与分子缀合相关的组合物和方法与流程

与分子缀合相关的组合物和方法
1.相关申请
2.本技术要求2019年12月2日提交的美国临时专利申请号62/942,482的优先权权益。这一申请的全部内容以引用的方式并入本文。


背景技术：

3.抗体-药物缀合物(adc)正在成为一类强大的抗肿瘤剂，对一系列癌症具有疗效。adc通常包括三个不同的特征结构：细胞结合剂或靶向部分(抗体)；接头；和细胞毒性剂(药物)(图1)。因此，抗体生物缀合物在开发用于生物学和医学应用的新型生物活性缀合物中具有至关重要的作用。化学选择性和温和的过程是在不干扰抗体结构、功能和活性的情况下精确安装修饰的关键。氨基酸侧链的反应性、可达性和丰度是实现某一残基对所有其他蛋白氨基酸进行选择性修饰所需的关键方面。其中，半胱氨酸(cys)由于其低丰度及其巯基侧链的高亲核性，仍然是首选氨基酸。
4.尽管抗体生物缀合领域取得了发展，但马来酰亚胺仍然是最常用的试剂，这主要是由于马来酰亚胺试剂的快动力学和易于合成。然而，由此试剂形成的硫代琥珀酰亚胺缀合物与血浆中存在的硫醇发生交换反应，从而导致马来酰亚胺的释放。就adc而言，这可能会导致毒性，因为硫醇交换反应的产物是一种高效的细胞毒性药物。因此，迫切需要以这样的方式构建蛋白质和抗体缀合物的方法，所述方式允许探针和药物在其序列内的特定位点进行位点选择性和不可逆的安装，从而得到在预期目标位点可靠地释放药物的血浆稳定的adc。
5.单克隆抗体中链间半胱氨酸残基的硫醇可用作药物分子的连接位点。在人igg1中，有四个链间二硫键可用作缀合位点。所述四个链间二硫键可以被三(2-羧乙基)膦(tcep)或二硫苏糖醇(dtt)还原，从而产生八个可用于缀合药物分子的硫醇基团。通过这种方法，可以获得不同药物抗体比(dar)的缀合物。
6.经典地，半胱氨酸残基可以通过将硫醇添加到亲电子试剂诸如马来酰亚胺中来修饰。因此可以通过还原抗体的二硫键然后与马来酰亚胺反应来制备缀合物。然而，已发现基于马来酰亚胺的抗体-药物缀合物在血液循环中的稳定性有限。因此，需要一种将半胱氨酸残基缀合到活性部分的替代方法，这将导致adc不易受逆迈克尔反应影响。


