使用抗FcRn抗体治疗温性自身免疫性溶血性贫血的方法与流程

使用抗fcrn抗体治疗温性自身免疫性溶血性贫血的方法
1.本发明要求于2019年11月19日提交的美国临时专利申请第62/937,395号的优先权的权益，其全部内容通过引用整体并入本文。
2.本技术包含序列表，该序列表已经以ascii格式电子提交，并且通过引用将其全部内容整体并入本文。所述ascii副本于2020年11月12日创建，命名为15193_0005-00304_sl.txt，大小为34,226字节。
3.本发明涉及包含分离的抗fcrn抗体或其抗原结合片段的治疗方法、用途和组合物，所述分离的抗fcrn抗体或其抗原结合片段与新生儿fc受体(fcrn)结合以预防、调节或治疗温性自身免疫性溶血性贫血。在某些方面，本发明提供了通过向有需要的患者施用抗fcrn抗体或其抗原结合片段来治疗或预防温性自身免疫性溶血性贫血的方法。在某些方面，本发明提供了用于治疗或预防温性自身免疫性溶血性贫血的药物组合物，该药物组合物包含抗fcrn抗体或其抗原结合片段和至少一种药学上可接受的载体。
4.抗体是与特定抗原结合的免疫蛋白。在包括人和小鼠在内的大多数动物中，抗体由成对的重链和轻链多肽构成，每条链由两个不同的区域组成，称为可变区和恒定区。重链可变区和轻链可变区在抗体之间显示出显著的序列多样性，并负责与靶抗原的结合。恒定区显示较少的序列多样性，并负责结合许多天然蛋白，从而引发各种生化事件。
5.在正常条件下，大多数igg(即igg1、igg2和igg4，不包括igg3同种型)的平均血清半衰期在人类中约为21天(morell et al.,j.clin.invest.49(4):673-80,1970)，这相对于其他血浆蛋白的血清半衰期而言时间较长。考虑到igg的血清半衰期如此长，通过内吞作用进入细胞的igg可以在ph值为6.0的内体中与新生儿fc受体(fcrn)牢固结合，从而避开溶酶体降解途径(fcrn是一种fcγ受体，也称为fcrp、fcrb或brambell受体)。当igg-fcrn复合物循环到质膜时，igg与fcrn在弱碱性ph(约7.4)的血液中迅速解离。通过该受体介导的再循环机制，fcrn有效地拯救了igg使其免于溶酶体的降解，从而延长了igg的半衰期((roopenian et al.,j.immunol.170:3528,2003)。
6.在新生大鼠肠道中鉴定出fcrn，fcrn在其中起介导igg从母乳中吸收igg并促进igg转运至循环系统的作用。还已从人胎盘中分离出fcrn，fcrn在其中介导母体igg的吸收和将母体igg运输至胎儿血液循环。在成年人中，fcrn在许多组织中表达，包括肺、肠、肾的上皮组织以及鼻、阴道和胆管树表面。
7.fcrn是非共价异二聚体，通常位于内皮细胞和上皮细胞的内体中。fcrn是具有三个重链α结构域(α1、α2和α3)和单个可溶性轻链β2-微球蛋白(β2m)结构域的膜结合受体。从结构上讲，它属于具有β2m作为共同轻链的主要组织相容性复合物分子家族i类。fcrn链的分子量为约46kda，由包含α1、α2和α3重链结构域和β2m轻链结构域的胞外域组成，并具有单糖链、单次跨膜蛋白和相对短的胞质尾区。
8.为了研究fcrn对igg稳态的贡献，已对小鼠进行了工程改造，以“敲除”编码β2m和fcrn重链的基因的至少一部分，以便使所述蛋白质不表达。在这些小鼠中，igg的血清半衰期和浓度显著降低，提示igg稳态的fcrn依赖性机制。还提出可以在这些fcrn敲除小鼠中产生抗人fcrn抗体，并且所述抗体可以阻止igg与fcrn结合。抑制igg与fcrn的结合会通过阻
止igg再循环而消极地改变igg血清半衰期。
9.自身免疫性溶血性贫血是一种罕见的异质性疾病，每年影响大约每100,000名患者中的1至3名患者(michel,expert rev.hematol.4(6):607-18,2011；sokol et al.,br.med.j.(clin.res.ed.)282(6281):2023-7,1981)。该疾病的病理学可能是由于自身抗体在有或没有补体激活的情况下与rbc抗原反应而触发的正常的红细胞(rbc)破坏增加引起的(barcellini,transfus.med.hemother.42(5):287-93,2015)。根据自身抗体在体内与患者rbc结合的最佳温度，将自身免疫性溶血性贫血分为三种主要类型：温性自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征和阵发性冷性血红蛋白尿。温性自身免疫性溶血性贫血是最常见的自身免疫性溶血性贫血类型，约占所有成人病例的约70％至约80％且约占儿童病例的50％(sokol et al.,br.med.j.(clin.res.ed.)282(6281):2023-7,1981)。
10.在温性自身免疫性溶血性贫血中，自身抗体在约37℃时与rbc反应最佳。被温性反应性igg包被的rbc通常与携带igg重链的fcγ受体的脾脏巨噬细胞结合，并且被吞噬或者形成微球形红细胞而在其下一次通过脾脏时受到进一步破坏(kalfa,hematology am.soc.hematol.educ.program 2016(1):690-7,2016)。当高浓度的igg或对补体具有高亲和力的igg与rbc结合时，补体(c1q)可以与c3b结合并被激活。然后c3b调理的rbc可以被携带c3b受体的肝巨噬细胞吞噬，进一步促成rbc的破坏(barcellini,transfus.med.hemother.42(5):287-93,2015；berentsen,transfus.med.hemother.42(5):303-10,2015；lobuglio et al.,science 158(3808):1582-5,1967)。因此，自身抗体如igg可以在温性自身免疫性溶血性贫血的发病机制中发挥作用。
11.在各种实施方式中，本发明提供了用于治疗患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者的治疗方法、用途和组合物。在各种实施方式中，本发明更具体地提供了一种通过向患者施用治疗有效量的抗fcrn抗体或其抗原结合片段来治疗患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者的方法。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段被配制成药物组合物。还提供了本文所述的抗体、抗原结合片段和药物组合物的治疗用途。
12.在各种实施方式中，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物治疗降低了患者和/或来自患者(例如患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者)的样本中的至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg，例如，病原性igg(例如，病原性igg1、病原性igg2、病原性igg3或病原性igg4)、血清igg1、血清igg2、血清igg3或血清igg4)的水平。在各种实施方式中，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗使患者和/或来自患者的样本中的至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)的水平相对于治疗前患者和/或样本中该至少一种自身抗体和/或病原性抗体的水平降低至少约25％、约35％、约45％、约50％、约60％、约70％或约80％。在各种实施方式中，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗降低了患者和/或来自患者(例如患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者)的样本的至少一种igg的水平。在各种实施方式中，至少一种igg包含病原性igg(例如，病原性igg1、病原性igg2、病原性igg3或病原性igg4)。在各种实施方式中，至少一种igg包含血清igg1。在各种实施方式中，至少一种igg包含血清igg2。在各种实施方式中，至少一种igg包含血清igg3。在各种实施方式中，至少一种igg包含血清igg4。
13.在各种实施方式中，至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)的水平的最大降低发生在施用抗体、抗原结合片段或药物组合物后约5天至约30天。在一些实
施方式中，至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)的水平的最大降低发生在单剂量的抗体、抗原结合片段或药物组合物后约8天。在一些实施方式中，在约3至4剂抗体、抗原结合片段或药物组合物后达到稳态。
14.在各种实施方式中，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗降低了患者和/或来自患者(例如患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者)的样本中的总血清igg水平。在各种实施方式中，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平相对于治疗前患者和/或样本中总血清igg水平降低至少约25％、约35％、约45％、约50％、约60％、约70％或约80％。在各种实施方式中，在每周给药进行约1周或2周后，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平相对于治疗前患者和/或样本中的总血清igg水平降低至少约40％(例如，约40％至约50％)。在各种实施方式中，在每周给药进行约3周后，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平相对于治疗前患者和/或样本中的总血清igg水平降低至少约60％(例如，约60％至约70％)。在各种实施方式中，在每周给药进行约5周后，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平相对于治疗前患者和/或样本中的总血清igg水平降低至少约70％(例如，约70％至约80％)。在各种实施方式中，总血清igg水平的最大降低发生在施用抗体、抗原结合片段或药物组合物后约5天至约30天。在各种实施方式中，总血清igg水平的最大降低发生在约3剂至5剂(例如，约4剂之后)抗体、抗原结合片段或药物组合物之后。
15.在各种实施方式中，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗增加了患者和/或来自患者(例如患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者)的样本中的血红蛋白水平。在各种实施方式中，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗使患者和/或来自患者的样本中的血红蛋白水平相对于治疗前患者和/或样本中的血红蛋白水平增加至少约5％、约10％、约15％或约20％(例如，约5％至约30％)。在各种实施方式中，在每周给药进行约1周或2周后，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗使患者和/或来自患者的样本中的血红蛋白水平相对于治疗前患者和/或样本中的血红蛋白水平增加至少约10％(例如，约10％至约15％)。在各种实施方式中，在每周给药进行约1周或2周后，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗使患者和/或来自患者的样本中的血红蛋白水平相对于治疗前患者和/或样本中的血红蛋白水平增加至少约20％(例如，约20％至约25％)。在一些实施方式中，在整个治疗期或其一部分中维持患者和/或来自患者的样本中血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)。在一些实施方式中，患者和/或来自患者的样本中血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)维持至少2周、3周或4周(例如，4周或更长时间)。在一些实施方式中，患者和/或来自患者的样本中血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)维持约2周至约6周。
16.在各种实施方式中，本发明提供了用于治疗或预防温性自身免疫性溶血性贫血的治疗方法、用途和组合物。
17.在各种实施方式中，本发明提供了一种治疗或预防有需要的患者的温性自身免疫性溶血性贫血的方法，该方法包括向患者施用：(i)治疗有效量的抗fcrn抗体或其抗原结合片段；或(ii)包含至少一种药学上可接受的载体和治疗有效量的抗fcrn抗体或其抗原结合
片段的药物组合物。
18.在各种实施方式中，本发明提供了一种用于治疗或预防有需要的患者的温性自身免疫性溶血性贫血的方法的抗fcrn抗体或其抗原结合片段，该方法包括向患者施用：(i)治疗有效量的该抗体或抗原结合片段；或(ii)包含至少一种药学上可接受的载体和治疗有效量的该抗体或抗原结合片段的药物组合物。
19.在各种实施方式中，本发明提供了抗fcrn抗体或其抗原结合片段在治疗或预防有需要的患者的温性自身免疫性溶血性贫血的方法中的用途，该方法包括向患者施用：(i)治疗有效量的该抗体或抗原结合片段；或(ii)包含至少一种药学上可接受的载体和治疗有效量的该抗体或抗原结合片段的药物组合物。
20.在各种实施方式中，本发明提供了抗fcrn抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗或预防有需要的患者的温性自身免疫性溶血性贫血的药物中的用途。
21.在各种实施方式中，本发明提供了一种试剂盒，其包含抗fcrn抗体或其抗原结合片段和在治疗或预防有需要的患者的温性自身免疫性溶血性贫血中使用该抗体或抗原结合片段的说明。
22.在各种实施方式中，本发明提供了一种用于治疗或预防有需要的患者的温性自身免疫性溶血性贫血的药物组合物，该药物组合物包含至少一种药学上可接受的载体和抗fcrn抗体或其抗原结合片段。
23.在本文公开的治疗方法、用途和组合物(例如，用于治疗或预防温性自身免疫性溶血性贫血)的一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:27的氨基酸序列(hcdr1)、seq id no:28的氨基酸序列(hcdr2)和seq id no:29的氨基酸序列(hcdr3)；和轻链可变区，其包含seq id no:30的氨基酸序列(lcdr1)、seq id no:31的氨基酸序列(lcdr2)和seq id no:32的氨基酸序列(lcdr3)。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:21的氨基酸序列(hcdr1)、seq id no:22的氨基酸序列(hcdr2)和seq id no:23的氨基酸序列(hcdr3)；和轻链可变区，其包含seq id no:24的氨基酸序列(lcdr1)、seq id no:25的氨基酸序列(lcdr2)和seq id no:26的氨基酸序列(lcdr3)。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约170mg至约1500mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约300mg至约800mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约340mg至约680mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约340mg或约680mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以一次或多次皮下注射每周一次施用约340mg至约680mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约340mg或约680mg(例如约680mg)持续至少2周(例如2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、10周、12周或更长时间)。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约340mg或约680mg(例如约680mg)持续至少4周。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约340mg或约680mg(例如约680mg)持续至少7周。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约340mg或约680mg(例如约680mg)持续至少12周。
24.在本文所公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，抗体或抗原结合片段是在国际申请pct/kr2015/004424号(公开号wo 2015/167293 a1)(其通过引用并入本
文)中公开的任何抗体或抗原结合片段。
25.在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：
26.cdr1，其包含一个或多个选自由seq id no：21、24、27、30、33、36、39和42组成的组的氨基酸序列；
27.cdr2，其包含一个或多个选自由seq id no：22、25、28、31、34、37、40和43组成的组的氨基酸序列；和
28.cdr3，其包含一个或多个选自由seq id no：23、26、29、32、35、38、41和44组成的组的氨基酸序列。
29.在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：
30.cdrl，其包含与一个或多个选自由seq id no:21、24、27、30、33、36、39和42组成的组的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列；
31.cdr2，其包含与一个或多个选自由seq id no:22、25、28、31、34、37、40和43组成的组的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列；和
32.cdr3，其包含与一个或多个选自由seq id no:23、26、29、32、35、38、41和44组成的组的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。
33.在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:27的氨基酸序列(hcdr1)、seq id no:28的氨基酸序列(hcdr2)和seq id no:29的氨基酸序列(hcdr3)；和轻链可变区，其包含seq id no:30的氨基酸序列(lcdr1)、seq id no:31的氨基酸序列(lcdr2)和seq id no:32的氨基酸序列(lcdr3)。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:21的氨基酸序列(hcdr1)、seq id no:22的氨基酸序列(hcdr2)和seq id no:23的氨基酸序列(hcdr3)；和轻链可变区，其包含seq id no:24的氨基酸序列(lcdr1)、seq id no:25的氨基酸序列(lcdr2)和seq id no:26的氨基酸序列(lcdr3)。
34.在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含一个或多个重链可变区和一个或多个轻链可变区，其中重链可变区和轻链可变区包含一个或多个选自由seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18和20的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列。
35.在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:4或seq id no:6的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含seq id no:14或seq id no:16的氨基酸序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:6的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含seq id no:16的氨基酸序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:4的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含seq id no:14的氨基酸序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:2的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含seq id no:12的氨基酸序列。
36.在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含一个或多个重链可变区和一个或多个轻链可变区，其中重链可变区和轻链可变区包含与一个或多个选自由seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18和20的氨基酸序列组成的组的
氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在各种实施方式中，重链可变区和轻链可变区包含与一个或多个选自由seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18和20的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的氨基酸序列。
37.在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含与seq id no:6至少90％相同的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含与seq id no:16至少90％相同的氨基酸序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含与seq id no:4至少90％相同的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含与seq id no:14至少90％相同的氨基酸序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含与seq id no:2至少90％相同的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含与seq id no:12至少90％相同的氨基酸序列。
38.在各种实施方式中，根据通过例如表面等离子体共振(spr)测量的，抗体或抗原结合片段在ph6.0或ph7.4下以约0.01nm至约2nm的kd(解离常数)与fcrn结合。在各种实施方式中，通过表面等离子共振(例如，人fcrn-固定的表面等离子共振)来测量kd。在各种实施方式中，通过人fcrn固定的表面等离子共振来测量kd。
39.在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段是本文公开或以引用方式并入的任何抗体或抗原结合片段。
40.在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，患者或来自患者的样本(例如，患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者)具有可检测水平的抗红细胞igg(抗rbc igg)。在一些实施方式中，抗rbc igg是抗rbc igg1。在一些实施方式中，抗rbc igg是抗rbc igg2。在一些实施方式中，抗rbc igg是抗rbc igg3。在一些实施方式中，抗rbc igg是抗rbc igg4。
