一种增强免疫力的参杞强精颗粒及其制备方法

1.本发明涉及保健药品领域，具体而言，涉及一种增强免疫力的参杞强精颗粒及其制备方法。


背景技术：

2.随着人口老年化时代的到来以及我国全面三胎政策的开放，越来越多的家庭准备生育二胎或三胎。相反，由于环境污染、工作压力大、性开放、不良生活习惯等因素的影响，人类的生育能力日趋下降，这一矛盾严重影响了社会的稳定以及家庭的和睦，严重影响关于人口政策的实施。而本项目所研发的产品参杞强精颗粒具有补肾健脾、活血养血、清热利湿、增强免疫作用，已在临床应用十年以上，是治疗少、弱精症的有效方剂，能更好地服务人口战略与生育政策，因此，本项目的实施具有重要意义，十分必要且刻不容缓。
3.中医药治疗男性不育有独特疗效，积累了丰富的经验。中医学认为男性不育症的病因复杂，包括先天和后天因素，外伤和饮食情志劳伤等，涉及肾、脾、肝，其中肾尤为重要。对于少精子症病因病机，中医学认为，先天禀赋薄弱而造成肾精匮乏，或房室不节、声色过度而暗耗肾精，或五劳七伤、病久及肾致肾精消耗，或后天脾胃孱弱、失于调养而致肾精不得充养，最终肾精亏损，形成“精亏”。肾藏精主生殖，肾精不足，则生殖机能减退，生殖之精生成乏源；又有因湿热熏蒸精室，凝结成浊，阻滞精脉，或忍精不泄，败精瘀阻，或肝气不舒，疏泄失常，气机失和，奇经血瘀，精道痹阻，或久病入络，或素有痰湿，或外伤，或精索血脉迂曲，致浊瘀阻窍而成“精瘀”。
4.传统增强免疫力的中药存在需要煎煮、携带不便、久置易发霉变质、服用容积大等缺点，给用户带来不好的使用体验。


技术实现要素：

5.为了弥补以上不足，本发明提供了一种增强免疫力的参杞强精颗粒及其制备方法，旨在改善传统增强免疫力的中药存在需要煎煮、携带不便、久置易发霉变质、服用容积大等缺点，给用户带来不好的使用体验的问题。
6.本发明是这样实现的：第一方面，本发明提供一种增强免疫力的参杞强精颗粒，该参杞强精颗粒以党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、鹿角霜、淫羊藿、神曲、路路通和紫河车为主要组成成分，以糊精和甜菊素为辅料配制而成。
7.在本发明的一种实施例中，所述党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、鹿角霜、淫羊藿、神曲、路路通和紫河车的重量依次为10-20g、15-25g、19-28g、11-19g、8-14g、7-12g、4-17g、21-38g、22-39g、6-14g、10-19g、2-15g、4-16g和2-6g。
8.第二方面，本发明另提供一种增强免疫力的参杞强精颗粒的制备方法，包括上述的增强免疫力的参杞强精颗粒，及以下步骤：s1：前处理，对党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫
羊藿和路路通这些原材料进行制备前的处理，利用清洗机构、分切机构和混合机构对原料依次进行清洗、分切和混合；s2：煎煮，利用煎煮机构对混合在一起的党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通进行煎制；s3：过滤，把党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通存在残渣过滤掉，得到药液；s4：制软，对药液进行浓缩，并对浓缩的药液进行浸膏，然后把紫河车、鹿角霜、神曲打粉和糊精混合均匀后加入到浸膏内，制作软膏；s5：整粒，对软膏进行干燥打粉并在其中加入甜菊素制成粒，对制粒进行干燥使其形成整粒；s6：检验，利用薄层色谱鉴别、显微鉴别、微生物限度检查和常规检查、含量测定对整粒内的成分进行鉴别；s7：药理研究，利用临床研究观察、动物实验研究和毒理学研究对整粒进行研究得到药理依据。
9.在本发明的一种实施例中，所述步骤s1中清洗机构由中药清洗机和上料结构组成，上料结构依次把党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通等这些原材料注入到中药清洗机内，中药清洗机对上述原料进行清理。