技术实现要素：

7.在某些实施方案中，本公开涉及一种式(i)的化合物：
[0008][0009]
或其盐，其中：
[0010]
a是a是
[0011]
m是n、cr
30
或c(-l-q)；
[0012]
每个l独立地选自间隔基部分；
[0013]
每个q独立地选自活性部分或反应性基团；
[0014]
x选自-cl、-br和-i；
[0015]
j是靶向部分；
[0016]r30
和r
31
各自独立地选自吸电子基团、氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基；
[0017]r46
选自烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基；
[0018]r42
和r
43
各自独立地选自-oh、烷氧基、-nr
44r45
、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基和杂环基，其中r
44
和r
45
与它们所连接的氮原子一起可形成5至8元环，任选地与芳基或杂芳基环稠合；
[0019]r32
、r
44
和r
45
各自独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基；
[0020]r47
是o-、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基；并且
[0021]
n为1至4。
[0022]
在某些实施方案中，本公开涉及一种制备缀合物的方法，所述方法包括使式(i)的化合物与包含共价结合到迈克尔供体的靶向部分的试剂反应，从而产生迈克尔加合物。
[0023]
在某些实施方案中，本公开涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含式(i)的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂。
[0024]
在某些实施方案中，本公开涉及一种用于治疗有需要的受试者的方法，所述方法包括施用式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，或施用包含式(i)的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂的组合物。
附图说明
[0025]
图1是抗体-药物缀合物(adc)的示意图。
[0026]
图2示出了证明ama-9c在水性环境中随时间的稳定性的高效液相色谱(hplc)图。
[0027]
图3说明了n-ac-半胱氨酸与化合物ama-1、ama-2、ama-3、ama-4、ama-8、ama-9c、ama-10、mmps-4和pyrmps-1的相对反应速率。
[0028]
图4显示了化合物n-ac-cys-ama-10与化合物14相比的相对稳定性。
[0029]
图5是示出ama-9c与人血清白蛋白(1)和thio-mab(2)的缀合反应的反应方案。
[0030]
图6是示出ama-9c与thio-mab的缀合反应的分析的疏水相互作用色谱-hplc(hic-hplc)图。
[0031]
图7是示出迈克尔受体前体参比a相比于ama前体prymps-1和mmps-4与n-ac-半胱氨酸的相对反应速率的方案。
具体实施方式
[0032]
本公开的化合物
[0033]
在某些方面，本公开涉及活化的迈克尔受体(ama)化合物，其可以与含有迈克尔供体部分的生物分子进行缀合。ama(诸如式(ii)和(iii)的乙烯基芳基酮)可以与迈克尔供体发生迈克尔加成反应，以得到式(iia)和(iiia)的缀合物(方案1)。在某些方面，本公开涉及生物分子与ama的缀合物，诸如化合物(iia)和(iiia)。
[0034]
方案1.
[0035][0036]
在式(ii)、(iii)、(iia)和(iiia)的化合物中，l是间隔基部分；q是活性部分(例如，其可以包含药物部分，如本文别处所述)或反应性基团；m是n、cr
30
或c(-l-q)；j是靶向部分(例如，其可以包含抗体，如本文别处所述)；r
30
和r
31
各自独立地选自吸电子基团、氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基。例如，在某些实施方案中，r
30
和r
31
中的至少一个存在并且是吸电子基团；并且r
32
选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基。
[0037]
在本发明的一些实施方案中，迈克尔供体是蛋白质(诸如抗体或融合蛋白)的cys残基。
[0038]
在一些实施方案中，活性部分q包含l'和q'，其中l'是接头且q'是活性剂。在本发明的一些方面中，l'包含偶联基团，其中偶联基团偶联至l。例如，偶联基团可选自-c(＝o)nr
32-、-c(＝o)o-、-c(＝nr
32
)-、-c＝no-、-nr
32-c(＝o)-nr
32-、-oc(＝o)o-、-s-s-、-nr
32
s(＝o)2o-和-os(＝o)2o-。替代地，偶联基团选自：
[0039][0040]
l'还可包含可裂解基团，其中可裂解基团偶联至q'。例如，偶联至q'的可裂解基团可选自：
[0041][0041]
其中
[0042]r49
是氢或-c(＝o)r
50
；并且
[0043]r50
是低级烷基。
[0044]
可裂解基团的另外的实例公开在国际专利申请公布号wo2019/008441中，所述专利申请公布以引用的方式整体并入本文。
[0045]
在一些实施方案中，l'还包含c
6-c
100
亚烷基，所述亚烷基包含至少一个选自-nh-、-c(＝o)-、-o-、-s-、-s(o)-和-s(＝o)
2-的基团。
[0046]
在某些实施方案中，间隔基部分包含c
6-c
100
亚烷基，所述亚烷基包含至少一个选自-nh-、-c(＝o)-、-o-、-s-、-s(o)-和-s(＝o)
2-的基团。
[0047]
另外或替代地，间隔基部分可包含
[0048][0048]
其中
[0049]
a是连接至含m芳族环的键，且b是连接至l’的键；并且
[0050]
n为2至20。
[0051]
在本发明的一些实施方案中，q'是激素、寡核苷酸、毒素、亲和配体、用于检测的探针或其组合。例如，q'可选自细胞因子、免疫调节化合物、抗癌剂、抗病毒剂、抗细菌剂、抗真菌剂、驱虫剂或其组合。
[0052]
在一些实施方案中，靶向部分包含-s-部分。在一些实施方案中，靶向部分通过-s-部分偶联至式(i)的化合物的其余部分。
[0053]
在某些实施方案中，靶向部分包含抗体，诸如选自以下的抗体：完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、抗体片段、单链fv(scfv)突变体、多特异性抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的抗原决定簇部分的融合蛋白和包含抗原识别位点的其
他修饰的免疫球蛋白分子。例如，靶向部分可包含选自以下的抗体：莫罗单抗-cd3(muromonab-cd3)、阿昔单抗(abciximab)、利妥昔单抗(rituximab)、达珠单抗(daclizumab)、帕利珠单抗(palivizumab)、英夫利昔单抗(infliximab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)(赫赛汀(herceptin))、依那西普(etanercept)、巴昔利单抗(basiliximab)、吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)、阿仑单抗(alemtuzumab)、替伊莫单抗(ibritu momab tiuxetan)、阿达木单抗(adalimumab)、阿法赛特(alefacept)、奥马珠单抗(omalizumab)、依法珠单抗(efalizumab)、托西莫单抗(tositumomob)-i
131
、西妥昔单抗(cetuximab)、贝伐珠单抗(bevacizumab)、那他珠单抗(natalizuma b)、雷珠单抗(ranibizumab)、帕尼单抗(panitumumab)、依库珠单抗(eculizum ab)、利洛纳塞(rilonacept)、赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、罗米司亭(rom iplostim)、amg-531、cnto-148、cnto-1275、abt-874、lea-29y、贝利木单抗(belimumab)、taci-ig、第二代抗-cd20、acz-885、托珠单抗(tocili zumab)、阿替利珠单抗(atlizumab)、美泊利单抗(mepolizumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、humax cd20、曲美木单抗(tremelimumab)(cp-675 206)、替西木单抗(ticilimumab)、mdx-010、idec-114、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozo gamycin)、humax egfr、阿柏西普(aflibercept)、humax-cd4、ala-ala、chaglycd3、trx4、卡妥索单抗(catumaxomab)、ign101、mt-201、普瑞戈夫单抗(pregovomab)、ch-14.18、wx-g250、amg-162、aab-001、莫他珠单抗(motavizumab)、medi-524、依芬古单抗(efumgumab)、奥罗拉布(aurogr ab)、瑞西巴库单抗(raxibacumab)、第三代抗cd20、ly2469298和维妥珠单抗(veltuzumab)。
[0054]
本公开的方法
[0055]
本发明涉及一种使用活化的迈克尔受体(ama)化合物将蛋白质与活性部分缀合的方法。ama(诸如式(ii)和(iii)的乙烯基芳基酮)可以与迈克尔供体发生迈克尔加成反应，以得到式(iia)和(iiia)的缀合物(方案1)。
[0056]
在式(ii)和(iii)的化合物中，l是间隔基部分；q是活性部分或反应性基团；m是n、cr
30
或c(-l-q)；j是靶向部分；r
30
和r
31
各自独立地选自吸电子基团、氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基；并且r
32
选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基。
[0057]
在本发明的一些实施方案中，迈克尔供体是蛋白质(诸如抗体或融合蛋白)的cys残基。
[0058]
在某些实施方案中，共价结合到靶向部分的迈克尔供体选自：-sh、-nh2、-oh、其中r是c
1-3
烷基或c
1-3
烷氧基。
[0059]
方案1.
[0060][0061]
令人惊讶的是，发明人发现在化合物(ii)或(iii)的芳基环的间位引入氮原子或吸电子取代基(原子表示为“m”)和/或在迈克尔受体本身上引入吸电子取代基(基团表示为“r
31”)大大增加了迈克尔加成反应的速率，从而导致缀合化合物(iia)和(iiia)的快速且干净的形成。ama化合物6与n-ac-cys干净地反应的实例如方案2所示。
[0062]
方案2.
[0063][0064]
方案3中的反应证明了和与n-ac-lys和n-ac-tyr的反应相比，ama与n-ac-cys反应的化学选择性。
[0065]
方案3.
[0066][0067]
当暴露于含有等摩尔量的n-ac-cys和n-ac-lys的混合物(方案3，上方反应)或和n-ac-cys、n-ac-tyr和n-ac-lys的混合物(方案3，下方反应)，ama化合物6以超过95％的化学选择性与n-ac-cys产生缀合物。
[0068]
图2证明了式(ii)的化合物在水性环境中的稳定性。适用于快速且干净地形成蛋白质缀合物的另外的迈克尔受体化合物显示在方案4中。
[0069]
方案4.
[0070][0071]
各种式(ii)的化合物以及其他具有n-ac-cys的迈克尔受体的迈克尔加成反应的相对速率示于图3中。如图所示，将迈克尔受体部分置于相对于芳基环上的接头取代基的间位提高了反应速率(参见化合物3与化合物4)。在相对于芳基环上的迈克尔受体部分和接头部分的间位都存在吸电子取代基或氮原子的情况下，反应速率进一步提高(化合物5和6与化合物4)。
[0072]
为了解决关于逆迈克尔转化的adc不稳定性问题，探索了在水性环境中稳定式(iiia)的化合物的各种方法。用氢化物源(诸如nabh4)处理式(iiia)的化合物导致形成在水性介质中稳定的式(iva)的含醇化合物(方案5)。此外，发明人发现用含胺化合物或羟胺处理式(iiia)的化合物导致形成式(ivb)的亚胺或肟(方案5)，其在水性介质中稳定(方案6)。
[0073]
方案5.
[0074][0075]r42
选自-oh、烷氧基、-nr
44r45
、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基和杂环基，其中r
44
和r
45
与它们所连接的氮原子一起可形成5至8元环，任选地与芳基或杂芳基环稠合。
[0076]
方案6.
[0077][0078]
式(iva)的化合物在人和小鼠血浆中以及在ph为7.4的pbs缓冲液中表现出超过一周的高稳定性，而相应的式(iiia)的化合物较不稳定(图4)。
[0079]
在某些实施方案中，本公开还涉及一种将蛋白质与活性部分缀合的方法，所述方法使用活化迈克尔受体(ama)化合物的前体，诸如方案7中式(va)、(vb)和(vc)的化合物，其中
[0080]
x选自-cl、-br和-i；
[0081]r46
选自烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基；
[0082]r47
是o-、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基；并且
[0083]
n为1至4。
[0084]
方案7.
[0085][0086]
式(va)、(vb)和(vc)的化合物的实例显示在方案8中。式(va)、(vb)和(vc)的化合物可以干净地转化为适合与含有迈克尔供体的分子(诸如蛋白质)进行缀合的迈克尔受体试剂。
[0087]
方案8.
[0088][0089]
进一步的研究证明，涉及ama的缀合方法可以扩展到抗体，诸如人血清白蛋白和thio-mab(曲妥珠单抗)(图5和图6)。用nabh4还原所得缀合物提供了血浆稳定的adc。
[0090]
在某些实施方案中，本公开涉及一种式(i)的化合物：
[0091][0092]
或其盐，其中：
[0093]
a是a是a是
[0094]
m是n、cr
30
或c(-l-q)；
[0095]
每个l独立地选自间隔基部分；
[0096]
每个q独立地选自活性部分或反应性基团；
[0097]
x选自-cl、-br和-i；
[0098]
j是靶向部分；
[0099]r30
和r
31
各自独立地选自吸电子基团、氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基；
[0100]r46
选自烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基；
[0101]r42
和r
43
各自独立地选自-oh、烷氧基、-nr
44r45
、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基和杂环基，其中r
44
和r
45
与它们所连接的氮原子一起可形成5至8元环，任选地与芳基或杂芳基环稠合；
[0102]r32
、r
44
和r
45
各自独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基；
[0103]r47
是o-、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基；并且
[0104]
n为1至4。
[0105]
在一些实施方案中，m是n。
[0106]
在某些实施方案中，m是cr
30
，并且r
30
是吸电子基团。
[0107]
在一些实施方案中，a选自
[0108][0109]
其中r
31
是吸电子基团，优选地其中l通过选自酰胺或酯的吸电子基团与c偶联。
[0110]
在一些实施方案中，m是c(-l-q)，并且其中l通过吸电子基团与c偶联。
[0111]
在一些实施方案中，r
30
是-co2nr
33r34
或-co2r
35
，并且r
33
、r
34
和r
35
各自独立地选自
氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基。
[0112]
在一些实施方案中，每个吸电子基团独立地选自-no2、-cn、-卤代烷基、-co2nr
33r34
、-co2r
35
、-c(＝o)r
36
、-s(＝o)r
37
、-s(＝o)2or
38
和-nr
39r40r41
；并且r
36
、r
37
、r
38
、r
39
、r
40
和r
41
各自独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、碳环基、杂环基和卤代烷基。
[0113]
在某些实施方案中，每个吸电子基团独立地选自-cn、-conr
33r34
和-co2r
35
。
[0114]
在一些实施方案中，每个吸电子基团独立地选自-cn、-conh2和-co2me。
[0115]
在某些实施方案中，q是活性部分。
[0116]
在一些实施方案中，q包含l’和q’，其中l’是接头且q’是活性剂。
[0117]
在某些实施方案中，l’包含偶联基团，其中偶联基团偶联至l。
[0118]
在一些实施方案中，偶联基团选自-c(＝o)nr
32-、-c(＝o)o-、-c(＝nr
32
)-、-c＝no-、-nr
32-c(＝o)-nr
32-、-oc(＝o)o-、-s-s-、-nr
32
s(＝o)2o-和-os(＝o)2o-。
[0119]
在某些实施方案中，偶联基团选自
[0120][0121]
在一些实施方案中，l’还包含可裂解基团，其中可裂解基团偶联至q’。
[0122]
在某些实施方案中，偶联至q’的可裂解基团选自
[0123][0123]
其中
[0124]r49
是氢或-c(＝o)r
50
；并且
[0125]r50
是低级烷基。
[0126]
在一些实施方案中，l’还包含c
6-c
100
亚烷基，所述亚烷基包含至少一个选自-nh-、-c(＝o)-、-o-、-s-、-s(o)-和-s(＝o)
2-的基团。
[0127]
在某些实施方案中，l包含c
6-c
100
亚烷基，所述亚烷基包含至少一个选自-nh-、-c(＝o)-、-o-、-s-、-s(o)-和-s(＝o)
2-的基团。例如，l包含
[0128][0128]
其中
[0129]
a是连接至含m芳族环的键，且b是连接至l’的键；并且
[0130]
n为2至20。
[0131]
在一些实施方案中，q’是激素、寡核苷酸、毒素、亲和配体、用于检测的探针或其组合。
[0132]
在某些实施方案中，q’选自细胞因子、免疫调节化合物、抗癌剂、抗病毒剂、抗细菌剂、抗真菌剂、驱虫剂或其组合。
[0133]
在某些实施方案中，q是反应性基团。
[0134]
i在一些实施方案中，反应性基团选自-n3、-c≡ch、-s(o)2hal、-nh2、-co2hal、-oh、-c(o)h、-sh、-n＝c＝o和-n＝s＝c，其中hal是-cl、-br或-i。
[0135]
在某些实施方案中，靶向部分包含-s-部分。
[0136]
在一些实施方案中，靶向部分通过-s-部分偶联至式(i)的化合物的其余部分。
[0137]
在一些实施方案中，a是
[0138][0139]
在一些实施方案中，a是
[0140]
在某些实施方案中，r
31
是-cn、-co2nr
33r34
或-co2r
35
。
[0141]
在某些实施方案中，a是
[0142]
在一些实施方案中，r
32
是氢或c
1-3
烷基。
[0143]
在一些实施方案中，a是
[0144]
在某些实施方案中，r
46
是任选取代的c
1-3
烷基、任选取代的c
6-c
12
芳基或任选取代的杂芳基。
[0145]
在一些实施方案中，a是
[0146]
在某些实施方案中，r
47
是o-或c
1-3
烷基。
[0147]
在某些实施方案中，a是
[0148]
在一些实施方案中，a是在一些实施方案中，a是
[0149]
例如，a可以是
[0150]
替代地，a可以是
[0151]
在其他实施方案中，a可以是在其他实施方案中，a可以是
[0152]
在一些实施方案中，a是
[0153]
在某些实施方案中，r
42
是-oh或-nr
44r45
。
[0154]
在一些实施方案中，靶向部分包含纳米颗粒、免疫球蛋白、核酸、蛋白质、寡肽、多肽、抗体、抗原多肽的片段或重复体(repebody)。例如，靶向部分可包含抗体，诸如选自以下的抗体：完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、抗体片段、单链fv(scfv)突变体、多特异性抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的抗原决定簇部分的融合蛋白和包含抗原识别位点的修饰的免疫球蛋白分子。例如，靶向部分可包含选自以下的抗体：莫罗单抗-cd3、阿昔单抗、利妥昔单抗、达珠单抗、帕利珠单抗、英夫利昔单抗、曲妥珠单抗(赫赛汀)、依那西普、巴昔利单抗、吉妥珠单抗奥佐米星、阿仑单抗、替伊莫单抗、阿达木单抗、
阿法赛特、奥马珠单抗、依法珠单抗、托西莫单抗-i
131
、西妥昔单抗、贝伐珠单抗、那他珠单抗、雷珠单抗、帕尼单抗、依库珠单抗、利洛纳塞、赛妥珠单抗、罗米司亭、amg-531、cnto-148、cnto-1275、abt-874、lea-29y、贝利木单抗、taci-ig、第二代抗-cd20、acz-885、托珠单抗、阿替利珠单抗、美泊利单抗、帕妥珠单抗、humax cd20、曲美木单抗(cp-675 206)、替西木单抗、mdx-010、idec-114、奥英妥珠单抗、humax egfr、阿柏西普、humax-cd4、ala-ala、chaglycd3、trx4、卡妥索单抗、ign101、mt-201、普瑞戈夫单抗、ch-14.18、wx-g250、amg-162、aab-001、莫他珠单抗、medi-524、依芬古单抗、奥罗拉布、瑞西巴库单抗、第三代抗cd20、ly2469298和维妥珠单抗。
[0155]
在一些实施方案中，式(i)的化合物选自
[0156][0157]
在一些实施方案中，本公开涉及一种制备缀合物的方法，所述方法包括使式(i)的化合物与包含共价结合到迈克尔供体的靶向部分的试剂反应，从而产生迈克尔加合物。
[0158]
在一些实施方案中，本公开涉及一种还包括还原迈克尔加合物的方法。
[0159]
在一些实施方案中，共价结合到靶向部分的迈克尔供体选自：
[0160]-sh、-nh2、-oh、其中
[0161]
r是c
1-3
烷基或c
1-3
烷氧基。
[0162]
在一些实施方案中，本公开涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含式(i)的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂。
[0163]
在一些实施方案中，本公开涉及一种用于治疗疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，或包含式(i)的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂的组合物。
[0164]
在一些实施方案中，疾病或病症选自癌症、感染性疾病或自身免疫疾病。
[0165]
在某些实施方案中，疾病或病症是癌症。
[0166]
定义
[0167]
术语“酰基”是本领域公认的，并且是指由通式烃基c(o)-，优选烷基c(o)-表示的基团。
[0168]
术语“酰基氨基”是本领域公认的，并且是指被酰基基团取代的氨基基团并且可以例如由式烃基c(o)nh-表示。
[0169]
术语“酰氧基”是本领域公认的，并且是指由通式烃基c(o)o-，优选烷基c(o)o-表示的基团。
[0170]
术语“烷氧基”是指连接有氧的烷基基团，优选低级烷基基团。代表性烷氧基基团包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。
[0171]
术语“烷氧基烷基”是指被烷氧基基团取代的烷基基团，并且可以由通式烷基-o-烷基表示。
[0172]
如本文所用，术语“烯基”是指含有至少一个双键的脂族基团，并且旨在包括“未取代的烯基”和“取代的烯基”两者，后者是指在烯基基团的一个或多个碳上具有替换氢的取代基的烯基部分。此类取代基可出现在包含或不包含在一个或多个双键中的一个或多个碳上。此外，除非稳定性不允许，否则此类取代基包括如下文讨论的针对烷基基团所考虑的所有取代基。例如，考虑了烯基基团被一个或多个烷基、碳环基、芳基、杂环基或杂芳基基团取代。
[0173]“烷基”基团或“烷烃”是完全饱和的直链或支链非芳族烃。通常，除非另有定义，否则直链或支链烷基基团具有1至约20个碳原子，优选1至约10个。直链和支链烷基基团的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、戊基和辛基。c
1-c6直链或支链烷基基团也称为“低级烷基”基团。
[0174]
此外，在整个说明书，实施例和权利要求书中使用的术语“烷基”(或“低级烷基”)旨在包括“未取代的烷基”和“取代的烷基”，后者是指在烃主链的一个或多个碳上具有替换一个或多个氢的取代基的烷基部分。如果没有另外说明，此类取代基可包括例如卤素、羟基、羰基(诸如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(诸如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸基、膦酸基、次膦酸基、氨基、酰胺基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸基、磺酸基、氨磺酰基、亚磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基、胍基或芳族或杂芳族部分。本领域技术人员将理解，如果合适，在烃链上取代的部分本身可以被取代。例如，取代的烷基的取代基可包括氨基、叠氮基、亚氨基、酰胺基、磷酰基(包括膦酸基和次膦酸基)、磺酰基(包括硫酸基、亚磺酰胺基、氨磺酰基和磺酸基)和甲硅烷基基团以及醚、烷硫基、羰基(包括酮、醛、羧酸基和酯)、-cf3、-cn等的取代的和未取代的形式。示例性取代的烷基在下文描述。环烷基可进一步被烷基、烯基、烷氧基、烷硫基、氨基烷基、羰基取代的烷基、-cf3、-cn等取代。
[0175]
当与诸如酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基的化学部分结合使用时，术语“c
x-c
y”意指包括在链中含有x至y个碳的基团。例如，术语“c
x-cy烷基”是指取代的或未取代的饱和烃基，包括在链中含有x至y个碳的直链烷基和支链烷基基团，包括卤代烷基基团诸如三氟甲基和2,2,2-三氟乙基等。c0烷基表示基团位于末端位置的氢，如果基团位于内部则表示键。术语“c
2-cy烯基”和“c
2-cy炔基”是指长度和可能的取代与上述烷基相似但分别含有至少一个双键或三键的取代的或未取代的不饱和脂族基团。
[0176]
如本文所用，术语“烷基氨基”是指被至少一个烷基基团取代的氨基基团。
[0177]
如本文所用，术语“烷硫基”是指被烷基基团取代的硫醇基团，并且可以由通式烷基s-表示。
[0178]
如本文所用，术语“炔基”是指含有至少一个三键的脂族基团，并且旨在包括“未取代的炔基”和“取代的炔基”两者，后者是指在炔基基团的一个或多个碳上具有替换氢的取代基的炔基部分。此类取代基可出现在包含或不包含在一个或多个三键中的一个或多个碳上。此外，除非是在稳定性过高的情况下，此类取代基包括如上文所讨论的针对烷基基团所考虑的所有取代基。例如，考虑了炔基基团被一个或多个烷基、碳环基、芳基、杂环基或杂芳基基团取代。
[0179]
如本文所用，术语“酰胺”是指基团
[0180][0181]
其中每个r
10
独立地表示氢或烃基基团，或者两个r
10
与它们所连接的n原子合在一起，形成在环结构中具有4至8个原子的杂环。
[0182]
术语“胺”和“氨基”是本领域公认的，并且是指未取代的和取代的胺及其盐，例如可以由下式表示的部分
[0183][0184]
其中每个r
10
独立地表示氢或烃基基团，或者两个r
10
与它们所连接的n原子合在一起，形成在环结构中具有4至8个原子的杂环。
[0185]
如本文所用，术语“氨基烷基”是指被氨基基团取代的烷基基团。
[0186]
如本文所用，术语“芳烷基”是指被芳基基团取代的烷基基团。
[0187]
如本文所用，术语“芳基”包括取代或未取代的单环芳族基团，其中环的每个原子为碳。优选地，所述环是5至7元环，更优选地是6元环。术语“芳基”还包括具有两个或更多个环的多环系统，其中两个或更多个碳是两个相邻环共有的，其中至少一个环是芳族的，例如，其他环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。因此，术语“芳基”可以包括(c
5-c
10
)和(c
6-c
10
)芳基基团。芳基基团包括苯、萘、菲、苯酚、苯胺等。
[0188]
术语“氨基甲酸酯”是本领域公认的，并且是指以下基团
[0189][0190]
其中r9和r
10
独立地表示氢或烃基基团，诸如烷基基团，或r9和r
10
与居间原子合在一起形成在环结构中具有4至8个原子的杂环。
[0191]
如本文所用，术语“碳环”和“碳环的”是指其中环的每个原子都为碳的饱和或不饱和环。术语碳环包括芳族碳环和非芳族碳环。非芳族碳环包括其中所有碳原子都饱和的环烷烃环和含有至少一个双键的环烯烃环。“碳环”包括5至7元单环和8至12元双环。双环碳环的每个环可选自饱和、不饱和和芳族环。碳环包括其中两个环之间共享一个、两个或三个或更多个原子的双环分子。术语“稠合的碳环”是指其中每个环与另一个环共享两个相邻原子的双环碳环。稠合碳环的每个环可选自饱和、不饱和和芳族环。在示例性实施方案中，芳族
环(例如苯基)可与饱和或不饱和环(例如环己烷、环戊烷或环己烯)稠合。在化合价允许时，饱和双环、不饱和双环和芳族双环的任何组合均包括在碳环的定义中。示例性“碳环”包括环戊烷、环己烷、双环[2.2.1]庚烷、1,5-环辛二烯、1,2,3,4-四氢化萘、双环[4.2.0]辛-3-烯、萘和金刚烷。示例性稠合碳环包括十氢化萘、萘、1,2,3,4-四氢化萘、双环[4.2.0]辛烷、4,5,6,7-四氢-1h-茚和双环[4.1.0]庚-3-烯。“碳环”可在能够携带氢原子的任何一个或多个位置处被取代。
[0192]“环烷基”基团是完全饱和的环状烃。“环烷基”包括单环和双环。除非另外定义，否则单环环烷基基团通常具有3至约10个碳原子，更通常3至8个碳原子。双环环烷基的第二环可选自饱和、不饱和和芳族环。环烷基包括其中两个环之间共享一个、两个或三个或更多个原子的双环分子。术语“稠合的环烷基”是指其中每个环与另一个环共享两个相邻原子的双环环烷基。稠合双环环烷基的第二环可选自饱和、不饱和和芳族环。“环烯基”基团是含有一个或多个双键的环状烃。
[0193]
如本文所用，术语“(环烷基)烷基”是指被环烷基基团取代的烷基基团。
[0194]
术语“碳酸酯”是本领域公认的，并且是指基团-oco
2-r
10
，其中r
10
表示烃基基团。
[0195]
如本文所用，术语“羧基”是指由式-co2h表示的基团。
[0196]
如本文所用，术语“酯”是指基团-c(o)or
10
，其中r
10
表示烃基基团。
[0197]
如本文所用，术语“醚”是指通过氧连接至另一个烃基基团的烃基基团。因此，烃基基团的醚取代基可以是烃基-o-。醚可以是对称的或不对称的。醚的实例包括但不限于杂环-o-杂环和芳基-o-杂环。醚包括“烷氧基烷基”基团，其可以由通式烷基-o-烷基表示。
[0198]
如本文所用，术语“卤基”和“卤素”意指卤素，并且包括氯、氟、溴和碘。
[0199]
如本文所用，术语“杂芳烷基”是指被杂芳基基团取代的烷基基团。
[0200]
如本文所用，术语“杂烷基”是指具有碳原子和至少一个杂原子的饱和或不饱和链，其中任何两个杂原子都不相邻。
[0201]
术语“杂芳基”包括取代或未取代的芳族单环结构，优选5元至7元环，更优选5元至6元环，其环结构包含至少一个杂原子，优选一至四个杂原子，更优选一个或两个杂原子。术语“杂芳基”还包括具有两个或更多个环的多环系统，其中两个或更多个碳是两个相邻环共有的，其中至少一个环是杂芳族的，例如，其他环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。因此，术语“杂芳基”可以包括(c
2-c
10
)和(c
2-c
10
)杂芳基基团。杂芳基基团包括例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。
[0202]
如本文所用，术语“杂原子”意指除碳或氢以外的任何元素的原子。优选的杂原子是氮、氧和硫。
[0203]
术语“杂环烷基”、“杂环”和“杂环的”是指取代或未取代的非芳族环结构，优选3元至10元环，更优选3元至7元环，其环结构包含至少一个杂原子，优选一至四个杂原子，更优选一个或两个杂原子。术语“杂环烷基”和“杂环的”还包括具有两个或更多个环的多环系统，其中两个或更多个碳是两个相邻环共有的，其中至少一个环是杂环的，例如，其他环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。杂环烷基基团包括例如哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、内酯、内酰胺等。
[0204]
如本文所用，术语“(杂环烷基)烷基”是指被杂环烷基基团取代的烷基基团。
[0205]
如本文所用，术语“烃基”是指通过不具有＝o或＝s取代基的碳原子键合的基团，
并且通常具有至少一个碳-氢键和主要为碳的主链，但是可以任选地包含杂原子。因此，出于本技术的目的，如甲基、乙氧基乙基、2-吡啶基和三氟甲基的基团被认为是烃基，但是诸如乙酰基(其在连接碳上具有＝o取代基)和乙氧基(其通过氧而不是碳连接)的取代基不被认为是烃基。烃基基团包括但不限于芳基、杂芳基、碳环、杂环基、烷基、烯基、炔基及其组合。
[0206]
如本文所用，术语“羟烷基”是指被羟基基团取代的烷基基团。
[0207]
当与化学部分诸如酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基结合使用时，术语“低级”意指包括其中取代基中有十个或更少，优选六个或更少非氢原子的基团。例如，“低级烷基”是指含有十个或更少，优选六个或更少的碳原子的烷基。在某些实施方案中，本文所定义的酰基、酰氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基取代基分别是低级酰基、低级酰氧基、低级烷基、低级烯基、低级炔基或低级烷氧基，无论它们是单独出现还是与其他取代基组合出现，诸如在表述羟烷基和芳烷基中(在这种情况下，例如，当计算烷基取代基中的碳原子时，不计算芳基基团内的原子)。
[0208]
术语“多环基”、“多环”和“多环的”是指两个或更多个环(例如，环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基)，其中两个或更多个原子是两个相邻环共用的，例如，环是“稠合环”。多环的每个环可以是取代的或未取代的。在某些实施方案中，多环的每个环在环中含有3至10个原子，优选5至7个原子。
[0209]
术语“甲硅烷基”是指连接有三个烃基部分的硅部分。
[0210]
术语“取代的”是指在主链的一个或多个碳上具有替换氢的取代基的部分。应理解，“取代”或“被
……
取代”包括隐含的前提条件，即这种取代是根据取代原子和取代基的允许化合价的，并且所述取代产生稳定的化合物，例如，其不会自发地进行诸如通过重排、环化、消除等的转化。如本文所用，术语“取代的”考虑包括有机化合物的所有可允许的取代基。在广义方面，可允许的取代基包括有机化合物的非环状的和环状的、支链的和非支链的、碳环的和杂环的、芳族的和非芳族的取代基。可允许的取代基可以是一个或多个取代基并且对于适当的有机化合物而言是相同或不同的。出于本发明的目的，杂原子诸如氮可以具有氢取代基和/或本文所述的有机化合物的满足杂原子的化合价的任何可允许的取代基。取代基可以包括本文所述的任何取代基，例如卤素、羟基、羰基(诸如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(诸如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸基、膦酸基、次膦酸基、氨基、酰胺基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸基、磺酸基、氨磺酰基、亚磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族或杂芳族部分。本领域技术人员将理解，如果合适，取代基本身可以被取代。除非特别声明为“未取代的”，否则本文中提及的化学部分应理解为包括取代的变体。例如，提及“芳基”基团或部分隐含地包括取代和未取代的变体。
[0211]
术语“硫酸基”是本领域公认的，并且是指基团-oso3h或其药学上可接受的盐。
[0212]
术语“磺酰胺”是本领域公认的，并且是指由以下通式表示的基团
[0213][0214]
其中r9和r
10
独立地表示氢或烃基，诸如烷基，或者r9和r
10
与居间原子合在一起形
成在环结构中具有4至8个原子的杂环。
[0215]
术语“亚砜”是本领域公认的，并且是指基团-s(o)-r
10
，其中r
10
表示烃基。
[0216]
术语“磺酸基”是本领域公认的，并且是指基团so3h或其药学上可接受的盐。
[0217]
术语“砜”是本领域公认的，并且是指基团-s(o)
2-r
10
，其中r
10
表示烃基。
[0218]
如本文所用，术语“硫代烷基”是指被硫醇基团取代的烷基基团。
[0219]
如本文所用，术语“硫酯”是指基团-c(o)sr
10
或-sc(o)r
10
，其中r
10
表示烃基。
[0220]
如本文所用，术语“硫醚”等同于醚，其中氧被硫替换。
[0221]
术语“脲”是本领域公认的并且可由以下通式表示
[0222][0223]
其中r9和r
10
独立地表示氢或烃基，诸如烷基，或者每次出现的r9与r
10
和居间原子合在一起形成在环结构中具有4至8个原子的杂环。
[0224]“保护基团”是指当连接至分子中的反应性官能团时掩蔽、降低或防止所述官能团的反应性的原子团。通常，保护基团可以在合成过程中根据需要被选择性除去。保护基团的实例可在greene和wuts，protective groups in or ganic chemistry，第3版，1999，john wiley&sons，ny以及harrison等人，compendium of synthetic organic methods，第1至8卷，1971-1996，john wiley&sons，ny中找到。代表性氮保护基团包括但不限于甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苄基、苄氧羰基(“cbz”)、叔丁氧羰基(“boc”)、三甲基甲硅烷基(“tms”)、2-三甲基甲硅烷基-乙磺酰基(“tes”)、三苯甲基和取代的三苯甲基基团、烯丙氧基羰基、9-芴甲氧基羰基(“fmoc”)、硝基-藜芦氧基羰基(“nvoc”)等。代表性羟基保护基团包括但不限于羟基基团被酰化(酯化)或烷基化的那些，诸如苄基和三苯甲基醚，以及烷基醚、四氢吡喃基醚、三烷基甲硅烷基醚(例如，tms或tips基团)、乙二醇醚诸如乙二醇和丙二醇衍生物以及烯丙基醚。
[0225]
