1.本公开涉及伤口敷料。2.
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：：文献3.下面列出了被认为与当前公开的主题相关的参考文献作为背景：[0004]-ahmadoryan等人的“蜂蜜在伤口愈合中的生物学特性和治疗活性：叙述性回顾和荟萃分析(biologicalpropertiesandtherapeuticactivitiesofhoneyinwoundhealing:anarrativereviewandmeta-analysis)”，(《组织活力杂志》(journaloftissueviability)，(2016)25(2),98-118)。[0005]-abu-jdayila、al-majeedghzavia、al-malahkim、zaitouns的“浅色和深色蜂蜜的流变热效应(heateffectonrheologyoflight-anddark-coloredhoney)”(《食品工程期刊》(journaloffoodengineering)，(2000)51(1),33-38)。[0006]-fcbiluca、fdbetta、gpirassoldeoliveira、lmpereira、lvaldemirogonzaga、acoliveiracosta,ffett的“热处理前后无刺蜂蜜中5-hmf和碳水化合物的含量(5-hmfandcarbohydratescontentinstinglessbeehoneybycebeforeandafterthermaltreatment)”(《食品化学》(foodchemistry)，(2014)159,244-249)。[0007]-daga、afikoyeselsony、schaffera、shafirs的“以色列鳄梨(perseaamericanamill.)蜂蜜的物理、化学和孢粉学特性(physical,chemicalandpalynologicalcharacterizationofavocado(perseaamericanamill.)honeyinisrael)”(《国际食品科学与技术杂志》(internationaljournaloffoodscienceandtechnology)，(2005)40,1-8)。[0008]-petrov,v.的“通过原子吸收分光光度法测定的一些澳大利亚蜂蜜的矿物成分(mineralconstituentsofsomeaustralianhoneysasdeterminedbyatomicabsorptionspectrophotometry)”(《养蜂研究杂志》(journalofapiculturalresearch)，(1970)9,95-101)。[0009]-priscilamissiodasilva等人“蜂蜜：化学成分、稳定性和真实性(honey:chemicalcomposition,stabilityandauthenticity)”(《食品化学》(foodchemistry)，(2016)196,309–323)。[0010]-neilburton等人的“具有伤口愈合潜力的蜂蜜中自由基的产生和淬灭(freeradicalproductionandquenchinginhoneyswithwoundhealingpotential)”(《抗菌化学疗法杂志》(journalofantimicrobialchemotherapy)(2006)58,773–777)。[0011]-公开号为cn108144109的中国专利申请。[0012]-kanaratnalampang等人的“基于amps的医用伤口敷料水凝胶的设计与制备(designandpreparationofamps-basedhydrogelsforbiomedicaluseaswounddressings)”(《清迈科学杂志》(chiangmaij.sci.)(2007)34(2),183-189)。[0013]-agolon,nkuhnert的“采用先进的电喷雾电离质谱法对选定单糖(包括果糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖和核糖)的“焦糖型”热分解产物进行表征(characterizationof“caramel-type”thermaldecompositionproductsofselectedmonosaccharidesincludingfructose,mannose,galactose,arabinoseandribosebyadvancedelectrosprayionizationmassspectrometrymethods)”(《食品功能》(foodfunct.)(2013)4(7),1040-50)。[0014]-isimkovic、isurina、mvrican的“蔗糖热降解的初级反应(primaryreactionsofsucrosethermaldegradation)”(《分析与应用热解杂志》(j.anal.appl.pyrolysis)(2003)70,493-504)。[0015]-elsohaimysa、masryshd、shehataamg的“不同产地蜂蜜的理化特性(physicochemicalcharacteristicsofhoneyfromdifferentorigins)”(《农业科学年鉴》(annalsofagriculturalsciences)(2015)60(2),279-287)。[0016]-s.durmaza和o.okay的“丙烯酰胺/2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸钠水凝胶的合成与表征(acrylamide/2-acrylamido-2-methylpropanesulfonicacidsodiumsalt-basedhydrogels:synthesisandcharacterization)”(《聚合物》(polymer)(2000)41,3693–3704)。[0017]-oroianm、amarieis、leahua、guttg的“蜂蜜的多元素成分作为其真实性分析的合适工具(multi-elementcompositionofhoneyasasuitabletoolforitsauthenticityanalysis)”(《波兰食品和营养科学杂志》(pol.j.foodnutr.sci.)(2015)65(2),93-100)。[0018]-whitejr.jw的“蜂蜜(honey)”(《食品研究进展》(advancesinfoodresearch)(1978)24,287-374)。[0019]-公开号为wo2015/059501的国际专利申请。[0020]-alwailins等人的“蜂蜜用于伤口愈合、溃疡和烧伤；支持其在临床实践中使用的数据(honeyforwoundhealing,ulcers,andburns；datasupportingitsuseinclinicalpractice)”(《科学世界期刊》(thescientificworldjournal)(2011)11,766–787)。[0021]本公开对上述参考文献的认可不应被推断为意味着这些参考文献以任何方式与当前公开的主题的可专利性相关。
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：[0022]蜂蜜被描述为具有抗菌、抗炎和抗氧化活性，有助于清创作用、刺激伤口再生和加速伤口愈合过程。这种活性可以用过氧化氢的缓慢释放来解释，这是由于伤口渗出物与蜂蜜固有的葡萄糖氧化酶、高渗透压、酸性、高酚含量、淋巴细胞和抗体产生等的相互作用而产生[oryan等人，2016年]。[0023]为了保存蜂蜜的生物活性，应在尽可能低的温度下储存、加工和处理蜂蜜。蜂蜜的温度稳定性随蜂蜜类型和来源而变化。在高于40℃的温度下，大多数类型蜂蜜的生物活性受到影响。在这些温度下，会形成不良产物，如毒性5-羟甲基糠醛(hmf)[例如biluca等人,2014]。这些元素的产生是由于蜂蜜中存在的糖还原端的羧基与氨基酸和蛋白质的游离氨基反应(美拉德反应(maillardreaction))[dasilva等人，2016]。[0024]也有数据支持其在临床实践中的应用，如治疗伤口、溃疡和烧伤[alwaili等人，2011]。[0025]产生过氧化氢的葡萄糖氧化酶在最高55℃的温度下保持稳定，而在55-70℃时分解。其他活性特性在37℃时可能会受到影响[oryan等人，2016]。[0026]蜂蜜浸渍的伤口敷料已被描述，重点是一些蜂蜜的自由基产生[burton等人，2006]。[0027]cn108144109描述了一种含蜂蜜的互穿网络交联结构的水凝胶敷料。具有互穿网络交联结构的水凝胶敷料被描述为具有高强度并且在吸水后不容易崩解。水凝胶被进一步描述为具有高效的瞬时吸收速度和可持续吸收能力，可用于渗液更多的伤口。根据该公开文本，蜂蜜内部的金属离子参与水凝胶的交联，蜂蜜难以稀释和分离出来。交联反应发生在40-60℃(蜂蜜中的酶被破坏的温度)的高温下。据描述，含蜂蜜的水凝胶敷料表现出抗氧化性(这是由于蜂蜜的高温处理)和抑菌活性，为伤口提供湿润的愈合环境，该水凝胶敷料可用于制备医疗用品，具有良好的市场前景。[0028]片状水凝胶技术可以用于开发和制造先进的伤口护理产品，这些产品具有液体吸收、潮湿愈合环境维持和其他完全受控于工艺的特性[nalampang等人，2007]。uv下的交联(自由基聚合)提供了水凝胶的冷加工制造，允许将蜂蜜引入水凝胶中。然而，该工艺需要使用化学光引发剂和交联剂，这可能会降低水凝胶的生物相容性。[0029]wo2015/059501中描述了包含背衬层的伤口敷料，背衬层上设置有不连续的水凝胶层。其中水凝胶的不连续层是水凝胶的离散岛的形式。技术实现要素：[0030]本公开基于以下发现：在水凝胶制造的冷工艺中掺入蜂蜜可显著减少化学光引发剂和交联剂的用量或对化学光引发剂和交联剂的需求，同时保持蜂蜜在水凝胶中的酶活性，从而提供具有改善的生物相容性的伤口敷料。事实上，交联前蜂蜜的存在可以解决使用大量交联剂和聚合引发剂(例如紫外线引发剂)的需要，从而提供更安全的伤口敷料。[0031]因此，本公开旨在提供一种伤口敷料组合物，该伤口敷料组合物包含生物活性蜂蜜(例如被认为具有伤口愈合特性的蜂蜜)，并具有改善的生物相容性和改善的初级伤口护理作用，如下文进一步所描述。[0032]具体地，本文公开了一种伤口敷料组合物，该伤口敷料组合物包含交联的水凝胶支架和嵌入其中的抗菌活性的蜂蜜，所述活性通过检测所述伤口敷料的过氧化氢产生速率来确定，所述伤口敷料组合物包含光引发剂和/或至少一种uv交联剂中的至少一种，所述光引发剂和/或uv交联剂的总量等于或小于所述伤口敷料的总重量的0.2％w/w。[0033]本文还公开了一种制备伤口敷料组合物的方法，所述伤口敷料组合物包含交联的水凝胶支架和嵌入其中的抗菌活性的蜂蜜，所述方法包括混合包含一种或多种水凝胶形成单体、蜂蜜和至少一种光引发剂和/或至少一种uv交联剂的混合物，以形成均匀的混合物；并使该均匀的混合物经受uv照射(irradiation)，直到所述均匀的混合物固化。在一种优选情况下，所述混合物所包含的所述光引发剂和/或uv交联剂的量等于或小于伤口敷料组合物总重量的0.2％w/w。[0034]此外，本文公开了一种治疗伤口，例如治疗感染伤口的方法，该方法包括将本文公开的伤口敷料组合物放置在伤口上。[0035]本文公开的另一方法涉及预防伤口感染，该方法包括将本文公开的伤口敷料组合物放置在易发生感染例如在手术后的伤口上。[0036]本公开还提供了一种试剂盒，该试剂盒包含本文公开的伤口敷料组合物及其在伤口敷料中的使用说明。[0037]最后，本文公开了一种提供可用作本文公开的伤口敷料的抗微生物交联水凝胶的方法，该方法包括混合包含水凝胶形成单体和蜂蜜的混合物，并将混合物暴露于uv辐射(radiation)直至该混合物固化。附图说明[0038]为了更好地理解本文公开的主题，并举例说明如何在实践中实施该主题，现在将参考附图仅以非限制性示例的方式来描述实施例，其中：[0039]图1a-1b提供了lmesitran医用蜂蜜定义单体含量的tga结果，其中图1a提供tg，即lmesitran医用蜂蜜的重量百分比(wt％)与温度(℃)的关系，图1b提供了dtg，即lmesitran医用蜂蜜随时间(％/min)的重量变化百分比(wt％)与温度的关系，两个图的加热速率均为5℃/min。[0040]图2a-2b提供了透明质酸的tga结果，其中图2a提供了tg，即透明质酸的重量百分比(wt％)与温度(℃)的关系，图2b提供了透明质酸与温度(℃)的dtg；两个图的加热速率均为5℃/min。[0041]图3a-3b提供了amps的tga结果，其中图3a提供了tg，即amps的重量百分比(wt％)与温度(℃)的关系，图3b提供了dtg，即amps随时间(％/min)的重量变化百分比(wt％)与温度(℃)的关系；两个图的加热速率均为5℃/min。[0042]图4a-4e提供了来自组合物#2(图4a)、组合物#3(图4b)、组合物#4(图4c)、组合物#5(图4d)和组合物#6(图4e)的样品的tga(重量百分比(wt％)与温度(℃))，所有图的加热速率均为5℃/min。[0043]图5提供了含有蜂蜜的水凝胶(参见表5中的组合物#8)在不同剪切速率下的粘度的图。