一种提取白首乌3种药理活性物质的方法

1.本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种提取白首乌3种药理活性物质的方法。


背景技术：

2.白首乌又名耳叶牛皮消，是中国传统中药材，因其具有补肾益肝、养血益精、乌发生发、抗衰老的功效，被历代名家视为摄生防老之珍品。作为首乌之乡——江苏省盐城市滨海县，当地人在早茶或下午茶时间均会食用白首乌，这主要是由于白首乌可作为保健药材，用于日常服用，且温补宜人。
3.然而，白首乌的深加工产业发展仍然相对滞后，白首乌产品多以初加工的片、粉为主，产品附加值低。而白首乌中富含有药理价值的黄酮、多糖、甾苷，因此，有必要对白首乌中的药理活性物质进行提取，以促进白首乌产业的发展。
4.目前，对于白首乌中药理活性物质提取工艺的报道较少，多采用水提法、酶解辅助法、微波辅助法等传统工艺，这些提取方法存在操作复杂，提取周期长，提取得率低，产品纯度低等问题，且在提取过程中容易破坏黄酮、多糖、甾苷的活性，使其丧失药理价值。且还会致使白首乌原料利用率低，造成药材原料的严重浪费，不利于白首乌的产业化发展。
5.另外，有现有技术报道，可以采用不同的提取方法来对白首乌分别提取，以获得三种药理活性物质，但是单一活性物质的提取仍然存在原料利用率低，造成药材严重浪费的问题。而且传统的提取工艺中，提取过程中可能存在物质的干扰，这会影响提取产品的纯度，导致了连续提取的困难。且传统工艺的高成本、低产率等劣势，导致白首乌黄酮、白首乌多糖、白首乌甾苷在市场销售上尚属空白。这些都严重影响着白首乌深加工产业的发展，并制约了白首乌活性物质提取工厂化生产技术的推广和应用。因此，有必要建立一条提取白首乌黄酮、白首乌多糖、白首乌甾苷的工艺流程，以减少白首乌活性物质提取的步骤，简化工艺流程，降低提取成本，提高白首乌原料的利用率，减少白首乌原料的浪费。最终工艺流程提取周期短、产品得率高、纯度高，为白首乌高质量活性物质的提取工作奠定基础，为生产实践提供科学依据。


技术实现要素：

6.为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种提取白首乌3种药理活性物质的方法。
7.为实现上述目的，本发明的技术方案如下。
8.一种提取白首乌3种药理活性物质的方法，包括以下步骤：
9.s1、将白首乌粉末与乙醇混合后，加入非离子表面活性剂，并在循环超声条件下于50～70℃提取30～50min；离心，收集上清液得到白首乌黄酮提取液；
10.s2、将s1离心后的沉淀分散在烷基糖苷溶液中，于50～70℃下超声提取30～50min，离心，收集上清液；
11.s3、将s2的上清液浓缩后，除去蛋白，再分散到乙醇中，于1～5℃进行醇沉，然后将醇沉液离心，并对离心后的沉淀进行处理，得到白首乌多糖；
12.将s2的沉淀在50～70℃下用乙醇溶液提取至少两次，合并提取液，离心，收集上清液，浓缩以去除乙醇，浓缩液用烷基糖苷溶液萃取至少两次，合并烷基糖苷层，浓缩以回收溶剂，得到白首乌甾苷。
13.进一步，s1中，白首乌粉末与乙醇的用量比为1g：30～50ml。
14.进一步，s1中，非离子表面活性剂为曲拉通x-100溶液，且曲拉通x-100溶液的浓度为1.0～1.5mmol/l。
15.更进一步，s1中，白首乌粉末与非离子表面活性剂的用量比为1g：0.1～0.2ml。
16.进一步，s2和s4中，烷基糖苷溶液的浓度为0.1～0.25mmol/l。
17.s2中，沉淀与烷基糖苷溶液的用量比为1g：5～10ml。
