一种以沉香叶为主要原料制备具有降尿酸作用的提取物的方法及其应用与流程

1.本发明涉及天然药物化学技术领域，具体涉及一种以沉香叶为主要原料制备具有降尿酸作用的提取物的方法及其应用。


背景技术：

2.尿酸高是人体内嘌呤因代谢发生紊乱，致使血液中尿酸增多而引起的一种代谢性疾病。高尿酸血症患者体内的尿酸盐结晶在关节滑膜、滑囊、软骨及其他组织中沉积，引起反复发作性炎性疾病，称之为痛风，表现为痛风性急性关节炎、慢性关节炎、痛风石和关节畸形、痛风性肾病等。
3.秋水仙碱是治疗痛风性关节炎的急性发作的常用药物之一；但是秋水仙碱具有一定的毒副作用，不能长期服用。因此，开发急需开发一种毒副作用小的降尿酸产品。
4.据现有技术报道，许多中药以及天然植物中含有降尿酸的有效成分，是本领域技术人员开发毒副作用小的降尿酸产品的研究方向之一。现有技术有报道采用青木瓜和铁观音泡茶可以降尿酸；但是，进一步研究发现，青木瓜铁观音茶虽然无毒副作用，但是其降尿酸作用并不强，只能作为辅助降尿酸使用。因此，以青木瓜和铁观音为原料，如能从中提取出具有优异降尿酸作用的提取物，对于制备毒副作用小的降尿酸产品具有重要的意义。


技术实现要素：

5.为了克服现有技术中存在的至少之一的技术问题，本发明首先提供了一种具有降尿酸作用的提取物。研究表明，以青木瓜、铁观音茶叶和沉香叶为原料，采用本发明所述的方法制备得到的提取物具有优异的降尿酸作用。
6.本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：
7.本发明首先提供了一种以沉香叶为主要原料制备具有降尿酸作用的提取物的方法，其包含如下步骤：
8.(1)取天然植物原料，用有机溶剂提取，得提取液；
9.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物，即所述的具有降尿酸作用的提取物；
10.步骤(1)中所述的天然植物原料由铁观音茶叶、青木瓜以及沉香叶组成。
11.优选地，铁观音茶叶、青木瓜以及沉香叶的重量比为1:5～10:1～3。
12.最优选地，铁观音茶叶、青木瓜以及沉香叶的重量比为1:8:2。
13.发明人在研究中惊奇的发现，将沉香叶与铁观音茶叶和青木瓜作为原料提取得到的有机溶剂提取物，其降尿酸作用要远远强于仅仅采用铁观音茶叶和青木瓜作为原料提取得到的有机溶剂提取物，同时也远远强于单独以沉香叶为原料提取得到的有机溶剂提取物。
14.最优选地，步骤(1)中所述的有机溶剂为正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂，其中，正丁醇和乙酸乙酯的体积比为5～8:1；最优选地，正丁醇和乙酸乙酯的体积比为6:1。
15.本发明中有机溶剂的具体选择对于提取得到的天然植物有机溶剂提取物是否具有优异的降尿酸作用起着决定性作用。发明人在大量的研究中惊奇的发现，当采用正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂对铁观音茶叶、青木瓜以及沉香叶进行提取，得到的有机溶剂提取物，其降尿酸作用要远远强于采用常规的乙醇、甲醇、水提取得到的提取物。
16.发明人进一步研究表明，必须采用正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂对铁观音茶叶、青木瓜以及沉香叶进行提取，才能得到具有优异降尿酸作用的有机溶剂提取物；其降尿酸作用同样也远远强于单独采用正丁醇或乙酸乙酯提取得到的提取物。这说明：必须采用正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂才能从铁观音茶叶、青木瓜以及沉香叶中提取出大量的具有降尿酸作用的有效成分；而采用其它溶剂并不能大幅地从铁观音茶叶、青木瓜以及沉香叶中提取出大量的具有降尿酸作用的有效成分。
17.优选地，步骤(1)中天然植物原料和有机溶剂的用量比为1g:15～25ml。
18.最优选地，步骤(1)中天然植物原料和有机溶剂的用量比为1g:20ml。
19.步骤(1)中所述的提取，是指在70～75℃下提取2～4h。
20.优选地，所述的具有降尿酸作用的提取物的制备方法，还包括进一步将有机溶剂提取物通过制备型hplc富集有效成分步骤；
21.其中制备型hplc的具体方法为：色谱柱采用制备型c18色谱柱；检测波长为270～300nm；流速为10ml/min；以甲醇为流动相a，水为流动相b，采用梯度洗脱法进行洗脱，收集11.5～13.8min洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后即得所述的具有降尿酸作用的提取物。
22.优选地，梯度洗脱法的具体梯度洗脱条件为：0min-10min，流动相a的体积百分比变化为0％-17％；10min-15min，流动相a的体积百分比变化为17％-24％；15min-17min，流动相a的体积百分比变化为24％-100％，15min-20min，流动相a的体积百分比为100％。
23.发明人进一步研究表明，采用制备型hplc可以进一步从制备得到的天然植物有机溶剂提取物中富集到更多的具有降尿酸作用的有效成分；使得制备得到的提取其降尿酸作用得到进一步大幅度提高。