10.在本发明的一种实施例中，所述步骤s1中分切机构由分切机和收集箱构成，所述收集箱设置在所述分切机下料口的正下方，混合机构由反应釜、电机、连接轴、搅叶和料仓构成，所述电机固定在所述反应釜的上表面上，所述连接轴的上端固定在所述电机的输出轴上，所述搅叶固定在所述连接轴的外壁上，所述料仓设置在所述反应釜上，分切机把清洗干净的原料分切成一段一段，收集箱把成段的原料收集起来，操作员把原料通过料仓注入到反应釜内，电机工作带动搅叶对原料进行混合。
11.在本发明的一种实施例中，所述步骤s2煎煮机构由煎煮炉和过滤网板构成，所述过滤网板固定在所述煎煮炉内，把混合均匀的原料注入到煎煮炉内，在煎煮炉内注入饮用水，煎煮炉工作对原料进行煎煮，煎煮完成后过滤网板把滤渣过滤掉，得到浓缩的药液。
12.在本发明的一种实施例中，所述步骤s6中的薄层色谱鉴别对组方药味进行薄层色谱鉴别研究，并选用专属性强、重现性好的药味的鉴别方法控制产品质量，对于药材法定标准中无鉴别项、含量测定性的药味，对照物质首选对照药材，其次为重现性强含量可鉴别的对照品，工作有，供试品制备方法研究、展开条件选择、检视条件选择、专属性考察和重现性考察，根据处方组成药物，以原药材为对照，参照药典方法，针对黄芪中的黄芪甲苷，枸杞子中的枸杞子多糖、甜菜碱，川续断中的川续断皂苷ⅵ，益母草中的盐酸水苏碱，当归中的阿魏酸，五味子中的五味子醇甲，党参中的党参炔苷等可以定性鉴别的成分优选，确定几个定性鉴别项目，显微鉴别对处方中打粉制粒的原药材，拟通过显微镜下观察鉴别，微生物限度检查利用微生物限度检查法的要求对产品的微生物限度检查方法进行研究，常规检查对参杞强精颗粒进行常规检查，包括性状、水分、重量差异、溶散时限等。含量测定研究根据处方组成药物，参照药典方法，在采用高效液相色谱法测定川续断中的川续断皂苷ⅵ、可见-紫外分光光度法测定枸杞子中的枸杞子多糖、薄层色谱法测定枸杞子中的甜菜碱、tcl法测定益母草中的盐酸水苏碱，hplc法测定当归中的阿魏酸、hplc法测定五味子中的五味子醇甲、
hplc法或tcl法测定黄芪中的黄芪甲苷等方面开展实验研究，摸索适合本制剂的定量控制的指标。
13.在本发明的一种实施例中，所述s7中的临床研究观察把病例纳入标准：有规律性生活1年以上，未采取任何避孕措施女方未受孕；精子检查符合少弱精子症的诊断标准；抗精子抗体阴性；检测方法：采用计算机辅助精液分析技术作全套相关分析；病例分组及给药方法；病例分组：按随机、对照、均衡原则，将符合纳入标准的120例少弱精子症患者，根据就诊先后顺序编号，根据随机数字表随机分为服用生精胶囊的对照组和服用参杞强精颗粒的治疗组，每组60例；给药方法：治疗组口服参杞强精颗粒；对照组口服阳性对照药物生精胶囊4粒/次，3次/天；观察指标：1个疗程后，观察临床疗效及精子参数的变化；临床治愈：女方怀孕或精子密度、活动力等恢复正常；有效：精子检测虽不正常，但精子活率及a级或a b级活力精子提升≥30% ，少精症治疗后精子密度提升≥2
×
109/l；无效：未达以上标准者。
14.在本发明的一种实施例中，所述s7中的动物实验研究利用参杞强精颗粒对弱精子症大鼠精子质量的影响以及抗氧化作用的研究将雄性大鼠50 只，随机分为5组，每组10只，除正常组外，每只大鼠灌胃给予奥硝唑400 mg/kg/d建立大鼠弱精子症模型，分别灌胃给予参杞强精颗粒低、中、高剂量，正常组给予0.5%羧甲基纤维素钠，各组大鼠连续给药21d后检测大鼠精子活动力、精子活率、精子计数、附睾丙二醛含量和超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、一氧化氮合酶活性，取各组大鼠睾丸和附睾尾以3%戊二醛固定，常规病理切片，观察大鼠生精上皮、附睾上皮和管腔内精子数目的变化，采用透射电镜观察生精上皮、附睾上皮及精子的细胞与亚细胞结构；参杞强精颗粒对少弱精子症大鼠精子相关酶活性的影响50只雄性sd大鼠，随机分为5组，每组10只，以奥硝唑灌胃给药建立大鼠弱精子症模型，采用实时荧光定量pcr检测少弱精子症大鼠精子腺苷酸环化酶、磷酸二酯酶基因的表达，并检测精子顶体酶活性影响；参杞强精颗粒对弱精症大鼠能量代谢及相关蛋白表达的影响将60只sd健康雄性大鼠随机分为正常组、模型组、参杞强精颗粒高、中、低剂量组和阳性对照组，采用奥硝唑灌胃诱导建立弱精症大鼠模型，检测大鼠附睾组织α-葡萄糖苷酶、果糖、乳酸脱氢酶及丙二醛的浓度，采用免疫组织化学法检测各组大鼠睾丸组织fas、fas l、bcl-2、bax蛋白在大鼠睾丸实质组织中的表达；采用实时荧光定量pcr法检测大鼠附睾组织核因子nf-e2相关因子和琥珀酸脱氢酶mrna水平。