18.进一步，s3中，除去蛋白采用sevag法。
19.进一步，s3中，上清液浓缩后的浓缩液的体积是上清液在浓缩前的体积的1/4～1/3；除去蛋白后的浓缩液与乙醇的体积比为1：3～5。
20.进一步，s3中，对离心后的沉淀进行处理的方法如下：
21.将离心后的沉淀用体积百分比为70～90％的乙醇溶液洗涤至少两次，再用水将沉淀复溶，离心除去不溶物，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液，将洗脱液浓缩并透析32～48h后，冷冻干燥。
22.进一步，s3中，乙醇溶液是体积百分比为70～90％的乙醇溶液；
23.沉淀与乙醇溶液的用量比为20～24g：1ml。
24.进一步，s3中，浓缩液与烷基糖苷溶液的用量比为1g：5～10ml。
25.本发明的有益效果：
26.1、本发明的方法，与现有工艺提取白首乌活性物质的技术对比，周期降低，活性提高，纯度提高，得率提高，原料利用率提高。本发明以白首乌的块根为试材，使用曲拉通x-100和烷基糖苷作为提取试剂，辅助使用循环超声工艺，分别研制出提取白首乌黄酮、白首乌多糖、白首乌甾苷的提取工艺，再将三种提取方法相结合，成功研制出一种提取白首乌黄酮、白首乌多糖、白首乌甾苷的工艺流程。该方法成功减少提取周期、提高产品得率、纯度和活性，为白首乌活性物质的提取工作提供理论依据和实验基础。
27.2、本发明首次使用成本低廉的表面活性剂辅助循环超声方法进行白首乌活性物质的提取。同时，使用本工艺处理白首乌能一步提取三种白首乌活性物质，显著降低提取周期和成本，提高原料利用率。并且通过对料液比、提取时间等工艺参数的优化，与传统工艺相比，本工艺的周期降低、产品得率和纯度提高、生物活性提高。此外，本发明运用技术手段解决了一步提取白首乌精提产品时可能存在的物质的干扰的问题。本发明不仅规范了白首乌活性物质提取的一系列过程，还大大简化了工艺流程，推动了一套完整的白首乌活性物质产品的提取工艺流程的建立。
具体实施方式
28.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于
限定本发明。
29.基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
30.实施例1
31.一种提取白首乌3种药理活性物质的方法，包括以下步骤：
32.s1、白首乌的预处理
33.取洗净后的白首乌块根100g，切块后放入粉碎机，研磨成粉后过80目筛，得到白首乌粉末。
34.s2、白首乌黄酮的提取
35.将1g白首乌粉末置于30ml无水乙醇中，混合均匀后，加入0.15ml浓度为1.2mmol/l的曲拉通x-100溶液，置于循环超声机中，在60℃下提取30min；提取结束后将提取液倒入离心杯中，在4000r/min下离心10min，收集上清液，得到白首乌黄酮提取液。
36.s3、白首乌多糖的提取
37.将s2离心后的沉淀按照料液比1g：8ml分散在0.125mmol/l烷基糖苷溶液中，然后置于循环超声机中，于60℃下超声提取30min，超声功率400w，提取结束后，将提取液倒入离心杯中，以4000r/min的转速离心10min，收集上清液；
38.s4、白首乌多糖的沉淀分离
39.将s3的上清液转入旋蒸瓶，旋转蒸发至原体积的1/4后，采用sevag法除去蛋白。再加入4倍体积的无水乙醇，置于4℃条件下过夜醇沉，然后将醇沉液于4000r/min离心10min，弃去上清液，将离心后的沉淀用80％的乙醇溶液洗涤三次，最后用去离子水将沉淀复溶，离心除去不溶物。将上清液上样于层析柱(φ26.0mm
