一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法及应用与流程

1.本发明涉及检测技术领域，具体而言，涉及一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法及应用。


背景技术：

2.生乳汁由当归、地黄、黄芪、党参、玄参、麦冬、穿山甲、知母八味药材组成，具有补气养血、滋阴通乳的功效，主治产后阴血亏虚，乳汁稀薄、短少。
3.基于以上，提出一种能够检出生乳汁中阿魏酸含量和哈巴俄苷含量的检测方法对于生乳汁的质量控制具有重要参考价值。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法，该检测方法能够定量检测出生乳汁中的阿魏酸和哈巴俄苷，不仅简单便捷，适用性强，而且该检测方法的重现性以及稳定性较好，可靠性较高，使用价值较高。
5.本发明的另一目的在于提供一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法的应用，以此检测方法可用于生乳汁的质量控制和质量评价，此时能够原质控基础上以生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷含量作为指标进一步控制生乳汁的质量，从而使得生乳汁质量的可控性更强。
6.本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
7.一方面，本发明提出一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法，主要包括以下步骤：
8.将生乳汁样品一与盐酸溶液混合后，制得混合液，将所述混合液以乙醚和/或石油醚进行提取，制得提取液；将所述提取液与碳酸钠溶液混合，经分离后制得碳酸钠混液；将所述碳酸钠混液的ph调节至2-3后，制得供试液一；
9.将生乳汁样品二与饱和正丁醇溶液混合，经分离后制得正丁醇混液，将所述正丁醇混液蒸干后，制得固体；将所述固体以甲醇溶解，经超声后，制得供试液二；
10.将所述供试液一和供试液二分别以高效液相色谱的方式进行检测，获得检测结果。
11.另一方面，本发明提出一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法的应用，将上述检测方法用于辅助控制生乳汁成品的质量。
12.本发明实施例的生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法及应用至少具有以下有益效果：
13.一、该检测方法能够定量地检测出生乳汁中的阿魏酸以及哈巴俄苷，不仅简单便捷，而且适用性较强。
14.二、该检测方法能够将生乳汁样品中的阿魏酸以及哈巴俄苷有效分离提取出来，以此使得阿魏酸和哈巴俄苷的含量能够进一步表现出生乳汁的质量好坏，检测效果较好。
15.三、与现有技术相比，该检测方法的稳定性以及重现性较高，可靠性更强。
16.四、将上述检测方法应用于生乳汁的质量控制时，能够在基础检测指标上进一步辅助控制生乳汁成品的质量，以此提升生乳汁的食用安全性，应用价值较高。
附图说明
17.为了更清楚地说明本技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
18.图1为本技术提供的阿魏酸对照品的色谱图；
19.图2为本技术提供的供试液一中阿魏酸的色谱图；
20.图3为本技术提供的哈巴俄苷对照品的色谱图；
21.图4为本技术提供的供试液二中哈巴俄苷的色谱图。
具体实施方式
22.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
23.需要说明的是，在不冲突的情况下，本技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考具体实施例来详细说明本发明。
24.一方面，本技术提出一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法，主要包括以下步骤：
25.将生乳汁样品一与盐酸溶液混合后，制得混合液，将所述混合液以乙醚和/或石油醚进行提取，制得提取液；将所述提取液与碳酸钠溶液混合，经分离后制得碳酸钠混液；将所述碳酸钠混液的ph调节至2-3后，制得供试液一；
26.将生乳汁样品二与饱和正丁醇溶液混合，经分离后制得正丁醇混液，将所述正丁醇混液蒸干后，制得固体；将所述固体以甲醇溶解，经超声后，制得供试液二；