24.然而，要想进一步提高采用正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂对铁观音茶叶和青木瓜以及沉香叶进行提取的到的有机溶剂提取物的降尿酸作用，并非易事；上述具体梯度洗脱条件起着决定性作用；梯度洗脱条件不同，制备得到的提取物，其降尿酸作用差别是巨大的，甚至制备不到具有降尿酸作用的提取物。发明人在大量研究过程中惊奇的发现：采用本发明上述梯度洗脱条件，收集11.5～13.8min洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后即得所述的提取物，其具有十分优异的降尿酸作用；其降尿酸作用要大幅强于采用正丁醇和乙酸乙酯提取的到的有机溶剂提取物。然而，收集其它时间的洗脱液，或者采用其它梯度洗脱条件制备得到的提取物，其降尿酸作用远远小于本发明；并不具有优异的降尿酸作用。
25.本发明还提供了一种由上述制备方法制备得到的具有降尿酸作用的提取物。
26.本发明还提供了一种上述具有降尿酸作用的提取物在制备降尿酸药物、食品或保健品中的应用。
27.本发明还提供了一种上述具有降尿酸作用的提取物在制备用于治疗痛风的药物、食品或保健品中的应用。
28.有益效果：本发明提供了一种全新的具有降尿酸作用的提取物的制备方法，研究表明，由该方法制备得到的提取物具有优异的降尿酸作用。因此，可以将该提取物作为有效
成分用于制备具有降尿酸以及治疗痛风作用的药物。
具体实施方式
29.以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
30.实施例1具有降尿酸作用的提取物的制备
31.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在70℃下进行回流提取3h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:20ml；
32.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物，即所述的具有降尿酸作用的提取物；
33.步骤(1)中所述的天然植物原料由重量比为1:8:2的铁观音茶叶、干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶组成；步骤(1)中所述的有机溶剂由体积比为6:1的正丁醇和乙酸乙酯组成。
34.实施例2具有降尿酸作用的提取物的制备
35.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在70℃下进行回流提取3h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:20ml；所述的天然植物原料由重量比为1:8:2的铁观音茶叶、干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶组成；所述的有机溶剂由体积比为6:1的正丁醇和乙酸乙酯组成；
36.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物；
37.(3)将有机溶剂提取物进一步通过制备型hplc富集有效成分；其中，制备型hplc的具体方法为：色谱柱采用制备型c18色谱柱；检测波长为280nm；流速为10ml/min；以甲醇为流动相a，水为流动相b，采用梯度洗脱法进行洗脱，收集11.5～13.8min洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后即得所述的具有降尿酸作用的提取物；
38.其中，梯度洗脱法的具体梯度洗脱条件为：0min-10min，流动相a的体积百分比变化为0％-17％；10min-15min，流动相a的体积百分比变化为17％-24％；15min-17min，流动相a的体积百分比变化为24％-100％，15min-20min，流动相a的体积百分比为100％。
39.实施例3具有降尿酸作用的提取物的制备
40.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在75℃下进行回流提取2h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:15ml；所述的天然植物原料由重量比为1:5:1的铁观音茶叶、干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶组成；所述的有机溶剂由体积比为5:1的正丁醇和乙酸乙酯组成；
41.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物；
42.(3)将有机溶剂提取物进一步通过制备型hplc富集有效成分；其中，制备型hplc的具体方法为：色谱柱采用制备型c18色谱柱；检测波长为280nm；流速为10ml/min；以甲醇为流动相a，水为流动相b，采用梯度洗脱法进行洗脱，收集11.5～13.8min洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后即得所述的具有降尿酸作用的提取物；
