一种用于甲鱼细菌性出血性败血症的组合物及治疗方法

1.本发明属于甲鱼病害防控技术领域，特别是涉及一种用于甲鱼由细菌引起的出血性败血症病害的组合药物及治疗方法。


背景技术：

2.甲鱼又称鳖或团鱼，是一种珍贵的经济动物，不仅肉味鲜美，营养丰富，蛋白质含量高，属于高营养的水产品种类。另外，甲鱼全身各部分均可入药，具有滋阴清热，平肝益气和破结软坚与消淤等功效。由于野生甲鱼数量有限，生长速度慢，因此，人工养殖甲鱼备受推崇。但是，甲鱼是变温动物，秋后当水温降到16℃左右时就停食，低于12℃时就钻入泥沙中冬眠，来年开春，水温上升到16℃时，开始从冬眠中苏醒过来，进行摄食，甲鱼的休眠行为影响养殖行业的高效运转和正常市场需求。现在甲鱼养殖行业一般采取“二段法”养殖方式，秋、冬季节时把幼稚甲鱼放入30℃恒温的温室中养殖，来年春季温度回升之后再放入莲田或稻田进行生态养殖。在温室养殖环境中，由于养殖密度大，换水少，饲料投量大，通风换气少，造成养殖水质环境恶劣，氨态氮一般达到 30mg/l以上，甚至更高。在这种养殖环境下，甲鱼非常容易患病死亡。
3.温室甲鱼养殖中，由于环境条件恶劣，甲鱼特别容易感染细菌引起的出血性败血症，从出现病症到死亡发展速度快，一般死亡率达到20％以上，养殖户会用各种常用消毒剂和抗生素来控制甲鱼的病情，但是很难起到明显降低和延缓死亡的作用，导致病情严重时死亡率高达80％以上，甚至整个养殖池中甲鱼全部死亡，给养殖户带来巨大损失。
4.为了降低甲鱼死亡率，迅速控制出血性败血病症蔓延，降低养殖户损失，亟需一种甲鱼出血性败血症的治疗方法。


技术实现要素：

5.为了解决上述问题，本发明提供了一种用于甲鱼由细菌引起的出血性败血症病害的组合药物及治疗方法。本发明提供的组合药物能够迅速控制病情蔓延，从而降低甲鱼的死亡率。
6.为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
7.本发明提供了一种用于甲鱼由细菌引起的出血性败血症病害的组合药物，所述组合药物包括恩诺沙星、三黄粉、壳聚糖微生物复合制剂和稻壳醋液。
8.优选的，所述壳聚糖微生物复合制剂包括壳聚糖、乳酸杆菌和复合芽孢杆菌；
9.所述壳聚糖的脱乙酰度大于等于85％，平均分子量小于等于10万；
10.所述乳酸杆菌的有效活菌数大于等于5.0亿/ml；所述复合芽孢杆菌的有效活菌数大于等于2.0亿/ml；
11.所述复合芽孢杆菌包括地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和多粘类芽孢杆菌；所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和多粘类芽孢杆菌的活菌数比为(0.5～2.0): (0.5～2.0):(0.5～2.0)；
12.所述壳聚糖、乳酸杆菌和复合芽孢杆菌的重量比为(5～10):(7～14):(14～56)。
13.本发明还提供了一种基于上述组合药物的甲鱼细菌性出血性败血症的治疗方法，包括以下步骤：
14.当甲鱼出现出血性败血症后，依次给甲鱼饲喂恩诺沙星、三黄粉和壳聚糖微生物复合制剂，同时向水体中投放稻壳醋液。
15.优选的，所述甲鱼的养殖环境包括温室，甲鱼的生长阶段包括幼年。
16.优选的，所述恩诺沙星或三黄粉或壳聚糖微生物复合制剂的饲喂的方式包括：将恩诺沙星或三黄粉或壳聚糖微生物复合制剂与甲鱼的饲料混合制成软性颗粒饲料进行饲喂。
17.优选的，所述恩诺沙星或三黄粉的饲喂时间分别为3～5d；
18.所述恩诺沙星每天的总饲喂量为20～40mg/kg；
19.所述三黄粉每天的总饲喂量为5～10g/kg。
20.优选的，所述壳聚糖微生物复合制剂的饲喂时间为7～15d。