[0044]图6a-6b是根据本公开的手术后膝关节敷料的照片图像，为了防止手术部位感染(ssi)，在手术后立即施用敷料(图6a)，在患者没有ssi发展风险的情况下四天后出院(图6b)。[0045]图7a-7d是感染手术部位的照片图像，术后三个月(图7a)，用根据本公开的伤口敷料治疗1天(图7b)、治疗1周(图7c)和1个月后，在ssi治疗后使用伤口愈合促进系统进行补充治疗(图7d)。具体实施方式[0046]本公开提供了可用作伤口敷料的组合物，该组合物包含交联水凝胶支架和嵌入在支架中的具有抗菌活性的蜂蜜，所述伤口敷料组合物表现出抗菌活性，该抗菌活性被认为归因于来自蜂蜜的酶的活性。此外，如下文进一步讨论的，可通过伤口敷料检测过氧化氢产生速率来分析或确认抗菌活性。[0047]令人惊讶的是，在存在蜂蜜的情况下，伤口敷料组合物在存在uv光引发剂的情况下形成，该uv光引发剂的量显著低于不存在蜂蜜时所需的量(例如，参见表1c中的数据)。[0048]本文还公开了一种制备伤口敷料组合物的方法，该方法包括混合包含形成一种或多种水凝胶形成单体、蜂蜜和至少一种光引发剂和/或至少一种uv交联剂的混合物，以形成均匀混合物；并使该均匀混合物经受uv照射，直到所述均匀混合物固化。所述至少一种光引发剂和/或至少一种uv交联剂的量优选等于或小于混合物(和最终组合物)总重量的0.2％w/w。[0049]已经设想，在一定量(和相对低量)的光引发剂和/或交联剂存在的情况下，单体暴露于uv会导致单体交联，而不会损害蜂蜜的生物功能性，特别是其愈合性能。在这方面，值得注意的是，已经发现，与不含蜂蜜时所需的量相比，包含蜂蜜可显著减少引发剂和/或交联剂的用量，以引起交联形成固体伤口敷料。下表1c中也强调了这一点，表明在不存在蜂蜜的情况下，引发剂和交联剂中的一种或两种的量较高。换句话说，为了在没有蜂蜜的情况下充分固化，需要增加一种或两种物质的含量。例如，在没有蜂蜜的情况下，要达到无限粘度(即充分固化)，引发剂和交联剂的总量为0.9％w/w。在存在约10％w/w至约20％w/w蜂蜜以及引发剂和交联剂的总量为约0.2％w/w的情况下，达到了相同的粘度。[0050]本文公开的发现是意想不到的，并且提供了有益的产品，因为希望将伤口敷料中残留的引发剂和/或交联剂的量减至最小，并且包含蜂蜜，使得引发剂和/或交联剂的量显著减少。[0051]此外，发现在蜂蜜存在下，甚至在这些低量引发剂和/或交联剂下，所有单体都是交联的。这被认为是伤口敷料的一个重要特征，因为一旦施用到皮肤上，组合物中含有大量游离单体是不利的。换句话说，伤口敷料优选包含不可检测量的所述交联水凝胶支架的非交联单体单元。[0052]蜂蜜的存在以及至少一种光引发剂和/或交联剂的痕量允许达到理想的粘度，尽管引发剂和/或交联剂的量较低。[0053]伤口敷料组合物的粘度可通过常规方法测定，包括常用的粘度计。[0054]在一些示例中，使用t-bart-fhbdv-e(或本公开限定的轴(spindle)r7)测定粘度，转速约为12rpm。[0055]在一些情况下，本文公开的伤口敷料组合物的粘度至少为15,000cps，有时至少为30,000cps，有时至少为50,000cps，有时至少为100,000cps，有时至少为200,000cps，有时至少为300,000cps，有时多于333,000cps。[0056]例如，可以使用蜂蜜的愈合特性来确定伤口敷料组合物的粘度。蜂蜜的愈合特性是因为它提供抗菌活性，维持湿润的伤口状况，共同帮助提供保护屏障，以防止伤口感染。抗菌活性是由于酶促产生过氧化氢。一些人还报告说，蜂蜜的抗菌活性可能与蜂蜜的低ph水平和足以阻碍细菌生长的高糖含量(高渗透压)有关。例如，这可以在非过氧化物蜂蜜，例如麦卢卡蜂蜜(manukahoney)中看到。此外，抗菌活性可能是由于植物化学成分，例如甲基乙二醛(mgo)的存在有关。[0057]蜂蜜中的抗菌剂(因子)主要是过氧化氢物质，其浓度由葡萄糖氧化酶的相对水平决定，葡萄糖氧化酶由蜜蜂和源自花粉的过氧化氢酶合成。[0058]大多数类型的蜂蜜在稀释时产生h2o2，因为葡萄糖氧化酶的激活将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和h2o2，因此具有抗菌活性。但是，在一些情况下，如本公开提供的非限制性实例所示，蜂蜜中的过氧化物活性可容易地被热或过氧化氢酶的存在破坏。[0059]即使存在过氧化氢酶(不存在葡萄糖氧化酶)，蜂蜜也可能保持其抗菌活性，因此这种类型的蜂蜜被认为是“非过氧化蜂蜜”。已知有几种成分有助于非过氧化物活性，例如存在丁香酸甲酯和甲基乙二醛(例如麦卢卡蜂蜜)。[0060]讨论了蜂蜜的颜色与抗菌效力之间的相关性[albaridina，蜂蜜的抗菌效力(antibacterialpotencyofhoney)，国际微生物杂志(intjmicrobiol，2019；2019:2464507)，公开日：2019年6月2日：doi：10.1155/2019/2464507]。蜂蜜的颜色从浅黄色到琥珀色，从深红色到几乎黑色。蜂蜜的颜色可以反映存在的各种成分，例如多酚、矿物质和花粉。深色蜂蜜具有更高含量的色素，例如类黄酮。深色蜂蜜中酚类化合物含量较高，这与其较高的抗菌活性有很好的相关性。[0061]确定蜂蜜抗菌活性有多种方法，大多数集中于过氧化氢的生产水平或速率。例如，过氧化氢的生产速率可以通过使用过氧化氢测试条来测定，根据制造商的说明使用。例如，可将测试条浸入待测试的溶液中，在规定的时间(通常为几秒)后，根据预定的色标识别测试条的颜色。[0062]蜂蜜的颜色也与蜂蜜矿物质含量有关。浅色蜂蜜通常含有高达0.2％的金属离子和其他胶体物质，而深色蜂蜜可能含有1％或更高含量的金属离子。在目前的研究中，单花鳄梨蜂蜜(monofloralavocadohoney)被用作深色蜂蜜的模型，洋槐蜂蜜(acaciahoney)则被用作浅色蜂蜜。钾是蜂蜜中的主要矿物质，其含量与蜂蜜色素沉着相关，浅色蜂蜜中的平均含量为441ppm，深色蜂蜜中的平均含量为1676ppm。单花鳄梨蜂蜜可能平均含3800ppm的钾，而洋槐蜂蜜含约550ppm的钾。[0063]在一些示例中，蜂蜜是浅色蜂蜜。在不受约束的情况下，具有较低的生物负荷，因此，对于灭菌验证和其他要求，浅色蜂蜜可能比深色蜂蜜更可行。[0064]在一些示例中，蜂蜜是金属离子含量高达0.2％的蜂蜜。[0065]不管蜂蜜的颜色如何，有各种类型的蜂蜜可用于伤口愈合，因此用于本文公开的伤口敷料中。这些包括但不限于麦芦卡蜂蜜(leptospermumscopariumhoney)(例如麦卢卡(manuka)、医用级蜂蜜(medihoney)-深色)；荞麦蜜(buckwheathoney)(例如：principelle，深色)、洋槐蜂蜜(acaciahoney)(浅色)、无刺蜂蜜(浅色)、栗子蜜(chestnuthoney)(浅琥珀色)、杜鹃花蜜(rhododendronhoney)(浅色)、桉树蜂蜜(eucalyptushoney)(浅琥珀色)、百花蜜(polyfloralhoneys)(各种)、医用级蜂蜜(例如：honeys)(各种)、医用级蜂蜜(例如：)，后者包含40％医用级蜂蜜、羊毛脂(lanolin)、丙二醇、聚乙二醇4000、维生素c、维生素e。[0066]在本公开的上下文中，医用级蜂蜜(medicalgradehoney)或药用蜂蜜(medicinalhoney)应被理解为包括适合或已知适合施用于伤口上的任何蜂蜜。这种蜂蜜通常被认为是具有伤口愈合效果的蜂蜜。[0067]在一些情况下，由于产生过氧化氢或存在氧化葡萄糖，蜂蜜被认为具有抗菌活性。[0068]在一些情况下，蜂蜜与载体，例如医学或药学上可接受的亲脂性物质，例如油、蜡等混合。[0069]在一些情况下，医用级(药用)蜂蜜是不含已知杀虫剂和受控细菌含量的多花蜂蜜。[0070]蜂蜜的用量可能有所不同，具体取决于用引发剂和/或交联剂的用量以及所需的粘度水平。[0071]在一些实施例中，伤口敷料组合物在组合物中包含至少1％w/w的蜂蜜，有时至少5％w/w的蜂蜜，有时至少8％w/w的蜂蜜，有时至少10％w/w的蜂蜜，有时至少12％w/w的蜂蜜，有时至少14％w/w的蜂蜜，有时至少15％w/w的蜂蜜，有时至少18％w/w的蜂蜜，有时至少20％w/w的蜂蜜，有时至少22％w/w的蜂蜜，有时至少24％w/w的蜂蜜，有时至少26％w/w的蜂蜜，有时至少28％w/w的蜂蜜，有时至少30％w/w的蜂蜜，至少32％w/w的蜂蜜，有时至少34％w/w的蜂蜜、有时至少36％w/w的蜂蜜，有时至少38％w/w的蜂蜜，有时至少40％w/w的蜂蜜，有时至少42％w/w的蜂蜜，有时至少44％w/w的蜂蜜，有时至少46％w/w的蜂蜜或甚至高达50％w/w的蜂蜜。[0072]在一些情况下，蜂蜜的量为5％w/w至50％w/w范围内的任何量；有时为5％w/w至40％w/w之间的任何量；有时为10％w/w至40％w/w之间的任何量；有时为20％±15％w/w的量。[0073]本文公开的伤口敷料(组合物本身以及载体基质上的组合物)包括交联的水凝胶支架和嵌入支架中的活性蜂蜜。水凝胶的交联是在蜂蜜和引发剂和/或交联剂存在下uv照射的结果，这与热诱导交联相反，在热诱导交联中，热是交联的驱动力。[0074]在最终产品，即伤口敷料组合物中，交联的方式(类型)可以从是否存在抗菌活性(通过热交联会降低或消除抗菌活性)，以及任选地，是否存在至少微量(即低于0.2％w/w)光引发剂和/或uv交联剂中明显看出。光引发剂和uv交联剂中的一种或两种的微量可以在皮摩尔(picomoles)范围内，并且可以被认为一种区分用指纹形式，用于区分根据本公开生产的水凝胶和通过热聚合生产的水凝胶(如果不需要这种试剂)。[0075]如本文所述，由于功能性/生物活性蜂蜜，伤口敷料的抗菌活性提供了进一步的指纹。[0076]可用于形成伤口敷料并因此存在于本公开的伤口敷料中的光引发剂是本领域公知的。然而，不限于此，光引发剂可以是2-羟基-2-甲基丙苯酮、乙基(2,4,6-三甲基苯甲酰)苯基亚膦酸酯、10％-25％的二苯基(2,4,6-三甲基苯甲酰基)氧化膦、2-羟基-1-[4-(羟基乙氧基)苯基]-2-甲基-1-丙酮、1-羟基环己基苯基酮、2,2-二甲氧基-2-苯基苯乙酮等的一种或组合。[0077]可用于形成伤口敷料并因此存在于本公开的伤口敷料中的uv交联剂在本领域中也是众所周知的。然而，不限于此，uv交联剂可以是甲基丙烯酰氧基乙基乙烯基碳酸酯、nvp-aam077水合四钠、n,n-亚甲基双丙烯酰胺、四甘醇聚(乙二醇)甲基醚单甲基丙烯酸酯、四(乙二醇)二甲基丙烯酸酯、乙二醇二甲基丙烯酸酯、聚乙二醇(400)二丙烯酸酯(miramerm280)、4-(1-氧代-2-丙烯基)-吗啉(genocureacmo)中的一种或组合。[0078]在一些情况下，本文公开的伤口敷料包含至少微量的光引发剂或uv交联剂。[0079]在本公开的上下文中，当提及至少微量时，其应理解为可检测的量，但不超过形成组合物的材料总重量的0.2％w/w(不包括任何载体基质)。[0080]在一些情况下，微量是不超过0.19％w/w的量，有时是不超过0.18％w/w的量，有时是不超过0.17％w/w的量，有时是不超过0.16％w/w的量，有时是不超过0.15％w/w的量，有时是不超过0.1％w/w的量，有时是不超过0.09％w/w的量，有时是不超过0.08％w/w的量，有时是不超过0.07％w/w的量，有时是不超过0.06％w/w的量，有时是约0.05％w/w的量。[0081]在一些情况下，伤口敷料组合物包含至少微量的光引发剂。[0082]在一些情况下，伤口敷料组合物包含所述至少一种光引发剂和至少一种uv交联剂，其中所述至少一种光引发剂的量高达约0.1％w/w。[0083]在一些情况下，本文公开的伤口敷料包含至少微量的光引发剂和uv交联剂，合计量不超过0.2％。[0084]伤口敷料的水凝胶成分可以由不同类型的水凝胶形成单体形成，这些单体可通过uv照射交联。通常，当通过uv照射提供交联水凝胶时，可以使用含磺酸盐(sulfonate)的单体单元，即水凝胶是含磺酸盐的水凝胶。[0085]在一些示例中，水凝胶的单体单元是那些被鉴定为反应性亲水性单体的单元。[0086]在一些示例中，水凝胶的单体单元是那些被认为形成具有吸水/溶胀能力的医学上可接受的水凝胶的单体单元。[0087]在一些示例中，水凝胶的单体单元包括至少2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸(amps)。[0088]水凝胶可以是均聚物或共聚物。例如，水凝胶可以是amps均聚物。[0089]此外，例如，水凝胶可以是共聚物。例如，含有单体和乙烯基单体的磺酸盐。例如，已知amps与以下各种乙烯基单体反应：丙烯酸、衣康酸、丙烯酰胺、苯乙烯、乙酸乙烯酯、n-乙烯基吡咯烷酮、甲基丙烯酸2-羟乙酯、甲基丙烯酸2-羟丙酯、n,n-二甲基丙烯酰胺、n-乙烯基甲酰胺。[0090]在一些示例中，伤口敷料还包含其他生物聚合物，即除了形成水凝胶本身的交联聚合物之外的其他生物聚合物。[0091]在一些示例中，伤口敷料包含透明质酸(ha)。ha是一种已知具有抗菌活性的聚合物。ha被成功地结合到含蜂蜜的水凝胶中，以提供强化的伤口敷料。不受理论的束缚，ha(以及一些其他多糖，如角豆树胶(carobgum)，一种已知的市售半乳甘露聚糖)，可促进/改善伤口分泌的液体在伤口敷料中的吸收。ha的量可以变化，但通常不超过伤口敷料(包括水)总重量的5％。有时，ha的量占伤口敷料总重量的0.1％至2％w/w之间，有时占伤口敷料总重量的0.5％至1.5％w/w之间。[0092]伤口敷料的特征在于其保持水或盐水的能力。该参数与敷料吸收伤口挤出物的能力相关。