可用作正电子发射断层扫描术的示踪剂化合物的cgrp拮抗剂
1.本发明涉及某些新型降钙素基因相关肽（cgrp）受体拮抗剂化合物，其可用作cgrp受体的正电子发射断层扫描（pet）成像，包括诊断成像的示踪剂化合物，涉及包含所述化合物的药物组合物，涉及使用某些新型cgrp受体拮抗剂化合物预防或治疗某些生理障碍（如偏头痛）的方法，以及涉及可用于合成所述化合物的中间体和方法。
2.cgrp受体pet示踪剂[11c]mk-4232已用于评价cgrp拮抗剂telcagepant的cgrp受体占位（参见s.g.g. vermeersch等人, the journal of headache and pain, 14(suppl 1), 第224页(2013)）。需要用于cgrp受体成像的新型pet示踪剂，特别是可渗透血脑屏障（bbb）并且较不易被p-糖蛋白（p-gp）外排泵主动转运出中枢神经系统（cns）的那些。
[0003]
i.m. bell等人, medicinal chemistry letters, 4, 第863-868页(2013)描述了mk-4232作为cgrp受体的最初pet示踪剂。美国专利nos. 9,637,495和9,708,297各自公开了可用于治疗或预防偏头痛的某些cgrp受体拮抗剂化合物。
[0004]
本发明提供作为cgrp受体的拮抗剂的某些新型化合物。此外，本发明提供某些新型放射性标记化合物，其可用作用于cgrp受体成像的pet示踪剂。
[0005]
相应地，本发明提供式i的化合物或其可药用盐：其中r1是氢、f或
18
f；和r2是氢、f或
18
f；条件是当r1是
18
f时，则r2不是
18
f。
[0006]
本发明进一步提供式ia的化合物或其可药用盐：其中r1是氢、f或
18
f；和r2是氢、f或
18
f；条件是当r1是
18
f时，则r2不是
18
f。
[0007]
本发明进一步提供式ib的放射性标记化合物或其可药用盐：
其中r1是氢或
18
f；和r2是氢或
18
f；条件是当r1是
18
f时，r2不是
18
f。
[0008]
本发明进一步提供一种使用式ib的放射性标记化合物或其可药用盐的方法其中r1是氢或
18
f；和r2是氢或
18
f；条件是当r1是
18
f时，则r2不是
18
f，所述方法包括将可检测量的式ib的放射性标记化合物引入哺乳动物，留出足够的时间以使所述化合物与哺乳动物脑中的cgrp受体结合，然后检测哺乳动物脑中的式ib的放射性标记化合物。
[0009]
本发明提供一种制备式ib的放射性标记化合物的方法：其中r1是氢或
18
f；和r2是氢或
18
f，条件是当r1是
18
f时，则r2不是
18
f，所述方法包括使式ii的化合物与[
18
f]氟化物源反应：其中x1是氢或合适的离去基团；或x2是氢或合适的离去基团。
[0010]
本发明进一步提供式iia的中间体：
其中x1是合适的离去基团。
[0011]
本发明进一步提供式iib的中间体：其中x2是合适的离去基团。
[0012]
此外，本发明提供式iic的中间体：其中x1和x2各自独立地是合适的离去基团。
[0013]
本发明还提供一种预防患者的偏头痛的方法，其包括给予需要其的患者有效量的式i或式ia的化合物或其可药用盐。
[0014]
本发明进一步提供一种治疗患者的偏头痛的方法，其包括给予需要其的患者有效量的式i或式ia的化合物或其可药用盐。本发明还提供一种拮抗患者的cgrp受体的方法，其包括给予需要其的患者有效量的式i或式ia的化合物或其可药用盐。
[0015]
此外，本发明提供用于疗法，特别用于治疗偏头痛的式i或式ia的化合物或其可药用盐。此外，本发明提供用于预防偏头痛的式i或式ia的化合物或其可药用盐。再此外，本发明提供式i或式ia的化合物或其可药用盐用于制备治疗偏头痛或预防偏头痛的药物的用途。
[0016]
本发明进一步提供一种药物组合物，其包含式i、ia或ib的化合物或其可药用盐，以及一种或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂。本发明进一步提供一种制备药物组合物的方法，其包括将式i、ia或ib的化合物或其可药用盐与一种或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂混合。
[0017]
本文所用的术语“治疗”包括抑制、减慢、阻止或逆转已有症状或障碍的进展或严重程度。
[0018]
本文所用的术语“预防”是指保护有发生特定疾病或障碍如偏头痛的倾向但当前未受该疾病或障碍的症状如偏头痛的症状困扰的患者。
[0019]
本文所用的术语“患者”是指哺乳动物，特别是人类。
[0020]
检测哺乳动物脑中的放射性标记化合物的优选方法是正电子发射断层扫描术。
[0021]
本文所用的术语“有效量”是指在单剂量或多剂量给药于患者时在被诊断或治疗的患者中提供所需作用的本发明的化合物或其可药用盐的量或剂量。
[0022]
本领域技术人员通过使用已知技术和通过观察在类似情况下获得的结果容易确定有效量。在确定患者的有效量时，主治诊断医师考虑许多因素，包括但不限于：患者的物种；其体型、年龄和一般健康状况；所涉的具体疾病或障碍；疾病或障碍的涉入程度或严重程度；个体患者的响应；给予的特定化合物；给药模式；给予的制剂的生物利用度特征；所选给药方案；合并用药；和其它相关情况。
[0023]
本发明的化合物在落在大约0.01至大约20 mg/kg体重范围内的每日剂量下有效。在一些情况下，低于上述范围的下限的剂量水平可能绰绰有余，而在另一些情况下，可能在可接受的副作用下使用更大剂量，因此上述剂量范围无意以任何方式限制本发明的范围。
[0024]
本发明的化合物配制为通过可生物利用该化合物的任何途径给药的药物组合物。这样的药物组合物及其制备方法是本领域中公知的（参见例如remington: the science and practice of pharmacy, l.v. allen编辑，第22版，pharmaceutical press, 2012）。
[0025]
其中吡咯烷环上的甲基和-ch2r1取代基为顺式构型的式i的化合物或其可药用盐是优选的。例如，本领域普通技术人员会认识到，如以下方案a中所示，在位置3的甲基取代基相对于在位置4的-ch2r1取代基为顺式构型：方案a。
[0026]
以下化合物及其可药用盐也是优选的：以下化合物及其可药用盐也是优选的：
其中r1是氢、f或
18
f；和r2是氢、f或
18
f；条件是当r1是
18
f时，则r2不是
18
f。
[0027]
以下化合物及其可药用盐特别优选：以下化合物及其可药用盐特别优选：以下化合物及其可药用盐特别优选：以下化合物及其可药用盐特别优选：
。
[0028]
以下制备中描述的某些中间体可含有一个或多个氮保护基。要理解的是，可如本领域技术人员所认识根据特定反应条件和要进行的特定转化改变保护基。保护和脱保护条件是技术人员公知的并描述在文献中（参见例如“greene’s protective groups in organic synthesis”, 第四版, peter g.m. wuts和theodora w. greene，john wiley and sons, inc. 2007）。
[0029]
本领域普通技术人员可在本发明的化合物的合成中的任何方便的点通过如选择性结晶技术或手性色谱法之类的方法分离或拆分独立的异构体、对映异构体和非对映异构体（参见例如j. jacques等人, "enantiomers, racemates, and resolutions", john wiley and sons, inc., 1981和e.l. eliel和s.h. wilen,
ꢀ“
stereochemistry of organic compounds”, wiley-interscience, 1994）。
[0030]
本发明的化合物的可药用盐可以例如通过本发明的化合物的适当游离碱与适当的可药用酸在合适溶剂如乙醚中在本领域中公知的标准条件下反应形成。另外，这样的盐的形成可在氮保护基脱保护的同时发生。这样的盐的形成是本领域众所周知和充分认识的。参见例如gould、p.l.,
ꢀ“
salt selection for basic drugs,
”ꢀ
international journal of pharmaceutics, 33: 201-217 (1986)；bastin, r.j.等人,
ꢀ“
salt selection and optimization procedures for pharmaceutical new chemical entities,”organic process research and development, 4: 427-435 (2000)；和berge, s.m.等人,
ꢀ“
pharmaceutical salts,”journal of pharmaceutical sciences, 66: 1-19, (1977)。
[0031]
某些缩写如下定义：“acn”是指乙腈；“beh”是指用于hplc粒度的亚乙基桥杂化粒子技术；“ci”是指居里；“conc”是指浓度；“c-pr”是指环丙基；“dbu”是指1,8-二氮杂双环(5.4.0)十一碳-7-烯；“dcm”是指dcm或二氯甲烷；“dmea”是指n,n-二甲基乙基胺；“dipea”是指n,n-二异丙基乙基胺；“dmf”是指n,n-二甲基甲酰胺；“dmap”是指4-二甲基氨基吡啶；“dmso”是指二甲亚砜；“edta”是指乙二胺四乙酸；“eos”是指合成结束；“es/ms”是指电喷雾质谱法；“et”是指乙基；“et2o”是指乙醚；“etoac”是指乙酸乙酯；“etoh”是指乙醇；“tfa”是指三氟乙酸；“g”当参考离心使用时，是指相对离心力；“hplc”是指高效液相色谱法；“hp-bcd”是指20-羟丙基-β-环糊精；“h”或“hr”是指作为时间单位的小时；“htrf”是指均相时间分辨荧光；“ic
50”是指产生该试剂可能实现的最大抑制响应的50%的试剂浓度；“kpa”是指千帕；“kv”是指千伏；“lc-es/ms”是指液相色谱-电喷雾质谱法；“lc-ms/ms”是指液相色谱-串联质谱法；“lda”是指二异丙基氨基锂；“lg”是指离去基团；“ma”是指毫安或毫安培；“mdck”是指madin-darby犬肾上皮细胞；“min”是指作为时间单位的分钟；“me”是指甲基；“meoh”是指甲醇或甲基醇；“ms”是指甲磺酰基或甲基磺酰基或甲烷磺酰基；“mtbe”是指甲基叔丁基醚；“nahmds”是指双(三甲基甲硅烷基)氨基钠；“n-buli”是指正丁基锂；“ng”是指纳克；“pw”是指纯净水；“oac”是指乙酸根；“oms”是指甲磺酸根；“ots”是指甲苯磺酸根；“psi”是指磅/平方英寸；“rpm”是指每分钟转数；“rt”是指室温；“sd”是指标准偏差；“sec”是指作为时间单位的秒；“sem”是指平均值的标准误差；“tbaf”是指四丁基氟化铵；“t-buoh”是指叔丁醇；“tea”是指三乙胺；“ts”是指甲苯磺酰基或4-甲基苯磺酰基；“tfa”是指三氟乙酸；“thf”是指四氢呋喃；“tmeda”是指四甲基乙二胺；“t
r”是指保留时间；“tris-hcl”是指三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐；“u/ml”是指单位/毫升；“wfi”是指注射用水。
[0032]
本发明的化合物或其盐可通过本领域普通技术人员已知的各种程序制备，其中一些阐述在下面的方案、制备和实施例中。本领域普通技术人员会认识到，所述各路线的具体合成步骤可以以不同方式组合，或与来自不同方案的步骤结合，以制备本发明的化合物或其盐。以下方案中的各步骤的产物可通过本领域众所周知的常规方法回收，包括萃取、蒸发、沉淀、色谱法、过滤、研制和结晶。在以下方案中，除非另行指明，所有取代基如上文定义。试剂和原材料是本领域普通技术人员易得的。以下方案、制备、实施例和测定法进一步例示本发明，但不应以任何方式解释为限制本发明的范围。
[0033]
方案1在方案1，步骤a中，本领域技术人员会认识到，(3r,4r)-3-((r)-1-(4-溴苯基)乙基)-3,4-二甲基吡咯烷-2,5-二酮（1，us 9708297，2017年2月2日公开）可用适当强碱双重去质子化并用亲电体，如烷基卤处理以获得烷基化吡咯烷酮2。例如，化合物1可在合适的极性非质子溶剂如thf或1,4-二氧杂环己烷中在大约-78℃至大约室温下用2或更多当量的有机锂试剂处理。所得双阴离子可用大约1或更多当量的各种所需亲电体处理，如适当保护的烷氧基卤、甲磺酸酯或甲苯磺酸酯，如甲氧基甲基氯、叔丁氧基甲基氯、三烷基甲硅烷基乙氧基甲基卤或甲苯磺酸酯，或(取代的)苄氧基甲基氯或甲苯磺酸酯等。更具体地，大约1当量化合物1可在大约-10℃下在thf中用大约2.3当量的lda处理，并可通过加入大约1.2当量的2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯和随后用水淬灭而捕获双阴离子。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac、mtbe、et2o或dcm的萃取法分离和纯化产物以提供化合物2（pg =
ꢀ‑
(三烷基甲硅烷基)乙基）。
[0034]
在方案1，步骤b中，(三烷基甲硅烷基)乙基保护基可在本领域中公知的一系列条件下裂解，如在合适的有机溶剂中用acoh、tfa或tbaf裂解。例如，大约1当量的化合物2可在大约室温下在dcm中用过量tfa处理。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac、
mtbe、et2o或dcm的萃取法分离和纯化产物以提供化合物3。
[0035]
在方案1，步骤c中，本领域技术人员会认识到使用一系列还原剂区域选择性还原琥珀酰亚胺羰基的可能性，如在极性非质子溶剂中用金属氢化物、硼氢化物盐或乙硼烷。更具体地，化合物3可用大约1当量nabh4在大约0℃至室温下缓慢处理，用酸淬灭反应混合物。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如dcm和meoh的萃取法和色谱法分离和纯化产物以获得4。
[0036]
方案2在方案2，步骤a中，本领域技术人员会认识到，可在如本领域中充分描述的各种条件下将侧羟基转化成许多合适的离去基团之一（例如lg = cl、br、oso2ch3、oso2ph以及本领域中公知的其它离去基团）。例如，化合物4可在有机溶剂如dcm中在大约-78℃至室温下用非亲核有机碱处理，随后用烷基-或芳基-磺酰氯处理。更具体地，大约1当量的化合物4可在大约室温下在dcm中用大约2当量的tea处理，所得混合物可用大约1.1当量的甲磺酰氯逐滴处理。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac、mtbe、et2o或dcm的萃取法分离和纯化产物以提供化合物5（lg =
ꢀ‑
oso2ch3）。
[0037]
在方案2，步骤b中，5的甲磺酸酯可在本领域中公知的各种条件下在sn2-型反应中被氟阴离子置换。例如，可将化合物4溶解在合适的极性溶剂中，并在氟化物源存在下在微波中辐照。更具体地，可将大约1当量的5和1.6当量的csf置于ipa中并在大约130℃下在微波中辐照大约3小时。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac、mtbe、et2o或dcm的萃取法和在硅胶上的柱色谱法分离和纯化产物以获得化合物6。
[0038]
在方案2，步骤c中，本领域技术人员会认识到，6中的溴可在各种条件下羰基化，包括在一氧化碳气氛下的过渡金属介导的方法，或锂-卤素交换并使用例如一氧化碳或dmf原位淬灭芳基锂物类。如果稳定，可以分离和纯化生成的醛中间体，或者可在标准还原条件下原位还原。更具体地，大约1当量的溴化物6可与大约0.03-0.2当量的pd(oac)2和大约0.1-0.2当量的合适膦配体，如丁基二(1-金刚烷基)膦一起在大约1.1当量的合适二齿非亲核碱，如tmeda存在下，在一氧化碳/氢气气氛下在大约65 psi在大约95℃下加热整夜。可将反应混合物冷却到室温，并可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac、mtbe、et2o或dcm的萃取法和在硅胶上的柱色谱法分离和纯化钯介导反应的粗制醛产物。后续还原可在极性
有机溶剂如etoh中在大约0℃下用大约1.2-1.5当量nabh4进行。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac或dcm的萃取法和在c18硅胶上的反相色谱法分离和纯化产物以获得化合物7。
[0039]
在方案2，步骤d中，7可用适当取代的2-卤代吡啶在公知的snar条件下在加热和微波辐照下芳基化，或更优选地，通过如文献中描述的过渡金属介导的ullman或buchwald-hartwig醚化条件芳基化（b. liu, b.-f. shi, tet. lett 56 (1), 2015年1月1日, 第15-22页）。技术人员会认识到，这种醚化步骤中所需的必要的6-甲基-4-取代的氨基吡啶可如本领域中充分描述的那样由2,4-二氯-6-甲基吡啶或4-溴-2-氯-6-甲基吡啶和适当取代的胺在例如铜介导的ullmann偶联条件或钯介导的buchwald-hartwig偶联条件下制备。例如，大约1当量的化合物7和大约1.2当量的适当取代的(氮杂环丁烷-1-基)-2-氯-6-甲基-吡啶可在n2气氛下在钯(0)-配体-碱混合物（1:10:240，例如由三(二亚苄基丙酮)二钯(0)、2-(二叔丁基膦基)-2',4',6'-三异丙基-3,6-二甲氧基-1,1'-联苯和cs2co3的混合物制备）存在下在大约85℃下加热大约16-24小时。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac或dcm的萃取法和在c18硅胶上的反相色谱法分离和纯化产物以获得芳基醚化合物8（r
2 = h、f）。
[0040]
方案3在方案3，步骤a中，化合物4可在本领域中公知的各种条件下烷基化，如通过用有机或无机碱处理，例如用醇盐（如叔丁醇钠或叔丁醇钾）、甲基锂或正丁基锂、格氏试剂，或更优选碱，如氢化钠或氢化钾、六甲基二甲硅烷基氨基锂（lithium hexamethyldisilazide）或lda在合适的有机溶剂，如thf或1,4-二氧杂环己烷中处理，随后用甲基化剂，如甲基卤处理双阴离子。更具体地，大约1当量的化合物4可用2.2-3当量的双(三甲基甲硅烷基)氨基锂在thf中在室温下处理大约1-2小时，随后缓慢加入大约0.8-1当量的甲基碘。然后可利用本领域中公知的技术，如萃取法和色谱法分离和纯化产物以提供
化合物9。
[0041]
在方案3，步骤b中，琥珀酰亚胺羰基的还原可以以类似于方案1，步骤c中所述的方式进行。更具体地，大约1当量的9可用大约5当量的硼烷二甲硫醚络合物在合适的极性有机溶剂，如thf或1,4-二氧杂环己烷中在0℃下处理。反应混合物可用合适的质子溶剂，如meoh淬灭，减压浓缩，粗物质可用大约2当量的还原剂，如nabh4在质子溶剂，如tfa中处理。还原产物10可利用本领域中公知的技术，如萃取法和色谱法分离和纯化以提供化合物10。
[0042]
在方案3，步骤c中，化合物10至11的羰基化和随后如方案3，步骤d中还原成羟甲基化合物12可以以类似于方案2，步骤c中所述的方式进行。醛11可利用本领域中公知的技术，如萃取法和色谱法分离和纯化，或可直接进入还原步骤d。
[0043]
在方案3，步骤e中，化合物12的芳基醚化可以以类似于方案2，步骤d中所述的方式进行，以获得芳基醚化合物13（r
2 = f）。技术人员会认识到，这种醚化步骤中所需的必要的6-甲基-4-取代的氨基吡啶可如本领域中充分描述的那样由2,4-二氯-6-甲基吡啶或4-溴-2-氯-6-甲基吡啶和适当取代的胺在例如铜介导的ullmann偶联条件或钯介导的buchwald-hartwig偶联条件下制备。
[0044]
方案4在方案4，步骤a中，可使用本领域中公知的各种保护基保护来自方案1，步骤c的醇产物4。例如，作为醇保护基的甲硅烷基醚由于它们易于形成和除去而尤其广泛使用，其可通过硅原子周围的电子基团和空间基团进行调制，以便根据需要在各种酸性或碱性条件下脱保护。更具体地，大约1当量的醇4可用大约1.5当量的叔丁基二甲基氯硅烷在大约1.5当量的合适碱，如tea/dmap、咪唑或dbu存在下，在合适的非质子溶剂，如dcm、thf或1,4-二氧杂环己烷中，在大约0℃至回流下处理2-24小时。然后可利用本领域中公知的技术，如萃取法和色谱法分离和纯化产物以提供化合物14（pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）。
[0045]
在方案4，步骤b中，化合物12中的溴的羰基化和随后还原成羟甲基化合物15（例如
pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）可以以类似于方案2，步骤c中所述的方式进行。
[0046]
在方案4，步骤c中，化合物15（例如pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）的芳基醚化可以以类似于方案2，步骤d中所述的方式进行，以获得芳基醚化合物16（例如pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）。技术人员会认识到，这种醚化步骤中所需的必要的4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-4-取代的氨基吡啶可如本领域中充分描述的那样由2,4-二氯-6-甲基吡啶和氮杂环丁烷通过铜介导的ullmann偶联条件或钯介导的buchwald-hartwig偶联条件制备。
[0047]
在方案4，步骤d中，可根据保护基利用各种脱保护条件之一实现化合物16（例如pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）脱保护成醇17。例如，当保护基是甲硅烷基醚时，可使用在合适的极性溶剂如thf或1,4-二氧杂环己烷中的许多氟化物源之一，如tbaf、nh4f或kf。更具体地，大约1当量的受保护化合物16（例如pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）可用逐份过量的tbaf在thf中的溶液在室温下处理18-24小时。然后可利用本领域中公知的技术，如萃取法和反相色谱法分离和纯化产物以获得脱保护的醇17。
[0048]
在方案4，步骤e中，17的醇部分可如方案2，步骤a中所述转化成合适的离去基团。更具体地，大约1当量的醇17可在过量的合适胺，如tea或dipea存在下用逐份过量的对甲苯磺酰氯在室温下处理6-24小时。然后可利用本领域中公知的技术，如萃取法和色谱法分离和纯化产物以获得化合物18（lg = ots）。
[0049]
在方案4，步骤f中，化合物18（lg = ots或其它合适的离去基团）可在本领域中公知的条件下被[
18
f]氟化物置换。例如，其中离去基团是甲磺酰基或4-甲基苯磺酰基的化合物18可在合适的极性溶剂，如dmso中在合适的非亲核碱，如k2co3存在下用合适的
18
f源（例如[
18
f]f-）处理以获得化合物19。
18
f氟化物源包括[
18
f]fk
222
。更具体地，可将溶解在无水dmso中的大约1毫克化合物18添加到含有无水[
18
f]fk
222-k2co3（由[
18
f]f制备，获自回旋加速器设施，捕集到离子交换柱上并用kryptofix 222/k2co3在acn中的溶液洗脱，在大约100℃下在无水条件下蒸发）的反应小瓶中，并在氦气气氛下在大约120℃下加热大约10分钟。反应混合物可用适当的hplc溶剂，如etoh、acn和水稀释，产物可利用本领域中公知的技术，如半制备反相柱色谱法纯化，以获得放射性标记化合物19。
[0050]
方案5在方案5，步骤a中，化合物12的芳基醚化可以以类似于方案2，步骤d中所述的方式进行，以获得芳基醚化合物20（r
2 = oh）。技术人员会认识到，合适的离去基团可以是本领域已知的许多离去基团之一，如甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、氯、溴等。另外，技术人员会认识到，这种醚化步骤中所需的必要的4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-4-取代的氨基吡啶可以例如由2,4-二氯-6-甲基吡啶和氮杂环丁烷通过本领域中公知的铜介导的ullmann偶联条件或
钯介导的buchwald-hartwig偶联条件制备。
[0051]
在方案5，步骤b中，20的端羟基可在类似于对方案2，步骤a所述的条件下转化成合适的离去基团（例如lg = ots、oms、cl），以获得化合物21。
[0052]
在方案5，步骤c中，化合物21的合适的离去基团可在类似于方案4，步骤f中所述的条件下被[
18
f]氟化物置换，以获得化合物22（r
2 = 18
f）。
[0053]
制备和实施例以下制备和实施例进一步例示本发明并代表本发明的化合物的典型合成。试剂和原材料是易得的或可以是本领域普通技术人员容易合成的。应该理解的是，制备和实施例作为示例而非限制给出，并可由本领域普通技术人员作出各种修改。
[0054]
本发明的化合物的r-或s-构型可通过标准技术确定，如x-射线分析和与手性-hplc保留时间的相关性。
[0055]
在agilent
® hp1100液相色谱系统上进行lc-es/ms。在连接到hp1100 hplc的质量选择检测器四极杆质谱仪上进行电喷雾质谱测量（在正模式和/或负模式下获取）。lc-ms条件（低ph）: 柱: phenomenex
® gemini
® nx c18 2.1
ꢀ×ꢀ
50 mm 3.0 μm；梯度: 在3 min内5-100% b，然后100% b保持0.75 min，柱温: 50℃ /-10℃；流速: 1.2 ml/min；溶剂a: 含0.1% hcooh的去离子水；溶剂b: 含0.1%甲酸的acn；波长214 nm。替代性lc-ms条件（高ph）:柱:xterra
® ms c18柱2.1
×
50 mm，3.5 μm；梯度:5%溶剂a保持0.25 min、梯度在3 min内从5%至100%的溶剂b，和100%的溶剂b 保持0.50 min，或在3 min内从10%至100%的溶剂b，和100%的溶剂b保持0.75 min；柱温:50℃ /-10℃；流速: 1.2 ml/min；溶剂a:10 mm nh4hco
3 ph 9；溶剂b:acn；波长: 214 nm。
[0056]
在配有质量选择检测器质谱仪和leap
®
自动进样器/级分收集器的agilent
® 1200 lc-es/ms上进行制备反相色谱法。高ph法在75 x 30 mm phenomenex
® gemini
®-nx上运行，5
ꢀµ
粒度柱，具有10 x 20 mm保护柱。流速85 ml/min。除非另行指明，洗脱剂是在乙腈中的10 mm碳酸氢铵（ph 10）。
[0057]
在bruker aviii hd 400 mhz nmr能谱仪上以cdcl3或dmso溶液获得以ppm报道的nmr谱，使用残余溶剂[cdcl3，7.26 ppm；(cd3)2so，2.05 ppm]作为参考标准。当报道峰多重性时，可使用以下缩写：s (单峰)、d (双峰)、t (三重峰)、q (四重峰)、m (多重峰)、br-s (宽单峰)、dd (双重双峰)、dt (双重三峰)。当报道耦合常数(j)时，以赫兹（hz）为单位报道。
[0058]
制备1(3r,4s)-3-((r)-1-(4-溴苯基)乙基)-3-甲基-4-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)吡咯烷-2,5-二酮方案1，步骤a: 在-13℃下向dipea（110 ml, 782 mmol）在thf（1 l）中的搅拌溶液
中加入n-buli在己烷中的2.5 m溶液（310 ml, 780 mmol）并将所得混合物搅拌1小时。向这种溶液中加入溶解在thf（200 ml）中的(3r,4r)-3-((r)-1-(4-溴苯基)乙基)-3,4-二甲基吡咯烷-2,5-二酮（100 g, 338 mmol）并将所得混合物在-10℃下搅拌1小时。向所得混合物中加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯的溶液（70 ml, 376 mmol）并将反应混合物在-10℃下搅拌2小时。反应小心地用水（750 ml）淬灭，使用5 n hcl水溶液（~220 ml）将ph调节到~ 3.5，并用mtbe（1 l）萃取该酸化混合物。有机相相继用水（2 x 500 ml）和饱和nacl水溶液（500 ml）洗涤并在减压下浓缩以产生橙色油。该粗物质通过在硅胶上的柱色谱法提纯，用5至30% etoac/己烷洗脱。合并纯的色谱级分并在减压下浓缩以获得标题化合物（87.4 g, 61%收率）。1h nmr (cdcl3) δ 0.02 (s, 9h), 0.80-0.84 (m, 2h), 1.32, (s, 3h), 1.34 (d, j = 7.1 hz, 3h), 3.00 (m, 1h), 3.08 (q, j = 7.1 hz, 1h), 3.31-3.41 (m, 3h) 3.62 (m, 1h), 7.08 (d, j = 8.4 hz, 2h), 7.42 (d, j = 8.4 hz, 2h), 9.05 (s, 1h). es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 424.0, 426.0 (m h)。
[0059]
制备2(3r,4s)-3-((r)-1-(4-溴苯基)乙基)-4-(羟甲基)-3-甲基吡咯烷-2,5-二酮方案1，步骤b: 在室温下经5分钟向(3r,4s)-3-((r)-1-(4-溴苯基)乙基)-3-甲基-4-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)吡咯烷-2,5-二酮（86.5 g, 203 mmol）在dcm（450 ml）中的搅拌溶液中小心地加入tfa（110 ml, 1455 mmol）。将反应搅拌3小时并用dcm（500 ml）稀释。将混合物冷却到5℃，然后加入5 n naoh水溶液直至碱性ph（~ 12）。混合物用水（600 ml）稀释。分离各相，用5 n hcl水溶液将水层酸化到ph ~ 3。这种酸化混合物用mtbe（300 ml）萃取。有机相相继用饱和nahco3水溶液（100 ml）和饱和nacl水溶液（50 ml）洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生为泡沫状白色固体的标题化合物（52.1 g, 79%收率）。1h nmr (cdcl3) δ 1.22, (s, 3h), 1.36 (d, j = 7.2 hz, 3h), 3.10 (dd, j
1 = 6.8hz, j
2 = 4.4 hz, 1h), 3.15 (q, j = 7.2 hz, 1h), 3.52 (dd, j
1 = 11.2hz, j
2 = 4.8 hz, 1h), 3.63 (dd, j
1 = 11.2hz, j
2 = 6.8 hz, 1h), 7.12 (d, j = 8.4 hz, 2h), 7.48 (d, j = 8.4 hz, 2h), 8.58 (s, 1h)。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 324.0, 326.0 (m h)。
[0060]
制备3(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案1，步骤c: 在冷水浴中冷却的烧瓶中向(3r,4s)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮（32 g, 98 mmol）在thf（320 ml）中的搅拌溶液
中小心地逐份加入nabh4（11 g, 300 mmol）。混合物在室温下搅拌整夜。反应在冰/水浴中冷却并在保持温度高于25℃的同时小心地用tfa（160 ml）逐滴处理。在30分钟后，反应混合物用meoh（160 ml）和水（160 ml）处理并搅拌1小时。混合物在40℃下减压浓缩以产生稠浆料，其用dcm（320 ml）和水（200 ml）稀释。混合物用5 n hcl水溶液（100 ml）处理。加入水（100 ml），接着加入足够的5 n naoh水溶液以达到ph ~ 14。所得乳状液用meoh（30 ml）处理。分离有机层，相继用水（100 ml）、5 n naoh水溶液（10 ml）两次和饱和nacl水溶液（150 ml）洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。所得残留物通过在硅胶上的快速色谱法提纯，用dcm/meoh使用100/0至90/10的梯度洗脱以产生标题化合物（15 g, 49%收率）。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 312.0, 314.0 (m h)。
[0061]
制备4甲磺酸[(3r,4r)-4-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基]甲基酯方案2，步骤a: 在室温下在n2气氛下向(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮（5.6 g, 18 mmol）和tea（3.6 g, 36 mmol）在dcm（56 ml）中的搅拌溶液中小心地逐滴加入甲磺酰氯（1.7 ml, 21 mmol）。将反应搅拌2小时并用dcm和水稀释。分离各相，水层用更多的dcm萃取。合并有机萃取物，用饱和nacl水溶液洗涤，经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供为白色固体的标题化合物（7.0 g, 96%收率）。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 389.8, 391.8 (m h)。
[0062]
制备5(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(氟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案2，步骤b: 向甲磺酸[(3r,4r)-4-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基]甲基酯（2.1 g, 5.2 mmol）在ipa（15 ml）中的溶液中加入csf（13 g, 8.3 mmol）。混合物在微波中在130℃下加热3小时并冷却到室温。所得反应混合物用水和etoac稀释。分离各层并用etoac萃取水相。合并有机萃取物，经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生白色泡沫。该程序在相同规模下再进行一次，合并这两批并通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用70/30至0/100的梯度洗脱以产生标题化合物（3.2 g, 88%收率），其纯度足够用于后续使用。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 314.0, 316.0 (m h)。
[0063]
制备6
(3r,4r)-4-(氟甲基)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案2，步骤c: 在反应小瓶中向(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(氟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮（3.2 g, 8.9 mmol）在甲苯（80 ml）中的溶液中加入tmeda（1.1 g, 9.7 mmol）、pd(oac)2（80 mg, 0.36 mmol）和丁基二(1-金刚烷基)膦（0.37 g, 0.98 mmol）。密封小瓶并在一氧化碳和氢气的1:1混合物下在95℃和65 psi下搅拌整夜。将反应混合物冷却到室温，用etoac稀释，过滤并在减压下浓缩。残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用90/10至0/100的梯度洗脱以提供4-[(1r)-1-[(3r,4r)-4-(氟甲基)-3-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲醛（2.6g）。将这种分离物质溶解在etoh（104 ml）中，在n2气氛下冷却到0℃并用nabh4（0.45 g, 12 mmol）处理。在30分钟后，通过缓慢加入饱和nh4cl水溶液（15 ml）和水（15 ml）而淬灭反应混合物。一旦析气停止，反应混合物在减压下浓缩，将所得残留物溶解在水和etoac中。分离各层并用etoac萃取水相。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残留物溶解在meoh中（至39.2 ml的总体积），过滤并通过prep-hplc提纯（phenomenex
® gemini
®-nx, 10 μ, 50 x 150mm c-18, 210 nm, 110 ml/min），用acn和含有10 mm nh4hco3并用nh4oh调节到ph ~ 9的水洗脱，经10分钟使用15%至100% acn的梯度（4次等量注入在meoh中的粗产物）。含所需物质的级分在减压下浓缩以产生为无色油的标题化合物（1.8 g, 76%收率）。es/ms (m/z): 266.0 (m h)。
[0064]
制备74-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氯-6-甲基-吡啶在反应小瓶中向2,4-二氯-6-甲基-吡啶（0.7 ml, 5.6 mmol）在甲苯（10 ml）中的溶液中加入氮杂环丁烷（0.38 g, 6.7 mmol）、叔丁醇钠（0.66 g, 6.7 mmol）、2-(二-叔丁基膦基)联苯（0.19 g, 0.61 mmol）和pd(oac)2（0.14 g, 0.61 mmol）。密封小瓶，抽空并用n2回填三次，在搅拌下在100℃下加热整夜。将反应混合物倒入水中，分离各层并用etoac萃取水相。合并的有机萃取物用饱和nacl水溶液洗涤，经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供为区域异构体的混合物的橙色油。通过硅胶上的快速色谱法分离区域异构体，用环己烷/etoac使用100/0至40/60的梯度洗脱。
[0065]
最先洗脱的区域异构体是2-(氮杂环丁烷-1-基)-4-氯-6-甲基-吡啶（0.32 g, 30%收率）。1h nmr (cdcl3) δ 2.32-2.43 (m, 5h), 3.99-4.04 (m, 4h), 6.05 (s, 1h)和6.45 (s, 1h)。es/ms (m/z): 183.0 (m h)。
[0066]
第二个洗脱的区域异构体是标题化合物（0.48 g, 43%收率）。1h nmr (cdcl3) δ 2.34-2.50 (m, 5h), 3.92-3.98 (m, 4h), 5.98-6.00 (m, 1h)和6.06-6.08 (m, 1h)。
es/ms (m/z): 183.0 (m h)。
[0067]
制备8醚化催化剂混合物将cs2co3（80 g, 245 mmol）、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)（2.3 g, 2.5 mmol）、2-(二-叔丁基膦基)-2',4',6'-三异丙基-3,6-二甲氧基-1,1'-联苯（5.0 g, 9.8 mmol）和甲苯（500 ml）的混合物置于圆底烧瓶中。密封烧瓶，抽空并用n2回填三次，在搅拌下在85℃下加热1小时。将反应混合物冷却到室温，在减压下除去溶剂以产生干粉，其在研钵研杵中研磨以产生86g绿色细粉。
[0068]
制备92-氯-4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-吡啶在反应瓶中向4-溴-2-氯-6-甲基-吡啶（0.97 g, 4.7 mmol）在dmso（3.3 ml）中的溶液中加入3-氟氮杂环丁烷盐酸盐（0.76 g, 6.8 mmol）、l-脯氨酸（0.33 g, 2.8 mmol）、cs2co3（0.53 g, 16 mmol）和cui（0.55 g, 2.8 mmol）。在n2气氛下密封瓶，并在搅拌下加热到95℃整夜。反应混合物用etoac和水稀释，分离各层并用etoac萃取水相。有机萃取物用饱和nacl水溶液洗涤，经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供棕色油。所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用100/0至40/60的梯度洗脱以获得为浅黄色固体的标题化合物（422 mg, 45%收率）。es/ms (m/z): 201.0 (m h)。
[0069]