27.将所述供试液一和供试液二分别以高效液相色谱的方式进行检测，获得检测结果。
28.具体地，本技术中，生乳汁样品一依次与盐酸溶液、乙醚和/或石油醚、碳酸钠溶液混合，除去生乳汁中的杂质以及干扰成分后，能够将其中的阿魏酸提取到碳酸钠混液中，从而便于检测。而在此过程中，混合液与乙醚和/或石油醚进行多次混合提取，以此将生乳汁中的阿魏酸几乎全部提取出来，从而有效提升检测方法的可靠性。
29.本技术中，以饱和正丁醇溶液将生乳汁样品二中的杂质除去，以此使得检测结果可靠，同时提升哈巴俄苷检出的重现性。
30.本技术中，所述盐酸溶液的浓度为0.05m-0.15m，所述生乳汁样品一与盐酸溶液的体积比为(1-3):1。
31.本技术中，所述混合液的提取方法如下：将所述混合液以乙醚和/或石油醚在分液
漏斗中连续提取三次以上，合并后制得提取液。详细地，提取三次以上时，则可将生乳汁样品一中的阿魏酸有效提取出来，避免生乳汁样品一中残留有阿魏酸，防止降低检测结果的可靠性。
32.本技术中，单次提取时，所述乙醚和/或石油醚与混合液的体积比为(0.5-2):1。乙醚和/或石油醚在上述条件下与混合液混合能够使得连续提取次数更少，同时还能保证提取效果。
33.本技术中，所述碳酸钠溶液的浓度为0.5wt％-3wt％，且所述碳酸钠溶液与所述生乳汁样品一的体积比为(0.5-1.5):1。
34.本技术中，以1m-3m的盐酸溶液将所述碳酸钠混液的ph调节至2-3。以盐酸进行调节ph能够避免引入新的杂质至提取液中。
35.本技术中，所述饱和正丁醇溶液以水为溶剂制得，且所述饱和正丁醇溶液与生乳汁样品二的体积为(0.8-1.2):1。
36.本技术中，所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相由水、乙酸以及正丁醇以体积比为(330-360):1:5的比例混合制得；流速为1.0ml/min-2.0ml/min，色谱柱柱温为30℃-40℃，供试液一的进样量为10μl-25μl。
37.本技术中，所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相a为乙腈，流动相b为1％的乙酸，流速为0.5ml/min-1.5ml/min，色谱柱柱温为30℃-40℃，供试液一的进样量为5μl-15μl。
38.另一方面，本技术中提出一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法的应用，将上述检测方法用于辅助控制生乳汁成品的质量。详细地，将生乳汁成品随机取样，在基础检测指标上，以上述检测方法检测生乳汁中的阿魏酸含量以及哈巴俄苷的含量，此时，可通过生乳汁中的阿魏酸含量以及哈巴俄苷的含量进一步判断出生乳汁成品的质量好坏，达到预期的应用效果。
39.在此制得一提的是，以增设生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测指标，建立一种新的生乳汁的质控方法，能够更好地提升生乳汁的质控效果，使用价值较高。
40.以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
41.实施例1
42.本实施例的目的在于提供一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法，具体如下：
43.将生乳汁样品一与0.1m盐酸溶液混合后，制得混合液，所述生乳汁样品一与0.1m的盐酸溶液的体积比为1.25:1，将所述混合液以乙醚连续进行三次提取，合并后制得提取液，且单次提取时，乙醚与生乳汁样品一的体积比为1:1；将所述提取液与2wt％的碳酸钠溶液混合，所述碳酸钠溶液与上述生乳汁样品一的体积比为0.8:1，经分离后制得碳酸钠混液；将所述碳酸钠混液以2m的盐酸溶液将其的ph调节至2-3后，制得供试液一；
44.将生乳汁样品二与饱和正丁醇溶液(该饱和正丁醇溶液以水作为溶剂配制)混合，并连续5次混合提取(单次混合时，上述饱和正丁醇溶液与生乳汁样品一的体积比为1:1)，经分离后制得正丁醇混液，将所述正丁醇混液蒸干后，制得固体；将所述固体以甲醇溶解，经超声后，制得供试液二；
45.将所述供试液一和供试液二分别以高效液相色谱的方式进行检测，获得检测结
果。
46.所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相由水、乙酸以及正丁醇以体积比为347:1:5的比例混合制得；流速为1.5ml/min，色谱柱柱温为40℃，供试液一的进样量为20μl。
