麻风病早期诊断生物标志物及其检测试剂和应用

1.本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种麻风病早期诊断生物标志物及其检测试剂和应用。
背景技术：
：：2.麻风病是由麻风分枝杆菌引起的一种慢性传染病。麻风病虽然可以通过多种药物治疗治愈，但在东南亚(如印度)、北非和中非(如中非共和国和刚果民主共和国)、大洋洲(如印度尼西亚和巴布亚新几内亚)以及美洲(如巴西和墨西哥)仍然是一个严重的健康问题(世界卫生组织，2017年)。根据世界卫生组织2020年的数据，全球超过23万例新病例与麻风病有关，发现10816例二级畸残(https://www.who.int/health-topics/leprosy)(世界卫生组织，2021年)。对麻风病的早期诊断可以打破传播链，减少特定社区的二级畸残染麻风病病例数量。然而，准确诊断麻风病仍然是一项挑战。皮肤涂片抗酸染色快速且经济，但敏感性和特异性非常低(nagetal.，2019)。通过临床和病理特征明确诊断麻风病需要有经验的医生。尽管通过全血试验对麻风菌免疫反应阳性的宿主生物标志物对麻风有潜在的诊断价值，(chenetal,2019；geluketal,2010；hungriaetal.,2017；sampaioetal,2011)，但目前中国还没有基于麻风病患者转录组分析的诊断检测。因此，迫切需要开发一种准确的临床诊断检测方法。3.关于结核病的研究表明，il-8(cxcl8)是一种主要由巨噬细胞和间皮细胞产生的趋化因子(parketal.,2003))，在结核患者的淋巴细胞和单核细胞募集到免疫系统中起关键作用(kurashimaetal.,1997)。il-8在结核分枝杆菌的正常免疫反应中发挥着核心作用，是肉芽肿形成所必需的(mirandaetal.，2012；kirkaldyetal.,2003)。对麻风病的研究表明，在麻风病病灶中存在不含中性粒细胞的中性粒细胞趋化剂il-8，强烈提示il-8在这些病灶中作为单核细胞和淋巴细胞招募者的作用(parketal.，2003)。与麻风病对照组相比，麻风病人中il-8的生成显著增加(negeraetal.,2018)。我们之前利用luminex技术进行的研究也发现，麻风菌抗原ml2044刺激后，麻风患者il-8细胞因子表达升高(chenetal.，2019)，这证实了我们在本研究转录组水平上的发现。因此，我们发现麻风病患者血液中il-8mrna/基因表达增加，这与这种趋化因子在麻风病发病机制中的潜在作用是一致的(negeraetal.,2018；bhat和vaidya,2020)。4.早期诊断是控制麻风病的关键。目前，麻风病的金标准诊断试验是基于抗酸杆菌染色和皮肤病变活检的组织病理学检查。麻风菌不能在体外培养，抗酸染色需要皮肤活检中大量的杆菌，敏感性低，特异性差((mohantyetal.,2020)。血清学测试,如ndo-lid快速测试和麻风杆菌抗原elisa是有用的工具来帮助识别的麻风病患者,尤其是多菌型麻风病人,但敏感性低，特异性高(chenetal.,2018)。一些新的方法已经发展起来，如免疫学分析。例如，采用全血法评估麻风分枝杆菌抗原特异性ifn-γ释放，该方法测量全血标本与特定麻风分枝杆菌抗原共培养后ifn-γ的产生，对中国西南地区人群少菌型病人与tb具有诊断价值，但对少菌型病人与家庭接触对照或健康对照无诊断价值(chenetal.,2018)。因此，需要筛选新的麻风分枝杆菌特异性抗原，结合不同的麻风分枝杆菌抗原，建立多细胞因子分析模型，才能更有效地诊断麻风。许多研究已经使用全血试验和麻风病人确定了特征基因或蛋白质，这可以区分麻风病患者、健康对照和家庭接触对照(chenetal.,2018,2019；geluketal.,2012；hungriaetal.,2017；oliveiraetal.,2014；sampaioetal.,2011；)。