血液凝固时间测定方法与流程

1.本发明涉及血液凝固时间测定方法。


背景技术：

2.血液凝固检查是用于通过向患者的血液检体添加规定的试剂来测定血液凝固时间等，从而诊断患者的血液凝固能力的检查。作为血液凝固时间的典型的例子，存在凝血酶原时间(pt)、活化部分凝血活酶时间(aptt)、凝血酶时间等。通过血液凝固检查，能够调查患者的止血能力、纤溶能力。血液凝固能力的异常主要引起凝固时间的延长。例如，凝固时间的延长的原因在于抗凝药剂的影响、参与凝固的成分的减少、先天性血液凝固因子的缺乏、抑制后天性凝固反应的自身抗体等。
3.近年，进行血液凝固检查的自动测量的自动分析装置是通用的，能够便于实施血液凝固检查。例如，在某种自动分析装置中，对向血液检体添加试剂而得的混合液照射光，并基于所得到的散射光量的变化来测量该血液检体的凝固反应。在通常的血液凝固反应中，在从添加试剂起经过了某种程度的时间的时刻，散射光量因凝固的进行而急剧上升，其后凝固反应接近结束，并且散射光量饱和，而达到平稳。能够基于这样的散射光量的时间的变化来测定血液凝固时间。作为基于自动分析装置的凝固时间的计算法，使用百分比检测法、微分法等几种方法。其中，在百分比检测法中，每单位时间的散射光变化量大时，例如通过检测最大散射光量的50％到达点，即使是低纤维蛋白原检体、乳糜检体、溶血检体等异常检体，也能够相当准确地进行凝固时间的测定。
4.另一方面，在分析装置中的测光数据中包含由装置、试剂、检体的状态等引起的各种噪声，这些噪声会导致凝固时间的误检测。在血液检体的自动分析中，要求去除噪声的负面影响来计算具有可靠性的凝固时间。考虑了避免由测光数据的噪声导致的凝固时间的误检测的方法。在专利文献1中记载有如下这样的血液凝固时间测定方法，即，对从分析装置实时得到的散射光量数据进行平滑化以及原点调整而作为基准数据x，根据该基准数据，进一步运算对该基准数据进行了积分后的基准积分数据y、和作为上述基准数据的各相邻的微小时间的累计值之比的基准比数据z，选出该基准比数据z成为预先确定的一定的基准比数据值zs的时刻中的、该基准比数据z的峰值以后的时刻且该基准积分数据y成为预先确定的阈值ys以上的时刻的基准数据值xd，将直到该xd的1/n(n为1以上的一定整数)的值所对应的时刻为止的混合时刻起的时间作为凝固时间。
5.专利文献1：日本特开平6-249855号公报


技术实现要素：

6.本发明涉及能够准确地测定表示各种血液凝固反应曲线的血液检体的凝固时间的血液凝固时间测定方法。
7.即，本发明提供以下内容。
8.＜1＞一种方法，该方法是血液凝固时间测定方法，
9.该方法包含：
10.〔1〕对关于血液检体的凝固反应的测量值p(i)进行平滑化以及零点调整，取得反应x(i)；
11.〔2〕取得该反应x(i)的累计比z(i)，这里，该z(i)是第一测量区间中的x的累计值、与和该第一区间相邻的第二测量区间中的x的累计值的比；
12.〔3〕计算参数te[k]、x(te[k])、tc[k]、te[k-1]、x(te[k-1])、以及tc[k-1]，
[0013]
这里，
[0014]
k为2以上的整数，
[0015]
te[k]以及te[k-1]分别是满足z(i)＜zs[k]的i下的测量时间、以及满足z(i)＜zs[k-1]的i下的测量时间，
[0016]
x(te[k])以及x(te[k-1])分别是te[k]以及te[k-1]下的反应x，
[0017]
tc[k]以及tc[k-1]分别是满足x(i)＝{x(te[k])
×
q％}的i下的测量时间、以及满足{x(te[k-1])
×
q％}的i下的测量时间，
[0018]
1＜q＜100；
[0019]
〔4〕计算指标r[k]、以及/或指标tr[k]，
[0020]
这里，
[0021]
r[k]＝x(te[k])/x(te[k-1])
ꢀꢀ
(2)
[0022]
tr[k]＝δtc[k]/δte[k]
ꢀꢀ
(5)
[0023]
δtc[k]＝tc[k]-tc[k-1]
ꢀꢀ
(3)
[0024]
δte[k]＝te[k]-te[k-1]
ꢀꢀ
(4)；以及
[0025]
〔5〕在该r[k]以及/或tr[k]满足规定的条件的情况下，将该tc[k]或该tc[k-1]决定为凝固时间tc。
[0026]
＜2＞根据＜1＞记载的方法，在工序〔5〕中该r[k]或tr[k]不满足该规定的条件的情况下，设为k＝k 1，反复进行工序〔3〕～〔5〕。
[0027]
＜3＞根据＜1＞或＜2＞记载的方法，zs[k]＜zs[k-1]，zs[k]大于1，且zs[1]为1.100以下。
[0028]
＜4＞根据＜1＞～＜3＞中任一项记载的方法，k为10以下。
[0029]
＜5＞根据＜1＞～＜4＞中任一项记载的方法，其中，zs[k-1]与zs[k]的差为0.050～0.001。
[0030]
＜6＞根据＜1＞～＜5＞中任一项记载的方法，z(i)由下述式表示：
[0031]
z(i)＝{x(i 1) x(i 2) ... x(i m)}/{x(i-m) x(i-m 1) ... x(i-1)}(1)
[0032]
这里，m＝10～30。
[0033]
＜7＞根据＜1＞～＜6＞中任一项记载的方法，在i达到规定的计算开始点s以后进行工序〔3〕。
[0034]
＜8＞根据＜7＞记载的方法，上述计算开始点s是比凝固反应的速度成为最大的时间靠后的测量点。
[0035]
＜9＞根据＜7＞或＜8＞记载的方法，该方法还包括：在v(i)＝vs的两点间的测量点数超过规定的值时，将成为v(i)＝vs的较慢的测量点检测作为计算开始点s，这里，v(i)是上述反应x(i)的微分值。
[0036]
＜10＞根据＜7＞记载的方法，上述计算开始点s是在工序〔2〕中取得的z(i)达到峰值以后的测量点。
[0037]
＜11＞根据＜1＞～＜10＞中任一项记载的方法，并行地进行工序〔1〕～〔2〕和工序〔3〕～〔5〕。
[0038]
＜12＞根据＜2＞～＜11＞中任一项记载的方法，该方法还包含：通过反复进行上述工序〔3〕～〔5〕而没有决定tc时，取得tc未被正常地决定的结果。
[0039]
根据本发明的方法，能够对表示包含正常检体、异常检体在内的各种血液凝固反应曲线的血液检体的凝固时间准确地进行测定。另外，在通过自动分析装置实时地分析大量的检体的情况，本发明的方法防止凝固时间的误检测并且使每一个检体的分析时间最佳化，使分析效率提高。
附图说明
[0040]
图1是基于本发明的血液凝固时间测定方法的一实施方式的基本流程。
[0041]
图2a是反应x以及微分值v；图2b是反应x以及累计比z。图2a、图2b都是左侧为正常检体，右侧为fviii缺乏检体。
