一种植物乳杆菌检测的引物探针组合、RPA检测试剂盒及其检测方法与流程

技术特征：
1.一种用于植物乳杆菌检测的引物探针组合，其特征在于，所述上、下游引物的核苷酸序列分别如seq id no.1、2所示，基因探针的核苷酸序列如seq id no.3所示的。2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，上、下引物应用于pcr反应中的终浓度为0.4μm，荧光探针应用于pcr反应中的终浓度为0.12μm。3.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述seq id no.3即荧光标记探针序列5’端起第34位碱基标记fam荧光基团，第35位为无碱基位点，第37位碱基标记bhq1猝灭基团。4.一种将权利要求1所述的引物探针组合用于植物乳杆菌rpa检测试剂盒的应用。5.一种采用权利要求1所述的引物探针组合的植物乳杆菌rpa检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物探针组合，还包括快速核酸释放剂、缓冲液体系a、缓冲液体系b和干粉反应管。6.根据权利要求5所述的植物乳杆菌rpa检测试剂盒，其特征在于，所述快速核酸释放剂包括质量浓度为1mg/ml～20mg/ml的溶菌酶、体积百分比为1％～5％的聚乙二醇、摩尔浓度为0.5mm～5mm的二硫苏糖醇和摩尔浓度为1mm～10mm的tris-hcl。7.根据权利要求5所述的植物乳杆菌rpa检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液体系a包括peg-6000和无核酸酶水，所述缓冲液体系b包括醋酸镁和无核酸酶水，所述干粉反应管包含单链dna结合蛋白、重组酶、链置换dna聚合酶、海藻糖、peg-6000和dntps。8.一种利用权利要求4-7任一项所述植物乳杆菌rpa检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：(1)将待测样本与快速核酸释放剂充分混合，核酸释放剂与样本的混合比例为3：3～20，混合物于25℃～95℃孵育1～10min，完成核酸释放；(2)向每个反应管中依次加入29.4μl缓冲液体系a、2μl上游引物、2μl下游引物、0.6μl荧光探针和8.5μl无核酸酶水；(3)向每个反应管中加入5μl样本与核酸释放剂的混合物；(4)向每个反应管中加入2.5μl缓冲液体系b，混匀并离心后，进行上机检测，反应程序为：42℃反应20min，每30s读取一次荧光值，判断植物乳杆菌是否检出。9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，步骤(4)中先判断扩增过程中是否产生指数扩增曲线，未产生指数扩增曲线则判定为阴性；产生指数扩增曲线，按照下表进行判读：。

技术总结
本发明提供了一种用于植物乳杆菌检测的引物探针组合，其特征在于，所述上、下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、2所示，基因探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的。本发明提供的引物探针针对植物乳杆菌基因组保守区域设计并经过筛选，具有良好的特异性和灵敏度，检出限低。检出限低。检出限低。


技术研发人员：赵可心 马雪征 刘莹莹 胡孔新
受保护的技术使用者：中国检验检疫科学研究院
技术研发日：2022.03.29
技术公布日：2022/7/15