然而，转录组特征对麻风病早期诊断有用的关系很少被讨论(tió‑coma等，2019；wenetal.，2014)。在越南麻风病患者中进行的一项类似研究显示，在超声抗原刺激多菌型病人pbmc(外周血单个核细胞)后，ifn-γ途径基因包括ifn-γ、stat1、irf8和il-12上调(manryj.etal.2017)。然而，我们的研究结果没有发现这些基因的表达与我们患者的麻风病有关，这可能是由于不同的种族或疾病状态有关。5.最近，四种micrna(mir-101、mir-196b、mir-27b和mir-29c)的组合被发现能够以80％的敏感性和91％的特异性区分健康对照组和麻风病患者(jorgeetal.，2017)。该套microrna还可区分麻风病和结核样麻风病患者，敏感性为83％，特异性为80％，可能对麻风病具有良好的诊断潜力(jorgeetal.，2017)。在本研究中，我们采用不同的pbmc转录组分析方法，发现il-8、ccl2和serp不仅可以区分麻风病患者和健康对照，而且可以区分多菌型病人和少菌型病人麻风病患者和健康对照。此外，loc34487、loc101928143、ccl2和ncf1c具有区分多菌型病人和少菌型病人以及麻风患者与家庭接触对照的潜力。这一结果与我们之前在中国西南部人群中进行的研究一致，在该人群中，麻风抗原(ml2044)诱导的il-8可以区分麻风流行区少菌型病人型麻风患者和健康对照型麻风患者(chenetal.,2019；bobosha等，2014)。我们还使用验证队列中进行了受试者操作特征分析，结果表明il-8和serp在区分麻风患者和麻风亚型与健康对照方面具有潜在的诊断价值。ncf1c可用于区分麻风患者和麻风亚型与家庭接触对照。技术实现要素：6.为了解决以上问题，本技术提供了一种麻风病早期诊断生物标志物。7.麻风病早期诊断生物标志物，为ccl2/mcp-1、il-8、jakm、atp、nd1、serp、flj10489、linc00659、loc34487、loc101928143、mir22和ncf1c，12个基因组中的一个或多个。8.其中，9.il-8、ccl2/mcp-1、serp、linc00659和flj10489，5个基因组组合用于区分麻风病和流行区健康者的标志物。10.il-8、ccl2/mcp-1、serp和linc00659为多菌型的诊断标志物；il-8、ccl2/mcp‑ꢀ1、serp和flj10489为少菌型诊断标志物。11.ncf1c区分麻风与家庭接触者诊断标志物，而ccl2区分不同的麻风病患者的诊断标志物。12.il-8、ccl2/mcp-1和serp，3个基因组合作为麻风病的诊断标志物。13.本发明另外还提供了检测麻风病诊断生物标志物的试剂及其用于早期麻风病试剂盒中的应用。14.检测ccl2/mcp-1、il-8、jakm、atp、nd1、serp、flj10489、linc00659、loc34487、loc101928143、mir22和ncf1c，12个基因组中在rna表达水平或细胞因子蛋白水平的一个或多个的试剂。15.12个生物标志物基因的引物序列如下：16.标志物实时荧光定量pcr引物序列17.[0018][0019][0020]12个标志物的抗体用enzyme-linkedimmuno-sorbantassay(elisa)或multiplexarrays来检测生物标志物；或者是针对上述标志物的核苷酸引物用qrt-pcr方法来检测宿主外周血单核细胞(pbmc)在麻风抗原刺激后上述标志物基因表达rna水平的变化来诊断麻风病。[0021]所述检测12个标志物的试剂在制备快速血液检测早期麻风病试剂盒中的应用。[0022]其中，检测il-8、ccl2/mcp-1、serp、linc00659和flj10489，5个基因组组合的试剂用于制备区分麻风病和流行区健康者的诊断试剂盒。