在一些示例中，伤口敷料在与液体材料接触之前具有至少700wt％的水性液体(盐水或水)保持能力。[0093]本文公开的伤口敷料也可包含载体基质，即水凝胶和蜂蜜的组合嵌入载体基质内或载体基质上。载体基质可以是无菌聚合物或无菌织物。例如，载体基质可以是聚氨酯层压材料。如果载体基体是织物，则可以是织造或非织造织物。[0094]首先将一种或多种水凝胶形成单体与光引发剂和/或uv交联剂溶解以形成单体组分，然后将其与含蜂蜜的组分混合，直至获得均匀混合物，从而制备伤口敷料。混合可以在均质器中进行。[0095]使用其他聚合物时，通常将其加入含单体的组分中，直至所有成分均匀混合。[0096]各组分的混合物优选为均相混合物。[0097]对于聚合和形成水凝胶，在受控条件下将混合物暴露于uv照射，直到混合物固化。有时，混合物首先与载体基质接触，然后才暴露于uv光。例如，可以用混合物浸泡载体基质，可以在载体基质上刷涂或喷涂混合物等。[0098]当提及受控条件下的uv照射时，应理解为足以发生交联的条件。这些条件取决于所用单体、光引发剂、uv交联剂、蜂蜜和其他聚合物的类型和/或浓度。[0099]在一些示例中，固化/聚合包括使用230v/50hz、400w汞灯，进行uv光暴露。曝光时间可能有所不同，但通常是从毫秒到几秒。[0100]汞紫外灯输出主要为uvc光谱。这足以提供有效的固化。使用条件，包括汞紫外灯在各种紫外波长下的输出，可依据灯制造商提供的说明书获得。[0101]一旦制备好，伤口敷料可储存在专用包装中，通常是无菌包装。[0102]根据需要，伤口敷料用于治疗伤口。在这种情况下，治疗应理解为也包括预防性(preventative/prophylactic)治疗，即预防不期望的情况发生。[0103]在一些示例中，伤口敷料用于治疗被诊断为感染细菌感染的伤口。在其他一些示例中，伤口敷料用于治疗尚未被确定为有感染的、易发生感染的伤口。[0104]不限于此，本文公开的伤口敷料可用于治疗开放性伤口、外科手术伤口、褥疮、昆虫咬伤和由皮肤疾病引起的继发性炎症。在一个具体示例中，伤口敷料与外科手术一起使用。[0105]在一些情况下，伤口敷料可用于手术部位，以治疗或预防术后并发症，如手术部位感染(ssi)。[0106]伤口治疗可包括用新鲜伤口敷料定期更换伤口。更换的频率将取决于伤口治疗的时间、被治疗伤口的状况、形成伤口敷料的成分组成以及医生通常考虑的任何其他因素。[0107]非限制性示例[0108]伤口敷料组合物的制备[0109]材料[0110]单体：[0111]2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸钠盐，特别是amps2408a，由lubrizolchemical公司生产，包括溶解在水中的58％w/w的单体，cas号为15214-89-8。[0112]合成来源的透明质酸钠(ha)，分子量约1420000da，化学清洁度大于93％，由西安品诚生物技术有限公司(xi'anpincreditbio-techco.,ltd)生产，cas号为9067-32-7。[0113]澄清豆角(clarifiedcarob)(刺槐豆(locustbean))胶，化妆品级，由cpkelco公司生产，cas号为9000-40-2。[0114]高酰基结冷凝胶(highacylgellangum)(1-2×106道尔顿)化妆品等级，由cpkelco公司生产，cas号为71010-52-1。[0115]甲基纤维素(methocela40m)，食品级改性纤维素，由陶氏化学(dow)公司生产，cas号为9004-67-5。[0116]黄原胶(keltrol高级性能黄原胶，化妆品级)，由cpkelco,huber公司生产，cas号为11138-66-2。[0117]光引发剂：[0118]2-羟基-2-甲基丙苯酮(genocuredmha)，由瑞士瑞安集团(rahngroup)生产，cas号为7473-98-5，作为低压光引发剂。[0119]乙基(2,4,6-三甲基苯甲酰)苯基亚膦酸酯(genocuretpo-l)，由瑞士瑞安集团(rahngroup)生产，cas号为4434-11-7，作为中压光引发剂。[0120]10％-25％的二苯基(2,4,6-三甲基苯甲酰基)氧化膦，由瑞士瑞安集团(rahngroup)生产，cas号为75980-60-8，作为广谱光引发剂。[0121]经过特殊处理的药用蜂蜜，由lmesitran公司生产，cas号为8028-66-8，作为广谱光引发剂。[0122]交联剂：[0123]乙二醇二甲基丙烯酸酯，由默克(merck)公司生产，cas号为25852-47-5。[0124]聚乙二醇(400)二丙烯酸酯(miramerm280)，由瑞士瑞安集团生产，cas号26570-48-9。[0125]4-(1-氧代-2-丙烯基)-吗啉(genocureacmo)，由瑞士瑞安集团(rahngroup)生产，cas号为5117-12-4。[0126]活性成分[0127]透明质酸、钠盐作为超强吸收剂。[0128]医用级蜂蜜作为抗菌剂。[0129]其他组分[0130]不同制造商生产的1,2,3-丙三醇(甘油)，cas号56-81-5，作为溶剂。[0131]纯化水作为溶剂。[0132]方法和结果[0133]水凝胶中最佳蜂蜜含量的测定[0134]影响固化过程的蜂蜜最佳含量已通过粘度测量(添加amps至100％含量)预先确定，如下表1所述。[0135]将各种受试混合物的所有组分混合在一起并均质化，直至均匀透明。然后将混合物暴露于uv中1秒(详见“水凝胶方案的固化(聚合)(curing(polymerization)ofhydrogelprotocol)”部分)，形成交联水凝胶。收集这些水凝胶样品，并测量其粘度。[0136]使用comecta公司生产的“canon-fenske”不透明粘度计测量小于1000cps的低粘度(在这方面，请参见tianguangfan(2001年10月26日)http://www.prrc.nmt.edu/groups/petrophysics/media/pdf/viscometer.pdf描述的使用canon-fenske粘度计的粘度测量)。[0137]使用myrvr-3000brookfield型粘度计测量高于1000cps的粘度，该粘度计具有以下轴：[0138]-轴r2，转速为12rpm，粘度在1000cps至3333cps之间；[0139]-轴r3，转速为12rpm，粘度在3333cps至8333cps之间；[0140]-轴r5，转速为12rpm，粘度在8333cps至33333cps之间；[0141]-轴r7，转速为12rpm，粘度在33333cps至333333cps之间。[0142]对于高粘度，当液体仍表现为牛顿流体时，在各种剪切速率下检查粘度并求平均值。当行为变为非牛顿粘度时，在高剪切速率下(当粘度没有显著变化时)对一系列粘度进行平均。[0143]通常，水凝胶系统中从牛顿行为到非牛顿行为的转变发生在约1000mpas至10000mpas之间。在此范围内，粘度行为仍可视为牛顿行为。表1a提供了包含10％蜂蜜、0.15％交联剂且不含引发剂的配方的粘度。[0144]表1a：粘度与剪切速率的关系[0145][0146]在非牛顿行为下，与平均粘度的偏差随剪切速率的增加而显著增加。因此，在粘度高于10000mpas时，粘度应在较高剪切速率的结果上取平均值。表1b提供了含10％蜂蜜和0.05％引发剂但不含交联剂的配方的粘度。这种行为是非牛顿性的。[0147]表1b：粘度与剪切速率的关系[0148][0149]在不受理论的束缚的情况下，认为增加的粘度应证明聚合过程的引发。粘度越高表示聚合度越高。然而，在聚合的某一阶段，水凝胶产生粘弹性和剪切稀化行为，并变得坚硬(粘度变得无穷高(未在表1b中显示))。因此，稳定粘度测试仅用于指示聚合过程。[0150]表1c中提供了用于水凝胶配方的初始调整的粘度测量结果，该水凝胶配方包含固定量的单体amps和ha(53.15％的amps和1％的ha，表示蜂蜜、交联剂和引发剂(并用工艺用水填充至1％)的量)。[0151]表1c-包括单体amps在内的各种组合物的混合物的粘度[0152][0153]表1c示出蜂蜜可以部分代替光引发剂和/或交联剂。当蜂蜜浓度为5％时，效果可忽略不计(包含0.05％引发剂、0％交联剂和5％蜂蜜的混合物的粘度从18cps增加到100cps)。在蜂蜜浓度为10％和20％时，聚合过程更为明显。含有20％蜂蜜的水凝胶是优选的，因为其治疗性能更好(见下文)。研究表明，在所有配方中，引发剂和交联剂的组合量可以等于或小于0.2％w/w，以便在蜂蜜存在下充分固化。鉴于在不含蜂蜜(“0”蜂蜜)的情况下，相同固化所需的这些药剂的量要高得多，因此这是独一无二的。[0154]选择蜂蜜[0155]为了更好地理解蜂蜜的作用机理，检验了两种类型的蜂蜜(l-mesitran浅色蜂蜜和鳄梨深色蜂蜜)的一部分单体混合物，并检验了每种混合物的粘度。[0156]具体而言，在室温或50℃加热条件下将蜂蜜加入单体混合物中。在加热的情况下，混合物仅在混合时保持在50℃，直至均匀。未向每种混合物中加入光引发剂或交联剂。[0157]当每种混合物的温度达到25℃时，测定粘度。加入蜂蜜前，每种混合物的粘度为10-11cps(基线，固化前)。含有蜂蜜(但不含任何引发剂或交联剂)固化后的粘度见表2。[0158]表2包含蜂蜜和单体的混合物的粘度(amps)[0159][0160]表2示出含有鳄梨蜂蜜的混合物的粘度高于含有l-mesitran医用蜂蜜的混合物的粘度。然而，当在50℃混合时，蜂蜜浓度的增加不会影响最终的粘度。据推测，粘度的差异在于，鳄梨蜂蜜含有金属离子(在医用蜂蜜中不存在)，这些金属离子在高温(即50℃)下，甚至在没有交联剂或引发剂的情况下，诱导单体(amps)交联/聚合过程，然而在此温度下蜂蜜不再形成自由基。因此，发生的唯一聚合过程是由金属离子诱导的。[0161]结果还表明，在无金属离子或金属离子含量较低的医用蜂蜜中，20％蜂蜜的低温交联水平较高。这可以解释为加热对蜂蜜中酶产生h2o2的抑制作用，因此也降低了加热下的交联水平。换句话说，加热似乎具有双重破坏作用，一方面减少了交联，另一方面降低了蜂蜜中所含酶的活性。上述结果建议在以下实验中使用20％蜂蜜。[0162]表3表示水凝胶混合物的粘度，在室温(rt)或50℃下用鳄梨蜂蜜混合制备水凝胶混合物。[0163]表3含有鳄梨蜂蜜(深色鳄梨)的各种组合物的交联水凝胶的粘度，其中鳄梨蜂蜜包含单体[0164][0165]表3示出，在不存在蜂蜜的情况下，交联和水凝胶形成是低的(低粘度)，然而，在存在蜂蜜的情况下，即使存在金属离子(存在于深色蜂蜜中)，也有交联。有趣的是，在相同的交联剂浓度下，加热降低了酶对交联过程的贡献。这可能是由于加热对蜂蜜中固有存在的酶的影响，即可能是因为加热破坏了蜂蜜中固有酶的功能/活性。[0166]测定蜂蜜混合物中过氧化物含量的方案[0167]本试验的目的是测定混合物中形成的过氧化物的量。含量越高，含蜂蜜制剂的抗菌活性越高。过氧化物由蜂蜜中的酶活性形成。希望酶不被破坏，例如不被通常在热聚合中发生的加热破坏。[0168]方案：[0169]·取50g水凝胶混合物(也可以是刚性水凝胶)；[0170]·加入40g水并混合，直至均匀，或者在使用刚性水凝胶的情况下，等待水被完全吸收；[0171]·在30℃下培育1小时；[0172]·检验溶液/凝胶的ph值是否在2-12之间。如果不是，使用氢氧化钠或柠檬酸调节ph；[0173]·取一条过氧化氢25；[0174]·将测试条浸入测试溶液中1秒；[0175]·抖掉多余的液体/凝胶；[0176]·等待15秒；[0177]·与比色刻度尺比较，如果存在过氧化氢，测试区域会变为蓝色。[0178]结果：[0179]在30℃培育1小时后的过氧化氢含量见表4。在此方面测试的组合物包括0.05％光引发剂、0.15％交联剂、53.15％amps、1％ha和指定的蜂蜜，加水至100％。产量[0180]表4不同组合物释放的h2o2(三次重复的平均值)[0181][0182][0183]结果表明，含10％洋槐蜂蜜的情况下，相同浓度下，室温下已经很好的产生了2-5mg/lh2o2，但在50℃下没有过氧化物产生，这表明产生过氧化物所需的酶的活性已被加热破坏。[0184]结果还表明，深色蜂蜜和浅色蜂蜜在室温下均能更好的产生h2o2，这是加热时酶活性被破坏的结果。[0185]值得注意的是，结果表明，过氧化物的释放不需要存在聚合引发剂或交联体，仅取决于蜂蜜的存在。[0186]水凝胶-透明质酸(ha)制剂[0187]最终的制剂还包含透明质酸(ha)，以促进/改善伤口分泌的任何液体的吸收。为此，制定了以下制备方案：[0188]预混料i(premixi)：将3％的ha分散在水中，等待约24小时，直至完全溶解且均匀。加入l-mesitran医用蜂蜜，混合至均匀。[0189]预混料ii(premixii)：向主混合反应器中加入amps，加入光引发剂和交联剂，并均质化，直至均匀透明。确保预混料ii表面没有出现油渍。[0190]在混合状态下逐渐将预混料i加入预混料ii。均质化直至均匀。保持缓慢混合，避免紫外线照射，直至进料至固化站(以在时间之前避免不希望的交联)。[0191]如下所述，进行紫外光固化。[0192]根据上述方案，制备了八种水凝胶组合物用于分析。表5中提供了组合物1-8。[0193]蜂蜜中的金属含量从浅色蜂蜜中的0.04％到深色蜂蜜中的0.2％不等[oryan等人，2016]。选择l-mesitran洋槐医用蜂蜜有多种原因，包含的矿物质和金属离子含量低，因此认为其具有更好的抗菌活性，并且生物负荷低于深色蜂蜜(因此使灭菌过程更可行)。