[0042]
图3是基于v的峰值宽度的计算开始点s的检测方法的概念图。
[0043]
图4a是zs[1]、和所对应的te[1]、x(te[1])、tc[1]以及x(tc[1])的例子。图4b是zs[1]～zs[3]、和所对应的te[1]～te[3]、x(te[1])～x(te[3])、tc[1]～tc[3]的例子。
[0044]
图5是本发明的血液凝固时间测定方法的一实施方式的详细流程。
[0045]
图6是关于试样1(左)以及试样10(右)的x的反应曲线。
[0046]
图7是不同的zs[k]下的tc[k](左)以及te[k](右)。
[0047]
图8a～图8b是r[k](％)相对于aptt的标绘图以及其放大图。图8c～图8d是表示基于r[k](％)进行的tc计算的准确性的标绘图以及其放大图。图8e是不同的zs[k]下的x(te[k])/x(te[8])。
[0048]
图9a是不同的zs[k]下的x(te[k])/x(te[8])。图9b～图9d是tr[k](δc/δe)(％)、δe、以及δc相对于aptt的标绘图。
[0049]
图10a～图10b是根据试样1～10计算出的tc[k]以及te[k]，其中本法：决定tc时的值，1.001：zs＝1.001时的值、1.031：zs＝1.031时的值。图10c～图10d是本法或zs＝1.031与zs＝1.001的tc[k]以及te[k]的差。
[0050]
图11是表示在测量时间内反应没有结束的aptt延长检体的反应曲线、以及所取得的参数和指标的表。
[0051]
图12是表示低纤维蛋白原试样的反应曲线、以及所取得的参数和指标的表。
[0052]
图13是不同的条件1～3下检测到的计算开始点s对tc计算用参数的影响。
具体实施方式
[0053]
1.血液凝固反应测量
[0054]
在血液凝固检查中，向血液检体添加规定的试剂，对其后的血液凝固反应进行测量，并根据凝固反应来测定血液凝固时间。凝固反应的测量使用一般的手段，例如测量散射光量、透过度、吸光度等的光学手段、或测量血浆的粘度的力学手段等。正常的血液检体的
凝固反应曲线取决于测量手段，但基本上显示s形。例如，基于正常检体的散射光量的凝固反应曲线通常在从试剂添加起经过了某种程度的时间的时刻因凝固的进行而急剧上升，其后，凝固反应接近结束并且达到平稳。另一方面，具有凝固异常的异常检体的凝固反应曲线取决于曲线的升高时间的延慢、缓慢的上升等异常原因而显示各种形状。异常检体的凝固反应曲线的多样性使得自动分析装置中的凝固时间的准确的测定变得困难。
[0055]
在以往的一般的血液凝固时间测定中，至少取得到凝固反应结束为止的数据，基于所取得的数据来计算凝固时间。例如，存在如下等方法，即，在将散射光量饱和的时刻判定为凝固反应结束后，将从试剂添加时刻到凝固反应结束时刻为止的期间、凝固反应曲线达到最大速度的时刻决定为凝固时间的方法(微分法)、和将达到凝固反应结束时刻的散射光量的1/q的时刻决定为凝固时间的方法(百分比检测法，参照专利文献1)等。然而，因上述那样的异常检体的凝固反应曲线的异常的形状、噪声，会引起凝固反应结束的误检测，例如有时在过早时刻检测到凝固反应结束、或未检测到凝固反应结束。这样的凝固反应结束的误检测的结果是，计算出不准确的凝固时间。
[0056]
在自动分析装置中，为了高效地分析大量的检体，而希望当判断为一个检体的凝固反应结束时，迅速地结束测量，并开始下一个检体的测量。但是，在这样的方法中，存在上述的在过早时刻的凝固反应结束的误检测尽管在测量中却导致结束测量，并遗漏必要的数据的风险。另一方面，若将每一个检体的测定时间固定为足够长的时间，则能够防止由凝固反应结束的误检测导致的数据遗漏，但这样的方法由于对大量的检体而言测定时间长至必要以上，使整体的分析效率降低。
[0057]
例如，在用专利文献1所记载的方法测定第viii因子(fviii)缺乏检体那样的凝固反应曲线的变化小的检体的凝固时间的情况下，基准比数据值zs的适当的值比较小(例如1.01)，这意味着在该检体的凝固时间测定中需要比较长时间的凝固反应测量。另一方面，适合于正常检体的zs是更大的值(1.05左右)，这意味着在正常检体中能够以更短的凝固反应测量进行凝固时间的计算。因此，在使用自动分析装置并按照专利文献1所记载的方法，进行包含正常检体、异常检体在内的所有的检体的凝固时间测定的情况下，必须将用于一部分的异常检体的比较长的测量时间也应用于大量的正常检体。这不能说是高效率的分析方法。
[0058]
本发明的血液凝固时间测定方法能够防止由上述那样的凝固反应曲线的异常的形状引起的凝固时间的误检测，而进行准确的凝固时间测定。另外，根据本发明，能够使测量时间最佳化，使得对包含正常检体、异常检体在内的各种血液检体，应用各自的凝固时间测定所需的最低限度的凝固反应测量时间。
[0059]
在本发明的血液凝固时间测定方法(以下，也称为本发明的方法)中，对混合了试剂的被检血液检体的凝固反应进行测量。基于由该测量而得到的凝固反应的时间序列数据，来测定血液凝固时间。作为本发明的方法中所测定的血液凝固时间的例子，可列举凝血酶原时间(pt)、活化部分凝血活酶时间(aptt)、纤维蛋白原浓度(fbg)测定中的凝固时间等。
[0060]
在本发明的方法中，作为被检血液检体，优选使用被检者的血浆。在以下的本说明书中，也将血液检体简称为检体。在该检体中可添加凝固检查通常使用的抗凝固剂。例如，在使用加入柠檬酸钠的采血管进行采血后，通过离心分离而得到血浆。
[0061]
向该被检检体添加凝固时间测定试剂，使血液凝固反应开始。可测量试剂添加后的混合液的凝固反应。所使用的凝固时间测定试剂能够根据测定目标而任意地选择。用于各种凝固时间测定的试剂在市场中出售(例如，aptt测定试剂coagpia aptt-n；积水医疗株式会社制)。凝固反应的测量使用一般的手段，例如测量散射光量、透过度、吸光度等的光学手段、或测量血浆的粘度的力学手段等即可。凝固反应的反应开始时刻典型地可以定义为向检体混合试剂而使凝固反应开始的时刻，但也可以将其他时机定义为反应开始时刻。持续凝固反应的测量的时间例如可以是从检体与试剂的混合的时刻起数十秒～7分钟左右。该测量时间也可以是任意确定的固定的值，但也可以设为直到检测到各检体的凝固反应的结束的时刻为止。该测量时间期间，可以以规定的间隔反复进行凝固反应的进行状况的测量(在光学检测的情况下为测光)。例如，可以以0.1秒间隔进行测量。该测量中的混合液的温度在通常的条件下例如为30℃以上40℃以下，优选为35℃以上39℃以下。另外，测量的各种条件可根据被检检体、试剂、测量手段等而适当设定。