43.其中，梯度洗脱法的具体梯度洗脱条件为：0min-10min，流动相a的体积百分比变化为0％-17％；10min-15min，流动相a的体积百分比变化为17％-24％；15min-17min，流动相a的体积百分比变化为24％-100％，15min-20min，流动相a的体积百分比为100％。
44.实施例4具有降尿酸作用的提取物的制备
45.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在75℃下进行回流提取2h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:25ml；所述的天然植物原料由重量比为1:10:3的铁观音茶叶、干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶组成；所述的有机溶剂由体积比为8:1的正丁醇和乙酸乙酯组成；
46.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物；
47.(3)将有机溶剂提取物进一步通过制备型hplc富集有效成分；其中，制备型hplc的具体方法为：色谱柱采用制备型c18色谱柱；检测波长为280nm；流速为10ml/min；以甲醇为流动相a，水为流动相b，采用梯度洗脱法进行洗脱，收集11.5～13.8min洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后即得所述的具有降尿酸作用的提取物；
48.其中，梯度洗脱法的具体梯度洗脱条件为：0min-10min，流动相a的体积百分比变化为0％-17％；10min-15min，流动相a的体积百分比变化为17％-24％；15min-17min，流动相a的体积百分比变化为24％-100％，15min-20min，流动相a的体积百分比为100％。
49.对比例1具有降尿酸作用的提取物的制备
50.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在70℃下进行回流提取3h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:20ml；
51.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物，即所述的具有降尿酸作用的提取物；
52.步骤(1)中所述的天然植物原料由重量比为1:8:2的铁观音茶叶、干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶组成；步骤(1)中所述的有机溶剂为体积分数为95％的乙醇水溶液。
53.对比例1与实施例1的区别在于，对比例2采用体积分数为95％的乙醇水溶液提取；而实施例1则是采用正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂进行提取。
54.对比例2具有降尿酸作用的提取物的制备
55.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在70℃下进行回流提取3h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:20ml；
56.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物，即所述的具有降尿酸作用的提取物；
57.步骤(1)中所述的天然植物原料由重量比为1:8:2的铁观音茶叶、干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶组成；步骤(1)中所述的有机溶剂为无水甲醇。
58.对比例2与实施例1的区别在于，对比例2采用无水甲醇提取；而实施例1则是采用正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂进行提取。
59.对比例3具有降尿酸作用的提取物的制备
60.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在70℃下进行回流提取3h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:20ml；
61.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物，即所述的具有降尿酸作用的提取物；
62.步骤(1)中所述的天然植物原料由重量比为1:8:2的铁观音茶叶、干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶组成；步骤(1)中所述的有机溶剂为正丁醇。
63.对比例3与实施例1的区别在于，对比例3采用正丁醇提取；而实施例1则是采用正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂进行提取。
64.对比例4具有降尿酸作用的提取物的制备