制备10(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷]氧基甲基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案4，步骤a: 向(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮（2.2 g, 7.1 mmol）在dcm（70 ml）中的搅拌溶液中加入叔丁基二甲基氯硅烷（1.6 g, 11 mmol）、咪唑（0.72 g, 11 mmol）和4-二甲基氨基吡啶（43mg, 0.35 mmol）。所得混合物在n2气氛下搅拌整夜。反应混合物用水淬灭，分离各层并用dcm萃取水层。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩。所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用100/0至50/50的梯度洗脱以提供为白色固体的标题化合物（2.8 g, 93%收率）。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 426.0, 428.0 (m h)。
[0070]
制备11
(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案4，步骤b: 在反应小瓶中向(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（2.8g, 6.5 mmol）在甲苯（58 ml）中的溶液中加入tmeda（0.82 g, 7.1 mmol）、pd(oac)2（58 mg, 0.26 mmol）和丁基二(1-金刚烷基)膦（0.27 g, 0.71 mmol）。密封小瓶并在一氧化碳和h2的1:1混合物下在95℃和65 psi下搅拌整夜。反应混合物用etoac稀释，过滤并在减压下浓缩。所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用100/0至0/100的梯度洗脱，以产生为黄色油的4-[(1r)-1-[(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲醛（2.1 g），其纯度足够用于后续使用。将4-[(1r)-1-[(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲醛溶解在etoh（64 ml）中，冷却到0℃，并用nabh4（0.28 g, 7.2 mmol）处理。反应混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌2小时并通过缓慢加入饱和nh4cl水溶液（10 ml）和水（10 ml）而淬灭。一旦析气停止，反应混合物在减压下浓缩。将所得残留物溶解在水和etoac中。分离各层并用etoac萃取水相。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩。所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用100/0至100/0的梯度洗脱以产生为无色油的标题化合物（1.5 g），其纯度足够用于后续使用。es/ms (m/z): 378.2 (m h)。
[0071]
制备12(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案4，步骤c: 在反应小瓶中向(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（0.22 g, 0.54 mmol）在甲苯（5.4 ml）中的溶液中加入4-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氯-6-甲基-吡啶（0.13 g, 0.64 mmol）和醚化催化剂混合物（0.60 g）。密封小瓶，抽空并用n2回填三次，在搅拌下加热到85℃ 4小时。将反应混合物冷却到室温，用更多的4-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氯-6-甲基-吡啶（37 mg, 0.19 mmol）和醚化催化剂混合物（0.30 g）处理。密封小瓶，抽空并用n2回填三次，在搅拌下加热到85℃ 13小时。将反应混合物倒在nh4cl的饱和水溶液上。分离各层并用dcm
萃取水相。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供橙色油。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用100/0至0/100的梯度洗脱以产生为黄色油的标题化合物（0.24g, 85%收率）。es/ms (m/z): 524.2 (m h)。
[0072]
制备13(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案4，步骤d: 在n2气氛下向(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（0.24 g, 通过lcms uv为90%纯, 0.41 mmol）在thf（4.1 ml）中的溶液中加入四丁基氟化铵在thf中的1n溶液（0.49 ml, 0.49 mmol）。反应混合物在室温下搅拌2.5小时并用另外的四丁基氟化铵在thf中的1n溶液（0.21 ml, 0.21 mmol）处理。所得混合物在室温下搅拌整夜并通过加入nh4cl的饱和水溶液淬灭。分离各层并用etoac萃取水相。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残留物溶解在meoh中（至9.8 ml的总体积），过滤并通过prep-hplc提纯（phenomenex
® gemini
®‑
nx, 10 μ, 50 x 150 mm c-18, 219 nm, 120 ml/min），用acn和用浓nh4oh水溶液调节到ph ~ 9的水[0.5毫升浓nh4oh/2.5升水]经11分钟使用15%至100% acn的梯度洗脱，以提供标题化合物（99 mg, 59%收率）。es/ms (m/z): 410.0 (m h)。
[0073]
制备144-甲基苯磺酸[(3r,4r)-4-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基]甲基酯方案4，步骤e: 在n2下向(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮（50 mg, 0.12 mmol）和tea（62 mg, 0.61 mmol）在dcm（5 ml）中的冰浴冷却溶液中加入对甲苯磺酰氯（58 mg, 0.31 mmol）。将混合物搅拌到室温整夜。反应混合物用另外的tea（62 mg, 0.61 mmol）和对甲苯磺酰氯（58 mg, 0.31 mmol）处理并在室温下搅拌7小时。混合物用另外的tea（62 mg, 0.61 mmol）和对甲苯磺酰氯（58 mg, 0.31 mmol）处理并在室温下搅拌整夜。反应混合物在减压下浓缩并通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用90/10至0/100的梯
度洗脱，以产生无色玻璃状的标题化合物（35 mg, 47%收率）。es/ms (m/z): 564.2 (m h)。
[0074]
制备15(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-3,4-二甲基吡咯烷-2,5-二酮方案3，步骤a: 向在氮气气氛下浸没在室温水浴中的(3s)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-3-甲基吡咯烷-2,5-二酮（1.2 g, 4.1 mml）在无水thf（34 ml）中的溶液中逐份加入在thf中的0.9 m双(三甲基甲硅烷基)氨基锂（10 ml, 9.3 mmol）。将反应混合物搅拌1.5小时。经5分钟逐滴加入碘甲烷（预先经过碱性氧化铝）在thf中的溶液（2 ml）。在搅拌1小时后，使用饱和nh4cl水溶液淬灭反应。浓缩反应以除去大部分thf，残留物在etoac和水之间分配。除去水层，有机层经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。所得残留物使用在二氧化硅（80 g）上的正相色谱法提纯，用20-30% etoac/己烷的梯度经30 min洗脱以在溶剂蒸发后获得为无色油的标题化合物（1.2 g, 95%收率）。1h nmr (400 mhz, cdcl3): δ 0.94 (d, j= 7.5 hz, 3h), 1.16 (s, 3h), 1.37 (d, j= 7.1 hz, 3h), 3.03 (q, j= 7.5 hz, 1h), 3.16 (q, j= 7.1 hz, 1h), 7.08-7.11 (d, 2h), 7.45-7.49 (d, 2h), 7.90 (bs, 1h)。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 309.8, 311.8 (m h)。
[0075]
制备16(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮方案3，步骤b: 向在氮气下搅拌并在冰/水浴中冷却的(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2,5-二酮（3.86 g, 12.2 mmol）在thf（50 ml）中的溶液中经25分钟逐份加入硼烷二甲硫醚络合物（6.10 ml, 61.1 mmol）。混合物在室温下搅拌21小时。反应混合物在冰/水浴中冷却并小心地用meoh（10 ml）淬灭。反应在减压下浓缩，溶解在meoh（25 ml）中并浓缩。将浓缩物溶解在tfa（20 ml）中，在冰/水浴中冷却，并经30分钟逐份加入nabh4（2.36g, 61.1 mmol），同时用n2吹扫反应烧瓶。将反应混合物搅拌另外30分钟，然后用冰/水（100 ml）淬灭并用etoac（3 x 50 ml）萃取。合并的有机萃取物用饱和nacl水溶液洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用己烷/etoac使用95/5至25/75的梯度洗脱，以产生为白色固体的标题化合物（1.84 g, 51%收率）。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 295.9 / 297.9 (m h)。
[0076]
制备174-[(1r)-1-[(3r,4r)-3,4-二甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲醛
方案3，步骤c: 向100ml parr高压釜中装载(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮（1.75 g, 5.91 mmol）、乙酸钯(ii)（54 mg, 0.24 mmol）、丁基二-1-金刚烷基膦（catacxium
® a, 255 mg, 0.675 mmol）、无水甲苯（50 ml）和tmeda（1.0 ml, 6.6 mmol）。密封高压釜，将反应混合物置于合成气体（h
2 / co (1:1, 75 psi)）的气氛下，加热到95℃，并搅拌16小时。将反应混合物冷却，悬浮液经硅藻土垫过滤。滤饼用etoac洗涤，收集的滤液在减压下浓缩以提供琥珀色油。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用dcm / meoh使用100:0至9:1的梯度洗脱以产生标题化合物（1.36 g, 83%收率）。es/ms (m/z): 246.0 (m h)。
[0077]
制备18(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮方案3，步骤d: 将nabh4（263 mg, 6.82 mmol）一次性添加到4-[(1r)-1-[(3r,4r)-3,4-二甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲醛（1.36 g, 4.55 mmol）在etoh（60 ml）中的悬浮液中，在冰/水浴中冷却。在45分钟后，反应用水（10 ml）淬灭并在减压下浓缩。所得浓缩物用水（50 ml）稀释并用etoac（2 x 50 ml）萃取。合并的有机萃取物用饱和nacl水溶液洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用dcm / meoh使用100:0至9:1的梯度洗脱，以产生标题化合物（1.02 g, 91%收率）。es/ms (m/z): 248.8 (m h)。
[0078]
制备19叔丁基-[1-(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)氮杂环丁烷-3-基]氧基-二甲基-硅烷向反应容器中装载2,4-二氯-6-甲基吡啶（2.05 g, 12.3 mmol）、3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐（2.06 g, 18.4 mmol）、cs2co3（14.0 g,43.0 mmol）、l-脯氨酸（856 mg, 7.3 mmol）、cui（1.4 g, 7.3 mmol）和dmso（15 ml）。该容器用隔膜密封，抽空并用n2回填四次。反应混合物在90℃下加热16小时并冷却到室温。反应混合物经纸过滤，滤饼用etoac洗涤。滤液用水稀释并用etoac（3 x 50 ml）萃取。合并的有机萃取物用饱和nacl水溶液洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩以产生区域异构体的粗制混合物（2.22 g）。
[0079]
将区域异构体的粗制混合物部分溶解在dcm（50 ml）中并用叔丁基二甲基氯硅烷
（2.60 g, 16.8 mmol）和咪唑（1.15 g, 16.8 mmol）处理。在室温下搅拌45分钟后，反应用水（75 ml）稀释并用dcm（2 x 50 ml）萃取。合并的有机萃取物经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用etoac / 己烷使用2:98至30:70的梯度洗脱，以作为第二个洗脱的区域异构体获得标题化合物（1.88 g, 54%收率）。es/ms (
35
cl, 37
cl的m/z ): 313.0 / 315.0 (m h)。
[0080]
制备201-(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)氮杂环丁烷-3-醇叔丁基-[1-(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)氮杂环丁烷-3-基]氧基-二甲基-硅烷（3.03 g, 9.67 mmol）在thf（50 ml）中的溶液在冰/水浴中冷却并用tbaf在thf中的1.0 m溶液（39 ml, 39 mmol）处理。在室温下搅拌1小时后，反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物溶解在dcm（150 ml）中，相继用水和饱和nacl水溶液洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用etoac / 己烷使用10:90至100:0的梯度洗脱，以获得标题化合物（1.69 g, 88%收率）。es/ms (
35
cl, 37
cl的m/z): 199.0 / 201.0 (m h)。
[0081]
制备21(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮方案5，步骤a: 向反应容器中装载(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮（1.0 g, 4.1 mmol）、1-(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)氮杂环丁烷-3-醇（1.7 mg, 8.5 mmol）、cs2co3（3.5 g, 10.8 mmol）、tbubrettphos（216 mg, 0.445 mmol）、pd2(dba)3（102 mg, 0.11 mmol）和甲苯（30 ml）。该容器用隔膜密封，抽空并用n2回填四次。反应混合物在100℃下加热14小时并冷却到室温。将反应混合物倒入饱和nh4cl水溶液（40 ml）中并用dcm（3 x 30 ml）萃取。合并的有机萃取物经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用meoh / dcm使用0:100至10:90的梯度洗脱。产物通过c18二氧化硅上的高ph反相色谱法进一步提纯，用acn / 10 mm nh4hco3水溶液使用25:75至42:58的梯度洗脱以获得标题化合物（412 mg, 22%收率）。es/ms (m/z): 410.2 (m h)。
[0082]
制备224-甲基苯磺酸[1-[2-[[4-[(1r)-1-[(3r,4r)-3,4-二甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯基]甲氧基]-6-甲基-4-吡啶基]氮杂环丁烷-3-基]酯
方案5，步骤b: 在氮气下向(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮（115 mg, 0.26 mmol）和tea（131 mg, 1.28 mmol）在dcm（5 ml）中的溶液中加入对甲苯磺酰氯（122 mg, 0.64 mmol）。反应混合物在室温下搅拌17小时。反应在减压下浓缩，所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用己烷/etoac使用90/10至0/100的梯度洗脱，以获得为白色泡沫的标题化合物（114 mg, 79%收率）。es/ms (m/z): 564.2 (m h)。
[0083]
制备23(3r,4r)-4-(氟甲基)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案2，步骤d: 向(3r,4r)-4-(氟甲基)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（151.3 mg, 0.56 mmol）在甲苯（5.6 ml）中的溶液中加入1-(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)氮杂环丁烷-3-醇（224.3 mg, 1.13 mmol）和catkit醚化混合物（630.1 mg, 1.69 mmol）。密封小瓶，将反应混合物抽真空并用氮气回填3次。所得混合物在85℃下搅拌20小时。在冷却到室温后，将反应混合物倒入nh4cl的饱和水溶液。分离各层并用dcm萃取水相。合并的有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供橙色油。将残留物溶解在meoh中并通过prep-hplc提纯（c-18 phenomenex
® gemini-nx, 10 μ, 50 x 150 mm, 120 ml/min, 运行11 min, 219 nm），用15%
ꢀ‑ꢀ
100% acn/用浓nh4oh调节到大约ph ~ 9的水的溶液（0.5毫升浓nh4oh/2.5升水）梯度洗脱。从所需产物级分中蒸发溶剂，所得残留物通过制备sfc进一步提纯（bzs柱, 150 x 4.6 mm, 5 μ 120 g/min, 出口压力100.0巴），用17%的含0.2% dmea的meoh在co2中的混合物洗脱，以在溶剂蒸发后产生标题化合物（27 mg, 11%收率）。es/ms (m/z): 428.2 (m h)。
[0084]
制备24(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮
向(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（462.3 mg, 1.13 mmol）在甲苯（11.26 ml）中的溶液中加入2-氯-4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-吡啶（248.6 mg, 1.24 mmol）和catkit醚化混合物（1257 mg, 3.38 mmol）。密封小瓶，将反应混合物抽真空，用氮气回填3次，并在85℃下搅拌整夜。将反应混合物倒入nh4cl的饱和水溶液。分离各层并用dcm萃取水相。合并的有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供橙色油。所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用0-100% etoac/环己烷梯度洗脱，以在所需色谱级分蒸发后获得为黄色泡沫的标题化合物（318 mg, 52%收率）。es/ms (m/z): 428.2 (m h)。
[0085]
制备25(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮在n2下向(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（370.7 mg, 0.59 mmol）在thf（5.9 ml）中的溶液中逐滴加入tbaf在thf中的1m溶液（1.0 ml），反应混合物在室温下搅拌6小时。加入nh4cl的饱和水溶液并分离各层。水相用etoac萃取，经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残留物溶解在meoh（9.8 ml）中，过滤，甲醇滤液通过制备hplc提纯（c-18 phenomenex
® gemini-nx, 10 μ, 50 x 150mm, 120 ml/min, 运行11 min, 219 nm），用15%
ꢀ‑ꢀ
100% acn/用浓nh4oh调节到大约ph ~ 9的水的溶液（0.5毫升浓nh4oh/2.5升水）梯度洗脱，以在色谱级分蒸发后提供为黄色油的标题化合物（180 mg, 72%收率）。es/ms (m/z): 428.2 (m h)。
[0086]
实施例1(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-(氟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮
方案2，步骤d: 在反应小瓶中向(3r,4r)-4-(氟甲基)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（0.25g, 0.92 mmol）在甲苯（9 ml）中的溶液中加入4-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氯-6-甲基-吡啶（0.22 g, 1.1 mmol）和醚化催化剂混合物（1.0 g）。密封小瓶，抽空并用n2回填三次，在搅拌下加热到85℃ 20小时。将反应混合物倒在nh4cl的饱和水溶液上。分离各层并用dcm萃取水相。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供橙色油。将油溶解在meoh中（至9.8 ml的总体积），过滤并通过prep-hplc提纯（phenomenex
® gemini
®-nx, 10 μ, 50 x 150mm c-18, 219 nm, 120 ml/min），用acn和用浓nh4oh水溶液调节到ph ~ 9的水[0.5毫升浓nh4oh/2.5升水]经11分钟使用15%至100% acn的梯度洗脱，以提供标题化合物（0.21 g, 54%收率）。es/ms (m/z): 412.2 (m h)。
[0087]
实施例2(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮方案3，步骤e: 向反应容器中装载(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮（101 mg, 0.401 mmol）、2-氯-4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-吡啶（123 mg, 0.61 mmol）、cs2co3（292 mg,0.90 mmol）、tbubrettphos（18 mg, 0.037 mmol）、pd2(dba)3（8 mg, 0.009 mmol）和甲苯（6 ml）。该容器用隔膜密封，抽空并用n2回填四次。反应混合物在100℃下加热18小时并冷却到室温。将反应混合物倒入饱和nh4cl水溶液（20 ml）中并用etoac（2 x 25 ml）萃取。合并的有机层经na2so4干燥，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用etoac/己烷使用1:9至100:0的梯度洗脱，以获得标题化合物（123 mg, 71%收率）。es/ms (m/z): 412.2 (m h)。
[0088]
实施例3(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-(氟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮
(v/v)混合物在4 ml/min下洗脱。将产物级分收集在含抗坏血酸（10 mg/ml）/ wfi（20 ml）的烧瓶中。稀释产物混合物经过tc18固相萃取柱，该柱用10毫升抗坏血酸（10 mg/ml）/wfi冲洗。用200-proof usp级etoh（1 ml）将放射性标记产物从spe柱洗脱到预装10毫升制剂基料（formulation base）（在0.9 m nacl水溶液中的抗坏血酸）的制剂烧瓶（formulation flask）中。该柱用4毫升制剂基料冲洗，并将洗液与制剂烧瓶的内容物混合。所得溶液经过除菌0.2 μm膜过滤器进入预填充15毫升0.9 m nacl水溶液的无菌过滤排气（filter-vented）的小瓶中。在该合成过程中使用单次制备，衰变校正收率为30.9%。
[0091]
实施例5(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-([
18
f]氟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案4，步骤f: 实施例5的化合物可在与实施例4中所述的那些类似的条件下使用无水kryptofix 222-k2co3[
18
f]氟化物和4-甲基苯磺酸[(3r,4r)-4-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基]甲基酯（1 mg）制备。在该合成过程中使用总共9次制备，平均衰变校正收率为19.8%
ꢀ±ꢀ
7.9%。
[0092]
通过cgrp受体拮抗剂抑制camp生成将hcgrp（人降钙素基因相关肽）受体功能性地偶联到gαs蛋白。hcgrp的刺激导致细胞内camp的合成增加，并可通过加入受体拮抗剂阻断。受体活性因此是细胞内存在的camp量的反映，其可使用标准体外技术检测。
[0093]
细胞培养: 使内源性表达hcgrp受体的培养的sk-n-mc成神经细胞瘤细胞（atcc）在补充了10%热灭活胎牛血清（fbs；gibco
®
）、非必需氨基酸（gibco
®
）、1mm丙酮酸钠、2 mm l-谷氨酰胺、100 u/ml青霉素和10 μg/ml链霉素的eagle's最低必需培养基（hyclone
tm
）中生长至大约70%汇合。在提供新鲜培养基后，细胞在37℃下温育整夜。在测定当天，使用accutase
®
（mp biomedicals）分离细胞，重悬在测定缓冲液 [hank’s平衡盐溶液/ dulbecco’s磷酸盐缓冲盐水，含有各100 mg/ml的cacl2和mgcl2（混合1:2）、3.3 mm 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸、0.03%牛血清白蛋白和0.5 mm 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤（作为camp抑制剂）]中，并以3-5k/孔接种到384孔聚-d-赖氨酸涂布的白色平板（bd biosciences）中。
[0094]
抑制camp生成: 对于剂量-响应研究，将化合物在二甲亚砜中1:3连续稀释，然后1:10稀释到测定缓冲液中。将人cgrp（0.8 nm；bachem）作为hcgrp受体的受体特异性激动剂与稀释的化合物混合，并在它们的ec
80
浓度下作为激发刺激物（challenge stimulant）添加到细胞中。
[0095]
数据分析: 根据供应商说明书，使用htrf技术（cisbio）量化细胞内camp的量。简言之，camp-d2缀合物和抗camp-穴状化合物缀合物在裂解缓冲液中用处理过的细胞在室温
b. susan，k.-h. switek和h. braunger, j label compd radiopharm 2006；49: 421-427）稀释至520 pm的4x储备浓度（目标130 pm/孔，最终浓度）。通过将[3h]bibn-4096放射性配体（在62.5 μl测定缓冲液中）添加到连续稀释的受试化合物和50 μl的sk-n-mc膜（在测定缓冲液中；20 μg/孔）中而开始结合测定。总测定体积为250 μl/孔。在60分钟的温育期后，通过将200 μl转移到用0.3%聚乙烯亚胺（pei）预处理60分钟并使用405 ts洗板机（biotek
®
）在冰冷的50 mm tris-hcl（ph 7.4）中洗涤三次的gf/b whatman（millipore）中而终止反应。该板随后用冰冷的50mm tris-hcl缓冲液（ph 7.4）洗涤三次。将板干燥整夜。将emulsifier-safe
tm
（perkinelmer
®
）添加到过滤板中（100
ꢀµ
l/孔）。
[0102]
数据分析: 可以使用microbeta
® trilux scintillation counter（perkinelmer
®
）计数结合放射性。特异性结合被定义为可被10 μm bibn-4096（mce
® medchemexpress）置换的计数。使用四参数逻辑曲线拟合程序（graphpad prism v8.3.0）计算相对ic
50
值。由以下方程计算化合物的平衡解离结合常数（ki）：k
i = ic
50
/(1 [l]/kd)其中ic
50 = 导致结合活性的50%抑制的化合物浓度，[l] = 用于该实验的放射性配体浓度，k
d = 由饱和结合分析测定的放射性配体的平衡解离常数。计算的ki值作为平均值和sem报道。
[0103]
结果: 这一结合亲和力表征程序用于确定实施例1-3各自的ki，其概括在下表2中。这三种化合物各自表现出对人cgrp受体异源二聚体的高亲和力特异性结合。
[0104]
表2. cgrp结合亲和力结果ki值是平均值，表达到3个有效位数。平均值的标准误差（sem）用与平均值相同的小数位数表示。n是测试次数。
[0105]
体外测定abcb1人p-糖蛋白（pgp）的外排细胞培养: 稳定表达人野生型abcb1 (pgp)的mdckii细胞获自netherlands cancer institute（amsterdam, the netherlands）。如先前所述保存mdck细胞（desai等人, mol pharm 10:1249-1261, 2013）。
[0106]
穿过mdck细胞的双向转运: 该测定基本如先前所述进行（desai等人, mol pharm 10:1249-1261, 2013）。使用由10 mm dmso储液（最终dmso浓度为0.05%）稀释的5 μm底物浓度和单个60分钟时间间隔，双向测量跨过未受抑制和受抑制的细胞单层的转运。2.5 μm的实施例1的化合物用于选择性抑制pgp。作为每60分钟转运的质量相对于总回收质量的斜率估算表观渗透系数（papp）。在各细胞系中在不存在或存在抑制剂的情况下计算基底-顶端（basal-to-apical）（b-a）/顶端-基底（apical-to-basal）（a-b）papp比率作为净外排率
（ner）。
[0107]
结果：测定实施例1化合物的pgp外排的ner为1.9，并测定实施例2的pgp外排的ner为1.6。
[0108]
体内大鼠示踪剂分布和动力学研究大鼠中的示踪剂分布和脑摄取示踪剂混合说明书储备制剂: 在25% hp-bcd/pw中以0.5 mg/ml制备示踪剂储备溶液（针对盐重量校正）。充分涡旋30秒，置于浴式超声中30分钟。确认储备制剂是清澈溶液或均质悬液。可使用酸（10 μl乙酸）或碱（10 μl 5n naoh）、探头超声或声波浴以助于溶解。
[0109]
最终给药制剂: 如果储备制剂是溶液或均质悬液，允许储备溶液在室温下静置5分钟，并确认和记录储备制剂的外观。用25% hp-bcd/pw将储备溶液稀释到适当的剂量浓度。将最终给药溶液涡旋30秒。最终示踪剂给药溶液用于在适当的基质中生成lc/ms/ms校准标准。
[0110]
研究群体: 在eli lilly and company和preclinomics institutional animal care and use committee批准的方案下进行动物研究。20只体重200-300g的sprague-dawley大鼠获自harlan sprague dawley inc.（indianapolis, in）并随机分成4组，每组5只动物。在研究前，动物可随意获取食物和水。
[0111]
live phase方法: 每个剂量组使用5只动物。每只动物接受10 μg/kg的cgrp示踪剂化合物，其在侧尾静脉中静脉给药。在5、10、20或40分钟存活间隔期后，通过颈脱位接着断头或活体断头（live decapitation）对动物实施安乐死。
[0112]
将躯干血收集在edta-涂布的eppendorf管中并储存在湿冰上直至研究完成。迅速取出全脑，并用无菌水轻轻冲洗。解剖额皮质、海马体、小脑、脑干和纹状体脑组织，称重，储存在1.5 ml eppendorf管中，并放置在湿冰上直至live phase研究完成。
[0113]
使用未用药受试对象，收集血液和七个皮质脑组织样品以用于生成空白和标准曲线样品。
[0114]
示踪剂提取 & 样品制备方法组织
ꢀ–ꢀ
将组织样品保存在湿冰上直至live phase完成。收集自受试对象和未用药对象的组织样品在preclinomics（indianapolis, in, usa）匀浆，并立即在湿冰上送到ait bioscience（indianapolis, in, usa）以便离心，用excel表格指示组织重量、添加到所有组织样品中的acn 0.1% hcooh的量、和如何将未用药组织（naive tissues）加标（spiked for standards）。关于在preclinomics进行的加工的细节如下：将含有0.1% hcooh的acn以四倍于组织样品重量的体积添加到各组织样品中（例如，将600 μl acn添加到150 mg脑组织中）。通过探头超声处理将样品匀浆。标准曲线是6点曲线，范围为0.3-60 ng/g，线性回归，相关系数r2最小值≥ 0.95。由用计算体积的标样（由在live phase的过程中使用的示踪剂给药溶液制备）加标的（相同器官的）对照组织基质匀浆制备校准标样。将匀浆的组织样品和加标的标样在湿冰上转移到ait bioscience。一旦到达ait biosciences，所有匀浆样品在14,000 rpm下离心20分钟。上清液用内标溶液（在水中的1.0 ng/ml苯海拉明）以1:4的比率稀释。在稀释上清液后，如果孔板中的总样品体积太小以致无法注射，使用流动相acn:水:0.1% hcooh（20:80:0.1）以1:1的比率进行额外稀
释。将该溶液充分混合，并通过lc/ms/ms分析示踪剂化合物。由于样品体积小而造成的额外稀释在回归分析过程中应用适当的稀释因子。
[0115]
血液样品
ꢀ–ꢀ
将全血样品保存在湿冰上直至live phase完成。血液样品在14,000 rpm下离心20分钟。在离心后，将血浆样品转移到带有标签的管中，储存在湿冰上，并（与组织样品一起）运送到ait bioscience以分析阻断剂试验制品。将200 μl含有0.1% hcooh的acn添加到各50 μl血浆样品中。将样品置于超声水浴中5分钟，然后在14,000 rpm下离心20分钟。标准曲线是6点曲线，范围为0.1-30 ng/ml，线性回归相关系数r2最小值≥ 0.95。由用计算体积的标样（由在live phase的过程中使用的示踪剂给药溶液制备）加标的对照血浆制备校准标样。上清液用内标溶液（在水中的1.0 ng/ml苯海拉明）以1:3的比率稀释。然后将该溶液充分混合，并通过lc/ms/ms分析示踪剂化合物。
用于小分子萃取的有机溶剂乙腈 0.1%甲酸有机溶剂:组织的量4x组织重量（体积以μl计）有机溶剂:血浆的量200μlacn:50μl血浆用内标溶液（在水中的1.0ng/ml苯海拉明）稀释上清液1体积组织上清液（以μl计）:4体积无菌内标溶液（以μl计）用内标溶液（在水中的1.0ng/ml苯海拉明）稀释上清液1体积血浆上清液（以μl计）:3体积内标溶液（以μl计）用于稀释小样品体积的有机溶剂（任选基于等分试样体积）acn:水:hcooh(20:80:0.1)
[0116]
lc-ms/ms参数使用连接到thermo scientific
tm tsq quantiva
tm
三重四极杆质谱仪（thermo fisher scientific，ma usa）的型号dionex
tm ultimate
tm 3000 lc自动进样器（thermo fisher scientific，ma usa）实现脑组织中的示踪剂浓度的lc-ms/ms分析。将20 μl样品溶液注射到保持在25-30℃的waters beh c18柱（2.1 mm
ꢀ×ꢀ
50 mm；1.7
ꢀµ
m；part # 176000863）上，使用acn: 水: 0.1% hcooh的混合物作为流动相，流速为0.4 ml/min。改变acn: 水的混合物以使被分析物保留时间保持在1-6分钟的范围内（基于lc条件）。从柱中洗脱的示踪剂通过其特征保留时间和质荷比（m/z）识别，并通过与在适当的组织基质中制备的标准曲线进行比较而量化。组织中的示踪剂含量以ng/g组织为单位表示。血浆中的示踪剂含量以ng/ml血浆为单位表示。
[0117]
实施例1
ꢀ‑ꢀ
监测的前体到产物离子转变（precursor to product ion transition）为q1 = 412.32，q3 = 117.229。使用持续2分钟的等度法，保留时间为1.1 min。流动相由水（72.5%）和含0.1% hcooh的acn（27.5%）组成。
[0118]
实施例2
ꢀ‑ꢀ
监测的前体到产物离子转变为q1 = 412.161，q3 = 230.224。使用持续2.5分钟的梯度法，保留时间为1.2 min。流动相由水和含0.1% hcooh的acn在各种比率下组成。梯度条件是从0
ꢀ‑ꢀ
1.7 min 为73%水和27% acn，从1.75 min
ꢀ–ꢀ
2.3 min梯度至10%水和90% acn和从2.35分钟
ꢀ–ꢀ
2.5 min 73%水27% b。
[0119]
实施例3
ꢀ‑ꢀ
监测的前体到产物离子转变为q1 = 430.27，q3 = 248.117。使用持续2.3分钟的等度法，保留时间为1.1 min。流动相由水（72.5%）和含0.1% hcooh的acn（27.5%）组成。
[0120]
统计分析: 通过处理组平均示踪剂浓度（ng/g或ng/ml）
±ꢀ
sem概括示踪剂分布。
[0121]
实施例1-3在大鼠中的示踪剂分布和脑摄取数据显示在表3-5中。
[0122]
表3.实施例1 平均示踪剂浓度
ꢀ±ꢀ
sem，(ng/g)在脑组织区域中，(ng/ml)在血浆中
[0123]
表4. 实施例2 平均示踪剂浓度
ꢀ±ꢀ
sem，(ng/g)在脑组织区域中，(ng/ml)在血浆中
[0124]
表5. 实施例3 平均示踪剂浓度
ꢀ±ꢀ
sem，(ng/g)在脑组织区域中，(ng/ml)在血浆中
[0125]
表3-5的数据表明，在10 μg/kg的示踪剂剂量下，实施例1-3的化合物是脑渗透性的，尤其均匀遍布于脑组织，并在大鼠物种中随时间经过保持恒定b/p比。
1.本发明涉及某些新型降钙素基因相关肽（cgrp）受体拮抗剂化合物，其可用作cgrp受体的正电子发射断层扫描（pet）成像，包括诊断成像的示踪剂化合物，涉及包含所述化合物的药物组合物，涉及使用某些新型cgrp受体拮抗剂化合物预防或治疗某些生理障碍（如偏头痛）的方法，以及涉及可用于合成所述化合物的中间体和方法。
2.cgrp受体pet示踪剂[11c]mk-4232已用于评价cgrp拮抗剂telcagepant的cgrp受体占位（参见s.g.g. vermeersch等人, the journal of headache and pain, 14(suppl 1), 第224页(2013)）。需要用于cgrp受体成像的新型pet示踪剂，特别是可渗透血脑屏障（bbb）并且较不易被p-糖蛋白（p-gp）外排泵主动转运出中枢神经系统（cns）的那些。