[0062]
上述凝固反应测量中的一系列的操作能够使用自动分析装置来进行。作为自动分析装置的一个例子，可列举血液凝固自动分析装置cp3000(积水医疗株式会社制)。或者，也可以通过人工作业来进行一部分的操作。例如，由人进行被检检体的调制，此后的操作通过自动分析装置进行。
[0063]
1.血液凝固时间的测定
[0064]
以下，参照图1所示的基于本发明的血液凝固时间测定方法的一实施方式的基本流程，对本发明进行说明。
[0065]
1.1反应x、微分值v、累计比z的取得
[0066]
在本发明的方法中，通过分析装置，逐次取得针对从反应开始时刻起的凝固反应的测量值p(i)(例如散射光量的测光值)。这里“i”表示测量点编号。例如，若测量(测光)间隔为0.1秒，则p(i)表示测量开始0.1
×
i秒后的测量值。
[0067]
由于在该测量值p(i)中包含测光时的噪声、与紧接在测光开始之后出现的反应无关的变动，所以用公知的方法对该测量值进行平滑化处理。另外，在用散射光量对凝固反应进行测光的情况下，进行减去出自反应前的反应液的散射光量的零点调整处理。因此，所取得的时间序列的测量值p(i)被逐次平滑化以及零点调整，而取得反应x(i)(工序s1)。在测量值的平滑化处理中，可使用与噪声去除相关的各种公知的方法中的任一种。例如，作为平滑化处理，可列举滤波处理、或在通过差值、后述的区间内平均斜率的运算等而求出微分值后对其进行积分的处理等。在零点调整中，例如只要以测量开始时刻的值成为0的方式调整平滑化后的测量值即可。并且，也可以对测量值p(i)进行初始变动去除处理。初始变动去除处理只要使得从测光开始时刻到预先确定的初始变动去除时间为止的所有的值成为0即可。基本上，如图2所示，反应x(i)构成进行了平滑化以及零点调整的凝固反应曲线。
[0068]
接着，根据求出的反应x(i)，取得该反应x(i)的累计比z(i)(工序s2)。并且，也可以取得该反应x(i)的微分值v(i)。微分值v(i)能够用于后述的计算开始点s的检测。
[0069]
微分值v(i)是对反应x(i)进行一次微分而得到的。微分处理能够通过任意的方法实施，例如可通过区间内平均斜率值的计算来进行。在区间内平均斜率值的计算中，可利用各测量点i的前后的一定数量的测量点，例如从i-k到i k为止的2k 1个测量点。例如，可利用第i-2、i-1、i、i 1、i 2这5个点的测量点。平均斜率值是指对这些多个测量点进行了直线
近似时的斜率值。直线近似的运算方法可利用最小二乘法等常规方法。这些测量点的平均斜率值可视为在测量点i的一次微分值。
[0070]
累计比z(i)是在第一测量区间的x的累计值、与和该第一区间相邻的第二测量区间中的反应x的累计值的比。更详细而言，z(i)是比测量点i靠前的第一测量区间中的反应x(例如在测量点[i-m]～[i-1]的x(i-m)～x(i-1))的累计值、与比该测量点i靠后的第二测量区间中的反应x(例如在测量点[i 1]～[i m]的x(i 1)～x(i m))的累计值之比。这里，第一测量区间与该第二测量区间优选为相同的长度。即，在将测量点i的反应x设为x(i)，将m设为常数时，测量点i处的累计比z(i)通过下式(1)计算。
[0071]
z(i)＝{x(i 1) x(i 2) ... x(i m)}/{x(i-m) x(i-m 1) ... x(i-1)}
ꢀꢀ
(1)
[0072]
在式(1)中，m优选设定为该微小测量区间的时间宽度成为1秒至3秒。即，若测量(测光)时间间隔为0.1秒，则m优选为10至30，若测量(测光)时间间隔为0.2秒，则m优选为5至15。只要考虑测量条件来选择m的最佳值，以便能够计算适当的凝固时间即可。
[0073]
因此，在作为关于x的第2m 1个数据，取得测量点i m处的x(i m)以后，能够执行累计比z(i)的计算。但是，为了避免在反应初始的x的变动的影响，优选将从x(i-m)到x(i-1)为止全部为规定的阈值xs以上作为条件，开始z(i)的计算。由于基于散射光测量的反应曲线成为s形，所以通常当x(i)一旦超过xs时，则其后也成为x(i)＞xs。如果在成为x(i)＞xs后成为x(i)≤xs的情况下，数据可被视为异常。xs优选为预测的反应x的最大值的10％至50％。例如，在估算反应x的最大值为约700的情况下，xs优选为70～350。
[0074]
通过以上过程，能够求出各测量点i的反应x(i)、微分值v(i)、以及累计比z(i)。参照图2，对关于aptt为正常的正常检体、和作为aptt延长的例子的fviii缺乏检体(以下，称为延长检体)的反应x、微分值v、以及累计比z的每一个的形状的相对的差异进行说明。图2a表示反应x和微分值v，图2b表示反应x以及累计比z。图2a、b均是左为正常检体，右为延长检体。横轴换算为从反应开始时刻起的时间。
[0075]
反应x)根据图2a所示，x构成进行了平滑化以及零点调整的凝固反应曲线。在正常检体(图2a左)中，x的升高点快，上升的斜率大。但是，在延长检体(图2a右)中，x的升高点慢，上升的斜率小。
[0076]
微分值v)在正常检体(图2a左)中，v的峰值的顶部位置高，形状大致左右对称。但是，在延长检体(图2a右)中，v的峰值的顶部位置低(在该例子中，小于正常检体的六分之一)，形状为左右非对称，峰值并不是一个，而是呈双峰性形状。
[0077]
累计比z)在正常检体(图2b左)中，在反应曲线的升高时z的最大值约为8，其后朝向1急剧减少。另一方面，在延长检体(图2b右)中z的最大值约为2.5，减少也缓慢。无论在哪一种情况下，累计比z都在凝固反应曲线接近平稳(血液凝固反应接近结束)的同时接近1。
[0078]
1.2凝固时间tc的计算
[0079]
1.2.1计算开始点的决定
[0080]
在本发明的方法中，使用上述的反应x(i)、微分值v(i)、以及累计比z(i)的值来计算凝固时间tc。在本发明的方法中，x、v、z的取得可以与后述的凝固反应测量过程并行地进行。首先，基于目前为止取得的x、v、z，来决定开始凝固时间tc的计算处理的时机，即计算开始点s。
[0081]
在一个例子中，能够将z达到峰值以后的任意的测量点设为计算开始点s。例如，能
够将z达到阈值后，经过峰值再次达到该阈值的测量点设为计算开始点s。以图2b为例，能够将累计比z达到2后，经过峰值再次达到2的测量点设为计算开始点s。
[0082]
在另一个例子中，求出凝固反应速度成为最大值vmax的测量点，并将该测量点设为计算开始点s。最简单来说，能够将与由逐次取得的v(i)构成的曲线中的最初的峰值顶部对应的测量点设为与vmax对应的计算开始点s。
