一种噁拉戈利钠中化合物I含量的测定分析方法与流程

一种噁拉戈利钠中化合物i含量的测定分析方法
技术领域
1.本发明涉及用高效液相色谱-质谱联用仪通过与n-甲基亚氨基二乙酸(以下简称衍生剂)衍生后测定2-氟-3-甲氧基苯硼酸衍生物(以下简称化合物i衍生物)含量，从而测定出噁拉戈利钠中2-氟-3-甲氧基苯硼酸(以下简称化合物i)的含量。此方法能较好的控制原料药及制剂中痕量化合物i含量，为患者的健康安全用药提供保障，属于医药技术领域。
技术背景
2.噁拉戈利钠，化学名r-4-((2-(5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-3-((2-氟-6-(三氟甲基)苄基)-4-甲基-2,6-二氧代-2,3-二氢嘧啶-1(6h)-基)-1-苯乙基)氨基)丁酸钠。
3.噁拉戈利钠(elagolix sodium)是由艾伯维(abbvie)与合作伙伴neurocrine biosciences共同研发的一种口服gnrh拮抗剂，通过抑制脑垂体促性腺释放激素受体，最终降低血循环中性腺激素水平。结构如下：
[0004][0005]
噁拉戈利钠中含有反应残留的化合物i，结构如下：
[0006][0007]
准确定量地测定噁拉戈利钠中痕量的化合物i含量极具挑战性。很难采用气相、液相色谱等对其进行痕量直接测定。
[0008]
目前，只有测定常量化合物i含量的方法，采用经典的色谱法,其专一性、灵敏度、方法精密度和重复性都存在很大的缺陷，不能提供可靠的痕量分析结果。为了克服原方法的缺陷，本发明采用高效液相色谱-质谱联用仪通过与衍生剂衍生后测定噁拉戈利钠中化合物i的含量。该分析方法具有操作简单、专一性好、灵敏极高、重现性好等特点。


技术实现要素：

[0009]
如上所述，直接准确定量测定痕量化合物i存在各种缺陷。然而,利用化合物i与衍生剂反应活性高，反应条件温和，及衍生物具有稳定性强和非常适合反相液相色谱分离的
特征，以及在质谱检测器中很容易离子化并具有稳定的适合定量分析的分子结构的特点，可以采用高效液相色谱-质谱联用仪测定。除此之外化合物i在质谱检测器有灵敏的响应这一特征使本方法的灵敏度和专一性大大提高。
[0010]
衍生剂n-甲基亚氨基二乙酸结构如下：
[0011][0012]
化合物i与衍生剂n-甲基亚氨基二乙酸生成化合物i衍生物反应路线如下：
[0013]
通过试验发现噁拉戈利钠在二甲亚砜中有非常好的溶解性，且化合物i与衍生剂在酸性二甲亚砜中反应效率高，条件温和易操作。本发明将用二甲亚砜作为稀释剂。
[0014]
本发明涉及一种噁拉戈利钠中化合物i含量的测定分析方法，该方法为将化合物i与衍生剂反应，通过用高效液相色谱-质谱联用仪测定化合物i衍生物的含量，从而间接地测定噁拉戈利钠中化合物i的含量。
[0015]
上述样品配制中用10％乙酸的二甲亚砜溶液作为稀释液。
[0016]
上述采用高效液相色谱-质谱联用仪，选择正离子离子模式。
[0017]
该方法包括以下几个步骤：
[0018]
(1)取噁拉戈利钠原料药或制剂粉末，以5％至30％甲酸或乙酸或三氟乙酸的二甲亚砜或n，n-二甲基甲酰胺溶液作为稀释液制备得到样品储备溶液；
[0019]
(2)取衍生剂n-甲基亚氨基二乙酸固体，以5％至30％甲酸或乙酸或三氟乙酸的二甲亚砜或n，n-二甲基甲酰胺溶液作为稀释液制备得到衍生剂溶液；
[0020]
(3)取样品储备溶液与衍生剂溶液以一定体积比混合均匀，在烘箱中加热至50至150℃，反应时间20分钟至10小时，制备得到样品溶液；
[0021]
(4)采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液和乙腈或甲醇，进行等度或梯度洗脱。
[0022]
(5)设置流动相流速为0.3-2.0ml/min，柱温控制在25℃-45℃之间。
[0023]
(6)采用质谱检测器，离子模式选择正离子，取(3)的样品溶液进样，记录化合物i衍生物质谱离子流图。
[0024]
本发明采用的技术方案如下：
[0025]
样品前处理：
[0026]
稀释液：5％至30％甲酸或乙酸或三氟乙酸的二甲亚砜或n，n-二甲基甲酰胺溶液。
[0027]
衍生剂溶液：称取100mg衍生剂n-甲基亚氨基二乙酸于10ml的容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0028]
化合物i标准储备溶液：用稀释液精密配制200ng/ml的化合物i溶液。
[0029]
样品储备溶液：精密称取400mg样品于10ml的容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0030]
化合物i标准溶液：取500μl化合物i标准储备溶液与500μl衍生剂溶液于1.5ml进样小瓶中混匀，100℃加热1小时即得。
[0031]
样品溶液：取样品储备溶液与500μl衍生剂溶液于1.5ml进样小瓶中混匀，100℃加热1小时即得。
[0032]
本发明使用色谱柱为：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。流速0.3-2.0ml/min。柱温25℃-45℃。流动相a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液，流动相b：乙腈或甲醇，等度或梯度洗脱。
[0033]
质谱检测器：正离子模式，[m h]

