一种含福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品及其制备方法

一种含福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品及其制备方法
一、技术领域：
1.本发明涉及化妆品原料及制备技术领域，具体涉及一种含福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品及其制备方法。
二、

背景技术：

2.美白是我们亚洲人永不褪色的时尚话题，除此之外，在西方国家，美白产品被应用于无规律色素过度沉着的预防和治疗中，如老年斑、雀斑等。因此，美白一直是化妆品市场的主旋律，美白行业具有很大的发展空间。
3.然而，传统的美白活性成分有汞类化合物、类激素和氢醌等，此类化合物易在体内沉积、细胞毒性大、对皮肤刺激性强、致敏性高、容易引起不良反应等缺点，在许多国家的卫生规范中已明令禁用。源于中药的天然活性成分作为美白护肤产品添加剂，因其毒副作用小、安全性高，对肌肤温和无刺激，备受人们青睐。单一的中草药含有的有效美白活性成分不足以满足皮肤对各种营养成分的需求，将多种中药复配的协同增效往往能得到比单方提取物更好的美白效果、作用温和及促进皮肤新陈代谢等优点。美白中药复方的研发具有广阔的应用前景及开发价值。
4.黑色素的含量及分布决定着皮肤的颜色。黑色素在皮肤基底层黑色素细胞中形成以后，其生命周期还包括迁移、代谢、降解和排出等一系列复杂过程，并与角质细胞和成纤维细胞有密切联系。因此，抑制酪氨酸酶活性、抑制皮肤黑色素细胞增殖，从而减少黑色素生成、达到美白皮肤的效果。现阶段的美白化妆品功效评价主要有三大系统：非细胞酪氨酸酶(tyr)测试系统、细胞测试系统和重建皮肤模型测试系统。细胞测试系统能快速有效的评估活性物质的美白功效，是研究活性物质美白功效的常用方法。
5.福鼎白茶主要产自福鼎、政和、建阳、松溪，其制作工艺独特、不炒不揉、工艺自然简单，鲜叶经萎凋和干燥两道至简工艺，自然天成，成就了白茶内含营养成分的独特性。现代研究表明，白茶中的黄酮含量最高，自由基含量最低，具有很好的抗氧化、抗辐射功效。同时对部分疾病、不良状况起到治疗、缓解的作用，主要包括明目、提神、抗氧化、延缓衰老、调解肠道菌群、提高免疫力、固齿、降脂、降血压、减肥、预防心脑血管疾病、利尿、解暑、防辐射、防过敏等作用。福鼎白茶还具有显著的美容抗衰老和抵御皮肤的光老化功效。发明专利申请cn201611116033.8公开了一种白茶提取物及其制备方法与应用，该专利涉及具有保湿、美白、滋润、抗衰老等多种功能的白茶提取物。
6.川芎为多年生伞形科藁本属草本植物ligusticum chuanxiong hort.的干燥根茎，主要产于四川、贵州、云南、湖北、广西等地。其性温、味辛，有活血行气、祛风、祛斑养颜等多种功效。中国传统医学认为川芎具有美白的功效，古代已有使用川芎美白的记录，据文献记载：《外台秘要方》收录美容方剂363首，其中外用美容方剂274首，内服美容方剂89首。川芎所含生物活性成分复杂，按化学结构分包括有机酚酸类、生物碱类、内酯类、苯酞类和多糖类等。
7.有文献报道川芎的50％乙醇水提取物兼具较高的抗氧化和蘑菇酪氨酸酶抑制作
用。川芎酚酸是川芎最重要的活性成分，具有抗氧化、清除自由基、美白、抗血小板凝集、抗血栓、防治冠心病等多种药理活性。
8.沙棘为落叶灌木或小乔木，属胡颓子科，不仅能够防风固沙，还富含多糖、黄酮、有机酸等成分，其不同部位，尤其是浆果，被认为是新疆、内蒙古和西藏的传统药物，具有多种活性，如抗菌、抗氧化和抗衰老作用。沙棘多糖在医药方面，具有抗肿瘤，预防心、脑血管系统疾病等作用。多糖是在动物细胞膜、高等植物和微生物细胞壁中发现的天然聚合物，无毒副作用、生物活性广泛，是天然存在的重复单元(单糖或双寡糖)聚合碳水化合物，通过糖苷键连接在一起，是生命活动中必不可少的生物大分子，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等功能，在功能和医学领域得到了广泛的研究。
9.植物抗菌肽是一类具有广谱抗细菌、真菌、病毒等生物活性的天然活性物质，微生物致病菌对常用抗生素已经产生了耐药性。因此，从植物抗菌肽中寻找开发新型抗生素来控制这些致病微生物具有重要的理论和实践意义。另外，抗菌肽还具有一定的促进机体组织愈合及调节体内免疫的生物活性。
三、

技术实现要素：

10.本发明要解决的技术问题是：为了克服现有技术中存在的不足之处，本发明提供一种含福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品及其制备方法。
11.为了解决上述问题，本发明采取的技术方案是：
