包含尿液NAD+代谢物的急性肾损伤标志物

包含尿液nad 代谢物的急性肾损伤标志物
技术领域
1.本发明属于生物检测领域，具体涉及尿液nad 代谢物作为急性肾损伤标志物的应用、试剂盒及其使用方法。


背景技术：

2.糖尿病是以高血糖为特征的代谢疾病群，其症状可分为两大类：一大类是与代谢紊乱有关的表现，尤其是与高血糖有关的“三多一少”，多见于1型糖尿病，2型糖尿病常不十分明显或仅有部分表现，另一大类是各种急性、慢性并发症的表现。据法国媒体2016年4月6日报道，世界卫生组织报告显示，和1980年相比，全球患糖尿病的人数已经增长了4倍。2017年6月28日报道称，我国是全球糖尿病最严重的国家，大约11％的成年人都患有糖尿病。
3.糖尿病是一种衰老相关的代谢性疾病，也是aki发生的危险因素之一。已有研究发现糖尿病模型中肝脏、白色脂肪组织和血管等组织器官nad 减少。虽然目前暂无糖尿病肾脏nad 降低的直接证据，但是以nad 为底物的sirt1表达下降通过上调claudin导致蛋白尿，参与dkd的发生发展。糖尿病导致aki易感是否通过影响nad 含量尚不明确。
4.有效预防aki(急性肾损伤)的发生，不仅需要明确高危易感因素，还需要高效的生物标志物预测aki易感性。目前scr是通用的aki生物标志物，作为功能性标志物而非损伤性标志物，scr具有迟滞性和较低的灵敏度及特异度，从而导致aki诊断的遗漏和延迟。
5.近年来大量研究致力于探寻新型的aki生物标志物，包括促炎症介质il-18、ngal(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)，结构性上调蛋白kim-1(kidney injury molecule-1)、l-fabp(liver-type fatty acid-binding protein)，细胞周期调节因子timp-2(tissue inhibitor of metalloproteinases-2)、igfbp7(igf-binding protein-7)等，大多数标志物难以达到理想的临床诊断效果，研究发现timp-2和igfbp-7联合比其他标志物具有更高的aki早期诊断效度，但仍未得到广泛应用，且目前的aki生物标志物均无在损伤诱因出现之前预测aki发生的能力。


技术实现要素：

6.本发明要解决的技术问题是提供一种新的急性肾损伤的标志物。
7.本发明要解决的另一个技术问题是提供上述急性肾损伤的标志物的应用。
8.本发明提供了一种检测急性肾损伤的标志物，所述的标志物是qa/3-oh aa。
9.所述的qa/3-oh aa化疗前尿液中喹啉酸与3-羟基邻氨基苯甲酸的比值。
10.本研究为前瞻性队列研究，发现队列选用华山医院血液科拟用大剂量mtx化疗的患者，验证队列选用普外科拟行原位肝移植术的患者。发现队列收集患者mtx治疗开始前72小时内和开始后0-12小时的尿液，用液相色谱-质谱联用(liquid chromatograph mass spectrometer,lc-ms)方法检测尿液nad 代谢物含量，mtx化疗后72小时内是否发生aki为随访终点，比较糖尿病组和非糖尿病组以及aki组和非aki组尿液nad 代谢物浓度差异，筛选差异显著的尿液代谢物分析预测aki的效度。验证队列收集患者肝移植术前72小时内和
术后0-12小时的尿液，以术后5天内是否发生aki为随访终点，根据发现队列的结果验证尿液nad 代谢物预测aki的效度。aki定义为化疗后/术后血清肌酐≥1.5倍基线值或较基线值升高26.5μmol/l或接受肾脏替代治疗。
11.结果表明，发现队列入组大剂量mtx化疗疗程191例次，糖尿病38例次(19.90％)，化疗后72小时内发生aki35例次(18.32％)。收集化疗前72小时内尿液191例，化疗后12小时内尿液91例。和非糖尿病组相比，糖尿病组化疗前尿液犬尿氨酸(kynurenine,kyn)和3-羟基邻氨基苯甲酸(3-hydroxyanthranilic acid,3-oh aa)浓度较高，喹啉酸(quinolinic acid,qa)浓度较低，其余代谢物无明显差异；化疗后3-oh aa浓度较高，其余代谢物无明显差异。和非aki组相比，aki组化疗前尿液3-oh aa浓度较高，喹啉酸qa浓度较低，此两种代谢物变化趋势与糖尿病组同，其余代谢物无明显差异；化疗后尿液各代谢物浓度均无明显差异。以化疗前尿液qa/3-oh aa为生物标志物预测aki发生风险，二分位低值组发生aki的风险为高值组的4.37倍，接受者操作特征(receiver operating characteristic，roc)曲线下面积(area under curve，auc)为0.748，临界值为4.62时约登指数最大，此时灵敏度和特异度分别为77.1％和69.9％。临床模型(年龄、性别、糖尿病)预测aki发病风险auc为0.672，化疗前尿液qa/3-oh aa和临床模型联合auc为0.772。