41.在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，皮下施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在各种实施方式中，以一次或多次皮下注射施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在各种实施方式中，以一次或多次静脉内注射来施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在各种实施方式中，在一次或多次皮下注射之前在不进行静脉内施用(例如，静脉内诱导)的情况下施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在各种实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物在施用前包含在注射器中。在各种实施方式中，以单次(即，一次)皮下注射施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在各种实施方式中，以两次或更多次(例如两次)连续皮下注射施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在各种实施方式中，以固定剂量施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。
42.在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物作为单剂量施用一次或每周施用一次至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以单次皮下注射每周一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以两次或更多次连续皮下注射每周一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，持续至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少9周、至少10周、至少12周、至少20周、至少24周、至少30周、至少40周、至少50周、至少60周、至少70周、至少76周、至少80周或更长时间。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行至少4周。在一些实施方式中，将抗体、
抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行6至76周，或介于两者之间的任何时间段。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行至少6周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行至少7周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行至少12周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行至少24周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行至少76周。在一些实施方式中，每周一次向患者施用抗体、抗原结合片段或药物组合物直到足以对温性自身免疫性溶血性贫血的一种或多种症状进行治疗、预防、降低严重性、延迟发作和/或降低其发生的风险。
43.在一些实施方式中，患者患有温性自身免疫性溶血性贫血。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以单次皮下注射每周一次施用至患者，进行至少4周(例如，以约340mg的剂量)。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以单次皮下注射每周一次施用至患者，进行至少7周(例如，以约340mg的剂量)。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以单次皮下注射每周一次施用至患者，进行至少12周(例如，以约340mg的剂量)。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以两次或更多次(例如两次)连续皮下注射每周一次施用至患者，进行至少4周(例如，以约680mg的剂量)。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以两次或更多次(例如两次)连续皮下注射每周一次施用至患者，进行至少7周(例如，以约680mg的剂量)。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以两次或更多次(例如两次)连续皮下注射每周一次施用至患者，进行至少12周(例如，以约680mg的剂量)。在一些实施方式中，以一次或多次皮下注射每周一次向患者施用抗体、抗原结合片段或药物组合物直到足以对患者的温性自身免疫性溶血性贫血的一种或多种症状进行治疗、预防、降低严重性、延迟发作和/或降低其发生的风险。在一些实施方式中，以约340mg或约680mg的剂量向患者施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。
44.在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次(每两周一次)施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物作为单次皮下注射每2周一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以两次或更多次连续皮下注射每2周一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次施用至患者，进行至少2周、至少4周、至少6周、至少8周、至少10周、至少12周、至少20周、至少24周、至少30周、至少40周、至少50周、至少60周、至少70周、至少76周、至少80周或更长时间。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次施用至患者，进行6至76周，或介于两者之间的任何时间段。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次施用至患者，进行至少6周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次施用至患者，进行至少12周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次施用至患者，进行至少24周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次施用至患者，进行至少76周。在一些实施方式中，每2周一次向患者施用抗体、抗原结合片段或药物组合物直到足以对温性自身免疫性溶血性贫血的一种或多种症状进行治疗、预防、降低严重性、延迟发作和/或降低其发生的风险。
45.在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每月一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物作为单次皮下注射每月一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以两次或更多次连续皮下注射每月一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每月一次施用至患者，进行至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月或更长时间。在一些实施方式中，每月一次向患者施用抗体、抗原结合片段或药物组合物直到足以对温性自身免疫性溶血性贫血的一种或多种症状进行治疗、预防、降低严重性、延迟发作和/或降低其发生的风险。
46.在一些实施方式中，在约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、18个月、24个月、30个月、36个月或更长的时间段内将抗体、抗原结合片段或药物组合物施用于患者一次或多于一次。
47.在各种实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物由患者自行施用。在各种实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物由患者在家中自行施用。在各种实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物由治疗临床医生施用。在各种实施方式中，单独，即，作为单一药剂施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在各种实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物与至少一种另外的治疗剂联合施用。
48.在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约170mg至约300mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约300mg至约500mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约500mg至约700mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约700mg至约900mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约900mg至约1100mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约1100mg至约1300mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约1300mg至约1500mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量是使患者和/或来自患者的样本中的至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)的水平降低至少约25％、约35％、约45％、约50％、约60％、约70％、约80％或更多所需的量。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量是使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg的水平降低至少约25％、约35％、约45％、约50％、约60％、约70％、约80％或更多所需的量。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量是使患者和/或来自患者的样本中的血红蛋白水平增加约5％、约10％、约15％、约20％或更多所需的量。
49.在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约300mg至约900mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次或每2周一次施用约300mg至约900mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约300mg至约400mg、约400mg至约500mg、约500mg至约600mg、约600mg至约700mg、约700mg至约800mg或约800mg至约900mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次或每2周一次施用约300mg至约400mg、约400mg至约500mg、约500mg至约600mg、约600mg至约700mg、约700mg至约800mg或约800mg至约900mg。
50.在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约300mg至约400mg(例如约300mg至约350mg，例如约340mg)。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约340mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约340mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以单次皮下注射每周一次施用约340mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约340mg，进行至少2周(例如2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、10周、12周或更长时间)。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为为每周一次施用约340mg，进行至少4周。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约340mg，进行至少7周。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约340mg，进行至少12周。
51.在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约650mg至约750mg(例如约650mg至约700mg，例如约680mg)。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为约680mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约680mg。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以两次或更多次(例如两次)连续皮下注射每周一次施用约680mg。在各种实施方式中，每次皮下注射包含大约等量(例如，约340mg)的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约680mg，进行至少2周(例如2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、10周、12周或更长时间)。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约680mg，进行至少4周。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约680mg，进行至少7周。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约680mg，进行至少12周。
52.在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，用本发明的抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗降低了患者和/或来自患者(例如患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者)的样本中的至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)的水平。在一些实施方式中，治疗使患者和/或来自患者的样本中的至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)的水平，即，相对于治疗前患者和/或样本中至少一种自身抗体和/或病原性抗体的水平。降低至少约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％或约90％。在一些实施方式中，治疗使患者和/或来自患者的样本中的至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)的水平，即，相对于治疗前患者和/或样本中至少一种自身抗体和/或病原性抗体的水平，降低至少约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％或约90％。在一些实施方式中，在治疗开始时和/或在治疗开始后约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周和/或约8周时测量至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)的水平。在一些实施方式中，患者的至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)的水平的最大降低发生在施用抗体、抗原结合片段或药物组合物后约5天至约40天或约5天至约30天。在一些实施方式中，患者的至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)水平的最大降低发生在施用抗体、抗原结合片段、或药物组合物后约15天至约30天。
53.在一些实施方式中，至少一种igg包含病原性igg(例如，病原性igg1、igg2、igg3或
igg4)。在一些实施方式中，至少一种igg包含抗rbc igg(例如，抗rbc igg1、抗rbc igg2、抗rbc igg3和/或抗rbc igg4)。在一些实施方式中，至少一种igg包括igg1、igg2、igg3或igg4。在一些实施方式中，至少一种igg包含血清igg1。在一些实施方式中，至少一种igg包含血清igg2。在一些实施方式中，至少一种igg包含血清igg3。在一些实施方式中，至少一种igg包含血清igg4。
54.在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，用本发明的抗fcrn抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗降低了患者和/或来自患者(例如，患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者)的样本中的总血清igg水平。在一些实施方式中，治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平，即，相对于治疗前患者和/或样本中的总血清igg水平，降低至少约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％或约90％。在一些实施方式中，治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平，即，相对于治疗前患者和/或样本中的总血清igg水平，降低至少约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％或约90％。在各种实施方式中，在每周给药进行约1周或2周后，治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平，即，相对于治疗前患者和/或样本中的总血清igg水平，降低至少约40％(例如，约40％至约50％)。在各种实施方式中，在每周给药进行约3周后，治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平，即，相对于治疗前患者和/或样本中的总血清igg水平，降低至少约60％(例如，约60％至约70％)。在各种实施方式中，在每周给药进行约5周后，治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平，即，相对于治疗前患者和/或样本中的总血清igg水平，降低至少约70％(例如，约70％至约80％)。在一些实施方式中，在治疗开始时和/或在治疗开始后约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周和/或约8周时测量总血清igg水平。在一些实施方式中，患者总血清igg水平的最大降低发生在施用抗体、抗原结合片段或药物组合物后约5天至约40天或约5天至约30天。在一些实施方式中，患者总血清igg水平的最大降低发生在施用抗体、抗原结合片段或药物组合物后约15天至约30天。在一些实施方式中，总血清igg水平的最大降低发生在约3剂至5剂(例如，约4剂之后)抗体、抗原结合片段或药物组合物之后。
55.在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，用本发明的抗fcrn抗体、抗原结合片段或药物组合物进行治疗增加了患者和/或来自患者(例如患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者)的样本中的血红蛋白水平。在各种实施方式中，治疗使患者和/或来自患者的样本中的血红蛋白水平，即，相对于治疗前患者和/或样本中血红蛋白水平，增加至少约5％、约10％、约15％或约20％(例如，约5％至约30％)。在各种实施方式中，在每周给药进行约1周或2周后，治疗使患者和/或来自患者的样本中的血红蛋白水平，即，相对于治疗前患者和/或样本中的血红蛋白水平，增加至少约10％(例如，约10％至约15％)。在各种实施方式中，在每周给药进行约1周或2周后，治疗使患者和/或来自患者的样本中的血红蛋白水平，即，相对于治疗前患者和/或样本中的血红蛋白水平，增加至少约20％(例如，约20％至约25％)。在一些实施方式中，在整个治疗期或其一部分中维持患者和/或来自患者的样本中血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)。在一些实施方式中，患者和/或来自患者的样本中血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)维持至少2周、3周或4周(例如，4周或更长时间)。在一些实施方式中，患者和/或来自患者的样本中
血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)维持约2周至约6周。
附图说明
56.图1示出了在还原或未还原条件下在sds-page凝胶上分析抗体在cho-s细胞中的表达并分析通过蛋白a纯化获得的hl161a、hl161b、hl161c和hl161d抗体蛋白的结果。在非还原条件下，每种hl161抗体均具有大小约为160kda的完整人igg1型结构，在还原条件下，重链的大小约为55kda，轻链大小约为25kda。在图1中，泳道1代表分子量(m.w.)标记，泳道2代表2μg未还原(经*nem处理)的抗体，泳道3代表2μg还原的抗体。
57.图2a至图2h示出了使用表面等离子体共振(spr)系统执行的分析以确定与fcrn结合的四种抗体(hl161a、hl161b、hl161c和hl161d)的动力学解离(kd)的结果。使用proteon glc芯片和proteon xpr36(bio-rad)系统通过分析在ph6.0和ph7.4下人fcrn与hl161a、hl161b、hl161c或hl161d抗体之间的相互作用而获得图2a至图2h的结果。
58.图2a示出了分析在ph6.0下人fcrn与hl161a抗体之间的相互作用的结果。
59.图2b示出了分析在ph7.4下人fcrn与hl161a抗体之间的相互作用的结果。
60.图2c示出了分析在ph6.0下人fcrn与hl161b抗体之间的相互作用的结果。
61.图2d示出了分析在ph7.4下人fcrn与hl161b抗体之间相互作用的结果。
62.图2e示出了分析在ph6.0下人fcrn与hl161c抗体之间的相互作用的结果。
63.图2f示出了分析在ph7.4下人fcrn与hl161c抗体之间的相互作用的结果。
64.图2g示出了分析在ph6.0下人fcrn与hl161d抗体之间的相互作用的结果。
65.图2h示出了分析在ph7.4下人fcrn与hl161d抗体之间的相互作用的结果。
66.图3示出了选择的两种抗体与细胞表面结合的能力，并且显示了通过用与细胞表面上存在的人fcrn结合的所选择的hl161a和hl161b抗体处理过表达人fcrn的hek293细胞并分析在ph6.0和ph7.4下与细胞表面结合的抗体而获得的结果。hl161a和hl161b抗体中的每种与人fcrn的结合以mfi值表示，该值是通过在不同ph值下用每种抗体处理细胞后，使用alexa488标记的抗人山羊抗体进行荧光激活细胞分选(facs)获得的。
67.图4示出了分析在ph6.0下阻断人igg与表达人fcrn的细胞结合的能力的结果，并显示了在细胞水平上，两种与细胞表面人fcrn结合的抗体是否可以阻断人igg与人fcrn结合的观察结果。通过将被确认与过表达人fcrn的hek293细胞结合的hl161a和hl161b抗体中的每种由200nm起连续稀释4倍，获得了阻断alexa488标记的人igg与人fcrn结合的能力的谱图。