×
300.0mm)，装柱体系1bv(130ml)，用蒸馏水进行洗脱，收集洗脱液；在50℃条件下将收集的洗脱液浓缩至30ml后，用去离子水透析48h，再于-80℃冷冻干燥，得到白首乌多糖。
40.s5、白首乌甾苷的提取
41.将s3的沉淀按照料液比22g：1ml与体积分数90％乙醇溶液混合于圆底烧瓶中，在55℃下加热提取2h，过滤，滤渣重复提取一次，合并两次提取液，在8000r/min下离心8min，收集上清液，减压浓缩至无醇味；
42.向浓缩液中加入浓度为0.2mmol/l烷基糖苷溶液10ml进行萃取，萃取两次，收集烷基糖苷层，减压蒸干，得到白首乌甾苷提取物。
43.实施例2
44.一种提取白首乌3种药理活性物质的方法，包括以下步骤：
45.s1、白首乌的预处理
46.取洗净后的白首乌块根100g，切块后放入粉碎机，研磨成粉后过80目筛，得到白首乌粉末。
47.s2、白首乌黄酮的提取
48.将1g白首乌粉末置于40ml无水乙醇中，混合均匀后，加入0.2ml浓度为1.0mmol/l的曲拉通x-100溶液，置于循环超声机中，在50℃下提取50min；提取结束后将提取液倒入离心杯中，在4000r/min下离心10min，收集上清液，得到白首乌黄酮提取液。
49.s3、白首乌多糖的提取
50.将s2离心后的沉淀按照料液比1g：10ml分散在0.1mmol/l烷基糖苷溶液中，然后置于循环超声机中，于50℃下超声提取50min，超声功率400w，提取结束后，将提取液倒入离心杯中，以4000r/min的转速离心10min，收集上清液；
51.s4、白首乌多糖的沉淀分离
52.将s3的上清液转入旋蒸瓶，旋转蒸发至原体积的1/3后，采用sevag法除去蛋白。再加入3倍体积的无水乙醇，置于5℃条件下过夜醇沉，然后将醇沉液于4000r/min离心10min，弃去上清液，将离心后的沉淀用70％的乙醇溶液洗涤三次，最后用去离子水将沉淀复溶，离心除去不溶物。将上清液上样于层析柱(φ26.0mm
×
300.0mm)，装柱体系1bv(130ml)，用蒸馏水进行洗脱，收集洗脱液；在50℃条件下将收集的洗脱液浓缩至30ml后，用去离子水透析48h，再于-80℃冷冻干燥，得到白首乌多糖。
53.s5、白首乌甾苷的提取
54.将s3的沉淀按照料液比20g：1ml与体积分数70％乙醇溶液混合于圆底烧瓶中，在50℃下加热提取2h，过滤，滤渣重复提取两次，合并两次提取液，在8000r/min下离心8min，收集上清液，减压浓缩至无醇味；
55.向浓缩液中加入浓度为0.15mmol/l烷基糖苷溶液8ml进行萃取，萃取两次，收集烷基糖苷层，减压蒸干，得到白首乌甾苷提取物。
56.实施例3
57.一种提取白首乌3种药理活性物质的方法，包括以下步骤：
58.s1、白首乌的预处理
59.取洗净后的白首乌块根100g，切块后放入粉碎机，研磨成粉后过80目筛，得到白首乌粉末。
60.s2、白首乌黄酮的提取
61.将1g白首乌粉末置于50ml无水乙醇中，混合均匀后，加入0.1ml浓度为1.5mmol/l的曲拉通x-100溶液，置于循环超声机中，在70℃下提取40min；提取结束后将提取液倒入离心杯中，在4000r/min下离心10min，收集上清液，得到白首乌黄酮提取液。
62.s3、白首乌多糖的提取
63.将s2离心后的沉淀按照料液比1g：5ml分散在0.25mmol/l烷基糖苷溶液中，然后置于循环超声机中，于70℃下超声提取40min，超声功率400w，提取结束后，将提取液倒入离心杯中，以4000r/min的转速离心10min，收集上清液；