12.本发明提供一种含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品组合物，所述美白抗菌化妆品组合物由原料福鼎白茶提取物、川芎提取物、沙棘多糖提取物和花椒籽抗菌肽组成，四者之间的质量配比为42～48：40～46：7.5～11.5：0.25～0.5。
13.根据上述的含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品组合物，所述福鼎白茶提取物的制备方法为：
14.将福鼎白茶置于提取罐中，并加入水，福鼎白茶与水二者之间加入的质量体积比为1g：30～50ml，然后加热至沸腾条件下提取10～20min；按照此方法提取2～3次，将所得提取液进行合并，合并后过滤、浓缩至膏状粗提物，得到福鼎白茶提取物。
15.根据上述的含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品组合物，所述川芎提取物的制备方法为：
16.将川芎根粉碎至20目以下，然后采用质量百分浓度为50～90％的乙醇进行超声提取，超声提取温度为60～75℃、超声时间为50～70min；同样条件下超声提取2～3次，将所得提取液进行合并，合并后过滤、浓缩至膏状粗提物，得到川穹提取物。
17.根据上述的含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品组合物，所述沙棘多糖提取物的制备方法为：
18.将沙棘干果粉碎，过40目筛，然后加入10～15倍体积的石油醚进行回流提取2～3次，每次提取时间为40～80min；合并提取物，除去其中的脂溶性物质，然后进行抽滤，所得滤渣待用；
19.所得滤渣中按照1g：20～30ml的料液比加入蒸馏水，在65～75℃条件下超声波辅助提取，所得提取液进行浓缩，浓缩至1g/ml(即所得浓缩物1ml中含1g沙棘原料)；所得浓缩物中加入3～5倍体积的无水乙醇，降温至4℃条件下静置10～14h使沉淀产生，然后进行沉
淀离心，离心后所得溶液进行除蛋白(5次除蛋白)，除蛋白后所得物质置于烘箱中进行干燥，干燥温度为35～45℃，干燥后得到沙棘粗多糖提取物。
20.根据上述的含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品组合物，所述花椒籽抗菌肽的制备方法为：
21.a、将花椒籽粉碎至30目以下，得到花椒籽粉，作为原料；
22.b、将所得花椒籽粉采用石油醚进行脱脂，得到脱脂花椒籽粉；
23.c、所得脱脂花椒籽粉中加入10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，加入后搅拌30min；然后以8000r
·
min的速度离心20min，收集上清液；再次向离心管里加人10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，重复以上操作；将2次离心所得上清液进行合并，合并后进行冷冻干燥，得到花椒籽蛋白；
24.d、称取所得花椒籽蛋白溶于去离子水中，使花椒籽蛋白质量浓度为30～50mg/ml，在温度为32～50℃的恒温水浴锅中进行预热，然后加入酸性蛋白酶进行酶解；酶解过程中不断搅拌，并滴加hcl或naoh以维持溶液的ph值为2.1～4.0；酶解后取出所得物，放入95℃水浴锅中进行灭酶15min、冷却，冷却后在4℃、8000r/min条件下离心10min，取上清液调节ph值至中性，然后进行真空冷冻干燥，所得冻干粉即为花椒籽抗菌肽，保存备用；
25.所述酶解条件为：酸性蛋白酶与花椒籽蛋白的质量比为0.9～3：100、ph值为2.1～4.0、酶解时间为3.2～5.0h。
26.另外，提供一种含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品，上述美白抗菌化妆品组合物在化妆品原料组成中所占的质量百分含量为1～10％。
27.根据上述的含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品，以质量百分含量表示，所述美白抗菌化妆品的原料组成为：福鼎白茶提取物0.44～1.76％、沙棘多糖提取物0.115～0.46％、川芎提取物0.44～1.76％、花椒籽抗菌肽0.005～0.02％、1,3-丁二醇1～5％、透明质酸钠1～1.2％、聚甘油脂肪酸酯1～1.3％、角鲨烷1～1.8％、鲸蜡硬脂醇1～1.8％、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.04～0.1％、十八醇1～1.8％和异硬脂酰基乳酰乳酸钠1～1.8％，余量为去离子水，各成分百分含量之和为100％。