[0194]表5水凝胶-ha组合物[0195][0196]组合物4、5和6包含相同量的光引发剂。组合物3、5和6包含相同量的交联剂。[0197]组合物6代表最终/首选的组合物。组合物3与组合物6的不同之处在于，光引发剂被水取代(即，组合物3中没有光引发剂)。组合物4不同于与组合物6，其中交联剂被水取代(即在组合物4中没有交联剂)。组合物5与组合物6的不同之处在于，lmesitran医用蜂蜜被水代替。组合物2与组合物6的不同之处在于，其不含交联剂或光引发剂。组合物7和8与组合物4不同，其中蜂蜜部分被水取代。[0198]水凝胶的uv固化(聚合)[0199]水凝胶分布在基材表面，因此表面的凝胶深度/厚度在0.9mm至1.3mm之间。然后用密度为13克/平方米重量的非织造材料覆盖凝胶，以防止表面张力驱动的流动和凝胶深度的变化。在230v/50hz、400w汞灯(德国hoenle集团公司生产)下暴露约1秒进行固化。各种uv波长的汞uv灯输出可在制造商规格中获得。[0200]汞uv灯输出主要为uvc光谱。这足以提供有效的固化。[0201]测定固化水平[0202]使用两种独立的技术测试表4中详述的组合物的单体含量(即交联水平)：热重分析[golon和kuhnert,2013；simkovic等人，2003]和flory-rehner方法[durmaza和okay，2000]，如下所述。[0203]热重分析(tga)[0204]对水凝胶组合物进行热分解分析，以确定每种水凝胶组合物中的单体含量(即固化水平)。使用sdtq600热重分析仪根据总体质量损失观察水凝胶的热分解。[0205]将10mg样品均匀松散地分布在由氧化铝制成的敞口盘中，并放入微型炉中。加热速率为5℃/min。温度变化控制在室温(25℃)至最终温度200℃之间。在测试期间连续记录重量损失、加热时间和样品温度。[0206]分解温度是基于tga仪器软件的差分热重分析(dtg)发现的，并固定在dtg数据的极值点。某一分解温度的下限和上限是dtg曲线拐点，最接近dtg的极值(分解)点，或测试区域的限值(rt或200℃)。[0207]为了正确分析水凝胶样品，在测试前对主要原料(单体和lmesitran医用蜂蜜)进行分析，以验证其分解温度。[0208]图1a-1b、2a-2b和3a-3b分别表示原料lmesitran医用蜂蜜、透明质酸(ha)和amps的tga(tg和dtg)结果。tga分析的数据也汇总于下表5中。[0209]具体而言，图1a-1b示出，lmesitran医用蜂蜜包含三种主要元素：第一种元素在约90℃下分解，推测其为水(样品在测试前未干燥，以防止糖分解)，第二种元素在约130℃下分解，推测其为果糖[agolon，(2013年)。同上]，第三种元素在约190℃下分解，推测其为蔗糖[isimkovic等人，2003，同上]。[0210]在tg分析中，确切的分解点并不明显。正如所理解的，化学清洁物质在特定温度下分解。然而，蜂蜜在一定温度范围内分解可能是由于一些杂质或lmesitran医用蜂蜜的天然来源，包括有机物，如蜂蜡、植物部分、蜜蜂和其他昆虫组织、杀虫剂等的组合。此外，一些天然单糖在高温下不断降解，形成具有不同特性的其他类型的糖，例如果糖分解为乳糖。但是，分解点可以从dtg结果中检测出来。[0211]ha也是逐渐分解的，如图2a-2b所示。尽管合成来源和相对化学纯度本应提供ha分解的相对窄的温度范围，但这还是发生了。逐渐分解可能是由于ha的高吸湿性，即使在干燥样品中也会导致相对较高的含水量。[0212]amps单体的分解点由图3a-3b确定，准确度较高。[0213]表6总结了分解温度和在这些分解温度下可能分解的元素。[0214]表6：基于tga分析的蜂蜜、ha和amps含量和分解温度[0215][0216]此外，还测定了在164℃至199℃温度范围内组合物2-6的tga，结果分别在图4a-4e中示出。[0217]根据dtg分析估计，成分2和成分3(分别如图4a和4b所示)的分解温度为186℃，成分4(如图4c所示)的分解温度为188℃，成分5和成分6(分别如图4d和4e所示)的分解温度为190℃。这些小的差异可以被认为在标准实验误差的范围内，和/或由组合物中的杂质等引起。[0218]在5℃/min的加热速率下，23.8806％的干amps单体样品在164℃至199℃的温度下分解(参见图3a-3b)。组合物2-6包括30.83％的amps干单体，因此由于amps，组合物2-6在固化前的质量降低预期为7.36％。在相同的实验条件下，lmesitran药用蜂蜜在163℃至199℃的温度下损失了其重量的8.6612％。因此，当将20％的lmesitran药用蜂蜜加入制剂(组合物2、3、4)中时，预计这些组合物的样品在固化前会额外减轻约1.73％的重量。假设由于固化引起的蜂蜜浓度变化可忽略不计，则固化后水凝胶样品中amps单体的浓度测定如下：[0219][0220]其中，camps,i为固化后样品i中amps单体的浓度；i＝2,3,4,5是为表4中所述的组合物编号(#)；ci是在164℃至199℃之间的温度下组合物i的重量减少百分比；ih(组合物2、3、4为0.2(20％)，组合物5为0)是固化前组合物i中lmesitran医用蜂蜜的一部分；ch,0为lmesitran医用蜂蜜样品的重量减少(详见图1)；camps,0为amps单体样品的重量减少(参见图4)；iamps为0.3083(所有组合物)是固化前组合物i中amps单体的一部分。[0221]测定了组合物2-6在164℃至199℃温度范围内的tga结果，结果如表7所示。[0222]表7基于tga分析的聚合后单体的组成和浓度[0223][0224]由此能够看出，当没有向组合物中加入光引发剂时，约50％w/w的单体聚合(组合物2中单体从30.83％的减少至15.2％，组合物3中单体减少至14.9％)。当向组合物中加入0.15％的交联剂时，amps单体的含量从组合物中2的15.2％降至组合物3中的14.9％，因此引发剂可以至少部分被蜂蜜替代。当加入0.05％的光引发剂时，amps单体的浓度从组合物2中的15.2％降至组合物4中的零(0％)。当制剂中未加入蜂蜜，但使用0.15％化学交联剂和0.05％化学引发剂时，单体浓度高于包含0.05％化学引发剂和不含化学交联剂的制剂中单体的浓度，即组合物5中单体浓度为4.5，而在组合物4中单体浓度仅为4.0％。因此，化学交联剂可以完全被lmesitran医用蜂蜜替代，甚至比化学交联剂更有效。[0225]关于组合物6，值得注意的是，由于蜂蜜的存在，样品重量预计减少1.73％，而实际结果是重量减少1.699％。这种微小差异可能是由于实验误差。[0226]flory-rehner法[0227]为了使用flory-remner法测定水凝胶中的单体含量，在测试前将测试样品干燥至湿度小于1％。为了降低单体蒸发的风险，在40℃下干燥组合物。具体而言，将100克样品在40℃培养箱中干燥10天，在干燥器中冷却12小至室温，并称重。称重后，在40℃下再次培育样品。每5天检验一次样品重量(第15、20、25天等)。如果两次后续测试(第15天和第10天，或第20天和第15天等)之间的重量差异在天平的精度范围内，则样品可用于以下测试。干燥时间可能随天气、lmesitran医用蜂蜜的含水量和其他参数而变化。在大多数情况下，干燥时间为15天(但可以达到20天，甚至25天)。[0228]将干燥水凝胶组合物(100gr)的样品放置在包括1l纯化水的容器中，在室温下混合25分钟。然后将水替换为新鲜的1l纯化水，并混合25分钟。该步骤之后，将样品干燥、称重、洗涤并再次干燥。重复该步骤，直至干燥样品的重量停止变化。[0229]在这些条件下，ha单体可以完全蒸发，蜂蜜可以与单体一起从水凝胶中完全溶解。在分析测试结果时，应考虑这些可能的影响。[0230]对干燥前后的样品进行称重，并估算固化前干燥制剂中的单体浓度，结果见表8。[0231]在表8中，估算含量(克)是固化前组合物中元素的浓度乘以根据制造商规格(amps为30.83％，ha为0.93％)的含量和样品重量。相对于干燥样品重量，在固化前估算浓度。用于研究的蜂蜜在40℃下干燥，直至重量停止变化，蜂蜜批次中的含水量为9％。[0232]在固化前，湿样品中amps单体的浓度等于53.15％的amps2405a(详见表4)，或30.83％的干amps单体。固化前，湿样品中ha单体的浓度等于1％的ha(详见表4)，或高于0.93％的干ha。[0233]表8干燥样品组合物(2至8)[0234][0235][0236]请注意，组合物5中amps和ha的总估算(理论)含量为(97.8 2.9＝100.7％)，即至少24.7％，这是干燥时蒸发的0.93克ha中的0.23克。这是基于最坏情况的估算，根据以上内容，在干燥过程中，光引发剂和交联剂完全蒸发，而amps由于相对高的分解温度而没有蒸发(分解温度在164℃至197℃之间，干燥温度为40℃)。[0237]根据上述步骤，将表5中所述的样品洗涤并干燥3至5次。样品中单体含量估算如下：[0238]wamps,m＝wd-ww-wh，(2)[0239]其中[0240]wamps,m为固化后估算的amps单体含量。[0241]wd为干燥后样品的重量。[0242]ww为清洗后的干燥样品的重量。[0243]wh为作为干残渣的蜂蜜含量。[0244]水凝胶wa中amps单体的浓度，定义为wamps,m占干燥前总初始样品重量(w)的百分比。[0245]表9表示固化后的amps单体含量，采用flory-remner法估算样品(2至8)。[0246]表9根据flory-rener法计算的干样品重量和单体残渣(2至8)[0247][0248]请注意，采用flory-remner法估算的固化后amps单体浓度高于采用tga法估算的浓度(详见表4)，但总体趋势保持不变。因此，较高的单体浓度可能与处理过程中的重量损失和其他实验误差有关。[0249]抗菌活性[0250]在测试抗菌活性时，制备了伤口敷料，由20％蜂蜜、0.05％光引发剂、0.15％交联剂、1％ha、53.15％amps，以及水添加至100％的组合物制备而成。[0251]所描述的方法可用于制造活性抗菌绷带，这些绷带已进行过手术部位感染(ssi)预防和治疗测试。约10％的患者出现ssi。[0252]高危组患者的ssi预防包括在手术后立即用无菌透明质酸和蜂蜜水凝胶绷带包扎手术部位，并在24小时至4天内重新施用(取决于伤口状况)。[0253]图6a-6b为ssi预防敷料的示例，其中敷料在手术后直接施用(图6a)，并在术后12小时再施用一次。手术后4天，患者出院，没有发生ssi的风险(图6b)。值得注意的是，在所有施用水凝胶敷料的试验中，均未出现ssi。[0254]使用本文公开的伤口敷料进行的ssi治疗，包括敷料的施用和定期更换，直到手术部位干净，并且没有观察到炎症。[0255]图7a-7d为手术后3个月ssi患者的ssi治疗结果。治疗前(术后3个月)的手术部位情况如图7a所示；治疗后1天的手术部位情况如图7b所示；水凝胶治疗结束时(大约治疗1周)的手术部位状况如图7c所示。治疗阶段(1周)后，使用含蜂蜜的l-mesitran软凝胶加速手术部位的愈合。图7d表示愈合阶段开始后1个月的手术部位状况。[0256]图6a-6b和7a-7d中所示的结果清楚地表明，由20％蜂蜜、0.05％光引发剂、0.15％交联剂、1％ha、53.15％amps形成的伤口敷料在预防炎症发展(图6b)，以及在治愈已经发展的ssi方面非常有效。[0257]生物相容性[0258]namsa实验室检验了水凝胶的生物相容性，并表现出良好的生物相容性，如下所述。[0259]细胞毒性[0260]细胞毒性试验是根据iso1-5(医疗器械生物学评价-第5部分：体外细胞毒性试验)的要求进行的。使用含有l-929小鼠成纤维细胞亚汇合单层的六孔组织培养板的培养孔进行测试。向一式三份的孔中加入供试品部分(包含水凝胶和20％蜂蜜、0.05％引发剂和0.15％交联剂的伤口敷料)、高密度聚乙烯作为阴性对照或乳胶作为阳性对照。将各制品(各供试品或对照品)与l-929细胞直接接触。培育24-26小时后，用显微镜(100x)检验培养物，以确定制品附近是否存在任何异常细胞形态和细胞裂解。供试品对l-929细胞显示轻微的细胞毒性，并被确定符合监管要求。[0261]皮肤敏感性[0262]进一步评估了供试品在豚鼠中引发延迟皮肤接触致敏的可能性。本研究基于iso-10[医疗器械的生物评估，第10部分：刺激和皮肤致敏试验]的要求进行。[0263]在3周的时间内，将供试品以封闭的方式贴敷到10只动物的完整皮肤上，持续6小时(±30分钟)，每周三次，历时3周。对照品同样贴在5只动物身上。经过2周的恢复期后，以封闭的方式将供试品和对照品贴敷到10只试验动物和5只对照动物。在贴剂移除后24小时和48小时，观察所有部位是否出现皮肤反应。供试品未显示出导致豚鼠延迟皮肤接触致敏的证据。[0264]皮肤刺激[0265]评估了该产品对兔子的原发性皮肤刺激。本研究是按照iso10993-10，医疗器械的生物评估，第10部分：刺激和皮肤致敏试验的指南进行的。将两个25mm×25mm的供试品和对照品切片局部施用于三只兔子的皮肤上，并放置至少23小时，最多24小时。在取出单个样品后1、24、48和72小时，对这些部位的红斑和水肿进行分级。在接受供试品处理的动物皮肤上未观察到红斑和水肿。[0266]供试品的初级刺激指数计算为0.0。供试品的反应被归类为可忽略不计。当前第1页12当前第1页12