[0023]检测il-8、ccl2/mcp-1、serp和linc00659的试剂用于制备多菌型的诊断试剂盒；检测il-8、ccl2/mcp-1、serp和flj10489的试剂用于制备少菌型的诊断试剂盒。[0024]检测ncf1c试剂用于制备区分麻风与家庭接触者的诊断试剂盒。[0025]检测ccl2试剂用于制备区分不同的麻风病患者的诊断试剂盒。[0026]检测il-8、ccl2/mcp-1和serp，3个基因组合的试剂用于制备麻风病的诊断试剂盒。[0027]一种试剂盒，包括检测ccl2/mcp-1、il-8、jakm、atp、nd1、serp、flj10489、linc00659、loc34487、loc101928143、mir22和ncf1c，12个基因组中在rna表达水平或细胞因子蛋白水平的一个或多个的试剂。[0028]其中mrna表达水平用实时荧光定量pcr(qrt-pcr)来检测，细胞因子水平用抗原抗体检测方法确定。[0029]其中外周血单核细胞pbmc在麻风抗原刺激后rna表达水平用quantitativereal-timepcr(qrt-pcr)(实时定量pcr)(引物序列见序列表)来检测，而细胞因子水平用抗原抗体检测方法如酶联免疫吸附法enzyme-linkedimmuno-sorbantassay(elisa)或多重细胞因子检测方法multiplexarrays确定。[0030]本发明使用rna测序(rna-seq)来识别候选宿主生物标志物，这些标志物在麻风分枝杆菌刺激的多菌型和少菌型麻风患者以及非麻风对照(包括健康家庭接触者和健康对照)外周血单个核细胞中有差异表达。本研究发现的差异表达基因可以作为有用的生物标志物，并为快速诊断麻风病的血液检测方法的开发提供良好的基础。[0031]本发明在外周血单个核细胞中识别一种特异的宿主转录谱，以区分麻风患者和非麻风患者，从而对疾病进行早期诊断。方法：发现队列中纳入了16名患者，其中，8名麻风病患者，包括4个多菌型(多菌型病人)和4个少菌型(少菌型病人)病人；8名非麻风病对照者(包括4名健康家庭接触者和4名流行区健康对照)。研究麻风病患者和非麻风病对照组间pbmc对麻风菌抗原转录组反应的差异。结果：鉴定出12个差异表达基因(ccl2/mcp-1、il-8、jakm、atp、nd1、serp、flj10489、linc00659、loc34487、loc101928143、mir22和ncf1c)。在验证队列中的82个个体(13多菌型病人,10少菌型病人,37家庭接触对照和22健康对照)中，使用实时定量pcr进一步验证了12个差异表达基因的准确性。我们发现il-8、ccl2/mcp-1、serp、linc00659和flj10489这5个基因组合在区分麻风病和流行区健康者方面表现良好。此外，与流行区健康者相比，il-8、ccl2/mcp-1、serp和linc00659的表达升高与多菌型的诊断有关，而il-8、ccl2/mcp-1、serp和flj10489的表达升高被发现是少菌型的有用标志物。此外，我们发现ncf1c在麻风患者中的表达可以区分麻风与家庭接触者，而ccl2的表达可以区分不同的麻风病患者。综上所述，在鉴定的12个候选基因中，il-8、ccl2/mcp-1和serp3个基因组合在区分麻风病患者和健康对照组方面表现最好。这些发现可能对开发一种用于早期诊断麻风病的快速血液检测方法具有启示意义。附图说明[0032]图1为麻风早期诊断标志物筛选流程图。[0033]图2为rna测序后差异基因图。麻风病(mb pb)患者与非麻风病对照组相比，表达转录本的数量发生了改变。degs:差异表达基因；rna-seq：rna测序；mb:多菌型病人；pb:少菌型病人；hhc:健康家庭接触者；ec:流行区健康对照。