15.在本发明的一种实施例中，所述s7中的毒理学研究利用急性毒性试验选用健康昆明种小鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别灌胃给药参杞强精颗粒6种不同剂量，灌胃给药一次，给药后观察14天，观察指标包括动物体重变化、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应等，观察到动物有毒性反应时应进行肉眼尸检，记录所有病变组织时应对组织进行镜检，并测定参杞强精颗粒的半数致死剂量或最大耐受量；长期毒性试验，选取成年健康sd大鼠80只，雌雄各半，随机分为4组，每组20只，分为空白对照组，参杞强精颗粒高剂量组、参杞强精颗粒中剂量组和参杞强精颗粒低剂量组，空白组每天灌胃等容量饮用水，给药组按体表面积折算人等效剂量，分别给予人体等效剂量的1/2、1、2倍的参杞强精颗粒，每天灌胃给药1次，连续给药6个月，每周称重1次，并按体重调整给药剂量，实验期间，观察大鼠的一般状况，包括外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、二便、摄食量、体重、死亡等情况，同时测定血液学指标、液生化学指标、脏器指数体重指标和病理组织学检测，统计学分析均采用 spss22.0版统计学软件进行方差分析，计量数据
以x
±
s表示，组间比较采用两样本均数的t检验，多组间样本均数比较采用方差分析；以p＜0.05认为有显著性差异，生殖毒性研究，选取成年健康sd大鼠80只，雌雄比例1：2，开始分笼饲养，给药之后再合笼饲养，随机分为4组，每组20只，分为空白对照组，参杞强精颗粒高剂量组、参杞强精颗粒中剂量组和参杞强精颗粒低剂量组，空白组每天灌胃等容量饮用水，给药组按体表面积折算人等效剂量，分别给予人体等效剂量的1/2、1、2倍的参杞强精颗粒，每天灌胃给药1次，雌性大鼠连续给药21 d，21 d 后合笼交配期间继续给药，妊娠后给药至大鼠妊娠第15天处死，观察临床表现及病理变化，统计各剂量组雄鼠生育率、雌鼠性周期、妊娠率、孕鼠死亡率和死胎率；胚胎-胎仔发育毒性实验：随机分组，对妊娠后大鼠进行灌胃给予溶媒对照品和参杞强精颗粒，于妊娠20d（gd20）处死母鼠，取出胎仔，检查黄体数、着床数、活胎数、死胎数等，遗传毒性研究，ames试验：参杞强精颗粒设五个剂量组及溶剂对照组、自发对照组和阳性对照组，使用经β-萘黄酮与苯巴比妥联合诱导雄性大鼠肝s9，按标准方法制成s9混合液后作为活化系统，试验用ta97、ta98、ta100、ta102 四种菌株，用间接致突变物测定s9活性，高压0.103 mpa 蒸汽灭菌20 min后，在添加和不添加s9试验条件下进行平板掺入法试验，每组同时作三个平行皿，并重复试验，s9阳性对照物：ta97和ta98 用0.5
ꢀµ
g/皿的4-硝基喹啉-n-氧化物；ta100用1.5
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g/皿的nan3；ta102用1.0
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g/皿的mmc； s9阳性对照物ta102用50
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g/皿的1-8-二羟基蒽醌，其余三个菌林均用20
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g/皿的2-af，每皿加入阳性对照的体积为0.1 ml，受试物组回变菌落数增加一倍以上即回变菌落数等于或大于2乘以未处理对照数，有剂量反应关系或至少某一测试点有可重复的并有统计学意义的阳性反应，即确定该受试物诱变试验阳性；骨髓细胞微核试验：昆明种小鼠，雌雄各半，60只，初始体重25-30 g随机分为5组，分别为空白对照组，参杞强精颗粒高剂量组、参杞强精颗粒中剂量组和参杞强精颗粒低剂量组及环磷酰胺阳性对照组，口服灌胃给药，每次间隔24 h，首次染毒后观察30 h，采用30 h两次给药法，灌胃间隔24 h，在第二次给受试物后6 h 