68.图5a和图5b示出了分析选自表达人fcrn的转基因小鼠tg32(hfcrn / ，hβ2m / ，mfcrn-/-，mβ2m-/-)的hl161a和hl161b抗体对hlgg1的分解代谢的影响的结果。在第0小时，腹膜内施用5mg/kg的生物素-higg和495mg/kg的人igg以使体内igg饱和。关于药物施用，在施用生物素-igg后24、48、72和96小时，每天一次以5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量腹膜内注射igg1、hl161a、hl161b或pbs。在施用生物素-igg后24、48、72、96、120和168小时进行样本收集。在第24、48、72和96小时，在施用药物前收集血液，并通过elisa法分析生物素-igg的剩余量。结果表示为在每个时间点的剩余量相对于在第24小时收集的血液样本中的剩余量(作为100％)的比率。
69.图6a至图6c示出了分析对与人fcrn具有96％序列同源性的食蟹猴施用两种抗体
(hl161a和hl161b)而引起的猴igg血液水平变化的结果。每天一次以5mg/kg和20mg/kg的剂量将hl161a和hl161b抗体分别静脉内注射给食蟹猴。
70.图6a示出了在不同抗体浓度下hl161a和hl161b抗体的血清igg减少作用。
71.图6b示出了hl161a和hl161b抗体(猴个体中的浓度：(5mg/kg))的血清igg减少作用。
72.图6c示出了hl161a和hl161b抗体(猴个体中的浓度：(20mg/kg)的血清igg降低作用)。
73.图7a和图7b示出了在使用食蟹猴进行的实验中分析hl161a和hl161b的药代动力学谱的结果。
74.图8a至图8c示出了在使用食蟹猴进行的实验中分析由于施用hl161a和hl161b抗体引起的猴igm、iga和白蛋白血液水平变化的结果。
75.图8a示出了猴的血清igm水平的变化。
76.图8b示出了猴的血清iga水平的变化。
77.图8c示出了猴的血清白蛋白水平的变化。
78.图9示出了皮下(sc)或静脉内(iv)施用后健康对象中的单剂量和多剂量rvt-1401(hl161bkn)(n＝rvt-1401:安慰剂)。
79.图10a和图10b示出了在单剂量iv和sc施用rvt-1401后健康对象的平均浓度-时间曲线(图10a：iv；图10b：sc)。
80.图11a和图11b示出了每周sc施用340mg或680mg的rvt-1401后健康对象的平均浓度-时间曲线(图11a：线性图；图11b：半对数图)。
81.图12示出了在每周sc施用340mg或680mg的rvt-1401后健康对象的血清igg浓度-时间曲线。
82.图13a示出了在单剂量iv施用rvt-1401(340mg、765mg、1530mg)或安慰剂后健康对象中血清igg从基线降低的百分比(％)。箭头表示rvt-1401施用的时间。图13b示出了在单剂量sc施用rvt-1401(340mg、765mg)或安慰剂后健康对象中血清igg从基线降低的百分比(％)。箭头表示rvt-1401施用的时间。
83.图14a至图14e示出在多剂量sc施用rvt-1401(340mg、680mg)或安慰剂后健康对象中血清igg(总igg和igg亚类)从基线降低的百分比(％)。箭头表示rvt-1401施用的时间(每周一次
×
4周)。
84.图14a示出了在多剂量sc施用rvt-1401(340mg、680mg)或安慰剂后健康对象中血清igg(总)从基线降低的百分比(％)。
85.图14b示出了在多剂量sc施用rvt-1401(340mg、680mg)或安慰剂后健康对象中血清igg1从基线降低的百分比(％)。
86.图14c示出了在多剂量sc施用rvt-1401(340mg、680mg)或安慰剂后健康对象中血清igg2从基线降低的百分比(％)。
87.图14d示出了在多剂量sc施用rvt-1401(340mg、680mg)或安慰剂后健康对象中血清igg3从基线降低的百分比(％)。
88.图14e示出了在多剂量sc施用rvt-1401(340mg、680mg)或安慰剂后健康对象中血清igg4从基线降低的百分比(％)。
89.图15示出了评估rvt-1401(每周680mg和每周340mg)在患有温性自身免疫性溶血性贫血(warm autoimmune hemolytic anemia，waiha)的患者中的安全性、耐受性、pk、pd和功效的非随机、开放标签研究的研究设计。以每周一次rvt-1401sc注射，对诊断为具有waiha的患者进行治疗：给药方案a(每周680mg，进行12周(队列1))和给药方案b(每周340mg，进行12周(队列2))。以每周两次sc注射施用给药方案a(每周680mg)，以每周单次sc注射施用给药方案b(每周340mg)。星号(**)表示队列1首先录入，然后是队列2。
具体实施方式
90.为了可以更容易地理解本发明，在整个详细描述中定义了某些术语。除非本文另有定义，否则结合本发明使用的所有科技术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同含义。本文引用的所有参考文献也通过引用并入用于任何目的。如果引用的参考文献与本文的公开内容相冲突，则以说明书为准。
91.如本文所用，单词的单数形式也包括复数形式，除非上下文另外明确指出。作为示例，术语“一”，“一个”和“该”被理解为单数或复数的。举例来说，“一个元素”是指一个或多个元素。除非特定上下文另外指出，否则术语“或”表示“和/或”。除非具体上下文另有说明，否则所有范围，包括以“值x和值y之间”的形式记载的范围，都包括端点和介于两者之间的所有点。
92.在一些实施方式中，本发明涉及治疗或预防温性自身免疫性溶血性贫血的方法，该方法通过向需要治疗的患者施用抗fcrn抗体或其抗原结合片段或通过向需要治疗的患者施用包含至少一种药学上可接受的载体和抗fcrn抗体或其抗原结合片段的药物组合物来进行。在一些实施方式中，本发明涉及抗fcrn抗体或其抗原结合片段在治疗或预防温性自身免疫性溶血性贫血的方法中的用途，该方法通过向需要治疗的患者施用抗fcrn抗体或抗原结合片段或通过向需要治疗的患者施用包含至少一种药学上可接受的载体和抗fcrn抗体或抗原结合片段的药物组合物来进行。在一些实施方式中，本发明涉及抗fcrn抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗或预防温性自身免疫性溶血性贫血的药物中的用途。在一些实施方式中，本发明涉及用于治疗或预防温性自身免疫性溶血性贫血的方法中的抗fcrn抗体或其抗原结合片段。还公开了包含抗fcrn抗体或其抗原结合片段和至少一种药学上可接受的载体的药物组合物并且该药物组合物可用于本文所述的治疗方法和用途。
93.如本文所用，术语“治疗”及其同源词是指疾病、病症或病状(例如，温性自身免疫性溶血性贫血)或其至少一种可辨别的症状(例如，本文描述的任何一种或多种体征和/或症状)的缓解。术语“治疗”包括但不限于温性自身免疫性溶血性贫血的一种或多种症状的完全治疗或完全缓解。在一些实施方式中，“治疗”是指患者不一定可辨别的至少一种可测量的物理参数的至少部分缓解，例如至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，病原性igg)水平和/或总血清igg水平的降低，或血红蛋白水平的升高。在一些实施方式中，“治疗”是指在身体上(例如，可辨别的症状的稳定)、生理上(例如，物理参数的稳定)或两者上抑制温性自身免疫性溶血性贫血的进展。在一些实施方式中，“治疗”是指减慢或逆转温性自身免疫性溶血性贫血的进展。如本文所用，“治疗”及其同源词还包括延迟温性自身免疫性溶血性贫血发作或降低获得温性自身免疫性溶血性贫血的风险。本文公开的抗体、抗原结合片段和药物组合物也可用于预防或防范温性自身免疫性溶血性贫血。例如，预防方法可包
括向处于发展成温性自身免疫性溶血性贫血的风险的对象施用本文公开的抗体、抗原结合片段或药物组合物，以预防或减少发展成温性自身免疫性溶血性贫血、或其至少一种可辨别的症状的机率。在一些实施方式中，要治疗的疾病、病症或病状是温性自身免疫性溶血性贫血。
94.术语“对象”和“患者”在本文可互换使用，是指任何人或非人动物。非人动物包括所有脊椎动物(例如，哺乳动物和非哺乳动物)，例如任何哺乳动物。哺乳动物的非限制性实例包括人、小鼠、大鼠、兔子、狗、猴和猪。在各种实施方式中，对象是人。在各种实施方式中，对象是患有或怀疑患有温性自身免疫性溶血性贫血的人。
95.如本文所用，术语“温性自身免疫性溶血性贫血”或“waiha”是指由在等于或高于正常体温的温度下附着并破坏红细胞(有或没有补体激活)的自身抗体的存在定义的自身免疫病状。温性自身免疫性溶血性贫血也可称为温性抗体溶血性贫血、特发性温性抗体溶血性贫血、温性抗体自身免疫性溶血性贫血和/或温性反应性抗体病。通常，温性自身免疫性溶血性贫血中的抗体在37摄氏度时反应最佳。与温性自身免疫性溶血性贫血有关的最常见的抗体同种型是igg，其中igg1和igg3更普遍(kalfa,hematology am.soc.hematol.educ.program 2016(1):690-7,2016)。通过补体介导的机制对rbc的血管内破坏仅在小比例的温性自身免疫性溶血性贫血患者中起作用。在大多数患者中，被温性反应性igg包被的红细胞经fcrn与脾巨噬细胞结合，这可能导致它们被吞噬或在脾中去除其膜的一部分。在后一种情况下，此类红细胞可以形成微球形红细胞，然后在它们下一次通过脾脏时受到进一步破坏(kalfa,hematology am.soc.hematol.educ.program 2016(1):690-7,2016)。cd8

t细胞和自然杀伤细胞(nk细胞)也可能通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)促进rbc裂解。
96.waiha的临床表现通常以疲劳、劳力性呼吸困难、苍白和脾肿大为特征。常见的实验室检查结果包括但不限于：血红蛋白(hb)降低、网状红细胞增多症、未结合胆红素和乳酸脱氢酶升高、血清天冬氨酸氨基转移酶不成比例地高于血清丙氨酸氨基转移酶以及结合珠蛋白降低(kalfa,hematology am.soc.hematol.educ.program 2016(1):690-7,2016)。温性自身免疫性溶血性贫血的体征和症状包括但不限于皮肤异常苍白(苍白)、疲劳、劳累时呼吸困难、头晕、心悸、皮肤和/或眼白发黄(黄疸))、脾脏肿大(脾肿大)和肝脏肿大(肝肿大)。受影响的个体，尤其是那些逐渐出现贫血的个体，也可能是无症状的并且不表现出任何体征或症状。温性自身免疫性溶血性贫血的诊断可能涉及全面的临床评估、详细的患者病史、特征性症状的识别和/或各种测试，例如测量血红蛋白和/或血细胞比容的血液检查。血液检查也可能显示血液中胆红素水平升高和/或未成熟红细胞(网织红细胞)水平升高，当身体被迫产生额外的红细胞以弥补过早破坏的红细胞时，可能会发生这种情况。此外，可以进行专门的试验，例如库姆斯(coombs)和/或二硫苏糖醇(dtt)试验。库姆斯试验可用于检测对红细胞起作用的抗体。对于库姆斯试验，在一些实施方式中，采集血液样本，然后将其暴露于库姆斯试剂。当红细胞在试剂存在下结块或聚集时，可能表明库姆斯试验呈阳性。也可以进行dtt测试，例如，以区分由igm自身抗体引起的温性自身免疫性溶血性贫血和由igg自身抗体引起的更常见的形式，因为dtt通常与igm反应，但不与igg反应。
97.在一些实施方式中，使用量表(例如，本文所述的任何量表)对需要治疗温性自身免疫性溶血性贫血或正在接受温性自身免疫性溶血性贫血治疗的患者进行评估。
98.在一些实施方式中，使用慢性疾病治疗疲劳功能评估(facit-f)量表对需要治疗温性自身免疫性溶血性贫血或正在接受温性自身免疫性溶血性贫血治疗的患者进行评估。facit-f量表是经过验证的量表，该量表测量疲劳(温性自身免疫性溶血性贫血的主要临床表现之一)的身体、情绪和社会影响(acaster et al.,health qual.life outcomes 13(1):60-9,2015；webster et al.,health qual.life outcomes 1(79):1-7,2003)。评分范围为0至52，评分越高表明生活质量越高。低于30分通常表示重度疲劳。
99.在一些实施方式中，使用医学研究委员会(mrc)呼吸困难量表对需要治疗温性自身免疫性溶血性贫血或正在接受温性自身免疫性溶血性贫血治疗的患者进行评估。mrc呼吸困难量表是由五个关于感知呼吸困难的陈述组成的问卷。该量表的重点是量化与呼吸困难相关的障碍，而不是量化呼吸困难的严重程度(stenton,occupational med.58:226-7,2008)。该量表与当前修订的mrc主题版本进行了迭代，范围从0级(限于无障碍)到4级(重度障碍)。该量表已用于慢性阻塞性肺病(copd)患者，并对低血红蛋白水平的患者进行进一步分级，以证明贫血的copd患者的mrc显著较高(ferrari et al.,bmc pulm.med.15:58,2015)。该量表可以通过要求患者选择最能描述其病状的短语来自我管理。评分是与患者活动水平最匹配的数字。
100.在一些实施方式中，使用eq-5d-3l量表对需要治疗温性自身免疫性溶血性贫血或正在接受温性自身免疫性溶血性贫血治疗的患者进行评估。eq-5d-3l是经过验证的健康相关生活质量的测量方法(devlin et al.,health econ.27(1):7-22,2018；hernandez et al.,eepru report:“quality review of a proposed eq-5d-5lvalue set for england”[线上])。该量表由两部分组成：eq-5d描述性系统和eq视觉模拟量表。描述性系统评估流动性、自我护理、日常活动、疼痛/不适以及焦虑/抑郁。该量表可通过在每个类别中选择最合适陈述的患者进行自行管理。较低的评分与更好的生活质量对应。eq vas在垂直视觉模拟量表上记录患者的自评健康状况，其中端点标记为“可想象的最佳健康状态”(100)和“可想象的最差健康状态”(0)。患者可以选择0至100之间的任何数字。
[0101]
在一些实施方式中，需要治疗温性自身免疫性溶血性贫血的患者表现出温性自身免疫性溶血性贫血的一种或多种体征和症状(例如，苍白、疲劳、黄疸和/或脾脏肿大)和/或已由治疗的临床医生诊断出患有任何形式的病状。在一些实施方式中，需要治疗温性自身免疫性溶血性贫血的患者(或来自患者的样本)具有可检测水平的抗红细胞igg(抗rbc igg)，即能够与至少一种红细胞结合的igg。在一些实施方式中，抗rbc igg通过补体固定(cf)起作用和/或促成疾病发病机制。在一些实施方式中，抗rbc igg通过与一种或多种fc受体结合(例如，激活患者的先天免疫系统，包括，例如，细胞因子释放和/或吞噬作用)而起作用和/或促成疾病发病机制。在一些实施方式中，抗rbc igg通过激活患者的先天免疫系统(包括例如细胞因子释放和/或吞噬作用)而起作用和/或促成疾病发病机制。在一些实施方式中，抗rbc igg存在于患者的血液中。在一些实施方式中，抗rbc igg是抗rbc igg1。在一些实施方式中，抗rbc igg是抗rbc igg2。在一些实施方式中，抗rbc igg是抗rbc igg3。在一些实施方式中，抗rbc igg是抗rbc igg4。
[0102]
一个实施方式是治疗或预防有需要的患者的温性自身免疫性溶血性贫血的方法，该方法包括向患者施用：(i)治疗有效量的抗fcrn抗体或其抗原结合片段；或(ii)包含至少一种药学上可接受的载体和治疗有效量的抗fcrn抗体或其抗原结合片段的药物组合物。
[0103]
另一个实施方式是用于治疗或预防有需要的患者的温性自身免疫性溶血性贫血的方法的抗fcrn抗体或其抗原结合片段，该方法包括向患者施用：(i)治疗有效量的该抗体或抗原结合片段；或(ii)包含至少一种药学上可接受的载体和治疗有效量的该抗体或抗原结合片段的药物组合物。
[0104]
另一个实施方式是抗fcrn抗体或其抗原结合片段在治疗或预防有需要的患者的温性自身免疫性溶血性贫血的方法中的用途，该方法包括向患者施用：(i)治疗有效量的该抗体或抗原结合片段；或(ii)包含至少一种药学上可接受的载体和治疗有效量的该抗体或抗原结合片段的药物组合物。
[0105]
另一个实施方式是抗fcrn抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗或预防有需要的患者的温性自身免疫性溶血性贫血的药物中的用途。
[0106]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段充当igg与fcrn的结合中的非竞争性抑制剂。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段与fcrn的结合抑制至少一种自身抗体和/或病原性抗体与fcrn的结合。在各种实施方式中，这种抑制促进了至少一种自身抗体和/或病原性抗体从对象体内清除(即，去除)。在各种实施方式中，这种抑制降低了至少一种自身抗体和/或病原性抗体的半衰期。在各种实施方式中，这种抑制降低了对象和/或来自对象的样本中的至少一种自身抗体和/或病原性抗体的水平。在各种实施方式中，至少一种自身抗体和/或病原性抗体水平的降低导致温性自身免疫性溶血性贫血的至少一种临床参数的改善和/或与温性自身免疫性溶血性贫血的至少一种临床参数的改善相关。
[0107]
如本文所用，术语“自身抗体”是指由生物体的免疫系统产生的针对生物体自身蛋白质、组织和/或器官中的一种或多种的抗体。例如，当人类患者的免疫系统无法区分“自身”和“非自身”时，则可能会产生一种或多种自身抗体。在一些实施方式中，自身抗体是病原性抗体(例如，病原性igg，例如，病原性igg1、病原性igg2、病原性igg3或病原性igg4)。如本文所用，术语“病原性抗体”是指有助于一种或多种疾病、病症或病状(例如，温性自身免疫性溶血性贫血)的发病机理和/或引起一种或多种疾病、病症或病状(例如，温性自身免疫性溶血性贫血)的抗体(例如，自身抗体)。
[0108]
在一些实施方式中，病原性抗体是病原性igg(例如，病原性igg1、病原性igg2、病原性igg3或病原性igg4)。在一些实施方式中，病原性抗体和/或病原性igg是抗红细胞igg(抗rbc igg)。
[0109]
在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是能够与红细胞(rbc)(即，至少一种红细胞抗原)结合的自身抗体。在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是抗红细胞igg(抗rbc igg)。在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是抗红细胞igg1(抗rbc igg1)。在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是抗红细胞igg2(抗rbc igg2)。在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是抗红细胞igg3(抗rbc igg3)。在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是抗红细胞igg4(抗rbc igg4)。在一些实施方式中，用本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物治疗患者，例如使用本文所述的方法，使抗-rbc igg(例如，抗-rbc igg1、抗-rbc igg2、抗-rbc igg3和/或抗-rbc igg4)的水平，即，相对于治疗前抗rbc igg的水平，降低了至少约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％。
[0110]
在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是igg、igm、iga、igd或ige。在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是igg(例如，病原性igg)。在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是igg1、igg2、igg3或igg4。在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是igg1(例如，病原性igg1，例如，抗rbc igg1)。在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是igg2(例如，病原性igg2，例如，抗-rbc igg2)。在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是igg3(例如，病原性igg3，例如，抗rbc igg3)。在一些实施方式中，自身抗体和/或病原性抗体是igg4(例如，病原性igg4，例如，抗-rbc igg4)。在一些实施方式中，自身抗体是病原性抗体。
[0111]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段可以在生理ph(即ph7.0-7.4)下非竞争性地抑制至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)与fcrn的结合。不希望被理论所束缚，据信fcrn与其配体(即igg)结合，并且在非酸性ph的生理ph下基本上不显示出对igg的亲和力。因此，在各种实施方式中，在生理ph下，抗fcrn抗体或抗原结合片段可以充当igg与fcrn的结合的非竞争性抑制剂，抗fcrn抗体或抗原结合片段与fcrn的结合不受igg存在的影响。因此，在各种实施方式中，以非ph依赖性方式与igg非竞争性地特异性结合fcrn的抗fcrn抗体或抗原结合片段具有优于常规竞争性抑制剂(即与igg竞争性地结合fcrn的抗体)的优势，即它通过fcrn介导的igg信号传导，即使在显著低的浓度下，也可以提供治疗或预防作用。另外，在各种实施方式中，在以与fcrn结合的状态进行细胞内迁移的过程中，抗fcrn抗体或抗原结合片段相比血液中igg可以以更高的亲和力维持其与fcrn的结合。因此，在各种实施方式中，即使在igg可与fcrn结合的ph环境为酸性的内体中，抗fcrn抗体或抗原结合片段也可以抑制igg与fcrn的结合，从而促进igg的清除。在各种实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段是rvt-1401(在本文中也称为hl161bkn)。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段是rvt-1401或其抗原结合片段。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：三个重链cdr氨基酸序列seq id no:27(hcdr1)、seq id no:28(hcdr2)、seq id no:29(hcdr3)；和三个轻链cdr氨基酸序列seq id no:30(lcdr1)、seq id no:31(lcdr2)seq id no:32(lcdr3)。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区氨基酸序列seq id no:6；和轻链可变区氨基酸序列seq id no:16。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链氨基酸序列seq id no:46；和轻链氨基酸序列seq id no:48。
[0112]
结合“亲和力”是指抗体和抗原之间在单个抗原位点的相互作用的强度。在每个抗原位点内，抗体“臂”的可变区通过弱的非共价力与抗原在许多位点相互作用。通常，相互作用越多，亲和力就越高。
[0113]
如本文所用，术语“特异性”、“特异性结合”和“特异地结合”是指抗体或其抗原结合片段(例如，抗fcrn抗体或其抗原结合片段)与蛋白质和其他生物物质的异质群中的靶抗原(例如fcrn)之间的结合反应。通过将在给定的一套条件下与适当抗原的结合和与替代抗原或抗原混合物的结合进行比较，可以测试抗体的结合特异性。如果抗体与适当的抗原结合的亲和力是与替代抗原或抗原混合物的亲和力的至少2倍、至少5倍或至少10倍(或更多)，则认为它是特异性的。
[0114]“特异性抗体”或“靶标特异性抗体”是仅结合靶抗原(例如，fcrn)但不与其他抗原结合(或表现出最小结合)的抗体。在一些实施方式中，特异性结合靶抗原(例如，fcrn)的抗
体或其抗原结合片段在ph6.0或ph7.4下的kd小于1
×
10-6
m，小于1
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10-7
m，小于1
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10-8
m，小于1
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10-9
m，小于1
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10-10
m，小于1
×
10-11
m，小于1
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10-12