[0003]
i.m. bell等人, medicinal chemistry letters, 4, 第863-868页(2013)描述了mk-4232作为cgrp受体的最初pet示踪剂。美国专利nos. 9,637,495和9,708,297各自公开了可用于治疗或预防偏头痛的某些cgrp受体拮抗剂化合物。
[0004]
本发明提供作为cgrp受体的拮抗剂的某些新型化合物。此外，本发明提供某些新型放射性标记化合物，其可用作用于cgrp受体成像的pet示踪剂。
[0005]
相应地，本发明提供式i的化合物或其可药用盐：其中r1是氢、f或
18
f；和r2是氢、f或
18
f；条件是当r1是
18
f时，则r2不是
18
f。
[0006]
本发明进一步提供式ia的化合物或其可药用盐：其中r1是氢、f或
18
f；和r2是氢、f或
18
f；条件是当r1是
18
f时，则r2不是
18
f。
[0007]
本发明进一步提供式ib的放射性标记化合物或其可药用盐：
其中r1是氢或
18
f；和r2是氢或
18
f；条件是当r1是
18
f时，r2不是
18
f。
[0008]
本发明进一步提供一种使用式ib的放射性标记化合物或其可药用盐的方法其中r1是氢或
18
f；和r2是氢或
18
f；条件是当r1是
18
f时，则r2不是
18
f，所述方法包括将可检测量的式ib的放射性标记化合物引入哺乳动物，留出足够的时间以使所述化合物与哺乳动物脑中的cgrp受体结合，然后检测哺乳动物脑中的式ib的放射性标记化合物。
[0009]
本发明提供一种制备式ib的放射性标记化合物的方法：其中r1是氢或
18
f；和r2是氢或
18
f，条件是当r1是
18
f时，则r2不是
18
f，所述方法包括使式ii的化合物与[
18
f]氟化物源反应：其中x1是氢或合适的离去基团；或x2是氢或合适的离去基团。
[0010]
本发明进一步提供式iia的中间体：
其中x1是合适的离去基团。
[0011]
本发明进一步提供式iib的中间体：其中x2是合适的离去基团。
[0012]
此外，本发明提供式iic的中间体：其中x1和x2各自独立地是合适的离去基团。
[0013]
本发明还提供一种预防患者的偏头痛的方法，其包括给予需要其的患者有效量的式i或式ia的化合物或其可药用盐。
[0014]
本发明进一步提供一种治疗患者的偏头痛的方法，其包括给予需要其的患者有效量的式i或式ia的化合物或其可药用盐。本发明还提供一种拮抗患者的cgrp受体的方法，其包括给予需要其的患者有效量的式i或式ia的化合物或其可药用盐。
[0015]
此外，本发明提供用于疗法，特别用于治疗偏头痛的式i或式ia的化合物或其可药用盐。此外，本发明提供用于预防偏头痛的式i或式ia的化合物或其可药用盐。再此外，本发明提供式i或式ia的化合物或其可药用盐用于制备治疗偏头痛或预防偏头痛的药物的用途。
[0016]
本发明进一步提供一种药物组合物，其包含式i、ia或ib的化合物或其可药用盐，以及一种或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂。本发明进一步提供一种制备药物组合物的方法，其包括将式i、ia或ib的化合物或其可药用盐与一种或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂混合。
[0017]
本文所用的术语“治疗”包括抑制、减慢、阻止或逆转已有症状或障碍的进展或严重程度。
[0018]
本文所用的术语“预防”是指保护有发生特定疾病或障碍如偏头痛的倾向但当前未受该疾病或障碍的症状如偏头痛的症状困扰的患者。
[0019]
本文所用的术语“患者”是指哺乳动物，特别是人类。
[0020]
检测哺乳动物脑中的放射性标记化合物的优选方法是正电子发射断层扫描术。
[0021]
本文所用的术语“有效量”是指在单剂量或多剂量给药于患者时在被诊断或治疗的患者中提供所需作用的本发明的化合物或其可药用盐的量或剂量。
[0022]
本领域技术人员通过使用已知技术和通过观察在类似情况下获得的结果容易确定有效量。在确定患者的有效量时，主治诊断医师考虑许多因素，包括但不限于：患者的物种；其体型、年龄和一般健康状况；所涉的具体疾病或障碍；疾病或障碍的涉入程度或严重程度；个体患者的响应；给予的特定化合物；给药模式；给予的制剂的生物利用度特征；所选给药方案；合并用药；和其它相关情况。
[0023]
本发明的化合物在落在大约0.01至大约20 mg/kg体重范围内的每日剂量下有效。在一些情况下，低于上述范围的下限的剂量水平可能绰绰有余，而在另一些情况下，可能在可接受的副作用下使用更大剂量，因此上述剂量范围无意以任何方式限制本发明的范围。
[0024]
本发明的化合物配制为通过可生物利用该化合物的任何途径给药的药物组合物。这样的药物组合物及其制备方法是本领域中公知的（参见例如remington: the science and practice of pharmacy, l.v. allen编辑，第22版，pharmaceutical press, 2012）。
[0025]
其中吡咯烷环上的甲基和-ch2r1取代基为顺式构型的式i的化合物或其可药用盐是优选的。例如，本领域普通技术人员会认识到，如以下方案a中所示，在位置3的甲基取代基相对于在位置4的-ch2r1取代基为顺式构型：方案a。
[0026]
以下化合物及其可药用盐也是优选的：以下化合物及其可药用盐也是优选的：
其中r1是氢、f或
18
f；和r2是氢、f或
18
f；条件是当r1是
18
f时，则r2不是
18
f。
[0027]
以下化合物及其可药用盐特别优选：以下化合物及其可药用盐特别优选：以下化合物及其可药用盐特别优选：以下化合物及其可药用盐特别优选：
。
[0028]
以下制备中描述的某些中间体可含有一个或多个氮保护基。要理解的是，可如本领域技术人员所认识根据特定反应条件和要进行的特定转化改变保护基。保护和脱保护条件是技术人员公知的并描述在文献中（参见例如“greene’s protective groups in organic synthesis”, 第四版, peter g.m. wuts和theodora w. greene，john wiley and sons, inc. 2007）。
[0029]
本领域普通技术人员可在本发明的化合物的合成中的任何方便的点通过如选择性结晶技术或手性色谱法之类的方法分离或拆分独立的异构体、对映异构体和非对映异构体（参见例如j. jacques等人, "enantiomers, racemates, and resolutions", john wiley and sons, inc., 1981和e.l. eliel和s.h. wilen,
ꢀ“
stereochemistry of organic compounds”, wiley-interscience, 1994）。
[0030]
本发明的化合物的可药用盐可以例如通过本发明的化合物的适当游离碱与适当的可药用酸在合适溶剂如乙醚中在本领域中公知的标准条件下反应形成。另外，这样的盐的形成可在氮保护基脱保护的同时发生。这样的盐的形成是本领域众所周知和充分认识的。参见例如gould、p.l.,
ꢀ“
salt selection for basic drugs,
”ꢀ
international journal of pharmaceutics, 33: 201-217 (1986)；bastin, r.j.等人,
ꢀ“
salt selection and optimization procedures for pharmaceutical new chemical entities,”organic process research and development, 4: 427-435 (2000)；和berge, s.m.等人,
ꢀ“
pharmaceutical salts,”journal of pharmaceutical sciences, 66: 1-19, (1977)。
[0031]
某些缩写如下定义：“acn”是指乙腈；“beh”是指用于hplc粒度的亚乙基桥杂化粒子技术；“ci”是指居里；“conc”是指浓度；“c-pr”是指环丙基；“dbu”是指1,8-二氮杂双环(5.4.0)十一碳-7-烯；“dcm”是指dcm或二氯甲烷；“dmea”是指n,n-二甲基乙基胺；“dipea”是指n,n-二异丙基乙基胺；“dmf”是指n,n-二甲基甲酰胺；“dmap”是指4-二甲基氨基吡啶；“dmso”是指二甲亚砜；“edta”是指乙二胺四乙酸；“eos”是指合成结束；“es/ms”是指电喷雾质谱法；“et”是指乙基；“et2o”是指乙醚；“etoac”是指乙酸乙酯；“etoh”是指乙醇；“tfa”是指三氟乙酸；“g”当参考离心使用时，是指相对离心力；“hplc”是指高效液相色谱法；“hp-bcd”是指20-羟丙基-β-环糊精；“h”或“hr”是指作为时间单位的小时；“htrf”是指均相时间分辨荧光；“ic
50”是指产生该试剂可能实现的最大抑制响应的50%的试剂浓度；“kpa”是指千帕；“kv”是指千伏；“lc-es/ms”是指液相色谱-电喷雾质谱法；“lc-ms/ms”是指液相色谱-串联质谱法；“lda”是指二异丙基氨基锂；“lg”是指离去基团；“ma”是指毫安或毫安培；“mdck”是指madin-darby犬肾上皮细胞；“min”是指作为时间单位的分钟；“me”是指甲基；“meoh”是指甲醇或甲基醇；“ms”是指甲磺酰基或甲基磺酰基或甲烷磺酰基；“mtbe”是指甲基叔丁基醚；“nahmds”是指双(三甲基甲硅烷基)氨基钠；“n-buli”是指正丁基锂；“ng”是指纳克；“pw”是指纯净水；“oac”是指乙酸根；“oms”是指甲磺酸根；“ots”是指甲苯磺酸根；“psi”是指磅/平方英寸；“rpm”是指每分钟转数；“rt”是指室温；“sd”是指标准偏差；“sec”是指作为时间单位的秒；“sem”是指平均值的标准误差；“tbaf”是指四丁基氟化铵；“t-buoh”是指叔丁醇；“tea”是指三乙胺；“ts”是指甲苯磺酰基或4-甲基苯磺酰基；“tfa”是指三氟乙酸；“thf”是指四氢呋喃；“tmeda”是指四甲基乙二胺；“t
r”是指保留时间；“tris-hcl”是指三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐；“u/ml”是指单位/毫升；“wfi”是指注射用水。
[0032]
本发明的化合物或其盐可通过本领域普通技术人员已知的各种程序制备，其中一些阐述在下面的方案、制备和实施例中。本领域普通技术人员会认识到，所述各路线的具体合成步骤可以以不同方式组合，或与来自不同方案的步骤结合，以制备本发明的化合物或其盐。以下方案中的各步骤的产物可通过本领域众所周知的常规方法回收，包括萃取、蒸发、沉淀、色谱法、过滤、研制和结晶。在以下方案中，除非另行指明，所有取代基如上文定义。试剂和原材料是本领域普通技术人员易得的。以下方案、制备、实施例和测定法进一步例示本发明，但不应以任何方式解释为限制本发明的范围。
[0033]
方案1在方案1，步骤a中，本领域技术人员会认识到，(3r,4r)-3-((r)-1-(4-溴苯基)乙基)-3,4-二甲基吡咯烷-2,5-二酮（1，us 9708297，2017年2月2日公开）可用适当强碱双重去质子化并用亲电体，如烷基卤处理以获得烷基化吡咯烷酮2。例如，化合物1可在合适的极性非质子溶剂如thf或1,4-二氧杂环己烷中在大约-78℃至大约室温下用2或更多当量的有机锂试剂处理。所得双阴离子可用大约1或更多当量的各种所需亲电体处理，如适当保护的烷氧基卤、甲磺酸酯或甲苯磺酸酯，如甲氧基甲基氯、叔丁氧基甲基氯、三烷基甲硅烷基乙氧基甲基卤或甲苯磺酸酯，或(取代的)苄氧基甲基氯或甲苯磺酸酯等。更具体地，大约1当量化合物1可在大约-10℃下在thf中用大约2.3当量的lda处理，并可通过加入大约1.2当量的2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯和随后用水淬灭而捕获双阴离子。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac、mtbe、et2o或dcm的萃取法分离和纯化产物以提供化合物2（pg =
ꢀ‑
(三烷基甲硅烷基)乙基）。
[0034]
在方案1，步骤b中，(三烷基甲硅烷基)乙基保护基可在本领域中公知的一系列条件下裂解，如在合适的有机溶剂中用acoh、tfa或tbaf裂解。例如，大约1当量的化合物2可在大约室温下在dcm中用过量tfa处理。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac、
mtbe、et2o或dcm的萃取法分离和纯化产物以提供化合物3。
[0035]
在方案1，步骤c中，本领域技术人员会认识到使用一系列还原剂区域选择性还原琥珀酰亚胺羰基的可能性，如在极性非质子溶剂中用金属氢化物、硼氢化物盐或乙硼烷。更具体地，化合物3可用大约1当量nabh4在大约0℃至室温下缓慢处理，用酸淬灭反应混合物。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如dcm和meoh的萃取法和色谱法分离和纯化产物以获得4。
[0036]
方案2在方案2，步骤a中，本领域技术人员会认识到，可在如本领域中充分描述的各种条件下将侧羟基转化成许多合适的离去基团之一（例如lg = cl、br、oso2ch3、oso2ph以及本领域中公知的其它离去基团）。例如，化合物4可在有机溶剂如dcm中在大约-78℃至室温下用非亲核有机碱处理，随后用烷基-或芳基-磺酰氯处理。更具体地，大约1当量的化合物4可在大约室温下在dcm中用大约2当量的tea处理，所得混合物可用大约1.1当量的甲磺酰氯逐滴处理。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac、mtbe、et2o或dcm的萃取法分离和纯化产物以提供化合物5（lg =
ꢀ‑
oso2ch3）。
[0037]
在方案2，步骤b中，5的甲磺酸酯可在本领域中公知的各种条件下在sn2-型反应中被氟阴离子置换。例如，可将化合物4溶解在合适的极性溶剂中，并在氟化物源存在下在微波中辐照。更具体地，可将大约1当量的5和1.6当量的csf置于ipa中并在大约130℃下在微波中辐照大约3小时。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac、mtbe、et2o或dcm的萃取法和在硅胶上的柱色谱法分离和纯化产物以获得化合物6。
[0038]
在方案2，步骤c中，本领域技术人员会认识到，6中的溴可在各种条件下羰基化，包括在一氧化碳气氛下的过渡金属介导的方法，或锂-卤素交换并使用例如一氧化碳或dmf原位淬灭芳基锂物类。如果稳定，可以分离和纯化生成的醛中间体，或者可在标准还原条件下原位还原。更具体地，大约1当量的溴化物6可与大约0.03-0.2当量的pd(oac)2和大约0.1-0.2当量的合适膦配体，如丁基二(1-金刚烷基)膦一起在大约1.1当量的合适二齿非亲核碱，如tmeda存在下，在一氧化碳/氢气气氛下在大约65 psi在大约95℃下加热整夜。可将反应混合物冷却到室温，并可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac、mtbe、et2o或dcm的萃取法和在硅胶上的柱色谱法分离和纯化钯介导反应的粗制醛产物。后续还原可在极性
有机溶剂如etoh中在大约0℃下用大约1.2-1.5当量nabh4进行。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac或dcm的萃取法和在c18硅胶上的反相色谱法分离和纯化产物以获得化合物7。
[0039]
在方案2，步骤d中，7可用适当取代的2-卤代吡啶在公知的snar条件下在加热和微波辐照下芳基化，或更优选地，通过如文献中描述的过渡金属介导的ullman或buchwald-hartwig醚化条件芳基化（b. liu, b.-f. shi, tet. lett 56 (1), 2015年1月1日, 第15-22页）。技术人员会认识到，这种醚化步骤中所需的必要的6-甲基-4-取代的氨基吡啶可如本领域中充分描述的那样由2,4-二氯-6-甲基吡啶或4-溴-2-氯-6-甲基吡啶和适当取代的胺在例如铜介导的ullmann偶联条件或钯介导的buchwald-hartwig偶联条件下制备。例如，大约1当量的化合物7和大约1.2当量的适当取代的(氮杂环丁烷-1-基)-2-氯-6-甲基-吡啶可在n2气氛下在钯(0)-配体-碱混合物（1:10:240，例如由三(二亚苄基丙酮)二钯(0)、2-(二叔丁基膦基)-2',4',6'-三异丙基-3,6-二甲氧基-1,1'-联苯和cs2co3的混合物制备）存在下在大约85℃下加热大约16-24小时。然后可利用本领域中公知的技术，如使用例如etoac或dcm的萃取法和在c18硅胶上的反相色谱法分离和纯化产物以获得芳基醚化合物8（r
2 = h、f）。
[0040]
方案3在方案3，步骤a中，化合物4可在本领域中公知的各种条件下烷基化，如通过用有机或无机碱处理，例如用醇盐（如叔丁醇钠或叔丁醇钾）、甲基锂或正丁基锂、格氏试剂，或更优选碱，如氢化钠或氢化钾、六甲基二甲硅烷基氨基锂（lithium hexamethyldisilazide）或lda在合适的有机溶剂，如thf或1,4-二氧杂环己烷中处理，随后用甲基化剂，如甲基卤处理双阴离子。更具体地，大约1当量的化合物4可用2.2-3当量的双(三甲基甲硅烷基)氨基锂在thf中在室温下处理大约1-2小时，随后缓慢加入大约0.8-1当量的甲基碘。然后可利用本领域中公知的技术，如萃取法和色谱法分离和纯化产物以提供
化合物9。
[0041]
在方案3，步骤b中，琥珀酰亚胺羰基的还原可以以类似于方案1，步骤c中所述的方式进行。更具体地，大约1当量的9可用大约5当量的硼烷二甲硫醚络合物在合适的极性有机溶剂，如thf或1,4-二氧杂环己烷中在0℃下处理。反应混合物可用合适的质子溶剂，如meoh淬灭，减压浓缩，粗物质可用大约2当量的还原剂，如nabh4在质子溶剂，如tfa中处理。还原产物10可利用本领域中公知的技术，如萃取法和色谱法分离和纯化以提供化合物10。
[0042]
在方案3，步骤c中，化合物10至11的羰基化和随后如方案3，步骤d中还原成羟甲基化合物12可以以类似于方案2，步骤c中所述的方式进行。醛11可利用本领域中公知的技术，如萃取法和色谱法分离和纯化，或可直接进入还原步骤d。
[0043]
在方案3，步骤e中，化合物12的芳基醚化可以以类似于方案2，步骤d中所述的方式进行，以获得芳基醚化合物13（r
2 = f）。技术人员会认识到，这种醚化步骤中所需的必要的6-甲基-4-取代的氨基吡啶可如本领域中充分描述的那样由2,4-二氯-6-甲基吡啶或4-溴-2-氯-6-甲基吡啶和适当取代的胺在例如铜介导的ullmann偶联条件或钯介导的buchwald-hartwig偶联条件下制备。
[0044]
方案4在方案4，步骤a中，可使用本领域中公知的各种保护基保护来自方案1，步骤c的醇产物4。例如，作为醇保护基的甲硅烷基醚由于它们易于形成和除去而尤其广泛使用，其可通过硅原子周围的电子基团和空间基团进行调制，以便根据需要在各种酸性或碱性条件下脱保护。更具体地，大约1当量的醇4可用大约1.5当量的叔丁基二甲基氯硅烷在大约1.5当量的合适碱，如tea/dmap、咪唑或dbu存在下，在合适的非质子溶剂，如dcm、thf或1,4-二氧杂环己烷中，在大约0℃至回流下处理2-24小时。然后可利用本领域中公知的技术，如萃取法和色谱法分离和纯化产物以提供化合物14（pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）。
[0045]
在方案4，步骤b中，化合物12中的溴的羰基化和随后还原成羟甲基化合物15（例如
pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）可以以类似于方案2，步骤c中所述的方式进行。
[0046]
在方案4，步骤c中，化合物15（例如pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）的芳基醚化可以以类似于方案2，步骤d中所述的方式进行，以获得芳基醚化合物16（例如pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）。技术人员会认识到，这种醚化步骤中所需的必要的4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-4-取代的氨基吡啶可如本领域中充分描述的那样由2,4-二氯-6-甲基吡啶和氮杂环丁烷通过铜介导的ullmann偶联条件或钯介导的buchwald-hartwig偶联条件制备。