21.优选的，所述壳聚糖微生物复合制剂每天的总投喂量为甲鱼的饲料质量的 0.05％～0.08％。
22.优选的，所述稻壳醋液的投放量为水体总量的0.005％～0.01％。
23.本发明还提供了一株引起甲鱼细菌性出血性败血症的新型变形杆菌 stb12；所述新型变形杆菌stb12的保藏编号为cctcc no.m 2021964(中国典型培养物保藏中心)。
24.本发明提供了一种用于甲鱼细菌性出血性败血症的组合物，所述组合药物包括恩诺沙星、三黄粉、壳聚糖微生物复合制剂和稻壳醋液。本发明提供的组合药物，采取内外兼治的方法，抗生素、中药和微生物共同发挥作用起到体内治疗，稻壳醋液则在甲鱼体外发挥灭菌的功效，起到快速起效、无耐药性、还能兼顾提高甲鱼自身免疫力的治疗效果。由实施例可知，对爆发了出血症的温室养殖幼年甲鱼使用本发明提供的组合药物后，甲鱼的死亡率能够从80％降低至20％以下。
25.生物保藏证明
26.新型变形杆菌(proteus terrae)stb12，于2021年8月02日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地为武汉，保藏编号为cctcc no.m 2021964。
附图说明
27.图1为新型变形杆菌(proteus terrae)stb12的进化树。
具体实施方式
28.本发明提供了一种用于甲鱼由变形杆菌(proteus terrae)细菌引起的出血性败血症病害的组合药物，所述组合药物包括恩诺沙星、三黄粉、壳聚糖微生物复合制剂和稻壳醋液。本发明提供的组合药物通过抗生素短期快速控制病害、中药和微生物制剂联合提高温室甲鱼的免疫能力，以及泼洒稻壳醋液对水体进行生物消毒，经过所述组合药物的治疗后，能够快速降低温室养殖甲鱼由新型变形杆菌引起的爆发性的细菌性出血性败血症病。
29.在本发明中，所述壳聚糖微生物复合制剂优选包括壳聚糖、乳酸杆菌和复合芽孢杆菌。在本发明中，所述壳聚糖微生物复合制剂的有效活菌数优选为 1.5～2.5亿个/ml。
30.在本发明中，所述壳聚糖的脱乙酰度优选大于等于85％，平均分子量优选小于等于10万。
31.在本发明中，所述乳酸杆菌的有效活菌数优选大于等于5.0亿/ml；所述复合芽孢杆菌有效活菌数优选大于等于2.0亿/ml
32.在本发明中，所述复合芽孢杆菌优选包括地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和多粘类芽孢杆菌；所述地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和多粘类芽孢杆菌的活菌数比优选为(0.5～2.0):(0.5～2.0):(0.5～2.0)，进一步优选为1:1:1。
33.在本发明中，所述壳聚糖微生物复合制剂优选还包括辅料；所述辅料优选包括麸皮和/沸石粉；所述麸皮的重量份优选为30～35份，进一步优选为32份；所述沸石粉的重量份优选为15～20份，进一步优选为16份。
34.在本发明中，所述壳聚糖、乳酸杆菌、复合芽孢杆菌和辅料的重量份比优选为(5～10):(7～14):(14～56):(15～55)，进一步优选为8:10:30:48或10:12:24:55 或5:8:32:50或6:10:28:48。在本发明中，所述壳聚糖微生物复合制剂进一步优选为专利cn108815202a提供的壳聚糖微生物复合制剂。
35.本发明通过饲喂甲鱼壳聚糖微生物复合制剂，能够使有益芽孢杆菌占领甲鱼的肠道空间，提高甲鱼的抗病能力和免疫力。
36.在本发明中，所述三黄粉优选包括大黄、黄芩和黄柏。在本发明中，所述三黄粉的制备方法优选包括：将大黄、黄芩和黄柏等比例混合后进行研磨得到混合粉末，对混合粉末过60目筛后得到三黄粉。本发明通过中药中多种有效成分共同作用的机制，能够有效避免病原菌形成耐药性。