47.所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相a为乙腈，流动相b为1％的乙酸，流速为1.0ml/min，色谱柱柱温为40℃，供试液一的进样量为10μl。
48.实施例2
49.本实施例的目的在于提供一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法，具体如下：
50.将生乳汁样品一与0.1m盐酸溶液混合后，制得混合液，所述生乳汁样品一与0.1m的盐酸溶液的体积比为1.25:1，将所述混合液以石油醚连续进行三次提取，合并后制得提取液，且单次提取时，石油醚与生乳汁样品一的体积比为1:1；将所述提取液与2wt％的碳酸钠溶液混合，所述碳酸钠溶液与上述生乳汁样品一的体积比为0.8:1，经分离后制得碳酸钠混液；将所述碳酸钠混液以2m的盐酸溶液将其的ph调节至2-3后，制得供试液一；
51.将生乳汁样品二与饱和正丁醇溶液(该饱和正丁醇溶液以水作为溶剂配制)混合，并连续5次混合提取(单次混合时，上述饱和正丁醇溶液与生乳汁样品一的体积比为1:1)，经分离后制得正丁醇混液，将所述正丁醇混液蒸干后，制得固体；将所述固体以甲醇溶解，经超声后，制得供试液二；
52.将所述供试液一和供试液二分别以高效液相色谱的方式进行检测，获得检测结果。
53.所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相由水、乙酸以及正丁醇以体积比为347:1:5的比例混合制得；流速为1.5ml/min，色谱柱柱温为40℃，供试液一的进样量为20μl。
54.所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相a为乙腈，流动相b为1％的乙酸，流速为1.0ml/min，色谱柱柱温为40℃，供试液一的进样量为10μl。
55.实施例3
56.本实施例的目的在于提供一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法，具体如下：
57.将生乳汁样品一与0.1m盐酸溶液混合后，制得混合液，所述生乳汁样品一与0.1m的盐酸溶液的体积比为1.25:1，将所述混合液以乙醚和石油醚连续进行三次提取，合并后制得提取液，且单次提取时，乙醚与生乳汁样品一的体积比为1:1，石油醚与生乳汁样品一的体积比为1:1；将所述提取液与2wt％的碳酸钠溶液混合，所述碳酸钠溶液与上述生乳汁样品一的体积比为0.8:1，经分离后制得碳酸钠混液；将所述碳酸钠混液以2m的盐酸溶液将其的ph调节至2-3后，制得供试液一；
58.将生乳汁样品二与饱和正丁醇溶液(该饱和正丁醇溶液以水作为溶剂配制)混合，并连续5次混合提取(单次混合时，上述饱和正丁醇溶液与生乳汁样品一的体积比为1:1)，经分离后制得正丁醇混液，将所述正丁醇混液蒸干后，制得固体；将所述固体以甲醇溶解，
经超声后，制得供试液二；
59.将所述供试液一和供试液二分别以高效液相色谱的方式进行检测，获得检测结果。
60.所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相由水、乙酸以及正丁醇以体积比为347:1:5的比例混合制得；流速为1.5ml/min，色谱柱柱温为40℃，供试液一的进样量为20μl。
61.所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相a为乙腈，流动相b为1％的乙酸，流速为1.0ml/min，色谱柱柱温为40℃，供试液一的进样量为10μl。
62.实施例4
63.本实施例的目的在于提供一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法，具体如下：
64.将生乳汁样品一与0.05m盐酸溶液混合后，制得混合液，所述生乳汁样品一与0.05m的盐酸溶液的体积比为1:1，将所述混合液以乙醚连续进行三次提取，合并后制得提取液，且单次提取时，乙醚与生乳汁样品一的体积比为0.5:1；将所述提取液与0.5wt％的碳酸钠溶液混合，所述碳酸钠溶液与上述生乳汁样品一的体积比为0.5:1，经分离后制得碳酸钠混液；将所述碳酸钠混液以1m的盐酸溶液将其的ph调节至2-3后，制得供试液一；