[0034]图3为不同麻风病患者组和对照组的差异基因3d维恩分析图；[0035]其中，3a为麻风病患者与ecs、hhcs和非麻风病对照组之间的degs维恩图；3b为mb型麻风病患者与ecs、hhcs、pb型麻风病患者之间的degs维恩图；3c为pb型麻风患者与ecs、hhcs、mb型麻风患者的degs维恩图。mb:多菌型病人；pb:少菌型病人；hhc:健康家庭接触者；ec:流行区健康对照。[0036]图4为病人流行区健康对照差异基因热图；[0037]其中，4a多菌型病人与家庭接触者差异基因热图；4b少菌型病人与流行区健康对照差异基因热图；4c多菌型病人与流行区健康对照差异基因热图；4d麻风病人与流行区健康对照差异基因热图。[0038]图5为麻风病人与非病人差异基因表达火山图。[0039]个体基因的对数倍变化(x轴)与以10为底的负对数的p值(y轴)相对应。与非麻风病对照相比，正值log2(foldchange)值代表麻风病患者的基因表达上调，而负值代表下调。虚线上方的圆圈表示麻风病患者与对照组之间的差异表达基因。红色表示上调，绿色表示下调。[0040]图6差异基因验证结果。[0041]验证队列中麻风菌刺激的pbmcs的基因表达水平。麻风患者、hhcs和ecs中(a-l)m.麻风刺激pbmc中atp、ccl2/mcp-1、il-8、jakm、mtnd1、serp、flj10489、linc00659、loc34487、loc101928143、mir22和ncf1c表达水平的差异。采用非参数数据的mann-whitney检验评估统计差异。mb:多菌型病人；pb:少菌型病人；hhc:健康家庭接触者；ec:流行区健康对照；deg:差异表达基因；pbmc:外周血单个核细胞。[0042]图7不同病人与流行区对照的roc曲线图；[0043]其中，在验证试验中，麻风病患者和非麻风病对照组的pbmc中对每个选定基因的性能测试。roc曲线下面积显示pbmc样本中差异表达基因的敏感性和特异性.。7a验证试验中筛选基因在少菌型病人与流行区对照的roc曲线图；7b验证试验中筛选基因在多菌型病人与流行区对照的roc曲线图；7c验证试验中筛选基因在麻风病人与流行区对照的roc曲线图。[0044]图8基因表达联合应用的决策树结果；[0045]其中，[0046]8ail8和flj10489表达水平的联合对于区分麻风病人和正常人的决策树结果。麻风病人组22人，正常人22人。敏感度90.9％，特异度90.9％，正确率90.9％。[0047]8bserp和jakm表达水平的联合对于区分麻风病人和正常人的决策树结果。麻风病人组22人，正常人22人。敏感度81.8％，特异度95.5％，正确率88.6％。[0048]8cmir22和atp6表达水平的联合对于区分麻风病人和长期接触者的决策树结果。麻风病人组22人，长期接触者19人。敏感率77.3％，特异率84.2％，正确率80.5％。具体实施方式[0049]2014年10月，我们从云南省红河自治州招募了8名麻风病患者(多菌型病人和少菌型病人各4例)和8名非麻风病对照(家庭接触对照和健康对照各4例)作为探索队列。这项研究中的所有人都是同一种族的。在招募的患者中，3名男性，5名女性。2014年2月至2016年5月，在同一区域招募了82名个体(13多菌型病人、10少菌型病人、37家庭接触对照和22健康对照)进行验证。麻风病患者使用ridley-jopling分类法(ridleyandjopling,1966)进行分类，根据世界卫生组织的分类(reibeletal.，2015)将麻风病患者分为多菌型病人和少菌型病人两组。记录了麻风病患者的基本情况和临床特点。多菌型病人和少菌型病人患者治疗时间的中位数和四分位差(iqr)分别为4个月(1-7个月)和1个月(1-5个月)。麻风病诊断时的年龄从21岁到59岁不等，中位数为39岁。探索队列中有10名男性和6名女性，验证队列中有45名男性和37名女性。家庭接触对照与成年麻风病患者生活在同一家庭。