m或小于1
×
10-13
m。在一些实施方式中，在ph6.0或ph7.4下，kd为约0.01nm至约2nm。在一些实施方式中，在ph7.4下，kd为约300pm或更小至约2nm或更小。在一些实施方式中，在ph6.0下，kd为约2nm或更小至900pm或更小。
[0115]
如本文所用，术语“k
d”是指抗体-抗原结合的平衡解离常数，其由kd与ka的比率(即，kd/ka)获得，并且通常以摩尔浓度(m)表示。术语“k
assoc”或“k
a”是指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率，而术语“k
dis”或“k
d”是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。kd和/或ka的测量可以在25℃或37℃进行。抗体和抗原结合片段的kd值可以使用本领域完善建立的方法来确定(参见，例如，pollard,mol.biol.cell 21(23):4061-7,2010)。在一些实施方式中，通过直接结合测定和/或竞争结合测定(例如，表面等离子体共振和/或竞争elisa)来测量kd。在一些实施方式中，通过表面等离子体共振(例如，人fcrn固定的表面等离子体共振)来测量kd。在一些实施方式中，本文公开的抗fcrn抗体或抗原结合片段的kd通过人fcrn固定的表面等离子体共振来测量。
[0116]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，根据通过例如表面等离子体共振所确定的，抗fcrn抗体或抗原结合片段在ph6.0和ph7.4下的kd(解离常数)例如为约0.01至2nm。在一些实施方式中，根据通过表面等离子体共振所确定的，抗fcrn抗体或抗原结合片段在ph7.4下的kd为约300pm或更小至约2nm或更小，和/或在ph7.4下的kd为约2nm或更小至约900pm或更小。在一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段与细胞外部结合，并且在结合时维持其与内体的结合。在一些实施方式中，根据通过例如使用表达人fcrn的细胞和facs进行的阻断测定所确定的，抗fcrn抗体或抗原结合片段有效阻断一种或多种自身抗体与fcrn(例如人fcrn)的结合。
[0117]
如本文所用，术语“抗fcrn抗体”或“与fcrn特异性结合的抗体”是指与fcrn特异性结合的抗体或其抗原结合片段的任何形式，例如，根据通过例如表面等离子体共振(例如，人fcrn固定的表面等离子体共振)所确定的，在ph6.0或ph7.4下以小于2nm的kd值结合的那些。该术语包括单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体和生物学功能片段，只要它们与fcrn特异性结合即可。
[0118]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段包含：
[0119]
cdrl，其包含与一个或多个选自由seq id no:21、24、27、30、33、36、39和42组成的组的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列；
[0120]
cdr2，其包含与一个或多个选自由seq id no:22、25、28、31、34、37、40和43组成的组的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列；和
[0121]
cdr3，其包含与一个或多个选自由seq id no:23、26、29、32、35、38、41和44组成的组的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。
[0122]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段包含：
[0123]
cdr1，其包含与一个或多个选自由seq id no:21、24、27、30、33、36、39和42组成的组的氨基酸序列至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的氨基酸序列；
[0124]
cdr2，其包含与一个或多个选自由seq id no:22、25、28、31、34、37、40和43组成的组的氨基酸序列至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的氨基酸序列；和
[0125]
cdr3，其包含与一个或多个选自由seq id no:23、26、29、32、35、38、41和44组成的组的氨基酸序列至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的氨基酸序列。
[0126]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段可包含在本文所述的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸缺失、添加或取代。
[0127]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段可包含与本文所述氨基酸序列相同或具有同源性的氨基酸序列。术语“同一性”或“同源性”是指如通过比较序列所确定的两条或更多条多肽的序列之间的关系。术语“同一性”还指如通过两个或多个氨基酸残基的串之间的匹配数目所确定的多肽之间的序列相关性程度。两条序列之间的“同一性”百分比是所述序列共有的相同位置数的函数(即，同一性百分比等于相同位置数/总位置数
×
100)，同时还考虑了空位数、为了对两条序列进行最佳比对而需要引入的每个空位的长度。序列的比较和两条序列之间同一性百分比的确定可以使用数学算法来完成。为了进行序列比较，通常一个序列充当参考序列，将测试序列与该参考序列进行比较。使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入计算机中，必要时指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。可以使用默认程序参数，也可以指定替代参数。然后，序列比较算法根据程序参数来计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。另外地或可替代地，本文公开的氨基酸序列可以进一步用作“查询序列”以对公共数据库执行搜索，从而例如鉴定相关序列。例如，可以使用altschul等人(j.mol.biol.215:403-10,1990)的blast程序执行这样的搜索。
[0128]
当使用以下序列比较算法之一或通过手动对齐和目视检查在比较窗口或指定区域上出于最大对应而进行比较和比对时，如果两条序列具有指定的相同氨基酸残基百分比(即在特定区域上，或当未特指时即在整条序列上为60％同一性，可选65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％同一性)，则两条序列“基本相同”。可选地，同一性存在于长度至少约10个氨基酸的区域上，或存在于长度约20、50、200或更多个氨基酸的区域上。在一些实施方式中，本文描述的抗fcrn抗体和抗原结合片段包含至少一个与选自由seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18和20至48组成的组的序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方式中，本文所述的抗fcrn抗体和抗原结合片段包含至少一个与选自由seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18和20至48组成的组的序列至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的氨基酸序列。
[0129]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含重链可变区，该重链可变区包含：
[0130]
包含seq id no:21的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no:22的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no:23的氨基酸序列的cdr3；
[0131]
包含seq id no:27的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no:28的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no:29的氨基酸序列的cdr3；
[0132]
包含seq id no:33的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no:34的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no:35的氨基酸序列的cdr3；或者
[0133]
包含seq id no:39的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no:40的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no:41的氨基酸序列的cdr3；
[0134]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含轻链可变区，该轻链可变区包含：
[0135]
包含seq id no:24的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no:25的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no:26的氨基酸序列的cdr3；
[0136]
包含seq id no:30的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no:31的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no:32的氨基酸序列的cdr3；
[0137]
包含seq id no:36的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no:37的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no:38的氨基酸序列的cdr3；或
[0138]
包含seq id no:42的氨基酸序列的cdr1、包含seq id no:43的氨基酸序列的cdr2和包含seq id no:44的氨基酸序列的cdr3。
[0139]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含一个或多个重链可变区和一个或多个轻链可变区，该一个或多个重链可变区和一个或多个轻链可变区选自由以下组成的组：
[0140]
重链可变区，其包含含有seq id no:21的氨基酸序列的cdr1(hcdr1)、含有seq id no:22的氨基酸序列的cdr2(hcdr2)和含有seq id no:23的氨基酸序列的cdr3(hcdr3)；轻链可变区，其包含含有seq id no:24的氨基酸序列的cdr1(lcdr1)、含有seq id no:25的氨基酸序列的cdr2(lcdr2)和含有seq id no:26的氨基酸序列的cdr3(lcdr3)；
[0141]
重链可变区，其包含含有seq id no:27的氨基酸序列的cdr1(hcdr1)、含有seq id no:28的氨基酸序列的cdr2(hcdr2)和含有seq id no:29的氨基酸序列的cdr3(hcdr3)；轻链可变区，其包含含有seq id no:30的氨基酸序列的cdr1(lcdr1)、含有氨基酸序列seq idno:31的cdr2(lcdr2)和含有seq id no:32的氨基酸序列的cdr3(lcdr3)；
[0142]
重链可变区，其包含含有seq id no:33的氨基酸序列的cdr1(hcdr1)、含有seq id no:34的氨基酸序列的cdr2(hcdr2)和含有seq id no:35的氨基酸序列的cdr3(hcdr3)；轻链可变区，其包含含有seq id no:36的氨基酸序列的cdr1(lcdr1)、含有seq id no:37的氨基酸序列的cdr2(lcdr2)和含有seq id no:38的氨基酸序列的cdr3(lcdr3)；和
[0143]
重链可变区，其包含含有seq id no:39的氨基酸序列的cdr1(hcdr1)、含有seq id no:40的氨基酸序列的cdr2(hcdr2)和含有seq id no:41的氨基酸序列的cdr3(hcdr3)；轻链可变区，其包含含有seq id no:42的氨基酸序列的cdr1(lcdr1)、含有seq id no:43的氨基酸序列的cdr2(lcdr2)和含有seq id no:44的氨基酸序列的cdr3(lcdr3)。
[0144]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含一个或多个重链可变区和/或一个或多个轻链可变区，该一个或多个重链可变区和/或一个或多个轻链可变区包含选自由seq id no:2、4、6、8、10、12、14、16、18和20的氨基酸序列组成的组中的一个或多个氨基酸序列。
[0145]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含含有seq id no:2、4、6、8或10的氨基酸序列的重链可变区和/或含有seq id no:12、14、16、18或20的氨基酸序列的轻链可变区。
[0146]
在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含一个或多个重链可变区和一个或多个轻链可变区，该一个或多个重链可变区和一个或多个轻链可变区选自由以下组成的组：
[0147]
包含seq id no:2的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:12的氨基酸序列的轻链可变区；
[0148]
包含seq id no:4的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:14的氨基酸序列的轻链可变区；
[0149]
包含seq id no:6的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:16的氨基酸序列的轻链可变区；
[0150]
包含seq id no:8的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:18的氨基酸序列的轻链可变区；和
[0151]
包含seq id no:10的氨基酸序列的重链可变区和包含seq id no:20的氨基酸序列的轻链可变区。
[0152]
如本文中关于抗体所使用的，术语“片段”、“抗体片段”和“抗原结合片段”均是指全长抗体中保留了与靶抗原(例如，fcrn)特异性结合的能力和/或提供全长抗体的功能(例如，非竞争性干扰igg与fcrn的结合)的一个或多个片段。抗原结合片段也可以存在于较大的大分子中，例如双特异性抗体、三特异性抗体和多特异性抗体。抗原结合片段的实例包括但不限于单链抗体、双特异性抗体、三特异性抗体和多特异性抗体，例如双体抗体(diabody)、三体抗体(triabody)和四体抗体(tetrabody)、fab片段、f(ab')2片段、fd、scfv、结构域抗体、双重特异性抗体、小抗体、scap(固醇调节结合蛋白裂解激活蛋白)、螯合重组抗体、三抗体(tribody)或双抗体(bibody)、胞内抗体、纳米抗体、小型模块化免疫药物(smip)、结合结构域免疫球蛋白融合蛋白、骆驼化抗体、含vhh的抗体、igd抗体、ige抗体、igm抗体、igg1抗体、igg2抗体、igg3抗体、igg4抗体、抗体恒定区中的衍生物以及基于具有与fcrn结合能力的蛋白质支架的合成抗体。在一些实施方式中，抗原结合片段显示出与全长抗体相同或相似的性质。可以通过本领域已知的任何合适的方法来产生抗原结合片段而没有限制。例如，本文所述的各种抗原结合片段可以通过对全长抗体进行酶促修饰或化学修饰来产生，使用重组dna方法来从头合成(例如，scfv)，或使用噬菌体展示文库来鉴别(参见，例如，pini and bracci,curr.protein pept.sci.1(2):155-69,2000)。可以以与全长抗体相同的方式针对效用(例如特异性、结合亲和力、活性)来筛选抗原结合片段。
[0153]
另外，在可变区和/或恒定区中具有突变的抗体或抗原结合片段可以用于本文所述的治疗方法、用途和组合物中。这样的抗体或抗原结合片段的实例包括在可变区和/或恒定区中具有氨基酸残基的保守取代的抗体。如本文所用，术语“保守取代”是指被具有与原始氨基酸残基相似的性质的另一个氨基酸残基取代。例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸具有相似的性质，因为它们具有碱性侧链，而天冬氨酸和谷氨酸具有相似的性质，因为它们具有酸性侧链。此外，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸和色氨酸具有相似的特性，因为它们具有不带电荷的极性侧链，而丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸和蛋氨酸具有相似的特性，因为它们具有非极性侧链。另外，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和组氨酸具有相似的性质，因为它们具有芳族侧链。因此，对于本领域技术人员而言将显而易见的是，即使在表现出如上所述相似性质的基团中发生氨基酸残基的取代，抗体或抗原结合片段的性质也可能不会显示出显著变化。
[0154]
另外，在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可以与另外的物质(例如，治疗剂或可检测标签)缀合。可与本文所述的抗体或抗原结合片段缀合或联合施用的物质包括但不限于：通常用于治疗温性自身免疫性溶血性贫血的治疗剂(例如，标准护理剂，例如本文所述和/或通过引用并入本文的任何一种或多种标准护理剂)；能够抑制fcrn活性的物质；
以及可以与抗体或抗原结合片段物理缔合的部分，例如以改善其在循环中(例如在血液、血清、淋巴或其他组织中)的稳定性和/或滞留性。例如，抗体或抗原结合片段可以与聚合物(例如非抗原性聚合物，例如聚环氧烷或聚氧化乙烯)缔合。合适的聚合物在重量上会有很大的不同。可以使用重均分子量约200至约35,000(或约1,000至约15,000，以及2,000至约12,500)的聚合物。例如，抗体或抗原结合片段可以与水溶性聚合物(例如亲水性聚乙烯聚合物，例如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮)缀合。这样的聚合物的非限制性实例包括但不限于聚环氧烷均聚物，例如聚乙二醇(peg)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇，其共聚物和其嵌段共聚物，只要保持嵌段共聚物的水溶性即可。
[0155]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:27的氨基酸序列(hcdr1)、seq id no:28的氨基酸序列(hcdr2)和seq id no:29的氨基酸序列(hcdr3)；和轻链可变区，其包含seq id no:30的氨基酸序列(lcdr1)、seq id no:31的氨基酸序列(lcdr2)和seq id no:32的氨基酸序列(lcdr3)。
[0156]
在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:6的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含seq id no:16的氨基酸序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含与seq id no:6至少90％相同的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含与seq id no:16至少90％相同的氨基酸序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:4的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含seq id no:14的氨基酸序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含与seq id no:4至少90％相同的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含与seq id no:14至少90％相同的氨基酸序列。在各种实施方式中，如通过例如表面等离子体共振(spr)所测量的，抗体或抗原结合片段在ph6.0或ph7.4下以0.01nm至2nm的kd(解离常数)与fcrn结合。
[0157]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:21的氨基酸序列(hcdr1)、seq id no:22的氨基酸序列(hcdr2)和seq id no:23的氨基酸序列(hcdr3)；和轻链可变区，其包含seq id no:24的氨基酸序列(lcdr1)、seq id no:25的氨基酸序列(lcdr2)和seq id no:26的氨基酸序列(lcdr3)。
[0158]
在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含seq id no:2的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含seq id no:12的氨基酸序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：重链可变区，其包含与seq id no:2至少90％相同的氨基酸序列；和轻链可变区，其包含与seq id no:12至少90％相同的氨基酸序列。在各种实施方式中，如通过例如表面等离子体共振(spr)所测量的，抗体或抗原结合片段在ph6.0或ph7.4下以0.01nm至2nm的kd与fcrn结合。
[0159]
在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含seq id no:46的重链氨基酸序列，或与seq id no:46至少90％相同的序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含seq id no:48的轻链氨基酸序列，或与氨基酸序列seq id no:48至少90％相同的序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含seq id no:46的重链氨基酸序列和seq id no:48的轻链氨基酸序列。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段包含与seq id no:46至少95％、
至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的重链氨基酸序列和与seq id no:48至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的轻链氨基酸序列。
[0160]
rvt-1401(在本文中也称为hl161bkn)是抗fcrn抗体的实例。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段是rvt-1401或其抗原结合片段。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：rvt-1401的三个重链cdr氨基酸序列(hcdr1(seq id no:27)、hcdr2(seq id no:28)、hcdr3(seq id no:29)；和rvt-1401的三个轻链cdr氨基酸序列(lcdr1(seq id no:30)、lcdr2(seq id no:31)、lcdr3(seq id no:32)。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：rvt-1401的重链可变区氨基酸序列(seq id no:6)；和rvt-1401的轻链可变区氨基酸序列(seq id no:16)。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段包含：rvt-1401的重链氨基酸序列(seq id no:46)；和rvt-1401的轻链氨基酸序列(seq id no:48)。