12.验证队列入组原位肝移植患者49人，术后发生aki16人(32.65％)。收集术前72小时内尿液49例，和未发生aki患者相比，aki患者尿液3-oh aa浓度较高，qa/3-oh aa显著较低。尿液qa/3-oh aa预测aki发生auc为0.729，临界值为6.04时约登指数最大，此时灵敏度和特异度分别为87.5％和66.7％。
13.本发明还提供一种检测qa/3-oh aa的方法,所述的方法包括以下步骤：
14.获取待检测的尿液样本；
15.检测所获取的尿液样本的喹啉酸的含量；
16.检测所获取的尿液样本的3-羟基邻氨基苯甲酸的含量；
17.计算qa/3-oh aa。
18.所述的尿液样本是治疗开始前72小时内和/或治疗开始后0-12小时的尿液，在进行检测前进行预处理。
19.所述的检测喹啉酸和3-羟基邻氨基苯甲酸的含量使用液相色谱-质谱联用完成。
20.所述的术前72小时尿液qa/3-oh aa预测aki发生auc为0.729，临界值为6.04时约登指数最大。
21.化疗前尿液qa/3-oh aa为生物标志物预测aki发生风险，二分位低值组发生aki的风险为高值组的4.37倍，接受者操作特征曲线下面积为0.748，临界值为4.62时约登指数最大。
22.本发明还提供了所述的标志物在制备诊断或者治疗急性肾损伤药物中的应用。
23.所述的标志物是诊断急性肾损伤药剂中的靶标或者阳性对照。
24.或者，所述的标志物是治疗急性肾损伤药物的筛选标准；使qa/3-oh aa升高的物质是治疗急性肾损伤药物的候选物。
25.本发明为急性肾损伤提供了较早的诊断标志物，该标志物的使用方面简单、明了，为急性肾损伤的诊断和治疗提供了新的途径。
附图说明
26.图1nad 合成途径示意图。
27.nad 合成途径主要包括三条，从头合成途径(de novo pathway)、补偿合成途径(salvage pathway)和preiss-handler pathway，分别以trp(tryptophan,色氨酸)、nam(nicotinamide,烟酰胺)和na(nicotinic acid,烟酸)为初始底物。
28.从头合成途径中间产物：n-formylkyn(n-formylkynurenine,n-甲酰犬尿氨酸)；kyn(kynurenine犬尿氨酸)；3-ohkyn,3-hydroxykynurenine,3-羟基犬尿氨酸)；3-oh aa,(3-hydroxyanthranilic acid,3-羟基邻氨基苯甲酸)；acms(aminocarboxymuconic semialdehyde,氨基羧基粘康酸半醛)；qa(quinolinic acid,喹啉酸)；namn(nicotinic acid mononucleotide,烟酸单核苷酸)。
29.从头合成途径参与酶：tdo(tryptophan 2,3-dioxygenase,色氨酸2,3-双加氧酶)；ido(indoleamine 2,3-dioxygenase,吲哚胺2,3-双加氧酶)；afmid(formamidase,犬尿氨酸甲酰胺酶)；kmo(kynurenine monooxygenase,犬尿氨酸单加氧酶)；
30.kynu(kynureninase,犬尿氨酸酶)；haao(3-hydroxyanthranilic acid dioxygenase,3-羟基邻氨基苯甲酸双加氧酶)；qprt(quinolinic acid phosphoribosyltransferase,喹啉酸磷酸核糖转移酶)；acmsd(acms decarboxylase,氨基羧基粘康酸半醛脱羧酶)。
31.补偿合成途径中间产物：nmn(nicotinamide mononucleotide,烟酰胺单核苷酸)。补偿合成途径参与酶：nampt(nicotinamide phosphoribosyltransferase,烟酰胺磷酸核糖转移酶)；nmnat(nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase,烟酰胺单核苷酸腺苷酰基转移酶)。