如本文所用，“预防”病症或病状的治疗剂是指一种化合物，其在统计样品中，相对于未治疗对照样品使在治疗样品中的病症或病状的发生率降低，或者相对于未治疗对照样品延迟病症或病状的一种或多种症状的发作或降低其严重性。
[0226]
术语“治疗”包括预防性和/或治疗性治疗。术语“预防性或治疗性”治疗是本领域公认的，并且包括向宿主施用主题组合物中的一种或多种。如果在临床表现不良病状(例如，宿主动物的疾病或其他不良状态)之前施用，那么治疗是预防性的(即，其保护宿主免于发展不良病状)，而如果在表现不良病状之后施用，那么治疗是治疗性的(即，其旨在减弱、改善或稳定现有的不良病状或其副作用)。
[0227]“缀合物”是指共价连接成更大构建体的两个或更多个分子。在一些实施方案中，缀合物包含共价连接到一种或多种其他分子(诸如一种或多种其他生物分子或聚合物接头)的一种或多种生物分子(诸如肽、核酸、蛋白质、酶、糖、多糖、脂质、糖蛋白和脂蛋白)。
[0228]“缀合”、“结合”、“键合”、“偶联”或“连接”同义使用，意指将第一个原子或分子直接或间接结合到另一个原子或分子以形成更大的分子。
[0229]
如本文所用，术语“抗体-药物缀合物(adc)”是指其中药物和抗体彼此化学结合(例如通过接头部分)而不降低抗体和药物的生物活性的分子。
是指未经基因修饰的抗体。如本文所用，术语“重组抗体”是指可具有抗原结合活性或通过基因修饰赋予的所需特征的基因修饰抗体。
[0233]
如本文所用，术语“细胞因子”是指由众多细胞分泌的小细胞信号蛋白分子，并且是广泛用于细胞间通讯的一类信号分子。细胞因子可分为蛋白质、肽或糖蛋白；术语“细胞因子”包括由不同胚胎学来源的细胞在全身产生的庞大而多样的调节因子家族。
[0234]
如本文所用，术语“激素”涉及由身体某一部分中的细胞、腺体或器官释放的化学物质，其对生物体其他部位中的细胞执行信号传导功能。所述术语包括肽激素、脂质和磷脂衍生的激素，包括类固醇激素和单胺。
[0235]“部分”是指分子的片段，或分子的一部分，例如缀合物。
[0236]
本发明公开了具有能够进行迈克尔加成反应的官能团的化合物。例如，r.t.morrison和r.n.boyd在organic chemistry，第三版，allyn和bacon，1973中教授迈克尔加成。所述反应发生在包含迈克尔供体部分的分子与包含迈克尔受体部分的分子之间。
[0237]
靶向治疗
[0238]
缀合物的靶向部分可以识别细胞，或被细胞识别，从而提供所谓的靶向治疗。
[0239]
在一些实施方案中，缀合物包含活性部分q，用于在用于治疗自身免疫疾病的靶向治疗中使用。在某些实施方案中，活性部分包含选自以下的活性剂：环孢霉素(cyclosporine)、环孢霉素a(cyclosporine a)、霉酚酸酯(mycophenylate mofetil)、西罗莫司(sirolimus)、他克莫司(tacrolimus)、依那西普(enanercept)、强的松(prednisone)、硫唑嘌呤(azathioprine)、甲氨蝶呤环磷酰胺(methotrexate cyclophosphamide)、氨基己酸(aminocaproic acid)、氯喹(chloroquine)、羟氯喹(hydroxychloroquine)、氢化可的松(hydrocortisone)、地塞米松(dexamethasone)、苯丁酸氮芥(chlororambucil)、dhea、达那唑(danazol)、溴隐亭(bromocriptine)、美洛昔康(meloxicam)或英夫利昔单抗。
[0240]
在一些实施方案中，化合物包含活性部分q，用于在用于治疗感染性疾病的靶向治疗中使用。在某些实施方案中，q包含选自以下的活性剂：β-内酰胺(例如，青霉素g、青霉素v、氯唑西林(cloxacillin)、双氯西林(dicloxacillin)、甲氧西林(methicillin)、萘夫西林(nafcillin)、苯唑西林(oxacillin)、氨苄西林(ampicillin)、阿莫西林(amoxicillin)、巴氨西林(becampicillin)、阿洛西林(azlocillin)、羧苄青霉素(carbenicillin)、美洛西林(mezlocillin)、哌拉西林(piperacillin)、替卡西林(ticarcillin))、氨基糖苷系列(例如阿米卡星(amikacin)、庆大霉素(gentamycin)、卡那霉素(kanamycin)、新霉素(neomycin)、奈替米星(netilmicin)、链霉素(streptomycin)、妥布霉素(tobramycin))、大环内酯系列(阿奇霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、红霉素(erythromycin)、林可霉素(lincomycin)、克林霉素(clindamycin))、四环素(例如去甲金霉素(demeclocycline)、强力霉素(doxycyline)、米诺环素(minocycline)、四环素(tetracycline))、喹诺酮(例如西诺沙星(cinoxacin)、萘啶酸(nalidixic acid))、氟喹诺酮类(例如环丙沙星(ciprofloxacin)、依诺沙星(enoxacin)、格帕沙星(grepafloxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、诺氟沙星(norfloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、施怕沙星(sparfloxacin)、曲伐沙星(trovafloxicin))、多肽(例如杆菌肽(bacitracin)、粘菌素(colistin)、多粘菌素b(polymyxin b))、磺酰胺(例如磺胺异恶唑(sulfisoxazole)、磺胺甲恶唑(sulfamethoxazole)、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、磺胺甲噻
二唑(sulfamethizole)、乙酰磺胺(sulfacetamide))、抗生素剂(诸如甲氧苄氨嘧啶(trimethoprim)、磺胺甲恶唑(sylfamethazole)、氯霉素(chloramphenicol)、万古霉素(vancomycin)、甲硝唑(metronidazole)、奎奴普丁(quinupristin)、达福普汀(dalfopristin)、利福平(rifampicin)、大观霉素(spectinomycin)或呋喃妥因(nitrofurantoin))、通用抗病毒剂(例如，艾度拉定(idoxuradine)、阿糖腺苷(vidarabine)、阿昔洛韦(acyclovir)、泛昔昔洛韦(famcicyclovir)、喷昔昔洛韦(pencicyclovir)、伐昔洛韦(valacyclovir)、更昔洛韦(gancicyclovir)、膦甲酸(foscarnet)、利巴韦林(ribavirin)、金刚烷胺(amantadine)、金刚乙胺(rimantadine)、西多福韦(cidofovir)、反义寡核苷酸、免疫球蛋白、干扰素)、hiv感染治疗剂(例如，替诺福韦(tenofovir)、恩曲他滨(emtricitabine)、齐多夫定(zidovudine)、去羟肌苷(didanosine)、扎西他滨(zalcitabine)、司他夫定(stavudine)、拉米夫定(lamivudine)、奈韦拉平(nevirapine)、地拉韦定(delaviridine)、沙奎那韦(saquinavir)、利托那韦(ritonavir)、茚地那韦(indinavir)、奈非那韦(nelfinavir))。
[0241]
在一些实施方案中，本文公开的化合物和缀合物包含活性部分q，用于在用于将活性剂递送至细胞以治疗肿瘤的方法中使用，其中选择靶向部分与靶细胞(即，癌细胞)结合。特别地，本发明的化合物、缀合物和组合物可用于抑制哺乳动物(例如人)中的异常细胞生长或治疗增殖性疾病，诸如其中靶细胞是癌细胞并且选择靶向部分结合到与癌细胞相关联的分子(并且不与健康细胞相关联，或至少优先与肿瘤细胞而不是健康细胞相关联)。
[0242]
在某些实施方案中，活性部分q包含细胞毒性剂或免疫调节剂、抗癌剂、抗微管蛋白剂或细胞毒性剂。优选地，所述细胞毒性剂或免疫调节剂选自抗微管蛋白剂、澳瑞他汀(auristatin)、dna小沟结合剂、dna转录抑制剂、烷基化剂、蒽环类、抗生素、抗叶酸、抗代谢物、钙调蛋白抑制剂、化疗增敏剂、多卡霉素(duocarmycin)、依托泊苷(etoposide)、氟化嘧啶(fluorindated)、离子载体、来西托品(lexitropsin)、美登木素(maytansinoid)、亚硝基脲(nitroso urea)、氯氨铂(platinol)、成孔化合物、嘌呤抗代谢物、嘌呤霉素(puromycin)、辐射增敏剂、雷帕霉素(rapamycin)、类固醇、紫杉烷、拓扑异构酶抑制剂和长春花生物碱；所述抗癌剂选自甲氨蝶呤(methotrexate)、紫杉酚(taxol)、l-天冬酰胺酶(l-asparaginase)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、硫鸟嘌呤(thioguanin e)、羟基脲(hydroxyurea)、阿糖胞苷(cytarabine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、亚硝基脲(nitrosoureas)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carbo platin)、丝裂霉素(mitomycin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、普罗卡宾(proocarbizi ne)、拓扑替康(topotecan)、氮芥(nitrogen mustards)、环磷酰胺(cytoxan)、依托泊苷、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、bcnu、伊立替康(irinotecan)、喜树碱(camptothecin)、博来霉素(bleomycin)、多柔比星(doxorubicin)、伊达比星(idarib icin)、柔红霉素(daunorubicin)、更生霉素(dactinomycin)、普卡霉素(plicamyci n)、米托蒽醌(mitoxantrone)、天冬酰胺酶(asparaginase)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春瑞滨(vinorelbine)、紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docetaxel)等；抗微管蛋白剂包括紫杉烷(例如，紫杉醇、多西紫杉醇)、t67、长春花碱(例如，长春新碱、长春碱、长春地辛(vindesine)、长春瑞滨)、浆果赤霉素衍生物、紫杉烷衍生物、埃坡霉素(epothiolone)(例如，埃坡霉素a、埃坡霉素b)、诺考达唑(nocodazole)、秋水仙碱
(colchicine)、秋水仙胺(colcimid)、雌莫司汀(estramustine)、隐藻素(crytophycins)、西马多丁(cemadotin)、美登木素类生物碱(maytansinoids)、考布他汀(combrestatins)、圆皮海绵内酯(discoder molide)、五加素(eleutherobin)或奥瑞他汀衍生物(例如，afp、mmaf、mma e)；细胞毒性剂选自雄激素、蒽霉素(anthramycin)(amc)、天冬酰胺酶、5-氮杂胞苷(5-azacytidine)、硫唑嘌呤、博来霉素、白消安(busulfan)、丁硫氨酸亚砜胺(buthionine sulfoximine)、卡奇霉素(calicheamicin)、卡奇霉素衍生物、喜树碱、卡铂、卡莫司汀(carmustine)(bsnu)、cc-1065、氯霉素(chlorambuci n)、顺铂、秋水仙碱、环磷酰胺、阿糖胞苷、阿糖胞苷(cytidine arabinoside)、细胞松弛素b(cytochalasin b)、达卡巴嗪、更生霉素(放线菌素)、柔红霉素、氨烯咪胺(decarbazine)、dm1、dm4、多西紫杉醇、多柔比星、依托泊苷、雌激素(estrogen)、5-氟脱氧尿苷(5-fluordeoxyuridine)、5-氟尿嘧啶、吉西他滨(gemcitabine)、短杆菌肽d(gramicidin d)、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊立替康、洛莫司汀(lomustine)(ccnu)、美登素(maytansine)、二氯甲基二乙酸(mechlorethamine)、美法仑(melphalan)、6-巯基嘌呤、甲氨蝶呤、光神霉素(mithramycin)、丝裂霉素c、米托蒽醌、硝基咪唑(nitroimidazole)、紫杉醇、沙海葵毒素(palytoxin)、普卡霉素、丙卡比嗪(procarbizine)、根霉素(rhizoxin)、链脲菌素(streptozotocin)、替诺泊苷(tenoposide)、6-硫鸟嘌呤、硫代tepa、拓扑替康、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、vp-16、vm-26；dna小沟结合剂(例如，烯二炔(enediyne)、来西托品(lexitropsin)、cbi化合物)、多卡霉素、紫杉烷(例如，紫杉醇、多西紫杉醇)、嘌呤霉素、长春花生物碱、cc-1065、sn-38、拓扑替康、吗啉代-多柔比星(morpholino-doxorubicin)、根霉素、氰基吗啉代-多柔比星(cyanomorpholino-doxorubicin)、棘霉素(echinomycin)、康普瑞汀(combretastatin)、纺锤霉素(netropsin)、埃坡霉素a、埃坡霉素b、雌莫司汀(estramustine)、隐藻素(cryptophycins)、西马多丁(cemadotin)、美登木素、圆皮海绵内酯、艾榴塞洛素(eleutherobin)或米托蒽醌。
[0243]
细胞的增殖和凋亡
[0244]
本文公开的化合物和缀合物可用于诱导细胞凋亡的方法中。
[0245]
细胞凋亡失调与多种疾病有关，包括例如自身免疫性病症(例如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、移植物抗宿主病、重症肌无力或干燥综合征)、慢性炎症性病状(例如牛皮癣、哮喘或克罗恩病)、过度增殖性病症(例如，乳腺癌、肺癌)、病毒感染(例如，疱疹、乳头状瘤或hiv)，以及其他病状，诸如骨关节炎和动脉粥样硬化。本文所述的化合物、缀合物和组合物可用于治疗或改善任何这些疾病。此类治疗通常涉及向患有疾病的受试者施用足以提供治疗益处量的本文所述的化合物、缀合物或组合物。施用的化合物、缀合物或组合物的抗体的特性将取决于所治疗的疾病，因此抗体应结合在抑制将是有益的细胞类型中表达的细胞表面抗原。所获得的治疗益处也将取决于所治疗的具体疾病。在某些情况下，本文公开的化合物和组合物在作为单一疗法施用时可以治疗或改善疾病本身或疾病的症状。在其他情况下，本文公开的化合物和组合物可以是整体治疗方案的一部分，所述整体治疗方案包括与抑制剂或本文公开的化合物和组合物一起治疗或改善所治疗的疾病或疾病症状的其他剂。可作为本文公开的化合物和组合物的辅助或与所述化合物和组合物一起施用的用于治疗或改善特定疾病的剂对本领域技术人员来说是显而易见的。
[0246]
尽管在任何治疗方案中总是期望绝对治愈，但提供治疗益处并不要求实现治愈。
治疗益处可包括停止或减缓疾病的进展、使疾病消退但不治愈和/或改善或减缓疾病症状的进展。与统计平均值相比延长的生存期和/或改善的生活质量也可以被认为是治疗益处。
[0247]
一类特殊的涉及细胞凋亡失调并且是全世界重大健康负担的疾病是癌症。在某些实施方案中，本文公开的化合物和组合物可用于治疗癌症。例如，癌症可以是实体肿瘤或血液肿瘤。可用本文公开的化合物和组合物治疗的癌症包括但不限于膀胱癌、脑癌、乳腺癌、骨髓癌、宫颈癌、慢性淋巴细胞白血病、结肠直肠癌、食管癌、肝癌、淋巴细胞白血病、滤泡性淋巴瘤、t细胞或b细胞来源的淋巴恶性肿瘤、黑色素瘤、髓性白血病、骨髓瘤、口腔癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、慢性淋巴细胞白血病、骨髓瘤、前列腺癌、小细胞肺癌和脾癌。本文公开的化合物和组合物在治疗癌症中可能特别有益，因为抗体可用于特异性靶向肿瘤细胞，从而潜在地避免或改善可能与全身施用未缀合的抑制剂有关的不良副作用和/或毒性。在一些实施方案中，本公开涉及一种治疗涉及内在细胞凋亡失调的疾病的方法，所述方法包括向患有涉及细胞凋亡失调的疾病的受试者施用有效提供治疗益处的量的本文公开的化合物和组合物其中本文公开的化合物和组合物的靶向部分与内在凋亡失调的细胞上的细胞表面受体结合。在一些实施方案中，治疗癌症的方法包括以有效提供治疗益处的量向患有癌症的受试者施用本文公开的化合物和组合物，其中靶向部分能够结合在癌细胞表面上表达的细胞表面受体或肿瘤相关抗原。
[0248]
在致瘤性癌症的情况下，治疗益处除了包括上述效应外，还可以具体包括与所治疗癌症的类型和阶段的统计平均值相比停止或减缓肿瘤生长的进展、使肿瘤生长退化、根除一个或多个肿瘤和/或提高患者存活率。在一些实施方案中，所治疗的癌症是致瘤性癌症。
[0249]
本文公开的化合物和缀合物可作为单一疗法施用以提供治疗益处，或可作为其他化学治疗剂和/或放射疗法的辅助，或与它们联合施用。本文公开的化合物和组合物可用作辅助疗法的化学治疗剂可以是靶向的(例如，adc、蛋白激酶抑制剂等)或非靶向的(例如，非特异性细胞毒性剂诸如放射性核苷酸、烷基化剂和嵌入剂)。本文公开的化合物和组合物可与之辅助施用的非靶向化学治疗剂包括但不限于甲氨蝶呤、紫杉酚、l-天冬酰胺酶、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、羟基脲、阿糖胞苷、环磷酰胺、异环磷酰胺、亚硝基脲、顺铂、卡铂、丝裂霉素、达卡巴嗪、丙卡比嗪、托泊替康、氮芥、环磷酰胺、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、bcnu、伊立替康、喜树碱、博来霉素、多柔比星、伊达比星、柔红霉素、更生霉素、普卡霉素、米托蒽醌、天冬酰胺酶、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇、卡奇霉素和多西紫杉醇。
[0250]
作为单一疗法可能不能有效地治疗癌症的本文公开的化合物和缀合物可以作为其他化学治疗剂或放射疗法的辅助，或与它们一起施用以提供治疗益处。在一些实施方案中，本公开涉及一种方法，其中本文公开的化合物或组合物以有效使肿瘤细胞对标准化学疗法和/或放射疗法敏化的量施用。因此，在治疗癌症的情况下，“治疗益处”包括将本文公开的化合物和组合物作为化学治疗剂和/或放射疗法的辅助，或与它们一起施用给尚未开始此类疗法或已经开始此类疗法但尚未表现出耐药性迹象的患者，或已经出现耐药性迹象的患者，以作为使肿瘤对化疗和/或放射疗法敏化的一种手段。
[0251]
药物组合物
[0252]
在某些实施方案中，本发明提供了一种固体药物组合物，所述药物组合物包含本发明的化合物，诸如式的化合物或其药学上可接受的盐；以及药学上可接受的载剂。
[0253]
在某些实施方案中，本发明提供了一种适用于人患者的药物制剂，所述药物制剂包含本发明的任何化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，药物制剂可用于治疗或预防如本文所述的病状或疾病。在某些实施方案中，药物制剂具有足够低的热原活性以适用于人患者。
[0254]
在一些实施方案中，本发明涉及一种药物试剂盒，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐以及任选地关于如何施用化合物的说明。
[0255]
本发明的组合物和方法可用于治疗有需要的个体。在某些实施方案中，所述个体是哺乳动物诸如人，或非人哺乳动物。当施用于动物，诸如人时，所述组合物或化合物优选以药物组合物的形式施用，所述药物组合物包含例如本发明的化合物和药学上可接受的载剂。药学上可接受的载剂是本领域熟知的，并且包括例如非水性媒介物，诸如二醇、甘油、油诸如橄榄油，或可注射的有机酯。可以选择赋形剂，例如以实现剂的延迟释放或选择性地靶向一种或多种细胞、组织或器官。药物组合物可以呈剂量单位形式，诸如片剂、胶囊剂(包括分散型胶囊剂和明胶胶囊剂)、颗粒剂、用于重构的亲液胶体、粉剂、栓剂等。所述组合物也可以存在于透皮递送系统，例如皮肤贴剂中。
[0256]
药学上可接受的载剂可以含有生理上可接受的剂，所述剂起到例如稳定化合物(诸如本发明的化合物)、增加其溶解性或增加其吸收的作用。此类生理上可接受的剂包括例如碳水化合物，诸如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质或其他稳定剂或赋形剂。药学上可接受的载剂(包括生理上可接受的剂)的选择取决于例如组合物的施用途径。制剂或药物组合物可以是自乳化药物递送系统或自微乳化药物递送系统。药物组合物(制剂)也可以是脂质体或其他聚合物基体，其可以在其中掺入例如本发明的化合物。脂质体，例如包含磷脂或其他脂质的脂质体，是制造和施用相对简单的无毒的、生理上可接受的和可代谢的载剂。
[0257]
本文采用短语“药学上可接受的”指在合理医学判断范围内、适用于与人和动物组织接触而没有过量毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症、与合理的利益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
[0258]
如本文所用的短语“药学上可接受的载剂”意指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料。每种载剂在与制剂的其他成分相容的意义上必须是“可接受的”并且对患者是无害的。可以用作药学上可接受的载剂的材料的一些实例包括：(1)糖，诸如乳糖、葡萄糖以及蔗糖；(2)淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素以及乙酸纤维素；(4)黄芪胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；(9)油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油以及大豆油；(10)二醇，诸如丙二醇；(11)多元醇，诸如甘油、山梨醇、甘露醇以及聚乙二醇；(12)酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)乙醇；以及(17)药物制剂中采用的其他无毒相容性物质。
[0259]
药物组合物(制剂)可以通过多种施用途径中的任何一种施用于受试者，所述途径包括例如口服途径(例如，用于施加到舌的在非水性溶液或混悬液中的浸液、片剂、胶囊剂(包括分散型胶囊剂和明胶胶囊剂)、大丸剂、粉剂、颗粒剂、糊剂)；通过口腔粘膜吸收(例如，舌下)；肛门、直肠或阴道途径(例如作为阴道栓剂、乳霜或泡沫剂)；肠胃外途径(包括肌
肉内、静脉内、皮下或鞘内作为例如无菌溶液或混悬液)；鼻腔途径；腹膜内途径；皮下途径；透皮途径(例如作为施加到皮肤的贴剂)；以及局部途径(例如，作为施加到皮肤的乳霜、软膏或喷雾剂，或作为滴眼剂)。所述化合物还可以被配制成用于吸入。适当的施用途径和适用于其的组合物的细节可以在例如美国专利号6,110,973、5,763,493、5,731,000、5,541,231、5,427,798、5,358,970和4,172,896以及其中引用的专利中找到，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。
[0260]
制剂可以方便地以单位剂型存在并且可以通过药学领域中熟知的任何方法来制备。可与载剂材料组合以制备单剂型的活性成分的量将会根据被治疗的宿主、特定的施用模式而变化。可与载剂材料组合以产生单剂型的活性成分的量通常将是产生治疗效应的化合物的量。一般来说，在一百份中，此量将在约1％至约99％活性成分的范围内，优选约5％至约70％，最优选约10％至约30％。
[0261]
制备这些制剂或组合物的方法包括使活性化合物(诸如本发明的化合物)与载剂和任选地一种或多种辅助成分缔合的步骤。一般来说，通过将本发明的化合物与液体载剂或细分的固体载剂或两者均匀且密切地缔合，然后，如果必要，使产物成形来制备制剂。
[0262]
适用于口服施用的本发明的制剂可呈以下形式：胶囊剂(包括分散型胶囊剂和明胶胶囊剂)、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用经调味的基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)、冻干剂、粉剂、颗粒剂或作为非水性液体中的溶液或混悬液、或作为软锭剂(pastille)(使用惰性基质，诸如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)等，每种均含有预定量的本发明的化合物作为活性成分。组合物或化合物还可以作为大丸剂、药糖剂(electuary)或糊剂施用。
[0263]
为了制备口服施用的固体剂型(胶囊剂(包括分散型胶囊剂和明胶胶囊剂)、片剂、丸剂、糖锭剂、粉剂、颗粒剂等)，将所述活性成分与一种或多种药学上可接受的载剂(诸如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下中的任何一种进行混合：(1)填充剂或增充剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、和/或硅酸；(2)粘合剂，例如像，羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，诸如甘油；(4)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐以及碳酸钠；(5)溶液缓凝剂，诸如石蜡；(6)吸收加速剂，诸如季铵化合物；(7)湿润剂，例如像，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，诸如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；(10)络合剂，诸如修饰和未修饰的环糊精；以及(11)着色剂。就胶囊剂(包括分散型胶囊剂和明胶胶囊剂)、片剂以及丸剂而言，所述药物组合物还可以包含缓冲剂。类似类型的固体组合物也可在使用此类赋形剂(如乳糖(lactose)或乳糖(milk sugar))以及高分子量聚乙二醇等的软质和硬质填充的明胶胶囊中用作填充剂。
[0264]
片剂可通过压制或模制来制备，任选地具有一种或多种辅助成分。压制片剂可以使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，羧甲基淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂来制备。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物来制备。
[0265]
片剂和药物组合物的其他固体剂型，诸如糖锭剂、胶囊剂(包括分散型胶囊剂和明胶胶囊剂)、丸剂和颗粒剂可以任选地被刻痕或用包衣和壳，诸如肠溶包衣或药物配制领域熟知的其他包衣来制备。还可以使用例如，不同比例以提供所需释放特征的羟丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、脂质体和/或微球将它们配制成提供其中活性成分的缓慢释放或受
控释放。可通过例如过滤通过截留细菌的过滤器或通过在使用前立即掺入可溶于无菌水或一些其他无菌注射介质的无菌固体组合物形式的灭菌剂将它们灭菌。这些组合物还可任选含有遮光剂并且可以是仅在或优先在胃肠道的某一部分任选以延迟方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。所述活性成分也可呈微囊化形式，适当时具有一种或多种上述赋形剂。
[0266]
用于直肠、阴道或尿道施用的药物组合物的制剂可作为栓剂呈现，其可通过将一种或多种活性化合物与一种或多种合适的无刺激性赋形剂或载剂(包括，例如，可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯)混合来制备，且所述栓剂在室温下为固体，但在体温下为液体，并且因此将会在直肠或阴道腔中熔化并且释放活性化合物。
[0267]
替代地或另外，可以配制组合物以通过导管、支架、金属丝或其他腔内装置递送。通过此类装置的递送对于递送至膀胱、尿道、输尿管、直肠或肠道可能特别有用。
[0268]
适用于阴道施用的制剂还包括含有本领域已知的适当的此类载剂的阴道栓剂、止血栓、乳霜、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂制剂。
[0269]
用于局部或经皮施用的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏、糊剂、乳霜、洗剂、凝胶剂、溶液、贴剂以及吸入剂。可以在无菌条件下将活性化合物与药学上可接受的载剂以及与可能需要的任何防腐剂、缓冲剂、或推进剂进行混合。
[0270]
除活性化合物以外，软膏、糊剂、乳霜和凝胶剂可含有赋形剂，诸如动物和蔬菜脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌或其混合物。
[0271]
除活性化合物以外，粉剂和喷雾剂可含有赋形剂诸如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂可额外地含有常规推进剂，诸如氯氟烃和挥发性未取代的烃(诸如丁烷或丙烷)。
[0272]
透皮贴剂具有提供向身体受控递送本发明化合物的附加优点。此类剂型还可通过将活性化合物溶解或分散于适当的介质中来制备。吸收增强剂也可以用于增加化合物穿过皮肤的通量。这种通量的速率可以通过提供速率控制膜或将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。
[0273]
眼用制剂、眼用软膏、粉剂、溶液等也认为在本发明范围内。示例性眼科制剂描述于美国公布号2005/0080056、2005/0059744、2005/0031697和2005/004074以及美国专利号6,583,124中，其内容以引用的方式整体并入本文。如果需要，液体眼科制剂具有与泪液、房水或玻璃体液类似的特性，或与此类液体相容。优选的施用途径是局部施用(例如，局部施用，诸如滴眼剂，或通过植入物施用)。
[0274]
如本文所用的短语“肠胃外施用”和“肠胃外地施用”意指除了肠内施用和局部施用以外的，通常通过注射进行的施用模式，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眼眶内、心内、真皮内、腹膜内、气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。
[0275]
适合于肠胃外施用的药物组合物包含一种或多种活性化合物与一种或多种药学上可接受的无菌等渗非水性溶液、分散液、混悬液或乳液，或可在临使用前复原成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉剂的组合，所述组合可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使制剂与预期受体的血液等渗的溶质、或悬浮剂或增稠剂。
[0276]
可用于本发明的药物组合物中的合适的非水性载剂的实例包括乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(诸如橄榄油)和可注射有机酯(诸如油酸乙酯)。适当流动性可以例如通过使用包衣材料(诸如卵磷脂)，在分散液的情况下通过维持所需粒径和通过使用表面活性剂来维持。
[0277]
这些组合物也可含有辅助剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过包含各种抗菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等来确保防止微生物的作用。还可能需要在组合物中包含等渗剂，诸如糖、氯化钠等。另外，可通过包含延迟吸收的剂(诸如单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射药物形式的延迟吸收。
[0278]
在一些情况下，为了延长药物的作用，需要减缓皮下注射或肌肉内注射的药物的吸收。这可通过使用具有低水溶性的结晶或无定形材料的液体混悬液来实现。药物的吸收速率则取决于其溶解速率，溶解速率进而可取决于晶体大小和晶形。替代地，通过将药物溶解或悬浮于油媒介物中来完成胃肠外施用的药物形式的延迟吸收。
[0279]
可注射储库式形式是通过在可生物降解聚合物(诸如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成主题化合物的微囊化基质来制备的。根据药物与聚合物的比率和所采用的具体聚合物的性质，可控制药物释放的速率。其他可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。储库式可注射制剂也通过将药物截留在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。
[0280]
为了用于本发明的方法，可以本身或作为含有例如0.1％至99.5％(更优选0.5％至90％)的活性成分与药学上可接受的载剂组合的药物组合物来提供活性化合物。
[0281]
引入方法也可以由可再装填或可生物降解的装置提供。近年来，已经开发了各种缓释聚合物装置并在体内测试了药物(包括蛋白质生物药物)的受控递送。包括可生物降解和不可降解的聚合物在内的多种生物相容性聚合物(包括水凝胶)可用于形成植入物，以在特定目标位点缓释化合物。
[0282]
药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可改变以便获得对于特定患者、组合物以及施用模式有效实现所需的治疗反应，而对患者无毒的活性成分的量。
[0283]
选择的剂量水平将取决于多种因素，包括使用的特定化合物或化合物组合或其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，使用的特定化合物的排泄速率，治疗的持续时间，与所使用的特定化合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料，所治疗患者的年龄、性别、体重、病状、综合的健康状态和先前的病史，以及在医学领域熟知的类似因素。
[0284]
具有本领域中的普通技艺的医师或兽医可以容易地判定和开具治疗有效量的所需药物组合物。例如，医师或兽医可以低于为达成所需治疗效应所需水平的水平开始药物组合物或化合物剂量并且逐渐增加剂量，直至达成所需效应。“治疗有效量”意指足以引起所需治疗效应的化合物的浓度。通常应理解，化合物的有效量将根据受试者的体重、性别、年龄和病史而变化。影响有效量的其他因素可以包括但不限于患者病状的严重性、所治疗的病症、化合物的稳定性，以及如果需要的话，与本发明的化合物一起施用的另一种类型的治疗剂。通过多次施用剂可以递送更大的总剂量。确定功效和剂量的方法是本领域技术人员已知的(isselbacher等人(1996)harrison’s principles of internal medicine第13版,1814-1882，以引用的方式并入本文)。
[0285]
一般来说，用于本发明的组合物和方法中的活性化合物的合适的日剂量将为化合物有效产生治疗效应的最低剂量的量。这种有效剂量将通常取决于上述因素。
[0286]
如果需要，活性化合物的有效日剂量可任选地以单位剂型作为在全天内以适当间隔分开施用的一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量来施用。在本发明的某些实施方案中，活性化合物可以每天施用两次或三次。在优选的实施方案中，活性化合物将每天施用一次。
[0287]
接受这种治疗的患者是任何需要的动物，包括灵长类动物，特别是人，以及其他哺乳动物，诸如马、牛、猪和羊；以及一般的家禽和宠物。
[0288]
在某些实施方案中，本发明的化合物可以单独使用或与另一种类型的治疗剂联合施用。如本文所用，短语“联合施用”是指任何形式的两种或更多种不同治疗化合物的施用，使得第二种化合物在先前施用的治疗化合物在体内仍然有效时施用(例如，两种化合物在患者中同时有效，这可能包括两种化合物的协同增强效应)。例如，不同的治疗化合物可以在同一制剂中或在单独的制剂中同时地或顺序地施用。在某些实施方案中，可以在相隔1小时、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时或一周内施用不同的治疗化合物。因此，接受这种治疗的个体可受益于不同治疗化合物的组合效果。
[0289]
润湿剂、乳化剂和润滑剂(诸如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁)以及着色剂、剥离剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于所述组合物中。
[0290]
药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚(bha)、丁基化羟基甲苯(bht)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，诸如柠檬酸、乙二胺四乙酸(edta)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
[0291]
实施例
[0292]
现已大体上描述本发明，参考以下实施例将更容易理解本发明，包括这些实施例仅出于说明本发明的某些方面和实施方案的目的且不旨在限制本发明。
[0293]
实施例1.化合物l-1的制备
[0294][0295]
化合物l-1-1的制备
[0296]
将三甘醇(60.6g，403.5mmol)在干燥thf中的均匀溶液在室温在n2气氛下用60％-nah(3.2g，80.7mmol)处理并搅拌15分钟。滴加炔丙基溴(10g，67.25mmol)并使所得混合物静置过夜。反应用h2o(250ml)淬灭并用dcm(250mlx4)萃取。将有机层用盐水(500ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝3:1)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物l-1-1(12.5g，98％)。
[0297]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.18(d,j＝2.4hz,2h),3.73-3.64(m,10h),3.60-3.57(m,2h),2.63(m,1h),2.42(m,1h)。
[0298]
化合物l-1的制备
[0299]
将l-1-1(1.2g，6.22mmol)在干燥dcm中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用tpp(2.45g，9.34mmol)处理并在0℃搅拌5分钟。加入nbs(1.66g，9.34mmol)并将混合物在0℃搅拌20分钟并升温至室温1小时。反应用h2o(70ml)淬灭并用dcm(80ml)萃取。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝100:1至200:1)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物l-1(1.3g，80％，纯度70％)。
[0300]
ei-ms m/z:251(m