[0161]
在本文公开的治疗方法和用途的各种实施方式中，单独施用抗体或抗原结合片段。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段与至少一种另外的治疗剂联合施用。在各种实施方式中，至少一种另外的治疗剂可以包含用于温性自身免疫性溶血性贫血的标准护理剂或由用于温性自身免疫性溶血性贫血的标准护理剂组成。
[0162]
如本文所用，“联合”或“共同施用”是指在对象罹患温性自身免疫性溶血性贫血期间向对象递送两种或更多种不同的治疗。例如，在一些实施方式中，在对象被诊断出患有疾病之后，在疾病被治愈或消除之前，或在对象被鉴定为处于风险之中但在对象出现疾病症状之前，递送两种或更多种治疗。在一些实施方式中，一种治疗的递送在开始递送第二治疗时仍在进行，从而存在重叠。在一些实施方式中，第一治疗和第二治疗同时开始。这些类型的递送有时在本文中被称为“同时”、“并行”或“伴随”递送。在其他实施方式中，一种治疗的递送在开始递送第二治疗之前结束。在本文中有时将这种类型的递送称为“依次”递送或“顺序”递送。在一些实施方式中，同时施用抗体或抗原结合片段和至少一种另外的治疗剂。在一些实施方式中，顺序施用抗体或抗原结合片段和至少一种另外的治疗剂。
[0163]
在一些实施方式中，两种治疗(例如，抗fcrn抗体或抗原结合片段和第二治疗剂)被包含在同一组合物中。这样的组合物可以以任何合适的形式和通过任何合适的途径施用。在其他实施方式中，两种治疗(例如，抗fcrn抗体或抗原结合片段和第二治疗剂)以分开的组合物以任何合适的形式并通过任何合适的途径施用。例如，包含抗-fcrn抗体或抗原结合片段的组合物和包含第二治疗剂(例如，用于温性自身免疫性溶血性贫血的标准护理剂)的组合物可以并行或在不同的时间点以任何顺序顺序施用；无论哪种情况，应该在足够接近的时间施用它们以提供所需的治疗或预防作用。
[0164]
如本文所用，术语“药剂”是指化合物、化合物的混合物、生物大分子或由生物材料制成的提取物。术语“治疗剂”或“药物”是指能够调节生物学过程和/或具有生物学活性的药剂。本文所述的抗fcrn抗体和抗原结合片段是治疗剂的实例。
[0165]
如本文所用，术语“标准护理剂”是指作为对某种类型的疾病(例如，温性自身免疫性溶血性贫血)的适当治疗而被接受的任何治疗剂或其他形式的疗法。如本文所用，术语“标准剂量”或“标准给药方案”是指治疗剂的任何通常或常规给药方案，例如，由制造商提出的、经监管机构批准的或另外在人类对象中测试以满足普通患者的需求的方案。
[0166]
温性自身免疫性溶血性贫血的标准护理剂的一个例子是ivig。在一些实施方式中，ivig的标准给药方案包括以下或由以下组成：ivig，1g/kg/天，持续2天。用于温性自身
免疫性溶血性贫血的标准护理剂的另一个例子是一种或多种皮质类固醇(例如，强的松)。在一些实施方式中，一种或多种皮质类固醇(例如，强的松)的标准给药方案包括以下或由以下组成：强的松1.0-1.5mg/kg/天，持续1至3周，直到达到大于10g/dl的血红蛋白水平；随后的强的松剂量逐渐减量，每周10mg至15mg至日剂量20mg至30mg，然后每1至2周5mg至15mg剂量，然后每2周2.5mg，最终目的是撤药。用于温性自身免疫性溶血性贫血的其他标准护理剂以及此类药剂的标准给药方案在本领域中是已知的并公开于例如kalfa,hematology am.soc.hematol.educ.program 2016(1):690-7,2016和zanella和zanella and barcellini,haematologica 99(10):1547-54,2014中，它们通过引用并入本文用于此类药剂和给药方案。
[0167]
本文所述的抗fcrn抗体和抗原结合片段可与本文所述和/或通过引用并入本文的任何示例性标准护理剂联合施用。
[0168]
本文还提供了包含与至少一种药学上可接受的载体一起被配制的抗fcrn抗体或其抗原结合片段的药物组合物。所述组合物还可包含适合用于治疗或预防例如温性自身免疫性溶血性贫血的一种或多种另外的治疗剂(例如，用于温性自身免疫性溶血性贫血的标准护理剂)。配制药物组合物的方法和合适配制品是本领域已知的(参见，例如，“remington's pharmaceutical sciences,”mack publishing co.,easton,pa)。适当的配制品可能取决于施用途径。
[0169]
如本文所用，“药物组合物”是指抗fcrn抗体或其抗原结合片段加之适合施用于患者的其他组分(例如药学上可接受的载体和/或赋形剂)的制剂。本文提供的药物组合物可以适合于体外和/或体内施用。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物为允许施用并随后提供活性成分的预期生物学活性和/或实现治疗作用的形式。本文提供的药物组合物优选不包含对将施用配制品的对象具有不可接受的毒性的另外的组分。
[0170]
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”和“生理学上可接受的载体”可以互换使用，其是指不会对对象造成显著刺激并且不消除所施用抗体或抗原结合片段的生物学活性和性质的载体、稀释剂或赋形剂。因此，药学上可接受的载体应与活性成分(例如抗体或其抗原结合片段)相容，并且可以包括生理盐水、无菌水、林格氏液、缓冲盐水、右旋糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇或其两种或多种的混合物。药学上可接受的载体还可增强或稳定组合物，或可用于促进组合物的制备。药学上可接受的载体可以包括生理上相容的其他常规添加剂，例如抗氧化剂、缓冲剂、溶剂、抑菌剂、分散介质、包被剂、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。可以选择载体以使对象的不良副作用最小化和/或使活性成分的降解最小化。
[0171]
如本文所用，术语“赋形剂”是指添加到药物组合物中以进一步促进活性成分施用的惰性物质。用于肠胃外施用的配制品可以例如包含赋形剂，例如无菌水或盐水、聚亚烷基二醇(例如聚乙二醇)、植物油或氢化萘。其他赋形剂包括但不限于碳酸氢钙、磷酸钙、各种糖和各类淀粉、纤维素衍生物、明胶、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物颗粒和表面活性剂，包括例如聚山梨酯20。
[0172]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的各种实施方式中，可以通过本领域已知的各种方法来施用抗fcrn抗体、抗原结合片段或药物组合物。施用途径和/或方式可根据所期望的结果而变化。在一些实施方式中，通过口服、静脉内、肌内、动脉内、髓内、硬膜内、心
内、透皮、皮下、腹膜内、胃肠道、舌下或局部途径施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在一些实施方式中，口服或肠胃外施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在一些实施方式中，肠胃外，例如静脉内或皮下(例如，通过注射或输注)施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在一些实施方式中，皮下施用(例如，通过注射或输注)抗体、抗原结合片段或药物组合物。在一些实施方式中，以一次或多次皮下注射施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在一些实施方式中，以单次(即，一次)皮下注射施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在一些实施方式中，以两次或更多次(例如两次)连续皮下注射施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在一些实施方式中，在一次或多次皮下注射之前在不进行静脉内施用(例如，静脉内诱导)的情况下施用抗体、抗原结合片段或药物组合物。在一些实施方式中，通过注射器，导管、泵递送系统或支架来递送抗体、抗原结合片段或药物组合物。在一些实施方式中，通过注射器(例如，预填充式注射器)来递送抗体、抗原结合片段或药物组合物。取决于施用途径，可以将活性化合物(即抗fcrn抗体或抗原结合片段)包被在材料中，以保护该化合物免受酸和其他可能使该化合物失活的天然条件的作用。
[0173]
抗体、抗原结合片段或药物组合物可以被配制成各种形式，例如粉末、片剂、胶囊、液体、注射剂、软膏剂或糖浆剂和/或被包含在单剂量或多剂量容器中，例如被包含在密封的安瓿瓶、小瓶或注射器。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物被配制成可注射形式。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物与一种或多种赋形剂、稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂和/或润滑剂一起被配制成水溶液、悬液或乳剂。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物被包含在注射器(例如，预填充式注射器)中。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物被包含在注射器中，该注射器具有和/或配有小号针头(例如，大于约25号、大于约26号、大于约27号、大于约28号、大于约29号和/或大于约30号的针头)。
[0174]
在一些实施方式中，配制抗体、抗原结合片段或药物组合物以在施用前实现稳定性和/或防止物理和/或化学降解或使物理和/或化学降解最小化。物理不稳定性可能涉及诸如变性和聚集等过程，而常见的化学降解途径包括但不限于交联、脱酰胺、异构化、氧化和碎片化(参见例如wang et al.,j.pharm.sci.91(1):1-26,2007)。如本文所用，当用于描述抗体或其抗原结合片段时，术语“稳定的”或“稳定性”是指抗体或抗原结合片段以保持活性(例如，与fcrn结合)的方式保持完整和/或达到治疗效果。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物与一种或多种药学上可接受的载体(例如，一种或多种赋形剂)一起配制，以使其在标准储存条件下稳定。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物与一种或多种药学上可接受的载体(例如，一种或多种赋形剂)一起配制，以使其在高浓度下稳定。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可以按多至约170mg/ml或更多稳定地浓缩在配制品中。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段可以按约170mg/ml以上(例如，约180mg/ml、约200mg/ml、约220mg/ml或以上)稳定地浓缩在配制品中。在一些实施方式中，稳定浓缩的配制品(例如，包含多至约170mg/ml或更多的抗体或抗原结合片段的配制品)保持可接受的粘度以通过小号针头进行施用。在一些实施方式中，小号针头大于约25号、大于约26号、大于约27号、大于约28号、大于约29号和/或大于约30号。
[0175]
可以调整抗fcrn抗体或抗原结合片段单独或与一种或多种其他治疗剂联合的剂量方案，以提供最佳的期望响应(例如，治疗响应)。例如，可以一次施用单剂的抗fcrn抗体
或抗原结合片段，可以在预定时间段内施用数个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急状态按比例减少或增加抗fcrn抗体或抗原结合片段的剂量。对于任何特定的对象，可以根据个人的需要以及治疗临床医生的专业判断，随时间调整特定的剂量方案。例如，在一些实施方式中，可以通过考虑患者的严重程度、状况、年龄、病史等适当确定抗fcrn抗体或抗原结合片段的剂量。
[0176]
可以通过本领域技术人员已知的常规方法将抗fcrn抗体或抗原结合片段配制成药学上可接受的剂型。例如，肠胃外组合物可以出于易用性和剂量均匀性而配制成剂量单位形式。如本文所用，“剂量单位形式”是指适合作为待治疗对象的单位剂量的物理上离散的单位；每个单位包含预定量的活性化合物，该活性化合物经计算可与药物上可接受的载体联合产生所期望的治疗效果。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物被配制成剂量单位形式。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物被配制成用于皮下施用的剂量单位形式。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物被配制成用于以一次或多次皮下注射(例如一次皮下注射或两次或更多次(例如，两次)连续皮下注射)施用的剂量单位形式。在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物被配制成用于由患者自行施用和/或由治疗临床医生施用的剂量单位形式(例如，以一次或多次皮下注射)。
[0177]
基于活性化合物的独特特征和要达到的特定治疗效果，可以选择抗fcrn抗体或抗原结合片段、包含抗fcrn抗体或抗原结合片段的组合物和/或任何另外的治疗剂的剂量值。医师或兽医可以以低于达到所期望的治疗效果所需的水平开始给药抗体或抗原结合片段，并逐渐增加剂量直至获得所期望的效果。医师或兽医也可以以高于达到得所期望的治疗效果所需的水平开始给药抗体或抗原结合片段，并逐渐降低剂量直至获得所期望的效果。通常，用于治疗温性自身免疫性溶血性贫血的抗体或抗原结合片段的有效剂量可能取决于许多不同因素(包括治疗是预防性的还是治疗性的)而变化。选择的剂量水平还可以取决于多种药代动力学因素，包括所用特定组合物或其酯，其盐或酰胺的活性、施用途径、施用时间、所用特定化合物的排泄速率、与所用特定组合物联合使用的治疗、其他药物、化合物和/或材料的持续时间、所治疗患者的年龄、性别、体重、状况，一般健康状况和既往病史等类似因素。在一些实施方式中，可以施用治疗一次或几次。考虑到特定患者的状况，可以采用间歇和/或长期(持续)给药策略。
[0178]
在一些实施方式中，在本发明的方法、用途和药物组合物中采用治疗有效量的抗fcrn抗体或抗原结合片段。
[0179]
如本文所用，术语“治疗有效量”和“治疗有效剂量”在本文中可互换使用，是指足以减少至少一种与疾病、病症或病状相关的症状或可测量参数以使处于导致特定身体功能受损的疾病、病症或病状中的身体功能正常化，和/或提供疾病、病症或病状的一种或多种临床测量参数的改善或减慢所述临床测量参数的进展的量。治疗有效量可以例如足以对温性自身免疫性溶血性贫血的一种或多种症状进行治疗、预防、降低严重性、延迟发作和/或降低其发生的风险。可以通过本领域已知和本文讨论的方法来确定治疗有效量以及治疗有效施用频率。在本文描述的方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段以当以单一药剂施用时治疗有效的量来施用。在一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段和至少一种另外的治疗剂各自以当联合使用药剂时治疗有效的量施用。在一些实
施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段的治疗有效量是降低患有或怀疑患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者的总血清igg水平和/或至少一种自身抗体(例如，至少一种igg)水平所需的量。在一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段的治疗有效量是提高患有或怀疑患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者的血红蛋白水平所需的量。
[0180]
在一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段的治疗有效量是使温性自身免疫性溶血性贫血患者和/或来自该患者的样本的总血清igg水平和/或至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，在至少一种igg)水平相对于用抗fcrn抗体或抗原结合片段治疗前水平降低至少约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或约80％所需的量。在一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段的治疗有效量是使温性自身免疫性溶血性贫血患者和/或来自该患者的样本的总血清igg水平和/或至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，在至少一种igg)水平相对于用抗fcrn抗体或抗原结合片段治疗前水平降低至少约40％、约50％、约60％、约70％或约80％所需的量。在一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段的治疗有效量是使温性自身免疫性溶血性贫血患者和/或来自该患者的样本的血清内源性igg浓度降低至低于治疗前值的约40％、约50％、约60％、约70％或约80％所需的量。
[0181]
如本文所用，短语“总igg水平”或“总血清igg水平”是指例如在患者或来自患者的生物样本(例如血液样本)中的血清内源性igg浓度。
[0182]
如本文所用，短语“至少一种自身抗体的水平”是指例如在患者或来自患者的生物样本中的至少一种自身抗体的血清内源浓度。
[0183]
如本文所用，短语“至少一种igg的水平”是指例如在患者或来自患者的生物样本中的至少一种igg的血清内源浓度。在一些实施方式中，至少一种igg包含病原性igg。在一些实施方式中，至少一种igg包含血清igg1。在一些实施方式中，至少一种igg包含血清igg2。在一些实施方式中，至少一种igg包含血清igg3。在一些实施方式中，至少一种igg包含血清igg4。
[0184]
在一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段的治疗有效量是使温性自身免疫性溶血性贫血患者和/或来自该患者的样本的血红蛋白水平相对于用抗fcrn抗体或抗原结合片段治疗前水平增加至少约5％、约10％、约15％或约20％(例如，约5％至约30％)所需的量。在一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段的治疗有效量是在每周给药进行约1周或2周后使温性自身免疫性溶血性贫血患者和/或来自该患者的样本的血红蛋白水平相对于用抗fcrn抗体或抗原结合片段治疗前水平增加至少约10％(例如，约10％至约15％)所需的量。在一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段的治疗有效量是在每周给药进行约1周或2周后使温性自身免疫性溶血性贫血患者和/或来自该患者的样本的血红蛋白水平相对于用抗fcrn抗体或抗原结合片段治疗前水平增加至少约20％(例如，约20％至约25％)所需的量。在一些实施方式中，在整个治疗期或其一部分中维持患者和/或来自患者的样本中血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)。在一些实施方式中，患者和/或来自患者的样本中血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)维持至少2周、3周或4周(例如，4周或更长时间)。在一些实施方式中，患者和/或来自患者的样本中血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)维持约2周至约6周。
[0185]
如本文在数值和范围的上下文中使用的，术语“约”或“大约”是指近似或接近所列
举的值或范围而使得技术人员通过本文所包含的教导显而易见地可按预期执行该实施方式的值或范围。这些术语包含的值超出了系统误差产生的值。在一些实施方式中，“约”或“大约”是指数值量的正负10％。
[0186]
在本文公开的治疗方法和用途的各种实施方式中，以固定剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在本文公开的治疗方法和用途的各种实施方式中，以基于体重的剂量(即取决于患者体重的剂量)向患者施用抗体或抗原结合片段。在本文公开的治疗方法和用途的各种实施方式中，以基于体表面积的剂量(即取决于患者体表面积(bsa)的剂量)向患者施用抗体或抗原结合片段。在各种实施方式中，向患者施用的剂量包括抗体或抗原结合片段的治疗有效量。
[0187]
在一些实施方式中，以约170mg至约1500mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约300mg或约800mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约170mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg或约1500mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段，例如每周一次或每2周一次。
[0188]
在一些实施方式中，以约170mg至约300mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg或约300mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。
[0189]
在一些实施方式中，以约300mg至约500mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg或约500mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。
[0190]
在一些实施方式中，以约300mg至约400mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg或约400mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约320mg、约330mg、约340mg、约350mg或约360mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约340mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约340mg的剂量每周一次或每2周一次向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约340mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，作为单次皮下注射以约340mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约340mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段，进行至少2周(例如，2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、10周、12周或更长时间)。在一些实施方式中，以约340mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段，进行至少4周。在一些实施方式中，以约340mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段，进行至少7周。在一些实施方式中，以约340mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段，进行至少12周。
[0191]
在一些实施方式中，以约500mg至约700mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约500mg、约510mg、约520mg、约530mg、约540mg、约550mg、约560mg、约570mg、约580mg、约590mg、约600mg、约610mg、约620mg、约630mg、约640mg、约650mg、约660mg、约670mg、约680mg、约690mg或约700mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。
[0192]
