一种具有启动控制结构的心型脂肪酸结合蛋白检测装置及其制备方法与流程

1.本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一种具有启动控制结构的心型脂肪酸结合蛋白检测装置及其制备方法。


背景技术：

2.急性心肌梗死(ami)危急重症患者发病后的一小时是死亡的高峰期，死亡率高达50％，治疗前诊断时间过长会显著增加ami死亡风险。因此，提高ami诊断速度在挽救人民生命和促进人民健康方面具有十分重要的意义。国家卫计委发布的《胸痛中心建设与管理指导原则》明确指出缩短心型脂肪酸结合蛋白检测项目从抽血到获取报告的时间，并将其列为医疗质量控制基础指标。为了提高ami的诊断速度。
3.心型脂肪酸结合蛋白是重要的心肌组织损伤特异性标志物，其组织特异性好，是ami早期诊断的理想指标。心肌损伤后，心型脂肪酸结合蛋白在很短的时间内释放入血，在心肌缺血/损伤后0.5-2小时内显著升高，1小时可以在血液中被检测到，6-8小时达到峰值，在24-30小时内恢复基线水平，可用于检测二次ami的发生。因此，准确检测血液中心型脂肪酸结合蛋白含量对心血管疾病的预防、检测及早期诊断意义重大。
4.目前现有技术存在以下不足：(1)行业上存在的一个痛点的问题，就是液相在固相膜上流动欠均匀，造成免疫层析检测结果不稳定，检测时间长。(2)液体在膜上流动受着膜的特性和液体自身的特性的影响，无法在人为设定的时间内完全完成流动过程，且流动不完全均匀，影响检测。(3)层析反应点样后即开始，无法人为控制反应开始时间，需要人为记录每个样品的点样时间，造成医务资源的浪费。