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：：文献3.下面列出了被认为与当前公开的主题相关的参考文献作为背景：[0004]-ahmadoryan等人的“蜂蜜在伤口愈合中的生物学特性和治疗活性：叙述性回顾和荟萃分析(biologicalpropertiesandtherapeuticactivitiesofhoneyinwoundhealing:anarrativereviewandmeta-analysis)”，(《组织活力杂志》(journaloftissueviability)，(2016)25(2),98-118)。[0005]-abu-jdayila、al-majeedghzavia、al-malahkim、zaitouns的“浅色和深色蜂蜜的流变热效应(heateffectonrheologyoflight-anddark-coloredhoney)”(《食品工程期刊》(journaloffoodengineering)，(2000)51(1),33-38)。[0006]-fcbiluca、fdbetta、gpirassoldeoliveira、lmpereira、lvaldemirogonzaga、acoliveiracosta,ffett的“热处理前后无刺蜂蜜中5-hmf和碳水化合物的含量(5-hmfandcarbohydratescontentinstinglessbeehoneybycebeforeandafterthermaltreatment)”(《食品化学》(foodchemistry)，(2014)159,244-249)。[0007]-daga、afikoyeselsony、schaffera、shafirs的“以色列鳄梨(perseaamericanamill.)蜂蜜的物理、化学和孢粉学特性(physical,chemicalandpalynologicalcharacterizationofavocado(perseaamericanamill.)honeyinisrael)”(《国际食品科学与技术杂志》(internationaljournaloffoodscienceandtechnology)，(2005)40,1-8)。[0008]-petrov,v.的“通过原子吸收分光光度法测定的一些澳大利亚蜂蜜的矿物成分(mineralconstituentsofsomeaustralianhoneysasdeterminedbyatomicabsorptionspectrophotometry)”(《养蜂研究杂志》(journalofapiculturalresearch)，(1970)9,95-101)。[0009]-priscilamissiodasilva等人“蜂蜜：化学成分、稳定性和真实性(honey:chemicalcomposition,stabilityandauthenticity)”(《食品化学》(foodchemistry)，(2016)196,309–323)。[0010]-neilburton等人的“具有伤口愈合潜力的蜂蜜中自由基的产生和淬灭(freeradicalproductionandquenchinginhoneyswithwoundhealingpotential)”(《抗菌化学疗法杂志》(journalofantimicrobialchemotherapy)(2006)58,773–777)。[0011]-公开号为cn108144109的中国专利申请。[0012]-kanaratnalampang等人的“基于amps的医用伤口敷料水凝胶的设计与制备(designandpreparationofamps-basedhydrogelsforbiomedicaluseaswounddressings)”(《清迈科学杂志》(chiangmaij.sci.)(2007)34(2),183-189)。[0013]-agolon,nkuhnert的“采用先进的电喷雾电离质谱法对选定单糖(包括果糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖和核糖)的“焦糖型”热分解产物进行表征(characterizationof“caramel-type”thermaldecompositionproductsofselectedmonosaccharidesincludingfructose,mannose,galactose,arabinoseandribosebyadvancedelectrosprayionizationmassspectrometrymethods)”(《食品功能》(foodfunct.)(2013)4(7),1040-50)。[0014]-isimkovic、isurina、mvrican的“蔗糖热降解的初级反应(primaryreactionsofsucrosethermaldegradation)”(《分析与应用热解杂志》(j.anal.appl.pyrolysis)(2003)70,493-504)。[0015]-elsohaimysa、masryshd、shehataamg的“不同产地蜂蜜的理化特性(physicochemicalcharacteristicsofhoneyfromdifferentorigins)”(《农业科学年鉴》(annalsofagriculturalsciences)(2015)60(2),279-287)。[0016]-s.durmaza和o.okay的“丙烯酰胺/2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸钠水凝胶的合成与表征(acrylamide/2-acrylamido-2-methylpropanesulfonicacidsodiumsalt-basedhydrogels:synthesisandcharacterization)”(《聚合物》(polymer)(2000)41,3693–3704)。[0017]-oroianm、amarieis、leahua、guttg的“蜂蜜的多元素成分作为其真实性分析的合适工具(multi-elementcompositionofhoneyasasuitabletoolforitsauthenticityanalysis)”(《波兰食品和营养科学杂志》(pol.j.foodnutr.sci.)(2015)65(2),93-100)。[0018]-whitejr.jw的“蜂蜜(honey)”(《食品研究进展》(advancesinfoodresearch)(1978)24,287-374)。[0019]-公开号为wo2015/059501的国际专利申请。[0020]-alwailins等人的“蜂蜜用于伤口愈合、溃疡和烧伤；支持其在临床实践中使用的数据(honeyforwoundhealing,ulcers,andburns；datasupportingitsuseinclinicalpractice)”(《科学世界期刊》(thescientificworldjournal)(2011)11,766–787)。[0021]本公开对上述参考文献的认可不应被推断为意味着这些参考文献以任何方式与当前公开的主题的可专利性相关。
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：[0022]蜂蜜被描述为具有抗菌、抗炎和抗氧化活性，有助于清创作用、刺激伤口再生和加速伤口愈合过程。这种活性可以用过氧化氢的缓慢释放来解释，这是由于伤口渗出物与蜂蜜固有的葡萄糖氧化酶、高渗透压、酸性、高酚含量、淋巴细胞和抗体产生等的相互作用而产生[oryan等人，2016年]。[0023]为了保存蜂蜜的生物活性，应在尽可能低的温度下储存、加工和处理蜂蜜。蜂蜜的温度稳定性随蜂蜜类型和来源而变化。在高于40℃的温度下，大多数类型蜂蜜的生物活性受到影响。在这些温度下，会形成不良产物，如毒性5-羟甲基糠醛(hmf)[例如biluca等人,2014]。这些元素的产生是由于蜂蜜中存在的糖还原端的羧基与氨基酸和蛋白质的游离氨基反应(美拉德反应(maillardreaction))[dasilva等人，2016]。[0024]也有数据支持其在临床实践中的应用，如治疗伤口、溃疡和烧伤[alwaili等人，2011]。[0025]产生过氧化氢的葡萄糖氧化酶在最高55℃的温度下保持稳定，而在55-70℃时分解。其他活性特性在37℃时可能会受到影响[oryan等人，2016]。[0026]蜂蜜浸渍的伤口敷料已被描述，重点是一些蜂蜜的自由基产生[burton等人，2006]。[0027]cn108144109描述了一种含蜂蜜的互穿网络交联结构的水凝胶敷料。具有互穿网络交联结构的水凝胶敷料被描述为具有高强度并且在吸水后不容易崩解。水凝胶被进一步描述为具有高效的瞬时吸收速度和可持续吸收能力，可用于渗液更多的伤口。根据该公开文本，蜂蜜内部的金属离子参与水凝胶的交联，蜂蜜难以稀释和分离出来。交联反应发生在40-60℃(蜂蜜中的酶被破坏的温度)的高温下。据描述，含蜂蜜的水凝胶敷料表现出抗氧化性(这是由于蜂蜜的高温处理)和抑菌活性，为伤口提供湿润的愈合环境，该水凝胶敷料可用于制备医疗用品，具有良好的市场前景。[0028]片状水凝胶技术可以用于开发和制造先进的伤口护理产品，这些产品具有液体吸收、潮湿愈合环境维持和其他完全受控于工艺的特性[nalampang等人，2007]。uv下的交联(自由基聚合)提供了水凝胶的冷加工制造，允许将蜂蜜引入水凝胶中。然而，该工艺需要使用化学光引发剂和交联剂，这可能会降低水凝胶的生物相容性。[0029]wo2015/059501中描述了包含背衬层的伤口敷料，背衬层上设置有不连续的水凝胶层。其中水凝胶的不连续层是水凝胶的离散岛的形式。技术实现要素：[0030]本公开基于以下发现：在水凝胶制造的冷工艺中掺入蜂蜜可显著减少化学光引发剂和交联剂的用量或对化学光引发剂和交联剂的需求，同时保持蜂蜜在水凝胶中的酶活性，从而提供具有改善的生物相容性的伤口敷料。事实上，交联前蜂蜜的存在可以解决使用大量交联剂和聚合引发剂(例如紫外线引发剂)的需要，从而提供更安全的伤口敷料。[0031]因此，本公开旨在提供一种伤口敷料组合物，该伤口敷料组合物包含生物活性蜂蜜(例如被认为具有伤口愈合特性的蜂蜜)，并具有改善的生物相容性和改善的初级伤口护理作用，如下文进一步所描述。[0032]具体地，本文公开了一种伤口敷料组合物，该伤口敷料组合物包含交联的水凝胶支架和嵌入其中的抗菌活性的蜂蜜，所述活性通过检测所述伤口敷料的过氧化氢产生速率来确定，所述伤口敷料组合物包含光引发剂和/或至少一种uv交联剂中的至少一种，所述光引发剂和/或uv交联剂的总量等于或小于所述伤口敷料的总重量的0.2％w/w。[0033]本文还公开了一种制备伤口敷料组合物的方法，所述伤口敷料组合物包含交联的水凝胶支架和嵌入其中的抗菌活性的蜂蜜，所述方法包括混合包含一种或多种水凝胶形成单体、蜂蜜和至少一种光引发剂和/或至少一种uv交联剂的混合物，以形成均匀的混合物；并使该均匀的混合物经受uv照射(irradiation)，直到所述均匀的混合物固化。在一种优选情况下，所述混合物所包含的所述光引发剂和/或uv交联剂的量等于或小于伤口敷料组合物总重量的0.2％w/w。[0034]此外，本文公开了一种治疗伤口，例如治疗感染伤口的方法，该方法包括将本文公开的伤口敷料组合物放置在伤口上。[0035]本文公开的另一方法涉及预防伤口感染，该方法包括将本文公开的伤口敷料组合物放置在易发生感染例如在手术后的伤口上。[0036]本公开还提供了一种试剂盒，该试剂盒包含本文公开的伤口敷料组合物及其在伤口敷料中的使用说明。[0037]最后，本文公开了一种提供可用作本文公开的伤口敷料的抗微生物交联水凝胶的方法，该方法包括混合包含水凝胶形成单体和蜂蜜的混合物，并将混合物暴露于uv辐射(radiation)直至该混合物固化。附图说明[0038]为了更好地理解本文公开的主题，并举例说明如何在实践中实施该主题，现在将参考附图仅以非限制性示例的方式来描述实施例，其中：[0039]图1a-1b提供了lmesitran医用蜂蜜定义单体含量的tga结果，其中图1a提供tg，即lmesitran医用蜂蜜的重量百分比(wt％)与温度(℃)的关系，图1b提供了dtg，即lmesitran医用蜂蜜随时间(％/min)的重量变化百分比(wt％)与温度的关系，两个图的加热速率均为5℃/min。[0040]图2a-2b提供了透明质酸的tga结果，其中图2a提供了tg，即透明质酸的重量百分比(wt％)与温度(℃)的关系，图2b提供了透明质酸与温度(℃)的dtg；两个图的加热速率均为5℃/min。[0041]图3a-3b提供了amps的tga结果，其中图3a提供了tg，即amps的重量百分比(wt％)与温度(℃)的关系，图3b提供了dtg，即amps随时间(％/min)的重量变化百分比(wt％)与温度(℃)的关系；两个图的加热速率均为5℃/min。[0042]图4a-4e提供了来自组合物#2(图4a)、组合物#3(图4b)、组合物#4(图4c)、组合物#5(图4d)和组合物#6(图4e)的样品的tga(重量百分比(wt％)与温度(℃))，所有图的加热速率均为5℃/min。[0043]图5提供了含有蜂蜜的水凝胶(参见表5中的组合物#8)在不同剪切速率下的粘度的图。[0044]图6a-6b是根据本公开的手术后膝关节敷料的照片图像，为了防止手术部位感染(ssi)，在手术后立即施用敷料(图6a)，在患者没有ssi发展风险的情况下四天后出院(图6b)。