65.(3)取天然植物原料，用有机溶剂在70℃下进行回流提取3h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:20ml；
66.(3)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物，即所述的具有降尿酸作用的提取物；
67.步骤(1)中所述的天然植物原料由重量比为1:8:2的铁观音茶叶、干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶组成；步骤(1)中所述的有机溶剂为乙酸乙酯。
68.对比例4与实施例1的区别在于，对比例4采用乙酸乙酯提取；而实施例1则是采用正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂进行提取。
69.对比例5具有降尿酸作用的提取物的制备
70.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在70℃下进行回流提取3h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:20ml；所述的天然植物原料由重量比为1:8:2的铁观音茶叶、干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶组成；所述的有机溶剂由体积比为6:1的正丁醇和乙酸乙酯组成；
71.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物；
72.(3)将有机溶剂提取物进一步通过制备型hplc富集有效成分；其中，制备型hplc的具体方法为：色谱柱采用制备型c18色谱柱；检测波长为280nm；流速为10ml/min；以甲醇为流动相a，水为流动相b，进行洗脱，收集11.5～13.8min洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后即得所述的具有降尿酸作用的提取物；
73.其中，具体洗脱条件为：0min-20min，流动相a的体积百分比为20％。
74.对比例5与实施例2的区别在于，对比例5采用的是等浓度的甲醇进行洗脱；而实施例2则是采用梯度洗脱。
75.对比例6具有降尿酸作用的提取物的制备
76.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在70℃下进行回流提取3h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:20ml；所述的天然植物原料由重量比为1:8:2的铁观音茶叶、干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶组成；所述的有机溶剂由体积比为6:1的正丁醇和乙酸乙酯组成；
77.(2)将提取液浓缩干燥后得机溶剂提取物；
78.(3)将有机溶剂提取物进一步通过制备型hplc富集有效成分；其中，制备型hplc的具体方法为：色谱柱采用制备型c18色谱柱；检测波长为280nm；流速为10ml/min；以甲醇为流动相a，水为流动相b，采用梯度洗脱法进行洗脱，收集11.5～13.8min洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后即得所述的具有降尿酸作用的提取物；
79.其中，梯度洗脱法的具体梯度洗脱条件为：0min-10min，流动相a的体积百分比变化为0％-10％；10min-15min，流动相a的体积百分比变化为10％-25％；15min-17min，流动相a的体积百分比变化为25％-100％，15min-20min，流动相a的体积百分比为100％。
80.对比例6与实施例2的区别在于，对比例6采用的梯度洗脱条件与实施例2不同。
81.对比例7具有降尿酸作用的提取物的制备
82.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在70℃下进行回流提取3h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:20ml；所述的天然植物原料由重量比为1:8:2的铁观音茶叶、干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶组成；所述的有机溶剂由体积比为6:1的正丁醇和乙酸乙酯组成；
83.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物；
84.(3)将有机溶剂提取物进一步通过制备型hplc富集有效成分；其中，制备型hplc的
具体方法为：色谱柱采用制备型c18色谱柱；检测波长为280nm；流速为10ml/min；以甲醇为流动相a，水为流动相b，采用梯度洗脱法进行洗脱，收集13～15min洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后即得所述的具有降尿酸作用的提取物；