28.根据上述的含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品，所述美白抗菌化妆品的原料组成为：福鼎白茶提取物0.88％、沙棘多糖提取物0.23％、川芎提取物0.88％、花椒籽抗菌肽0.01％、1,3-丁二醇3％、透明质酸钠1.2％、聚甘油脂肪酸酯1.1％、角鲨烷1.5％、鲸蜡硬脂醇1.2％、抗坏血酸四异棕榈酸酯0.05％、十八醇1.2％和异硬脂酰基乳酰乳酸钠1.2％，余量为去离子水，各成分百分含量之和为100％。
29.本发明提供一种含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
30.1)按照上述美白抗菌化妆品的原料组成配制各种原料，首先将福鼎白茶提取物、沙棘多糖提取物、1,3-丁二醇、透明质酸钠和去离子水加入水相锅中搅拌，混合均匀后加热升温至40～50℃，得到水相料；
31.2)然后将聚甘油脂肪酸酯、川芎提取物、角鲨烷、花椒籽抗菌肽、鲸蜡硬脂醇、抗坏血酸四异棕榈酸酯、十八醇和异硬脂酰基乳酰乳酸钠依次加入油相锅中，加热至40～50℃搅拌混合均匀，得到油相料；
32.3)将水相料抽入乳化锅中，搅拌均质下抽入油相料，在40～50℃下均质15～25分
钟，得到含有福鼎白茶提取物的美白抗菌护肤霜。
33.本发明的积极有益效果：
34.1、本发明技术方案以福鼎白茶提取物、川芎提取物、沙棘多糖提取物和植物抗菌肽为活性原料制备的具有美白抗菌功效的组合物，经过b16细胞增殖、黑色素合成、酪氨酸酶活性以及抑菌活性测试，证明其具有良好的美白和抗菌功效。
35.2、本发明技术方案制成的美白抗菌护肤霜，经性能测试、改善皮肤亮度的能力、祛斑、消炎、油腻感和保湿补水效果等美白功效满意度测试和温和度测试，证明其安全温和、可以长期使用；其制备方法操作简单，适合产业化生产。
四、具体实施方式：
36.以下结合实施例进一步阐述本发明，但并不限制本发明技术方案保护的范围。
37.实施例1：
38.本发明含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品组合物，所述美白抗菌化妆品组合物由原料福鼎白茶提取物、川芎提取物、沙棘多糖提取物和花椒籽抗菌肽组成，四者之间的质量配比为42：46：10.0：0.5。
39.所述福鼎白茶提取物的制备方法为：将福鼎白茶置于提取罐中，并加入水，福鼎白茶与水二者之间加入的质量体积比为1g：50ml，然后加热至沸腾条件下提取10min；按照此方法提取2次，将所得提取液进行合并，合并后过滤、浓缩至膏状粗提物，得到福鼎白茶提取物。
40.所述川芎提取物的制备方法为：将川芎根粉碎至20目以下，然后采用质量百分浓度为80％的乙醇进行超声提取，控制料液比1:20g/ml，超声提取温度为65℃、超声时间为60min；同样条件下超声提取2次，将所得提取液进行合并，合并后过滤、浓缩至膏状粗提物，得到川穹提取物。
41.所述沙棘多糖提取物的制备方法为：将沙棘干果粉碎，过40目筛，然后加入10倍体积的石油醚进行回流提取2次，每次提取时间为60min；合并提取物，除去其中的脂溶性物质，然后进行抽滤，所得滤渣待用；
42.所得滤渣中按照1g：20ml的料液比加入蒸馏水，在70℃条件下超声波辅助提取，所得提取液进行浓缩，浓缩至1g/ml(即浓缩物1ml中含1g沙棘原料)；所得浓缩物中加入3倍体积的无水乙醇，降温至4℃条件下静置12h使沉淀产生，然后进行沉淀离心，离心后所得溶液进行5次除蛋白，除蛋白后所得物质置于烘箱中进行干燥，干燥温度为40℃，干燥后得到沙棘粗多糖提取物。
43.所述花椒籽抗菌肽的制备方法为：
44.a、将花椒籽粉碎至30目以下，得到花椒籽粉，作为原料；
45.b、将所得花椒籽粉采用石油醚进行脱脂，得到脱脂花椒籽粉；
46.c、所得脱脂花椒籽粉中加入10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，加入后搅拌30min；然后以8000r
·
min的速度离心20min，收集上清液；再次向离心管里加人10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，重复以上操作；将2次离心所得上清液进行合并，合并后进行冷冻干燥，得到花椒籽蛋白；
47.d、称取所得花椒籽蛋白溶于去离子水中，使花椒籽蛋白质量浓度为50mg/ml，在温
度为32℃的恒温水浴锅中进行预热，然后加入酸性蛋白酶进行酶解；酶解过程中不断搅拌，并滴加hcl或naoh以维持溶液的ph值为2.1；酶解后取出所得物，放入95℃水浴锅中进行灭酶15min、冷却，冷却后在4℃、8000r/min条件下离心10min，取上清液调节ph值至中性，然后进行真空冷冻干燥，所得冻干粉即为花椒籽抗菌肽，保存备用；
48.所述酶解条件为：酸性蛋白酶与花椒籽蛋白的质量比为0.9：100、ph值为2.1、酶解时间为3.2h。