[0045]图7a-7d是感染手术部位的照片图像，术后三个月(图7a)，用根据本公开的伤口敷料治疗1天(图7b)、治疗1周(图7c)和1个月后，在ssi治疗后使用伤口愈合促进系统进行补充治疗(图7d)。具体实施方式[0046]本公开提供了可用作伤口敷料的组合物，该组合物包含交联水凝胶支架和嵌入在支架中的具有抗菌活性的蜂蜜，所述伤口敷料组合物表现出抗菌活性，该抗菌活性被认为归因于来自蜂蜜的酶的活性。此外，如下文进一步讨论的，可通过伤口敷料检测过氧化氢产生速率来分析或确认抗菌活性。[0047]令人惊讶的是，在存在蜂蜜的情况下，伤口敷料组合物在存在uv光引发剂的情况下形成，该uv光引发剂的量显著低于不存在蜂蜜时所需的量(例如，参见表1c中的数据)。[0048]本文还公开了一种制备伤口敷料组合物的方法，该方法包括混合包含形成一种或多种水凝胶形成单体、蜂蜜和至少一种光引发剂和/或至少一种uv交联剂的混合物，以形成均匀混合物；并使该均匀混合物经受uv照射，直到所述均匀混合物固化。所述至少一种光引发剂和/或至少一种uv交联剂的量优选等于或小于混合物(和最终组合物)总重量的0.2％w/w。[0049]已经设想，在一定量(和相对低量)的光引发剂和/或交联剂存在的情况下，单体暴露于uv会导致单体交联，而不会损害蜂蜜的生物功能性，特别是其愈合性能。在这方面，值得注意的是，已经发现，与不含蜂蜜时所需的量相比，包含蜂蜜可显著减少引发剂和/或交联剂的用量，以引起交联形成固体伤口敷料。下表1c中也强调了这一点，表明在不存在蜂蜜的情况下，引发剂和交联剂中的一种或两种的量较高。换句话说，为了在没有蜂蜜的情况下充分固化，需要增加一种或两种物质的含量。例如，在没有蜂蜜的情况下，要达到无限粘度(即充分固化)，引发剂和交联剂的总量为0.9％w/w。在存在约10％w/w至约20％w/w蜂蜜以及引发剂和交联剂的总量为约0.2％w/w的情况下，达到了相同的粘度。[0050]本文公开的发现是意想不到的，并且提供了有益的产品，因为希望将伤口敷料中残留的引发剂和/或交联剂的量减至最小，并且包含蜂蜜，使得引发剂和/或交联剂的量显著减少。[0051]此外，发现在蜂蜜存在下，甚至在这些低量引发剂和/或交联剂下，所有单体都是交联的。这被认为是伤口敷料的一个重要特征，因为一旦施用到皮肤上，组合物中含有大量游离单体是不利的。换句话说，伤口敷料优选包含不可检测量的所述交联水凝胶支架的非交联单体单元。[0052]蜂蜜的存在以及至少一种光引发剂和/或交联剂的痕量允许达到理想的粘度，尽管引发剂和/或交联剂的量较低。[0053]伤口敷料组合物的粘度可通过常规方法测定，包括常用的粘度计。[0054]在一些示例中，使用t-bart-fhbdv-e(或本公开限定的轴(spindle)r7)测定粘度，转速约为12rpm。[0055]在一些情况下，本文公开的伤口敷料组合物的粘度至少为15,000cps，有时至少为30,000cps，有时至少为50,000cps，有时至少为100,000cps，有时至少为200,000cps，有时至少为300,000cps，有时多于333,000cps。[0056]例如，可以使用蜂蜜的愈合特性来确定伤口敷料组合物的粘度。蜂蜜的愈合特性是因为它提供抗菌活性，维持湿润的伤口状况，共同帮助提供保护屏障，以防止伤口感染。抗菌活性是由于酶促产生过氧化氢。一些人还报告说，蜂蜜的抗菌活性可能与蜂蜜的低ph水平和足以阻碍细菌生长的高糖含量(高渗透压)有关。例如，这可以在非过氧化物蜂蜜，例如麦卢卡蜂蜜(manukahoney)中看到。此外，抗菌活性可能是由于植物化学成分，例如甲基乙二醛(mgo)的存在有关。[0057]蜂蜜中的抗菌剂(因子)主要是过氧化氢物质，其浓度由葡萄糖氧化酶的相对水平决定，葡萄糖氧化酶由蜜蜂和源自花粉的过氧化氢酶合成。[0058]大多数类型的蜂蜜在稀释时产生h2o2，因为葡萄糖氧化酶的激活将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和h2o2，因此具有抗菌活性。但是，在一些情况下，如本公开提供的非限制性实例所示，蜂蜜中的过氧化物活性可容易地被热或过氧化氢酶的存在破坏。[0059]即使存在过氧化氢酶(不存在葡萄糖氧化酶)，蜂蜜也可能保持其抗菌活性，因此这种类型的蜂蜜被认为是“非过氧化蜂蜜”。已知有几种成分有助于非过氧化物活性，例如存在丁香酸甲酯和甲基乙二醛(例如麦卢卡蜂蜜)。[0060]讨论了蜂蜜的颜色与抗菌效力之间的相关性[albaridina，蜂蜜的抗菌效力(antibacterialpotencyofhoney)，国际微生物杂志(intjmicrobiol，2019；2019:2464507)，公开日：2019年6月2日：doi：10.1155/2019/2464507]。蜂蜜的颜色从浅黄色到琥珀色，从深红色到几乎黑色。蜂蜜的颜色可以反映存在的各种成分，例如多酚、矿物质和花粉。深色蜂蜜具有更高含量的色素，例如类黄酮。深色蜂蜜中酚类化合物含量较高，这与其较高的抗菌活性有很好的相关性。[0061]确定蜂蜜抗菌活性有多种方法，大多数集中于过氧化氢的生产水平或速率。例如，过氧化氢的生产速率可以通过使用过氧化氢测试条来测定，根据制造商的说明使用。例如，可将测试条浸入待测试的溶液中，在规定的时间(通常为几秒)后，根据预定的色标识别测试条的颜色。[0062]蜂蜜的颜色也与蜂蜜矿物质含量有关。浅色蜂蜜通常含有高达0.2％的金属离子和其他胶体物质，而深色蜂蜜可能含有1％或更高含量的金属离子。在目前的研究中，单花鳄梨蜂蜜(monofloralavocadohoney)被用作深色蜂蜜的模型，洋槐蜂蜜(acaciahoney)则被用作浅色蜂蜜。钾是蜂蜜中的主要矿物质，其含量与蜂蜜色素沉着相关，浅色蜂蜜中的平均含量为441ppm，深色蜂蜜中的平均含量为1676ppm。单花鳄梨蜂蜜可能平均含3800ppm的钾，而洋槐蜂蜜含约550ppm的钾。[0063]在一些示例中，蜂蜜是浅色蜂蜜。在不受约束的情况下，具有较低的生物负荷，因此，对于灭菌验证和其他要求，浅色蜂蜜可能比深色蜂蜜更可行。[0064]在一些示例中，蜂蜜是金属离子含量高达0.2％的蜂蜜。[0065]不管蜂蜜的颜色如何，有各种类型的蜂蜜可用于伤口愈合，因此用于本文公开的伤口敷料中。这些包括但不限于麦芦卡蜂蜜(leptospermumscopariumhoney)(例如麦卢卡(manuka)、医用级蜂蜜(medihoney)-深色)；荞麦蜜(buckwheathoney)(例如：principelle，深色)、洋槐蜂蜜(acaciahoney)(浅色)、无刺蜂蜜(浅色)、栗子蜜(chestnuthoney)(浅琥珀色)、杜鹃花蜜(rhododendronhoney)(浅色)、桉树蜂蜜(eucalyptushoney)(浅琥珀色)、百花蜜(polyfloralhoneys)(各种)、医用级蜂蜜(例如：honeys)(各种)、医用级蜂蜜(例如：)，后者包含40％医用级蜂蜜、羊毛脂(lanolin)、丙二醇、聚乙二醇4000、维生素c、维生素e。[0066]在本公开的上下文中，医用级蜂蜜(medicalgradehoney)或药用蜂蜜(medicinalhoney)应被理解为包括适合或已知适合施用于伤口上的任何蜂蜜。这种蜂蜜通常被认为是具有伤口愈合效果的蜂蜜。[0067]在一些情况下，由于产生过氧化氢或存在氧化葡萄糖，蜂蜜被认为具有抗菌活性。[0068]在一些情况下，蜂蜜与载体，例如医学或药学上可接受的亲脂性物质，例如油、蜡等混合。[0069]在一些情况下，医用级(药用)蜂蜜是不含已知杀虫剂和受控细菌含量的多花蜂蜜。[0070]蜂蜜的用量可能有所不同，具体取决于用引发剂和/或交联剂的用量以及所需的粘度水平。[0071]在一些实施例中，伤口敷料组合物在组合物中包含至少1％w/w的蜂蜜，有时至少5％w/w的蜂蜜，有时至少8％w/w的蜂蜜，有时至少10％w/w的蜂蜜，有时至少12％w/w的蜂蜜，有时至少14％w/w的蜂蜜，有时至少15％w/w的蜂蜜，有时至少18％w/w的蜂蜜，有时至少20％w/w的蜂蜜，有时至少22％w/w的蜂蜜，有时至少24％w/w的蜂蜜，有时至少26％w/w的蜂蜜，有时至少28％w/w的蜂蜜，有时至少30％w/w的蜂蜜，至少32％w/w的蜂蜜，有时至少34％w/w的蜂蜜、有时至少36％w/w的蜂蜜，有时至少38％w/w的蜂蜜，有时至少40％w/w的蜂蜜，有时至少42％w/w的蜂蜜，有时至少44％w/w的蜂蜜，有时至少46％w/w的蜂蜜或甚至高达50％w/w的蜂蜜。[0072]在一些情况下，蜂蜜的量为5％w/w至50％w/w范围内的任何量；有时为5％w/w至40％w/w之间的任何量；有时为10％w/w至40％w/w之间的任何量；有时为20％±15％w/w的量。[0073]本文公开的伤口敷料(组合物本身以及载体基质上的组合物)包括交联的水凝胶支架和嵌入支架中的活性蜂蜜。水凝胶的交联是在蜂蜜和引发剂和/或交联剂存在下uv照射的结果，这与热诱导交联相反，在热诱导交联中，热是交联的驱动力。[0074]在最终产品，即伤口敷料组合物中，交联的方式(类型)可以从是否存在抗菌活性(通过热交联会降低或消除抗菌活性)，以及任选地，是否存在至少微量(即低于0.2％w/w)光引发剂和/或uv交联剂中明显看出。光引发剂和uv交联剂中的一种或两种的微量可以在皮摩尔(picomoles)范围内，并且可以被认为一种区分用指纹形式，用于区分根据本公开生产的水凝胶和通过热聚合生产的水凝胶(如果不需要这种试剂)。[0075]如本文所述，由于功能性/生物活性蜂蜜，伤口敷料的抗菌活性提供了进一步的指纹。[0076]可用于形成伤口敷料并因此存在于本公开的伤口敷料中的光引发剂是本领域公知的。然而，不限于此，光引发剂可以是2-羟基-2-甲基丙苯酮、乙基(2,4,6-三甲基苯甲酰)苯基亚膦酸酯、10％-25％的二苯基(2,4,6-三甲基苯甲酰基)氧化膦、2-羟基-1-[4-(羟基乙氧基)苯基]-2-甲基-1-丙酮、1-羟基环己基苯基酮、2,2-二甲氧基-2-苯基苯乙酮等的一种或组合。[0077]可用于形成伤口敷料并因此存在于本公开的伤口敷料中的uv交联剂在本领域中也是众所周知的。然而，不限于此，uv交联剂可以是甲基丙烯酰氧基乙基乙烯基碳酸酯、nvp-aam077水合四钠、n,n-亚甲基双丙烯酰胺、四甘醇聚(乙二醇)甲基醚单甲基丙烯酸酯、四(乙二醇)二甲基丙烯酸酯、乙二醇二甲基丙烯酸酯、聚乙二醇(400)二丙烯酸酯(miramerm280)、4-(1-氧代-2-丙烯基)-吗啉(genocureacmo)中的一种或组合。[0078]在一些情况下，本文公开的伤口敷料包含至少微量的光引发剂或uv交联剂。[0079]在本公开的上下文中，当提及至少微量时，其应理解为可检测的量，但不超过形成组合物的材料总重量的0.2％w/w(不包括任何载体基质)。[0080]在一些情况下，微量是不超过0.19％w/w的量，有时是不超过0.18％w/w的量，有时是不超过0.17％w/w的量，有时是不超过0.16％w/w的量，有时是不超过0.15％w/w的量，有时是不超过0.1％w/w的量，有时是不超过0.09％w/w的量，有时是不超过0.08％w/w的量，有时是不超过0.07％w/w的量，有时是不超过0.06％w/w的量，有时是约0.05％w/w的量。[0081]在一些情况下，伤口敷料组合物包含至少微量的光引发剂。[0082]在一些情况下，伤口敷料组合物包含所述至少一种光引发剂和至少一种uv交联剂，其中所述至少一种光引发剂的量高达约0.1％w/w。[0083]在一些情况下，本文公开的伤口敷料包含至少微量的光引发剂和uv交联剂，合计量不超过0.2％。[0084]伤口敷料的水凝胶成分可以由不同类型的水凝胶形成单体形成，这些单体可通过uv照射交联。通常，当通过uv照射提供交联水凝胶时，可以使用含磺酸盐(sulfonate)的单体单元，即水凝胶是含磺酸盐的水凝胶。[0085]在一些示例中，水凝胶的单体单元是那些被鉴定为反应性亲水性单体的单元。[0086]在一些示例中，水凝胶的单体单元是那些被认为形成具有吸水/溶胀能力的医学上可接受的水凝胶的单体单元。[0087]在一些示例中，水凝胶的单体单元包括至少2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸(amps)。[0088]水凝胶可以是均聚物或共聚物。例如，水凝胶可以是amps均聚物。[0089]此外，例如，水凝胶可以是共聚物。例如，含有单体和乙烯基单体的磺酸盐。例如，已知amps与以下各种乙烯基单体反应：丙烯酸、衣康酸、丙烯酰胺、苯乙烯、乙酸乙烯酯、n-乙烯基吡咯烷酮、甲基丙烯酸2-羟乙酯、甲基丙烯酸2-羟丙酯、n,n-二甲基丙烯酰胺、n-乙烯基甲酰胺。[0090]在一些示例中，伤口敷料还包含其他生物聚合物，即除了形成水凝胶本身的交联聚合物之外的其他生物聚合物。[0091]在一些示例中，伤口敷料包含透明质酸(ha)。ha是一种已知具有抗菌活性的聚合物。ha被成功地结合到含蜂蜜的水凝胶中，以提供强化的伤口敷料。不受理论的束缚，ha(以及一些其他多糖，如角豆树胶(carobgum)，一种已知的市售半乳甘露聚糖)，可促进/改善伤口分泌的液体在伤口敷料中的吸收。ha的量可以变化，但通常不超过伤口敷料(包括水)总重量的5％。有时，ha的量占伤口敷料总重量的0.1％至2％w/w之间，有时占伤口敷料总重量的0.5％至1.5％w/w之间。[0092]伤口敷料的特征在于其保持水或盐水的能力。该参数与敷料吸收伤口挤出物的能力相关。在一些示例中，伤口敷料在与液体材料接触之前具有至少700wt％的水性液体(盐水或水)保持能力。