85.其中，梯度洗脱法的具体梯度洗脱条件为：0min-10min，流动相a的体积百分比变化为0％-17％；10min-15min，流动相a的体积百分比变化为17％-24％；15min-17min，流动相a的体积百分比变化为24％-100％，15min-20min，流动相a的体积百分比为100％。
86.对比例7与实施例2的区别在于，梯度洗脱条件相同，但是收集的是不同时间洗脱下来的洗脱液。
87.对比例8具有降尿酸作用的提取物的制备
88.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在70℃下进行回流提取3h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:20ml；
89.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物，即所述的具有降尿酸作用的提取物；
90.步骤(1)中所述的天然植物原料由重量比为1:8的铁观音茶叶和干燥的青木瓜组成；步骤(1)中所述的有机溶剂由体积比为6:1的正丁醇和乙酸乙酯组成。
91.对比例8与实施例1的区别在于，对比例8仅仅以铁观音茶叶和干燥的青木瓜为原料制备有机溶剂提取物；而实施例1则是以铁观音茶叶和干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶为原料制备有机溶剂提取物。
92.对比例9具有降尿酸作用的提取物的制备
93.(1)取天然植物原料，用有机溶剂在70℃下进行回流提取3h，得提取液；其中，天然植物原料与用有机溶剂的用量比为1g:20ml；
94.(2)将提取液浓缩干燥后得有机溶剂提取物，即所述的具有降尿酸作用的提取物；
95.步骤(1)中所述的天然植物原料为干燥的沉香叶；步骤(1)中所述的有机溶剂由体积比为6:1的正丁醇和乙酸乙酯组成。
96.对比例9与实施例1的区别在于，对比例9仅仅以干燥的沉香叶为原料制备有机溶剂提取物。而实施例1则是以铁观音茶叶和干燥的青木瓜以及干燥的沉香叶为原料制备有机溶剂提取物。
97.实验例1
98.取体重为20
±
2g的雄性昆明种小白鼠，用氧嗪酸钾混悬液进行连续灌胃7天进行造模；选取血清中尿酸含量在145～150μmol/l之间的小鼠作为高尿酸模型小鼠作为实验对象。取上述雄性高尿酸模型小鼠140只，随机分为14组，其中12组为实验组，1组为模型对照组，每组10只；将实施例1-4以及对比例1-9制备得到的具有降尿酸作用的提取物分别加水制成混悬液；然后按100mg/kg
·
d的量对分别对1-12组实验组小鼠进行灌胃给药；模型对照组灌胃等量的蒸馏水。连续给药7天；第7天给药结束后1h，取小鼠血液，测定其血清中的尿酸含量；测试结果见表1。
99.表1.本发明提取物降尿酸实验结果
[0100][0101]
从表1数据中可以看出，实施例1制备得到的有机溶剂提取物与对比例8和9相比，小鼠体内的尿酸得到的明显的降低；这说明：在铁观音茶叶和青木瓜的原料中，加入沉香叶共同作为原料，提取物得到的有机溶剂提取物，其降尿酸作用要显著强于以铁观音茶叶和青木瓜为原料制备得到的有机溶剂提取物或单独以沉香叶为原料制备得到的有机溶剂提取物。
[0102]
从表1数据中可以看出，实施例2～4制备得到的具有降尿酸作用的提取物其与实施例1相比，得到了进一步大幅降低，同样也远远低于度比例8和9；具有十分优异的降尿酸作用；这说明：采用本发明所述的制备型hplc的梯度洗脱条件可以进一步从制备得到的有机溶剂提取物中富集到具有降尿酸作用的有效成分；使得制备得到的提取其降尿酸作用得到进一步大幅度提高。
[0103]
从表1数据中可以看出，实施例1制备得到的有机溶剂提取物的降尿酸作用要远远强于对比例1和2；这说明：有机溶剂的具体选择对于提取得到的有机溶剂提取物是否具有优异的降尿酸作用起着决定性作用；以铁观音茶叶、青木瓜以及沉香叶为原料，采用常规的有机溶剂对其进行提取得到的有机溶剂提取物并不具有优异的降尿酸作用；必须采用由正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂进行提取得到的有机溶剂提取物才具备优异的降尿酸作用。
[0104]
从表1数据中可以看出，实施例1制备得到的有机溶剂提取物降尿酸作用要强于对比例3和4；这说明：以铁观音茶叶、青木瓜以及沉香叶为原料，单独采用正丁醇或乙酸乙酯
提取得到的有机溶剂提取物的降尿酸作用要明显小于采用由正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂进行提取得到的有机溶剂提取物；必须采用由正丁醇和乙酸乙酯组成的混合溶剂进行提取得到的有机溶剂提取物才具备优异的降尿酸作用。
[0105]
从表1数据中可以看出，实施例2制备得到的具有降尿酸作用的提取物降尿酸作用要远远大于对比例5～7；这说明：要想进一步提有机溶剂提取物的降尿酸作用，制备型hplc的具体梯度洗脱条件起着决定性作用；而只有采用本发明上述梯度洗脱条件，收集11.5～13.8min洗脱下来的洗脱液得到的提取物才具有十分优异的降尿酸作用；其降尿酸作用才能大幅强于实施例1制备得到的有机溶剂提取物。然而，收集其它时间的洗脱液，或者采用其它梯度洗脱条件制备得到的提取物，其降尿酸作用远远小于本发明，且降尿酸作用还弱于实施例1制备得到的有机溶剂提取物，其并不具备优异的降尿酸作用。