[0083]
另一方面，在计算开始点s的决定时，希望排除在凝固因子缺乏检体中常见的凝固反应速度曲线成为双峰性的情况下(例如图2a右)可能引起的vmax的误检测、由噪声引起的变动的影响。因此，在优选的例子中，能够将逐次取得的v(i)超过规定的值之后，经过峰值而达成规定的条件时的测量点设为计算开始点s。在图3示出有计算开始点s的决定方法的一个例子的概念图。在图3示出有v(i)、和用于计算开始点s的决定的参数。v(i)形成具有峰值vmax的曲线。vs是将vmax设定为100％时的s％的值。v(i)一旦达到vs后，经过峰值，在v(s)中再次达到vs。此时，在峰值宽度ws超过了规定的值时，检测该v(s)时的测量点s来作为计算开始点s，该峰值宽度ws是v(i)＝vs的两点间的宽度(测量点数)。
[0084]
1.2.2参数取得
[0085]
接下来，取得tc计算所需的参数(工序s3)。
[0086]
首先，检测在计算开始点s以后z(i)初次达到不足预先确定的第一个阈值zs[1](z(i)＜zs[1])时的测量点处的测量时间(从反应开始时刻起的时间)te[1]。根据需要，继续取得z(i)，直到满足z(i)＜zs[1]为止。
[0087]
若检测到te[1]，则求出在te[1]处的反应x(te[1])。接下来，检测与具有或接近x(te[1])的q％的值的x(i)对应的测量点处的测量时间tc[1](这里tc[1]＜te[1])。例如，能够检测满足x(tc[1])＝{x(te[1])
×
q％}的时间tc[1]。另外，例如能够将最接近{x(te[1])
×
q％}的值设为x(tc[1])。另外，例如在x(tc’[1])＜{x(te[1])
×
q％}＜x(tc”[1])(tc’[1]与tc”[1]是相邻的测量点的时间)时，能够检测tc’[1]和tc”[1]中的任一个来作为tc[1]。在测量(测光)间隔足够短的(例如0.1秒等)的情况下，最终的tc的计算值不会产生大的差异，因此也可以选择tc’[1]和tc”[1]中的任一个。q只要是0＜q＜100的任意的值即可，优选为10～80，更优选为20～70(例如50)。
[0088]
在图4a中示出有表示zs[1]、和凝固反应曲线(由x(i)构成的曲线)上的te[1]及x(te[1])、和tc[1]及x(tc[1])的关系的概念图。
[0089]
并且，检测在z(i)初次达到不足预先确定第二个阈值zs[2](z(i)＜zs[2])时的测量点处的测量时间te[2](这里zs[2]＜zs[1])。根据需要，继续取得z(i)，直到满足z(i)＜zs[2]为止。在te[2]处的x为x(te[2])。接下来，检测与具有或接近x(te[2])的q％的值的x(i)对应的测量点处的时间tc[2](此时，tc[2]＜te[2])。
[0090]
上述所求出的te是z(i)达到阈值zs的时刻，且表示临时的凝固结束点。另一方面，tc是x的值成为临时的凝固结束点处的x的q％的时刻，且表示临时的凝固点。图4b是表示zs[1]～zs[3]、以及与这些对应的反应曲线x上的临时的凝固结束点te[1]～te[3]、以及此时的x(te[1])～x(te[3])、和临时的凝固点tc[1]～tc[3]的概念图。如图4b所示，随着反应曲线接近平稳(凝固反应接近结束)，te的增加幅度变大，另一方面，x(te)的增加幅度逐渐变小。另一方面，随着凝固反应曲线接近平稳，tc也逐渐增加，但其变化与te相比较小。
[0091]
1.2.3tc的计算
[0092]
在本发明的方法中，进行tc计算步骤，该tc计算步骤利用上述那样的随着凝固反应的进行而产生的临时的凝固结束点te以及临时的凝固点tc的变化，来决定临时的凝固点tc是否为真正的凝固时间tc。即，在本发明的方法中，利用出自上述所求出的zs的参数te、tc、x(te)等，取得用于tc计算的指标(工序s4)。
[0093]
因此，在本发明的方法中，检测z(i)初次达到不足第k个阈值zs[k](z(i)＜zs[k])时的测量点(这里为zs[k]＜zs[k-1]、k≥2的整数)。根据需要，继续取得z(i)，直到满足z(i)＜zs[k]为止。接下来，取得出自zs[k]的参数(例如te[k]、tc[k]、x(te[k])等)以及出自在其之前取得的第k-1个阈值zs[k-1](这里zs[k]＜zs[k-1])的参数(例如te[k-1]、tc[k-1]、x(te[k-1])等)。
[0094]
优选该指标可以基于te[k]、tc[k]以及x(te[k])中的任一个以上、和te[k-1]、tc[k-1]以及x(te[k-1])中的任一个以上而取得。
[0095]
在tc计算步骤中，在该指标满足预先确定的基准的情况下，将临时的凝固点tc[k]或tc[k-1]决定为凝固时间tc。
[0096]
因此，该指标的取得可以在取得出自第二个阈值zs[2]的te[2]、tc[2]、x(te[2])以后进行。优选为在k＝2时，最初的指标可基于出自zs[1]的te[1]、tc[1]或x(te[1])、和出自zs[2]的te[2]、tc[2]或x(te[2])而取得。
[0097]
在一实施方式中，该指标是出自第k个阈值zs[k]的x(te[k])、与出自在其之前的阈值zs[k-1]的x(te[k-1])的差或比。优选为，按照下述式(2)得出的r[k]被用作用于tc计算的指标。
[0098]
r[k]＝x(te[k])/x(te[k-1])
ꢀꢀ
(2)
[0099]
该r[k]可以用比率表示，也可以用百分率表示。若r[k]是预先确定的基准值rs或比其小，则能够将该tc[k]或该tc[k-1]决定为凝固时间tc。此时该te[k]或该te[k-1]能够被决定为真正的凝固结束点。
[0100]
在另一实施方式中，首先，按照以下式(3)～(5)，计算δtc[k]、δte[k]以及tr[k]。该tr[k]被用作用于tc计算的指标。
[0101]
δtc[k]＝tc[k]-tc[k-1]
ꢀꢀ
(3)
[0102]
δte[k]＝te[k]-te[k-1]
ꢀꢀ
(4)
[0103]
tr[k]＝δtc[k]/δte[k]
ꢀꢀ
(5)
[0104]
该tr[k]可以用比率表示，也可以用百分率表示。若tr[k]是预先确定的基准值trs或比其小，则能够将该tc[k]或该tc[k-1]决定为凝固时间tc。此时该te[k]或该te[k-1]能够被决定为真正的凝固结束点。
[0105]