1)。
[0301]
实施例2.化合物l-2的制备
[0302][0303]
化合物l-2-1的制备
[0304]
将l-1-1(2.88g，15.3mmol)在干燥dcm中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用p-tscl(2.92g，15.3mmol)、koh(3.43g，61.2mmol)处理并升温至室温3.5小时。反应用h2o(50ml)淬灭并用dcm(80mlx3)萃取。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩以得到呈液体的标题化合物l-2-1(粗品)。
[0305]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝7.2hz,2h),7.33(d,j＝7.6hz,2h),4.20-4.12(m,4h),3.68-3.58(m,10h),2.44(s,3h),2.42(m,1h)。ei-ms m/z:343(m

1)。
[0306]
化合物l-2-2的制备
[0307]
将l-2-1(5.24g，15.3mmol)在无水dmf中的均匀溶液在室温在n2气氛下用nan3(1.49g，22.95mmol)处理并加热至60℃过夜。反应用h2o(100ml)淬灭并用ea(120mlx2)萃取。将有机层用盐水(150ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝1:3)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物l-2-2(2.39g，2步产率73％)。
[0308]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.19(d,j＝2hz,2h),3.69-3.56(m,10h),3.38(m,2h),2.42(m,1h)。ei-ms m/z:236(m

na)。
[0309]
化合物l-2的制备
[0310]
将l-2-2(2.39g，11.2mmol)在ea、乙醚和5％hcl中的澄清溶液在0℃在n2气氛下用tpp(2.94g，11.2mmol)处理并缓慢升温至室温过夜。将反应混合物用乙醚(50mlx2)洗涤并将h2o层在真空中浓缩。将液体在高真空下干燥以得到呈无色油状物的标题化合物l-2(2.13g，85％)。
[0311]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ4.14(d,j＝1.6hz,2h),3.62-3.50(m,10h),2.97-2.93(m,2h),2.50(m,1h)。
[0312]
实施例3.化合物l-3和l-4的制备
[0313][0314]
化合物l-3-1的制备
[0315]
将四甘醇(10g，51.49mmol)在干燥dcm中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用koh(23.1g，411.88mmol)、p-tscl(19.6g，102.97mmol)处理并升温至室温2.5小时。反应用h2o(200ml)稀释并用dcm(250mlx3)萃取。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩以得到呈液体的标题化合物：l-3-1(粗品)。
[0316]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.78(d,j＝7.6hz,2h),7.33(d,j＝7.6hz,2h),4.16-4.13(m,4h),3.68-3.65(m,4h),3.59-3.52(m,8h),2.43(s,6h)；ei-ms m/z:503(m

1)。
[0317]
化合物l-3-2的制备
[0318]
将l-3-1(25.9g，51.49mmol)在无水dmf中的均匀溶液在室温在n2气氛下用nan3(10g，154.46mmol)处理并加热至60℃过夜。反应用h2o(250ml)淬灭并用ea(250mlx3)萃取。将有机层用盐水(350ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝1:3)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物：l-3-2(10.64g，2步产率85％)。
[0319]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ3.70-3.66(m,12h),3.41-3.37(m,4h)；ei-ms m/z:267(m

na)。
[0320]
化合物l-3的制备
[0321]
将l-3-2(10.64g，43.56mmol)在ea、乙醚和5％hcl中的澄清溶液在0℃在n2气氛下用tpp(11.4g，43.56mmol)处理并缓慢升温至室温过夜。在真空中浓缩有机层。将残余物h2o相用dcm(150mlx2)洗涤，并将h2o层在真空中浓缩。将液体在高真空下干燥以得到呈无色油状物的标题化合物：l-3(10.78g，78％)。
[0322]
ei-ms m/z:219(m

1)。
[0323]
通过制备化合物l-3的类似合成方法合成化合物l-4。
[0324]
化合物l-4-1的制备
[0325]
ei-ms m/z:591(m

1)。
[0326]
化合物l-4-2的制备
[0327]
产率79％，无色油状物。
[0328]1h nmr(600mhz,cdcl3)δ3.69-3.66(m,20h),3.39(t,j＝4.8hz,4h)；ei-ms m/z:355(m

na)。
[0329]
化合物l-4的制备
[0330]
产率91％，无色油状物。
[0331]1h nmr(600mhz,cdcl3)δ8.15(br s,2h),3.93(t,j＝4.2hz,2h),3.82-3.66(m,18h),3.49-3.46(m,2h),3.21-3.19(m,2h)。ei-ms m/z:307(m

1)。
[0332]
实施例4.化合物l-5的制备
[0333][0334]
化合物l-5-1的制备
[0335]
将四甘醇(20g，102.97mmol)在干燥thf中的均匀溶液在室温在n2气氛下用t-buok(54.57ml，54.57mmol)处理并搅拌至室温30分钟。滴加炔丙基溴(6.08ml，54.57mmol)并使所得混合物静置15小时。将反应混合物通过过滤，并且用ea(100mlx2)洗涤塞。将滤液在减压下浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝5:1)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物：l-5-1(10.98g，46％)。
[0336]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.20(d,j＝1.6hz,2h),3.72-3.59(m,16h),2.56(m,1h),
2.43(m,1h)。
[0337]
化合物l-5-2的制备
[0338]
将l-5-1(10.98g，47.27mmol)在干燥dcm中的均匀溶液在室温在n2气氛下用tea(17.13ml，122.90mmol)、p-tscl(18.02g，94.54mmol)处理并搅拌至室温过夜。将反应混合物在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝1:3至1:1)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物：l-5-2(17.06g，93％)。
[0339]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.79-7.77(m,2h),7.33-7.30(m,2h),4.20-4.10(m,4h),3.71-3.55(m,14h),2.43-2.40(m,4h)。
[0340]
化合物l-5-3的制备
[0341]
将l-5-2(8.22g，21.27mmol)在无水dmf中的均匀溶液在室温在n2气氛下用nan3(2.07g，31.90mmol)处理并加热至60℃过夜。反应用h2o(200ml)淬灭并用ea(250mlx3)萃取。将有机层用盐水(350ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝1:2至1:1)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物：l-5-3(2.94g，54％)。
[0342]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.20(d,j＝2.4hz,2h),3.72-3.60(m,14h),3.40-3.37(m,2h),2.42(m,1h)。
[0343]
化合物l-5的制备
[0344]
将l-5-3(2.94g，11.41mmol)在ea、乙醚和5％hcl中的澄清溶液在0℃在n2气氛下用tpp(2.99g，11.41mmol)处理并缓慢升温至室温过夜。在真空中浓缩有机层。将残余物h2o相用dcm(200mlx2)洗涤，并将h2o层在真空中浓缩。将液体在高真空下干燥以得到呈无色油状物的标题化合物：l-5(2.55g，83％)。
[0345]
ei-ms m/z:232(m

1)。
[0346]
实施例5.化合物l-6的制备
[0347][0348]
化合物l-6-1的制备
[0349]
将六甘醇(7.8g，27.63mmol)在干燥thf中的均匀溶液在室温在n2气氛下用t-buok(1.64g，14.64mmol)处理并搅拌至室温30分钟。滴加炔丙基溴(1.63ml，14.64mmol)并使所得混合物静置过夜。将反应混合物过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:meoh＝97:3)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物l-6-1(4,57g，52％)。
[0350]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.20(d,j＝2hz,2h),3.72-3.59(m,24h),2.65(m,1h),2.42(m,1h)。
[0351]
化合物l-6-2的制备
[0352]
将六甘醇(5.6g，19.83mmol)在干燥dcm中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用ag2o
(5.52g，23.80mmol)、ki(329mg，1.98mmol)、p-tscl(4.16g，21.82mmol)处理并搅拌至室温3小时。将反应混合物过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:meoh＝95:5至90:10)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物l-6-2(7.71g，89％)。
[0353]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝6.8hz,2h),7.33(d,j＝7.6hz,2h),4.16-4.14(m,2h),3.72-3.57(m,22h),2.65-2.63(m,1h),2.44(s,3h)。
[0354]
化合物l-6-3的制备
[0355]
将l-6-2(7.71g，17.66mmol)在无水dmf中的均匀溶液在室温在n2气氛下用nan3(1.72g，26.48mmol)处理并加热至110℃3.5小时。将反应混合物在真空中浓缩并在高真空下除去dmf。通过快速色谱(ea:meoh＝10:1)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物：l-6-3(4.74g，87％)。
[0356]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ3.74-3.58(m,22h),3.41-3.36(m,2h),2.67-2.62(m,1h)。
[0357]
化合物l-6-4的制备
[0358]
将l-6-3(4.74g，15.42mmol)在干燥dcm中的均匀溶液在室温在n2气氛下用tea(5.59ml，40.10mmol)、p-tscl(5.88g，30.84mmol)处理并搅拌至室温过夜。将反应混合物在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝5:1)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物：l-6-4(6.52g，92％)。
[0359]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝8hz,2h),7.34(d,j＝8hz,2h),4.15(t,j＝5.2hz,2h),3.69-3.57(m,20h),3.38(d,j＝5.2hz,2h),2.44(s,3h)。
[0360]
化合物l-6-5的制备
[0361]
将l-6-1(4.53mg，14.14mmol)在干燥thf中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用60％nah(678mg，16.96mmol)处理并使其静置30分钟。加入l-6-4(6.52g，14.14mmol)，并将所得混合物升温至室温7小时。加入60％nah(678mg，16.96mmol)并使其静置过夜。加入60％nah(282.7mg，7.07mmol)并加热至40℃过夜。使反应在0℃冷却，用meoh(100ml)淬灭并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:meoh＝90:10)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物：l-6-5(7.341g，85％)。
[0362]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.19(m,2h),4.70-4.55(m,46h),0.38(m,2h),2.43(m,1h)。
[0363]
ei-ms m/z:610(m

1)。
[0364]
化合物l-6的制备
[0365]
将l-6-5(906.7mg，1.49mmol)在ea、乙醚和5％hcl中的澄清溶液在0℃在n2气氛下用tpp(390mg，1.49mmol)处理并缓慢升温至室温过夜。在真空中浓缩有机层。将残余物h2o相用dcm(60mlx3)洗涤，并将h2o层在真空中浓缩。将液体在高真空下干燥以得到呈无色油状物的标题化合物：l-6(495mg，54％)。
[0366]
ei-ms m/z:584(m

1)。
[0367]
实施例6.化合物l-7的制备
[0368][0369]
化合物l-7-1的制备
[0370]
将四甘醇(10g，51.48mmol)在干燥thf中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用naoh(3g，77.22mmol)、p-tscl(9.8g，51.48mmol)处理并使其静置30分钟。将反应混合物升温至室温3小时。反应用h2o(50ml)稀释并用ea(50mlx3)萃取。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝1:1至5:1)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物：l-7-1(3.15g，18％)。
[0371]1h nmr(600hz,dmso-d6)δ7.79(d,j＝8hz,2h),7.48(d,j＝8.4hz,2h),4.57(t,j＝5.6hz,1h),4.12-4.09(m,2h),3.58-3.56(m,2h),3.51-3.44(m,10h),3.42-3.38(m,2h),2.42(s,3h)；ei-ms m/z:349(m

1)。
[0372]
化合物l-7-2的制备
[0373]
将l-7-1(3.15g，9.04mmol)在无水dmf中的均匀溶液在室温在n2气氛下用nan3(3.53g，54.24mmol)处理并加热至90℃过夜。反应用h2o(30ml)淬灭并用ea(100mlx3)萃取。将有机层用盐水(200ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝15:1)纯化残余物以得到呈液体的标题化合物：l-7-2(1.8g，91％)。
[0374]
ei-ms m/z:220(m

1)。
[0375]
实施例7.化合物bcn-pnp的制备
[0376][0377]
将(1r,8s,9s)-双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲醇(800mg，5.3mmol)在室温在n2气氛下溶解在dcm(125ml)中。向其中加入吡啶(1.22ml，15.9mmol)和4-硝基苯氯甲酸酯(1.75g，8.74mmol)。将混合物在相同温度下搅拌4小时后，通过加入饱和nh4cl溶液(100ml)淬灭反应并用ea(100mlx4)萃取。将有机层经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过柱色谱(hex:ea＝10:1)纯化残余物以获得呈白色固体的bcn-pnp(1.34g，84％)。
[0378]1h nmr(600mhz,cdcl3)δ8.29(d,j＝9hz,2h),7.39(d,j＝9hz,2h),4.41(d,j＝8.4hz,2h),2.36-2.24(m,6h),1.62-1.55(m,2h),1.53-1.49(m,1h),1.07(t,j＝10.2hz,2h)。
[0379]
实施例8.化合物l-8的制备
[0380][0381]
化合物l-8-1的制备
[0382]
将l-4(740mg，2.16mmol)和二碳酸二叔丁酯(707mg，3.24mmol)在1,4-二氧六环:h2o＝1:1(10ml)中的均匀溶液在室温在n2气氛下用nahco3(363mg，4.32mmol)处理并搅拌至
室温2小时。反应用水(10ml)淬灭并且用ea(10mlx2)萃取。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。化合物l-8-1(809mg，96％)不经纯化直接用于下一反应。
[0383]
ei-ms m/z:407(m