技术实现要素：

5.本发明要解决的技术问题是如何实现反应起始及反应时间可控以及如何实现检测效率的提高和准确性的提高的问题，本发明提供了一种具有启动控制结构的心型脂肪酸结合蛋白检测装置及其制备方法。
6.本发明的目的可通过采用以下技术方案予以实现：
7.一种具有启动控制结构的心型脂肪酸结合蛋白检测装置，由荧光免疫心型脂肪酸结合蛋白检测试纸条、位于所述检测试纸条上的侧向流层析启动控制结构和离心装置所组成，具有如下特征：1)所述荧光免疫心型脂肪酸结合蛋白检测试纸条由包被有荧光微球标记的抗心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的结合膜垫、包被有非标记的配对的抗心型脂肪酸结合蛋白抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫在pvc支撑底片上依次粘贴排列组成；2)所述侧向流层析启动控制结构为所述结合膜垫与所述硝酸纤维素膜之间留有的可阻碍液相自然流动的间隙；3)所述离心装置为设置有所述检测试纸条放置结构的离心结构，所述检测试纸条放置于所述离心结构上。
8.所述的荧光微球的粒径范围为50nm-500nm。
9.所述间隙为空气、过滤膜垫的至少一种。
10.所述间隙宽度选择0.5-3mm，过滤膜垫的孔径选择0.1-5μm。
11.所述离心驱动的离心装置转速选择50-500转/分钟。
12.所述检测时间为5-8分钟。
13.本发明还提供一种具有启动控制结构的心型脂肪酸结合蛋白检测装置的制备方法，所述制备方法包括：
14.(1)包被有荧光微球标记的抗心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的结合膜垫制备：用荧光微球标记抗心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体，用10％bsa封闭15min后离心，弃掉上清，放4℃室温保存备用；
15.(2)包被有非标记的配对的抗心型脂肪酸结合蛋白抗体的硝酸纤维素膜制备：将配对的抗心型脂肪酸结合蛋白抗体包被在金标垫上，烘干后密封保存备用；
16.(3)半成品组装：将包被有荧光微球标记的抗心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的结合膜垫、包被有非标记的配对的抗心型脂肪酸结合蛋白抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴于pvc支撑底片上，结合膜垫和硝酸纤维素膜之间留有空隙，贴好后裁剪成4mm宽的试纸条。
17.(4)成品组装：将步骤(3)所得的试纸条置于扣卡内，制成检测试剂卡，放入装有干燥剂的铝箔袋内，在封口机上封口即得。
18.采用上述技术方案，本发明至少具有下列优点：
19.1、本发明以离心装置驱动检测液在固相膜上的流动，提高了液体流动速度，提高了待检物的捕获结合能力，降低了固相膜的背景噪声干扰，提高检测灵敏度、稳定性、重复性和准确性，缩短了检测时间。
20.2、本发明阻碍液相自然流动的空隙结果，可以控制反应的开始时间，从而批量检测可以同时进行反应，提高检测准确性。
21.因此，本发明一种具有启动控制结构的心型脂肪酸结合蛋白检测装置对改善现有心血管疾病免疫检测具有重要的意义和良好的应用前景。
附图说明
22.图1为具有启动控制结构的心型脂肪酸结合蛋白检测装置示意图；图中：1-结合膜垫，2-荧光微球垫，3-空隙结构，4-硝酸纤维素膜垫，5-吸水垫，6-pvc支撑底片。
具体实施方式
23.为更进一步阐述本发明为达成预定目的所采取的技术手段及功效，以下下述实施例结合附图对本发明进行进一步说明，但本发明并不局限于以下说明。
24.如图1所示，一种具有启动控制结构的心型脂肪酸结合蛋白检测装置，包括：结合膜垫1，荧光微球垫2，空隙结构3，硝酸纤维素膜垫4，吸水垫5，pvc支撑底片6。
25.结合膜垫1和荧光微球垫2依次相互搭接并粘贴于pvc支撑底片6的一端，硝酸纤维素膜垫4和吸水垫5依次相互搭接并粘贴于pvc支撑底片6的另一端，结合膜垫与硝酸纤维素膜垫之间留有的可阻碍液相自然流动的间隙结构3。
26.在实际操作时，将所述具有启动控制结构的肌红蛋白检测装置置于离心结构上，
通过启动离心时，离心力驱动液相流经间隙结构3进入硝酸纤维素膜垫4并在膜内向前流动，启动侧向流层析检测反应。
27.实施例1：本发明具有启动控制结构的心型脂肪酸结合蛋白检测装置制备
28.(1)结合膜垫制备
29.用ph8.0碳酸氢钠缓冲液溶解bsa和nacl，至bsa终浓度为2％，nacl终浓度为0.1m，然后加入表面活性剂tween20至终浓度为0.5％，调节ph到8.0，按玻璃纤维素膜吸水量60ul/cm2，将以上缓冲液均匀铺于玻璃纤维素膜上，置于37℃干燥8小时，置于4℃保存，备用。
30.取粒径大小为300nm的荧光微球溶液0.5ml，用50mm，ph6.0的mes缓冲液2ml清洗去除微球溶液中的表面活性剂，然后50mm，ph6.0的mes缓冲液溶解微球至2ml，再用500ul 10mg/ml活化剂edc和500ul 50mg/ml稳定剂nhs进行活化，然后用50mm，ph6.0的mes清洗，去除剩余的活化剂，10mm pbs重新溶解微球，将活化好的荧光微球与心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体混合，抗体终浓度为120ug/ml，最终体积为2ml，室温下，充分搅拌反应2h，然后用10％bsa溶液2ml进行封闭反应30min后离心，弃掉上清，放4℃室温保存备用。
31.(2)硝酸纤维素膜垫制备
32.将羊抗鼠igg抗体用50mm/l ph7.2的pb缓冲液稀释到1.0mg/ml的浓度，以0.8ul/cm的划线速率在硝酸纤维素膜上端c线标注位置划线得到质控线，将羊抗人心型脂肪酸结合蛋白多克隆抗体用稀释包被液稀释至1.0mg/ml的浓度，以0.8ul/cm的划线速率在nc膜上t线标注位置划线得到检测线，检测线和质控线间隔为5mm，划线完毕后置于37℃干燥8小时即得包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜。
33.(3)半成品组装：将步骤(1)所得的结合膜垫、步骤(2)所得的硝酸纤维素膜垫和吸水垫依次粘贴于pvc支撑底片上，步骤(1)所得的结合膜垫、步骤(2)所得的硝酸纤维素膜之间留有2mm空隙，贴好后裁剪成4mm宽的试纸条。
34.(4)成品组装：将步骤(3)所得的试纸条置于扣卡内，制成检测试剂卡，放入装有干燥剂的铝箔袋内，在封口机上封口即得。
35.实施例2：本发明与对照试剂检测结果对比
36.(1)材料：采用的样本为浓度为50ng/ml的人心型脂肪酸结合蛋白质控品。
37.(2)分别将人心型脂肪酸结合蛋白质控品分别加入10个对照试剂卡一中和10个本发明试剂卡中，启动反应，分别于反应5、8、10、15、20、25分钟后用荧光检测仪进行检测，记录检测结果，计算出每个时间点的测定均值和cv值。
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表1 对比试验一的检测结果
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(3)分别将人心型脂肪酸结合蛋白质控品分别加入10个对照试剂卡二中和10个本发明试剂卡中，启动反应，分别于反应5、8、10、15、20、25分钟后用荧光检测仪进行检测，记录检测结果，计算出每个时间点的测定均值和cv值。
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表2 对比试验二的检测结果
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通过具体实施方式的说明，应当可对本发明为达成预定目的所采取的技术手段及功效得以更加深入且具体的了解，然而所附图示仅是提供参考与说明之用，并非用来对本发明加以限制。