64.s4、白首乌多糖的沉淀分离
65.将s3的上清液转入旋蒸瓶，旋转蒸发至原体积的1/4后，采用sevag法除去蛋白。再加入5倍体积的无水乙醇，置于1℃条件下过夜醇沉，然后将醇沉液于4000r/min离心10min，弃去上清液，将离心后的沉淀用90％的乙醇溶液洗涤三次，最后用去离子水将沉淀复溶，离心除去不溶物。将上清液上样于层析柱(φ26.0mm
×
300.0mm)，装柱体系1bv(130ml)，用蒸馏水进行洗脱，收集洗脱液；在50℃条件下将收集的洗脱液浓缩至30ml后，用去离子水透析32h，再于-80℃冷冻干燥，得到白首乌多糖。
66.s5、白首乌甾苷的提取
67.将s3的沉淀按照料液比24g：1ml与体积分数80％乙醇溶液混合于圆底烧瓶中，在70℃下加热提取2h，过滤，滤渣重复提取两次，合并两次提取液，在8000r/min下离心8min，
收集上清液，减压浓缩至无醇味；
68.向浓缩液中加入浓度为0.1mmol/l烷基糖苷溶液10ml进行萃取，萃取两次，收集烷基糖苷层，减压蒸干，得到白首乌甾苷提取物。
69.对比例1
70.一种白首乌总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
71.s1、白首乌的预处理
72.取洗净后的白首乌块根100g，切块后放入粉碎机，研磨成粉后过80目筛，得到白首乌粉末。
73.s2、白首乌黄酮的提取
74.将1g白首乌粉末置于30ml无水乙醇中，混合均匀后，加入0.15ml浓度为1.2mmol/l的曲拉通x-100溶液，置于循环超声机中，在60℃下提取30min；提取结束后将提取液倒入离心杯中，在4000r/min下离心10min，收集上清液，得到白首乌黄酮提取液。
75.对比例2
76.一种白首乌多糖的提取方法，包括以下步骤：
77.s1、白首乌的预处理
78.取洗净后的白首乌块根100g，切块后放入粉碎机，研磨成粉后过80目筛，得到白首乌粉末。
79.s2、白首乌多糖的提取
80.将1g白首乌粉末按照料液比1g：8ml分散在0.125mmol/l烷基糖苷溶液中，然后置于循环超声机中，于60℃下超声提取30min，超声功率400w，提取结束后，将提取液倒入离心杯中，以4000r/min的转速离心10min，收集上清液；
81.s2、白首乌多糖的沉淀分离
82.将s2的上清液转入旋蒸瓶，旋转蒸发至原体积的1/4后，采用sevag法除去蛋白。再加入4倍体积的无水乙醇，置于4℃条件下过夜醇沉，然后将醇沉液于4000r/min离心10min，弃去上清液，将离心后的沉淀用80％的乙醇溶液洗涤三次，最后用去离子水将沉淀复溶，离心除去不溶物。将上清液上样于层析柱(φ26.0mm
×
300.0mm)，装柱体系1bv(130ml)，用蒸馏水进行洗脱，收集洗脱液；在50℃条件下将收集的洗脱液浓缩至30ml后，用去离子水透析48h，再于-80℃冷冻干燥，得到白首乌多糖。
83.对比例3
84.一种白首乌甾苷的提取方法，包括以下步骤：
85.s1、白首乌的预处理
86.取洗净后的白首乌块根100g，切块后放入粉碎机，研磨成粉后过80目筛，得到白首乌粉末。
87.s2、白首乌甾苷的提取
88.将1g白首乌粉末按照料液比22g：1ml与体积分数90％乙醇溶液混合于圆底烧瓶中，在55℃下加热提取2h，过滤，滤渣重复提取一次，合并两次提取液，在8000r/min下离心8min，收集上清液，减压浓缩至无醇味；
89.向浓缩液中加入浓度为0.2mmol/l烷基糖苷溶液10ml进行萃取，萃取两次，收集烷基糖苷层，减压蒸干，得到白首乌甾苷提取物。