)。
[0384]
化合物l-8的制备
[0385]
将l-8-1(809mg，1.99mmol)在无水meoh(15ml)中的均匀溶液在室温在h2气氛下用pd/c(90mg，10重量％)处理并搅拌4小时。将反应混合物通过过滤并在真空中浓缩。化合物l-8(829mg，定量)不经纯化直接用于下一反应。
[0386]
ei-ms m/z:381(m

)。
[0387]
实施例9.化合物ama-1的制备
[0388][0389]
化合物ama-1a的制备
[0390]
将4-羟基苯乙酮(5g，52.32mmol)和乙醛酸一水合物(7.4g，54.32mmol)在acoh中的混浊混合物在室温在n2气氛下加热至回流过夜。反应用h2o(150ml)淬灭并用ea(200mlx3)萃取，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝3:1至ea:meoh＝97:3)纯化残余物以得到呈棕色固体的标题化合物ama-1a(1.17g，11％，混合物6.61g)。
[0391]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.94(d,j＝8hz,2h),7.86(d,j＝15.6hz,1h),6.90(d,j＝8.8hz,2h),6.63(d,j＝15.6hz,1h)。
[0392]
化合物ama-1b的制备
[0393]
将ama-1a(457.9mg，2.38mmol)在无水dmf中的均匀溶液在0℃和n2气氛下用dmap(43.7mg，0.36mmol)、edci(456.8mg，2.38mmol)、dipea(2.08ml，11.91mmol)和nh4cl(1.25g，23.83mmol)处理，并缓慢升温至室温过夜。反应用饱和柠檬酸(35ml)、饱和nahco3(35ml)和盐水(30ml)淬灭，并用ea(50ml)洗涤，然后经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(100％dcm至ea:meoh＝97:3)纯化残余物以得到呈棕色固体的标题化合物ama-1b(24.4mg，5％)。
[0394]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.94-7.90(m,3h),7.75(d,j＝15.2hz,1h),7.48(br s,1h),6.88(d,j＝15.2hz,1h),6.85(d,j＝8.4hz,2h)。
[0395]
化合物ama-1的制备
[0396]
将ama-1b(12mg，0.063mmol)和l-1(31mg，0.126mmol)在无水dmf中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用k2co3(8.7mg，0.063mmol)处理并加热至40℃过夜。反应用h2o(20ml)淬灭并用ea(25ml)萃取。将有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝18:1)纯化残余物以得到呈淡黄色胶状物的标题化合物ama-1(10mg，44％)。
[0397]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.05-7.95(m,3h),7.02-6.94(m,3h),5.73(br s,1h),5.60(br s,1h),4.24-4.19(m,4h),3.92-3.88(m,2h),3.77-3.67(m,8h),2.43-2.42(m,1h)。ei-ms m/z:362(m

1)。
[0398]
实施例10.化合物ama-2和ama-3的制备
[0399][0400]
化合物ama-2a的制备
[0401]
将4-乙酰基苯甲酸(306mg，1.86mmol)和l-2(500mg，2.24mmol)在无水dmf中的均匀溶液在室温在n2气氛下用edci(428mg，2.24mmol)、dipea(0.81ml，4.66mmol)、hobt(342mg，2.24mmol)处理并搅拌至室温过夜。反应用饱和柠檬酸(35ml)淬灭。然后将混合物用饱和nahco3(35ml)、ea(40ml)和盐水(30ml)萃取，且经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝15:1)纯化残余物以得到呈淡黄色胶状物的标题化合物ama-2a(105mg，17％)。
[0402]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.01(d,j＝8.4hz,2h),7.90(d,j＝8.8hz,2h),6.90(br s,1h),4.13(m,2h),3.68(m,12h),2.64(s,3h),2.42(m,1h)。ei-ms m/z:334(m

1)。
[0403]
化合物ama-2b的制备
[0404]
将ama-2a(105mg，0.31mmol)和乙醛酸一水合物(58mg，0.63mmol)在acoh中的均匀溶液在室温在n2气氛下加热至回流6.5小时。加入另外的乙醛酸一水合物(58mg，0.63mmol)在acoh中的溶液，并使所得混合物静置过夜。加入第三部分乙醛酸一水合物(58mg，0.63mmol)在acoh中的溶液和所得混合物并搅拌6小时。将混合物在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝15:1至9:1至7:1)纯化残余物以得到呈淡黄色胶状物的标题化合物：ama-2b(39mg，32％产率，回收了35mg起始材料)。
[0405]
ei-ms m/z:390(m

1)。
[0406]
化合物ama-2的制备
[0407]
将ama-2b(14mg，0.036mmol)在干燥thf中的均匀溶液在-15℃在n2气氛下用nmm(5μl，0.043mmol)处理并且滴加i-buco2cl(7μl，0.054mmol)并使其静置40分钟。加入在thf(1ml)中的0.5m氨并搅拌40分钟。反应用h2o(10ml)淬灭并用ea(15ml)萃取。将有机层用盐水(10ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝9:1)纯化残余物以得到呈淡黄色胶状物的标题化合物ama-2(11mg，79％)。
[0408]
ei-ms m/z:389(m

1)。
[0409]
通过制备化合物ama-2的类似合成方法合成化合物ama-3。
[0410]
化合物ama-3a的制备
[0411]
产率40％，淡黄色胶状物。
[0412]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.38(s,1h),8.09(d,j＝7.6hz,1h),8.03(d,j＝8.4hz,1h),7.57-7.53(m,1h),6.95(br s,1h),4.12(m,2h),3.70-3.68(m,12h),2.66(s,3h),2.40(m,1h)。ei-ms m/z:334(m

1)。
[0413]
化合物ama-3b的制备
[0414]
产率65％，淡黄色胶状物。
[0415]
ei-ms m/z:390(m

1)。
[0416]
化合物ama-3的制备
[0417]
产率36％，淡黄色胶状物。
[0418]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.47(s,1h),8.14(d,j＝7.6hz,2h),8.02(d,j＝15.2hz,1h),7.62-7.58(m,1h),7.40(br s,1h),7.00(d,j＝14.8hz,1h),6.10(br s,1h),5.91(br s,1h),4.11(m,2h),3.72-3.67(m,12h),2.41(m,1h)。ei-ms m/z:389(m

1)。
[0419]
实施例11.化合物ama-4的制备
[0420][0421]
化合物ama-4a的制备
[0422]
将5-溴烟酸甲酯(3g，13.89mmol)、pdcl2(pph3)2(487mg，0.96mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(5.86ml，17.36mmol)在无水甲苯中的溶液在室温在n2气氛下加热至回流3小时。将混合物通过过滤，并用meoh(100ml)洗涤。将滤液在减压下浓缩。将残余物溶解在meoh(30ml)中并在室温在n2气氛下加入10m hcl(30ml)。使所得混合物静置2小时。反应用饱和na2co3(120ml)淬灭且用ea(150mlx3)萃取。将有机层用盐水(250ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝1:2)纯化残余物以获得呈白色固体的化合物ama-4a(2.22g，89％)。
[0423]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.37(s,1h),9.31(s,1h),8.79(s,1h),4.00(s,3h),2.69(s,3h)。
[0424]
化合物ama-4b的制备
[0425]
将ama-4a(636mg，3.55mmol)在meoh中的均匀溶液在室温在n2气氛下用1n naoh(10.64ml)处理并搅拌1小时。在减压下浓缩混合物后，反应用1n hcl(ph 2)淬灭并用ea(80mlx3)萃取。将有机层用盐水(150ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩以得到呈白色固体的标题化合物ama-4b。化合物ama-4b不经纯化直接用于下一反应。
[0426]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.31(s,1h),9.25(s,1h),8.64(s,1h),2.69(s,3h)。
[0427]
化合物ama-4c的制备
[0428]
将ama-4b(606mg，3.67mmol)和l-2(985g，4.40mmol)在无水dmf中的均匀溶液在室温在n2气氛下用edci(1.06g，5.50mmol)、dipea(1.92ml，11.01mmol)、hobt(843mg，5.50mmol)处理并搅拌至室温过夜。反应用ea(100mlx2)和盐水(80ml)萃取和洗涤，经无水
na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝15:1)纯化残余物以得到呈淡黄色胶状物的标题化合物ama-4c(880mg，2步产率74％)。
[0429]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.22(s,1h),9.19(s,1h),8.61(s,1h),4.08(m,2h),3.67-3.60(m,12h),2.66(s,3h),2.38(m,1h)。ei-ms m/z:335(m

1)。
[0430]
化合物ama-4d的制备
[0431]
将酒石酸二叔丁酯(500mg，1.91mmol)在meoh中的溶液在0℃在n2气氛下用naio4(489mg，2.29mmol)在h2o中的溶液处理并使其静置1.5小时。反应用h2o(40ml)淬灭并用乙醚(45mlx3)萃取，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩以得到呈无色油状物的标题化合物ama-4d。化合物ama-4d不经纯化直接用于下一反应。
[0432]
化合物ama-4e的制备
[0433]
将ama-4c(48mg，0.14mmol)和ama-4d(56mg，0.43mmol)在acoh中的均匀溶液在室温在n2气氛下加热至回流过夜。将混合物在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝15:1至9:1至7:1)纯化残余物以得到呈淡黄色胶状物的标题化合物ama-4e(27mg，48％)。
[0434]
ei-ms m/z:391(m

1)。
[0435]
化合物ama-4的制备
[0436]
将ama-4e(27mg，0.069mmol)在干燥thf中的均匀溶液在-15℃在n2气氛下用nmm(9.1ul，0.083mmol)处理并滴加i-buco2cl(13.5μl，0.104mmol)，并且搅拌40分钟。加入在thf(2ml)中的0.5m氨并将所得混合物搅拌30分钟。反应用h2o(30ml)淬灭并用ea(35ml)萃取。将有机层用盐水(30ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝15:1)纯化残余物以得到呈淡黄色胶状物的标题化合物ama-4(1.2mg，4％)。
[0437]
ei-ms m/z:390(m

1)。
[0438]
实施例12.化合物pyrmps-1的制备
[0439][0440]
化合物pyrmps-1a的制备
[0441]
将ama-4c(2.67g，16.19mmol)、哌啶hcl(1.97g，16.19mmol)和多聚甲醛(1.46g，48.57mmol)在etoh(25ml)中的混浊混合物在室温在n2气氛下用浓hcl(178μl)处理并加热至回流过夜。在使反应冷却至室温后，将混合物用丙酮(25ml)淬灭并冷却至0℃，并且搅拌1小时。通过过滤收集固体，用乙醚(50mlx2)洗涤并在高真空下干燥以得到呈白色固体的标题化合物pyrmps-1a(1.45g，30％，混合物3.21g)。
[0442]
ei-ms m/z:264(m

1)。
[0443]
化合物pyrmps-1b的制备
[0444]
将pyrmps-1a(1.45g，4.85mmol)和4-甲苯硫酚(603mg，4.85mmol)在etoh(15ml)和meoh(10ml)中的混浊混合物在室温在n2气氛下用哌啶(72μl，0.73mmol)处理并加热至回流过夜。使反应冷却至0℃1小时。通过过滤收集固体，用乙醚(50mlx2)洗涤并在高真空下干燥以得到呈白色固体的标题化合物int-5-3(154mg，11％，混合物1.31g)。
[0445]1h nmr(400hz,dmso-d6)δ9.26(d,j＝2hz,1h),9.23(d,j＝2hz,1h),8.58(m,1h),7.26(d,j＝8hz,2h),7.13(d,j＝8.4hz,2h),3.46(t,j＝7.2hz,2h),3.24(d,j＝7.2hz,2h),2.26(s,3h)。ei-ms m/z:302(m

1)。
[0446]
化合物pyrmps-1c的制备
[0447]
将pyrmps-1b(154mg，0.51mmol)在meoh(8ml)和h2o(8ml)中的混浊混合物在0℃在n2气氛下用单过硫酸氢钾复合盐(691mg，1.12mmol)处理并升温至室温6.5小时。反应用h2o(30ml)淬灭并用chcl3(50mlx4)萃取。将有机层用盐水(150ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩以得到呈白色固体的标题化合物pyrmps-1c(74g，43％)。
[0448]
ei-ms m/z:334(m

1)。
[0449]
化合物pyrmps-1的制备
[0450]
将pyrmps-1c(74mg，0.22mmol)和l-4(91mg，0.27mmol)在无水dmf(5ml)中的均匀溶液在室温在n2气氛下用hbtu(106mg，0.27mmol)、dipea(77.4μl，0.44mmol)处理，并在室温下搅拌3小时。反应用h2o(40ml)淬灭并用dcm(50mlx4)萃取。将有机层用盐水(150ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过制备型hplc纯化残余物以得到呈淡黄色胶状物的标题化合物pyrmps-1(18mg，13％，混合物43mg)。
[0451]
ei-ms m/z:622(m

1)。
[0452]
实施例13.化合物ama-5的制备
[0453][0454]
化合物ama-5a的制备
[0455]
将三甲基-1,3,5-苯三羧酸酯(34.28g，135.91mmol)在干燥thf中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用在thf(16.99ml，67.95mmol)中的4m libh4处理并加热至回流过夜。将反应冷却至室温后，将混合物用4n hcl(ph 2)酸化并用h2o(800ml)淬灭。将混合物用ea
(800mlx2)萃取。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝1:5至1:2)纯化残余物以得到呈白色固体的标题化合物ama-5a(16.75g，55％，回收了6.07g起始材料)。
[0456]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.59(s,1h),8.23(s,2h),4.81(d,j＝6hz,2h),3.95(s,6h),1.97(t,j＝5.6hz,1h)。
[0457]
化合物ama-5b的制备
[0458]
将ama-5a(16.75g，74.72mmol)在干燥dcm中的均匀溶液在室温在n2气氛下用dcc(80.53g，373.58mmol)处理并加热至回流过夜。通过快速色谱(ea:hex＝1:3)纯化反应混合物以得到呈白色固体的标题化合物ama-5b(13.84g，83％)。
[0459]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.13(s,1h),8.92(s,1h),8.72(s,2h),4.00(s,6h)。
[0460]
化合物ama-5c的制备
[0461]
将ama-5b(13.84g，62.30mmol)在干燥thf中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用在乙醚(20.77ml，62.30mmol)中的3m memgbr处理并搅拌2.5小时。在反应用饱和nh4cl(150ml)淬灭后，将混合物用ea(200ml)萃取。将有机层用盐水(150ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝1:3至1:2)纯化残余物以得到呈白色固体的标题化合物ama-5c(6.6g，44％)。
[0462]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.57(s,1h),8.24(s,2h),5.05-4.99(m,1h),3.95(s,6h),2.01(d,j＝3.6hz,1h),1.53(t,j＝6.8hz,3h)。
[0463]
化合物ama-5d的制备
[0464]
将ama-5c(6.6g，27.70mmol)在干燥dcm中的均匀溶液在室温在n2气氛下用dcc(29.86g，138.52mmol)处理并加热至回流过夜。通过快速色谱(ea:hex＝1:5)纯化反应混合物以得到呈白色固体的标题化合物ama-5d(4.75g，73％，混合物1.25g)。
[0465]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.87(m,1h),8.78(m,2h),4.00(s,6h),2.70(s,3h)。
[0466]
化合物ama-5e的制备
[0467]
将ama-5d(4.75g，20.11mmol)在丙酮中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用naoh在meoh中的溶液(845mg，21.11mmol)处理并升温至室温。将反应混合物搅拌过夜后，将所述混合物在真空中浓缩并在高真空下干燥。将残余物溶解在h2o中并用4n hcl(ph 1～2)酸化。将h2o相用ea(100mlx4)萃取，并经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝20:1)纯化残余物以得到呈淡黄色固体的标题化合物ama-5e(2.34g，52％，混合物1.72g)。
[0468]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.94(s,1h),8.85(s,1h),8.83(s,1h),4.00(s,3h),2.72(s,3h)。
[0469]
化合物ama-5f的制备
[0470]
将ama-5e(200mg，0.9mmol)和l-5(337mg，1.26mmol)在干燥dcm中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用edci(259mg，1.35mmol)、tea(376ul，2.7mmol)、hobt(207mg，1.35mmol)处理并升温至室温。将反应混合物搅拌过夜后，将反应用h2o(30ml)淬灭并用dcmc(35mlx6)萃取。将有机层用盐水(150ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea＝100％)纯化残余物以得到呈淡黄色油状物的标题化合物ama-5f(248mg，63％)。
[0471]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.71(s,1h),8.66(s,1h),8.61(s,1h),7.17(br s,1h),
4.13(d,j＝2.4hz,2h),3.98(s,3h),3.71-3.63(m,16h),2.70(s,3h),2.40(m,1h)。
[0472]
化合物ama-5g的制备
[0473]
将ama-5f(248mg，0.57mmol)和乙醛酸一水合物(410mg，4.56mmol)在acoh中的均匀溶液在室温在n2气氛下加热至回流8小时。将另外五份在acoh中的乙醛酸一水合物(210mg，2.28mmol)以4小时的间隔加入到反应混合物中。将混合物在真空中浓缩后，通过快速色谱(ea＝100％至dcm:meoh＝9:1)纯化残余物以得到呈淡黄色油状物的标题化合物ama-5g(124mg，44％)。
[0474]
ei-ms m/z:492(m

1)。
[0475]
化合物ama-5的制备
[0476]
将ama-5g(124mg，0.25mmol)在干燥thf中的均匀溶液在-15℃在n2气氛下用nmm(33μll，0.30mmol)处理并滴加i-buco2cl(49μl，0.38mmol)，并且搅拌40分钟。在向其中加入在thf(1ml)中的0.5m氨后，将混合物搅拌30分钟。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物溶解于dmso中并且用乙酸酸化。通过制备型hplc纯化混合物以得到呈淡黄色胶状物的标题化合物ama-6(28mg，23％)。
[0477]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.77(s,1h),8.75(s,1h),8.70(s,1h),8.03(d,j＝15.6hz,1h),7.79(br s,1h),7.03(d,j＝15.6hz,1h),6.40(br s,1h),6.13(br s,1h),4.12-4.09(m,2h),3.96(s,3h),3.75-3.61(m,16h),2.39(m,1h)。ei-ms m/z:491(m

1)。
[0478]
实施例14.化合物ama-6的制备
[0479][0480]
将苯酚(24.9mg，0.13mmol)和l-7(43.4mg，0.15mmol)在无水dmf中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用k2co3(27mg，0.20mmol)处理并升温至室温。将反应混合物搅拌2.5小时后，将第二份k2co3(9mg，0.07mmol)加入反应混合物中，并将混合物在40℃搅拌过夜。反应用h2o(15ml)淬灭并用dcm(20ml)萃取。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝15:1)和制备型hplc纯化残余物以得到呈淡黄色油状物的标题化合物ama-6(5.9mg，12％)。
[0481]
ei-ms m/z:393(m

1)。
[0482]
实施例15.化合物ama-7的制备
[0483][0484]
化合物ama-7a的制备
[0485]
将3-乙酰苯甲酸(5g，30.46mmol)和l-3(7.76g，30.46mmol)在无水dmf中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用tbtu(19.56g，60.92mmol)、tea(21.2ml，152.3mmol)处理。将反应升
温至室温并搅拌过夜。混合物用ea(500ml)、1n hcl(350ml)和饱和nahco3(350ml)萃取。将有机层用盐水(350ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物在高真空下干燥以得到呈深棕色油状物的标题化合物ama-7a(7.77g，70％)。
[0486]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.38-8.37(m,1h),8.10-8.07(m,1h),8.05-8.02(m,1h),7.57-7.53(m,1h),6.94(br s,1h),3.71-3.61(m,14h),3.34(d,j＝5.2hz,2h),2.66(s,3h)。ei-ms m/z:365(m

1)。
[0487]
化合物ama-7b的制备
[0488]
将seo2(365.4mg，3.29mmol)在1,4-二氧六环和h2o中的溶液在室温在n2气氛下加热至50℃30分钟。向其中缓慢加入ama-7a(300mg，0.82mmol)在1，4-二氧六环和h2o中的溶液。将反应混合物回流4小时。添加另外的seo2(182.7mg，1.65mmol)在1,4-二氧六环和h2o中的溶液，并将所得混合物搅拌过夜。在冷却至室温之后，将混合物通过过滤，并在真空中浓缩。将残余物用dcm(50mlx2)萃取并用h2o(35ml)洗涤。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物在高真空下干燥以得到呈淡黄色油状物的标题化合物ama-7b(粗品)。
[0489]
ei-ms m/z:397(m

h2o)。
[0490]
化合物ama-7的制备
[0491]
将ama-7b(97.6mg，0.26mmol)在干燥dcm中的均匀溶液在室温在n2气氛下用(三苯基亚正膦基)乙腈(77.7mg，0.26mmol)处理并搅拌过夜。反应用h2o(20ml)淬灭并用dcm(30ml)萃取。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝2:1至3:1至5:1至dcm:meoh＝20:1)和制备型hplc纯化残余物以得到呈白色胶状物的标题化合物ama-7(9.5mg，9％)。
[0492]
ei-ms m/z:402(m