基准值rs以及trs能够适当设定，以使根据本发明而决定的tc的准确性成为所希望的值。例如，优选调整rs以及trs，使得对于各种检体，通过本发明的方法决定的tc成为实测的凝固时间的90％以上，优选为95％以上。实测的凝固时间能够从目测的凝固反应曲线的凝固反应结束点推断。或者，也可以将zs接近1的情况下(例如zs＝1.001)得到的tc推断为实测的凝固时间。例如，rs(％)优选为110％以下，更优选为105％以下，trs(％)优选为15％以下，更优选为10％以下。
[0106]
在优选的实施方式中，在上述两个基准都满足的情况下，例如在r[k]≤rs、且tr[k]≤trs时，能够将该tc[k]或该tc[k-1]决定为凝固时间tc。
[0107]
另一方面，在该指标不满足预先确定的基准的情况下，设为k＝k 1，并反复进行上述过程。边使k递增边反复进行该过程，直到取得满足基准的指标为止。
[0108]
以下对指标的取得和tc决定的过程的具体例进行说明。优选为，首先，使用与zs[1]相关的参数te[1]、tc[1]、或x(te[1])、和与zs[2]相关的参数te[2]、tc[2]、或x(te[2])来计算用于tc计算的指标。
[0109]
在一实施方式中，该指标是x(te[1])与x(te[2])的差或比。优选为，按照下述式得出的r[2]被用作用于tc计算的指标。
[0110]
r[2](％)＝{x(te[2])/x(te[1])}(％)
ꢀꢀ
(2)’[0111]
在优选的实施方式中，首先，按照以下式，计算δtc[2]、δte[2]、以及tr[2]。该tr[2]被用作用于tc计算的指标。
[0112]
δtc[2]＝tc[2]-tc[1]
ꢀꢀ
(3)’[0113]
δte[2]＝te[2]-te[1]
ꢀꢀ
(4)’[0114]
tr[2](％)＝{δtc[2]/δte[2]}(％)
ꢀꢀ
(5)’[0115]
在该指标满足预先确定的基准的情况下，将tc[1]或tc[2]决定为凝固时间tc。优选为将tc[2]决定为tc。例如，若上述r[2]是预先确定的基准值rs或比其小，则将该tc[2]或该tc[1]决定为tc。另外，例如，若上述tr[2]是预先确定的基准值trs或比其小，则将该tc[2]或该tc[1]决定为tc。优选为，在上述两个基准均满足的情况下，例如在r[2]≤rs、且tr[2]≤trs时，将该tc[2]或该tc[1]决定为tc。
[0116]
另一方面，在该指标不满足预先确定的基准的情况下，针对第三个阈值zs[3](这里zs[3])＜zs[2])，与上述同样地求出te[3]、tc[3]或x(te[3])，并根据这些值和te[2]、tc[2]或x(te[2])，按同样的过程计算指标。
[0117]
例如，在r[2]大于rs、且tr[2]大于trs的情况下，针对第三个阈值zs[3]，与上述同样地求出x(te[3])，接下来根据上述式(2)计算r[3]、以及/或求出te[3]以及tc[3]，接下来根据上述式(3)～(5)计算tr[3]。
[0118]
若计算出的指标满足基准，则将该tc[2]或该tc[3]决定为tc。优选为在r[3]≤rs、以及/或tr[3]≤trs的情况下，将该tc[3]或该tc[2]决定为tc。
[0119]
在指标不满足基准的情况下，进一步针对第四个阈值zs[4](这里zs[4]＜zs[3])反复进行相同的过程。
[0120]
这样，一边并行地逐次进行凝固反应的测量和x、y、z的取得，直到决定tc为止，一边针对第n个阈值zs[n](这里zs[n]＜zs[n-1]；n≥2)反复进行相同的过程。最终，该tc[n]或该tc[n-1]被决定为tc。此外，若将zs[n]与zs[n-1]的差设定在适当的范围，则满足r[n]≤rs以及/或tr[n]≤trs时的tc[n]和tc(n-1)是表示比较接近的值，因此对于tc，无论选择tc[n]，还是选择该tc(n-1)，在使用tc的临床的判断中都不会产生实际的问题。但是，从提高tc的计算值的可靠性的观点出发，优选对tc选择tc[n]。
[0121]
本发明的方法基本上是应用百分比法，该百分比法是以往用作血液凝固时间的一般的计算法。在百分比法中，将凝固反应进行到反应结束时的q％(作为一个例子为50％)为止的时刻决定为凝固时间tc。因此，在本发明的方法中，理想的也是凝固反应来到累计比z为1或接近1时(血液凝固反应大致结束时)的q％的时刻作为凝固时间tc来进行计算。若计算条件适当，则te[k]成为s状的凝固反应曲线接近平稳之前的时刻，因此通过本发明的方
法而决定的凝固时间tc不会与理想值相差较大。另外，在百分比法中，在将凝固反应从反应结束时的50％偏离的比率c％(作为一个例子，为45％以下或55％以上)设为凝固时间的情况下，也可以在求出作为q％＝50％的50％凝固时间后，基于相同的反应结束时刻来计算c％时的凝固时间。
[0122]
1.2.4阈值zs
[0123]
如图2所示，z(i)在由x(i)构成的凝固反应曲线接近平稳的同时接近1。因此，zs[k]是大于1的值。在zs[k]达到预先设定的最低值zsmin时，结束上述过程的反复进行，将基于该zs[k]计算出的该tc[k]或该tc[k-1](优选为tc[k])决定为凝固时间tc。zsmin只要大于1即可，只要根据测定条件(例如试剂、分析装置以及分析项目)适当设定即可。例如在aptt测定的情况下，zsmin优选为1.0001～1.05，更优选为1.0002～1.01，进一步优选为1.0005～1.002(例如1.001)。
[0124]
或者，在递增的整数k达到了预先设定的最大数n时，结束上述过程的反复进行，将基于zs[n]计算出的tc[n]或tc[n-1](优选为tc[n])决定为凝固时间tc。从凝固时间计算的效率的观点出发，n优选为20以下，更优选为10以下，进一步优选为8以下。
[0125]
第一个阈值zs[1]只要根据测定条件(例如试剂、分析装置以及分析项目)适当设定即可。例如在aptt测定的情况下，优选为1.100以下，更优选为1.080以下，进一步优选为1.050以下。例如，在fviii缺乏检体的aptt测定中，凝固反应速度成为最大时的累计比z大多为1.03至1.04，因此对于zs[1]，选择约1.04即可。
[0126]
阈值zs的刻度宽度(zs[k-1]与zs[k]的差；δzs))可取决于zs[1]、zsmin、k的最大数n、或凝固反应的测量频度(取样周期)等而决定，但从凝固时间计算的精度以及效率的观点出发，优选为0.050～0.001的范围，更优选为0.020～0.002的范围，进一步优选为0.010～0.005的范围。