32.preiss-handler pathway参与酶：naprt(nicotinic acid phosphoribosyltransferase，烟酸磷酸核糖转移酶)。
33.图2发现队列aki组和非aki组基线尿液nad 代谢物比较。
34.图3发现队列基线尿液qa/3-oh aa二分位分组的aki发病风险。其中，注：模型1未加入校正因素，模型2加入校正因素包括年龄、性别和糖尿病。
35.图4发现队列基线尿液qa/3-oh aa和临床模型预测aki风险roc曲线。其中，基线尿液qa/3-oh aa roc曲线下面积(auc)为0.748，由年龄、性别和糖尿病组成的临床模型auc为0.672，基线尿液qa/3-oh aa联合临床模型auc为0.772。
36.图5验证队列aki组和非aki组基线尿液nad 代谢物比较。
37.图6验证队列基线尿液qa/3-oh aa和临床模型预测aki风险roc曲线。基线尿液qa/3-oh aa roc曲线下面积(auc)为0.729。
具体实施方式
38.以下结合实施例和附图，对本发明进行详细描述，但本发明的实施不仅限于此。本发明所用试剂盒原料均市售可得或可按文献方法制备。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常可按照常规条件如《分子克隆：实验室指南》(newyork:cold spring harbor laboratory press,1989)中所述的条件，或按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另行说明，否则百分比和份数按重量计算。
39.实验步骤：
40.1.研究对象
41.(1)mtx化疗患者
42.2019年1月到2020年1月在复旦大学附属华山医院血液科接受大剂量mtx化疗的原发性中枢神经系统淋巴瘤患者，所有患者均为病理诊断明确的原发性中枢神经系统淋巴瘤，mtx给药方式为静脉滴注，剂量＞500mg/m2。
43.1)入选标准：
44.a.年龄≥18岁，性别不限；
45.b.病理诊断明确为原发性中枢神经系统淋巴瘤，治疗方案为大剂量mtx静脉滴注。
46.2)排除标准：
47.a.治疗前确诊为ckd3-5期；
48.b.化疗前发生aki；
49.c.肿瘤浸润肾脏；
50.d.存在先天性肾脏畸形如肾脏缺如、异位肾、马蹄肾等；
51.e.接受过肾脏移植或肾脏切除术；
52.f.拒绝或不能配合本研究。
53.(2)原位肝移植患者
54.2019年8月到2020年1月在复旦大学附属华山医院普外科接受尸肝供肝原位肝移植患者。
55.1)入选标准：
56.a.年龄≥18岁，性别不限；
57.b.因终末期肝病、急性或亚急性肝衰竭等病因接受肝移植的患者，供肝来源于尸体，术式为原位肝移植。
58.2)排除标准：
59.a.术前确诊为ckd3-5期；
60.b.术前发生肝肾综合征或其他类型aki；
61.c.存在先天性肾脏畸形如肾脏缺如、异位肾、马蹄肾等；
62.d.接受过肾脏移植或肾脏切除术；
63.e.术式为肝肾联合移植；
64.f.重复肝移植；
65.g.拒绝或不能配合本研究。
66.2.临床数据采集
67.患者数据采集来源于复旦大学附属华山医院电子病历和检验系统。
68.(1)mtx化疗患者
69.收集患者的临床数据如下：
70.1)基本信息：年龄、性别、种族、bmi、bsa；
71.2)合并基础疾病史：糖尿病、高血压病、ckd；
72.3)化疗前影像学结果：肾脏超声或ct或pet-ct；
73.4)mtx治疗前72小时内实验室检验结果：hb、wbc、n％、plt、hba1c、ast、alt、tb、白
蛋白、scr、egfr、尿液ph值；
74.5)mtx治疗相关信息：剂量、水化碱化方案、亚叶酸钙使用；
75.6)mtx治疗后相关检验结果：0小时、24小时、48小时、72小时mtx血药浓度、尿液ph值和scr；
76.7)治疗过程中合并用药情况：ppi、甘露醇、acei/arb。
77.(2)原位肝移植患者
78.收集患者的临床数据如下：
79.1)基本信息：年龄、性别、种族、bmi；
80.2)肝移植病因：病毒性、酒精性、自身免疫性、肿瘤等；