脱颈椎处死小鼠，取胸骨髓经制片、固定和giemsa染色于油镜下每只小鼠计数1000个嗜多染红细胞中含微核pcb数，计算微核细胞率（%），观察200个红细胞中嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值（pce/nce），试验组与对照组相比，试验结果微核率有明显剂量反应关系并有统计学意义时即为阳性结果；若统计学上差异有显著性但无剂量反应关系时结果能重复者确定为阳性，精子畸形试验：昆明种小鼠，全雄，50只，初始体重25～30 g随机分为5组，分别为空白对照组，参杞强精颗粒高剂量组、参杞强精颗粒中剂量组和参杞强精颗粒低剂量组及环磷酰胺阳性对照组（cp，40 mg/kg.bw），每天按20 ml/kg.bw 经口灌胃连续5天，首次染毒后观察35天，脱颈椎处死小鼠取双侧附睾制片，甲醇固定1%伊红染色后，在高倍镜下计数每只雄性小鼠的1000条完整精子，辨析精子畸形的数目、畸形的类型确定精子畸形率，每个剂量组分别与相应阴性对照组比较，畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义并有剂量反应关系，即可判定为阳性。
16.本发明的有益效果是：本发明通过上述设计得到的一种增强免疫力的参杞强精颗粒的制备方法，使用时，对党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通这些原材料进行制备前的处理，利用清洗机构、分切机构和混合机构对原料依次进行清洗、分切和混合，利用煎煮机构对混合在一起的党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、
五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通进行煎制，把党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通存在残渣过滤掉，得到药液，对药液进行浓缩，并对浓缩的药液进行浸膏，然后把紫河车、鹿角霜、神曲打粉和糊精混合均匀后加入到浸膏内，制作软膏，对软膏进行干燥打粉并在其中加入甜菊素制成粒，对制粒进行干燥使其形成整粒，利用薄层色谱鉴别、显微鉴别、微生物限度检查和常规检查、含量测定对整粒内的成分进行鉴别，利用临床研究观察、动物实验研究和毒理学研究对整粒进行研究得到药理依据，该参杞强精颗粒将传统中药汤剂开发成颗粒剂，克服了汤剂煎煮、携带不便、久置易发霉变质、服用容积大等缺点，首次对中药验方强精煎开展制剂研究，力求开发出治疗少、弱精子症的传统中药制剂参杞强精颗粒，研发制备成安全有效、质量可控、经济方便、服药剂量小、临床用药方便、便于携带贮藏的颗粒剂，一旦参杞强精颗粒研发成功，获得大批量地投产，规模化的生产带动产业化的发展，不仅可发挥中医药资源丰富的优势、增加就业岗位、也可提升中医药产品创新能力和技术水平，增强中医药行业的竞争力，推动地区经济发展具有重要的意义。
附图说明
17.为了更清楚地说明本发明实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
18.图1为本发明一种增强免疫力的参杞强精颗粒的生产工艺流程图。
具体实施方式
19.为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
实施例
20.请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种增强免疫力的参杞强精颗粒，该参杞强精颗粒以党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、鹿角霜、淫羊藿、神曲、路路通和紫河车为主要组成成分，以糊精和甜菊素为辅料配制而成，所述党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、鹿角霜、淫羊藿、神曲、路路通和紫河车的重量依次为10-20g、15-25g、19-28g、11-19g、8-14g、7-12g、4-17g、21-38g、22-39g、6-14g、10-19g、2-15g、4-16g和2-6g。
21.具体的，本发明另提供一种增强免疫力的参杞强精颗粒的制备方法，包括上述的增强免疫力的参杞强精颗粒，及以下步骤：s1：前处理，对党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通这些原材料进行制备前的处理，利用清洗机构、分切机构和混合机构对原料