90.实施例1～3的方法提取三种药理活性物质的提取效果基本相同，因此，下面仅对实施例1的方法提取三种药理活性物质的提取效果进行研究。
91.一、提取工艺对白首乌三种药理活性物质得率的影响
92.对实施例1及比较例1～3提取白首乌三种药理活性物质的得率进行对比，结果见表1。
93.表1不同工艺对白首乌黄酮、多糖、甾苷得率的影响
[0094] 实施例1对比例1对比例2对比例3黄酮5.22mg/g3.92mg/g
‑‑
多糖2.31％-0.62％-甾苷37.02mg/g
‑‑
24.77mg/g
[0095]
二、提取工艺对白首乌三种药理活性物质提取时间的影响
[0096]
对实施例1及比较例1～3提取白首乌三种药理活性物质的提取时间进行对比，结果见表2。
[0097]
表2不同工艺对白首乌黄酮、多糖、甾苷提取时间的影响
[0098][0099][0100]
根据表2可得，使用对比例1～3的方法分别提取黄酮、多糖、甾苷时，每次提取都需要对白首乌原料进行粉碎、研磨、过筛。与例1～3的方法相比，实施例1的方法减少在提取多糖和甾苷时的白首乌原料粉碎、研磨、过筛的步骤。此外，本工艺使用曲拉通x-100提取白首乌黄酮，使用烷基糖苷提取白首乌多糖和白首乌甾苷，产品生产周期和生产成本显著降低。
[0101]
三、提取工艺对白首乌三种药理活性物质产品纯度的影响
[0102]
对实施例1及比较例1～3提取白首乌三种药理活性物质的产品纯度进行对比，结果见表3。
[0103]
表3不同工艺对白首乌黄酮、多糖、甾苷产品纯度的影响
[0104] 实施例1对比例1对比例2对比例3黄酮37.61％30.14％
‑‑
多糖86.70％-91.45％-甾苷98.40％
‑‑
74％
[0105]
四、提取工艺对白首乌黄酮生物活性的影响
[0106]
对实施例1及比较例1提取白首乌黄酮的生物活性进行对比，分别检测两种工艺提取的黄酮对抑制心肌细胞凋亡、抑制心肌细胞过氧化、降低缺血脑组织神经功能损伤、改善脑水肿、抑制血栓形成的影响。检测设备为酶标仪。
[0107]
4.1、抑制心肌细胞凋亡
[0108]
取样品(10mg/kg)处理心肌缺血大鼠，取梗死区边缘心肌组织，annexinv/pi双染，流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况。
[0109]
4.2、抑制心肌细胞过氧化
[0110]
取样品(10mg/kg)处理急性心肌缺血大鼠5天，试剂盒检测心肌细胞sod活性。
[0111]
4.3、降低缺血脑组织神经功能损伤
[0112]
取样品(10mg/kg)处理缺血脑组织损伤大鼠7天，采用longa法评价大鼠神经功能障碍。
[0113]
4.4、改善脑水肿
[0114]
取样品(10mg/kg)处理缺血脑组织损伤大鼠7天，采用干湿重法测定大鼠脑组织含水量。
[0115]
4.5、抑制血栓形成
[0116]
取样品(10mg/kg)处理血栓闭塞性大鼠7天，采用elisa法测定pai-1含量。
[0117]
4.6、检测结果与分析
[0118]
表4不同工艺对白首乌黄酮生物活性的影响
[0119]
检测项目活性指标实施例1对比例1抑制心肌细胞凋亡凋亡率9.44％11.95％抑制心肌细胞过氧化sod活性26.25u/mg20.17u/mg降低缺血脑组织神经功能损伤损伤评分1.922.19改善脑水肿脑含水量78.84％79.66％抑制血栓形成pai-1含量1.52μm1.61μm
[0120]
五、提取工艺对白首乌多糖生物活性的影响