[0047]
在方案4，步骤d中，可根据保护基利用各种脱保护条件之一实现化合物16（例如pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）脱保护成醇17。例如，当保护基是甲硅烷基醚时，可使用在合适的极性溶剂如thf或1,4-二氧杂环己烷中的许多氟化物源之一，如tbaf、nh4f或kf。更具体地，大约1当量的受保护化合物16（例如pg = 叔丁基二甲基甲硅烷基）可用逐份过量的tbaf在thf中的溶液在室温下处理18-24小时。然后可利用本领域中公知的技术，如萃取法和反相色谱法分离和纯化产物以获得脱保护的醇17。
[0048]
在方案4，步骤e中，17的醇部分可如方案2，步骤a中所述转化成合适的离去基团。更具体地，大约1当量的醇17可在过量的合适胺，如tea或dipea存在下用逐份过量的对甲苯磺酰氯在室温下处理6-24小时。然后可利用本领域中公知的技术，如萃取法和色谱法分离和纯化产物以获得化合物18（lg = ots）。
[0049]
在方案4，步骤f中，化合物18（lg = ots或其它合适的离去基团）可在本领域中公知的条件下被[
18
f]氟化物置换。例如，其中离去基团是甲磺酰基或4-甲基苯磺酰基的化合物18可在合适的极性溶剂，如dmso中在合适的非亲核碱，如k2co3存在下用合适的
18
f源（例如[
18
f]f-）处理以获得化合物19。
18
f氟化物源包括[
18
f]fk
222
。更具体地，可将溶解在无水dmso中的大约1毫克化合物18添加到含有无水[
18
f]fk
222-k2co3（由[
18
f]f制备，获自回旋加速器设施，捕集到离子交换柱上并用kryptofix 222/k2co3在acn中的溶液洗脱，在大约100℃下在无水条件下蒸发）的反应小瓶中，并在氦气气氛下在大约120℃下加热大约10分钟。反应混合物可用适当的hplc溶剂，如etoh、acn和水稀释，产物可利用本领域中公知的技术，如半制备反相柱色谱法纯化，以获得放射性标记化合物19。
[0050]
方案5在方案5，步骤a中，化合物12的芳基醚化可以以类似于方案2，步骤d中所述的方式进行，以获得芳基醚化合物20（r
2 = oh）。技术人员会认识到，合适的离去基团可以是本领域已知的许多离去基团之一，如甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、氯、溴等。另外，技术人员会认识到，这种醚化步骤中所需的必要的4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-4-取代的氨基吡啶可以例如由2,4-二氯-6-甲基吡啶和氮杂环丁烷通过本领域中公知的铜介导的ullmann偶联条件或
钯介导的buchwald-hartwig偶联条件制备。
[0051]
在方案5，步骤b中，20的端羟基可在类似于对方案2，步骤a所述的条件下转化成合适的离去基团（例如lg = ots、oms、cl），以获得化合物21。
[0052]
在方案5，步骤c中，化合物21的合适的离去基团可在类似于方案4，步骤f中所述的条件下被[
18
f]氟化物置换，以获得化合物22（r
2 = 18
f）。
[0053]
制备和实施例以下制备和实施例进一步例示本发明并代表本发明的化合物的典型合成。试剂和原材料是易得的或可以是本领域普通技术人员容易合成的。应该理解的是，制备和实施例作为示例而非限制给出，并可由本领域普通技术人员作出各种修改。
[0054]
本发明的化合物的r-或s-构型可通过标准技术确定，如x-射线分析和与手性-hplc保留时间的相关性。
[0055]
在agilent
® hp1100液相色谱系统上进行lc-es/ms。在连接到hp1100 hplc的质量选择检测器四极杆质谱仪上进行电喷雾质谱测量（在正模式和/或负模式下获取）。lc-ms条件（低ph）: 柱: phenomenex
® gemini
® nx c18 2.1
ꢀ×ꢀ
50 mm 3.0 μm；梯度: 在3 min内5-100% b，然后100% b保持0.75 min，柱温: 50℃ /-10℃；流速: 1.2 ml/min；溶剂a: 含0.1% hcooh的去离子水；溶剂b: 含0.1%甲酸的acn；波长214 nm。替代性lc-ms条件（高ph）:柱:xterra
® ms c18柱2.1
×
50 mm，3.5 μm；梯度:5%溶剂a保持0.25 min、梯度在3 min内从5%至100%的溶剂b，和100%的溶剂b 保持0.50 min，或在3 min内从10%至100%的溶剂b，和100%的溶剂b保持0.75 min；柱温:50℃ /-10℃；流速: 1.2 ml/min；溶剂a:10 mm nh4hco
3 ph 9；溶剂b:acn；波长: 214 nm。
[0056]
在配有质量选择检测器质谱仪和leap
®
自动进样器/级分收集器的agilent
® 1200 lc-es/ms上进行制备反相色谱法。高ph法在75 x 30 mm phenomenex
® gemini
®-nx上运行，5
ꢀµ
粒度柱，具有10 x 20 mm保护柱。流速85 ml/min。除非另行指明，洗脱剂是在乙腈中的10 mm碳酸氢铵（ph 10）。
[0057]
在bruker aviii hd 400 mhz nmr能谱仪上以cdcl3或dmso溶液获得以ppm报道的nmr谱，使用残余溶剂[cdcl3，7.26 ppm；(cd3)2so，2.05 ppm]作为参考标准。当报道峰多重性时，可使用以下缩写：s (单峰)、d (双峰)、t (三重峰)、q (四重峰)、m (多重峰)、br-s (宽单峰)、dd (双重双峰)、dt (双重三峰)。当报道耦合常数(j)时，以赫兹（hz）为单位报道。
[0058]
制备1(3r,4s)-3-((r)-1-(4-溴苯基)乙基)-3-甲基-4-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)吡咯烷-2,5-二酮方案1，步骤a: 在-13℃下向dipea（110 ml, 782 mmol）在thf（1 l）中的搅拌溶液
中加入n-buli在己烷中的2.5 m溶液（310 ml, 780 mmol）并将所得混合物搅拌1小时。向这种溶液中加入溶解在thf（200 ml）中的(3r,4r)-3-((r)-1-(4-溴苯基)乙基)-3,4-二甲基吡咯烷-2,5-二酮（100 g, 338 mmol）并将所得混合物在-10℃下搅拌1小时。向所得混合物中加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯的溶液（70 ml, 376 mmol）并将反应混合物在-10℃下搅拌2小时。反应小心地用水（750 ml）淬灭，使用5 n hcl水溶液（~220 ml）将ph调节到~ 3.5，并用mtbe（1 l）萃取该酸化混合物。有机相相继用水（2 x 500 ml）和饱和nacl水溶液（500 ml）洗涤并在减压下浓缩以产生橙色油。该粗物质通过在硅胶上的柱色谱法提纯，用5至30% etoac/己烷洗脱。合并纯的色谱级分并在减压下浓缩以获得标题化合物（87.4 g, 61%收率）。1h nmr (cdcl3) δ 0.02 (s, 9h), 0.80-0.84 (m, 2h), 1.32, (s, 3h), 1.34 (d, j = 7.1 hz, 3h), 3.00 (m, 1h), 3.08 (q, j = 7.1 hz, 1h), 3.31-3.41 (m, 3h) 3.62 (m, 1h), 7.08 (d, j = 8.4 hz, 2h), 7.42 (d, j = 8.4 hz, 2h), 9.05 (s, 1h). es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 424.0, 426.0 (m h)。
[0059]
制备2(3r,4s)-3-((r)-1-(4-溴苯基)乙基)-4-(羟甲基)-3-甲基吡咯烷-2,5-二酮方案1，步骤b: 在室温下经5分钟向(3r,4s)-3-((r)-1-(4-溴苯基)乙基)-3-甲基-4-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)吡咯烷-2,5-二酮（86.5 g, 203 mmol）在dcm（450 ml）中的搅拌溶液中小心地加入tfa（110 ml, 1455 mmol）。将反应搅拌3小时并用dcm（500 ml）稀释。将混合物冷却到5℃，然后加入5 n naoh水溶液直至碱性ph（~ 12）。混合物用水（600 ml）稀释。分离各相，用5 n hcl水溶液将水层酸化到ph ~ 3。这种酸化混合物用mtbe（300 ml）萃取。有机相相继用饱和nahco3水溶液（100 ml）和饱和nacl水溶液（50 ml）洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生为泡沫状白色固体的标题化合物（52.1 g, 79%收率）。1h nmr (cdcl3) δ 1.22, (s, 3h), 1.36 (d, j = 7.2 hz, 3h), 3.10 (dd, j
1 = 6.8hz, j
2 = 4.4 hz, 1h), 3.15 (q, j = 7.2 hz, 1h), 3.52 (dd, j
1 = 11.2hz, j
2 = 4.8 hz, 1h), 3.63 (dd, j
1 = 11.2hz, j
2 = 6.8 hz, 1h), 7.12 (d, j = 8.4 hz, 2h), 7.48 (d, j = 8.4 hz, 2h), 8.58 (s, 1h)。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 324.0, 326.0 (m h)。
[0060]
制备3(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案1，步骤c: 在冷水浴中冷却的烧瓶中向(3r,4s)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮（32 g, 98 mmol）在thf（320 ml）中的搅拌溶液
中小心地逐份加入nabh4（11 g, 300 mmol）。混合物在室温下搅拌整夜。反应在冰/水浴中冷却并在保持温度高于25℃的同时小心地用tfa（160 ml）逐滴处理。在30分钟后，反应混合物用meoh（160 ml）和水（160 ml）处理并搅拌1小时。混合物在40℃下减压浓缩以产生稠浆料，其用dcm（320 ml）和水（200 ml）稀释。混合物用5 n hcl水溶液（100 ml）处理。加入水（100 ml），接着加入足够的5 n naoh水溶液以达到ph ~ 14。所得乳状液用meoh（30 ml）处理。分离有机层，相继用水（100 ml）、5 n naoh水溶液（10 ml）两次和饱和nacl水溶液（150 ml）洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。所得残留物通过在硅胶上的快速色谱法提纯，用dcm/meoh使用100/0至90/10的梯度洗脱以产生标题化合物（15 g, 49%收率）。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 312.0, 314.0 (m h)。
[0061]
制备4甲磺酸[(3r,4r)-4-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基]甲基酯方案2，步骤a: 在室温下在n2气氛下向(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮（5.6 g, 18 mmol）和tea（3.6 g, 36 mmol）在dcm（56 ml）中的搅拌溶液中小心地逐滴加入甲磺酰氯（1.7 ml, 21 mmol）。将反应搅拌2小时并用dcm和水稀释。分离各相，水层用更多的dcm萃取。合并有机萃取物，用饱和nacl水溶液洗涤，经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供为白色固体的标题化合物（7.0 g, 96%收率）。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 389.8, 391.8 (m h)。
[0062]
制备5(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(氟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案2，步骤b: 向甲磺酸[(3r,4r)-4-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基]甲基酯（2.1 g, 5.2 mmol）在ipa（15 ml）中的溶液中加入csf（13 g, 8.3 mmol）。混合物在微波中在130℃下加热3小时并冷却到室温。所得反应混合物用水和etoac稀释。分离各层并用etoac萃取水相。合并有机萃取物，经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以产生白色泡沫。该程序在相同规模下再进行一次，合并这两批并通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用70/30至0/100的梯度洗脱以产生标题化合物（3.2 g, 88%收率），其纯度足够用于后续使用。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 314.0, 316.0 (m h)。
[0063]
制备6
(3r,4r)-4-(氟甲基)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案2，步骤c: 在反应小瓶中向(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(氟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮（3.2 g, 8.9 mmol）在甲苯（80 ml）中的溶液中加入tmeda（1.1 g, 9.7 mmol）、pd(oac)2（80 mg, 0.36 mmol）和丁基二(1-金刚烷基)膦（0.37 g, 0.98 mmol）。密封小瓶并在一氧化碳和氢气的1:1混合物下在95℃和65 psi下搅拌整夜。将反应混合物冷却到室温，用etoac稀释，过滤并在减压下浓缩。残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用90/10至0/100的梯度洗脱以提供4-[(1r)-1-[(3r,4r)-4-(氟甲基)-3-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲醛（2.6g）。将这种分离物质溶解在etoh（104 ml）中，在n2气氛下冷却到0℃并用nabh4（0.45 g, 12 mmol）处理。在30分钟后，通过缓慢加入饱和nh4cl水溶液（15 ml）和水（15 ml）而淬灭反应混合物。一旦析气停止，反应混合物在减压下浓缩，将所得残留物溶解在水和etoac中。分离各层并用etoac萃取水相。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残留物溶解在meoh中（至39.2 ml的总体积），过滤并通过prep-hplc提纯（phenomenex
® gemini
®-nx, 10 μ, 50 x 150mm c-18, 210 nm, 110 ml/min），用acn和含有10 mm nh4hco3并用nh4oh调节到ph ~ 9的水洗脱，经10分钟使用15%至100% acn的梯度（4次等量注入在meoh中的粗产物）。含所需物质的级分在减压下浓缩以产生为无色油的标题化合物（1.8 g, 76%收率）。es/ms (m/z): 266.0 (m h)。
[0064]
制备74-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氯-6-甲基-吡啶在反应小瓶中向2,4-二氯-6-甲基-吡啶（0.7 ml, 5.6 mmol）在甲苯（10 ml）中的溶液中加入氮杂环丁烷（0.38 g, 6.7 mmol）、叔丁醇钠（0.66 g, 6.7 mmol）、2-(二-叔丁基膦基)联苯（0.19 g, 0.61 mmol）和pd(oac)2（0.14 g, 0.61 mmol）。密封小瓶，抽空并用n2回填三次，在搅拌下在100℃下加热整夜。将反应混合物倒入水中，分离各层并用etoac萃取水相。合并的有机萃取物用饱和nacl水溶液洗涤，经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供为区域异构体的混合物的橙色油。通过硅胶上的快速色谱法分离区域异构体，用环己烷/etoac使用100/0至40/60的梯度洗脱。
[0065]
最先洗脱的区域异构体是2-(氮杂环丁烷-1-基)-4-氯-6-甲基-吡啶（0.32 g, 30%收率）。1h nmr (cdcl3) δ 2.32-2.43 (m, 5h), 3.99-4.04 (m, 4h), 6.05 (s, 1h)和6.45 (s, 1h)。es/ms (m/z): 183.0 (m h)。
[0066]
第二个洗脱的区域异构体是标题化合物（0.48 g, 43%收率）。1h nmr (cdcl3) δ 2.34-2.50 (m, 5h), 3.92-3.98 (m, 4h), 5.98-6.00 (m, 1h)和6.06-6.08 (m, 1h)。
es/ms (m/z): 183.0 (m h)。
[0067]
制备8醚化催化剂混合物将cs2co3（80 g, 245 mmol）、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)（2.3 g, 2.5 mmol）、2-(二-叔丁基膦基)-2',4',6'-三异丙基-3,6-二甲氧基-1,1'-联苯（5.0 g, 9.8 mmol）和甲苯（500 ml）的混合物置于圆底烧瓶中。密封烧瓶，抽空并用n2回填三次，在搅拌下在85℃下加热1小时。将反应混合物冷却到室温，在减压下除去溶剂以产生干粉，其在研钵研杵中研磨以产生86g绿色细粉。
[0068]
制备92-氯-4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-吡啶在反应瓶中向4-溴-2-氯-6-甲基-吡啶（0.97 g, 4.7 mmol）在dmso（3.3 ml）中的溶液中加入3-氟氮杂环丁烷盐酸盐（0.76 g, 6.8 mmol）、l-脯氨酸（0.33 g, 2.8 mmol）、cs2co3（0.53 g, 16 mmol）和cui（0.55 g, 2.8 mmol）。在n2气氛下密封瓶，并在搅拌下加热到95℃整夜。反应混合物用etoac和水稀释，分离各层并用etoac萃取水相。有机萃取物用饱和nacl水溶液洗涤，经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供棕色油。所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用100/0至40/60的梯度洗脱以获得为浅黄色固体的标题化合物（422 mg, 45%收率）。es/ms (m/z): 201.0 (m h)。
[0069]
制备10(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷]氧基甲基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案4，步骤a: 向(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮（2.2 g, 7.1 mmol）在dcm（70 ml）中的搅拌溶液中加入叔丁基二甲基氯硅烷（1.6 g, 11 mmol）、咪唑（0.72 g, 11 mmol）和4-二甲基氨基吡啶（43mg, 0.35 mmol）。所得混合物在n2气氛下搅拌整夜。反应混合物用水淬灭，分离各层并用dcm萃取水层。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩。所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用100/0至50/50的梯度洗脱以提供为白色固体的标题化合物（2.8 g, 93%收率）。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 426.0, 428.0 (m h)。