依次进行清洗、分切和混合，所述步骤s1中清洗机构由中药清洗机和上料结构组成，上料结构依次把党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通等这些原材料注入到中药清洗机内，中药清洗机对上述原料进行清理，有效的防止杂质影响药性，所述步骤s1中分切机构由分切机和收集箱构成，所述收集箱设置在所述分切机下料口的正下方，混合机构由反应釜、电机、连接轴、搅叶和料仓构成，所述电机固定在所述反应釜的上表面上，所述连接轴的上端固定在所述电机的输出轴上，所述搅叶固定在所述连接轴的外壁上，所述料仓设置在所述反应釜上，分切机把清洗干净的原料分切成一段一段，收集箱把成段的原料收集起来，操作员把原料通过料仓注入到反应釜内，电机工作带动搅叶对原料进行混合；s2：煎煮，利用煎煮机构对混合在一起的党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通进行煎制，所述步骤s2煎煮机构由煎煮炉和过滤网板构成，所述过滤网板固定在所述煎煮炉内，把混合均匀的原料注入到煎煮炉内，在煎煮炉内注入饮用水，煎煮炉工作对原料进行煎煮，煎煮完成后过滤网板把滤渣过滤掉，得到浓缩的药液；s3：过滤，把党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通存在残渣过滤掉，得到药液；s4：制软，对药液进行浓缩，并对浓缩的药液进行浸膏，然后把紫河车、鹿角霜、神曲打粉和糊精混合均匀后加入到浸膏内，制作软膏；s5：整粒，对软膏进行干燥打粉并在其中加入甜菊素制成粒，对制粒进行干燥使其形成整粒；s6：检验，利用薄层色谱鉴别、显微鉴别、微生物限度检查和常规检查、含量测定对整粒内的成分进行鉴别，所述步骤s6中的薄层色谱鉴别对组方药味进行薄层色谱鉴别研究，并选用专属性强、重现性好的药味的鉴别方法控制产品质量，对于药材法定标准中无鉴别项、含量测定性的药味，对照物质首选对照药材，其次为重现性强含量可鉴别的对照品，工作有，供试品制备方法研究、展开条件选择、检视条件选择、专属性考察和重现性考察，根据处方组成药物，以原药材为对照，参照药典方法，针对黄芪中的黄芪甲苷，枸杞子中的枸杞子多糖、甜菜碱，川续断中的川续断皂苷ⅵ，益母草中的盐酸水苏碱，当归中的阿魏酸，五味子中的五味子醇甲，党参中的党参炔苷等可以定性鉴别的成分优选，确定几个定性鉴别项目，显微鉴别对处方中打粉制粒的原药材，拟通过显微镜下观察鉴别，微生物限度检查利用微生物限度检查法的要求对产品的微生物限度检查方法进行研究，常规检查对参杞强精颗粒进行常规检查，包括性状、水分、重量差异、溶散时限等。含量测定研究根据处方组成药物，参照药典方法，在采用高效液相色谱法测定川续断中的川续断皂苷ⅵ、可见-紫外分光光度法测定枸杞子中的枸杞子多糖、薄层色谱法测定枸杞子中的甜菜碱、tcl法测定益母草中的盐酸水苏碱，hplc法测定当归中的阿魏酸、hplc法测定五味子中的五味子醇甲、hplc法或tcl法测定黄芪中的黄芪甲苷等方面开展实验研究，摸索适合本制剂的定量控制的指标；s7：药理研究，利用临床研究观察、动物实验研究和毒理学研究对整粒进行研究得到药理依据，所述s7中的临床研究观察把病例纳入标准：有规律性生活1年以上，未采取任何避孕措施女方未受孕；精子检查符合少弱精子症的诊断标准；抗精子抗体阴性；检测方法：采用计算机辅助精液分析技术作全套相关分析；病例分组及给药方法；病例分组：按随
机、对照、均衡原则，将符合纳入标准的120例少弱精子症患者，根据就诊先后顺序编号，根据随机数字表随机分为服用生精胶囊的对照组和服用参杞强精颗粒的治疗组，每组60例；给药方法：治疗组口服参杞强精颗粒；对照组口服阳性对照药物生精胶囊4粒/次，3次/天；观察指标：1个疗程后，观察临床疗效及精子参数的变化；临床治愈：女方怀孕或精子密度、活动力等恢复正常；有效：精子检测虽不正常，但精子活率及a级或a b级活力精子提升≥30% ，少精症治疗后精子密度提升≥2
×