[0093]本文公开的伤口敷料也可包含载体基质，即水凝胶和蜂蜜的组合嵌入载体基质内或载体基质上。载体基质可以是无菌聚合物或无菌织物。例如，载体基质可以是聚氨酯层压材料。如果载体基体是织物，则可以是织造或非织造织物。[0094]首先将一种或多种水凝胶形成单体与光引发剂和/或uv交联剂溶解以形成单体组分，然后将其与含蜂蜜的组分混合，直至获得均匀混合物，从而制备伤口敷料。混合可以在均质器中进行。[0095]使用其他聚合物时，通常将其加入含单体的组分中，直至所有成分均匀混合。[0096]各组分的混合物优选为均相混合物。[0097]对于聚合和形成水凝胶，在受控条件下将混合物暴露于uv照射，直到混合物固化。有时，混合物首先与载体基质接触，然后才暴露于uv光。例如，可以用混合物浸泡载体基质，可以在载体基质上刷涂或喷涂混合物等。[0098]当提及受控条件下的uv照射时，应理解为足以发生交联的条件。这些条件取决于所用单体、光引发剂、uv交联剂、蜂蜜和其他聚合物的类型和/或浓度。[0099]在一些示例中，固化/聚合包括使用230v/50hz、400w汞灯，进行uv光暴露。曝光时间可能有所不同，但通常是从毫秒到几秒。[0100]汞紫外灯输出主要为uvc光谱。这足以提供有效的固化。使用条件，包括汞紫外灯在各种紫外波长下的输出，可依据灯制造商提供的说明书获得。[0101]一旦制备好，伤口敷料可储存在专用包装中，通常是无菌包装。[0102]根据需要，伤口敷料用于治疗伤口。在这种情况下，治疗应理解为也包括预防性(preventative/prophylactic)治疗，即预防不期望的情况发生。[0103]在一些示例中，伤口敷料用于治疗被诊断为感染细菌感染的伤口。在其他一些示例中，伤口敷料用于治疗尚未被确定为有感染的、易发生感染的伤口。[0104]不限于此，本文公开的伤口敷料可用于治疗开放性伤口、外科手术伤口、褥疮、昆虫咬伤和由皮肤疾病引起的继发性炎症。在一个具体示例中，伤口敷料与外科手术一起使用。[0105]在一些情况下，伤口敷料可用于手术部位，以治疗或预防术后并发症，如手术部位感染(ssi)。[0106]伤口治疗可包括用新鲜伤口敷料定期更换伤口。更换的频率将取决于伤口治疗的时间、被治疗伤口的状况、形成伤口敷料的成分组成以及医生通常考虑的任何其他因素。[0107]非限制性示例[0108]伤口敷料组合物的制备[0109]材料[0110]单体：[0111]2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸钠盐，特别是amps2408a，由lubrizolchemical公司生产，包括溶解在水中的58％w/w的单体，cas号为15214-89-8。[0112]合成来源的透明质酸钠(ha)，分子量约1420000da，化学清洁度大于93％，由西安品诚生物技术有限公司(xi'anpincreditbio-techco.,ltd)生产，cas号为9067-32-7。[0113]澄清豆角(clarifiedcarob)(刺槐豆(locustbean))胶，化妆品级，由cpkelco公司生产，cas号为9000-40-2。[0114]高酰基结冷凝胶(highacylgellangum)(1-2×106道尔顿)化妆品等级，由cpkelco公司生产，cas号为71010-52-1。[0115]甲基纤维素(methocela40m)，食品级改性纤维素，由陶氏化学(dow)公司生产，cas号为9004-67-5。[0116]黄原胶(keltrol高级性能黄原胶，化妆品级)，由cpkelco,huber公司生产，cas号为11138-66-2。[0117]光引发剂：[0118]2-羟基-2-甲基丙苯酮(genocuredmha)，由瑞士瑞安集团(rahngroup)生产，cas号为7473-98-5，作为低压光引发剂。[0119]乙基(2,4,6-三甲基苯甲酰)苯基亚膦酸酯(genocuretpo-l)，由瑞士瑞安集团(rahngroup)生产，cas号为4434-11-7，作为中压光引发剂。[0120]10％-25％的二苯基(2,4,6-三甲基苯甲酰基)氧化膦，由瑞士瑞安集团(rahngroup)生产，cas号为75980-60-8，作为广谱光引发剂。[0121]经过特殊处理的药用蜂蜜，由lmesitran公司生产，cas号为8028-66-8，作为广谱光引发剂。[0122]交联剂：[0123]乙二醇二甲基丙烯酸酯，由默克(merck)公司生产，cas号为25852-47-5。[0124]聚乙二醇(400)二丙烯酸酯(miramerm280)，由瑞士瑞安集团生产，cas号26570-48-9。[0125]4-(1-氧代-2-丙烯基)-吗啉(genocureacmo)，由瑞士瑞安集团(rahngroup)生产，cas号为5117-12-4。[0126]活性成分[0127]透明质酸、钠盐作为超强吸收剂。[0128]医用级蜂蜜作为抗菌剂。[0129]其他组分[0130]不同制造商生产的1,2,3-丙三醇(甘油)，cas号56-81-5，作为溶剂。[0131]纯化水作为溶剂。[0132]方法和结果[0133]水凝胶中最佳蜂蜜含量的测定[0134]影响固化过程的蜂蜜最佳含量已通过粘度测量(添加amps至100％含量)预先确定，如下表1所述。[0135]将各种受试混合物的所有组分混合在一起并均质化，直至均匀透明。然后将混合物暴露于uv中1秒(详见“水凝胶方案的固化(聚合)(curing(polymerization)ofhydrogelprotocol)”部分)，形成交联水凝胶。收集这些水凝胶样品，并测量其粘度。[0136]使用comecta公司生产的“canon-fenske”不透明粘度计测量小于1000cps的低粘度(在这方面，请参见tianguangfan(2001年10月26日)http://www.prrc.nmt.edu/groups/petrophysics/media/pdf/viscometer.pdf描述的使用canon-fenske粘度计的粘度测量)。[0137]使用myrvr-3000brookfield型粘度计测量高于1000cps的粘度，该粘度计具有以下轴：[0138]-轴r2，转速为12rpm，粘度在1000cps至3333cps之间；[0139]-轴r3，转速为12rpm，粘度在3333cps至8333cps之间；[0140]-轴r5，转速为12rpm，粘度在8333cps至33333cps之间；[0141]-轴r7，转速为12rpm，粘度在33333cps至333333cps之间。[0142]对于高粘度，当液体仍表现为牛顿流体时，在各种剪切速率下检查粘度并求平均值。当行为变为非牛顿粘度时，在高剪切速率下(当粘度没有显著变化时)对一系列粘度进行平均。[0143]通常，水凝胶系统中从牛顿行为到非牛顿行为的转变发生在约1000mpas至10000mpas之间。在此范围内，粘度行为仍可视为牛顿行为。表1a提供了包含10％蜂蜜、0.15％交联剂且不含引发剂的配方的粘度。[0144]表1a：粘度与剪切速率的关系[0145][0146]在非牛顿行为下，与平均粘度的偏差随剪切速率的增加而显著增加。因此，在粘度高于10000mpas时，粘度应在较高剪切速率的结果上取平均值。表1b提供了含10％蜂蜜和0.05％引发剂但不含交联剂的配方的粘度。这种行为是非牛顿性的。[0147]表1b：粘度与剪切速率的关系[0148][0149]在不受理论的束缚的情况下，认为增加的粘度应证明聚合过程的引发。粘度越高表示聚合度越高。然而，在聚合的某一阶段，水凝胶产生粘弹性和剪切稀化行为，并变得坚硬(粘度变得无穷高(未在表1b中显示))。因此，稳定粘度测试仅用于指示聚合过程。[0150]表1c中提供了用于水凝胶配方的初始调整的粘度测量结果，该水凝胶配方包含固定量的单体amps和ha(53.15％的amps和1％的ha，表示蜂蜜、交联剂和引发剂(并用工艺用水填充至1％)的量)。[0151]表1c-包括单体amps在内的各种组合物的混合物的粘度[0152][0153]表1c示出蜂蜜可以部分代替光引发剂和/或交联剂。当蜂蜜浓度为5％时，效果可忽略不计(包含0.05％引发剂、0％交联剂和5％蜂蜜的混合物的粘度从18cps增加到100cps)。在蜂蜜浓度为10％和20％时，聚合过程更为明显。含有20％蜂蜜的水凝胶是优选的，因为其治疗性能更好(见下文)。研究表明，在所有配方中，引发剂和交联剂的组合量可以等于或小于0.2％w/w，以便在蜂蜜存在下充分固化。鉴于在不含蜂蜜(“0”蜂蜜)的情况下，相同固化所需的这些药剂的量要高得多，因此这是独一无二的。[0154]选择蜂蜜[0155]为了更好地理解蜂蜜的作用机理，检验了两种类型的蜂蜜(l-mesitran浅色蜂蜜和鳄梨深色蜂蜜)的一部分单体混合物，并检验了每种混合物的粘度。[0156]具体而言，在室温或50℃加热条件下将蜂蜜加入单体混合物中。在加热的情况下，混合物仅在混合时保持在50℃，直至均匀。未向每种混合物中加入光引发剂或交联剂。[0157]当每种混合物的温度达到25℃时，测定粘度。加入蜂蜜前，每种混合物的粘度为10-11cps(基线，固化前)。含有蜂蜜(但不含任何引发剂或交联剂)固化后的粘度见表2。[0158]表2包含蜂蜜和单体的混合物的粘度(amps)[0159][0160]表2示出含有鳄梨蜂蜜的混合物的粘度高于含有l-mesitran医用蜂蜜的混合物的粘度。然而，当在50℃混合时，蜂蜜浓度的增加不会影响最终的粘度。据推测，粘度的差异在于，鳄梨蜂蜜含有金属离子(在医用蜂蜜中不存在)，这些金属离子在高温(即50℃)下，甚至在没有交联剂或引发剂的情况下，诱导单体(amps)交联/聚合过程，然而在此温度下蜂蜜不再形成自由基。因此，发生的唯一聚合过程是由金属离子诱导的。[0161]结果还表明，在无金属离子或金属离子含量较低的医用蜂蜜中，20％蜂蜜的低温交联水平较高。这可以解释为加热对蜂蜜中酶产生h2o2的抑制作用，因此也降低了加热下的交联水平。换句话说，加热似乎具有双重破坏作用，一方面减少了交联，另一方面降低了蜂蜜中所含酶的活性。上述结果建议在以下实验中使用20％蜂蜜。[0162]表3表示水凝胶混合物的粘度，在室温(rt)或50℃下用鳄梨蜂蜜混合制备水凝胶混合物。[0163]表3含有鳄梨蜂蜜(深色鳄梨)的各种组合物的交联水凝胶的粘度，其中鳄梨蜂蜜包含单体[0164][0165]表3示出，在不存在蜂蜜的情况下，交联和水凝胶形成是低的(低粘度)，然而，在存在蜂蜜的情况下，即使存在金属离子(存在于深色蜂蜜中)，也有交联。有趣的是，在相同的交联剂浓度下，加热降低了酶对交联过程的贡献。这可能是由于加热对蜂蜜中固有存在的酶的影响，即可能是因为加热破坏了蜂蜜中固有酶的功能/活性。[0166]测定蜂蜜混合物中过氧化物含量的方案[0167]本试验的目的是测定混合物中形成的过氧化物的量。含量越高，含蜂蜜制剂的抗菌活性越高。过氧化物由蜂蜜中的酶活性形成。希望酶不被破坏，例如不被通常在热聚合中发生的加热破坏。[0168]方案：[0169]·取50g水凝胶混合物(也可以是刚性水凝胶)；[0170]·加入40g水并混合，直至均匀，或者在使用刚性水凝胶的情况下，等待水被完全吸收；[0171]·在30℃下培育1小时；[0172]·检验溶液/凝胶的ph值是否在2-12之间。如果不是，使用氢氧化钠或柠檬酸调节ph；[0173]·取一条过氧化氢25；[0174]·将测试条浸入测试溶液中1秒；[0175]·抖掉多余的液体/凝胶；[0176]·等待15秒；[0177]·与比色刻度尺比较，如果存在过氧化氢，测试区域会变为蓝色。[0178]结果：[0179]在30℃培育1小时后的过氧化氢含量见表4。在此方面测试的组合物包括0.05％光引发剂、0.15％交联剂、53.15％amps、1％ha和指定的蜂蜜，加水至100％。产量[0180]表4不同组合物释放的h2o2(三次重复的平均值)[0181][0182][0183]结果表明，含10％洋槐蜂蜜的情况下，相同浓度下，室温下已经很好的产生了2-5mg/lh2o2，但在50℃下没有过氧化物产生，这表明产生过氧化物所需的酶的活性已被加热破坏。[0184]结果还表明，深色蜂蜜和浅色蜂蜜在室温下均能更好的产生h2o2，这是加热时酶活性被破坏的结果。[0185]值得注意的是，结果表明，过氧化物的释放不需要存在聚合引发剂或交联体，仅取决于蜂蜜的存在。[0186]水凝胶-透明质酸(ha)制剂[0187]最终的制剂还包含透明质酸(ha)，以促进/改善伤口分泌的任何液体的吸收。为此，制定了以下制备方案：[0188]预混料i(premixi)：将3％的ha分散在水中，等待约24小时，直至完全溶解且均匀。加入l-mesitran医用蜂蜜，混合至均匀。[0189]预混料ii(premixii)：向主混合反应器中加入amps，加入光引发剂和交联剂，并均质化，直至均匀透明。确保预混料ii表面没有出现油渍。[0190]在混合状态下逐渐将预混料i加入预混料ii。均质化直至均匀。保持缓慢混合，避免紫外线照射，直至进料至固化站(以在时间之前避免不希望的交联)。[0191]如下所述，进行紫外光固化。[0192]根据上述方案，制备了八种水凝胶组合物用于分析。表5中提供了组合物1-8。[0193]蜂蜜中的金属含量从浅色蜂蜜中的0.04％到深色蜂蜜中的0.2％不等[oryan等人，2016]。选择l-mesitran洋槐医用蜂蜜有多种原因，包含的矿物质和金属离子含量低，因此认为其具有更好的抗菌活性，并且生物负荷低于深色蜂蜜(因此使灭菌过程更可行)。