[0127]
优选以zs[1]、zsmin、k的最大数n、以及δzs分别成为上述的适当的范围的方式，设定各个值。例如，能够决定优选的zsmin、δzs、以及n，并与其对应地决定zs[1]。或者，能够决定优选的zs[1]、zsmin、以及n，并与其对应地决定δzs。
[0128]
例如，在zsmin＝1.001、k≤8、δzs＝0.005的情况下，zs[1]＝1.036。但是，本发明的方法中的zs[1]、zsmin、δzs、以及重复次数的组合的例子并不限定于这些，本领域技术人员能够适当设定适当的值。
[0129]
1.2.5错误处理
[0130]
在通过反复进行上述那样的过程而没有发现满足z(i)＜zs[k]的te[k]、或指标不满足基准的情况下，上述tc计算步骤在没有决定tc的状态下不完全地结束。在这样的情况下，在本发明的方法中，也可以将最后取得的tc[k]决定为tc，或能够视为tc不可计算。在任一种情况下，在没有决定tc时，都能够取得tc未被正常地决定的结果。
[0131]
2.tc决定的例示的过程
[0132]
以下，参照图5所示的详细流程，对基于本发明进行的凝固时间tc决定的更具体的过程的例子更详细地进行说明。图5所示的过程是例示，能够由本领域技术人员进行通常的变更，例如运算的顺序的更换等。
[0133]
s001：如下述表1那样，预先阶段性地以从高的值到低的值的方式设定zs，以能够通过变量k(计数器)依次选择各zs的方式制成数组zs[k]。k为整数，设定1，来作为初始值。
[0134]
[表1]
[0135]
k12345678zs[k]1.0361.0311.0261.0211.0161.0111.0061.001
[0136]
s002：在与凝固反应相关的测量值p(i)(i表示测量点编号)的数据数量超过平滑化处理、初始变动去除处理以及零点调整处理所需的数据数量(例如50个)以后，开始反应x(i)、微分值v(i)、以及累计比z(i)的取得。
[0137]
s003：边继续取得测光数据、和x(i)v(i)以及z(i)，边搜索在计算开始点s以后满足z(i)＜zs[1]的最早的i下的时间te[1]。根据搜索到的te[1]，如上述1.2.2中说明的那样，求出x(te[1])、tc[1]等参数。
[0138]
s004：在s003中，不可取得满足z(i)＜zs[1]的i下的时间te[1]的情况下，在i达到上限值为止时分支到s020，判定为“未检测到反应”，凝固时间不可计算。例如，在以0.1秒间隔将测量(测光)时间设定为360秒的情况下，最大测量点数为3600，这是i的上限值。另一方面，在能够取得te[1]的情况下分支到s005。
[0139]
s005：对k进行向上计数。
[0140]
s006：在前处理为s005的情况下k＝2，在前处理为s010的情况下，k为3以上的整数。接下来，进一步边继续取得p(i)、x(i)、v(i)以及z(i)，边搜索满足z(i)＜zs[k]的i下的时间te[k]。
[0141]
s007：在s006中，在不可取得te[k]的情况下，在i达到上限值为止时分支到s030，判断为“反应中途”，不能计算出凝固时间。i的上限值与s004相同。在能够取得的情况下分支到s008。
[0142]
s008：在s006中能够取得te[k]的情况下，如上述1.2.2中说明的那样，求出x(te[k])、tc[k]等参数。根据满足z(i)＜zs[k-1]的te[k-1]求出x(te[k-1])、tc[k-1]等参数，计算用于tc决定的指标。作为该指标，例如可列举上述式(2)所示的r[k]、以及上述式(5)所示的tr[k]等。r[k]和tr[k]只要任一个用作指标即可，也可以将双方用作指标。
[0143]
接下来，调查该指标是否满足基准。作为基准，可列举下述(a)或(b)，优选要求满足下述(a)以及(b)双方。
[0144]
基准(a)：r[k]≤rs
[0145]
基准(b)：tr[k]≤trs
[0146]
在满足上述基准的情况下，分支到s040，在其他情况下分支到s009。
[0147]
s009：在s008中基准(a)和(b)均不成立的情况下，将k向上计数。
[0148]
s010：在向上计数的k超过预先设定的最大值时分支到s011。k为最大值以下时分支到s006，将k向上计数并继续进行新的te[k]的搜索。
[0149]
s011：在s008中基准(a)和(b)不成立，而k超过最大值，因此tc决定过程不完全结束。在进入该步骤的情况下，也可以不输出tc。在输出tc的情况下，将最后取得的tc(即tc[k-1])决定为tc。tc的输出可以自动输出，也可以用按钮操作等通过手动输出。
[0150]
s020：在未发现满足z(i)＜zs[1]的te[1]而结束凝固反应测量的情况下，tc不可计算。在进入该步骤的情况下，能够判定为因某种理由而没有凝固反应，因此也可以输出“未检测到反应”标志。
[0151]
s030：未发现满足z(i)＜zs[k]的te[k]，因此tc不可计算。在进入该步骤的情况
下，能够判定为在凝固反应的中途阶段结束测量，因此也可以输出“反应中途”标志。
[0152]
s040：能够确认凝固结束点，并且将tc[k-1]或tc[k]作为tc输出。优选将tc(k)作为tc输出。也可以没有标志、或输出“正常结束”标志。
[0153]
3.针对其他凝固反应测量法的应用
[0154]
本发明的方法基本上是使用基于散射光量的血液凝固反应测量的血液凝固时间测定法，但本领域技术人员可以将本发明的方法应用于其他测量方法，例如使用基于透过度、吸光度等的血液凝固反应测量的血液凝固时间测定法。
[0155]
实施例
[0156]
以下，列举实施例，对本发明进一步详细地进行说明，但本发明并不限定于这些实施例。
[0157]
实施例1
[0158]
1.方法
[0159]
对将出自存在因血液凝固因子而引起凝固反应异常的受检者的血液检体(异常检体)、和正常的血液检体(正常检体)以分别不同的比例混合而得到的多个混合试样，实施了本发明的方法根据凝固时间的测定。
[0160]
1)试样
[0161]
作为异常检体，使用第viii因子(fviii)浓度为0.1％以下的factor viii deficient plasma(george king bio-medical，inc.制)(以下，称为fviii缺乏血浆)。作为正常检体，使用fviii浓度被视为100％的正常混合血浆(以下，称为正常血浆)。改变fviii缺乏血浆与正常血浆的混合比率而调制fviii浓度分别为50％、25％、10％、5％、2.5％、1％、0.75％、0.5％、0.25％的混合血浆(依次为试样1～试样9)。另外，仅将fviii缺乏血浆(fviii浓度0.1％以下)作为试样10。