健康对照属于与麻风病患者生活在同一社区的正常对照组(表1)[0050]表1麻风病人和对照者的临床信息[0051][0052]卫生组织:世界卫生组织提出的麻风分类[0053]患者人数；rjridley-jopling分类；bl:边缘型麻风；bt,边缘型结核样的；tt,结核样的结核样的；iqr:四分位间距。mb:多菌型病人；pb:少菌型病人；hhc:健康家庭接触者；ec:流行区健康对照[0054]麻风分枝杆菌全细胞超声抗原通过科罗拉多州立大学获得。[0055]1.血样和病人pbmc采集[0056]外周血(15ml)置于edta管中。采用ficoll-paque分离法(cedarlane,catno.cl5020)。简单地说，将外周血3000×g离心10分钟，以获得病人pbmc。去除含有血浆的上清液，用等体积的rpmi-1640(invitrogen-gibco；英杰公司)。共8ml稀释的涂层在4mlficoll-paque(cedarlane)上分层。在20-30℃下，3000×g梯度离心20分钟。病人pbmc被小心移液和洗涤。使用自动细胞计数器(invitrogen)测定细胞数量和活力。用台盼蓝染色鉴定非活细胞，用活细胞总数计算细胞活力，并在rpmi-1640中调整为2×106个细胞/ml。然后将细胞分成2等份(12孔板每孔990μl)，每孔加入麻风菌全细胞超声抗原10μl(1mg/ml)，37℃孵育12h。[0057]2.总rna提取及rna测序[0058]使用trizol保存的病人pbmc(lifetechnologies,grandisland,ny)，按照之前描述的制造商说明书提取总rna(yuanetal.，2017)。为了确定rna的浓度，使用nanodropone光谱仪(thermofisherscientificinc.，waltham,ma)测量260nm处的吸光度。测定rna完整性数(rin)和28s:18s比值为7.0，和一个28s:18s比例为1.8，用于后续实验。[0059]3.cdna文库的制备与测序[0060]文库和rna-seq的构建由上海烈冰生物信息公司(shanghainovelbioinformaticscompany,china)完成。然后，按照illumina提出的方案，制备插入大小为150bp的对端cdna文库。cdna文库在上海烈冰生物信息公司illuminahiseq2000基因组测序平台上测序。[0061]2.7rna-seq数据分析[0062]使用deseq算法分析样本之间的差异表达基因(andersetal.,2010)。然后得到一个p值，并使用错误发现率方法对其进行校正(benjaminiy,etal.，2001)。显著差异的分类为参数≥2倍差异和≥5000rawreads的转录本丰度。[0063]通过检索美国国家生物技术信息中心(ncbi)、uniprot、go(geneontology)和kegg数据库(http://www.genome.jp/kegg/)，并使用blast(basiclocalalignmentsearchtool)进行比对，确定差异基因的功能注释。选择最佳匹配来注释差异表达基因。最后，利用默认参数对差异表达基因进行go和kegg功能分析，标注差异基因的主要go和kegg类别。[0064]4.用rt-qpcr验证rna-seq数据[0065]为了验证rna-seq数据，使用sybrpremixextaqtmiikit(perfectrealtime)进行rt-qpcr。发现阶段使用的16个rna样本也用于验证的rna-seq分析。采用primerpremier软件(5.0版)对引物进行筛选和分析(supplementarytables1)。反应混合料中含有sybrpremixextaqtmii(2×)6.25μl、roxreferencedyeii(50×)0.25μl、10μm引物混合物1μl、cdna1μl和水，最终体积为12.5μl。循环条件为:95℃30s,95℃5s,60℃34s。