用于CD123修饰的组合物和方法与流程

技术特征：
1.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:21的序列。2.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:22的序列。3.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:23的序列。4.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:24的序列。5.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:25的序列。6.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:26的序列。7.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:27的序列。8.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:28的序列。9.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:29的序列。10.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:30的序列。11.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:48的序列。12.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:49的序列。13.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:50的序列。14.grna，其包含靶向域，其中所述靶向域包含seq id no:51的序列。15.grna，其包含结合表1、2、6或8的靶域的靶向域。16.grna，其包含靶向域，所述靶向域能够指导表1、2、6或8的靶域的切割或编辑。17.权利要求1-16中任一项所述的grna，其包含第一互补域、连接域、与所述第一互补域互补的第二互补域和近端域。18.权利要求1-17中任一项所述的grna，其是单一向导rna(sgrna)。19.权利要求1-18中任一项所述的grna，其包含一个或多个2’o-甲基核苷酸。20.权利要求1-19中任一项所述的grna，其包含一个或多个硫代磷酸酯或硫代pace联结。21.产生经遗传工程化改造的细胞的方法，其包括：(i)提供细胞(例如，造血干细胞或祖细胞，例如，野生型造血干细胞或祖细胞)，和(ii)将(a)权利要求1-20中任一项的grna；和(b)结合所述grna的cas9分子引入所述细胞，从而产生所述经遗传工程化改造的细胞。22.权利要求21所述的方法，其中所述cas分子包含spcas9内切核酸酶、sacas9内切核酸酶或cpf1内切核酸酶。23.权利要求21或22所述的方法，其中将(i)和(ii)作为预先形成的核糖核蛋白复合物引入所述细胞。24.权利要求21所述的方法，其中通过电穿孔将所述核糖核蛋白复合物引入所述细胞。25.经遗传工程化改造的造血干细胞或祖细胞，其通过权利要求21的方法产生。26.细胞群，其包含多个权利要求25的所述经遗传工程化改造的造血干细胞或祖细胞。27.权利要求26所述的细胞群，其进一步包含一种或多种细胞，所述细胞包含一种或多种非工程化改造的cd123基因。28.权利要求26或27所述的细胞群，其表达低于20％的由野生型对应细胞群所表达的cd123。29.权利要求26-28中任一项所述的细胞群，其包含造血干细胞和造血祖细胞两者。
30.权利要求26-29中任一项所述的细胞群，其进一步包含在编码除cd123之外的谱系特异性细胞表面抗原的基因处的第二突变。31.权利要求28所述的细胞群，其中所述编码除cd123之外的谱系特异性细胞表面抗原的基因是cd33或cll1。32.方法，其包括向有此需要的受试者施用权利要求26-31中任一项的细胞群。33.权利要求28所述的方法，其中所述受试者患有造血恶性病。34.权利要求28或33所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用有效量的靶向cd123的药剂，其中所述药剂包含结合cd123的抗原结合片段。

技术总结
本公开提供了例如在内源性CD123基因中具有修饰(例如插入或缺失)的新细胞。本公开还提供了可以用于进行此类修饰的组合物，例如gRNA。gRNA。gRNA。


技术研发人员：J.利迪尔德 C.罗 B.P.米什拉 M.林
受保护的技术使用者：VOR生物制药股份有限公司
技术研发日：2020.08.28
技术公布日：2022/7/22