基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法与流程

技术特征：
1.一种基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：s1、使用消化酶对目标蛋白进行酶切反应，得到蛋白的酶切片段；s2、以步骤s1中得到的蛋白的酶切片段作为检测样本，候选抗体作为一抗，进行western blot检测，获得蛋白酶切片段的肽谱识别特征指纹；s3、找出步骤s2中得到的蛋白酶切片段的肽谱识别特征指纹图谱中具有差异的泳道，所述泳道对应的候选抗体即为可能存在两两配对的配对抗体。2.如权利要求1所述的基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法，其特征在于，还包括采用双抗体夹心elisa法对步骤s3中得到的可能存在两两配对的配对抗体进行确认复核的步骤。3.如权利要求1所述的基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法，其特征在于，步骤s1中，所述消化酶选自胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或胃蛋白酶中的一种。4.如权利要求1所述的基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法，其特征在于，步骤s1中，所述消化酶的浓度为0.2～0.5%，所述酶切反应的温度为25～40℃，酶切反应的时间为0.5～8h。5.如权利要求1所述的基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法，其特征在于，步骤s1中，所述酶切反应体系中的缓冲液为tris-hcl缓冲液，ph为8.0。6.如权利要求1所述的基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法，其特征在于，步骤s2中，所述western blot检测的具体方法为：将所述蛋白酶切片段和蛋白上样缓冲液混匀后，煮沸5～10min，经sds-page分离；之后置于转移槽中进行转膜，将蛋白酶切片段转移至pvdf膜上；室温5％脱脂奶粉封闭2～4h，用封闭液稀释一抗，在温度为4℃的条件下，一抗封闭过夜；用tbst溶液洗涤3次，每次8mim，室温孵育二抗2h；用tbst溶液洗涤3次，每次9min，ecl试剂显影，获得蛋白酶切片段的肽谱识别特征指纹。7.权利要求1～6任一项所述的基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法在大样本配对抗体筛选领域中的应用。

技术总结
本发明公开了一种基于对蛋白酶切的肽谱识别特征指纹的抗体配对筛选方法，包括如下步骤：S1、使用消化酶对目标蛋白进行酶切反应，得到蛋白的酶切片段；S2、以步骤S1中得到的蛋白的酶切片段作为检测样本，候选抗体作为一抗，进行Western Blot检测，获得蛋白酶切片段的肽谱识别特征指纹；S3、找出步骤S2中得到的蛋白酶切片段的肽谱识别特征指纹图谱中具有差异的泳道，所述泳道对应的候选抗体即为可能存在两两配对的配对抗体。本发明所述的抗体配对筛选方法能快速进行初步筛选出识别不同表位的抗体，可有效缩小候选抗体数量，进而减少ELISA配对工作量，具有操作简单、成本低廉等优点，因此，在配对抗体筛选领域具有良好的应用情景。在配对抗体筛选领域具有良好的应用情景。在配对抗体筛选领域具有良好的应用情景。


技术研发人员：张蜜 尚真真 高丽 尹丽萍 罗长义
受保护的技术使用者：武汉三鹰生物技术有限公司
技术研发日：2021.12.28
技术公布日：2022/7/26