[0121]
对实施例1及比较例2提取白首乌多糖的生物活性进行对比，分别检测两种工艺提取的多糖对抑制心肌细胞凋亡、抑制心肌细胞过氧化、降低缺血脑组织神经功能损伤、改善脑水肿、抑制血栓形成的影响。检测设备为酶标仪。检测项目和活性指标与4.1～4.5相同，结果见表5。
[0122]
表5不同工艺对白首乌黄酮生物活性的影响
[0123]
检测项目活性指标实施例1对比例2抑制心肌细胞凋亡凋亡率8.95％9.47％抑制心肌细胞过氧化sod活性20.15u/mg19.35u/mg降低缺血脑组织神经功能损伤损伤评分2.032.08改善脑水肿脑含水量78.13％79.01％抑制血栓形成pai-1含量1.78μm1.88μm
[0124]
六、提取工艺对白首乌甾苷生物活性的影响
[0125]
对实施例1及比较例3提取白首乌甾苷的生物活性进行对比，分别检测两种工艺提取的甾苷对抑制心肌细胞凋亡、抑制心肌细胞过氧化、降低缺血脑组织神经功能损伤、改善脑水肿、抑制血栓形成的影响。检测设备为酶标仪。检测项目和活性指标与4.1～4.5相同，结果见表6。
[0126]
表6不同工艺对白首乌黄酮生物活性的影响
[0127]
检测项目活性指标实施例1对比例3抑制心肌细胞凋亡凋亡率8.31％9.03％抑制心肌细胞过氧化sod活性19.37u/mg18.04u/mg降低缺血脑组织神经功能损伤损伤评分1.952.09改善脑水肿脑含水量77.35％77.62％抑制血栓形成pai-1含量1.60μm1.71μm
[0128]
由表1～6可知，本发明实施例1的方法提取白首乌黄酮、多糖、甾苷的工艺流程代替分别提取白首乌黄酮、多糖、甾苷的三步工艺流程，有效减少工艺流程步骤，简化工艺流程，减少提取周期和提取成本。
[0129]
在白首乌黄酮提取工艺中以循环超声波技术替代传统的热回流法，可以有效缩短工艺周期，提高黄酮提取得率，降低提取成本。在白首乌多糖提取工艺中以烷基糖苷溶液替代水剂，无毒无刺激，可生物降解，能显著提高多糖得率。在白首乌多糖工艺中以循环超声波技术替代热回流法，可以有效缩短工艺周期，彻底除去白首乌精粉中的毒性物质，并保证白首乌多糖的活性。在白首乌甾苷提取工艺中将烷基糖苷与热回流法提取技术结合，可以有效缩短工艺周期，除去除甾苷以外的提取杂质，提高了提取甾苷的纯度，并保证白首乌甾苷的活性。
[0130]
七、不同黄酮的生物活性差异
[0131]
对实施例1提取白首乌黄酮的生物活性与现有产品进行对比，分别检测不同黄酮对抑制心肌细胞凋亡、抑制心肌细胞过氧化、降低缺血脑组织神经功能损伤、改善脑水肿、抑制血栓形成的影响。检测设备为酶标仪。检测项目和活性指标与4.1～4.5相同，结果见表7。
[0132]
表7不同黄酮生物活性差异
[0133][0134]
八、不同多糖的生物活性差异
[0135]
对实施例1提取白首乌多糖的生物活性与现有产品进行对比，分别检测不同多糖对抑制心肌细胞凋亡、抑制心肌细胞过氧化、降低缺血脑组织神经功能损伤、改善脑水肿、抑制血栓形成的影响。检测设备为酶标仪。检测项目和活性指标与4.1～4.5相同，结果见表8。
[0136]
表8不同多糖生物活性差异
[0137][0138]
九、不同甾苷的生物活性差异
[0139]
对实施例1提取白首乌甾苷的生物活性与现有产品进行对比，分别检测不同甾苷对抑制心肌细胞凋亡、抑制心肌细胞过氧化、降低缺血脑组织神经功能损伤、改善脑水肿、抑制血栓形成的影响。检测设备为酶标仪。检测项目和活性指标与4.1～4.5相同，结果见表9。
[0140]
表9不同甾苷生物活性差异
[0141]