:282
附图说明：
[0034]
附图1：根据本发明实施例1得到的化合物i衍生物质谱棒状图；
[0035]
附图2：根据本发明实施例2得到的化合物i衍生物质谱总离子流图；
[0036]
附图3：根据本发明实施例3得到的噁拉戈利钠样品质谱总离子流图；
[0037]
附图4：根据本发明实施例4得到的噁拉戈利钠样品回收质谱总离子流图；
具体实施方式
[0038]
为了更好的理解本发明的技术方案，下面结合本发明的具体实施例作进一步说明，但其不限制于本发明。
[0039]
实施例一
[0040]
仪器与条件：
[0041]
高效液相色谱质谱联用仪：agilent 1260infinity，ms检测器。
[0042]
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱
[0043]
流动相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液b:乙腈。
[0044]
等度如下：0～8.0min，有机相比例为5％。
[0045]
柱温：40℃。
[0046]
流速：0.6ml/min
[0047]
选择正离子：282
[0048]
进样体积：3ul。
[0049]
实验步骤：
[0050]
1)流动相a配制：精密量取1.0ml甲酸溶于1000ml水中，混匀。
[0051]
2)稀释液：10％乙酸的二甲亚砜溶液
[0052]
3)衍生剂溶液：称取100mg衍生剂n-甲基亚氨基二乙酸于10ml的容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0053]
4)化合物i衍生溶液：精密称取约20mg化合物i于10ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得化合物i衍生储备溶液。精密移取0.5ml化合物i衍生储备溶液于1.5ml进样小瓶中，再精密移取0.5ml衍生剂溶液于该进样小瓶中充分混合，于100℃烘箱中加热1小时，冷却，即得化合物i衍生溶液，进样，记录化合物i衍生物质谱棒状图，见典型图1。
[0054]
实施例二
[0055]
仪器与条件：
[0056]
高效液相色谱质谱联用仪：agilent 1260infinity，ms检测器。
[0057]
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱
[0058]
流动相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液b:乙腈。
[0059]
等度如下：0～8.0min，有机相比例为5％。
[0060]
柱温：40℃。
[0061]
流速：0.6ml/min
[0062]
选择正离子：282
[0063]
进样体积：3ul。
[0064]
实验步骤：
[0065]
1)流动相a配制：精密量取1.0ml甲酸溶于1000ml水中，混匀。
[0066]
2)稀释液：10％乙酸的二甲亚砜溶液。
[0067]
3)衍生剂溶液：称取100mg衍生剂n-甲基亚氨基二乙酸于10ml的容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0068]
4)化合物i标准溶液：精密称取约20mg化合物i于10ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取100μl置于另一10ml容量瓶中，加稀释液定容，摇匀，再精密移取100μl置于另一10ml容量瓶中，摇匀，即得化合物i标准储备溶液。精密移取0.5ml化合物i标准储备溶液于1.5ml进样小瓶中，再精密移取0.5ml衍生剂溶液于该进样小瓶中充分混合，于100℃烘箱中加热1小时，冷却，即得化合物i标准溶液，进样，记录化合物i衍生物质谱总离子流图，见典型图2。
[0069]
实施例三
[0070]
仪器与条件：
[0071]
高效液相色谱质谱联用仪：agilent 1260infinity，ms检测器。
[0072]
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱
[0073]
流动相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液b:乙腈。
[0074]
等度如下：0～8.0min，有机相比例为5％。
[0075]
柱温：40℃。
[0076]
流速：0.6ml/min
[0077]
选择正离子：282
[0078]
进样体积：3ul。
[0079]
实验步骤：
[0080]
1)流动相a配制：精密量取1.0ml甲酸溶于1000ml水中，混匀。
[0081]
2)稀释液：10％乙酸的二甲亚砜溶液。
[0082]
3)衍生剂溶液：称取100mg衍生剂n-甲基亚氨基二乙酸于10ml的容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0083]
4)噁拉戈利钠样品溶液：精密称取约400噁拉戈利钠于10ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得噁拉戈利钠样品储备溶液。精密移取0.5ml噁拉戈利钠样品储备溶液于1.5ml进样小瓶中，再精密移取0.5ml衍生剂溶液于该进样小瓶中充分混合，于100℃烘箱中加热1小时，冷却，即得噁拉戈利钠样品溶液，进样，记录噁拉戈利钠样品质谱总离
子流图，见典型图3。
[0084]
实施例四
[0085]
仪器与条件：
[0086]
高效液相色谱质谱联用仪：agilent 1260infinity，ms检测器。
[0087]
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱
[0088]
流动相：a：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液b:乙腈。
[0089]
等度如下：0～8.0min，有机相比例为5％。
[0090]
柱温：40℃。
[0091]
流速：0.6ml/min
[0092]
选择正离子：282
[0093]
进样体积：3ul。
[0094]
实验步骤：
[0095]
1)流动相a配制：精密量取1.0ml甲酸溶于1000ml水中，混匀。
[0096]
2)稀释液：10％乙酸的二甲亚砜溶液。
[0097]
3)衍生剂溶液：称取100mg衍生剂n-甲基亚氨基二乙酸于10ml的容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0098]
4)化合物i标准储备溶液：精密称取约20mg化合物i于10ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取100μl置于另一10ml容量瓶中，加稀释液定容，摇匀，再精密移取100μl置于另一10ml容量瓶中，摇匀，即得化合物i标准储备溶液。
[0099]
5)噁拉戈利钠样品回收溶液：精密称取约400mg噁拉戈利钠于10ml容量瓶中，加化合物i标准储备溶液溶解定容，摇匀，即得噁拉戈利钠样品回收储备溶液。精密移取0.5ml噁拉戈利钠样品回收储备溶液于1.5ml进样小瓶中，再精密移取0.5ml衍生剂溶液于该进样小瓶中充分混合，于100℃烘箱中加热1小时，冷却，即得噁拉戈利钠样品回收溶液，进样，记录噁拉戈利钠样品回收质谱总离子流图，见典型图4。