49.实施例2：
50.本发明含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品组合物，所述美白抗菌化妆品组合物由原料福鼎白茶提取物、川芎提取物、沙棘多糖提取物和花椒籽抗菌肽组成，四者之间的质量配比为48：40：7.5：0.25。
51.所述福鼎白茶提取物的制备方法为：将福鼎白茶置于提取罐中，并加入水，福鼎白茶与水二者之间加入的质量体积比为1g：30ml，然后加热至沸腾条件下提取10min；按照此方法提取2次，将所得提取液进行合并，合并后过滤、浓缩至膏状粗提物，得到福鼎白茶提取物。
52.所述川芎提取物的制备方法为：将川芎根粉碎至20目以下，然后采用质量百分浓度为80％的乙醇进行超声提取，控制料液比1:25g/ml，超声提取温度为65℃、超声时间为60min；同样条件下超声提取2次，将所得提取液进行合并，合并后过滤、浓缩至膏状粗提物，得到川穹提取物。
53.所述沙棘多糖提取物的制备方法为：将沙棘干果粉碎，过40目筛，然后加入12倍体积的石油醚进行回流提取2次，每次提取时间为70min；合并提取物，除去其中的脂溶性物质，然后进行抽滤，所得滤渣待用；
54.所得滤渣中按照1g：20ml的料液比加入蒸馏水，在70℃条件下超声波辅助提取，所得提取液进行浓缩，浓缩至1g/ml(即浓缩物1ml中含1g沙棘原料)；所得浓缩物中加入3倍体积的无水乙醇，降温至4℃条件下静置12h使沉淀产生，然后进行沉淀离心，离心后所得溶液进行5次除蛋白，除蛋白后所得物质置于烘箱中进行干燥，干燥温度为40℃，干燥后得到沙棘粗多糖提取物。
55.所述花椒籽抗菌肽的制备方法为：
56.a、将花椒籽粉碎至30目以下，得到花椒籽粉，作为原料；
57.b、将所得花椒籽粉采用石油醚进行脱脂，得到脱脂花椒籽粉；
58.c、所得脱脂花椒籽粉中加入10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，加入后搅拌30min；然后以8000r
·
min的速度离心20min，收集上清液；再次向离心管里加人10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，重复以上操作；将2次离心所得上清液进行合并，合并后进行冷冻干燥，得到花椒籽蛋白；
59.d、称取所得花椒籽蛋白溶于去离子水中，使花椒籽蛋白质量浓度为30mg/ml，在温度为45.5℃的恒温水浴锅中进行预热，然后加入酸性蛋白酶进行酶解；酶解过程中不断搅拌，并滴加hcl或naoh以维持溶液的ph值为4.0；酶解后取出所得物，放入95℃水浴锅中进行灭酶15min、冷却，冷却后在4℃、8000r/min条件下离心10min，取上清液调节ph值至中性，然后进行真空冷冻干燥，所得冻干粉即为花椒籽抗菌肽，保存备用；
60.所述酶解条件为：酸性蛋白酶与花椒籽蛋白的质量比为3.0：100、ph值为4.0、酶解
时间为4.8h。
61.实施例3：
62.本发明含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品组合物，所述美白抗菌化妆品组合物由原料福鼎白茶提取物、川芎提取物、沙棘多糖提取物和花椒籽抗菌肽组成，四者之间的质量配比为44：44：11.5：0.5。
63.所述福鼎白茶提取物的制备方法为：将福鼎白茶置于提取罐中，并加入水，福鼎白茶与水二者之间加入的质量体积比为1g：35ml，然后加热至沸腾条件下提取10min；按照此方法提取2次，将所得提取液进行合并，合并后过滤、浓缩至膏状粗提物，得到福鼎白茶提取物。
64.所述川芎提取物的制备方法为：将川芎根粉碎至20目以下，然后采用质量百分浓度为80％的乙醇进行超声提取，控制料液比1:18g/ml，超声提取温度为65℃、超声时间为60min；同样条件下超声提取2次，将所得提取液进行合并，合并后过、浓缩至膏状粗提物，得到川穹提取物。
65.所述沙棘多糖提取物的制备方法为：将沙棘干果粉碎，过40目筛，然后加入15倍体积的石油醚进行回流提取2次，每次提取时间为60min；合并提取物，除去其中的脂溶性物质，然后进行抽滤，所得滤渣待用；
66.所得滤渣中按照1g：25ml的料液比加入蒸馏水，在65℃条件下超声波辅助提取，所得提取液进行浓缩，浓缩至1g/ml(即浓缩物1ml中含1g沙棘原料)；所得浓缩物中加入3倍体积的无水乙醇，降温至4℃条件下静置12h使沉淀产生，然后进行沉淀离心，离心后所得溶液进行5次除蛋白，除蛋白后所得物质置于烘箱中进行干燥，干燥温度为40℃，干燥后得到沙棘粗多糖提取物。
67.所述花椒籽抗菌肽的制备方法为：
68.a、将花椒籽粉碎至30目以下，得到花椒籽粉，作为原料；
69.b、将所得花椒籽粉采用石油醚进行脱脂，得到脱脂花椒籽粉；