109/l；无效：未达以上标准者，所述s7中的动物实验研究利用参杞强精颗粒对弱精子症大鼠精子质量的影响以及抗氧化作用的研究将雄性大鼠50 只，随机分为5组，每组10只，除正常组外，每只大鼠灌胃给予奥硝唑400 mg/kg/d建立大鼠弱精子症模型，分别灌胃给予参杞强精颗粒低、中、高剂量，正常组给予0.5%羧甲基纤维素钠，各组大鼠连续给药21d后检测大鼠精子活动力、精子活率、精子计数、附睾丙二醛含量和超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、一氧化氮合酶活性，取各组大鼠睾丸和附睾尾以3%戊二醛固定，常规病理切片，观察大鼠生精上皮、附睾上皮和管腔内精子数目的变化，采用透射电镜观察生精上皮、附睾上皮及精子的细胞与亚细胞结构；参杞强精颗粒对少弱精子症大鼠精子相关酶活性的影响50只雄性sd大鼠，随机分为5组，每组10只，以奥硝唑灌胃给药建立大鼠弱精子症模型，采用实时荧光定量pcr检测少弱精子症大鼠精子腺苷酸环化酶、磷酸二酯酶基因的表达，并检测精子顶体酶活性影响；参杞强精颗粒对弱精症大鼠能量代谢及相关蛋白表达的影响将60只sd健康雄性大鼠随机分为正常组、模型组、参杞强精颗粒高、中、低剂量组和阳性对照组，采用奥硝唑灌胃诱导建立弱精症大鼠模型，检测大鼠附睾组织α-葡萄糖苷酶、果糖、乳酸脱氢酶及丙二醛的浓度，采用免疫组织化学法检测各组大鼠睾丸组织fas、fas l、bcl-2、bax蛋白在大鼠睾丸实质组织中的表达；采用实时荧光定量pcr法检测大鼠附睾组织核因子nf-e2相关因子和琥珀酸脱氢酶mrna水平，所述s7中的毒理学研究利用急性毒性试验选用健康昆明种小鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别灌胃给药参杞强精颗粒6种不同剂量，灌胃给药一次，给药后观察14天，观察指标包括动物体重变化、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应等，观察到动物有毒性反应时应进行肉眼尸检，记录所有病变组织时应对组织进行镜检，并测定参杞强精颗粒的半数致死剂量或最大耐受量；长期毒性试验，选取成年健康sd大鼠80只，雌雄各半，随机分为4组，每组20只，分为空白对照组，参杞强精颗粒高剂量组、参杞强精颗粒中剂量组和参杞强精颗粒低剂量组，空白组每天灌胃等容量饮用水，给药组按体表面积折算人等效剂量，分别给予人体等效剂量的1/2、1、2倍的参杞强精颗粒，每天灌胃给药1次，连续给药6个月，每周称重1次，并按体重调整给药剂量，实验期间，观察大鼠的一般状况，包括外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、二便、摄食量、体重、死亡等情况，同时测定血液学指标、液生化学指标、脏器指数体重指标和病理组织学检测，统计学分析均采用 spss22.0版统计学软件进行方差分析，计量数据以x
±
s表示，组间比较采用两样本均数的t检验，多组间样本均数比较采用方差分析；以p＜0.05认为有显著性差异，生殖毒性研究，选取成年健康sd大鼠80只，雌雄比例1：2，开始分笼饲养，给药之后再合笼饲养，随机分为4组，每组20只，分为空白对照组，参杞强精颗粒高剂量组、参杞强精颗粒中剂量组和参杞强精颗粒低剂量组，空白组每天灌胃等容量饮用水，给药组按体表面积折算人等效剂量，分别给予人体等效剂量的1/2、1、2倍的参杞强精颗粒，每天灌胃给药1次，雌性大鼠连续给药21 d，21 d 后合笼交配期间继续给药，妊娠后给药至大
鼠妊娠第15天处死，观察临床表现及病理变化，统计各剂量组雄鼠生育率、雌鼠性周期、妊娠率、孕鼠死亡率和死胎率；胚胎-胎仔发育毒性实验：随机分组，对妊娠后大鼠进行灌胃给予溶媒对照品和参杞强精颗粒，于妊娠20d（gd20）处死母鼠，取出胎仔，检查黄体数、着床数、活胎数、死胎数等，遗传毒性研究，ames试验：参杞强精颗粒设五个剂量组及溶剂对照组、自发对照组和阳性对照组，使用经β-萘黄酮与苯巴比妥联合诱导雄性大鼠肝s9，按标准方法制成s9混合液后作为活化系统，试验用ta97、ta98、ta100、ta102 四种菌株，用间接致突变物测定s9活性，高压0.103 mpa 蒸汽灭菌20 min后，在添加和不添加s9试验条件下进行平板掺入法试验，每组同时作三个平行皿，并重复试验，s9阳性对照物：ta97和ta98 用0.5
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g/皿的4-硝基喹啉-n-氧化物；ta100用1.5