37.在本发明中，所述稻壳醋液优选为市售产品。在本发明的实际应用中，购自江西金糠新材料科技有限公司。本发明使用的稻壳醋液无毒副作用，起到了杀灭水体中病菌的作用。
38.本发明还提供了一种基于上述组合药物的甲鱼由细菌引起的出血性败血症病的治疗方法，包括以下步骤：
39.当甲鱼出现出血性死亡的病症后，依次给甲鱼饲喂恩诺沙星、三黄粉和壳聚糖微生物复合制剂，同时向水体中投放稻壳醋液。在本发明中，所述甲鱼的养殖环境优选包括温室，甲鱼的生长阶段优选包括幼年。本发明提供的治疗方法通过抗生素、中药和微生物制剂的搭配，能够在发病初期迅速控制病情蔓延，中期继续加强对病原菌控制，巩固病情不复发，后期通过壳聚糖有益微生物复合制剂提高甲鱼自身的免疫力，同时兼顾内外遏止病菌，从根源上防止病菌的传播。
40.在本发明中，当甲鱼出现出血症或出现出血性死亡的病症，并且呈爆发式蔓延时，给甲鱼饲喂恩诺沙星。本发明所述恩诺沙星的饲喂的方式优选包括：将恩诺沙星与甲鱼的饲料混合制成软性颗粒饲料进行饲喂；所述恩诺沙星每天的总饲喂量优选为20～40mg/kg，优选分为2次投喂，所述2次饲喂优选为等量饲喂，饲喂的时间优选为3～5d。本发明使用的抗生素恩诺沙星兼顾有效性和安全性，在病情的初期控制病情的发展。
41.当恩诺沙星的饲喂结束后，本发明给甲鱼饲喂三黄粉。在本发明中，所述三黄粉的饲喂的方式优选包括：将三黄粉与甲鱼的饲料混合制成软性颗粒饲料进行饲喂；所述三黄粉每天的总饲喂量优选为5～10g/kg，优选分为2次投喂，所述2次饲喂优选为等量饲喂，饲
喂时间优选为3～5d。本发明联合使用抗生素和中药以减少病菌耐药性的生成，还能够快速控制病原菌传染，减少损失。
42.当三黄粉的饲喂结束后，本发明给甲鱼饲喂壳聚糖微生物复合制剂。在本发明中，所述壳聚糖微生物复合制剂的饲喂的方式优选包括：将壳聚糖微生物复合制剂与甲鱼的饲料混合制成软性颗粒饲料进行饲喂；所述壳聚糖微生物复合制剂每天的总投喂量优选为甲鱼的饲料质量的0.05％～0.08％，优选分为2次投喂，所述2次饲喂优选为等量饲喂，饲喂的时间优选包括7～15d。本发明使用的壳聚糖微生物复合制剂是一种微生态制剂，具有提高免疫力和促进生长作用，能够建立良好的甲鱼肠道微生态环境，提高自身免疫力，提高抗病能力。
43.在饲喂甲鱼恩诺沙星、三黄粉和壳聚糖微生物复合制剂的同时，本发明还向水体中投放稻壳醋液。在本发明中，所述稻壳醋液开始投放的时间和开始饲喂恩诺沙星的时间优选一致；所述稻壳醋液的投放量优选为水体总量的 0.005％～0.01％。本发明通过向水体中投放稻壳醋液能够起到杀灭水体中病原菌的作用。
44.本发明还提供了一株引起甲鱼细菌性出血性败血症的新型变形杆菌 stb12；所述新型变形杆菌stb12的保藏编号为cctcc no.m 2021964(中国典型培养物保藏中心)。在本发明中，所述新型变形杆菌stb12分离自因上述爆发性出血病死亡的甲鱼的体内。
45.为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
46.实施例1
47.收集因爆发性出血病病死的甲鱼，从外表观察，主要是腹部、四肢末端和肛门部位有明显红色出血现象的，解剖之后甲鱼的肠道、肝脏和脾脏等有典型出血症状。
48.对甲鱼感染的病菌进行分析，通过分子生物学检测、形态学观察和生理生化指标测定，初步鉴定病原菌是一种新型变形杆菌(proteus terrae)，该菌株编号为stb12，保藏编号为cctcc no.m 2021964(中国典型培养物保藏中心)。
49.实施例2
50.利用多种抗生素对实施例1分离获得的新型变形杆菌stb12进行抑菌效果的检测，检测抑菌效果的方法为本领域技术人员熟知的常规方法。各类抗生素对于新型变形杆菌stb12的应用效果见表1。