70.c、所得脱脂花椒籽粉中加入10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，加入后搅拌30min；然后以8000r
·
min的速度离心20min，收集上清液；再次向离心管里加人10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，重复以上操作；将2次离心所得上清液进行合并，合并后进行冷冻干燥，得到花椒籽蛋白；
71.d、称取所得花椒籽蛋白溶于去离子水中，使花椒籽蛋白质量浓度为40mg/ml，在温度为42.1℃的恒温水浴锅中进行预热，然后加入酸性蛋白酶进行酶解；酶解过程中不断搅拌，并滴加hcl或naoh以维持溶液的ph值为3；酶解后取出所得物，放入95℃水浴锅中进行灭酶15min、冷却，冷却后在4℃、8000r/min条件下离心10min，取上清液调节ph值至中性，然后进行真空冷冻干燥，所得冻干粉即为花椒籽抗菌肽，保存备用；
72.所述酶解条件为：酸性蛋白酶与花椒籽蛋白的质量比为2：100、ph值为3、酶解时间为3.5h。
73.实施例4：
74.本发明含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品组合物，所述美白抗菌化妆品组合物由原料福鼎白茶提取物、川芎提取物、沙棘多糖提取物和花椒籽抗菌肽组成，四者之间的质量配比为46：42：9.0：0.35。
75.所述福鼎白茶提取物的制备方法为：将福鼎白茶置于提取罐中，并加入水，福鼎白茶与水二者之间加入的质量体积比为1g：40ml，然后加热至沸腾条件下提取10min；按照此方法提取2次，将所得提取液进行合并，合并后过滤浓缩至膏状粗提物，得到福鼎白茶提取物。
76.所述川芎提取物的制备方法为：将川芎根粉碎至20目以下，然后采用质量百分浓度为80％的乙醇进行超声提取，控制料液比1:15g/ml，超声提取温度为65℃、超声时间为60min；同样条件下超声提取2次，将所得提取液进行合并，合并后过滤、浓缩至膏状粗提物，得到川穹提取物。
77.所述沙棘多糖提取物的制备方法为：将沙棘干果粉碎，过40目筛，然后加入10倍体积的石油醚进行回流提取2次，每次提取时间为60min；合并提取物，除去其中的脂溶性物质，然后进行抽滤，所得滤渣待用；
78.所得滤渣中按照1g：30ml的料液比加入蒸馏水，在70℃条件下超声波辅助提取，所得提取液进行浓缩，浓缩至1g/ml(即浓缩物1ml中含1g沙棘原料)；所得浓缩物中加入3倍体积的无水乙醇，降温至4℃条件下静置12h使沉淀产生，然后进行沉淀离心，离心后所得溶液进行5次除蛋白，除蛋白后所得物质置于烘箱中进行干燥，干燥温度为40℃，干燥后得到沙棘粗多糖提取物。
79.所述花椒籽抗菌肽的制备方法为：
80.a、将花椒籽粉碎至30目以下，得到花椒籽粉，作为原料；
81.b、将所得花椒籽粉采用石油醚进行脱脂，得到脱脂花椒籽粉；
82.c、所得脱脂花椒籽粉中加入10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，加入后搅拌30min；然后以8000r
·
min的速度离心20min，收集上清液；再次向离心管里加人10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，重复以上操作；将2次离心所得上清液进行合并，合并后进行冷冻干燥，得到花椒籽蛋白；
83.d、称取所得花椒籽蛋白溶于去离子水中，使花椒籽蛋白质量浓度为35mg/ml，在温度为36.1℃的恒温水浴锅中进行预热，然后加入酸性蛋白酶进行酶解；酶解过程中不断搅拌，并滴加hcl或naoh以维持溶液的ph值为3.2；酶解后取出所得物，放入95℃水浴锅中进行灭酶15min、冷却，冷却后在4℃、8000r/min条件下离心10min，取上清液调节ph值至中性，然后进行真空冷冻干燥，所得冻干粉即为花椒籽抗菌肽，保存备用；
84.所述酶解条件为：酸性蛋白酶与花椒籽蛋白的质量比为1.5：100、ph值为3.2、酶解时间为4h。
85.实施例5：
86.本发明含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品组合物，所述美白抗菌化妆品组合物由原料福鼎白茶提取物、川芎提取物、沙棘多糖提取物和花椒籽抗菌肽组成，四者之间的质量配比为45：43：8.5：0.45。
87.所述福鼎白茶提取物的制备方法为：将福鼎白茶置于提取罐中，并加入水，福鼎白茶与水二者之间加入的质量体积比为1g：45ml，然后加热至沸腾条件下提取10min；按照此方法提取2次，将所得提取液进行合并，合并后过滤、浓缩至膏状粗提物，得到福鼎白茶提取物。
88.所述川芎提取物的制备方法为：将川芎根粉碎至20目以下，然后采用质量百分浓