在一些实施方式中，以约650mg至约750mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约650mg、约660mg、约670mg、约680mg、约690mg、约700mg、约710mg、约720mg、约730mg、约740mg或约750mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约660mg、约670mg、约680mg、约690mg或约700mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约680mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约680mg的剂量每周一次或每2周一次向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约680mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，作为两次或多次(例如，两次)连续皮下注射以约680mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约680mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段，进行至少2周(例如，2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、10周、12周或更长时间)。在一些实施方式中，以约680mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段，进行至少4周。在一些实施方式中，以约680mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段，进行至少7周。在一些实施方式中，以约680mg的剂量每周一次向患者施用抗体或抗原结合片段，进行至少12周。
[0193]
在一些实施方式中，以约700mg至约900mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约700mg、约710mg、约720mg、约730mg、约740mg、约750mg、约760mg、约770mg、约780mg、约790mg、约800mg、约810mg、约820mg、约830mg、约840mg、约850mg、约860mg、约870mg、约880mg、约890mg或约900mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。
[0194]
在一些实施方式中，以约900mg至约1100mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约900mg、约910mg、约920mg、约930mg、约940mg、约950mg、约960mg、约970mg、约980mg、约990mg、约1000mg、约1010mg、约1020mg、约1030mg、约1040mg、约1050mg、约1060mg、约1070mg、约1080mg、约1090mg或约1100mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。
[0195]
在一些实施方式中，以约1100mg至约1300mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约1100mg、约1110mg、约1120mg、约1130mg、约1140mg、约1150mg、约1160mg、约1170mg、约1180mg、约1190mg、约1200mg、约1210mg、约1220mg、约1230mg、约1240mg、约1250mg、约1260mg、约1270mg、约1280mg、约1290mg或约1300mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。
[0196]
在一些实施方式中，以约1300mg至约1500mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约1300mg、约1310mg、约1320mg、约1330mg、约1340mg、约1350mg、约1360mg、约1370mg、约1380mg、约1390mg、约1400mg、约1410mg、约1420mg、约1430mg、约1440mg、约1450mg、约1460mg、约1470mg、约1480mg、约1490mg或约1500mg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。
[0197]
在一些实施方式中，以约1mg/kg体重至约2000mg/kg体重的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约1mg/kg至约200mg/kg、约200mg/kg至约400mg/kg、约400mg/kg至约600mg/kg、约600mg/kg至约800mg/kg、约800mg/kg至约1000mg/kg、约1000mg/kg至约1200mg/kg、约1200mg/kg至约1400mg/kg、约1400mg/kg至约1600mg/kg、约1600mg/kg至约1800mg/kg或约1800mg/kg至约2000mg/kg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约1mg/kg至约200mg/kg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约1mg/kg、约10mg/kg、约20mg/kg、约30mg/kg、约40mg/kg、约50mg/kg、约60mg/kg、约70mg/kg、约80mg/kg、约90mg/kg、约100mg/kg、约110mg/kg、约120mg/kg、约130mg/kg、约140mg/kg、约150mg/kg、约160mg/kg、约170mg/kg、约180mg/kg、约190mg/kg或约200mg/kg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约1mg/kg至约40mg/kg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，以约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg的剂量向患者施用抗体或抗原结合片段。
[0198]
抗体或抗原结合片段作为单一药剂或与一种或多种另外的治疗剂联合施用至患者的频率可以是一次或多于一次。在一些实施方式中，在单一场合下施用抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，在多种场合下施用抗体或抗原结合片段。剂量之间的间隔可以是例如每天、每周、每两周、每月或每年。间隔也可以是不规则的，例如，基于测量患者抗体或抗原结合片段的血液水平以使抗体或抗原结合片段的血浆浓度维持相对一致；基于测量至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)的水平以维持降低的至少一种自身抗体和/或病原性抗体(例如，至少一种igg)的水平，从而提供所期望的治疗或预防效果；基于测量总血清igg的水平，以维持降低的总血清igg水平，从而提供所期望的治疗或预防效果；和/或基于测量血红蛋白水平以维持增加的血红蛋白水平，从而提供所期望的治疗或预防效果。可替代地，在一些实施方式中，可以施用抗体或抗原结合片段作为缓释配制品，在这种情况下，需要的施用较不频繁。剂量和频率可以取决于患者抗体或抗原结合片段的半衰期而变化。施用的剂量和频率也可以根据治疗是预防性还是治病性的而变化。在预防性应用中，可以在长时间内以相对不频繁的间隔施用相对较低的剂量。一些患者可能终生继续接受治疗。在治疗性应用中，有时以相对较短的间隔施用相对较高的剂量，直到疾病的进展减少或终止，可选地直至患者显示出疾病的一种或多种症状的部分或完全缓解。此后，可以给患者施用较低的例如预防性方案。
[0199]
在一些实施方式中，在约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、18个月、24个月、30个月、36个月或更长的时间段内将抗体、抗原结合片段或药物组合物施用于患者一次或多于一次。
[0200]
在一些实施方式中，抗体、抗原结合片段或药物组合物作为单剂量施用一次至患者。
[0201]
在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少9周、至少10周、至少12周、至少20周、至少24周、至少30周、至少40周、至少50周、至少60周、至少70周、至少76周、
至少80周或更长时间。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行6至76周，或介于两者之间的任何时间段。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行至少2周、至少3周、至少4周或至少6周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行至少4周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行至少7周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者，进行至少12周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每周一次施用至患者直到足以对温性自身免疫性溶血性贫血的一种或多种症状(例如，苍白、疲劳、黄疸、脾脏肿大)进行治疗、预防、降低严重性、延迟发作和/或降低其发生的风险。
[0202]
在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物作为单次(例如，一次)皮下注射每周一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以两次或更多次连续皮下注射(例如，两次连续皮下注射)每周一次施用至患者。如本文在皮下注射(或其他施用途径)的上下文中所用，术语“连续的”是指一次接着另一次但是在时间上足够接近地以两次或多次皮下注射施用从而提供所期望的治疗或预防效果。在一些实施方式中，以在彼此的约30秒内、约1分钟内、约2分钟内、约5分钟内、约10分钟内、约30分钟内、约1小时内、约2小时内或约5个小时内施用连续皮下注射。
[0203]
在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次(每两周一次)施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次施用至患者，进行至少2周、至少4周、至少6周、至少8周、至少10周、至少12周、至少20周、至少24周、至少30周、至少40周、至少50周、至少60周、至少70周、至少76周、至少80周或更长时间。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次施用至患者，进行6至76周，或介于两者之间的任何时间段。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次施用至患者，进行至少12周。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每2周一次施用至患者直到足以对温性自身免疫性溶血性贫血的一种或多种症状进行治疗、预防、降低严重性、延迟发作和/或降低其发生的风险。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物作为单次皮下注射每2周一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以两次或更多次连续皮下注射每2周一次施用至患者。
[0204]
在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每月一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物每月一次施用至患者，进行至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月或更长时间。在一些实施方式中，每月一次向患者施用抗体、抗原结合片段或药物组合物直到足以对温性自身免疫性溶血性贫血的一种或多种症状进行治疗、预防、降低严重性、延迟发作和/或降低其发生的风险。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物作为单次皮下注射每月一次施用至患者。在一些实施方式中，将抗体、抗原结合片段或药物组合物以两次或更多次连续皮下注射每月一次施用至患者。
[0205]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约170mg至约1500mg作为单剂量施用一次。更具体地，在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约170mg至约300mg作为单剂量施用一次。在一
些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约300mg至约500mg作为单剂量施用一次。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约500mg至约700mg作为单剂量施用一次。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约700mg至约900mg作为单剂量施用一次。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约900mg至约1100mg作为单剂量施用一次。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约1100mg至约1300mg作为单剂量施用一次。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约1300mg至约1500mg作为单剂量施用一次。
[0206]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为作为单剂量以约300mg至约800mg施用一次。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约300mg至约400mg作为单剂量施用一次。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约340mg作为单剂量施用一次。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约450mg至约550mg作为单剂量施用一次。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约500mg作为单剂量施用一次。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约700mg至约800mg作为单剂量施用一次。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为以约765mg作为单剂量施用一次。在一些实施方式中，治疗使患者的总血清igg水平降低至少约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％或约50％。在一些实施方式中，治疗使患者的总血清igg水平降低至少约25％。在一些实施方式中，治疗使患者的总血清igg水平降低至少约35％。在一些实施方式中，治疗使患者的总血清igg水平降低至少约45％。在一些实施方式中，患者总血清igg水平的最大降低发生在施用抗体、抗原结合片段或包含抗体或抗原结合片段的药物组合物后约5天至约20天。在一些实施方式中，患者总血清igg水平的最大降低发生在施用抗体、抗原结合片段或包含抗体或抗原结合片段的药物组合物后约8天至约15天。在一些实施方式中，总血清igg水平的最大降低发生在约3剂至5剂(例如，约4剂之后)抗体或抗原结合片段或包含抗体或抗原结合片段的药物组合物之后。在一些实施方式中，治疗使患者的血红蛋白水平增加至少约5％、约10％、约15％或约20％(例如，约5％至约30％)。在一些实施方式中，治疗使患者的血红蛋白水平增加至少约10％(例如，约10％至约15％)。在一些实施方式中，治疗使患者的血红蛋白水平增加至少约20％(例如，约20％至约25％)。在一些实施方式中，治疗使患者的血红蛋白水平增加超过约20％(例如，约25％至约30％或更多)。
[0207]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约170mg至约1500mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约170mg至约300mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约300mg至约500mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约500mg至约700mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约700mg至约900mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约900mg至约1100mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约1100mg至约1300mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约1300mg至约1500mg。
[0208]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约300mg至约800mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片
段的治疗有效量为每周一次施用约300mg至约400mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约340mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约650mg至约750mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约680mg。在一些实施方式中，治疗使患者的总血清igg水平降低至少约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％或约80％。在一些实施方式中，治疗使患者的总血清igg水平降低至少约60％。在一些实施方式中，治疗使患者的总血清igg水平降低至少约70％。在一些实施方式中，治疗使患者的总血清igg水平降低至少约80％。在一些实施方式中，患者总血清igg水平的最大降低发生在施用抗体、抗原结合片段或包含抗体或抗原结合片段的药物组合物后约20天至约30天。在一些实施方式中，患者总血清igg水平的最大降低发生在施用抗体、抗原结合片段或包含抗体或抗原结合片段的药物组合物后约24天。在一些实施方式中，总血清igg水平的最大降低发生在约3剂至5剂(例如，约4剂之后)抗体或抗原结合片段或包含抗体或抗原结合片段的药物组合物之后。在一些实施方式中，治疗使患者的血红蛋白水平增加至少约5％、约10％、约15％或约20％(例如，约5％至约30％)。在一些实施方式中，治疗使患者的血红蛋白水平增加超过约20％。在一些实施方式中，在每周给药(例如，每周一次施用680mg)进行约1周或2周后，治疗使患者的血红蛋白水平增加至少约10％(例如，约10％至约15％)。在一些实施方式中，在每周给药(例如，每周一次施用680mg)进行约1周或2周后，治疗使患者的血红蛋白水平增加至少约20％(例如，约20％至约25％)。在一些实施方式中，在整个治疗期或其一部分中维持患者的血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)。在一些实施方式中，患者的血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)维持至少4周(例如，至少4周、6周、8周、10周、12周或更长时间)。
[0209]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每2周一次施用约170mg至约1500mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每2周一次施用约300mg至约800mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每2周一次施用约170mg至约300mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每2周一次施用约300mg至约500mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每2周一次施用约500mg至约700mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每2周一次施用约700mg至约900mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每2周一次施用约900mg至约1100mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每2周一次施用约1100mg至约1300mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每2周一次施用约1300mg至约1500mg。
[0210]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每月一次施用约170mg至约1500mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每月一次施用约300mg至约800mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每月一次施用约170mg至约300mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每月一次施用约300mg至约500mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每月一次施用约500mg至约700mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每月一次施用约700mg至约900mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每月一次施用约900mg至约1100mg。在一些实施方式中，抗体
或抗原结合片段的治疗有效量为每月一次施用约1100mg至约1300mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每月一次施用约1300mg至约1500mg。
[0211]
在本文公开的治疗方法、用途和组合物的一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约340mg或约680mg(例如，约680mg)。
[0212]
在一些实施方式中，在每周给药进行约1周或2周后，以约340mg或约680mg(例如，约680mg)的剂量每周一次施用抗体或抗原结合片段的治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平相对于治疗前患者和/或样本中的总血清igg水平降低至少约40％(例如，约40％至约50％)。在一些实施方式中，在每周给药进行约3周后，以约340mg或约680mg(例如，约680mg)的剂量每周一次施用抗体或抗原结合片段的治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平相对于治疗前患者和/或样本中的总血清igg水平降低至少约60％(例如，约60％至约70％)。在一些实施方式中，在每周给药进行约5周后，以约340mg或约680mg(例如，约680mg)的剂量每周一次施用抗体或抗原结合片段的治疗使患者和/或来自患者的样本中的总血清igg水平相对于治疗前患者和/或样本中的总血清igg水平降低至少约70％(例如，约70％至约80％)。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约680mg。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约680mg，进行至少2周(例如2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、10周、12周或更长时间，例如，4周、7周、12周或更长时间)。