65.将生乳汁样品二与饱和正丁醇溶液(该饱和正丁醇溶液以水作为溶剂配制)混合，并连续5次混合提取(单次混合时，上述饱和正丁醇溶液与生乳汁样品一的体积比为0.8:1)，经分离后制得正丁醇混液，将所述正丁醇混液蒸干后，制得固体；将所述固体以甲醇溶解，经超声后，制得供试液二；
66.将所述供试液一和供试液二分别以高效液相色谱的方式进行检测，获得检测结果。
67.所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相由水、乙酸以及正丁醇以体积比为330:1:5的比例混合制得；流速为1.50ml/min，色谱柱柱温为30℃，供试液一的进样量为10μl。
68.所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相a为乙腈，流动相b为1％的乙酸，流速为0.5ml/min，色谱柱柱温为30℃，供试液一的进样量为5μl。
69.实施例5
70.本实施例的目的在于提供一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法，具体如下：
71.将生乳汁样品一与0.15m盐酸溶液混合后，制得混合液，所述生乳汁样品一与0.15m的盐酸溶液的体积比为3:1，将所述混合液以乙醚连续进行三次提取，合并后制得提取液，且单次提取时，乙醚与生乳汁样品一的体积比为2:1；将所述提取液与3wt％的碳酸钠溶液混合，所述碳酸钠溶液与上述生乳汁样品一的体积比为1.5:1，经分离后制得碳酸钠混液；将所述碳酸钠混液以3m的盐酸溶液将其的ph调节至2-3后，制得供试液一；
72.将生乳汁样品二与饱和正丁醇溶液(该饱和正丁醇溶液以水作为溶剂配制)混合，并连续5次混合提取(单次混合时，上述饱和正丁醇溶液与生乳汁样品一的体积比为1.2:1)，经分离后制得正丁醇混液，将所述正丁醇混液蒸干后，制得固体；将所述固体以甲醇溶
解，经超声后，制得供试液二；
73.将所述供试液一和供试液二分别以高效液相色谱的方式进行检测，获得检测结果。
74.所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相由水、乙酸以及正丁醇以体积比为360:1:5的比例混合制得；流速为2.0ml/min，色谱柱柱温为40℃，供试液一的进样量为25μl。
75.所述供试液一以高效液相色谱的方式进行检测时，色谱条件如下：流动相a为乙腈，流动相b为1％的乙酸，流速为1.5ml/min，色谱柱柱温为40℃，供试液一的进样量为15μl。
76.实施例6
77.本实施例的目的在于提供一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法的应用，具体如下：
78.以实施例1中的检测方法对生乳汁样品中进行检测，检测后，阿魏酸含量不低于3.0mg/ml，哈巴俄苷含量不低于2.0mg/ml，属于合格品。
79.效果例1
80.以实施例1的检测方法配制供试液一和供试液二，检测后获得色谱图如图1-图4。
81.阿魏酸的对照品：称取10mg阿魏酸，以水定容至100ml，制得对照品一；
82.哈巴俄苷的对照品：称取哈巴俄苷，以甲醇制成浓度为15μg/ml的对照品二；
83.本效果例中，对照品一和对照品二的色谱条件与实施例1中相同。
84.由图可知，对比图1和图2可知，生乳汁样品中能够检测出阿魏酸，对比图3和图4可知，生乳汁样品中能够检测出哈巴俄苷，由此可见，本技术提出的检测方法能够达到预期的检测效果。色谱图的峰表见表1。
85.表1峰表
[0086][0087]
由上表可知，供试液与对照品相一致，检测效果较好。
[0088]
效果例2
[0089]
以实施例1的检测方法对同一批次的生乳汁进行检测，重复6次，阿魏酸的平均峰面积为21927，rsd为0.67％。哈巴俄苷的平均峰面积为26534，rsd为0.68％。由此可见，本技术提供的检测方法具有较好的重现性。
[0090]
综上，本技术提供一种生乳汁中阿魏酸和哈巴俄苷的检测方法，该检测方法能够定量地检测出生乳汁中的阿魏酸以及哈巴俄苷，不仅简单便捷，而且适用性较强。该检测方法能够将生乳汁样品中的阿魏酸以及哈巴俄苷有效分离提取出来，以此使得阿魏酸和哈巴俄苷的含量能够进一步表现出生乳汁的质量好坏，检测效果较好。与现有技术相比，该检测方法的稳定性以及重现性较高，可靠性更强。将上述检测方法应用于生乳汁的质量控制时，能够在基础检测指标上进一步辅助控制生乳汁成品的质量，以此提升生乳汁的食用安全性，应用价值较高。
[0091]
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。