定原则为：（1）样品中检出与驼鹿对照药材相应的肽段1或肽段2或肽段3，则认为样品为驼鹿来源；（2）样品中检出与驯鹿对照药材相应的肽段4或肽段5或肽段6，则认为样品为驯鹿来源；（3）样品中检出与白尾鹿对照药材相应的肽段7，则认为样品为白尾鹿来源；（4）样品中检出与白唇鹿对照药材相应的肽段8，则认为样品为白唇鹿来源；
（5）样品中检出与黇鹿对照药材相应的肽段9，且未检出肽段8与肽段11，则认为样品为黇鹿来源；（6）样品中检出与梅花鹿对照药材相应的肽段10，且检出肽段11，则认为样品为梅花鹿来源；（7）样品中检出与马鹿对照药材相应的肽段11，且未检出肽段10，则认为样品为马鹿来源。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，具体包括以下步骤：（1）样品制备方法：样品粉碎，过筛，称取粉末50mg，加入10ml变性缓冲液，摇匀，置80℃处理过夜，取出放冷至室温，12000r离心10分钟，取500μl样品提取液，使用分子量3kda的超滤离心管对样品进行脱盐和酶解，即得；（2）采用高效液相-三重四极杆质谱联用进行鉴定。5.根据权利要求4的所述的应用，其特征在于，所述变性缓冲液为6m盐酸胍，1m tris，2.5mm乙二胺四乙酸，加浓盐酸调ph至8.0。6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述脱盐和酶解的具体过程为：将样品提取液加入超滤离心管上层，12000r离心10分钟，弃去下层溶液，加入500μl水，12000r离心10分钟，弃去下层溶液，加入500μl水，12000r离心10分钟，弃去下层溶液，加入500μl 1% nh4hco3溶液和10μl 10mg/ml的牛胰蛋白酶溶液，37℃酶解15分钟，取出放冷至室温，离心，取上清液即可。7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述液相条件为：色谱柱为agilent sb c18 (2.1
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100mm，1.8μm)，柱温43℃，流速0.3ml/min，流动相a为0.1%甲酸溶液，b为0.1%甲酸乙腈溶液，进行梯度洗脱，进样量为5 μl。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述梯度洗脱的条件为：0~9min,3%b
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7.5%b; 9~13min, 7.5%b
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25%b; 13~14min,25%b
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90%b; 14~17min, 90%b; 17~17.5min, 90%b
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97%b,17.5~21min,97%b。9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述质谱条件为：采用质谱检测器，电喷雾离子化（esi），正离子模式下，进行多反应监测；鞘气流速46l/hr；辅助气流速850 l/hr；喷雾电压3.5kv；离子源温度150℃；辅助气温度400℃；锥孔电压30v，碰撞电压35v，溶剂延迟（solvent delay）为0～4min和16～20min。

技术总结
本发明属于鹿茸种属鉴别领域，具体涉及一种快速鉴别鹿茸种属来源的特征多肽库及其应用。该特征多肽库具体组成为：EFTPELQADYQK、VDEVGGEALGR、FFEHFGDLSTADAVMHNAK、VDEVGAEALGR、MLTSEEK、DFTPVLQADFQK、FFEHFGDLSSADAVmGNPK、LLGNVLVVVMAR、FFEHFGDLSTPDAVmGNPK、VVAGVAnALAHR、FFEHFGDLSTADAVmGNPK。本发明可以同时对7种鹿科动物的鹿茸实现鉴别鉴定，高效且专属性好。本发明得到了能够进行区别鉴定的特征多肽，专属性强，检测方法简单快捷，提高了鹿茸相关产品的质量控制水平，提高了临床用药的安全性和有效性，且检出限低，检测样品用量少。检测样品用量少。检测样品用量少。


技术研发人员：林永强 薛菲 孙沛霖 郭东晓 马双成 程显隆 牛艳 穆向荣 于凤蕊 许丽丽
受保护的技术使用者：山东省食品药品检验研究院
技术研发日：2022.06.02
技术公布日：2022/8/5