[0070]
制备11
(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案4，步骤b: 在反应小瓶中向(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（2.8g, 6.5 mmol）在甲苯（58 ml）中的溶液中加入tmeda（0.82 g, 7.1 mmol）、pd(oac)2（58 mg, 0.26 mmol）和丁基二(1-金刚烷基)膦（0.27 g, 0.71 mmol）。密封小瓶并在一氧化碳和h2的1:1混合物下在95℃和65 psi下搅拌整夜。反应混合物用etoac稀释，过滤并在减压下浓缩。所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用100/0至0/100的梯度洗脱，以产生为黄色油的4-[(1r)-1-[(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲醛（2.1 g），其纯度足够用于后续使用。将4-[(1r)-1-[(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲醛溶解在etoh（64 ml）中，冷却到0℃，并用nabh4（0.28 g, 7.2 mmol）处理。反应混合物在氮气气氛下在0℃下搅拌2小时并通过缓慢加入饱和nh4cl水溶液（10 ml）和水（10 ml）而淬灭。一旦析气停止，反应混合物在减压下浓缩。将所得残留物溶解在水和etoac中。分离各层并用etoac萃取水相。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩。所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用100/0至100/0的梯度洗脱以产生为无色油的标题化合物（1.5 g），其纯度足够用于后续使用。es/ms (m/z): 378.2 (m h)。
[0071]
制备12(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案4，步骤c: 在反应小瓶中向(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（0.22 g, 0.54 mmol）在甲苯（5.4 ml）中的溶液中加入4-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氯-6-甲基-吡啶（0.13 g, 0.64 mmol）和醚化催化剂混合物（0.60 g）。密封小瓶，抽空并用n2回填三次，在搅拌下加热到85℃ 4小时。将反应混合物冷却到室温，用更多的4-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氯-6-甲基-吡啶（37 mg, 0.19 mmol）和醚化催化剂混合物（0.30 g）处理。密封小瓶，抽空并用n2回填三次，在搅拌下加热到85℃ 13小时。将反应混合物倒在nh4cl的饱和水溶液上。分离各层并用dcm
萃取水相。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供橙色油。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用100/0至0/100的梯度洗脱以产生为黄色油的标题化合物（0.24g, 85%收率）。es/ms (m/z): 524.2 (m h)。
[0072]
制备13(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案4，步骤d: 在n2气氛下向(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（0.24 g, 通过lcms uv为90%纯, 0.41 mmol）在thf（4.1 ml）中的溶液中加入四丁基氟化铵在thf中的1n溶液（0.49 ml, 0.49 mmol）。反应混合物在室温下搅拌2.5小时并用另外的四丁基氟化铵在thf中的1n溶液（0.21 ml, 0.21 mmol）处理。所得混合物在室温下搅拌整夜并通过加入nh4cl的饱和水溶液淬灭。分离各层并用etoac萃取水相。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残留物溶解在meoh中（至9.8 ml的总体积），过滤并通过prep-hplc提纯（phenomenex
® gemini
®‑
nx, 10 μ, 50 x 150 mm c-18, 219 nm, 120 ml/min），用acn和用浓nh4oh水溶液调节到ph ~ 9的水[0.5毫升浓nh4oh/2.5升水]经11分钟使用15%至100% acn的梯度洗脱，以提供标题化合物（99 mg, 59%收率）。es/ms (m/z): 410.0 (m h)。
[0073]
制备144-甲基苯磺酸[(3r,4r)-4-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基]甲基酯方案4，步骤e: 在n2下向(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮（50 mg, 0.12 mmol）和tea（62 mg, 0.61 mmol）在dcm（5 ml）中的冰浴冷却溶液中加入对甲苯磺酰氯（58 mg, 0.31 mmol）。将混合物搅拌到室温整夜。反应混合物用另外的tea（62 mg, 0.61 mmol）和对甲苯磺酰氯（58 mg, 0.31 mmol）处理并在室温下搅拌7小时。混合物用另外的tea（62 mg, 0.61 mmol）和对甲苯磺酰氯（58 mg, 0.31 mmol）处理并在室温下搅拌整夜。反应混合物在减压下浓缩并通过硅胶上的快速色谱法提纯，用环己烷/etoac使用90/10至0/100的梯
度洗脱，以产生无色玻璃状的标题化合物（35 mg, 47%收率）。es/ms (m/z): 564.2 (m h)。
[0074]
制备15(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-3,4-二甲基吡咯烷-2,5-二酮方案3，步骤a: 向在氮气气氛下浸没在室温水浴中的(3s)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-3-甲基吡咯烷-2,5-二酮（1.2 g, 4.1 mml）在无水thf（34 ml）中的溶液中逐份加入在thf中的0.9 m双(三甲基甲硅烷基)氨基锂（10 ml, 9.3 mmol）。将反应混合物搅拌1.5小时。经5分钟逐滴加入碘甲烷（预先经过碱性氧化铝）在thf中的溶液（2 ml）。在搅拌1小时后，使用饱和nh4cl水溶液淬灭反应。浓缩反应以除去大部分thf，残留物在etoac和水之间分配。除去水层，有机层经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。所得残留物使用在二氧化硅（80 g）上的正相色谱法提纯，用20-30% etoac/己烷的梯度经30 min洗脱以在溶剂蒸发后获得为无色油的标题化合物（1.2 g, 95%收率）。1h nmr (400 mhz, cdcl3): δ 0.94 (d, j= 7.5 hz, 3h), 1.16 (s, 3h), 1.37 (d, j= 7.1 hz, 3h), 3.03 (q, j= 7.5 hz, 1h), 3.16 (q, j= 7.1 hz, 1h), 7.08-7.11 (d, 2h), 7.45-7.49 (d, 2h), 7.90 (bs, 1h)。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 309.8, 311.8 (m h)。
[0075]
制备16(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮方案3，步骤b: 向在氮气下搅拌并在冰/水浴中冷却的(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2,5-二酮（3.86 g, 12.2 mmol）在thf（50 ml）中的溶液中经25分钟逐份加入硼烷二甲硫醚络合物（6.10 ml, 61.1 mmol）。混合物在室温下搅拌21小时。反应混合物在冰/水浴中冷却并小心地用meoh（10 ml）淬灭。反应在减压下浓缩，溶解在meoh（25 ml）中并浓缩。将浓缩物溶解在tfa（20 ml）中，在冰/水浴中冷却，并经30分钟逐份加入nabh4（2.36g, 61.1 mmol），同时用n2吹扫反应烧瓶。将反应混合物搅拌另外30分钟，然后用冰/水（100 ml）淬灭并用etoac（3 x 50 ml）萃取。合并的有机萃取物用饱和nacl水溶液洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用己烷/etoac使用95/5至25/75的梯度洗脱，以产生为白色固体的标题化合物（1.84 g, 51%收率）。es/ms (
79
br, 81
br的m/z): 295.9 / 297.9 (m h)。
[0076]
制备174-[(1r)-1-[(3r,4r)-3,4-二甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲醛
方案3，步骤c: 向100ml parr高压釜中装载(3r,4r)-3-[(1r)-1-(4-溴苯基)乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮（1.75 g, 5.91 mmol）、乙酸钯(ii)（54 mg, 0.24 mmol）、丁基二-1-金刚烷基膦（catacxium
® a, 255 mg, 0.675 mmol）、无水甲苯（50 ml）和tmeda（1.0 ml, 6.6 mmol）。密封高压釜，将反应混合物置于合成气体（h
2 / co (1:1, 75 psi)）的气氛下，加热到95℃，并搅拌16小时。将反应混合物冷却，悬浮液经硅藻土垫过滤。滤饼用etoac洗涤，收集的滤液在减压下浓缩以提供琥珀色油。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用dcm / meoh使用100:0至9:1的梯度洗脱以产生标题化合物（1.36 g, 83%收率）。es/ms (m/z): 246.0 (m h)。
[0077]
制备18(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮方案3，步骤d: 将nabh4（263 mg, 6.82 mmol）一次性添加到4-[(1r)-1-[(3r,4r)-3,4-二甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲醛（1.36 g, 4.55 mmol）在etoh（60 ml）中的悬浮液中，在冰/水浴中冷却。在45分钟后，反应用水（10 ml）淬灭并在减压下浓缩。所得浓缩物用水（50 ml）稀释并用etoac（2 x 50 ml）萃取。合并的有机萃取物用饱和nacl水溶液洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用dcm / meoh使用100:0至9:1的梯度洗脱，以产生标题化合物（1.02 g, 91%收率）。es/ms (m/z): 248.8 (m h)。
[0078]
制备19叔丁基-[1-(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)氮杂环丁烷-3-基]氧基-二甲基-硅烷向反应容器中装载2,4-二氯-6-甲基吡啶（2.05 g, 12.3 mmol）、3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐（2.06 g, 18.4 mmol）、cs2co3（14.0 g,43.0 mmol）、l-脯氨酸（856 mg, 7.3 mmol）、cui（1.4 g, 7.3 mmol）和dmso（15 ml）。该容器用隔膜密封，抽空并用n2回填四次。反应混合物在90℃下加热16小时并冷却到室温。反应混合物经纸过滤，滤饼用etoac洗涤。滤液用水稀释并用etoac（3 x 50 ml）萃取。合并的有机萃取物用饱和nacl水溶液洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩以产生区域异构体的粗制混合物（2.22 g）。
[0079]
将区域异构体的粗制混合物部分溶解在dcm（50 ml）中并用叔丁基二甲基氯硅烷
（2.60 g, 16.8 mmol）和咪唑（1.15 g, 16.8 mmol）处理。在室温下搅拌45分钟后，反应用水（75 ml）稀释并用dcm（2 x 50 ml）萃取。合并的有机萃取物经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用etoac / 己烷使用2:98至30:70的梯度洗脱，以作为第二个洗脱的区域异构体获得标题化合物（1.88 g, 54%收率）。es/ms (
35
cl, 37
cl的m/z ): 313.0 / 315.0 (m h)。
[0080]
制备201-(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)氮杂环丁烷-3-醇叔丁基-[1-(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)氮杂环丁烷-3-基]氧基-二甲基-硅烷（3.03 g, 9.67 mmol）在thf（50 ml）中的溶液在冰/水浴中冷却并用tbaf在thf中的1.0 m溶液（39 ml, 39 mmol）处理。在室温下搅拌1小时后，反应混合物在减压下浓缩。将浓缩物溶解在dcm（150 ml）中，相继用水和饱和nacl水溶液洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用etoac / 己烷使用10:90至100:0的梯度洗脱，以获得标题化合物（1.69 g, 88%收率）。es/ms (
35
cl, 37
cl的m/z): 199.0 / 201.0 (m h)。
[0081]
制备21(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮方案5，步骤a: 向反应容器中装载(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮（1.0 g, 4.1 mmol）、1-(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)氮杂环丁烷-3-醇（1.7 mg, 8.5 mmol）、cs2co3（3.5 g, 10.8 mmol）、tbubrettphos（216 mg, 0.445 mmol）、pd2(dba)3（102 mg, 0.11 mmol）和甲苯（30 ml）。该容器用隔膜密封，抽空并用n2回填四次。反应混合物在100℃下加热14小时并冷却到室温。将反应混合物倒入饱和nh4cl水溶液（40 ml）中并用dcm（3 x 30 ml）萃取。合并的有机萃取物经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用meoh / dcm使用0:100至10:90的梯度洗脱。产物通过c18二氧化硅上的高ph反相色谱法进一步提纯，用acn / 10 mm nh4hco3水溶液使用25:75至42:58的梯度洗脱以获得标题化合物（412 mg, 22%收率）。es/ms (m/z): 410.2 (m h)。
[0082]
制备224-甲基苯磺酸[1-[2-[[4-[(1r)-1-[(3r,4r)-3,4-二甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯基]甲氧基]-6-甲基-4-吡啶基]氮杂环丁烷-3-基]酯
方案5，步骤b: 在氮气下向(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮（115 mg, 0.26 mmol）和tea（131 mg, 1.28 mmol）在dcm（5 ml）中的溶液中加入对甲苯磺酰氯（122 mg, 0.64 mmol）。反应混合物在室温下搅拌17小时。反应在减压下浓缩，所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用己烷/etoac使用90/10至0/100的梯度洗脱，以获得为白色泡沫的标题化合物（114 mg, 79%收率）。es/ms (m/z): 564.2 (m h)。
[0083]
制备23(3r,4r)-4-(氟甲基)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案2，步骤d: 向(3r,4r)-4-(氟甲基)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（151.3 mg, 0.56 mmol）在甲苯（5.6 ml）中的溶液中加入1-(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)氮杂环丁烷-3-醇（224.3 mg, 1.13 mmol）和catkit醚化混合物（630.1 mg, 1.69 mmol）。密封小瓶，将反应混合物抽真空并用氮气回填3次。所得混合物在85℃下搅拌20小时。在冷却到室温后，将反应混合物倒入nh4cl的饱和水溶液。分离各层并用dcm萃取水相。合并的有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供橙色油。将残留物溶解在meoh中并通过prep-hplc提纯（c-18 phenomenex
® gemini-nx, 10 μ, 50 x 150 mm, 120 ml/min, 运行11 min, 219 nm），用15%
ꢀ‑ꢀ
100% acn/用浓nh4oh调节到大约ph ~ 9的水的溶液（0.5毫升浓nh4oh/2.5升水）梯度洗脱。从所需产物级分中蒸发溶剂，所得残留物通过制备sfc进一步提纯（bzs柱, 150 x 4.6 mm, 5 μ 120 g/min, 出口压力100.0巴），用17%的含0.2% dmea的meoh在co2中的混合物洗脱，以在溶剂蒸发后产生标题化合物（27 mg, 11%收率）。es/ms (m/z): 428.2 (m h)。
[0084]
制备24(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮
向(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（462.3 mg, 1.13 mmol）在甲苯（11.26 ml）中的溶液中加入2-氯-4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-吡啶（248.6 mg, 1.24 mmol）和catkit醚化混合物（1257 mg, 3.38 mmol）。密封小瓶，将反应混合物抽真空，用氮气回填3次，并在85℃下搅拌整夜。将反应混合物倒入nh4cl的饱和水溶液。分离各层并用dcm萃取水相。合并的有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供橙色油。所得残留物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用0-100% etoac/环己烷梯度洗脱，以在所需色谱级分蒸发后获得为黄色泡沫的标题化合物（318 mg, 52%收率）。es/ms (m/z): 428.2 (m h)。
[0085]