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g/皿的nan3；ta102用1.0
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g/皿的mmc； s9阳性对照物ta102用50
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g/皿的1-8-二羟基蒽醌，其余三个菌林均用20
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g/皿的2-af，每皿加入阳性对照的体积为0.1 ml，受试物组回变菌落数增加一倍以上即回变菌落数等于或大于2乘以未处理对照数，有剂量反应关系或至少某一测试点有可重复的并有统计学意义的阳性反应，即确定该受试物诱变试验阳性；骨髓细胞微核试验：昆明种小鼠，雌雄各半，60只，初始体重25-30 g随机分为5组，分别为空白对照组，参杞强精颗粒高剂量组、参杞强精颗粒中剂量组和参杞强精颗粒低剂量组及环磷酰胺阳性对照组，口服灌胃给药，每次间隔24 h，首次染毒后观察30 h，采用30 h两次给药法，灌胃间隔24 h，在第二次给受试物后6 h 脱颈椎处死小鼠，取胸骨髓经制片、固定和giemsa染色于油镜下每只小鼠计数1000个嗜多染红细胞中含微核pcb数，计算微核细胞率（%），观察200个红细胞中嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值（pce/nce），试验组与对照组相比，试验结果微核率有明显剂量反应关系并有统计学意义时即为阳性结果；若统计学上差异有显著性但无剂量反应关系时结果能重复者确定为阳性，精子畸形试验：昆明种小鼠，全雄，50只，初始体重25～30 g随机分为5组，分别为空白对照组，参杞强精颗粒高剂量组、参杞强精颗粒中剂量组和参杞强精颗粒低剂量组及环磷酰胺阳性对照组（cp，40 mg/kg.bw），每天按20 ml/kg.bw 经口灌胃连续5天，首次染毒后观察35天，脱颈椎处死小鼠取双侧附睾制片，甲醇固定1%伊红染色后，在高倍镜下计数每只雄性小鼠的1000条完整精子，辨析精子畸形的数目、畸形的类型确定精子畸形率，每个剂量组分别与相应阴性对照组比较，畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义并有剂量反应关系，即可判定为阳性。
22.具体的，该增强免疫力的参杞强精颗粒的制备方法的工作原理：使用时，对党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通这些原材料进行制备前的处理，利用清洗机构、分切机构和混合机构对原料依次进行清洗、分切和混合，利用煎煮机构对混合在一起的党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通进行煎制，把党参、枸杞子、黄芪、菟丝子、五味子、当归、续断、益母草、生牡蛎、淫羊藿和路路通存在残渣过滤掉，得到药液，对药液进行浓缩，并对浓缩的药液进行浸膏，然后把紫河车、鹿角霜、神曲打粉和糊精混合均匀后加入到浸膏内，制作软膏，对软膏进行干燥打粉并在其中加入甜菊素制成粒，对制粒进行干燥使其形成整粒，利用薄层色谱鉴别、显微鉴别、微生物限度检查和常规检查、含量测定对整粒内的成分进行鉴别，利用临床研究观察、动物实验研究和毒理学研究对整粒进行研究得到药理依据，该参杞强精
颗粒将传统中药汤剂开发成颗粒剂，克服了汤剂煎煮、携带不便、久置易发霉变质、服用容积大等缺点，首次对中药验方强精煎开展制剂研究，力求开发出治疗少、弱精子症的传统中药制剂参杞强精颗粒，研发制备成安全有效、质量可控、经济方便、服药剂量小、临床用药方便、便于携带贮藏的颗粒剂，一旦参杞强精颗粒研发成功，获得大批量地投产，规模化的生产带动产业化的发展，不仅可发挥中医药资源丰富的优势、增加就业岗位、也可提升中医药产品创新能力和技术水平，增强中医药行业的竞争力，推动地区经济发展具有重要的意义。
23.以上所述仅为本发明的优选实施方式而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。