所有的rt-qpcr实验都是在appliedbiosystems公司的7500fastreal-timepcr系统(appliedbiosystems)上进行的，分别使用3个生物学重复。gapdhmrna作为内部对照，使用2-δδct方法计算foldchange(其中δct＝ctmrna-ctgapdh，δδct＝δctstimulated-δctunstimulated)。[0066]5.统计分析[0067]统计分析主要采用graphpadprism8.0软件(graphpadsoftwareinc.，sandiego,ca,usa)和spss25.0软件。采用非参数mann-whitneyu检验分析两组间的差异。p《0.05被认为有显著差异。[0068]6结果[0069]3.1研究设计概况及参与者的基本特征[0070]我们的研究遵循两步设计(图1)。首先，我们纳入了8名麻风病患者(多菌型病人和少菌型病人各4名)和8名非麻风病对照组(家庭接触对照和健康对照各4名)。通过使用rna-seq比较两组(麻风病患者和非麻风病对照)全血病人中pbmcs中麻风病抗原刺激的基因表达(所有受试者的pbmc均接受麻风菌超声抗原刺激，以变化倍数≥2,p《0.05，rawreads≥5,000为标准，在rna-seq分析中鉴定差异表达基因)，我们获得了一个在麻风病患者和对照组之间差异表达的基因集。接下来，我们利用在23名麻风病患者(13多菌型病人和10少菌型病人)和59名非麻风病对照(37个家庭接触对照和22个健康对照)验证队列中差异诱导的上调基因(从麻风病分枝杆菌抗原刺激的pmcs中获得rna)，选择的基因通过rt-qpcr验证为麻风病的诊断生物标志物(图1)。[0071]表1列出了队列的人口学和临床特征。探索队列中多菌型病人和少菌型病人麻风患者治疗时间的中位和iqr分别为4个月(1-7个月)和1个月(1-5个月)。验证队列中多菌型病人和少菌型病人麻风患者治疗时间的中位和iqr分别为5.5个月(1-7个月)和3.5个月(1-7个月)。[0072]3.2通过rna-seq分析麻风病患者与对照患者麻风病抗原刺激的病人pbmc转录组差异[0073]我们通过rna-seq分析了16个样本的差异表达基因结果(图2)。当麻风病患者与非麻风病对照的转录组图谱进行比较时，共获得423个差异表达基因，其中260和163个差异表达基因分别上调和下调。此外，从多菌型病人和少菌型病人麻风病患者中获得723和314个差异表达基因，与非麻风病对照相比，多菌型病人和少菌型病人麻风病患者中分别有272和232个差异表达基因上调，451和82个差异表达基因下调(图2)。[0074]3.3麻风病患者与非麻风病对照者之间的差异表达基因可作为潜在的诊断标志物[0075]我们使用维恩图分析来选择最高的差异表达基因，如图4所示为热图。我们发现麻风病患者中有27个差异表达基因与健康对照相比上调(图4a)，多菌型病人中有45个差异表达基因与健康对照相比上调(图4b)，少菌型麻风病患者中有16个差异表达基因与健康对照相比上调(图4c)。与家庭接触对照相比，多菌型病人麻风病患者中有18个差异表达基因表达上调(图4d)。更多细节见补充表s2和图5。[0076]3.4在验证队列中，所选差异表达基因在区分麻风病患者和对照组中的表现[0077]为了验证上述基因的相关性，我们在一个验证队列中评估了它们的表现，该队列包括23名麻风病患者(13多菌型病人和10少菌型病人)和59名非麻风病对照(37家庭接触对照和22健康对照)。根据rna-seq在麻风病患者中比非麻风病对照者高2倍以上的结果，以及随后的rt-pcr证实，以下12个基因被确定并评估为潜在的麻风病诊断生物标志物:ccl2/mcp-1、il-8、jakmip2、atp、nd1、serpinb2、flj10489、linc00659、loc34487、loc101928143、mir22、ncf1c。