[0213]
在一些实施方式中，在每周给药进行约1周或2周后，以约340mg或约680mg(例如，约680mg)的剂量每周一次施用抗体或抗原结合片段的治疗使患者和/或来自患者的样本中的血红蛋白水平相对于治疗前患者和/或样本中的血红蛋白水平增加至少约10％(例如，约10％至约15％)。在一些实施方式中，在每周给药进行约1周或2周后，以约340mg或约680mg(例如，约680mg)的剂量每周一次施用抗体或抗原结合片段的治疗使患者和/或来自患者的样本中的血红蛋白水平相对于治疗前患者和/或样本中的血红蛋白水平增加至少约20％(例如，约20％至约25％)。在一些实施方式中，在整个治疗期或其一部分中维持患者和/或来自患者的样本中血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)。在一些实施方式中，患者和/或来自患者的样本中血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)维持至少2周、3周或4周(例如，4周或更长时间)。在一些实施方式中，患者和/或来自患者的样本中血红蛋白水平的增加(例如，增加约10％、约20％或更多)维持约2周至约6周。在一些实施方式中，抗体或抗原结合片段的治疗有效量为每周一次施用约680mg，进行至少2周(例如2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、10周、12周或更长时间，例如，4周、7周、12周或更长时间)。
[0214]
在各种实施方式中，本发明还提供了用于本文所述的治疗性应用中的试剂盒。在各种实施方式中，本发明提供了用于温性自身免疫性溶血性贫血的预防治疗的试剂盒，该试剂盒包含抗fcrn抗体或其抗原结合片段。在各种实施方式中，试剂盒进一步包含一种或多种另外的组成部分，包括但不限于：使用说明；其他药剂，例如一种或多种另外的治疗剂(例如，一种或多种标准护理剂)；用于准备抗体或抗原结合片段以进行治疗性施用的装置、容器或其他材料；药学上可接受的载体(例如赋形剂)；以及用于向患者施用抗体或抗原结合片的装置、容器或其他材料。使用说明可以包括治疗性应用指南，包括建议的剂量和/或施用方式，例如建议的用于患有或怀疑患有温性自身免疫性溶血性贫血的患者的剂量和/
或施用方式。在各种实施方式中，试剂盒包含抗fcrn抗体或其抗原结合片段和用于治疗性用途(例如抗体或抗原结合片段在治疗或预防患者的温性自身免疫性溶血性贫血中的用途)的说明。在各种实施方式中，试剂盒进一步包含至少一种另外的治疗剂(例如，用于与抗体或抗原结合片段联合施用)。在各种实施方式中，抗体或抗原结合片段被配制成药物组合物。
[0215]
在一些实施方式中，抗fcrn抗体或抗原结合片段使用基因重组方法通过表达和纯化而产生。在一些实施方式中，编码抗体或抗原结合片段的可变区的多核苷酸序列通过在分开的宿主细胞中或同时在单种宿主细胞中表达而产生。
[0216]
如本文所用，术语“重组载体”是指能够在合适的宿主细胞中表达目的蛋白的表达载体。该术语包括dna构建体，该dna构建体包含可操作地连接以表达核酸插入物的必需调控元件。
[0217]
如本文所用，术语“可操作地连接”是指核酸表达控制序列功能性地连接至编码目的蛋白的核酸序列以执行一般功能。可以使用本领域众所周知的基因重组技术来进行与重组载体的可操作连接，并且可以使用本领域通常已知的酶来容易地进行位点特异性的dna切割和连接。
[0218]
合适的表达载体可以包括表达调节元件，例如启动子、操纵子、起始密码子、终止密码子、聚腺苷酸化信号和增强子以及用于膜靶向或分泌的信号序列。起始密码子和终止密码子通常被认为是编码免疫原性靶蛋白的核苷酸序列的一部分，并且对于在已施用了遗传构建体的个体中起作用是必需的，并且必须与编码序列在框内。启动子通常可以是组成型或诱导型。原核启动子包括但不限于lac、tac、t3和t7启动子。真核启动子包括但不限于猿猴病毒40(sv40)启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(mmtv)启动子、人免疫缺陷病毒(hiv)启动子(例如hiv长末端重复(ltr)启动子)、莫洛尼病毒启动子、巨细胞病毒(cmv)启动子、爱泼斯坦巴尔病毒(ebv)启动子、劳斯肉瘤病毒(rsv)启动子以及来自人类基因(例如人β-肌动蛋白、人血红蛋白、人肌肉肌酸和人金属硫蛋白)的启动子。表达载体可以包括允许选择含有该载体的宿主细胞的选择标记。编码赋予可选择表型(例如对药物的抗性、营养需求或对细胞毒剂的抗性或表面蛋白的表达)的产物的基因可以用作一般的选择标记。由于在用选择剂处理的环境中只有表达选择标记的细胞存活，因此可以对转化的细胞进行选择。同样，可复制的表达载体可以包括复制起点，即发起复制的特定核酸序列。可以使用的重组表达载体包括各种载体，例如质粒、病毒和粘粒。重组载体的种类不受限制，并且重组载体可以发挥功能以在各种宿主细胞如原核和真核细胞中表达所需的基因并产生所需的蛋白质。在一些实施方式中，使用了可以产生大量外来蛋白的载体，该外来蛋白与天然蛋白相似同时通过显示强活性的启动子而具有强表达能力。
[0219]
可以使用各种表达宿主/载体组合来表达抗fcrn抗体或其抗原结合片段。例如，适用于真核宿主的表达载体包括但不限于sv40、牛乳头瘤病毒、腺病毒、腺相关病毒、巨细胞病毒和逆转录病毒。可用于细菌宿主的表达载体包括细菌质粒(例如pet、prset、pbluescript、pgex2t、puc、colel、pcr1、pbr322、pmb9及其衍生物)、宿主范围较宽的质粒(例如rp4)、表示为各种噬菌体λ衍生物的噬菌体dna(例如gt10、gt11和nm989)以及其他dna噬菌体(例如ml3和单链丝状dna噬菌体)。在酵母细胞中有用的表达载体包括2μm质粒及其衍生物。在昆虫细胞中有用的载体是pvl941。
[0220]
在一些实施方式中，将重组载体引入宿主细胞以形成转化体。适于使用的宿主细胞包括原核细胞(例如大肠杆菌(e.coli)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、链霉菌属(streptomyces sp.)、假单胞菌属(pseudomonas sp.)、奇异变形杆菌(proteus mirabilis)和葡萄球菌属(staphylococcus sp.))、真菌(例如曲霉属(aspergillus sp.))、酵母(例如巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)、裂殖酵母属(schizosaccharomyces sp.)和粗糙脉孢菌(neurospora crassa))以及真核细胞(例如低等真核细胞以及其他高等真核细胞如昆虫细胞)。
[0221]
在一些实施方式中，宿主细胞来源于植物或动物(例如哺乳动物)，并且其实例包括但不限于猴肾细胞(cos7)、nso细胞、sp2/0、中国仓鼠卵巢(cho)细胞、w138、幼仓鼠肾(bhk)细胞、mdck、骨髓瘤细胞、hut 78细胞和hek293细胞。在一些实施方式中，使用cho细胞。
[0222]
转染或转化到宿主细胞中可以包括可将核酸引入生物体、细胞、组织或器官的任何方法，并且如本领域已知的，可使用根据宿主细胞的种类选择的合适标准技术来进行。方法包括但不限于电穿孔、原生质体融合、磷酸钙(capo4)沉淀、氯化钙(cacl2)沉淀、碳化硅纤维搅拌以及农杆菌介导的转化、peg介导的转化、硫酸葡聚糖介导的转化、脂质体介导的转化和脱水/抑制介导的转化。
[0223]
通过在营养培养基中培养包含重组载体的转化体，可以大量生产抗fcrn抗体或抗原结合片段，并且可以根据宿主细胞的种类来选择使用的培养基和培养条件。在培养期间，可以控制包括温度、培养基的ph和培养时间在内的条件，以适于细胞的生长和蛋白质的大量生产。可以从培养基或细胞裂解物中收集通过本文所述的重组方法产生的抗体或抗原结合片段，并可以通过常规生化分离技术分离和纯化所述抗体或抗原结合片段(sambrook et al.,molecular cloning:a laboratory manual,2nd ed.,cold spring harbor laboratory press(1989)；deuscher,guide to protein purification methods enzymology,vol.182.academic press.inc.,san diego,ca(1990))。这些技术包括但不限于电泳、离心、凝胶过滤、沉淀、透析、色谱(例如，离子交换色谱、亲和色谱、免疫吸附色谱、尺寸排阻色谱等)、等电点聚焦和各种修改及其组合。在一些实施方式中，使用蛋白a来分离并纯化抗体或抗原结合片段。
[0224]
实施例
[0225]
在下文中，将参考实施例进一步详细地描述本发明。对于本领域普通技术人员而言显而易见的是，这些实施例仅是说明性目的，并且不应解释为限制本发明的范围。
[0226]
实施例1：使用转基因大鼠构建抗fcrn表达文库
[0227]
总共使用六只转基因大鼠(omt)进行免疫。使用人fcrn作为免疫原。用0.0075mg人fcrn和佐剂在24天里以3天为间隔免疫大鼠的两个脚垫八次。在第28天，用稀释于pbs缓冲液中的5-10μg免疫原免疫大鼠。在第28天，收集大鼠血清并用于测量抗体滴度。在第31天，对大鼠实施安乐死，重获腘淋巴结和腹股沟淋巴结以用于与p3x63/ag8.653骨髓瘤细胞融合。
[0228]
进行elisa分析以测量大鼠血清中的抗体滴度。具体来说，将人fcrn稀释于pbs(ph6.0或ph7.4)缓冲液中以制成2μg/ml的溶液，将100μl的溶液包被在96孔板的每个孔中，然后在4℃下孵育至少18小时。每个孔用300μl洗涤缓冲液(pbs中的0.05％tween20)洗涤3
次，以去除未结合的人fcrn，然后向每个孔中添加200μl封闭缓冲液，并在室温下孵育2小时。将测试血清样本以1/100稀释，然后将溶液稀释连续2倍，以制成总共10个稀释系数为1/100至1/256,000的测试样本。封闭后，将每个孔用300μl洗涤缓冲液洗涤，然后将每个测试样本添加到各细胞中，并在室温下培养2小时。洗涤三遍后，向每个孔中加入在100μl的以1:50,000稀释的检测二抗的pbs缓冲液，并在室温下孵育2小时。再次洗涤三遍后，将100μl的tmb溶液添加到每个孔中，并使其在室温下反应10分钟，然后将50μl的1m含硫酸的终止溶液添加到每个孔中以终止反应，然后用酶标仪测量450nm的od值。免疫产生的抗人fcrn(hfcrn)igg滴度高于大鼠免疫前血清中的抗人fcrn igg滴度。
[0229]
总共制作了三种使用聚乙二醇融合的杂交瘤文库a、b和c。具体而言，转基因大鼠1和5用于制作杂交瘤文库a，大鼠2和6用于制作杂交瘤文库b，大鼠3和4用于制作杂交瘤文库c。将用于构建每个杂交瘤文库的杂交瘤文库融合混合物在含hat的培养基中培养7天，以便仅选择与hat融合的细胞。收集在hat培养基中可成活的杂交瘤细胞，并在ht培养基中培养约6天，然后收集上清液，并使用大鼠igg elisa试剂盒(rd-biotech)测量上清液中的大鼠igg的量。具体地，将每个样本以1:100稀释，并且将100μl的稀释液添加至elisa板的每个孔中，并与过氧化物酶缀合的抗大鼠igg混合，然后在室温下反应15分钟。将100μl的tmb溶液添加到每个孔中，并使其在室温反应10分钟，然后将50μl的1m的含硫酸终止溶液添加到每个孔中以终止反应。接着，用酶标仪测量450nm的od值。
[0230]
实施例2：杂交瘤文库的抗hfcrn抗体的抗原结合亲和力和igg结合阻断能力的评估
[0231]
为了分析抗体与hfcrn的结合，进行了与上述相同的elisa分析(ph6.0和ph7.4)。
[0232]
使用三种杂交瘤文库的培养物上清液，通过facs在ph6.0和ph7.4下以5ng/ml和25ng/ml进行hfcrn结合亲和力评估。使稳定表达人fcrn的hek293细胞从烧瓶中脱壁，然后悬浮在反应缓冲液(0.05％bsa的pbs，ph6.0或ph7.4)中。将悬液稀释至细胞密度为2
×
106个细胞/ml，并将50μl的稀释液添加至96孔板的每个孔中。然后，将50μl各自稀释至10ng/ml和50ng/ml的杂交瘤文库培养物上清液添加至每个孔中并悬浮以使抗体结合。a488兔抗igg山羊抗体以1:200的比例稀释于反应缓冲液中，将100μl的稀释液添加到每个孔中，并与细胞沉淀混合以进行结合反应，然后将150μl的反应缓冲液添加到每个孔中。在facs(bd)中进行测量。
[0233]
在ph6.0下通过facs进行杂交瘤文库的人fcrn阻断能力评估。具体地，将原初hek293细胞和过表达人fcrn的hek293细胞悬浮在反应缓冲液(0.05％bsa的pbs，ph6.0)中。将1
×
105个细胞添加至96孔板，并分别用4nm的每种杂交瘤文库培养物上清液和0.4nm的上清液10倍稀释液进行处理。为了证实higg的阻断能力，将100nm a488-higg1添加至每个孔，然后在冰上孵育90分钟。反应完成后，将细胞沉淀用100μl反应缓冲液洗涤，并转移至u形圆底管中，随后在facs中进行测量。测量100nm a488-higg1在过表达人fcrn的稳定细胞中剩余的量，然后计算阻断率(％)。使用了hlgg1作为同种型对照，且使用了先前开发的hl161-1ag抗体作为阳性对照来比较评估抗体的阻断作用。以1μm和2μm的浓度分析每个对照，并测量0.4nm和4nm的两个浓度下的杂交瘤文库样本。
[0234]
实施例3：通过facs分离杂交瘤克隆并且进行人抗体的选择
[0235]
使用显示出最高的人fcrn结合亲和力和阻断作用的杂交瘤文库a，通过facs(流式
细胞术)来分离克隆，从而获得总共442个单克隆。将分离的单克隆在ht培养基中培养，并收集上清液。通过facs选择与上清液中的hfcrn结合的表达抗体的杂交瘤克隆。
[0236]
从通过facs分析选择的100个单克隆中分离出rna，并对分离的rna进行测序。在第一步测序中，对100个单克隆中的88个进行了测序，并根据氨基酸序列分为总共35个组(g1至g38)。将排除培养基不可获得的两个克隆(g33和g35)后的33个组的代表性克隆的培养物上清液以100ng/ml的浓度稀释，并通过elisa评估对hfcrn的结合亲和力。
[0237]
以与上述相同的方式，通过facs在ph6.0和7.4下进行hfcrn结合亲和力评估。在两种ph之间，克隆的结合亲和力的顺序是相似的，并且结合强度以各种水平出现。
[0238]
此外，在ph6.0下通过facs进行33个克隆的hfcrn阻断作用评估。根据测得的mfi值计算阻断率(％)。基于对浓度为1667pm的阻断率％的分析结果，将克隆分为总计以下四组：a组：70％-100％；b组：30％-70％；c组：10％-30％；d组：10％或更低。
[0239]
为了通过spr对杂交瘤克隆进行动力学分析，将人fcrn固定化，然后使用杂交瘤培养物作为分析物进行分析。
[0240]
在五个杂交瘤克隆中，将根据hfcrn阻断作用的分析结果划分的a组和b组的18个克隆的基因转化为完整的人igg序列，该18个克隆的基因的cdr序列中没有n-糖基化位点或游离半胱氨酸。
[0241]
具体而言，使用ncbi网页的igblast程序检查了18种所选抗体的vh和vl与人类种系抗体组之间的氨基酸序列相似性。
[0242]
为了克隆18种人抗体基因，以以下方式将限制性酶识别位点插入基因的两端。将ecori/apai插入重链可变结构域(vh)；将ecori/xhoi插入轻链λ可变结构域(vl(λ))；将ecori/nhei限制酶识别位点插入轻链κ可变结构域(vl(κ))。在轻链可变结构域的情况下，在基因克隆过程中，轻链λ可变(vl(λ))基因序列与人轻链恒定(lc(λ))区基因相连，轻链κ可变(vl(κ))基因序列与人轻链恒定(lc(κ))区基因相连。
[0243]
在克隆到pcho1.0表达载体中以在动物细胞中表达抗体时，在用ecorv、paci、avrii和bstz17i限制酶切割后，插入了轻链基因和重链基因。为了检查含有选择的18种人抗体基因的pcho1.0表达载体是否与合成的基因序列一致，进行了dna测序。
[0244]
使用作为动物细胞表达系统的包含所有抗体轻链和重链基因的pcho1.0表达载体，表达了完整的人igg。通过将每种抗体的质粒dna瞬时转染到cho-s细胞中并通过蛋白a柱纯化分泌到培养基中的抗体，从而获得人抗体。
[0245]
将人igg注射到表达hfcrn的tg32(hfcrn / ，hβ2m / ，mfcrn-/-，mβ2m-/-)小鼠(jacksonlaboratory)中，然后将18种转化为人igg序列的人抗体施用至小鼠，以检查抗体是否会影响人igg的分解代谢。
[0246]
基于对抗原的结合亲和力(kd)的体外分析结果、以及通过facs对人fcrn的结合亲和力和阻断作用的分析、以及对人igg的分解代谢的体内分析，选择了四种人抗fcrn抗体蛋白(hl161a、hl161b、hl161c和hl161d)(图1)。另外，通过用赖氨酸(k)取代hl161b抗体的重链可变结构域第83位的天冬酰胺(n)，制备了不具有n-糖基化位点的hl161bk抗体。还通过用丙氨酸(a)取代hl161bk抗体的重链第238和239位(即在igg1重链恒定区之内)的赖氨酸(k)来制备hl161bkn抗体(rvt-1401)。选择的人fcrn抗体的核苷酸序列、氨基酸序列和cdr序列示于表1至表5。
[0247]
表1.选择的人fcrn抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域的多核苷酸序列
[0248]
[0249]
[0250][0251]
表2.选择的人fcrn抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域的氨基酸序列
[0252][0253]
表3.选择的人fcrn抗体的全长重链和轻链的多核苷酸序列
[0254]
[0255]
[0256][0257]
表4.选择的人fcrn抗体的全长重链和轻链的氨基酸序列
[0258]
[0259][0260]
表5.选择的人fcrn抗体的重链可变域和轻链可变域的cdr序列
[0261][0262]
实施例4：通过表面等离子体共振(spr)测量hl161a、hl161b、hl161c和hl161d抗体的抗原结合亲和力
[0263]
通过spr，通过将水溶性hfcrn作为配体在proteonglc芯片(bio-rad)上固定化并测量亲和力，测量hl161a、hl161b、hl161c和hl161d抗体的结合亲和力。使用proteonxpr36系统进行动力学分析。将水溶性人fcrn(shfcrn)在glc芯片上固定化，使抗体样本以5的浓度反应，并获得传感图结果。在动力学分析中，使用1:1langmuir结合模型，在ph6.0和ph7.4下分析分别重复六次，并计算出平均kd值。固定化步骤后，在edac/nhs0.5x，30μl/分钟和300秒的条件下激活芯片。为了进行固定化，将shfcrn在醋酸盐缓冲液(ph5.5)中稀释至浓度为2μg/ml和250μl，并使稀释液以30μl/分钟的速度在芯片上流动。当达到200-300ru的固定化水平时，反应停止。然后，使用乙醇胺以30μl/分钟的速度进行失活300秒。将每种hl161抗体从浓度10nm起连续2倍稀释为5nm、2.5nm、1.25nm、0.625nm、0.312nm等，从而制备样本。在每个ph下使用1
×
pbst(ph7.4)或1
×
pbst(ph6.0)进行样本稀释。为了进行样本分析，以50μl/分钟进行缔合200秒，然后以50μl/分钟进行解离步骤600秒，然后使用甘氨酸缓冲液(ph2.5)以100μl/分钟进行再生18分钟。每个样本的动力学分析重复六次，然后测量平均抗原结合亲和力(kd)。由spr分析得到的抗体的动力学参数示于表6(图2a至图2h)。
[0264]
表6.通过人fcrn固定化spr进行抗体动力学分析的结果
[0265][0266]
实施例5：通过facs分析hl161a和hl161b抗体与人fcrn的结合
[0267]
使用表达人fcrn的hek293细胞，使用facs系统分析在每个ph下与fcrn的结合。使用facs的fcrn结合测试在ph6.0和ph7.4的反应缓冲液中进行。具体地，用pbs缓冲液洗涤100,000个表达人fcrn的稳定hek293细胞，并在台式微量离心机中以4500rpm离心5分钟以获得细胞沉淀。将抗体添加到100μl的ph6.0或ph7.4 pbs/10mm edta中。将剩余的细胞沉淀悬浮在反应缓冲液中，并进行细胞计数。将10μl细胞悬液添加到载玻片上，并在tc10系统中对细胞悬液中的细胞数进行计数，然后将细胞悬液用反应缓冲液稀释至2
×
106个细胞/ml的细胞浓度。将每种抗体样本稀释至500nm。对于在ph6.0下进行分析，将稀释液在v型底96孔板中稀释至20nm，然后将50μl稀释液添加到每个孔中。对于在ph7.4下进行分析，通过3倍连续稀释液来稀释500nm抗体样本，以250nm至0.11nm的浓度进行分析。将50μl稀释至2
×
106个细胞/ml的细胞添加至每个孔并悬浮。将板安装在4℃的旋转器中，并以15
°
的角度和10rpm旋转90分钟。反应完成后，将板从旋转器中取出并以2000rpm离心10分钟，并除去上清液。将a488抗hlgg山羊抗体以1:200稀释于反应缓冲液中，并将100μl抗体稀释液添加至每个孔中并悬浮。接下来，将板再次安装在4℃的旋转器中，并以15
°
的角度和10rpm旋转90分钟。反应完成后，将板从旋转器中取出并以2000rpm离心10分钟，并除去上清液。再次执行洗
涤程序后，将100μl反应缓冲液添加到每个孔中以溶解细胞沉淀，然后将板转移到蓝色试管中。接下来，将200μl反应缓冲液添加到每个孔中，然后在facs中进行测量。facs测量在以下条件下执行：fs 108伏，ss 426伏，fl1 324伏，fl2 300伏。使用bd facsdiva
tm v6.1.3软件(bd bioscience)通过facs分析这些细胞。结果表示为平均荧光强度(mfi)(图3)。在10nm的浓度和ph6.0下，hl161a和hl161b抗体显示出mfi值分别为10.59和8.34。在ph7.4和0.11nm-250nm的浓度下，抗体显示出ec50值(有效浓度50％)分别为2.46nm和1.20nm，这是使用mfi值通过4参数逻辑回归而分析得出的。
[0268]
实施例6：通过facs分析hl161a和hl161b抗体的阻断作用
[0269]
用hl161a和hl161b抗体(之前已分析了它们对细胞表面人fcrn的结合亲和力)处理在细胞表面上表达hfcrn的hek293细胞，并基于与alexa-fluo-488标记的higg1结合的减少，检查了抗体的阻断作用。分析步骤按以下方式执行：
[0270]
将2ml的1
×
te添加到原初hek293细胞和过表达人fcrn的稳定hek293细胞中的每种类型中，将这些细胞在5％co2培养箱中于37℃孵育1分钟。从烧瓶中重获细胞，并向细胞中添加8ml反应缓冲液(ph6.0)，然后将细胞转移至50ml锥形管中。将细胞悬液以2000rpm离心5分钟，除去上清液，并将1ml反应缓冲液(ph6.0)添加到各细胞沉淀中。然后，将细胞悬液转移至新的1.5ml eppendorf管中。接下来，将细胞悬液以4000rpm离心5分钟，并除去上清液。然后，将反应缓冲液(ph6.0)添加到剩余的细胞沉淀中，并对细胞悬液的细胞数计数。最后，将细胞悬液用反应缓冲液稀释至细胞浓度为2.5
×
106个细胞/ml。
[0271]
将每种抗体样本稀释至400nm，然后在v型底96孔板中通过4倍连续稀释进行稀释。将稀释至最终浓度为200nm至0.01nm的50μl样本添加到每个孔中。然后，用1μm反应缓冲液(ph6.0)稀释的10μl alex488-higg1添加至每个孔。最后，将稀释至细胞浓度为2.5
×
106个细胞/ml的40μl细胞添加到每个孔中并悬浮。将板安装在4℃的旋转器中，并以15
°
的角度和10rpm旋转90分钟。反应完成后，将板从旋转器中取出，并以2000rpm离心10分钟，除去上清液。向每个孔中加入100μl反应缓冲液以溶解细胞沉淀，然后将板转移到蓝色试管中。然后，将200μl反应缓冲液添加到每个孔中，并在facs中进行测量。facs测量在以下条件下执行：fs 108伏，ss 426伏，fl1 324伏，fl2 300伏。使用bd facsdiva
tm v6.1.3软件(bdbioscience)通过facs分析这些细胞。结果表示为平均荧光强度(mfi)。在减去测得的细胞单独的mfi值(背景信号)后，对测试组的mfi进行处理。计算出含有竞争剂的试管相对于对照试管(仅alexafluor488，无竞争剂)(作为100％)的mfi的百分比。
[0272][0273]