度为80％的乙醇进行超声提取，控制料液比1:22g/ml，超声提取温度为65℃、超声时间为60min；同样条件下超声提取2次，将所得提取液进行合并，合并后过滤、浓缩至膏状粗提物，得到川穹提取物。
89.所述沙棘多糖提取物的制备方法为：将沙棘干果粉碎，过40目筛，然后加入10倍体积的石油醚进行回流提取2次，每次提取时间为60min；合并提取物，除去其中的脂溶性物质，然后进行抽滤，所得滤渣待用；
90.所得滤渣中按照1g：22ml的料液比加入蒸馏水，在70℃条件下超声波辅助提取，所得提取液进行浓缩，浓缩至1g/ml(即浓缩物1ml中含1g沙棘原料)；所得浓缩物中加入3倍体积的无水乙醇，降温至4℃条件下静置12h使沉淀产生，然后进行沉淀离心，离心后所得溶液进行5次除蛋白，除蛋白后所得物质置于烘箱中进行干燥，干燥温度为40℃，干燥后得到沙棘粗多糖提取物。
91.所述花椒籽抗菌肽的制备方法为：
92.a、将花椒籽粉碎至30目以下，得到花椒籽粉，作为原料；
93.b、将所得花椒籽粉采用石油醚进行脱脂，得到脱脂花椒籽粉；
94.c、所得脱脂花椒籽粉中加入10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，加入后搅拌30min；然后以8000r
·
min的速度离心20min，收集上清液；再次向离心管里加人10倍的浓度为0.5％的naoh溶液，重复以上操作；将2次离心所得上清液进行合并，合并后进行冷冻干燥，得到花椒籽蛋白；
95.d、称取所得花椒籽蛋白溶于去离子水中，使花椒籽蛋白质量浓度为38mg/ml，在温度为33℃的恒温水浴锅中进行预热，然后加入酸性蛋白酶进行酶解；酶解过程中不断搅拌，并滴加hcl或naoh以维持溶液的ph值为2.8；酶解后取出所得物，放入95℃水浴锅中进行灭酶15min、冷却，冷却后在4℃、8000r/min条件下离心10min，取上清液调节ph值至中性，然后进行真空冷冻干燥，所得冻干粉即为花椒籽抗菌肽，保存备用；
96.所述酶解条件为：酸性蛋白酶与花椒籽蛋白的质量比为1.9：100、ph值为2.8、酶解时间为3.9h。
97.以本发明实施例1-5制备的提取物组合物进行实验检测，具体检测过程如下：
98.本发明实施例1-5所得美白抗菌化妆品组合物进行以下实验前，先对其进行预处理，预处理方法为：
99.将实施例1-5待测样品，首先用5
‰
dmso(v/v)进行溶解，然后用蒸馏水配制成浓度为1600.0μg/ml的溶液，再用0.22μm滤膜过滤，过滤后作为实施例1-5母液；所得母液采用液体培养基依次倍比稀释，即浓度依次为800.0、400.0、200.0、100.0μg/ml。
100.一、b16细胞活性测定：
101.测定方案：取对数期生长的b16细胞，按照3
×
104个/ml的浓度接种于96孔板中，每孔100μl培养液；37℃、5％co2环境中培养24h；弃去上清原培养液，每孔添加含有不同浓度的待测样品实施例1-5(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)的完全培养液100μl，对照组设定为不含待测样品的同体积培养液，空白孔不接种细胞只加100μl培养基，每组设定3个重复。采用cck8法测定细胞活性。上述细胞于37℃、5％co2环境中继续培养24h、48h、72h，每孔加入10μlcck-8溶液，培养4h后，测定450nm处的吸光值，用空白孔调零，测定并计算细胞活力。细胞活力的计算公式如下：
102.细胞活力/％＝样品组吸光值/对照组吸光值*100
103.测试结果：本发明实施例1-5美白抗菌组合物作用b16细胞后，细胞活性如表1所示。作用浓度和处理时间会影响待测样品对b16细胞增殖的抑制作用。低浓度的实施例1-5美白抗菌组合物对b16细胞的活性无显著抑制作用，实施例1-5美白抗菌组合物浓度为100、200μg/ml时，最长72h的处理时间内，b16细胞活力未见明显下降。200μg/ml实施例1-5混合物均显著抑制b16细胞的活性，该浓度下处理72h，b16细胞的活力最低至90.36％；而400μg/ml的待测样品会呈现极显著的差异，72h后细胞活力低至82.23％。浓度为100μg/ml的熊果苷(阳性对照)同样极显著的抑制b16细胞的活性，处理72h后，细胞活力降至78.84％。
104.表1各种待测样品对b16细胞活力的影响
105.[0106][0107]
注：与对照组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0108]
二、细胞内黑色素含量的测定：
[0109]
测定方案：采用naoh溶解法测定b16细胞的黑色素含量。取对数期生长的b16细胞，调整细胞浓度接种于6孔板(3
×