1)。
[0493]
实施例16.化合物ama-8的制备
[0494][0495]
化合物ama-8a的制备
[0496]
将4-羟基苯乙酮(87mg，0.64mmol)和l-1(242mg，0.96mmol)在无水dmf(3ml)中的均匀溶液在室温在n2气氛下用k2co3(177mg，1.28mmol)处理并在室温下搅拌过夜。反应用水(10ml)淬灭并且用ea(10mlx2)萃取。将有机层用盐水(15ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝1:2)纯化残余物以得到标题化合物ama-8a(120mg，62％)。
[0497]
ei-ms m/z:307(m

)。
[0498]
化合物ama-8b的制备
[0499]
将ama-8a(120mg，0.39mmol)在acoh(4ml)中的均匀溶液在n2气氛下用乙醛酸一水合物(47mg，0.51mmol)处理。将混合物回流过夜。将另外五份在acoh中的乙醛酸一水合物
(210mg，2.28mmol)以4小时的间隔加入到反应混合物中。将混合物在真空中浓缩后，通过快速色谱(dcm:meoh＝12:1)纯化残余物以得到呈淡黄色胶状物的标题化合物ama-8b(28mg，20％)。
[0500]
ei-ms m/z:363(m

)。
[0501]
化合物ama-8的制备
[0502]
将ama-8b(24mg，0.08mmol)和碘甲烷(14μl，0.23mmol)在无水dmf(2ml)中的均匀溶液在室温在n2气氛下用k2co3(21mg，0.15mmol)处理。将反应混合物搅拌至室温3小时。反应通过加入水(5ml)淬灭且用ea(5mlx2)萃取。将有机层用盐水(8ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(ea:hex＝1:1)纯化残余物以得到标题化合物ama-8(16mg，65％)。
[0503]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.00(d,j＝8.8hz,2h),7.94(d,j＝15.6hz,1h),7.01(d,j＝8.8hz,2h),6.88(d,j＝15.6hz,1h),4.25-4.22(m,4h),3.92-3.89(m,2h),3.86(s,3h),3.76-3.75(m,2h),3.71(s,6h),2.44(s,1h)；ei-ms m/z:377(m

)。
[0504]
实施例17.化合物ama-9的制备
[0505][0506]
化合物ama-9a、ama-9b和ama-9c通过与实施例13的化合物ama-5的制备方法类似的方式合成。
[0507]
化合物ama-9a的制备
[0508]
产率77％。1h nmr(600mhz,cdcl3)δ8.71(s,1h),8.65(s,1h),8.60(s,1h),7.05(s,1h),4.12(s,2h),3.99(s,3h),3.72-3.69(m,12h),2.70(s,3h),2.38(s,1h)；ei-ms m/z:392(m

)。
[0509]
化合物ama-9b的制备
[0510]
产率27％。ei-ms m/z:448(m

)。
[0511]
化合物ama-9c的制备
[0512]
产率27％。ei-ms m/z:447(m

)。
[0513]
化合物ama-9通过与实施例15的化合物ama-7的制备方法类似的方式合成。
[0514]
产率8％。ei-ms m/z:429(m

)。
[0515]
实施例18.化合物ama-10的制备
[0516][0517]
化合物ama-10a的制备
[0518]
将ama-5d(1.05g，4.44mmol)在无水meoh(50ml)中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用naoh(356mg，8.88mmol)处理。将混合物升温至室温并回流过夜。通过小心加入稀hcl(10ml)淬灭混合物并在减压下浓缩。将水层用ea(20ml)萃取，并将所得有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。浓缩后，化合物ama-10a(984mg，100％)不经纯化直接用于下一反应。
[0519]
ei-ms m/z:209(m

)。
[0520]
化合物ama-10b、ama-10c和ama-10通过与实施例13的化合物ama-5的制备方法类似的方式合成。
[0521]
化合物ama-10b的制备
[0522]
产率84％。
[0523]
ei-ms m/z:547(m

)。
[0524]
化合物ama-10c的制备
[0525]
产率22％。
[0526]
ei-ms m/z:603(m

)。
[0527]
化合物ama-10c的制备
[0528]
产率32％。
[0529]
ei-ms m/z:602(m

)。
[0530]
实施例19.化合物pyrmps-2和pyrmps-3的制备
[0531][0532]
化合物pyrmps-2和pyrmps-3通过与实施例12的化合物pyrmps-1的制备方法类似的方式合成。
[0533]
化合物pyrmps-2的制备
[0534]
产率22％。
[0535]
ei-ms m/z:547(m

)。
[0536]
化合物pyrmps-3的制备
[0537]
产率26％。
[0538]
ei-ms m/z:900(m

)。
[0539]
实施例20.化合物mmps-1和mmps-2的制备
[0540][0541]
化合物mmps-1和mmps-2通过与实施例12的化合物pyrmps-1的制备方法类似的方式合成。
[0542]
化合物mmps-1a的制备
[0543]
产率51％，白色固体。
[0544]
ei-ms m/z:262(m

)。
[0545]
化合物mmps-1b的制备
[0546]
产率72％，白色固体
[0547]1h nmr(600hz,dmso-d6)δ8.40(s,1h),8.18-8.15(m,2h),7.66-7.63(m,1h),7.26(d,j＝7.8hz,2h),7.14(d,j＝7.8hz,2h),3.40-3.37(m,2h),3.26-3.23(m,2h),2.27(s,3h)；ei-ms m/z:301(m

1)。
[0548]
化合物mmps-1c的制备
[0549]
产率47％，淡黄色固体。
[0550]1h nmr(600hz,dmso-d6)δ8.37-8.36(m,1h),8.20-8.16(m,2h),7.81(d,j＝7.8hz,2h),7.68-7.65(m,1h),7.46(d,j＝8.4hz,2h),3.66-3.63(m,2h),3.44-3.41(m,2h),2.41(s,3h)；ei-ms m/z:333(m

1)。
[0551]
化合物mmps-1的制备
[0552]
产率60％，白色固体。
[0553]
ei-ms m/z:546(m

1)。
[0554]
化合物mmps-2的制备
[0555]
产率326％，白色固体。
[0556]
ei-ms m/z:898(m

)。
[0557]
实施例21.化合物mmps-3的制备
[0558][0559]
化合物mmps-3a的制备
[0560]
将mmps-1c(158mg，0.48mmol)和l-8(297mg，0.57mmol)在无水dmf(3ml)中的均匀溶液在室温在n2气氛下用dipea(0.25ml，1.43mmol)、hbtu(270mg，0.71mmol)处理并搅拌3小时。反应用水(10ml)淬灭并用ea(15ml
×
2)萃取。将有机层用盐水(10ml)洗涤，经无水
na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝15:1)纯化残余物以得到标题化合物mmps-3a(377mg，定量)。
[0561]
ei-ms m/z:695(m

)。
[0562]
化合物mmps-3b的制备
[0563]
将mmps-3a(100mg，0.14mmol)在干燥dcm(3ml)中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用在二氧六环(360μl，1.44mmol)中的4n hcl处理并搅拌2小时。将反应混合物在真空中浓缩后，mmps-3b(91mg，定量)不经纯化直接用于下一反应。
[0564]
ei-ms m/z:595(m

)。
[0565]
化合物mmps-3的制备
[0566]
将mmps-3b(91mg，0.144mmol)和bcn-pnp(55mg，0.173mmol)在无水dmf(2ml)中的均匀溶液在室温在n2气氛下用dipea(75μl，0.433mmol)处理并在室温下搅拌3小时。反应用水(5ml)淬灭并用ea(8ml
×
2)萃取。将有机层用盐水(8ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝15:1)纯化残余物以得到标题化合物mmps-3(44mg，38％)。
[0567]
ei-ms m/z:771(m

)。
[0568]
实施例22.化合物mmps-4的制备
[0569][0570]
化合物mmps-4通过与实施例20的化合物mmps-1的制备方法类似的方式合成。
[0571]
化合物mmps-4a的制备
[0572]
产率99％。
[0573]
ei-ms m/z:511(m

)。
[0574]
化合物mmps-4b的制备
[0575]
产率99％。
[0576]
ei-ms m/z:608(m

)。
[0577]
化合物mmps-4c的制备
[0578]
产率50％。
[0579]
ei-ms m/z:647(m

)。
[0580]
化合物mmps-4的制备
[0581]
产率8％。
[0582]
ei-ms m/z:679(m

)。
[0583]
实施例23.化合物mal-1和mal-2的制备
[0584][0585]
将n-琥珀酰亚胺基4-(n-马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸酯(30mg，0.09mmol)和l-2(18mg，0.096mmol)在干燥dcm中的均匀溶液在室温在n2气氛下用dipea(16μl，0.09mmol)处理并搅拌至室温45分钟。将反应用dcm(15ml)稀释并用1n hcl(10ml)、盐水(10ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱(dcm:meoh＝15:1)和制备型hplc纯化残余物以得到呈白色胶状物的标题化合物mal-1(14.3mg，39)。
[0586]
ei-ms m/z:407(m

1)。
[0587]
化合物mal-2通过与如上文针对化合物mal-1所述类似的合成路线合成。
[0588]
产率61％，白色胶状物。
[0589]
ei-ms m/z:4519(m

1)。
[0590]
实施例24.int-tg的制备
[0591][0592]
β-d-半乳糖五乙酸酯(5.0g，12.81mmol)在0℃在n2气氛下溶解于在acoh(20ml)中的33％hbr中。将混合物升温至室温。在室温下搅拌4小时后，将混合物在减压下浓缩，然后加入ea(1000ml)和饱和碳酸氢钠(1000ml)。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物int-tg(5.2g，99％)。
[0593]1h nmr(400hz,cdcl3)δ6.70(d,j＝4.0hz,1h),5.52(d,j＝2.4hz,1h),5.41(dd,j＝7.6,2.8hz,1h),5.05(dd,j＝6.4,4.0hz,1h),4.49(t,j＝6.4hz,1h),4.22-4.09(m,2h),2.16-2.01(m,12h)。
[0594]
实施例25.化合物l-9和l-10的制备
[0595][0596]
化合物l-9-1的制备
[0597]
在-78℃在n2气氛下，向5-羟基间苯二甲酸二甲酯(5g，23.79mmol)在干燥thf(300ml)中的溶液中缓慢加入lah(3.6g，95.15mmol)。将反应混合物在室温下搅拌17小时。反应完成后，加入15％naoh溶液(4ml)、h2o(8ml)和ea(100ml)，然后将反应混合物搅拌1小时。将混合物过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以获得化合物l-9-1(3.02g，
82％)。
[0598]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.21(s,1h),6.66(s,1h),6.58(s,2h),5.07(t,j＝6.0hz,2h),4.38(d,j＝4.6hz,4h)。
[0599]
化合物l-9-2的制备
[0600]
在n2气氛下将化合物l-9-1(2g，12.97mmol)溶解在hbr(5.0ml，33％在acoh中)中。在60℃搅拌18小时后，反应通过添加nahco3溶液(ph约8)淬灭。在反应混合物中加入蒸馏水(50ml)和ea(100ml
×
2)。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以获得化合物l-9-2(2.9g，80％)。
[0601]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.99(s,1h),6.81(s,2h),4.85(s,1h),4.41(s,2h)。
[0602]
化合物l-9的制备
[0603]
在室温在n2气氛下，向化合物l-1-2(1.0g，3.57mmol)在dcm(35ml)中的溶液中加入tea(0.45ml，3.21mmol)。通过气球引入so2f2气体，并将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物用dcm(50ml)和水(30ml)洗涤。将有机层用nahco3水溶液洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物l-2(941.7mg，73％)。
[0604]1h nmr(400hz,cdcl3)δ7.47(s,1h),7.32(s,2h),4.46(s,4h)。
[0605]
化合物l-10的制备
[0606]
在室温在n2气氛下，向化合物l-9-2(100mg，0.36mmol)在干燥dcm(3ml)中的溶液中加入咪唑(27mg，0.39mmol)和tbdms-cl(59mg，0.39mmol)。搅拌16小时后，向反应混合物中加入蒸馏水(50ml)和ea(100ml)。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物l-10(110mg，79％)。
[0607]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.00(s,1h),6.80(s,2h),4.41(s,4h),0.99(s,9h),0.21(s,6h)。
[0608]
实施例26.化合物l-11的制备
[0609][0610]
化合物l-11-1的制备
[0611]
在n2气氛下，向六甘醇(5.0g，17.71mmol)在无水dcm(178ml)中的溶液中加入ki(294mg，1.77mmol)、ag2o(4.92g，19.48mmol)和p-tscl(3.7g，19.48mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。反应完成后，将混合物通过过滤，并用dcm(100ml)洗涤塞。将滤液在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以获得化合物l-11-1(5.98g，73％)。
[0612]1h nmr(400hz,cdcl3)δ7.80(d,j＝8.4hz,2h),7.35(d,j＝8.4hz,2h),4.16(t,j＝4.8hz,2h),3.71-3.58(m,22h),2.88(br,1h),2.45(s,3h)。
[0613]
化合物l-11-2的制备
[0614]
在n2气氛下，向化合物l-11-1(5.98g，13.7mmol)在dmf(30ml)中的溶液中加入nan3(1.34g，20.55mmol)。将混合物在110℃下搅拌1小时并在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以获得化合物l-11-2(4.1g，97％)。
[0615]1h nmr(400hz,cdcl3)δ3.72-3.60(m,22h),3.39(t,j＝4.8hz,2h),2.78(br,1h)。
[0616]
化合物l-11-2a的制备
[0617]
在n2气氛下将化合物l-11-2(1.9g，6.18mmol)溶解在dcm(20ml)中，并向其中加入三乙胺(2.0ml，14.22mmol)和p-tscl(2.4g，12.36mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。反应完成后，将混合物在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物l-11-2a(2.58g，91％)。
[0618]1h nmr(400hz,cdcl3)δ7.80(d,j＝8.4hz,2h),7.35(d,j＝8.4hz,2h),4.16(t,j＝4.8hz,2h),3.70-3.61(m,16h),3.56(s,1h),3.39(t,j＝4.8hz,2h),2.45(s,3h)。
[0619]
ei-ms m/z:462(m

1)。
[0620]
化合物l-11-3的制备
[0621]
在h2气氛下，向化合物l-11-2(1.0g，3.25mmol)在etoh(5ml)中的溶液中加入5％pd/c(1.04g，0.49mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时。将混合物通过过滤以除去pd/c，并在减压下浓缩。将残余物溶解于dcm(25ml)中。加入boc2o(852.1mg，3.9mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物l-11-3(330mg，28％)。
[0622]1h nmr(400hz,cdcl3)δ5.19(br s,1h),3.73(t,j＝4.8hz,2h),3.67(s,12h),3.63-3.60(m,6h),3.54(t,j＝5.2hz,2h),3.34-3.27(m,1h),1.44(s,9h)。
[0623]
ei-ms m/z:382(m

1)。
[0624]
化合物l-11-4的制备
[0625]
将化合物l-11-3(450mg，1.18mmol)在无水thf(10ml)中的均匀溶液在0℃在n2气氛下用nah(60％分散液在矿物油中，47.2mg，1.18mmol)处理。在0℃搅拌混合物20分钟后，向其中加入l-11-2a(544.5mg，1.18mmol)。使反应升温至室温并搅拌过夜。使反应冷却，用meoh(5ml)淬灭，并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物l-11-4(582.9mg，74％)。
[0626]
化合物l-11的制备
[0627]
在0℃在n2气氛下向化合物l-11-4(582.9mg，0.87mmol)在dcm(3ml)中的溶液中加入4m hcl(在1,4-二氧六环中，1ml)。将混合物在室温下搅拌2小时。浓缩混合物以获得化合物l-11(527.6mg，定量)。
[0628]
ei-ms m/z:571(m

1)。
[0629]
实施例27.化合物int-tg1和int-tg2的制备
[0630][0631]
化合物int-tg1-1的制备
[0632]
在室温在n2气氛下向3-甲酰基-4-羟基苯甲酸(5g，43.06mmol)在dmf(100ml)中的溶液中加入苄基溴(5.1ml，43.06mmol)和nahco3(2.53g，43.06mmol)。在室温在n2气氛下将混合物搅拌过夜。反应用ea(200ml
×
2)和蒸馏水(100ml)萃取。将所得有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物int-tg1-1(2.56g，39％)。
[0633]1h nmr(400hz,cdcl3)δ11.41(s,1h),9.95(s,1h),8.34(d,j＝2.0hz,1h),8.23(dd,j＝6.4hz,2.4hz,1h),7.46-7.35(m,5h),7.04(d,j＝9.2hz,1h),5.37(s,2h)。
[0634]
化合物int-tg1-2的制备
[0635]
在室温在n2气氛下向化合物int-tg1-1(1.0g，3.90mmol)和化合物int-tg(1.6g，3.90mmol)在无水mecn(30ml)中的溶液中加入分子筛(8g)和ag2o(3.62g，15.61mmol)。在室温下，将混合物搅拌1小时，然后通过过滤。将有机层经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物int-tg1-2(2.1g，92％)。
[0636]1h nmr(400hz,cdcl3)δ10.34(s,1h),8.55(d,j＝2.0hz,1h),8.26(dd,j＝6.8,2.0hz,1h),7.45-7.35(m,5h),7.17(d,j＝8.8hz,1h),5.63-5.60(m,1h),5.50(d,j＝3.6hz,1h),5.37(s,2h),5.23(d,j＝8.0hz,1h),5.16(dd,j＝7.2,3.6hz,1h)4.24-4.10(m,4h),2.20(s,3h),2.10-2.03(m,9h)。
[0637]
化合物int-tg1-3的制备
[0638]
在0℃在n2气氛下向化合物int-tg1-2(2.1g，3.58mmol)在dcm(30ml)中的溶液中加入m-cpba(2.65g，10.74mmol)。在0℃搅拌7小时后，通过添加饱和碳酸氢钠(40ml
×
2)淬灭混合物。分离混合物，并将有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。在0℃在n2气氛下，将残余物溶解在dcm(5ml)中，并向混合物中加入水合肼(261μl，5.37mmol)。在0℃搅拌1小时后，加入ea(30ml
×
2)和1m hcl水溶液(10ml)。将所得有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以获得化合物int-tg1-3(1.1g，55％)。
[0639]
ei-ms m/z:574(m

na)
[0640]
化合物int-tg1-4的制备
[0641]
在0℃在n2气氛下，向化合物int-tg1-3(280mg，0.49mmol)在dcm(5ml)中的溶液中加入tbdms-otf(224μl，0.97mmol)和et3n(207μl，1.46mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5小时，然后通过添加柠檬酸(20ml)淬灭。将有机层用盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物int-tg1-4(246.3mg，68％)。
[0642]1h nmr(400hz,cdcl3)δ7.67(d,j＝8.4hz,1h),7.57(s,1h),7.44-7.34(m,5h),7.02(d,j＝8.4hz,1h),5.49-5.44(m,2h),5.30(s,2h),5.19(d,j＝7.6hz,1h),5.10(dd,j
＝6.8,3.2hz,1h)4.20-4.11(m,2h),4.05(t,j＝6.8hz,2h),2.19(s,3h),2.04(s,3h),2.01(d,j＝6.0hz,6h),1.02(s,9h),0.20(d,j＝15.6hz,6h)。
[0643]
化合物int-tg1-5的制备
[0644]
在室温在h2下，向化合物int-tg1-4(283.2mg，0.41mmol)在ea(5ml)中的溶液中加入pd/c(5％，87.5mg，0.04mmol)。将混合物搅拌1小时，并通过过滤，然后在减压下浓缩。化合物int-tg1-5不经进一步纯化直接用于下一反应(246mg，定量)。
[0645]1h nmr(400hz,cdcl3)δ7.67(d,j＝8.8hz,1h),7.57(s,1h),7.05(d,j＝8.4hz,1h),5.49-5.45(m,2h),5.22(d,j＝7.6hz,1h),5.12(dd,j＝7.2,3.6hz,1h)4.20-4.06(m,4h),2.19(s,3h),2.05(s,3h),2.02(d,j＝7.6hz,6h),1.01(s,9h),0.21(d,j＝15.2hz,6h)。
[0646]
化合物int-tg1的制备
[0647]
在室温在n2气氛下，向化合物int-tg1-5(243.2mg，0.41mmol)和11-叠氮基-3,6,9-三氧杂十一烷-1-胺(aldrich，cas 134179-38-7，89.5mg，0.41mmol)在dmf(5ml)中的溶液中加入pybop(275mg，0.53mmol)和dipea(176μl，1.02mmol)。将混合物在室温在n2气氛下搅拌2小时。反应用ea(30ml
×
2)和蒸馏水(10ml)萃取。将所得有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物int-tg1(272.8mg，84％)。
[0648]1h nmr(400hz,cdcl3)δ7.34(s,1h),7.31(d,j＝9.2hz,1h),7.02(d,j＝8.0hz,1h),6.73(s,1h),5.48-5.44(m,2h),5.19(d,j＝7.6hz,1h),5.10(dd,j＝6.4,3.6hz,1h),4.20-4.10(m,2h),4.06(t,j＝6.4hz,2h),3.66(s,14h),3.38(t,j＝4.4hz,2h),2.19(s,3h),2.02(t,j＝8.4hz,9h),1.00(s,9h),0.20(d,j＝14.4hz,6h)。
[0649]
ei-ms m/z:799(m