51.表1不同抗生素对甲鱼出血病新型病原菌新型变形杆菌stb12的抑菌效果
[0052][0053]
注：抑菌圈直径为5次重复的平均值，
“‑‑‑”
表示没有抑菌效果
[0054]
由表1可知，多种抗生素中，控制新型变形杆菌stb12效果最好的是沙星类抗生素，但是只有恩诺沙星是水产上允许使用的抗生素，比较新霉素和恩诺沙星的抑菌圈大小，选择恩诺沙星在本发明中用于治疗甲鱼爆发性出血病。
[0055]
对比例1
[0056]
出血症爆发后，不做任何处理的温室饲养甲鱼。
[0057]
应用例1
[0058]
2020年11-12月在温室养殖幼年甲鱼(体质量为30g-200g)发现养殖池中出现15例出血性死亡病症的幼年甲鱼，并且呈爆发式蔓延，当天即在饲料中添加抗生素恩诺沙星，恩诺沙星的添加用量为以幼年甲鱼的体重为基础，每日添加20mg/kg，分为2次投喂，连用5d。在恩诺沙星药物拌饲料治疗爆发性出血病的同时，还在水体中泼洒稻壳醋液(购自江西金糠新材料科技有限公司)，添加剂量按照水体总量的0.005％投入。
[0059]
恩诺沙星治疗结束后，向在饲料中添加三黄粉(将大黄、黄芩和黄柏等比例混合研成粉末，过60目筛之后混入饲料中)，添加的剂量为每天每公斤幼年甲鱼添加5g，连续投喂5d。
[0060]
三黄粉治疗结束后，在饲料中添加壳聚糖微生物复合制剂(配方来自专利 cn108815202a中的实施例2)，壳聚糖微生物复合制剂的用量为饲料质量的0.05％。饲喂该壳聚糖微生物复合制剂15d后，温室甲鱼由新型变形杆菌(proteusterrae)引起的爆发性出血病可以得到有效控制。40d后幼年甲鱼的死亡率从80％ (对比例1)下降到20％以下(如表2)，表明上述治疗方法能够有效控制温室甲鱼出血病的爆发和死亡率。
[0061]
表2生物综合控制甲鱼出血病效果对比
[0062]
处理初始甲鱼总数(只)40d后甲鱼死亡数(只)死亡率对比例135028080％实施例13556819.15％
[0063]
应用例2
[0064]
2020年11-12月在温室养殖幼年甲鱼(体质量为30g-200g)发现5个养殖池中都出现死亡甲鱼现象，起初每个养殖池每天都有多只甲鱼死亡。随后十几天，呈爆发式蔓延。在饲料中添加抗生素恩诺沙星，恩诺沙星的添加用量为以幼年甲鱼的体重为基础，每日添加40mg/kg，分为2次投喂，连用3d。在恩诺沙星药物拌饲料治疗爆发性出血病的同时，还在水体中泼洒稻壳醋液(购自江西金糠新材料科技有限公司)，添加剂量按照水体总量的0.01％投入。
[0065]
恩诺沙星治疗结束后，向在饲料中添加三黄粉(将大黄、黄芩和黄柏等比例混合研成粉末，过60目筛之后混入饲料中)，添加的剂量为每天每公斤幼年甲鱼添加10g，连续投喂3d。
[0066]
三黄粉治疗结束后，在饲料中添加壳聚糖微生物复合制剂(配方来自专利 cn108815202a中的实施例2)，壳聚糖微生物复合制剂的用量为饲料质量的 0.08％。饲喂该壳聚糖微生物复合制剂7d后，温室甲鱼由新型变形杆菌(proteusterrae)引起的爆发性出血病可以得到有效控制，幼年甲鱼的死亡率从80％(对比例1)下降到16.5％(如表3)，表明上述治疗方法能够有效控制温室甲鱼出血病的爆发和死亡率。
[0067]
表3生物综合控制甲鱼出血病效果对比
[0068]
处理初始甲鱼总数(只)40d后甲鱼死亡数(只)死亡率对比例135028080％实施例23626016.5％
[0069]
由以上实施例可知，采用本技术提供的组合药物可以有效控制甲鱼由细菌引起的出血性败血症，使甲鱼的死亡率从80％降低至20％以下。
[0070]
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。