[0162]
2)试剂
[0163]
作为aptt测定用试剂，使用coagpia aptt-n(积水医疗株式会社制)。作为氯化钙液，使用coagpia aptt-n氯化钙液(积水医疗株式会社制)。
[0164]
3)凝固反应测量
[0165]
凝固反应测量使用血液凝固自动分析装置cp3000(积水医疗株式会社制)来进行。将试样50μl分注到反应杯(反应容器)后，以37℃加热45秒，接着向反应杯添加加热至约37℃的aptt测定用试剂50μl，进一步经过171后添加25mm氯化钙液50μl而使凝固反应开始。反应在维持为约37℃的状态下进行。凝固反应的测量(测光)通过向反应杯照射将波长660nm的led等作为光源的光，以0.1秒间隔对90度侧方散射光的散射光量进行测光而进行。最大测量时间为360秒(数据数量3600个，0.1秒间隔)。
[0166]
4)凝固反应曲线的制作
[0167]
根据测光数据求出测光曲线p，在对该p进行了包含噪声去除在内的平滑化处理后，进行零点调整处理以使测光开始时刻的散射光量成为0，从而计算出反应x。
[0168]
5)微分值v、累计比z的取得
[0169]
根据反应x，按照一次微分值v以及下述式(1)计算出累计比z。
[0170]
z(i)＝{x(i 1) x(i 2) ... x(i m)}/{x(i-m) x(i-m 1) ... x(i-1)}
ꢀꢀ
(1)
[0171]
m＝20
[0172]
以x(i-m)到x(i-1)为止全部xs在以上为条件而开始z的计算。xs设定为350。
[0173]
6)计算开始点
[0174]
计算开始点s设为在z(i)超过规定值后，低于该规定值的点。该规定值设为1.2。
[0175]
7)阈值zs的设定
[0176]
按照下述表2设定了zs[k]。
[0177]
[表2]
[0178]
k12345678zs[k]1.0361.0311.0261.0211.0161.0111.0061.001
[0179]
8)参数
[0180]
te[k]、tc[k]、x(te[k])、te[k-1]、tc[k-1]、x(te[k-1])(k＝2～8的整数)。
[0181]
9)凝固时间tc计算用指标
[0182]
指标(a)：r[k](％)(＝x(te[k])/x(te[k-1])
×
100)
[0183]
指标(b)：tr[k](％)(＝δc/δe
×
100)
[0184]
δc＝tc[k]-tc[k-1]
[0185]
δe＝te[k]-te[k-1]
[0186]
10)计算工序
[0187]
在根据测光数据而逐次取得反应x、累计比z以及根据需要而取得的微分值v，并在计算开始点s以后，使用表1所示的zs[k]来计算参数：te[k]、tc[k]、x(te[k])、te[k-1]、tc[k-1]、以及x(te[k-1])，进一步计算指标(a)：r[k](％)以及指标(b)：tr[k](％)。将满足下述基准(a)以及(b)时的tc[k]设为凝固时间tc。k设为初始值k＝1，在每次增加1最大增加到8为止的同时反复进行上述工序，直到满足下述基准(a)以及(b)为止。在k＝8且不满足该基准的情况下，将tc[8]设为tc。
[0188]
基准(a)：r[k](％)≤rs，rs＝105％
[0189]
基准(b)：tr[k](％)≤trs，trs＝10％
[0190]
此外，在本实施例以及以下的实施例中，为了评价所决定的tc，在满足tc决定基准(同时满足了下述基准(a)和基准(b))后，仍继续凝固反应测量直到最大测量时间为止，从而取得了参数和指标。
[0191]
2.tc计算基准的评价
[0192]
1)临时凝固结束点te、临时凝固点tc的时间的变化
[0193]
在图6示出有相对于测量时间的试样1(左，fviii浓度50％)以及试样10(右，fviii浓度0.1％以下)的x的反应曲线。对于曲线上的标识符，白色方块表示临时凝固结束点te[k]，白色圆圈表示临时凝固点tc[k](k＝2～8，zs[k]＝1.031～1.001)。对于试样1、10的任意一个，tc[2]和te[2]最小，tc[8]和te[8]最大。对于试样1、10的任意一个，临时凝固结束点te[8](zs[8]＝1.001)是能够在视觉上判定为真正的凝固反应结束点的值。tc[k]的值在试样1中大致一致，另一方面，在试样10中不同。
[0194]
将满足z(i)＜zs[8](＝1.001)的时刻设为凝固结束点，将x为凝固结束点的50％的时刻设为aptt。在图7示出有关于试样1～10的zs[k](k＝1～8，zs[k]＝1.036～1.001)的tc[k](左)以及te[k](右)相对于aptt的标绘图。aptt越延长，临时凝固点tc[k]的分布宽度越宽。临时凝固结束点te[k]也确认到同样的趋势。其中，最慢的点te[8]处于远离其他点的
位置。
[0195]
2)关于指标(a)的tc决定基准
[0196]
图8a、b是针对试样1～10求出的指标(a)：r[k](％)相对于aptt的标绘图(a)以及其放大图(b)。r[k]即使出自相同的zs值，其分布也根据aptt而不同。由图8b可知，通过将用于tc决定的基准值rs设为105％，从而在约96％的情况下成为r[k]≤rs，能够准确地计算凝固时间tc(aptt)。
[0197]
图8c、d是将基于来自试样1～10的r[k](％)进行的tc计算的准确性按对应的zs[k]区分地表示的标绘图(c)以及其放大图(d)。纵轴是将各试样中的zs＝1.001(zs[8])时的tc计算值设为100％时的zs[1]～[7]的相对tc计算值，且表示计算值的准确性(％)。对于准确性成为96％以上的zs值而言，试样10(aptt＝约130秒)不符合(即使zs[7]＝1.006，也达不到96％)，在试样9(aptt＝约90秒)中zs[7]＝1.006和zs[6]＝1.011符合。图8e是将x(te[k])/x(te[8])(％)按对应的zs[k]区分地表示的标绘图。纵轴是将各试样中的zs＝1.001(zs[8])的x(te[8])设为100％时的zs[1]～[7]的x(te[1])～x(te[7])的相对值，且表示反应曲线x的相对高度(％)。相对高度成为与aptt的大小对应的分布。与图8a对比可知，随着反应曲线的相对高度接近100％，r[k]也朝向100％降低。
[0198]