1)。
[0650]
化合物int-tg2的制备
[0651]
在室温在n2气氛下，向化合物int-tg1-5(246mg，0.41mmol)和l-9(249.5mg，0.41mmol)在dmf(3ml)中的溶液中加入pybop(278mg，0.53mmol)和dipea(179μl，1.02mmol)。将混合物搅拌2小时后，对反应混合物进行制备型hplc以获得化合物int-tg2(384.6mg，81％)。ei-ms m/z:1152(m

1)。
[0652]
实施例28.化合物int-tg3的制备
[0653][0654]
化合物int-tg3a的制备
[0655]
在室温在n2气氛下，向4-羟基苯甲醛(1g，8.19mmol)在dcm(3ml)中的溶液中加入et3n(2.28ml，16.38mmol)。通过气球引入so2f2气体，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混
合物用dcm(30ml
×
3)和盐水(30ml)洗涤，将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物int-tg3a(790mg，63％)。
[0656]1h nmr(400hz,cdcl3)δ10.06(s,1h),8.05(d,j＝8.0hz,2h),7.55(d,j＝8.8hz,2h)。
[0657]
化合物int-tg3-1的制备
[0658]
向化合物int-tg1(100mg，0.13mmol)和化合物int-tg3a(26mg，0.13mmol)在无水mecn(3ml)中的溶液中加入dbu(4μl，25μmol)。将混合物在室温下搅拌1小时并用蒸馏水(10ml)和ea(15ml
×
2)洗涤。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物int-tg3-1(103mg，94％)。
[0659]
ei-ms m/z:869(m

1)。
[0660]
化合物int-tg3-2的制备
[0661]
在0℃在n2气氛下向化合物int-tg3-1(103mg，0.12mmol)在thf(8ml)中的溶液中加入nabh4(9mg，0.24mmol)。在室温下搅拌2小时后，加入蒸馏水(10ml)和ea(10ml
×
2)。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以获得化合物int-tg3-2(101mg，98％)。
[0662]
ei-ms m/z:871(m

1)。
[0663]
化合物int-tg3-3的制备
[0664]
在0℃在n2气氛下，向化合物int-tg3-2(320.5mg，0.0.37mmol)在dcm(3ml)中的溶液中加入在dcm(165μl，0.19mmol)中的1m pbr3。在0℃搅拌2小时后。通过加入饱和碳酸氢钠(8ml
×
2)淬灭混合物。分离混合物，并将有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物int-tg3-3(202.6mg，59％)
[0665]
ei-ms m/z:934(m

1)。
[0666]
化合物int-tg3的制备
[0667]
在室温在n2气氛下，向化合物int-tg3-3(10mg，0.01mmol)在dmf(1ml)中的溶液中加入二甲胺(0.1ml)。在室温下搅拌10分钟后，通过制备型hplc纯化反应混合物以获得化合物int-tg3(6mg，63％)。ei-ms m/z:898(m

1)。
[0668]
实施例29.化合物l-12的制备
[0669][0670]
化合物l-12-1的制备
[0671]
向香草酸(50.0g，0.30mol)在meoh(700ml)中的溶液中滴加socl2(207ml，2.85mol)并将所得混合物在0℃在n2气氛下搅拌，然后在室温下搅拌过夜。反应完成后，将混合物在减压下浓缩。用饱和nahco3水溶液将反应调节至ph 7至8，然后用蒸馏水(100ml)和ea(200ml
×
2)稀释。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化
残余物以获得化合物l-12-1(54.2g，定量)
[0672]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.64(dd,j＝6.4,1.6hz,1h),7.55(s,1h),6.94(d,j＝8.4hz,1h),6.05(s,1h),3.95(s,3h),3.89(s,3h)。
[0673]
化合物l-12-2的制备
[0674]
在n2气氛下向化合物l-12-1(54.2g，0.30mol)在dmf(200ml)中的溶液中加入k2co3(61.6g，0.45mol)和苄基溴(39.0ml，0.33mol)。在100℃搅拌6小时后，将混合物冷却至室温并用蒸馏水(100ml)和ea(200ml
×
2)稀释。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化残余物以获得化合物l-12-2(79.8g，98％)。
[0675]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.60(dd,j＝6.4,2.0hz,1h),7.56(d,j＝2.0hz,1h),7.44-7.31(m,5h),6.89(d,j＝8.4hz,1h),5.22(s,2h),3.94(s,3h),3.88(s,3h)。
[0676]
化合物l-12-3的制备
[0677]
在n2气氛下将化合物l-12-2(79.8g，0.29mol)溶解在乙酸酐(550ml)中，然后冷却至0℃。分批加入硝酸铜(ii)半-(五水合物)(75.0g，0.32mol)。在0℃搅拌6小时后，将反应用冰水(800ml)淬灭。将固体过滤并用蒸馏水(100ml)和己烷(200ml
×
2)洗涤以获得化合物l-12-3(85.5g，92％)。
[0678]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.52(s,1h),7.45-7.35(m,5h),7.08(s,1h),5.22(s,2h),3.98(s,3h),3.91(s,3h)。
[0679]
化合物l-12-4的制备
[0680]
向化合物l-12-3(85.5g，0.27mol)在thf(800ml)和meoh(300ml)中的溶液中加入2n naoh(404ml，0.81mol)。在65℃搅拌5小时后，将反应冷却至室温并通过添加2n hcl溶液调节至ph 2，然后用蒸馏水(100ml)和ea(300ml
×
2)萃取。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。收集残余物固体并用己烷洗涤以获得化合物l-12-4(79.2g，97％)。
[0681]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.69(s,1h),7.47-7.35(m,5h),7.03(s,1h),5.24(s,2h),3.91(s,3h)。
[0682]
化合物l-12的制备
[0683]
在0℃在n2气氛下，向化合物l-12-4(100mg，0.33mmol)在无水thf(500μl)和无水dcm(1.5ml)中的溶液中缓慢滴加草酰氯(42.4μl)和1滴dmf。搅拌30分钟后，将反应混合物在减压下浓缩。化合物l-12不经进一步纯化直接用于下一反应。
[0684]
实施例30.化合物mono-1的制备
[0685][0686]
化合物mono-1-1的制备
[0687]
向l-2-噻吩基丙氨酸(500mg，2.92mmol)在蒸馏水(5.0ml)中的溶液中滴加浓hcl(206μl)并在0℃在n2气氛下搅拌，然后向其中加入甲醛(37％，261μl，3.5mmol)。将混合物
回流过夜。反应完成后，将混合物在减压下浓缩。将残余物悬浮在ipa(3.0ml)中并向其中加入4m hcl(在1,4-二氧六环中，1.0ml)。搅拌2小时后，过滤固体，并用ipa(5ml)、醚(20ml)洗涤以获得化合物mono-1-1(495.7mg，77％)
[0688]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.95(br s,1h),7.48(d,j＝5.2hz,1h),6.94(d,j＝5.2hz,1h),4.48-4.44(m,1h),4.28(d,j＝15.6hz,1h),4.18(d,j＝16.0hz,1h),3.39(dd,j＝11.6,5.2hz,1h),3.17-3.10(m,1h)。ei-ms m/z:184(m

1)。
[0689]
化合物mono-1-2的制备
[0690]
在n2气氛下，将化合物mono-1-1(495.7mg，2.25mmol)溶解在meoh(10.0ml)中，然后冷却至0℃。在0℃下滴加socl2(491.3μl，6.76mmol)。然后将反应混合物回流3小时。反应完成后，将混合物在减压下浓缩。将残余物用乙醚(5ml
×
2)洗涤以获得化合物mono-1-2(521.5mg，99％)
[0691]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.22(br s,2h),7.49(d,j＝5.2hz,1h),6.94(d,j＝5.2hz,1h),4.65-4.61(m,1h),4.30(d,j＝15.6hz,1h),4.19(d,j＝15.6hz,1h),3.80(s,3h),3.60(dd,j＝11.6,5.2hz,1h),3.21-3.14,(m,1h)。ei-ms m/z:198(m

1)。
[0692]
化合物mono-1-3的制备
[0693]
在0℃下向化合物l-12(856.5mg，2.66mmol)在无水thf(3.0ml)中的溶液中加入溶解于dmf(3.0ml)和dipea(772.8μl，4.44mmol)中的化合物mono-1-2(518.5mg，2.22mmol)，并将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。反应完成后，将蒸馏水(20ml)和ea(50ml
×
2)加入到反应混合物。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物mono-1-3(888.5mg，89％)
[0694]
ei-ms m/z:483(m

1)。
[0695]
化合物mono-1-4的制备
[0696]
在-78℃在n2气氛下，向mono-1-3(880mg，1.82mmol)在无水dcm(5.0ml)和甲苯(15.0ml)中的溶液中滴加dibal(3.6ml，3.6mmol，1.0m在甲苯中)。将反应混合物在-78℃搅拌3小时。在-78℃用meoh(5ml)和2n hcl(20.0ml)淬灭反应。将蒸馏水(20ml)和ea(50ml
×
2)加入到反应混合物。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物mono-1-4(701.9mg，85％)。
[0697]
ei-ms m/z:453(m

1)。
[0698]
化合物mono-1-5的制备
[0699]
在室温下向mono-1-4(700mg，1.55mmol)在thf(15.0ml)和蒸馏水(3.0ml)中的溶液中加入na2s2o4(2.2g，12.4mmol)4小时。在反应完成后，用meoh(5ml)淬灭反应。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物悬浮在甲苯(20ml)中并蒸发以帮助除去任何剩余的水。通过在高真空下放置过夜将获得的白色固体完全干燥。将残余物悬浮在无水meoh(10ml)中，然后加入乙酰氯(1.1ml，15.5mmol)。15分钟后过滤混浊溶液并用无水meoh(5ml
×
2)洗涤固体。将滤液搅拌2小时。将反应混合物用nahco3溶液(ph约7)淬灭，然后将蒸馏水(20ml)和ea(50ml
×
2)加入到反应混合物。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物mono-1-5(701.9mg，85％)
[0700]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.55(d,j＝5.6hz,1h),7.47(m,5h),7.22(d,j＝5.2hz,1h),6.95(d,j＝5.2hz,1h),6.85(s,1h),5.26-5.14(m,2h),4.98(d,j＝16.4hz,1h),4.44
(d,j＝16.8hz,1h),4.08-4.02(m,1h),3.98(s,3h),3.32-3.26(m,1h)。
[0701]
ei-ms m/z:453(m

1)。
[0702]
化合物mono-1的制备
[0703]
在0℃向mono-1-5(60mg，0.15mmol)在无水dcm(3ml)中的溶液中加入在dcm(2.0ml)中的甲磺酸(700μl)，并将所得混合物在℃搅拌2小时。将反应用nahco3溶液(ph约7)淬灭，然后将蒸馏水(5ml)和ea(20ml
×
2)加入到反应混合物。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物mono-1(38.3mg，82％)。
[0704]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.58(d,j＝5.6hz,1h),7.54(s,1h),7.23(d,j＝5.2hz,1h),6.95(d,j＝5.2hz,1h),6.89(s,1h),6.06(s,1h),5.30(s,1h),4.99(d,j＝16.4hz,1h),4.44(d,j＝16.4hz,1h),4.10-4.04(m,1h),3.99(s,3h),3.32-3.26(m,1h)。
[0705]
ei-ms m/z:315(m

1)。
[0706]
实施例31.化合物mono-2的制备
[0707][0708]
化合物mono-2-1的制备
[0709]
在-13℃下，在30分钟内向fmoc-his(trt)-oh(15.0g，24.2mmol)和hobt(5.0g，24.2mmol)在无水thf(200ml)中的溶液中滴加在thf(40ml)和meoh(20ml)中的dcc(1.15g，8mmol)。使反应混合物缓慢升温至室温，同时搅拌5小时。反应完成后，将蒸馏水(50ml)和dcm(200ml
×
2)加入到反应混合物。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物mono-2-1(13.0g，84％)
[0710]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.75(d,j＝7.6hz,2h),7.62(t,j＝7.6hz,2h),7.41-7.28(m,14h),7.15-7.06(m,7h),6.54(s,1h),6.52(d,j＝7.6hz,1h),4.66-4.59(m,1h),4.38-4.22(m,2h),3.63(s,3h),3.07(t,j＝6.4hz,1h)。ei-ms m/z:634(m

1)。
[0711]
化合物mono-2-2的制备
[0712]
在0℃向化合物mono-2-1(13g，20.51mmol)在dmf(50ml)中的溶液中加入碘甲烷
(3.8ml，61.54mmol)。使反应混合物升温至室温并且搅拌5小时。反应完成后，将混合物在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物mono-2-2(11g，83％)
[0713]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.42(s,1h),7.76(d,j＝7.6hz,2h),7.70-7.60(m,2h),7.46-7.20(m,19h),6.89(s,1h),6.60(d,j＝7.2hz,1h),4.70-4.62(m,1h),4.30-4.12(m,3h),4.01(s,3h),3.67(s,3h),3.50-3.28(m,2h)。ei-ms m/z:648(m

1)。
[0714]
化合物mono-2-3的制备
[0715]
在0℃在n2气氛下向化合物mono-2-2(11g，16.95mmol)在dcm(150ml)中的溶液中加入tfa(40ml)和三乙基硅烷(8.12ml，50.86mmol)。使反应升温至室温，并搅拌6小时。反应完成后，将混合物在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物mono-2-3(6.25g，91％)。
[0716]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.87(s,1h),7.78(d,j＝7.2hz,2h),7.59(d,j＝7.6hz,2h),7.45-7.30(m,4h),7.09(s,1h),5.69(d,j＝6.0hz,1h),4.64-4.50(m,2h),4.48-4.38(m,1h),3.79(s,6h),3.51-3.44(m,1h),3.29-3.10(m,2h)。ei-ms m/z:407(m

1)。
[0717]
化合物mono-2-4的制备
[0718]
在0℃在n2气氛下，向化合物mono-2-3(6.25g，15.37mmol)在dcm(150ml)中的溶液中加入哌啶(3.0ml，30.74mmol)。使反应混合物升温至室温并且搅拌7小时。反应完成后，将混合物在减压下浓缩以获得化合物mono-2-4(2.65g，95％)。
[0719]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.51(s,1h),6.87(s,1h),3.78-3.69(m,4h),3.63(s,3h),3.09-2.84(m,2h)。ei-ms m/z:184(m

1)。
[0720]
化合物mono-2-5的制备
[0721]
在n2气氛下将化合物mono-2-4(2.65g，14.46mmol)溶解在蒸馏水(100ml)中，然后将反应混合物冷却至0℃。在0℃下滴加浓hcl(2.5ml)，然后滴加甲醛(37％，2.2ml，28.93mmol)。将反应混合物回流过夜。反应完成后，将混合物在减压下浓缩。将残余物悬浮在ipa(20ml)中并加入4m hcl(在1,4-二氧六环中，4.0ml)。将反应混合物搅拌2小时。将固体过滤并用ipa(5ml)和醚(10ml
×
2)洗涤以获得化合物mono-2-5(3.14g，99％)
[0722]
ei-ms m/z:182(m

1)。
[0723]
化合物mono-2-6的制备
[0724]
在0℃下，向mono-2-5(3.14g，14.43mmol)在meoh(100ml)中的溶液中滴加socl2(2.5ml，35.15mmol)。在将反应混合物回流5小时后，将混合物在减压下浓缩。将残余物用醚(25ml
×
2)洗涤以获得化合物mono-2-6(2.18g，65％)。
[0725]
ei-ms m/z:196(m

1)。
[0726]
化合物mono-2-7的制备
[0727]
在0℃下向化合物l-12(3.93g，12.23mmol)和化合物mono-2-6(2.18g，9.41mmol)在无水thf(30ml)和dmf(30ml)中的溶液中加入dipea(4.9ml，28.22mmol)。在室温下搅拌2小时后，将混合物用蒸馏水(200ml)和ea(1000ml)淬灭。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物mono-2-7(2.81g，62％)。
[0728]
ei-ms m/z:481(m

1)。
[0729]
化合物mono-2-8的制备
[0730]
在-78℃在n2气氛下向化合物mono-2-7(2.5g，5.20mmol)在无水dcm(12.5ml)和甲
苯(37.5ml)中的溶液中滴加dibal(10.4ml，10.41mmol，1.0m在甲苯中)。在-78℃下搅拌5小时后，在相同温度下用meoh(1.0ml)和2n hcl(100ml)淬灭混合物。将混合物相继用水(100ml)和dcm(200ml)稀释，然后将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物mono-2-8(1.21g，52％)。
[0731]
ei-ms m/z:451(m

1)。
[0732]
化合物mono-2-9的制备
[0733]
在室温下向化合物mono-2-8(1.2g，2.66mmol)在thf(100ml)和蒸馏水(70ml)中的溶液中加入na2s2o4(3.7g，21.31mmol)。搅拌6小时后，反应用meoh(20ml)淬灭。通过使用甲苯作为共溶剂将混合物在减压下浓缩三次，从而除去水。将所得黄色固体悬浮于无水meoh(200ml)中，并且向其中加入乙酰氯(1.9ml，26.64mmol)。搅拌15分钟后，通过加入饱和nahco3溶液将反应混合物的ph调节至8，并用蒸馏水(250ml)、meoh(250ml)和dcm(200ml)稀释。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物mono-2-9(918mg，78％)。
[0734]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.58(d,j＝5.6hz,1h),7.57(s,1h),7.52(s,1h),7.49-7.27(m,5h),6.84(s,1h),5.26-5.15(m,2h),4.66(s,2h),4.16(t,j＝6.0hz,1h),3.97(s,3h),3.67(s,3h),3.22-2.94(m,2h)。ei-ms m/z:403(m

1)。
[0735]
化合物mono-2的制备
[0736]
在0℃下向化合物mono-2-9(50mg，0.12mmol)在无水dcm(2ml)中的溶液中加入在dcm(0.2ml)中的甲磺酸(0.1ml)。在室温下搅拌1小时后，通过加入饱和nahco3溶液将混合物的ph调节至8。通过制备型hplc纯化残余物以获得化合物mono-2(27mg，71％)
[0737]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.34(br s,1h),7.68(s,1h),7.28(s,1h),6.42(s,1h),4.77(d,j＝16.0hz,1h),4.56(d,j＝16.0hz,1h),4.33(d,j＝7.6hz,1h),4.10-4.02(m,1h),3.84(s,3h),3.66(s,3h),3.02-2.82(m,2h)。ei-ms m/z:313(m

1)。
[0738]
实施例32.化合物mono-3的制备
[0739][0740]
化合物m-3-1的制备
[0741]
在0℃在n2气氛下向(s)-(-)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(5.0g，28.22mmol)在meoh(140ml)中的溶液中滴加socl2(2.30ml，31.04mmol)。于40℃搅拌21小时后，将混合物在减压下浓缩。将残余物用乙醚(25ml
×
2)洗涤以获得化合物m-3-1(6.42g，产率99％)。
[0742]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.02(s,2h),7.27(s,4h),4.60-4.56(m,1h),4.39-4.29(m,2h),3.82(s,3h),3.19-3.12(m,2h)；ei-ms m/z:192(m

1)。
[0743]
化合物m-3-2的制备
[0744]
在0℃下向化合物l-12(9.07g，28.22mmol)在无水thf(50ml)中的溶液中加入在thf(100ml)和tea(7.9ml，56.43mmol)中的化合物m-3-1(6.42g，28.22mmol)。在室温下搅拌2小时后，将反应用蒸馏水(500ml)和ea(800ml)稀释。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物m-3-2(12.01g，90％)。ei-ms m/z:477(m

1)。
[0745]
化合物m-3-3的制备
[0746]
在-78℃在n2气氛下向化合物m-3-2(4g，8.39mmol)在无水dcm(18ml)和甲苯(52ml)中的溶液中滴加dibal(16.8ml，16.79mmol，1.0m在甲苯中)。在-78℃下搅拌4小时后，在-78℃用meoh(0.4ml)、2n hcl(25ml)淬灭反应。向其中加入蒸馏水(100ml)和ea(500ml)。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物m-3-3(3.07g，82％)。
[0747]
ei-ms m/z:447(m

1)。
[0748]
化合物m-3-4的制备
[0749]
在室温下向化合物m-3-3(3g，6.72mmol)在thf(130ml)和蒸馏水(86ml)中的溶液中加入na2s2o4·
2h2o(11.3g，53.76mmol)。搅拌5小时后，通过使用甲苯作为共溶剂将反应在减压下浓缩四次，从而除去水。将所得黄色固体溶解在无水meoh(220ml)中，并且向其中加入乙酰氯(4.8ml，67.19mmol)。搅拌15分钟后，通过加入饱和nahco3溶液将反应混合物的ph调节至7，并用蒸馏水(100ml)和ea(250ml
×
2)稀释。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物m-3-4(2.48g，93％)。
[0750]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.55(s,1h),7.45-7.27(m,10h),6.84(s,1h),5.24-5.15(m,2h),5.00(d,j＝15.2,1h),4.56(d,j＝15.6,1h),3.97(s,3h),3.93-3.92(m,1h),3.31-3.12(m,2h).；ei-ms m/z:399(m