81.3)合并基础疾病史：糖尿病、高血压病史、ckd；
82.4)术前72小时内检验结果：hb、wbc、n％、plt、hba1c、ast、alt、tb、白蛋白、血氨、pt、inr、血脂(胆固醇、甘油三酯)、nt-probnp、scr、egfr、meld评分；
83.5)手术相关信息：供肝来源类型、手术术式、术中失血量；
84.6)术后相关检验结果：术后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天scr。
85.注：egfr运用2009年ckd-epi公式，根据患者种族、性别、年龄和scr值进行计算；bmi计算公式：bmi＝体重(kg)/身高2(m2)；bsa计算公式：男性：bsa＝0.00607
×
身高(cm) 0.0127
×
体重(kg)-0.0698，女性：bsa＝0.00586
×
身高(cm) 0.0126
×
体重(kg)-0.0461；meld评分计算公式：meld评分＝3.78
×
ln(tb(mg/dl)) 11.2
×
ln(inr) 9.57
×
ln(scr(mg/dl)) 6.43
×
病因分数(胆汁性或酒精性为0，其他为1)。
86.3.aki诊断
87.mtx化疗患者随访至出院或mtx化疗结束后第7天，原位肝移植患者随访至出院术后第7天，根据kdigoscr诊断标准，aki48小时内scr升高≥26.5umol/l或7天内升高至≥1.5倍基线值或进行肾脏替代治疗。
88.4.标本收集及保存
89.(1)标本收集
90.1)mtx化疗患者
91.收集患者mtx化疗前72小时内尿液10ml和mtx化疗后0-12小时尿液10ml。
92.2)原位肝移植患者
93.收集患者术前72小时内尿液10ml和术后0-12小时尿液10ml。
94.(2)标本保存
95.1)离心尿液样本：3000转10分钟；
96.2)移液枪吸取尿上清1ml至洁净ep管内，ep管标注患者住院号、姓名和取样日期；
97.3)将处理好的样品放置-80℃冰箱保存。
98.5.nad 代谢物检测
99.(1)主要仪器
100.lc30超高效液相色谱系统
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
shimadzu，日本
101.三重四级杆5500质谱仪
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
ab sciex，美国。
103.(2)液相色谱条件
104.1)柱：acquity uplc hss t3(100
×
2.1mm,1.7μm,waters)，温度:：40℃
105.2)流动相：a：水和0.1％的甲酸b：乙腈和0.1％的甲酸
106.3)梯度：1-6.5-7.5-8-8.5分钟，1％b-15％b-30％b-70％b-70％b
107.4)流速：0.4ml/min
108.5)注射量：1μl
109.(3)质谱条件
110.1)扫描模式：mrm模式
111.2)离子化电压：5.5kv(正离子模式)；4.5kv(负离子模式)
112.3)温度：500℃
113.4)气帘气：35psi
114.5)喷雾气：40psi
115.6)辅助加热气：55psi
116.7)接口加热器：开启
117.8)碰撞气：中
118.(4)离子对参数
119.正离子：
[0120][0121][0122]
负离子：
[0123][0124]
(5)分析软件
[0125]
数据获取和处理使用软件analyst 1.6.3(ab sciex，美国)。
[0126]
6.统计方法
[0127]
采用spss25.0软件进行统计学分析。对计量资料采用单样本kolmogorov-smirnov检验检测其分布类型，符合正态分布的以平均数
±
标准差表示，不符合正态分布的以中位数(25百分位数-75百分位数)表示，计数资料用频数和百分比表示。呈正态分布的计量资料的组间比较采用独立样本t检验，非正态分布、方差不齐的计量资料及等级资料的组间比较采用非参数检验中的mann-whitneyu检验，计数资料组间比较采用列联表法，若列联表中每个单元格的最小期望均大于5，且样本含量大于40，采用pearson卡方检验；若列联表为四格表，样本含量大于40，所有单元格的期望频数均大于1，且只有少于1/5单元格的期望频数小于5大于1时，用连续性校正的卡方检验；若样本含量小于40，或有格子的期望频数小于1，或大于1小于5的期望频数较多，采用fisher精确概率法。用logistic回归模型计算or值。用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,roc)曲线下面积(area under the curve,auc)表示生物标志物和临床模型区分aki和非aki的能力。本部分研究中所有检验均为双侧检验，p＜0.05为差异有统计学意义。