当mfi低于含有人igg1竞争剂的试管的mfi时，确定竞争剂抗体具有高竞争率。基于在ph6.0和浓度0.01nm-200nm的条件下测得的hl161a和hl161b抗体的阻断作用(％)，执行4参数逻辑回归。结果表明，hl161a和hl161b抗体显示ic50(抑制浓度50％)值分别为0.92nm和2.24nm(图4)。
[0274]
实施例7：测试hl161a和hl161b在mfcrn-/-hfcrn转基因32(tg32)小鼠中的作用
[0275]
将人igg注射到表达人fcrn的tg32(hfcrn / ，hβ2m / ，mfcrn-/-，mβ2m-/-)小鼠中(jacksonlaboratory)，然后将hl161a和hl161b连同人igg施用至小鼠以检查抗体是否会影响人igg的分解代谢。
[0276]
将hl161a和hl161b抗体以及人igg(greencross，ivglobulins)各分配成5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量以用于4天施用，并进行储存，并使用pbs(磷酸盐缓冲盐水)缓冲液(ph7.4)作为溶媒和20mg/kg igg1对照。使人fcrn tg32小鼠适应约7天，并自由摄取水和饲料。自动控制温度(23
±
2℃)，湿度(55
±
5％)和12小时光照/12小时黑暗循环。每个动物组由4只小鼠组成。为了使用人igg作为示踪剂，使用试剂盒(pierce，目录号21327)来制备生物素缀合的hlgg。在0小时时，腹膜内施用5mg/kg的生物素-higg和495mg/kg的人igg以使体内igg饱和。在施用生物素-igg后24、48、72和96小时，以5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量腹膜内注射每种药物每天一次。为了采集血液，将小鼠用异氟烷(jwpharmaceutical)轻度麻醉，然后在施用生物素igg后24、48、72、96、120和168小时，使用肝素化微量血细胞比容毛细管(fisher)从眼眶后血管丛采集血液。在第24、48、72和96小时时，在采血后施用药物。将0.1ml全血装入eppendorf管后，立即通过离心来分离血浆并将血浆保存在-70℃的深度冷冻柜(thermo)中直至分析。
[0277]
以如下方式通过elisa分析收集的血液中的生物素-hlgg1的水平。将100μl的中性亲和素(neutravidin，pierce，31000)添加至96孔板(costar，目录号：2592)中至浓度为1.0μg/ml，然后在4℃包被16小时。将板用缓冲液a(0.05％tween-20，10mm pbs，ph7.4)洗涤3次，然后在含1％bsa的pbs(ph7.4)缓冲液中室温孵育2小时。接下来，将板用缓冲液a洗涤3次，然后用含0.5％bsa的pbs(ph7.4)缓冲液制备中性亲和素(neutravidin)板，以相当于1μg/ml。将血液样本在缓冲液b(100mm mes，150mm nacl，0.5％无igg的bsa，0.05％tween-20，ph6.0)中连续稀释500-1000倍，然后向板的每个孔中添加150μl稀释液。使添加的样本室温反应1小时。接下来，将板用缓冲液a洗涤3次，然后将200μl的1nm的hrp缀合的抗人igg山羊抗体添加到每个孔中，并37℃培养2小时。接下来，将板用冰冷的缓冲液b洗涤3次，然后将100μl的底物溶液四甲基联苯胺(rnd，目录号：dy999)添加到每个孔中，并使底物溶液四甲基联苯胺室温反应15分钟。向每个孔中添加50μl的1.0m硫酸溶液(samchun，目录号：s2129)以终止反应，然后测量450nm吸光度。将24小时后的生物素igg浓度(大约为小鼠中生物素-igg的tmax；生物素igg发生分解代谢之前)设置为100％，分析其他时间点的浓度相对于24小时时的浓度的百分比。溶媒和20mg/kg igg1对照的半衰期分别为103小时和118小时。hl161a抗体在不同剂量下的igg半衰期为30、23和18小时。另外，hl161b抗体显示igg半衰期为41、22和21小时(图5a和图5b)。
[0278]
实施例8：测试hl161a和hl161b在猴中的作用
[0279]
使用与人fcrn具有96％同源性的食蟹猴，分析了通过施用hl161a和hl161b抗体而产生的猴igg、iga、igm和白蛋白水平，并分析了抗体的药代动力学(pk)谱。
[0280]
1)猴血中免疫球蛋白g表达的变化分析
[0281]
首先，通过elisa分析来测量猴igg的变化。将100μl抗人iggfc抗体(bethyllab，a80-104a)加样到96孔板(costar，目录号：2592)的每个孔中至浓度为4.0μg/ml，然后在4℃下包被16小时。用洗涤缓冲液(0.05％tween-20，10mm pbs，ph7.4)洗涤板3次，然后将板含1％bsa的pbs(ph7.4)缓冲液室温孵育2小时。使用浓度为3.9-500ng/ml的标准的猴igg，将血液样本在含1％bsa的pbs(ph7.4)缓冲液中稀释80,000倍，并将稀释液加样至板中且室温孵育2小时。接下来，将板用洗涤缓冲液洗涤3次，然后将100μl的抗-hlgg抗体的20,000倍稀释液(biorad，201005)加样到板中，并使其室温反应1小时。在洗涤每个板之后，将100μl的
底物溶液3,3',5,5'-四甲基联苯胺(rnd，目录号：dy999)加样到板中，并使其室温反应7分钟，之后向每个孔中添加50μl的1.0m硫酸溶液(samchun，目录号：s2129)以终止反应。使用450nm和540nm吸光度读数器(md，型号：versamax)测量吸光度(od)以进行分析。表7和图6a至图6c示出了通过施用hl161a和hl161b抗体导致的猴igg水平的变化(％)。
[0282]
表7.通过施用hl161a和hl161b导致的猴igg水平的变化(％)
[0283]
[0284]
2)猴血中hl161a和hl161b的药代动力学谱分析
[0285]
通过竞争性elisa分析了静脉内施用后hl161a和hl161b的时间依赖性药代动力学谱(pk)。具体地，制备2μg/ml的中性亲和素的溶液，并将100μl的溶液涂覆在96孔板的每个孔上，然后4℃培养18小时。将板用300μl洗涤缓冲液(含有0.05％tween20的10mm pbs，ph7.4)洗涤3次，然后将每个孔用含1％bsa的pbs(ph7.4)缓冲液25℃孵育2小时。将生物素化hfcrn用pbs稀释至1μg/ml，然后将100μl的稀释液添加到96孔板的每个孔中，且25℃孵育1小时。接下来，将板用300μl洗涤缓冲液洗涤3次以除去未结合的hfcrn，然后将标准样本(0.156ng/ml-20ng/ml)添加到每个孔中，并在25℃孵育2小时。接下来，将板用洗涤缓冲液洗涤3次，并且向每个孔中加入100μl的1:10,000稀释于pbs中的检测抗体，并在25℃孵育1.5小时。最后将板洗涤3次，并且将100μl的tmb溶液添加到每种缓冲液中并且室温孵育5分钟，之后将50μl的1m硫酸作为反应终止溶液添加到每个孔中以终止反应。接着，用酶标仪测定450nm吸光度。表8和图7a和图7b中显示了不同剂量的hl161a和hl161b的药代动力学谱的分析结果。
[0286]
表8.不同剂量下hl161a和hl161b的药代动力学谱的分析结果
[0287][0288]
3)猴血液中igm和iga抗体水平变化分析
[0289]
以与测量igg水平的elisa方法类似的方式进行测量猴血中igm和iga水平的elisa分析。具体而言，将100μl抗猴igm抗体(alphadiagnostic，70033)或iga抗体(alphadiagnostic，70043)添加到96孔板的每个孔中至浓度为2.0μg/ml，然后4℃包被16小时。用洗涤缓冲液(含0.05％tween-20的10mm pbs，ph7.4)将板洗涤3次，然后用含1％bsa的pbs(ph7.4)缓冲液室温孵育2小时。在7.8ng/ml-1,000ng/ml的浓度下分析标准猴igm，在15.6ng/ml-2,000ng/ml下分析iga。将血液样本在含1％bsa的pbs(ph7.4)缓冲液中稀释10,000或20,000倍，将稀释液添加到每个孔中，并室温孵育2小时。接下来，将板用洗涤缓冲液洗涤3次，然后将100μl的抗猴igm二抗(alphadiagnostic，70031)和抗猴iga二抗(kpl，074-11-011)的5,000倍稀释液各自添加到每个孔中，并使其室温反应1小时。最后将板洗涤3次，并将100μl的底物溶液3,3',5,5'-四甲基联苯胺(rnd，目录号：dy999)添加到每个孔中，并
使其室温反应7分钟。接下来，向每个孔中添加50μl的1.0m硫酸溶液(samchun，目录号：s2129)以终止反应。用450和540nm吸光度读数器(md，型号：versamax)测量每个孔的吸光度。
[0290]
4)猴血液中白蛋白水平变化分析
[0291]
使用市售elisa试剂盒(assaypro，目录号：eka2201-1)对猴血液中白蛋白水平的变化进行分析。简而言之，将作为测试样本的猴血清稀释4000倍，并将25μl的稀释液添加至用能够与猴白蛋白结合的抗体包被的96孔板的每个孔中。将25μl生物素化猴白蛋白溶液添加到每个孔中，并在25℃孵育2小时。用200μl洗涤缓冲液将板洗涤3次，然后将50μl链霉亲和素-过氧化物酶缀合的抗体的1:100稀释液添加到每个孔中，并在25℃孵育30分钟。最后将板洗涤3次，然后将50μl的底物添加到每个孔中，并室温孵育10分钟。接下来，向每个孔中添加50μl反应终止溶液，并测量450nm吸光度。
[0292]
图8a至图8c示出了通过施用hl161a和hl161b抗体导致的猴igm、iga和白蛋白水平的变化(％)。
[0293]
5)血液生化水平和尿液组分的分析
[0294]
最后，在测试的第14天使用样本进行经施用抗体的血液生化分析和尿液分析。使用hitachi 7180系统分析血液生化指标，包括天冬氨酸转氨酶(ast)、丙氨酸转氨酶(alt)、碱性磷酸酶(alp)、肌酸磷酸激酶(cpk)、总胆红素(tbil)、葡萄糖(glu)、总胆固醇(tcho)、甘油三酯(tg)、总蛋白(tp)、白蛋白(alb)、白蛋白/球蛋白(a/g)、血尿素氮(bun)、肌酐(cre)、无机磷(ip)、钙(ca)、钠(na)、钾(k)和氯(cl)。此外，使用missionu120系统分析了用于尿液分析的标记物，包括白细胞(leu)、硝酸盐(nit)、尿胆素原(uro)、蛋白质(pro)、ph、潜血(blo)、比重(sg)、酮体(ket)、胆红素(bil)、葡萄糖(glu)和抗坏血酸(asc)。测得的水平通常在食蟹猴的正常水平范围内。
[0295]
实施例9：对皮下(sc)或静脉内(iv)施用后健康对象中rvt-1401(hl161bkn)的评估
[0296]
为了评估rvt-1401(hl161bkn)在单次(iv和sc)和多次(sc)剂量后的安全性、耐受性、药代动力学(pk)、药效学(pd)和免疫原性，向健康对象施用以下剂量的rvt-1401或安慰剂(n＝rvt-1401:安慰剂)：0.5mg/kg sc(n＝3:0)；1.5mg/kg sc(n＝6:2)；5.0mg/kg sc(n＝6:2)；340mg sc(n＝6:2)；500mg sc(n＝6:2)；765mg sc(n＝6:2)；0.1mg/kg iv(n＝4:0)；100mg iv(n＝6:2)；340mg iv(n＝6:2)；765mg iv(n＝6:2)；1530mg iv(n＝6:2)；每周340mg
×
4(n＝8:2)；和每周680mg
×
4(n＝8:2)(图9)。表9示出了对象人口统计数据。
[0297]
表9.人口统计数据
[0298][0299][0300]
结果-[0301]
药代动力学(pk)：sc施用后的单剂量pk(cmax和auc)在1.5mg/kg(等效平均值：127mg)至765mg(固定剂量)的剂量范围内以大于剂量比例的方式增加。在100mg至340mg的剂量范围内iv输注1小时后观察到类似的趋势。在sc施用340mg或更高剂量后，在1.5至4天之间观察到峰值浓度。iv输注后，rvt-1401的血清终末半衰期(t
1/2
)随剂量增加。剂量依赖性半衰期和auc的大于比例增加与靶标介导的药物处置一致。在sc施用超过340mg的剂量后，观察到半衰期随剂量的变化，所有剂量的t
1/2
在10至38小时之间变化。在分别施用340mg和765mg后，皮下施用rvt-1401的生物利用度为11％和23.5％。图10a和图10b示出了iv和sc施用单剂量rvt-1401后，健康对象的平均浓度-时间曲线。表10和表11示出了施用单剂量rvt-1401后血浆pk参数的汇总。
[0302]
在多剂量队列中，以每周sc注射340mg或680mg施用rvt-1401，进行4周。每周sc施用340mg后，rvt-1401首剂后cmax和auc(0-168)的变化与单剂量数据一致。在随后的剂量后，这种对象间围绕cmax和auc(0-168)的变化性降低。每周340mg剂量后的药物积累也显示出对象间变化性较大，这可能是由于首剂后的变化性。重复sc施用680mg显示出对象间在暴露量上变化性较小，并且在给药4周后积累较少。当比较340mg和680mg sc剂量的第4周时，暴露量(cmax和auc(0-168))以超过剂量成比例的方式增加。随着剂量的增加，半衰期的增加和auc和cmax的大于比例增加与靶标介导的药物处置一致。图11a和图11b示出了每周sc施用340mg或680mg的rvt-1401后健康对象的平均浓度-时间曲线。
[0303]
表10.基于体重单次sc施用rvt-1401后pk参数[几何平均数(cv％)]的汇总
[0304][0305]1中位数(最小值、最大值)
[0306]2一名对象在施用1.5mg/kg后浓度不可测量，因此不包括在pk参数汇总中
[0307]
表11.固定剂量单次sc/iv施用rvt-1401后pk参数[几何平均数(cv％)]的汇总
[0308][0309]1中位数(最小值、最大值)
[0310]2340mg、500mg和765mg sc队列各有一名对象由于末期点数不足而无法计算终末半衰期
[0311]
nd＝数据截止时未确定
[0312]
主要药效动力学(pd)：在sc和iv施用单剂量rvt-1401后，观察到与基线相比，igg的剂量依赖性降低。施用rvt-1401后，igg达到最低浓度的时间在7至14天之间。通常在末剂后56天内实现恢复到基线。施用765mg后，单次sc剂量后igg降低的最高百分比为48％。重复给药rvt-1401后，340mg和680mg队列的igg浓度和白蛋白浓度累积降低。每周sc施用680mg后，大多数对象的igg和白蛋白的最低浓度出现在末剂之前，这表明到第4周降低已达到最大。每周sc施用340mg持续4周后观察到igg最大降低63％，以及每周sc施用680mg持续4周后观察到igg最大降低78％。末剂后五周，340mg和680mg队列的平均(sd)igg浓度分别为8.6(2.5)g/l和9.0(2.0)g/l，在基线值的30％范围内。末剂后一个月，保持igg持续降低(＞35％)，igm或iga未观察到临床相关变化。图12示出了每周sc施用340mg或680mg的rvt-1401后健康对象的血清igg浓度-时间曲线。表12示出了施用单剂量rvt-1401后，总igg pd参数的汇总。表13示出了施用多剂量rvt-1401后，总igg pd参数的汇总。
[0313]
表12.施用单剂量rvt-1401后总igg pd参数[平均值(sd)]的汇总
[0314][0315]1达到最低点的时间是相对于首剂施用而言的；中位数(最小值、最大值)
[0316]2n＝4
[0317]
表13.施用多剂量rvt-1401后总igg pd参数[平均值(sd)]的汇总
[0318][0319]1对于pd，n＝7，因为一名对象由于个人原因在第4次和末剂之前中断
[0320]2中位数(最小值、最大值)
[0321]3达到最低点的时间是相对于首剂施用的而言的
[0322]4安慰剂组是由来自两个治疗组中接受安慰剂的对象合并的
[0323]
次要pd：在重复施用340mg或680mg剂量的rvt-1401后，观察到白蛋白浓度的剂量依赖性降低。没有不良事件(ae)与观察到的白蛋白减少有关。在所有对象中，每周给药340mg后，平均血清白蛋白水平保持在正常限值内(＞3.5g/dl)。在680mg时，所有对象的白蛋白均低于正常限值，但在给药期间仍高于3.0g/dl，但一名对象除外(该对象的白蛋白在第22天和第25天达到2.6g/dl的最低值，但没有产生任何临床体征、症状或不良事件)。在所有对象中，在680mg队列的末剂后4周内，白蛋白水平均在正常限值内。在这两个队列中，在末剂后5周，对象的白蛋白水平平均在基线值的90％以内，表明rvt-1401对白蛋白的影响是可逆的。
[0324]
图13a示出了在iv施用单剂量rvt-1401(340mg、765mg、1530mg)或安慰剂后健康对象中血清igg相对于基线降低的百分比(％)。图13b示出了在sc施用单剂量rvt-1401(340mg、765mg)或安慰剂后健康对象中血清igg相对于基线降低的百分比(％)。图14a示出
了在sc施用多剂量rvt-1401(340mg、680mg)或安慰剂后健康对象中血清igg(总)相对于基线降低的百分比(％)。图14b示出了在sc施用多剂量rvt-1401(340mg、680mg)或安慰剂后健康对象血清igg1相对于基线降低的百分比(％)。图14c示出了在sc施用多剂量rvt-1401(340mg、680mg)或安慰剂后健康对象血清igg2相对于基线降低的百分比(％)。图14d示出了在sc施用多剂量rvt-1401(340mg、680mg)或安慰剂后健康对象中血清igg3从基线降低的百分比(％)。图14e示出了在sc施用多剂量rvt-1401(340mg、680mg)或安慰剂后健康对象中血清igg4相对于基线降低的百分比(％)。表14示出了igg亚类(igg1、igg2、igg3和igg4)相对于基线降低的血清igg最大百分比(％)。
[0325]
表14.igg亚类的血清igg降低最大百分比(％)
[0326][0327]
*平均值(sd)；**平均值(最小值、最大值)。
[0328]
安全性：rvt-1401总体耐受性良好，没有因不良事件(ae)和所有轻度或中度的非严重治疗出现的不良事件(teae)而导致死亡或撤药。注射部位反应(红斑和/或肿胀)是sc施用(单剂量和多剂量)后rvt-1401和安慰剂最常见的teae。注射部位反应的强度都很轻微，一般在给药后1小时至4小时内消退。注射部位反应的频率与剂量无关，并且rvt-1401和安慰剂相似。在用单剂量或多剂量≥340mg/kg sc治疗的3名或更多名对象中观察到的其他teae包括头痛和失眠。iv施用后3名或更多名对象中报告的唯一teae是口咽痛和头痛。iv剂量队列中的所有非严重teae的严重程度均为轻度至中度。总体而言，在sc或iv施用rvt-1401后，生命体征、实验室试验(包括肝功能试验)或ecg相对于基线没有临床相关变化。在sc或iv队列中，没有报告igg或白蛋白减少的临床体征或症状。重复sc注射680mg剂量的rvt-1401后未观察到头痛。报告了两个严重的ae，均与rvt-1401无关。
[0329]
免疫原性：在施用单次(iv和sc配制品)和多次(sc配制品)rvt-1401后，评估所有给药的队列中，针对rvt-1401的抗药物抗体(ada)的发展。初步数据显示，在单次递增剂量队列中，rvt-1401治疗对象和安慰剂治疗对象的治疗出现ada的发生率为10.3％和6.7％，这与ada测定的高灵敏度一致。滴度被认为是低的(≤1:16)并且不影响pk或pd。所有ada在监测期结束之前消退。在340mg或680mg多次递增剂量(mad)队列中均没有治疗出现ada。
[0330]
实施例10：rvt-1401治疗温性自身免疫性溶血性贫血(waiha)患者的非随机、开放标签研究
[0331]
为了评估rvt-1401(每周680mg和每周340mg)对温性自身免疫性溶血性贫血(waiha)患者的安全性、耐受性、pk、pd和疗效，在一项非随机、连续、开放标签研究中评估rvt-1401的两种给药方案。两种给药方案都涉及每周一次的皮下(sc)注射：给药方案a(每周680mg，进行12周)和给药方案b(每周340mg，进行12周)。给药方案a(每周680mg)作为每周
两次sc注射施用，给药方案b(每周340mg)作为每周单次sc注射施用。研究设计示于图15中并概述如下。
[0332]
研究设计：
[0333]
筛选-[0334]
对患者进行诊断并筛选主要纳入/排除标准(表15)。nct03226678、nct04119050和nct03764618(clinicaltrials.gov)中公开了纳入/排除标准的其他示例，这些通过引用并入本文用于公开此类标准。
[0335]
表15.主要纳入/排除标准
[0336]
[0337][0338]
治疗-[0339]
两队患者以非随机顺序方法纳入。患者首先被纳入队列1(每周680mg)，然后是队列2(每周340mg)。在基线随访(第1周，第1天)的初始剂量之后，在整个治疗期间每周进行一次研究随访。患者接受12周rvt-14011(每周680mg或每周340mg)。预计给药方案分别使总igg持续降低：方案a：约75％-80％；方案b：65％-70％。还预期在第3剂至第5剂(取决于所研究的剂量)实现最低igg降低，并在剩余剂量后维持，然后在停止治疗后接下来的6周至8周内升高恢复到基线。
[0340]
在第12周的最终剂量之后，每周进行随访直到第14周，然后在第16周和第20周进行随访。在整个研究过程中收集安全性、pk、pd和临床评估。每位患者参与研究长达大约24
周：长达4周的筛选期、12周的治疗期和8周的随访期。在治疗期间和治疗后，评估主要、次要和探索性终点直至第20周(表16)。
[0341]
表16.主要、次要和探索性终点
[0342][0343]
研究评估和程序：
[0344]
体检：完整的体检至少包括对心血管、呼吸、胃肠和神经系统和皮肤的评估。仅在筛选时测量和记录身高，仅在筛选和基线时测量和记录体重。简单体检至少包括对皮肤、呼吸和心血管系统以及腹部(肝脏和脾脏)的评估。
[0345]
生命体征：以仰卧位测量生命体征，包括体温、收缩压和舒张压以及脉搏血氧饱和度。
[0346]
心电图：以仰卧位测量心电图(ecg)。在研究期间使用自动计算心率并测量pr、qrs、qt和qtcf间隔的ecg机获得十二导联ecg。
[0347]
临床安全性实验室评估：下表17列出了将由中心实验室测试的血液学、临床化学、尿液分析和其他参数。
[0348]
表17.临床安全性实验室评估血液学
[0349][0350]
临床化学
[0351][0352][0353]
常规尿检
[0354]
比重、ph用试纸检验葡萄糖、蛋白质、血液和酮显微镜检查(如果血液或蛋白质异常)基线上微量白蛋白/肌酸酐比值，第13周、第20周(如果尿蛋白异常)
[0355]
其他试验
[0356][0357]
药代动力学(pk)：在特定时间点收集血液样本用于进行rvt-1401的pk分析。记录每次采集血液样本的实际日期和时间。
[0358]
抗药物抗体(ada)和中和抗体(nab)：在指定时间点收集血液样本用于进行ada和nab分析。记录每次采集血液样本的实际日期和时间。要求在第20周抗rvt-1401抗体治疗出现阳性结果(相对于基线发生变化)的患者在给药后大约6、9和12个月返回以获取更多样本，或者直到他们的结果不再是阳性。然而，出于安全随访和数据库锁定的目的，在第20周访问时结束参与。
[0359]
药效学(pd)：在特定时间点收集血液样本用于进行rvt-1401的pd分析。记录每次采集血液样本的实际日期和时间。药效学标记包括总igg并按类别区分(即igg亚类(igg1、igg2、igg3和igg4))。
[0360]
探索性生物标记：在特定时间点收集血液样本用于进行探索性生物标记分析。记录每次采集血液样本的实际日期和时间。可以改变样本的时间和/或可以在额外的时间点获得样本以确保生物标记评估全面。探索性生物标记包括b细胞表型、dat、抗d抗体、抗band 3抗体和/或抗血型糖蛋白抗体。
[0361]
中期评估：
[0362]
表18示出了用每周680mg剂量的rvt-1401(给药方案a)治疗的两名waiha患者的中期临床安全性实验室评估(血红蛋白和免疫球蛋白g(igg))。
[0363]
表18.中期临床安全性实验室评估-血红蛋白和igg
[0364][0365]
两名患者都有晚期waiha病史，并且之前的waiha治疗失败至少4次。在开始使用rvt-1401进行开放标签治疗时，两名患者均符合所有方案资格标准(表15)。
[0366]
在中期评估时，患者1已完成12周的治疗，患者2已完成7周的治疗。两名患者均未报告注射部位反应。
[0367]
基于患者1中血红蛋白的强劲和快速发作(即在第2周观察到增加超过2g/dl，并维持4周(第2周至第5周))得到改善，用于该患者的强的松剂量和第二种背景waiha治疗的剂量在第5周均减少。不受理论约束，背景药物剂量的这些变化可能与从第7周开始并且在随后的几周中在患者1中观察到血红蛋白水平降低有关(表18)。
[0368]
尽管已经参考特定特征详细描述了本发明，但是对于本领域技术人员而言显而易见的是，该描述仅出于说明的目的，并且不限制本发明的范围。因此，本发明的实质范围将由所附权利要求及其等同物限定。