104个/孔)。37℃、5％co2环境中培养24h。吸弃培养液，加入不同浓度的实施例1-5待测样品，处理同b16细胞活性测定，每孔加入1ml。上述细胞于37℃、5％co2环境中继续培养24h、48h、72h，后用pbs缓冲液冲洗3次。然后加入2ml、浓度为0.2mol/l的naoh溶液，80℃水浴1h，彻底溶解细胞团块。测定492nm处的吸光值，黑色素相对含量计算公式如下：
[0110]
黑色素相对含量/％＝样品组吸光值/对照组吸光值*100
[0111]
测定结果：本发明实施例1-5制备所得组合物作用b16细胞后对其黑色素含量的影响如表2所示。基于实施例1-5组合物对b16细胞活力的影响测定，选定处理浓度为100μg/ml和200μg/ml进行黑色素含量的测定，在此设定浓度下，b16细胞的活性不会受到明显抑制。但是对b16细胞黑色素合成有明显的抑制作用，并且随着浓度的增加抑制作用逐渐加强，200μg/ml处理b16细胞72h，使得细胞内黑色素含量为74.35％，即对黑色素生成量的抑制率达25.65％。可见本发明制备的含有福鼎白茶提取物的美白抗菌组合物是一种潜在的黑色素合成抑制剂。
[0112]
表2各种待测样品对b16细胞黑色素合成的影响
[0113][0114]
注：数值为3个重复的平均值
±
标准误，同列中不同小写字母表示5％差异显著性水平，下同。
[0115]
三、对b16细胞酪氨酸酶活性的影响：
[0116]
测定方案：细胞培养及处理方法同细胞活性测定。实施例1-5处理后的细胞继续培养24h、48h、72h，吸弃培养液，后用pbs缓冲液冲洗3次。加入50μl细胞裂解液1％tritonx-100，低温冷冻1h，取出后室温融化。37℃孵育并加入10μl、浓度为1％的l-dopa溶液，反应1h。测定492nm处的吸光值，酪氨酸酶相对活力计算公式如下：
[0117]
酷氨酸酶相对活力/％＝(1-样品组吸光值/对照组吸光值)*100
[0118]
本发明实施例1-5美白抗菌组合物对b16细胞酪氨酸酶活性如表3所示，与对照组相比，实施例1-5美白抗菌组合物对b16细胞酪氨酸酶活性具有显著的抑制作用。随着实施例1-5美白抗菌组合物浓度的增大及处理时间的增长，b16细胞酪氨酸酶活性逐步降低，呈现剂量依赖关系与对照组呈现显著差异(p《0.05)。实验设定范围内，实施例1-5美白抗菌组合物对b16细胞酪氨酸酶活性抑制率为10.76～46.64％。
[0119]
表3本发明实施例1-5美白抗菌组合物对b16细胞酪氨酸酶活力的影响
[0120][0121]
人体皮肤中的黑色素是由黑色素细胞产生，可以通过细胞的树突结构转移至角质形成细胞中，并且能够重新排列分布。因此，伴随角质形成细胞的分化，黑色素可以向上迁移，最终迁移至皮肤角质层，在皮肤表面形成了色素沉积。目前，已有学者探索了黑色素的合成过程。首先，黑色素细胞中的酪氨酸在酪氨酸酶(tyr)的催化作用下与多巴反应，氧化生成多巴醌，多巴醌异构化形成多巴色素，多巴色素进一步通过2条通路反应。其一，多巴色素脱羧并在tyr的作用下生成5,6-吲哚醌；其二，多巴色素在trp-2的作用下，形成5,6-二羟基吲哚羧酸，进一步在trp-1的催化下生成5,6-吲哚醌羧酸，5,6-吲哚醌和5,6-吲哚醌羧酸最终形成真色素。因此，酪氨酸酶在整个反应中作用重大，抑制酪氨酸酶的活性就能够有效抑制黑色素的形成。在本发明实验中，12.5μg/ml的实施例1-5美白抗菌组合物对酪氨酸酶活性的抑制率为6.69％，200μg/ml的实施例1-5美白抗菌组合物处理72h后，抑制率达到46.69％，具有较好的抑制作用。
[0122]
四、抑菌活性测定：
[0123]
1、菌株复苏及菌悬液的制备：
[0124]
在无菌液体培养基(100ml)中，用无菌接种环分别接种少量的活化菌种，固定于37℃恒温摇床，培养24h，制备成浓度为10
6-108cfu/ml的菌悬液备用。
[0125]
2、最小抑菌浓度(mic)的测定：
[0126]
采用倍比稀释法：首先用5
‰
dmso(v/v)将实施例1-5美白抗菌组合物溶解，然后添加1％吐温-80(v/v)，再用蒸馏水配制成浓度为320.0mg/ml的溶液，用0.22μm滤膜过滤后作为实施例1-5母液，最后用液体培养基依次倍比稀释成系列浓度，即浓度依次为160、80.0、40.0、20.0、10.0和5.0mg/ml。将实施例1-5及稀释成不同浓度的药液按浓度从小到大的顺序依次加入96孔板中，每孔0.1ml；再分别加入0.1ml菌悬液。以加入0.1ml菌悬液和0.1ml液
体培养基的处理为阳性对照，以只加0.2ml液体培养基的处理为阴性对照，将96孔板置于37℃恒温箱中培养24h。完全没有细菌生长处理对应的最低浓度即为最小抑菌浓度(mic)。
[0127]
3、最小杀菌浓度(mbc)的测定：