1)。
[0751]
化合物m-3的制备
[0752]
在0℃下向化合物m-3-4(1g，2.51mmol)在无水dcm(10ml)中的溶液中加入在dcm(10ml)中的甲磺酸(5ml)。在0℃下搅拌3小时后，将混合物用nahco3溶液淬灭，然后用蒸馏水(100ml)和ea(400ml)稀释。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物m-3(703mg，91％)。
[0753]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.54(s,1h),7.48(d,j＝4.8hz,1h),7.37-7.26(m,4h),6.88(s,1h),6.03(s,1h),5.00(d,j＝15.6hz,1h),4.56(d,j＝15.6hz,1h),3.98(s,3h),3.95-3.90(m,1h),3.30-3.13(m,2h)。
[0754]
ei-ms m/z:309(m

1)。
[0755]
实施例33.化合物d-101的制备
[0756][0757]
在室温在n2气氛下，向化合物mono-2(2.0mg，0.005mmol)和化合物l-10(3.3mg，0.010mmol)在dmf(1.0ml)中的溶液中加入k2co3(2.0mg，0.012mmol)。搅拌3小时后，通过制备型hplc纯化反应混合物以获得化合物d-101(1.2mg，34％)。
[0758]
ei-ms m/z:743(m

1)。
[0759]
实施例34.化合物d-102的制备
[0760][0761]
化合物d-102a的制备
[0762]
在室温在n2气氛下向化合物mono-1(100mg，0.318mmol)和1,3,5-三溴甲基苯(57mg，0.159mmol)在dmf(3ml)中的溶液中加入k2co3(66mg，0.477mmol)。搅拌3小时后，通过制备型hplc纯化反应混合物以获得化合物d-102a(62mg，48％)。
[0763]
ei-ms m/z:824(m

1)。
[0764]
化合物d-102的制备
[0765]
在室温在n2气氛下，向化合物d-102a(62mg，0.075mmol)在dmf(1ml)中的溶液中加入在thf(0.5ml)中的1m二甲胺。搅拌1小时后，通过制备型hplc纯化反应混合物以获得化合物d-102(39mg，60％)。
[0766]
ei-ms m/z:788(m

1)。
[0767]
实施例35.化合物d-103的制备
[0768][0769]
化合物d-103通过实施例34中所述的类似合成路线合成。
[0770]
化合物d-103a的制备
[0771]
产率42％。
[0772]
ei-ms m/z:812(m

1)。
[0773]
化合物d-103的制备
[0774]
产率17％。
[0775]
ei-ms m/z:776(m

)。
[0776]
实施例36.化合物mmaf-ome的制备
[0777][0778]
mmaf-ome通过与美国专利7,423,116和7,498,298以及国际专利申请公布wo2002/088172中所述的类似合成方法合成，其各自以引用的方式整体并入本文。
[0779]
实施例37.化合物int-tg4的制备
[0780][0781]
化合物int-tg4-1的制备
[0782]
向化合物int-tg1(100mg，0.13mmol)和化合物int-tg3a(26mg，0.13mmol)在无水mecn(3ml)中的溶液中加入dbu(4μl，25μmol)。在室温下搅拌混合物1小时并用蒸馏水(10ml)和ea(10ml
×
2)洗涤。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物int-tg4-1(103mg，94％)。
[0783]
ei-ms m/z:869(m

)。
[0784]
化合物int-tg4-2的制备
[0785]
在0℃在n2气氛下向化合物int-tg4-1(103mg，0.12mmol)在thf(8ml)中的溶液中加入nabh4(9mg，0.24mmol)。在室温下搅拌2小时后，加入蒸馏水(10ml)和ea(10ml
×
2)。将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以获得化合物int-tg4-2(101mg，98％)。
[0786]
ei-ms m/z:871(m

)。
[0787]
化合物int-tg4的制备
[0788]
在室温在氮气气氛下向化合物int-tg4-2(47mg，54μmol)在dmf(2ml)中的溶液中加入双(4-硝基苯基)碳酸酯(25mg，81μmol)和dipea(14μl，81μmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。加入蒸馏水(10ml)和ea(10ml
×
2)，将有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱纯化残余物以获得化合物int-tg4(53mg，94％)。
[0789]
ei-ms m/z:1036(m

)。
[0790]
实施例38.化合物t-int-1(b-3)的制备
[0791][0792]
化合物t-int-1a的制备
[0793]
在室温在n2气氛下向化合物int-tg4(65mg，0.063mmol)和mmaf-ome(52mg，0.069mmol)在dmf(1ml)中的溶液中加入hobt(2mg，0.013mmol)、dipea(12μl，0.069mmol)和吡啶(330μl)。搅拌过夜后，用1n hcl将混合物调节至ph 2至3，并用ea(8ml
×
2)萃取。将有机层用蒸馏水(8ml)和盐水(12ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩。对残余物进行柱色谱以获得化合物t-int-1a(73mg，71％)。
[0794]
ei-ms m/z:1644(m
1
)。
[0795]
化合物t-int-1的制备
[0796]
在0℃在n2气氛下，将t-int-1a(73mg，0.044mmol)在无水meoh(1.5ml)中的均匀溶液用lioh(14mg，0.333mmol)和蒸馏水(1.5ml)处理并搅拌至室温2小时。反应用1n hcl(2ml)淬灭，并且通过制备型hplc色谱纯化反应混合物以得到标题化合物t-int-1(45mg，69％)。
[0797]
ei-ms m/z:1462(m

)。
[0798]
实施例39.化合物t-int-2的制备
[0799]
[0800]
化合物t-int-2-1的制备
[0801]
在30℃在n2气氛下，向化合物mono-2(14mg，0.04mmol)和化合物l-9(8.0mg，0.02mmol)在dmf(0.6ml)中的溶液中加入k2co3(9.3mg，0.07mmol)。搅拌3小时后，通过制备型plc纯化反应混合物以获得化合物t-int-2-1(5.4mg，29％)。ei-ms m/z:825(m

1)。
[0802]
化合物t-int-2-2的制备
[0803]
在室温在n2气氛下向化合物t-int-2-1(7.5mg，0.01mmol)和化合物int-tg1(14mg，0.02mmol)在mecn(0.5ml)和dmf(0.5ml)中的溶液中加入bemp(1μl，0.004mmol)。在室温下搅拌5小时后，通过hplc纯化反应混合物以获得化合物t-int-2-2(67mg，83％)。ei-ms m/z:1490(m

1)。
[0804]
化合物t-int-2的制备
[0805]
在n2气氛下，向化合物t-int-1-2(8.1mg，0.01mmol)在meoh(1ml)和dcm(0.1ml)中的溶液中加入k2co3(5.6mg，0.04mmol)。在0℃下搅拌1小时后，通过hplc纯化反应混合物以获得化合物t-int-2(5.5mg，76％)。ei-ms m/z:1322(m

1)。
[0806]
实施例40.化合物t-int-3的制备
[0807][0808]
化合物t-int-3-1的制备
[0809]
在40℃在n2气氛下，向化合物d-103(22.8mg，0.03mmol)和化合物int-tg3-3(27.4mg，0.03mmol)在dmf(2ml)中的溶液中加入dipea(12ul，0.07mmol)。在室温下搅拌5小时后，通过制备型hplc纯化反应混合物以获得化合物t-int-3-1(28.9mg，71％)。
[0810]
ei-ms m/z:1630(m

1)。
[0811]
化合物t-int-3的制备
[0812]
在n2气氛下向化合物t-int-3-1(28.9mg，0.02mmol)在meoh(2ml)中的溶液中加入k2co3(12.2mg，0.09mmol)。在0℃在n2气氛下搅拌1小时后，通过制备型hplc纯化反应混合物以获得化合物t-int-3(18.4mg，71％)。
[0813]
ei-ms m/z:1462(m

1)。
[0814]
实施例41.化合物t-1和t-2的制备
[0815][0816]
在室温在氮气气氛下，向t-int-1(2mg，1.37μmol)和ama-5(2mg，4.11μmol)在dmso(4.5ml)中的均匀溶液中加入(bimc4a)3(4.5mg，5.48μmol)、cubr(6.42mg，44.8μmol)，并将
所得混合物搅拌10分钟。通过制备型hplc色谱纯化反应混合物以得到标题化合物t-1(0.4mg，15％)。ei-ms m/z:954(m

1/2)。
[0817]
化合物t-2通过与化合物t-1的制备方法类似的方式合成。
[0818]
产率33％，白色固体。ei-ms m/z:976(m/2

1)。
[0819]
实施例42.化合物t-3的制备
[0820][0821]
化合物t-3通过与实施例41的化合物t-2的制备方法类似的方式合成。
[0822]
产率40％，白色固体。ei-ms m/z:906(m

1)。
[0823]
实施例43.化合物t-4的制备
[0824][0825]
化合物t-4通过与实施例41的化合物t-2的制备方法类似的方式合成。
[0826]
产率77％，白色固体。ei-ms m/z:977(m

1)。
[0827]
实施例44.化合物t-5的制备
[0828][0829]
在室温在n2气氛下将t-int-1(2.5mg，0.0017mmol)和mal-1(2.3mg，0.0051mmol)在dmso(3461μl)中的均匀溶液用在dmso(1368μl，0.0068mmol)中的(bimc4a)3处理并搅拌10分钟。将在dmso中的cubr(171μl，0.017mmol)加入到反应混合物中并将所得混合物搅拌5分钟。通过制备型hplc(柱：innoval ods-2 10μm，21.2x250mm；流速：15ml/min，a缓冲液水中的0.1％甲酸/b缓冲液acn中的0.1％甲酸，方法梯度，溶剂a:溶剂b 95:5至5:95，1小时，波长214nm)纯化反应混合物以获得呈白色固体的化合物11(2.1mg，64％)。
[0830]
ei-ms m/z:957(m/2

1)。
[0831]
实施例45.化合物t-6的制备
[0832][0833]
化合物t-6通过与实施例44的化合物t-5的制备方法类似的方式合成。
[0834]
产率70％，白色固体。ei-ms m/z:1007(m/2
1
)。
[0835]
实施例46.化合物t-7的制备
[0836][0837]
化合物t-7通过与实施例44的化合物t-5的制备方法类似的方式合成。
[0838]
产率53％，白色固体。ei-ms m/z:1181(m/2
1
)。
[0839]
实施例47.化合物t-8的制备
[0840][0841]
化合物t-8通过与实施例44的化合物t-5的制备方法类似的方式合成。
[0842]
产率15％，白色固体。ei-ms m/z:935(m/2
1
)。
[0843]
实施例48.化合物t-9的制备
[0844][0845]
化合物t-9通过与实施例44的化合物t-5的制备方法类似的方式合成。产率61％，
白色固体。ei-ms m/z:957(m/2
1
)。
[0846]
实施例49.化合物t-10的制备
[0847][0848]
化合物t-10通过与实施例44的化合物t-5的制备方法类似的方式合成。
[0849]
产率65％，白色固体。ei-ms m/z:963(m/2
1
)。
[0850]
实施例50.化合物“bg-sig”的制备
[0851][0852]
bg-sig通过与美国专利10,383,949中所述的类似途径合成，所述专利以引用的方式整体并入本文。
[0853]
实施例51.化合物t-int-4的制备
[0854][0855]
t-int-4-1、t-int-4-2和t-int-4-3通过与美国专利10,383,949中所述的类似路线合成，所述专利以引用的方式整体并入本文。
[0856]
化合物t-int-4-1的制备
[0857]
产率82％；ei-ms m/z:1357(m
1
)。
[0858]
化合物t-int-4-2的制备
[0859]
产率76％；ei-ms m/z:1257(m
1
)。
[0860]
化合物t-int-4-3的制备
[0861]
产率75％；ei-ms m/z:1457(m
1
)。
[0862]
化合物t-int-4的制备
[0863]
化合物t-int-4通过与实施例38的化合物t-int-1的制备方法类似的方式合成。
[0864]
收率88x％；ei-ms m/z:1303(m
1
)。
[0865]
实施例52.化合物t-11的制备
[0866][0867]
化合物t-11通过与实施例44的化合物t-5的制备方法类似的方式合成。
[0868]
产率80％，白色固体。ei-ms m/z:846(m/2
1
)。
[0869]
实施例53.化合物t-12的制备
[0870][0871]
化合物t-12通过与实施例44的化合物t-5的制备方法类似的方式合成。
[0872]
产率71％，白色固体。ei-ms m/z:925(m/2
1
)。
[0873]
实施例54.化合物t-13的制备
[0874][0875]
化合物t-13通过与实施例44的化合物t-5的制备方法类似的方式合成。
[0876]
产率56％，白色固体。ei-ms m/z:877(m/2
1
)。
[0877]
实施例55.化合物t-14的制备
[0878][0879]
化合物t-14通过与实施例44的化合物t-5的制备方法类似的方式合成。
[0880]
产率70％，白色固体。ei-ms m/z:897(m/2
1
)。
[0881]
实施例56.化合物“mps-1”的制备
[0882][0883]
化合物mps-1以类似于实施例20中所述的方式合成。
[0884]1h nmr(400hz,cdcl3)δ8.04-7.99(m,4h),7.81(d,j＝8.4hz,2h),7.46(d,j＝8.4hz,2h),3.63(t,j＝7.2hz,2h),3.41(t,j＝7.2hz,2h),2.44(s,3h)。ei-ms m/z:333(m

1)。
[0885]
实施例57.化合物“参比a”的制备
[0886][0887]
参比a通过实施例20中所述的类似合成路线合成。
[0888]
ei-ms m/z:621(m

1)。
[0889]
实施例58.化合物“n-ac-cys-ama-9c”的制备
[0890][0891]
在室温在n2气氛下将ama-9c(11mg，0.025mmol)在pbs缓冲液ph 7.4(2ml)和dmso(0.2ml)中的均匀溶液用n-ac-半胱氨酸(4.2mg，0.026mmol)处理并搅拌1.5小时。在检查lc-mass后，将反应混合物原位用于下一步。
[0892]
ei-ms m/z:610(m )。
[0893]
实施例59.化合物“n-ac-cys-ama-10”的制备
[0894][0895]
化合物n-ac-cys-ama-10通过与实施例59的化合物n-ac-cys-ama-9c的制备方法类似的方式合成。
[0896]
生物测试
[0897]
实施例60.缀合物的制备
[0898]
用于缀合的抗体的还原/氧化：将半胱氨酸工程化单克隆抗体用在4mm tris ph 7.3和1mm edta中约20-50倍过量的tcep(三(2-羧乙基)膦盐酸盐或dtt(二硫苏糖醇)在37℃下还原1小时。将还原的thiomab稀释并加载到pbs中的pd-10柱上。所述柱用10mm pbs ph 7.3洗脱。通过空气氧化重新建立经洗脱的还原的thiomab。通过测定溶液在280nm处的吸光度的还原抗体浓度，以及通过与dtnb(aldrich，cas no d8130)反应和测定412nm处的吸光度确定硫醇浓度来检查硫醇/ab值。
[0899]
缀合方法1：
[0900]
将在dmso中的实施例41中获得的化合物t-1(3.80μl，3.0mmol，作为接头-毒素中间体)用还原的再氧化抗体(45μl，0.053mmol)处理并在室温下轻轻搅拌3小时。将硼氢化钠(3.80μl，300mmol)添加到反应混合物的溶液中，并在37℃下孵育1小时以阻断可逆的去缀合反应。缀合混合物通过pd-10柱加载和洗脱，以除去过量的药物-接头中间体和其他杂质。
[0901]
缀合方法2：
[0902]
在还原和再氧化反应之后，将抗体溶解在pbs中。将实施例42和43中获得的化合物t-3和t-4(8.86μl，3.0mmol，作为接头-毒素中间体)在dmso中的溶液用还原的再氧化抗体(70μl，0.053mmol)处理并在室温下轻轻搅拌3小时。将羟胺(8.86μl，1,500mmol)加入到反应混合物的溶液中，并在37℃下孵育8小时以阻断可逆的去缀合反应。缀合混合物通过pd-10柱加载和洗脱，以除去过量的药物-接头中间体和其他杂质。
[0903]
参考文献中提出的方法，将实施例41、42和43中获得的化合物t-1、t-3和t-4与曲妥珠单抗(抗-her2)的工程化半胱氨酸的硫醇基团进行缀合反应，从而分别制备t-1-ab、t-3-ab和t-4-ab作为thiomab药物缀合物(tdc)。[参见nature biotechnology,2008,26,925-932,bioconjugate chem.,2013,24,1256-1263,bioconjugate chem.,2016,27,1324-1331,bioconjugate chem.2014,25,460-469]。通过hic分析缀合抗体的dar(药物抗体比)，且分析的结果如表1所示。
[0904]
缀合方法3：马来酰亚胺缀合方案。
[0905]
在还原和再氧化反应之后，将所得抗体用3.5当量的作为dmso中3mm储备溶液的化合物t-10处理，以达到7.5％(体积/体积)的总有机物。使反应在40℃下静置1小时，然后通过使用pd-10柱除去过量的药物-接头中间体和其他杂质。最终样品浓缩至约5mg/ml蛋白质。
[0906]
表1.抗体-药物缀合物(adc)
[0907]
adcsdar缀合方法接头-毒素，实施例t-1-ab1.761t-1，实施例41t-3-ab0.52t-3，实施例42t-4-ab0.422t-4，实施例43
[0908]
实施例61.抗体-药物缀合物的细胞毒性
[0909]
将nci-n87癌细胞以每孔100μl培养基中5,000个细胞的密度接种在96孔板中，并培养24小时。通过50nm到0.000128nm的1:5系列稀释度处理t-dm1。孵育72小时后，将0.2ml溶解在pbs缓冲溶液(5mg/ml)中的3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四氮唑(mtt)染料加入板的每个孔中。将活细胞中线粒体氧化还原酶还原mtt染料形成的甲臜溶解在dmso中，并使用550nm处的吸光度进行测量。
[0910]
实施例62.ama-9c与n-ac-cys、n-ac-lys和n-ac-tyr反应的化学选择性研究。
[0911][0912]
向ama-9c(10μl，储备溶液10mmol)在pbs缓冲液(870μl)和dmso(90ul)中的均匀溶液中加入n-乙酰基-l-赖氨酸(10μl，储备溶液10mmol)、n-乙酰基-l-酪氨酸(10μl，储备溶液10mmol)和n-乙酰基-l-半胱氨酸(10μl，储备溶液10mmol)并搅拌1小时。使用lc-ms检查ama-9c反应的化学选择性。ama-9c在n-乙酰基-l-赖氨酸、n-乙酰基-l-酪氨酸和n-乙酰基-l-半胱氨酸的等摩尔混合物中的反应显示出对半胱氨酸的硫醇基团的完全化学选择性。
[0913]
实施例63.ama-9c的化学稳定性(水合稳定性)研究
[0914]
进行这项研究是为了检查ama-9c的稳定性。将化合物ama-9c溶解在dmso中并与pbs(ph 7.4)缓冲溶液混合以制备浓度为500μm(5％dmso)的溶液。将用作标准物质的mps制备为在pbs缓冲溶液中浓度为500μm的溶液。将420μl缓冲溶液和140μl化合物ama-6溶液以及140μl mps溶液混合，从而制备总量为700μl的反应混合物。将反应混合物在室温下孵育，同时遮光。将反应混合物在第0天(反应前)和反应后1天、2天、4天和7天取等分试样，其中每个等分试样量为70μl。然后，通过hplc分析对剩余的化合物ama-9c和mps进行定量，表明ama-9c在pbs缓冲液中的稳定性(参见图2)。
[0915]
实施例64.n-ac-cys-ama-10的血浆稳定性研究
[0916]
将化合物n-ac-cys-ama-10和甲基苯基砜(用作标准物质)溶解在dmso中，以使浓度为30mm。然后，将人血浆(biochemed 752pr-sc-pmg)和小鼠血浆(biochemed 029-apsc-mp)中的每种与n-ac-cys-ama-10和mps混合以使n-ac-cys-ama-10和甲基苯基砜的最终浓度为300μm。将所得血浆混合物在37℃的水浴中孵育。在反应前和反应后1天、2天、4天和7天取等分试样，其中每个等分试样为200μl。为了完成反应，加入两倍体积的乙腈，然后短暂涡旋和离心以得到血浆蛋白沉淀。收集离心后获得的每份上清液并通过hplc进行分析。如图4所示，在小鼠和人血浆中检测和定量化合物长达7天。研究证明n-ac-cys-ama-10在7天的过程中在血浆中具有高稳定性。
[0917]
实施例65.“参比a”、pyrmps-1和mmps-4与n-ac-半胱氨酸的相对反应速率
[0918][0919]
向“参比a”、pyrmps-1和mmps-4(10μl，储备溶液10mmol)在pbs缓冲液(870μl)和dmso(90μl)中的均匀溶液中加入n-乙酰基-l-半胱氨酸(10μl，储备溶液10mmol)并在室温下搅拌1小时。使用lc/ms检查所得样品的反应速率。
[0920]
化合物名称相对反应速率(参比a)1pyrmsp-1增加11.5倍mmps-4增加7倍
[0921]
间位取代基的引入提高了化合物的溶解度并提供了与硫醇基团的快速反应。
[0922]
以引用的方式并入
[0923]
本文提到的所有公布和专利以引用的方式整体并入本文，就如同具体且单个地指出单个的公布或专利各自以引用的方式并入本文一样。在冲突的情况下，将以本技术(包括本文的任何定义)为准。
[0924]
等效方案
[0925]
虽然已经讨论了本发明的具体实施方案，但是以上说明书是说明性的，并非限制性的。在阅读本说明书和下面的权利要求之后，本发明的许多变化对于本领域技术人员而言将为显而易见的。本发明的整个范围应通过参考权利要求书与其等效物的整个范围以及说明书与这类变化来确定。