[0128]
实施例1发现队列
[0129]
(1)基本信息
[0130]
本部分研究发现队列共统计大剂量mtx治疗疗程191例次，糖尿病38例次，所占比例为19.89％，发生aki35例次，发生率为18.32％，其中24小时内发生aki18例，24-48小时发生aki8例，48-72小时发生aki9例。所有疗程年龄中位数(四分位数)为59.0(51.00-65.00)岁，男性比例为66.49％。aki组基线egfr中位数(四分位数)为94.70(79.90-104.28)ml/min/1.73m2，和非aki组无明显差异(98.58(89.33-105.59)ml/min/1.73m2)。在aki组中，有糖尿病背景的疗程所占比例为42.85％，显著高于非aki组(14.74％)。aki组和非aki组mtx治疗剂量中位数分别为5.08g/m2和4.22g/m2，无明显差异，aki组mtx排泄延迟比例为34.28％，高于非aki组(14.74％)。aki组在治疗后0小时和24小时尿液ph值≥7.5的比例为37.14％，低于非aki组(58.33％)。(表1)
[0131]
表1发现队列疗程基本信息
[0132][0133][0134]
注：mtx排泄延迟：48小时血药浓度＞1μmol/l和72小时血药浓度＞0.1μmol/l。
[0135]
(2)aki组和非aki组尿液nad 代谢物差异
[0136]
191份基线尿液中有35份为aki，mtx化疗前基线尿液trp、n-formyl kyn、kyn的相对浓度在aki组和非aki组无明显差异，aki组基线尿液3-oh aa相对浓度较高而qa相对浓度较低。以基线尿液qa和3-oh aa浓度比值作为待分析生物标志物，aki组该比值显著低于非aki组。(图2)化疗后72小时内scr变化最大值与基线尿液qa和qa/3-oh aa呈负相关关系。(表2)
[0137]
表2基线尿液3-oh aa、qa及qa/3-oh aa和scr升高相关系数
[0138][0139][0140]
(3)基线尿液qa/3-oh aa预测aki的效度
[0141]
以基线尿液qa/3-oh aa中位数为界分为高低两组，模型1为未加入校正因素，低值组发生aki风险为高值组4.67倍，模型2加入校正因素包括年龄、性别、治疗前egfr和糖尿病，低值组发生aki风险为高值组3.15倍。(图3)
[0142]
基线尿液qa/3-oh aa预测aki发病风险的auc为0.748；由年龄、性别和糖尿病组成的临床模型预测aki发病风险的auc为0.672；基线尿液qa/3-oh aa和临床模型联合预测aki发病风险的auc为0.772。(图4)
[0143]
当基线尿液qa/3-oh aa值为4.62时，约登指数最大，此时灵敏度为77.1％，特异度为69.9％，阳性似然比为2.56，阴性似然比为0.33。
[0144]
实施例2验证队列
[0145]
(1)基本信息
[0146]
本部分研究验证队列共入组原位肝移植患者49人，年龄中位数(四分位数)为52.00(46.00-55.50)岁，81.63％为男性，其中发生aki16人，所占比例为32.65％。和非aki患者相比，aki患者术中失血量较大，其余指标无明显差异。aki患者中有6人诊断为糖尿病(37.50％)，非aki患者中有5人诊断为糖尿病(15.15％)，两者无统计学差异。(表3)
[0147]
表3验证队列患者基本信息
[0148]
[0149][0150]
(2)尿液nad 代谢物和aki发生风险关系
[0151]
共收集术前72小时内尿液49份，其中aki患者为16份。两组患者基线尿液tpr、n-formyl kyn、kyn、qa的相对浓度无明显差异。和非aki患者相比，aki患者基线尿液3-oh aa相对浓度较高，qa/3-oh aa较低。(图5)
[0152]
(3)基线尿液qa/3-oh aa预测aki的效度
[0153]