[0128]
在上述无细菌生长的各处理孔取一定量的菌液分别涂布于相应的无菌琼脂平板上，于37℃恒温箱中培养，24h观察结果，以平板上无细菌生长的最低药物浓度为mbc。
[0129]
上述测定结果详见表4。
[0130]
表4本发明实施例1-5样品对10种常见致病菌mic/mbc的测定结果
[0131][0132]
注：“ ”表示革兰氏染色阳性，
“‑”
表示革兰氏染色阴性；“〉200”表示在此浓度下无法观察mbc值。
[0133]
采用倍比稀释法研究了本发明实施例1-5制备所得组合物对所选10种常见致病菌的抑制活性，结果详见表4。结果表明，本发明实施例1-5组合物对试验所选的10种常见致病菌均具有较好的抑制作用，尤其是对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、化脓性链球菌和铜绿假单胞菌抑制作用最强，最小抑菌浓度(mic)和最小杀菌浓度(mbc)均在20.0mg/ml以下。此外，由抑菌活性结果可知，本发明实施例1-5组合物对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有显著的抑制作用，且对革兰氏阳性菌的抑制能力强于对革兰氏阴性菌的抑制能力。
[0134]
本发明应用实施例即含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品：
[0135]
表5是本发明含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品的应用实施例1-4的原料组成。
[0136]
表5本发明应用实施例1-4的组分及其重量百分含量
[0137][0138]
本发明应用实施例1-4所述含有福鼎白茶提取物的美白抗菌化妆品的制备方法，该制备方法的详细步骤如下：
[0139]
1)按照本发明应用实施例1-4任一所述美白抗菌化妆品的原料组成配制各种原料，首先将福鼎白茶提取物、沙棘多糖提取物、1,3-丁二醇、透明质酸钠和去离子水加入水相锅中搅拌，混合均匀后加热升温至45℃，得到水相料；
[0140]
2)然后将聚甘油脂肪酸酯、川芎提取物、角鲨烷、花椒籽抗菌肽、鲸蜡硬脂醇、抗坏血酸四异棕榈酸酯、十八醇和异硬脂酰基乳酰乳酸钠依次加入油相锅中，加热至45℃搅拌混合均匀，得到油相料；
[0141]
3)将水相料抽入乳化锅中，搅拌均质下抽入油相料，在45℃下均质20分钟，得到含有福鼎白茶提取物的美白抗菌护肤霜。
[0142]
利用本发明应用具体实施例制备的美白抗菌护肤霜进行如下性能测试：
[0143]
1、感官及理化性能指标测试：
[0144]
本发明产品美白抗菌护肤霜的感官及理化指标测定结果，详见表6所示，检验结果符合qb/t1857-2013润肤膏霜标准要求。
[0145]
表6本发明产品美白抗菌护肤霜的感官及理化指标测定结果
[0146][0147][0148]
2、功效试验例：
[0149]
本功效试验例检测本发明产品美白抗菌护肤霜的改善皮肤亮度能力。
[0150]
受试人群：100名成年女性志愿者，年龄在25～40周岁之间，随机分均为10组。
[0151]
试验方法：每组受试者每天早晚洁面后，在使用等量同一化妆水之后，分别在面部使用等量本发明应用实施例1～4和0.1％熊果苷，持续使用2周和4周后，用面部皮肤图像分析仪(visi a-cr)，测量皮肤亮度(l值)和色素沉着的改善度，测试结果详见表7所示，数据
为取同一试验组内所有数据的平均值。
[0152]
表7本发明产品美白抗菌护肤霜改善皮肤亮度的能力
[0153][0154]
由表7数据可知，使用本发明产品美白抗菌护肤霜的受试者的皮肤亮度均升高，与基础值相比，皮肤亮度至少升高0.93％，最高可升高1.78％。由此可见，本发明产品美白抗菌护肤霜具有显著的美白效果。
[0155]
3、满意度评分：
[0156]
采用用户试用及民意调查评分法，选取420名20～50岁年龄段的人作为试用对象，随机分成14组，分别使用本发明应用实施例1-4的护肤霜，早晚各一次，使用三个月后，对美白、祛斑、消炎、油腻感和保湿补水效果进行评分，各项使用效果总分为5分：5分为最高分，表示很好，非常满意；4分为较好；3分为好；3分以下为不好、不能接受。注：油腻感评分的规则是：5分，不油膩，使用感觉表示很好，非常满意；4分为使用感较好；3分为使用感好；3分以下为非常油腻、使用感不好、不能接受。以下为各项平均得分，结果详见表8。
[0157]
表8本发明应用实施例1-4产品美白抗菌护肤的满意度评分测试
[0158]
调查对象美白祛斑消炎油腻感保湿补水应用实施例14.53.74.14.64.7应用实施例24.63.64.24.64.7应用实施例34.73.94.54.84.9应用实施例44.63.54.34.54.8。