根据以上，示出有在决定凝固时间tc的情况下，作为表示反应曲线的相对高度达到了90％(即凝固反应处于结束阶段)的基准，能够设定[r[k](％)≤105％]。
[0199]
3)对于指标(b)的tc决定基准
[0200]
图9a是将x(te[k])/x(te[8])(％)按对应的zs[k]区分表示的标绘图(与图8e相同)，图9b～d是指标(b)：tr[k](＝δc/δe)(％)、δe以及δc相对于aptt的标绘图。δe和δc具有根据aptt值而增加的趋势，δe的变化量比δc大(图9c～d)。其结果，如图9b所示，作为两者的变化量的比的tr[k](＝δc/δe)也根据aptt而增加。tr[k]相对于aptt的分布示出与将图9a(x(te[k]))的纵轴反转时相同的行为。因此，tr[k]间接表示x(te[k])中的反应曲线的相对高度。
[0201]
3.tc决定
[0202]
在表3～表6中示出有针对试样1～10所取得的各参数以及指标。在任一个试样均没有达到最大测量时间的情况下结束tc计算工序。tc被决定以后的参数和指标的栏用斜线表示。灰色的栏表示指标满足基准(a)或(b)。
[0203]
[表3]
[0204]
试样1
[0205][0206]
试样2
[0207][0208]
试样3
[0209][0210]
[表4]
[0211]
试样4
[0212][0213]
试样5
[0214][0215]
试样6
[0216][0217]
[表5]
[0218]
试样7
[0219][0220]
试样8
[0221][0222]
试样9
[0223][0224]
[表6]
[0225]
试样10
[0226][0227]
在图10a、图10b中，将凝固时间tc被决定时的临时凝固点tc[k](a)和临时凝固结束点te[k](b)相对于aptt进行了标绘(在图中，本法)。在图中，对作为对照zs＝1.001(k＝8)、以及作为比较例zs＝1.031(k＝2)时的tc[k]、te[k]也一同进行了标绘。另外，在图10c以及d中分别示出从对照(zs＝1.001、k＝8)的tc[k]以及te[k]减去本法或比较例1中的值而得的差值。
[0228]
在本法中tc被决定时的tc[k](＝被决定的tc)与对照中的tc[k](与aptt大致相等)重叠。本法与对照的tc[k]的差为1秒以内。另一方面，本法中的te[k]在aptt短的情况下接近比较例，但在aptt90秒以后与对照重叠。te[k]最短为33秒(右图)。这表示在aptt小于90秒的情况下，本法所得到tc所需的凝固反应测量时间比对照短约20秒至约30秒。另一方面，在比较例与对照之间，tc[k](＝被决定的tc)的差在aptt到50秒为止时为1秒以内，但随着aptt的延长而变大，最大为29秒，另一方面te[k]的差最小为26秒，最大为142秒。即，在比较例中，凝固反应测量时间与对照相比变短，但在aptt小于50秒的情况下可得到与对照同等的凝固时间，但当aptt大于50秒时，与对照相比，凝固时间被计算得较短。根据以上表明，通过本发明的方法能够兼顾更准确的凝固时间的计算和测量时间的缩短化。
[0229]
实施例2
[0230]
作为检体，使用xii因子浓度为0.1％以下的factor xii deficient plasma(george king bio-medical，inc.制)(以下，称为fxii缺乏血浆、fxii浓度0％)、和fxii浓度被视为100％的正常混合血浆(以下，称为正常血浆)，将fxii缺乏血浆与正常血浆的混合比率设为1：39，而调制了fxii浓度为0.25％的混合血浆(试样11)。
[0231]
针对所调制的试样11，按照与实施例1的1.10)同样的过程搜索满足基准(a)以及(b)的tc。但是，在该试样中，虽然到k＝6(zs＝1.011)为止得到了te[k]、te[k]，但由于在取
得k＝7(zs＝1.006)之前达到了最大测量时间所以tc计算工序结束。结果，在本例中，不输出凝固时间tc而输出表示“反应中途”的标志。在图11中示出有针对试样11的反应曲线x(图示有te[k]、te[k])、以及计算出的参数以及指标。
[0232]
实施例3
[0233]
针对纤维蛋白原浓度为低值(62mg/dl)的检体(试样12)，按照与实施例1的1.10)同样的过程搜索满足基准(a)以及(b)的tc。在k＝2(zs＝1.031)时满足基准(a)以及(b)，凝固时间tc决定为30.9秒。在图12中示出有试样12的反应曲线x(对k＝1～8的te[k]、te[k]进行了图示)、以及计算出的参数以及指标。图12的表中灰色的栏表示指标满足基准(a)或(b)。与纤维蛋白原浓度为正常水平的图6左边相比较，在图12中的凝固反应的最大值约为八分之一，这样能够确认即使在纤维蛋白原浓度低的检体中也能够通过本发明的方法来计算凝固时间tc。
[0234]
实施例4
[0235]
对tc计算的计算开始点s的条件进行评价。试样使用了在反应初始反应曲线持续缓慢的上升的检体(试样13)。按照以下条件来确定计算开始点s，按照与实施例1的1.10)同样的过程，对满足基准(a)以及(b)的tc进行了搜索。
[0236]
条件1(与以往技术相同)：在累计比z越过峰值以后，即z超过规定值后，将低于该规定值的点设为计算开始点s。z的规定值设为1.2。
[0237]
条件2：在夹着峰值而成为v(i)＝vs的两点间的测量点数超过ws时，将成为v(i)＝vs的较慢的测量点设为计算开始点s(参照图3)。vs设定为90％vmax，ws设定为10(1秒)。
[0238]
条件3：与条件2相同，但vs设定为50％vmax，ws设定为10(1秒)。
[0239]
在图13示出有在条件1～3下取得的各参数以及指标。左图表示反应曲线x和微分值v，右图表示x和累计比z。在图中的标识符中，白色方块表示te[k]，白色圆圈表示tc[k]。右端是各参数以及指标的表。表中的灰色的栏表示指标满足基准(a)或(b)。
[0240]
在条件1中，由于在反应初始的反应曲线x的缓慢的上升部中，z低于规定值，因此在v(i)成为最大之前开始tc计算，而得到k＝1～4的te[k]、tc[k]。但在，在不满足基准(a)以及(b)的状态下进入tc计算工序，最终在k＝8(zs＝1.001)时决定了tc163.6秒。
[0241]
在条件2、3中，在v(i)超过峰值后开始tc计算。图中的黑色方块为计算开始点s。条件2、3都是在k＝8(zs＝1.001)时满足基准(a)以及(b)，决定了tc163.6秒。但是在条件3中，k＝1～4的te[k]是接近的，因此对k＝1～4时的指标以不采用到tc计算中的方式进行了处理。