基线尿液qa/3-oh aa预测aki发病风险的auc为0.729。(图6)当临界值为6.04时，约登指数最大，此时灵敏度为87.5％，特异度为66.7％，阳性似然比为2.63，阴性似然比为0.19。
[0154]
nad 从头合成酶表达于人肾近端小管，不表达于肾脏其他结构。损伤诱因作用前基线尿液3-oh aa浓度较高和qa浓度较低与aki发生相关，基线尿液qa/3-oh aa可作为预测aki发生的生物标志物。糖尿病患者基线尿液3-oh aa浓度和qa浓度与aki患者趋势一致，与糖尿病的aki易感性相关。
[0155]
对比例
[0156]
近年来，蛋白组学和代谢组学逐步应用于包括aki在内的肾脏病诊断，蛋白质和代谢物的动态变化更实时反映肾脏疾病状态，其中血液和尿液组学分析可无创获取样本大大增加了临床应用的可行性。本发明中，与未发生aki患者相比，aki患者在aki发生之前尿液3-oh aa的相对浓度3-oh aa/cre(尿肌酐校正后)较高，qa/cre较低，提示可能由于haao表达或活性差异导致nad 合成差异从而使不同患者aki易感性不同，表现为该酶上下游产物在尿液中相对浓度差异，qa/3-oh aa作为预测aki发生风险的生物标志物roc曲线下面积为0.748，当与糖尿病临床模型联合应用时，auc升高至0.769。损伤诱因作用之后无论aki是否发生，尿液3-oh aa浓度均升高，qa浓度均降低，qa/3-oh aa比例降低，提示haao可能在损伤打击之后表达或活性降低。pariah等发现nad 从头合成途径的另一个酶qprt表达减少介导aki发生，aki小鼠肾脏qprt底物qa堆积，尿液qa浓度升高，并在心脏外科手术患者和icu患者队列中得到一致结果，aki患者在心脏外科术后和进入icu病房72小时内的尿液qa浓度显著高于非aki患者，此结果与本研究不同。首先，我们与pariah等选用的患者队列不同，本研究排除ckd3-5期患者，开发队列入组患者原发病均为原发性中枢神经系统淋巴瘤，191例疗程均接受大剂量mtx静脉滴注，aki病因主要为mtx及其代谢物的肾毒性作用，验证队列为因急性肝衰竭或终末期肝病接受肝移植术的患者，供肝方式和术式一致，aki主要与肝移植术相关，两个队列组内患者同质性较高；pariah等选用心脏外科手术作为开发队列，样本数较少，aki和非aki分别6例，验证队列的215例icu患者疾病背景和aki病因存在较高的异质性。其次，我们着重研究患者在接受医疗干预前的基线尿液nad 代谢物水平，作为预测mtx化疗后或肝移植术后是否发生aki的生物标志物，而在pariah等的研究中，心脏外科手术患者基线尿液qa浓度并无显著差异，术后aki患者qa浓度上升，icu队列的尿液收集于aki发生前，但不能明确尿液收集与aki诱因出现的时间点关系，与本研究用基线尿液代谢物水平预测aki发生风险不同。
[0157]
许多大型临床研究发现部分新型aki生物标志物比scr具有更及时和高效识别aki的能力。在损伤诱因出现后的36h，尿液il-18和cystatinc浓度能够预测icu患者48小时内aki发生风险，auc分别为0.75和0.73。心脏外科术后发生aki的患者尿液l-fabp和kim-1分别在术后6小时和2天到达高峰，术后尿液kim-1浓度＞1.18ng/mlaki发生风险达到4.7倍，当尿液kim-1浓度与包含aki相关危险因素的临床模型联合应用，auc可达0.73，而尿液l-fabp则无良好的区分效度。血液和尿液ngal浓度在心脏外科术相关aki过程中上升，血液ngal比尿液nagl具有更高的aki检测效度，血液nagl浓度和临床模型整合评估aki发生风险的auc为0.75。尿液timp-2和igfbp比其他生物标志物有更高的早期发现aki的效度，尤其对于较为严重的aki(kdigo定义的2期和3期aki)，auc分别为0,79和0.76，timp-2和igfbp联合应用可以提高效度，auc可达0.8。上述研究发现这些生物标志物均无在损伤之前预测aki发生的能力。与上述损伤相关性生物标志物不同，nad 代谢物为细胞正常生命活动的代谢产物，我们团队前期研究发现肾脏nad 降低导致老年小鼠aki易感性高，因此本部分基于基线
尿液nad 代谢物可反映肾脏内nad 含量从而区分aki易感性高低的假设，着重于损伤前基线尿液nad 代谢物的分析，发现尿液qa/3-oh aa低的患者aki易感性增高，具有在损伤诱因作用之前预测aki发生的效果。