制备25(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-(羟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮在n2下向(3r,4r)-4-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（370.7 mg, 0.59 mmol）在thf（5.9 ml）中的溶液中逐滴加入tbaf在thf中的1m溶液（1.0 ml），反应混合物在室温下搅拌6小时。加入nh4cl的饱和水溶液并分离各层。水相用etoac萃取，经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残留物溶解在meoh（9.8 ml）中，过滤，甲醇滤液通过制备hplc提纯（c-18 phenomenex
® gemini-nx, 10 μ, 50 x 150mm, 120 ml/min, 运行11 min, 219 nm），用15%
ꢀ‑ꢀ
100% acn/用浓nh4oh调节到大约ph ~ 9的水的溶液（0.5毫升浓nh4oh/2.5升水）梯度洗脱，以在色谱级分蒸发后提供为黄色油的标题化合物（180 mg, 72%收率）。es/ms (m/z): 428.2 (m h)。
[0086]
实施例1(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-(氟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮
方案2，步骤d: 在反应小瓶中向(3r,4r)-4-(氟甲基)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3-甲基-吡咯烷-2-酮（0.25g, 0.92 mmol）在甲苯（9 ml）中的溶液中加入4-(氮杂环丁烷-1-基)-2-氯-6-甲基-吡啶（0.22 g, 1.1 mmol）和醚化催化剂混合物（1.0 g）。密封小瓶，抽空并用n2回填三次，在搅拌下加热到85℃ 20小时。将反应混合物倒在nh4cl的饱和水溶液上。分离各层并用dcm萃取水相。有机萃取物经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩以提供橙色油。将油溶解在meoh中（至9.8 ml的总体积），过滤并通过prep-hplc提纯（phenomenex
® gemini
®-nx, 10 μ, 50 x 150mm c-18, 219 nm, 120 ml/min），用acn和用浓nh4oh水溶液调节到ph ~ 9的水[0.5毫升浓nh4oh/2.5升水]经11分钟使用15%至100% acn的梯度洗脱，以提供标题化合物（0.21 g, 54%收率）。es/ms (m/z): 412.2 (m h)。
[0087]
实施例2(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮方案3，步骤e: 向反应容器中装载(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-(羟甲基)苯基]乙基]-3,4-二甲基-吡咯烷-2-酮（101 mg, 0.401 mmol）、2-氯-4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-吡啶（123 mg, 0.61 mmol）、cs2co3（292 mg,0.90 mmol）、tbubrettphos（18 mg, 0.037 mmol）、pd2(dba)3（8 mg, 0.009 mmol）和甲苯（6 ml）。该容器用隔膜密封，抽空并用n2回填四次。反应混合物在100℃下加热18小时并冷却到室温。将反应混合物倒入饱和nh4cl水溶液（20 ml）中并用etoac（2 x 25 ml）萃取。合并的有机层经na2so4干燥，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶上的快速色谱法提纯，用etoac/己烷使用1:9至100:0的梯度洗脱，以获得标题化合物（123 mg, 71%收率）。es/ms (m/z): 412.2 (m h)。
[0088]
实施例3(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(3-氟氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-(氟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮
(v/v)混合物在4 ml/min下洗脱。将产物级分收集在含抗坏血酸（10 mg/ml）/ wfi（20 ml）的烧瓶中。稀释产物混合物经过tc18固相萃取柱，该柱用10毫升抗坏血酸（10 mg/ml）/wfi冲洗。用200-proof usp级etoh（1 ml）将放射性标记产物从spe柱洗脱到预装10毫升制剂基料（formulation base）（在0.9 m nacl水溶液中的抗坏血酸）的制剂烧瓶（formulation flask）中。该柱用4毫升制剂基料冲洗，并将洗液与制剂烧瓶的内容物混合。所得溶液经过除菌0.2 μm膜过滤器进入预填充15毫升0.9 m nacl水溶液的无菌过滤排气（filter-vented）的小瓶中。在该合成过程中使用单次制备，衰变校正收率为30.9%。
[0091]
实施例5(3r,4r)-3-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-([
18
f]氟甲基)-3-甲基-吡咯烷-2-酮方案4，步骤f: 实施例5的化合物可在与实施例4中所述的那些类似的条件下使用无水kryptofix 222-k2co3[
18
f]氟化物和4-甲基苯磺酸[(3r,4r)-4-[(1r)-1-[4-[[4-(氮杂环丁烷-1-基)-6-甲基-2-吡啶基]氧基甲基]苯基]乙基]-4-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基]甲基酯（1 mg）制备。在该合成过程中使用总共9次制备，平均衰变校正收率为19.8%
ꢀ±ꢀ
7.9%。
[0092]
通过cgrp受体拮抗剂抑制camp生成将hcgrp（人降钙素基因相关肽）受体功能性地偶联到gαs蛋白。hcgrp的刺激导致细胞内camp的合成增加，并可通过加入受体拮抗剂阻断。受体活性因此是细胞内存在的camp量的反映，其可使用标准体外技术检测。
[0093]
细胞培养: 使内源性表达hcgrp受体的培养的sk-n-mc成神经细胞瘤细胞（atcc）在补充了10%热灭活胎牛血清（fbs；gibco
®
）、非必需氨基酸（gibco
®
）、1mm丙酮酸钠、2 mm l-谷氨酰胺、100 u/ml青霉素和10 μg/ml链霉素的eagle's最低必需培养基（hyclone
tm
）中生长至大约70%汇合。在提供新鲜培养基后，细胞在37℃下温育整夜。在测定当天，使用accutase
®
（mp biomedicals）分离细胞，重悬在测定缓冲液 [hank’s平衡盐溶液/ dulbecco’s磷酸盐缓冲盐水，含有各100 mg/ml的cacl2和mgcl2（混合1:2）、3.3 mm 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸、0.03%牛血清白蛋白和0.5 mm 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤（作为camp抑制剂）]中，并以3-5k/孔接种到384孔聚-d-赖氨酸涂布的白色平板（bd biosciences）中。
[0094]
抑制camp生成: 对于剂量-响应研究，将化合物在二甲亚砜中1:3连续稀释，然后1:10稀释到测定缓冲液中。将人cgrp（0.8 nm；bachem）作为hcgrp受体的受体特异性激动剂与稀释的化合物混合，并在它们的ec
80
浓度下作为激发刺激物（challenge stimulant）添加到细胞中。
[0095]
数据分析: 根据供应商说明书，使用htrf技术（cisbio）量化细胞内camp的量。简言之，camp-d2缀合物和抗camp-穴状化合物缀合物在裂解缓冲液中用处理过的细胞在室温
b. susan，k.-h. switek和h. braunger, j label compd radiopharm 2006；49: 421-427）稀释至520 pm的4x储备浓度（目标130 pm/孔，最终浓度）。通过将[3h]bibn-4096放射性配体（在62.5 μl测定缓冲液中）添加到连续稀释的受试化合物和50 μl的sk-n-mc膜（在测定缓冲液中；20 μg/孔）中而开始结合测定。总测定体积为250 μl/孔。在60分钟的温育期后，通过将200 μl转移到用0.3%聚乙烯亚胺（pei）预处理60分钟并使用405 ts洗板机（biotek
®
）在冰冷的50 mm tris-hcl（ph 7.4）中洗涤三次的gf/b whatman（millipore）中而终止反应。该板随后用冰冷的50mm tris-hcl缓冲液（ph 7.4）洗涤三次。将板干燥整夜。将emulsifier-safe
tm
（perkinelmer
®
）添加到过滤板中（100
ꢀµ
l/孔）。
[0102]
数据分析: 可以使用microbeta
® trilux scintillation counter（perkinelmer
®
）计数结合放射性。特异性结合被定义为可被10 μm bibn-4096（mce
® medchemexpress）置换的计数。使用四参数逻辑曲线拟合程序（graphpad prism v8.3.0）计算相对ic
50
值。由以下方程计算化合物的平衡解离结合常数（ki）：k
i = ic
50
/(1 [l]/kd)其中ic
50 = 导致结合活性的50%抑制的化合物浓度，[l] = 用于该实验的放射性配体浓度，k
d = 由饱和结合分析测定的放射性配体的平衡解离常数。计算的ki值作为平均值和sem报道。
[0103]
结果: 这一结合亲和力表征程序用于确定实施例1-3各自的ki，其概括在下表2中。这三种化合物各自表现出对人cgrp受体异源二聚体的高亲和力特异性结合。
[0104]
表2. cgrp结合亲和力结果ki值是平均值，表达到3个有效位数。平均值的标准误差（sem）用与平均值相同的小数位数表示。n是测试次数。
[0105]
体外测定abcb1人p-糖蛋白（pgp）的外排细胞培养: 稳定表达人野生型abcb1 (pgp)的mdckii细胞获自netherlands cancer institute（amsterdam, the netherlands）。如先前所述保存mdck细胞（desai等人, mol pharm 10:1249-1261, 2013）。
[0106]
穿过mdck细胞的双向转运: 该测定基本如先前所述进行（desai等人, mol pharm 10:1249-1261, 2013）。使用由10 mm dmso储液（最终dmso浓度为0.05%）稀释的5 μm底物浓度和单个60分钟时间间隔，双向测量跨过未受抑制和受抑制的细胞单层的转运。2.5 μm的实施例1的化合物用于选择性抑制pgp。作为每60分钟转运的质量相对于总回收质量的斜率估算表观渗透系数（papp）。在各细胞系中在不存在或存在抑制剂的情况下计算基底-顶端（basal-to-apical）（b-a）/顶端-基底（apical-to-basal）（a-b）papp比率作为净外排率
（ner）。
[0107]
结果：测定实施例1化合物的pgp外排的ner为1.9，并测定实施例2的pgp外排的ner为1.6。
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体内大鼠示踪剂分布和动力学研究大鼠中的示踪剂分布和脑摄取示踪剂混合说明书储备制剂: 在25% hp-bcd/pw中以0.5 mg/ml制备示踪剂储备溶液（针对盐重量校正）。充分涡旋30秒，置于浴式超声中30分钟。确认储备制剂是清澈溶液或均质悬液。可使用酸（10 μl乙酸）或碱（10 μl 5n naoh）、探头超声或声波浴以助于溶解。
[0109]
最终给药制剂: 如果储备制剂是溶液或均质悬液，允许储备溶液在室温下静置5分钟，并确认和记录储备制剂的外观。用25% hp-bcd/pw将储备溶液稀释到适当的剂量浓度。将最终给药溶液涡旋30秒。最终示踪剂给药溶液用于在适当的基质中生成lc/ms/ms校准标准。
[0110]
研究群体: 在eli lilly and company和preclinomics institutional animal care and use committee批准的方案下进行动物研究。20只体重200-300g的sprague-dawley大鼠获自harlan sprague dawley inc.（indianapolis, in）并随机分成4组，每组5只动物。在研究前，动物可随意获取食物和水。
[0111]
live phase方法: 每个剂量组使用5只动物。每只动物接受10 μg/kg的cgrp示踪剂化合物，其在侧尾静脉中静脉给药。在5、10、20或40分钟存活间隔期后，通过颈脱位接着断头或活体断头（live decapitation）对动物实施安乐死。
[0112]
将躯干血收集在edta-涂布的eppendorf管中并储存在湿冰上直至研究完成。迅速取出全脑，并用无菌水轻轻冲洗。解剖额皮质、海马体、小脑、脑干和纹状体脑组织，称重，储存在1.5 ml eppendorf管中，并放置在湿冰上直至live phase研究完成。
[0113]
使用未用药受试对象，收集血液和七个皮质脑组织样品以用于生成空白和标准曲线样品。
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示踪剂提取 & 样品制备方法组织
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将组织样品保存在湿冰上直至live phase完成。收集自受试对象和未用药对象的组织样品在preclinomics（indianapolis, in, usa）匀浆，并立即在湿冰上送到ait bioscience（indianapolis, in, usa）以便离心，用excel表格指示组织重量、添加到所有组织样品中的acn 0.1% hcooh的量、和如何将未用药组织（naive tissues）加标（spiked for standards）。关于在preclinomics进行的加工的细节如下：将含有0.1% hcooh的acn以四倍于组织样品重量的体积添加到各组织样品中（例如，将600 μl acn添加到150 mg脑组织中）。通过探头超声处理将样品匀浆。标准曲线是6点曲线，范围为0.3-60 ng/g，线性回归，相关系数r2最小值≥ 0.95。由用计算体积的标样（由在live phase的过程中使用的示踪剂给药溶液制备）加标的（相同器官的）对照组织基质匀浆制备校准标样。将匀浆的组织样品和加标的标样在湿冰上转移到ait bioscience。一旦到达ait biosciences，所有匀浆样品在14,000 rpm下离心20分钟。上清液用内标溶液（在水中的1.0 ng/ml苯海拉明）以1:4的比率稀释。在稀释上清液后，如果孔板中的总样品体积太小以致无法注射，使用流动相acn:水:0.1% hcooh（20:80:0.1）以1:1的比率进行额外稀
释。将该溶液充分混合，并通过lc/ms/ms分析示踪剂化合物。由于样品体积小而造成的额外稀释在回归分析过程中应用适当的稀释因子。
[0115]
血液样品
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将全血样品保存在湿冰上直至live phase完成。血液样品在14,000 rpm下离心20分钟。在离心后，将血浆样品转移到带有标签的管中，储存在湿冰上，并（与组织样品一起）运送到ait bioscience以分析阻断剂试验制品。将200 μl含有0.1% hcooh的acn添加到各50 μl血浆样品中。将样品置于超声水浴中5分钟，然后在14,000 rpm下离心20分钟。标准曲线是6点曲线，范围为0.1-30 ng/ml，线性回归相关系数r2最小值≥ 0.95。由用计算体积的标样（由在live phase的过程中使用的示踪剂给药溶液制备）加标的对照血浆制备校准标样。上清液用内标溶液（在水中的1.0 ng/ml苯海拉明）以1:3的比率稀释。然后将该溶液充分混合，并通过lc/ms/ms分析示踪剂化合物。
用于小分子萃取的有机溶剂乙腈 0.1%甲酸有机溶剂:组织的量4x组织重量（体积以μl计）有机溶剂:血浆的量200μlacn:50μl血浆用内标溶液（在水中的1.0ng/ml苯海拉明）稀释上清液1体积组织上清液（以μl计）:4体积无菌内标溶液（以μl计）用内标溶液（在水中的1.0ng/ml苯海拉明）稀释上清液1体积血浆上清液（以μl计）:3体积内标溶液（以μl计）用于稀释小样品体积的有机溶剂（任选基于等分试样体积）acn:水:hcooh(20:80:0.1)
[0116]
lc-ms/ms参数使用连接到thermo scientific
tm tsq quantiva
tm
三重四极杆质谱仪（thermo fisher scientific，ma usa）的型号dionex
tm ultimate
tm 3000 lc自动进样器（thermo fisher scientific，ma usa）实现脑组织中的示踪剂浓度的lc-ms/ms分析。将20 μl样品溶液注射到保持在25-30℃的waters beh c18柱（2.1 mm
ꢀ×ꢀ
50 mm；1.7
ꢀµ
m；part # 176000863）上，使用acn: 水: 0.1% hcooh的混合物作为流动相，流速为0.4 ml/min。改变acn: 水的混合物以使被分析物保留时间保持在1-6分钟的范围内（基于lc条件）。从柱中洗脱的示踪剂通过其特征保留时间和质荷比（m/z）识别，并通过与在适当的组织基质中制备的标准曲线进行比较而量化。组织中的示踪剂含量以ng/g组织为单位表示。血浆中的示踪剂含量以ng/ml血浆为单位表示。
[0117]
实施例1
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监测的前体到产物离子转变（precursor to product ion transition）为q1 = 412.32，q3 = 117.229。使用持续2分钟的等度法，保留时间为1.1 min。流动相由水（72.5%）和含0.1% hcooh的acn（27.5%）组成。
[0118]
实施例2
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监测的前体到产物离子转变为q1 = 412.161，q3 = 230.224。使用持续2.5分钟的梯度法，保留时间为1.2 min。流动相由水和含0.1% hcooh的acn在各种比率下组成。梯度条件是从0
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1.7 min 为73%水和27% acn，从1.75 min
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2.3 min梯度至10%水和90% acn和从2.35分钟
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2.5 min 73%水27% b。
[0119]
实施例3
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监测的前体到产物离子转变为q1 = 430.27，q3 = 248.117。使用持续2.3分钟的等度法，保留时间为1.1 min。流动相由水（72.5%）和含0.1% hcooh的acn（27.5%）组成。
[0120]
统计分析: 通过处理组平均示踪剂浓度（ng/g或ng/ml）
±ꢀ
sem概括示踪剂分布。
[0121]
实施例1-3在大鼠中的示踪剂分布和脑摄取数据显示在表3-5中。
[0122]
表3.实施例1 平均示踪剂浓度
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sem，(ng/g)在脑组织区域中，(ng/ml)在血浆中
[0123]
表4. 实施例2 平均示踪剂浓度
ꢀ±ꢀ
sem，(ng/g)在脑组织区域中，(ng/ml)在血浆中
[0124]
表5. 实施例3 平均示踪剂浓度
ꢀ±ꢀ
sem，(ng/g)在脑组织区域中，(ng/ml)在血浆中
[0125]
表3-5的数据表明，在10 μg/kg的示踪剂剂量下，实施例1-3的化合物是脑渗透性的，尤其均匀遍布于脑组织，并在大鼠物种中随时间经过保持恒定b/p比。
再多了解一些
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