[0194]表5水凝胶-ha组合物[0195][0196]组合物4、5和6包含相同量的光引发剂。组合物3、5和6包含相同量的交联剂。[0197]组合物6代表最终/首选的组合物。组合物3与组合物6的不同之处在于，光引发剂被水取代(即，组合物3中没有光引发剂)。组合物4不同于与组合物6，其中交联剂被水取代(即在组合物4中没有交联剂)。组合物5与组合物6的不同之处在于，lmesitran医用蜂蜜被水代替。组合物2与组合物6的不同之处在于，其不含交联剂或光引发剂。组合物7和8与组合物4不同，其中蜂蜜部分被水取代。[0198]水凝胶的uv固化(聚合)[0199]水凝胶分布在基材表面，因此表面的凝胶深度/厚度在0.9mm至1.3mm之间。然后用密度为13克/平方米重量的非织造材料覆盖凝胶，以防止表面张力驱动的流动和凝胶深度的变化。在230v/50hz、400w汞灯(德国hoenle集团公司生产)下暴露约1秒进行固化。各种uv波长的汞uv灯输出可在制造商规格中获得。[0200]汞uv灯输出主要为uvc光谱。这足以提供有效的固化。[0201]测定固化水平[0202]使用两种独立的技术测试表4中详述的组合物的单体含量(即交联水平)：热重分析[golon和kuhnert,2013；simkovic等人，2003]和flory-rehner方法[durmaza和okay，2000]，如下所述。[0203]热重分析(tga)[0204]对水凝胶组合物进行热分解分析，以确定每种水凝胶组合物中的单体含量(即固化水平)。使用sdtq600热重分析仪根据总体质量损失观察水凝胶的热分解。[0205]将10mg样品均匀松散地分布在由氧化铝制成的敞口盘中，并放入微型炉中。加热速率为5℃/min。温度变化控制在室温(25℃)至最终温度200℃之间。在测试期间连续记录重量损失、加热时间和样品温度。[0206]分解温度是基于tga仪器软件的差分热重分析(dtg)发现的，并固定在dtg数据的极值点。某一分解温度的下限和上限是dtg曲线拐点，最接近dtg的极值(分解)点，或测试区域的限值(rt或200℃)。[0207]为了正确分析水凝胶样品，在测试前对主要原料(单体和lmesitran医用蜂蜜)进行分析，以验证其分解温度。[0208]图1a-1b、2a-2b和3a-3b分别表示原料lmesitran医用蜂蜜、透明质酸(ha)和amps的tga(tg和dtg)结果。tga分析的数据也汇总于下表5中。[0209]具体而言，图1a-1b示出，lmesitran医用蜂蜜包含三种主要元素：第一种元素在约90℃下分解，推测其为水(样品在测试前未干燥，以防止糖分解)，第二种元素在约130℃下分解，推测其为果糖[agolon，(2013年)。同上]，第三种元素在约190℃下分解，推测其为蔗糖[isimkovic等人，2003，同上]。[0210]在tg分析中，确切的分解点并不明显。正如所理解的，化学清洁物质在特定温度下分解。然而，蜂蜜在一定温度范围内分解可能是由于一些杂质或lmesitran医用蜂蜜的天然来源，包括有机物，如蜂蜡、植物部分、蜜蜂和其他昆虫组织、杀虫剂等的组合。此外，一些天然单糖在高温下不断降解，形成具有不同特性的其他类型的糖，例如果糖分解为乳糖。但是，分解点可以从dtg结果中检测出来。[0211]ha也是逐渐分解的，如图2a-2b所示。尽管合成来源和相对化学纯度本应提供ha分解的相对窄的温度范围，但这还是发生了。逐渐分解可能是由于ha的高吸湿性，即使在干燥样品中也会导致相对较高的含水量。[0212]amps单体的分解点由图3a-3b确定，准确度较高。[0213]表6总结了分解温度和在这些分解温度下可能分解的元素。[0214]表6：基于tga分析的蜂蜜、ha和amps含量和分解温度[0215][0216]此外，还测定了在164℃至199℃温度范围内组合物2-6的tga，结果分别在图4a-4e中示出。[0217]根据dtg分析估计，成分2和成分3(分别如图4a和4b所示)的分解温度为186℃，成分4(如图4c所示)的分解温度为188℃，成分5和成分6(分别如图4d和4e所示)的分解温度为190℃。这些小的差异可以被认为在标准实验误差的范围内，和/或由组合物中的杂质等引起。[0218]在5℃/min的加热速率下，23.8806％的干amps单体样品在164℃至199℃的温度下分解(参见图3a-3b)。组合物2-6包括30.83％的amps干单体，因此由于amps，组合物2-6在固化前的质量降低预期为7.36％。在相同的实验条件下，lmesitran药用蜂蜜在163℃至199℃的温度下损失了其重量的8.6612％。因此，当将20％的lmesitran药用蜂蜜加入制剂(组合物2、3、4)中时，预计这些组合物的样品在固化前会额外减轻约1.73％的重量。假设由于固化引起的蜂蜜浓度变化可忽略不计，则固化后水凝胶样品中amps单体的浓度测定如下：[0219][0220]其中，camps,i为固化后样品i中amps单体的浓度；i＝2,3,4,5是为表4中所述的组合物编号(#)；ci是在164℃至199℃之间的温度下组合物i的重量减少百分比；ih(组合物2、3、4为0.2(20％)，组合物5为0)是固化前组合物i中lmesitran医用蜂蜜的一部分；ch,0为lmesitran医用蜂蜜样品的重量减少(详见图1)；camps,0为amps单体样品的重量减少(参见图4)；iamps为0.3083(所有组合物)是固化前组合物i中amps单体的一部分。[0221]测定了组合物2-6在164℃至199℃温度范围内的tga结果，结果如表7所示。[0222]表7基于tga分析的聚合后单体的组成和浓度[0223][0224]由此能够看出，当没有向组合物中加入光引发剂时，约50％w/w的单体聚合(组合物2中单体从30.83％的减少至15.2％，组合物3中单体减少至14.9％)。当向组合物中加入0.15％的交联剂时，amps单体的含量从组合物中2的15.2％降至组合物3中的14.9％，因此引发剂可以至少部分被蜂蜜替代。当加入0.05％的光引发剂时，amps单体的浓度从组合物2中的15.2％降至组合物4中的零(0％)。当制剂中未加入蜂蜜，但使用0.15％化学交联剂和0.05％化学引发剂时，单体浓度高于包含0.05％化学引发剂和不含化学交联剂的制剂中单体的浓度，即组合物5中单体浓度为4.5，而在组合物4中单体浓度仅为4.0％。因此，化学交联剂可以完全被lmesitran医用蜂蜜替代，甚至比化学交联剂更有效。[0225]关于组合物6，值得注意的是，由于蜂蜜的存在，样品重量预计减少1.73％，而实际结果是重量减少1.699％。这种微小差异可能是由于实验误差。[0226]flory-rehner法[0227]为了使用flory-remner法测定水凝胶中的单体含量，在测试前将测试样品干燥至湿度小于1％。为了降低单体蒸发的风险，在40℃下干燥组合物。具体而言，将100克样品在40℃培养箱中干燥10天，在干燥器中冷却12小至室温，并称重。称重后，在40℃下再次培育样品。每5天检验一次样品重量(第15、20、25天等)。如果两次后续测试(第15天和第10天，或第20天和第15天等)之间的重量差异在天平的精度范围内，则样品可用于以下测试。干燥时间可能随天气、lmesitran医用蜂蜜的含水量和其他参数而变化。在大多数情况下，干燥时间为15天(但可以达到20天，甚至25天)。[0228]将干燥水凝胶组合物(100gr)的样品放置在包括1l纯化水的容器中，在室温下混合25分钟。然后将水替换为新鲜的1l纯化水，并混合25分钟。该步骤之后，将样品干燥、称重、洗涤并再次干燥。重复该步骤，直至干燥样品的重量停止变化。[0229]在这些条件下，ha单体可以完全蒸发，蜂蜜可以与单体一起从水凝胶中完全溶解。在分析测试结果时，应考虑这些可能的影响。[0230]对干燥前后的样品进行称重，并估算固化前干燥制剂中的单体浓度，结果见表8。[0231]在表8中，估算含量(克)是固化前组合物中元素的浓度乘以根据制造商规格(amps为30.83％，ha为0.93％)的含量和样品重量。相对于干燥样品重量，在固化前估算浓度。用于研究的蜂蜜在40℃下干燥，直至重量停止变化，蜂蜜批次中的含水量为9％。[0232]在固化前，湿样品中amps单体的浓度等于53.15％的amps2405a(详见表4)，或30.83％的干amps单体。固化前，湿样品中ha单体的浓度等于1％的ha(详见表4)，或高于0.93％的干ha。[0233]表8干燥样品组合物(2至8)[0234][0235][0236]请注意，组合物5中amps和ha的总估算(理论)含量为(97.8 2.9＝100.7％)，即至少24.7％，这是干燥时蒸发的0.93克ha中的0.23克。这是基于最坏情况的估算，根据以上内容，在干燥过程中，光引发剂和交联剂完全蒸发，而amps由于相对高的分解温度而没有蒸发(分解温度在164℃至197℃之间，干燥温度为40℃)。[0237]根据上述步骤，将表5中所述的样品洗涤并干燥3至5次。样品中单体含量估算如下：[0238]wamps,m＝wd-ww-wh，(2)[0239]其中[0240]wamps,m为固化后估算的amps单体含量。[0241]wd为干燥后样品的重量。[0242]ww为清洗后的干燥样品的重量。[0243]wh为作为干残渣的蜂蜜含量。[0244]水凝胶wa中amps单体的浓度，定义为wamps,m占干燥前总初始样品重量(w)的百分比。[0245]表9表示固化后的amps单体含量，采用flory-remner法估算样品(2至8)。[0246]表9根据flory-rener法计算的干样品重量和单体残渣(2至8)[0247][0248]请注意，采用flory-remner法估算的固化后amps单体浓度高于采用tga法估算的浓度(详见表4)，但总体趋势保持不变。因此，较高的单体浓度可能与处理过程中的重量损失和其他实验误差有关。[0249]抗菌活性[0250]在测试抗菌活性时，制备了伤口敷料，由20％蜂蜜、0.05％光引发剂、0.15％交联剂、1％ha、53.15％amps，以及水添加至100％的组合物制备而成。[0251]所描述的方法可用于制造活性抗菌绷带，这些绷带已进行过手术部位感染(ssi)预防和治疗测试。约10％的患者出现ssi。[0252]高危组患者的ssi预防包括在手术后立即用无菌透明质酸和蜂蜜水凝胶绷带包扎手术部位，并在24小时至4天内重新施用(取决于伤口状况)。[0253]图6a-6b为ssi预防敷料的示例，其中敷料在手术后直接施用(图6a)，并在术后12小时再施用一次。手术后4天，患者出院，没有发生ssi的风险(图6b)。值得注意的是，在所有施用水凝胶敷料的试验中，均未出现ssi。[0254]使用本文公开的伤口敷料进行的ssi治疗，包括敷料的施用和定期更换，直到手术部位干净，并且没有观察到炎症。[0255]图7a-7d为手术后3个月ssi患者的ssi治疗结果。治疗前(术后3个月)的手术部位情况如图7a所示；治疗后1天的手术部位情况如图7b所示；水凝胶治疗结束时(大约治疗1周)的手术部位状况如图7c所示。治疗阶段(1周)后，使用含蜂蜜的l-mesitran软凝胶加速手术部位的愈合。图7d表示愈合阶段开始后1个月的手术部位状况。[0256]图6a-6b和7a-7d中所示的结果清楚地表明，由20％蜂蜜、0.05％光引发剂、0.15％交联剂、1％ha、53.15％amps形成的伤口敷料在预防炎症发展(图6b)，以及在治愈已经发展的ssi方面非常有效。[0257]生物相容性[0258]namsa实验室检验了水凝胶的生物相容性，并表现出良好的生物相容性，如下所述。[0259]细胞毒性[0260]细胞毒性试验是根据iso1-5(医疗器械生物学评价-第5部分：体外细胞毒性试验)的要求进行的。使用含有l-929小鼠成纤维细胞亚汇合单层的六孔组织培养板的培养孔进行测试。向一式三份的孔中加入供试品部分(包含水凝胶和20％蜂蜜、0.05％引发剂和0.15％交联剂的伤口敷料)、高密度聚乙烯作为阴性对照或乳胶作为阳性对照。将各制品(各供试品或对照品)与l-929细胞直接接触。培育24-26小时后，用显微镜(100x)检验培养物，以确定制品附近是否存在任何异常细胞形态和细胞裂解。供试品对l-929细胞显示轻微的细胞毒性，并被确定符合监管要求。[0261]皮肤敏感性[0262]进一步评估了供试品在豚鼠中引发延迟皮肤接触致敏的可能性。本研究基于iso-10[医疗器械的生物评估，第10部分：刺激和皮肤致敏试验]的要求进行。[0263]在3周的时间内，将供试品以封闭的方式贴敷到10只动物的完整皮肤上，持续6小时(±30分钟)，每周三次，历时3周。对照品同样贴在5只动物身上。经过2周的恢复期后，以封闭的方式将供试品和对照品贴敷到10只试验动物和5只对照动物。在贴剂移除后24小时和48小时，观察所有部位是否出现皮肤反应。供试品未显示出导致豚鼠延迟皮肤接触致敏的证据。[0264]皮肤刺激[0265]评估了该产品对兔子的原发性皮肤刺激。本研究是按照iso10993-10，医疗器械的生物评估，第10部分：刺激和皮肤致敏试验的指南进行的。将两个25mm×25mm的供试品和对照品切片局部施用于三只兔子的皮肤上，并放置至少23小时，最多24小时。在取出单个样品后1、24、48和72小时，对这些部位的红斑和水肿进行分级。在接受供试品处理的动物皮肤上未观察到红斑和水肿。[0266]供试品的初级刺激指数计算为0.0。供试品的反应被归类为可忽略不计。当前第1页12当前第1页12
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