补充表s3中列出了本文中提到的和ncbi搜索中包含的作为潜在诊断生物标志物的基因的登录号/id号列表。使用接受者操作特征(roc)曲线分析23例麻风病患者与22例健康对照患者，我们发现候选基因的表现如下:曲线下面积(auc)为0.9070(95％置信区间[ci]0.8164-0.9976)，敏感性为81.82％，特异性为95.45％，其中il-8的变化为18.2倍；auc为0.8662(95％ci0.7545-0.9778)，敏感度为90％，特异度为95.45％，ccl2为56.8倍；auc为0.8182(95％ci0.6813-0.9551)，敏感性为85.71％，特异性为81.82％，serp的变化为10.5倍；auc为0.7803(95％ci0.6217‑‑0.9388),灵敏度为77.3％,和特异性为68.2％flj10489,倍数变化为5.7(图7和表2，表3)。此外,我们评估了这些基因在23个麻风病人和37健康对照的验证能力。我们发现ncf1cauc为0.8448(95％ci0.7165‑‑0.9731),灵敏度为72.22％,和特异性为82.35％,倍数变化为3.8(表2)。我们利用决策树方法，又做了联合基因诊断以区分麻风病人与正常人，发现经评估il8和flj10489两个基因对麻风病人和正常人的联合诊断效果最好，敏感性达90.9％，特异性达90.9％，区分病人和正常人的正确率达90.9％。联合诊断结果见下表3及图8a及8b。另外，联合基因诊断以区分麻风病人与长期接触者，经评估mir22和atp6两个基因对麻风病人和长期接触者的联合诊断效果最好，敏感性达77.3％，特异性达84.2％，区分病人和长期接触者的正确率达80.5％。阳性预测值为85％，阴性预测值为84.2％，联合诊断结果见表4及图8c。总之,ccl2,和ncf1c显示较好的区分麻风病患者和健康对照组。候选基因的特点详见supplementarytables4和图7a-c。[0078]表2.筛选的单个基因对麻风病人和不同对照正常人的诊断效果[0079][0080]pbmc:外周血单个核细胞；rt-qpcr，逆转录定量聚合酶链反应；mb:多菌型病人；pb:少菌型病人；hhc:健康家庭接触者；ec:流行区健康对照；mrna信使rna；lncrna：长链非编码rna；auc:曲线下面积；ci,置信区间。*:p《0.05[0081]表3不同的基因组合对麻风病人和正常人的诊断效果[0082][0083]表4不同基因组合区分麻风病人和长期接触者的诊断效果[0084][0085]4讨论[0086]在本研究中，我们纳入了多菌型麻风病人和少菌型麻风病人、家庭接触对照和健康对照。我们对他们的pbmc进行麻风抗原刺激，然后进行rna-seq，并确定了一个特异基因组合(ccl2/mcp-1、il-8、jakm、atp、nd1、serp、flj10489、linc00659、loc34487、loc101928143、mir22和ncf1c)，这可能对麻风的快速诊断有用。这些候选基因随后在一个单独的验证队列中使用多菌型病人和少菌型病人麻风病患者、家庭接触对照和健康对照的少菌型病人的pbmc进行验证，我们发现il-8、ccl2/mcp-1、serp、linc00659和flj10489这5个基因组的表达升高可以区分麻风病患者和健康对照。此外，il-8、ccl2/mcp-1、serp和linc00659基因表达增加与多菌型病人诊断相关，而il-8、ccl2/mcp-1、serp和flj10489表达上调被发现是少菌型病人诊断有用的生物标志物。此外，我们评估了麻风病患者与家庭接触对照之间的基因表达。结果表明，ncf1c在麻风病患者中表达降低，可区分麻风病患者与家庭接触对照。此外，多菌型病人中ccl2的表达高于少菌型病人麻风患者，可以区分不同的麻风患者。据我们所知，这是第一份关于长链非编码rnancf1c的报导，它将麻风病患者与健康对照组区分开来。当前第1页12当前第1页12