[0142][0143]
十、提取顺序对白首乌三种药理活性物质得率的影响
[0144]
对不同提取顺序提取的白首乌三种药理活性物质得率进行对比，结果见表10。
[0145]
表10不同提取顺序对白首乌黄酮、多糖、甾苷得率的影响
[0146][0147]
其中，a(实施例1)：黄酮、多糖、甾苷，b：黄酮、甾苷、多糖，c：多糖、甾苷、黄酮，d：多糖、黄酮、甾苷，e：甾苷、黄酮、多糖，f：甾苷、多糖、黄酮。
[0148]
由表1～10可知，本发明实施例1按照白首乌黄酮、白首乌多糖、白首乌甾苷的顺序进行提取，在降低提取周期的同时，保证了白首乌黄酮、白首乌多糖、白首乌甾苷的得率、活性、纯度。本发明实施例1建立了一套将三种物质提取工艺结合起来的连续提取方法，有效地减少了白首乌活性物质提取工艺流程的步骤，产品生产周期下降43.75％，降低生产成本。此外，产品活性高、纯度高、工艺得率高。而且解决了连续提取过程中存在物质干扰(如无机盐、蛋白质、糖类等)的问题，在保证产品的得率的同时有效地保证了产品的纯度。
[0149]
十一、不同提取工艺对白首乌利用率的影响
[0150]
采用对比例1～3的方法分步提取白首乌三种药理活性物质，与实施例1的方法进行对比，在保证产品得率、纯度的情况下，对不同提取工艺下白首乌利用率的影响，结果见表11。
[0151]
表11不同提取工艺对白首乌原料利用率和产品得率、纯度的影响
[0152][0153]
与对比例1～3的分步提取相比，实施例1的方法在保证产品得率、纯度的情况下，提高了白首乌的利用率，减少原料浪费。
[0154]
根据表11可知，本发明实施例1的提取白首乌三种物质的方法，与分步提取三种物质的方法(对比例1～3)相比，白首乌原料的利用率从分步的0.522％、2.310％、3.702％提升至6.534％，减少原料浪费，降低生产成本。
[0155]
本发明实施例1在进行提取过程时，只有按照黄酮、多糖、甾苷的顺序提取，才能使三种产品的得率和纯度得到保证。本发明实施例1的流程为白首乌结合乙醇和曲拉通x-100，经过循环超声提取，离心，得到白首乌黄酮的提取液；在离心后的沉淀中加入烷基糖苷溶液，经过循环超声提取，收集上清液，对上清液进行醇沉、复溶，得到白首乌多糖；用乙醇处理上一步的沉淀，加热提取，离心，得到上清液，加入烷基糖苷溶液萃取，得到白首乌甾苷的提取物。若改变提取顺序，产品的得率和纯度将受到影响。例如，若将多糖和甾苷的提取顺序调换，那么，在进行甾苷提取时，得到的产品中将混有多糖，导致甾苷和多糖产品的纯度和得率下降。
[0156]
十二、结果分析
[0157]
1、本发明实施例1提供一种提取白首乌总黄酮、多糖和甾苷的方法，与现有工艺分别提取白首乌黄酮、白首乌多糖、白首乌甾苷对比，周期缩短，原料利用率提高、成本降低，同时保持了产品活性高、得率高、纯度高的特点。本发明实施例1的方法不仅降低了减少了提取步骤，降低了提取周期，还大大提高了白首乌原料的利用率，推动了一套完整的白首乌活性物质提取工艺流程体系的建立。
[0158]
2、本发明实施例1在提取黄酮时，将白首乌与乙醇混合后，加入曲拉通x-100，并利用循环超声法提取。本发明在在提取多糖时，将白首乌溶于烷基糖苷溶液中，利用循环超声萃取。本发明在提取甾苷时，将白首乌和乙醇混合，收集上清液，利用烷基糖苷溶液进行萃取。三步分别提取工艺流程各不相同，保证了分步提取得到产品不同，从而产品的得率和纯度不会受到其他步骤的干扰。
[0159]
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。