一种用于盐酸环苯扎林的质量检测方法与流程

1.本发明涉及质量检测技术领域，具体涉及一种用于盐酸环苯扎林的质量检测方法。


背景技术：

2.盐酸环苯扎林，化学名称：5-(3-二甲胺基亚丙基)二苯并[a,d]环庚烯盐酸盐
[0003]
化学结构式：
[0004]
分子式：c
20h21n·
hcl；分子量：311.85；理化性质：盐酸环苯扎林为白色或类白色结晶性粉末。在水、乙醇、甲醇或三氯甲烷中易溶，在二氯甲烷中溶解。本品的熔点为215～219℃。制剂：盐酸环苯扎林缓释胶囊规格：(1)15mg (2)30mg；适应症：本品作为休息和理疗的辅助治疗，用于缓解急性、疼痛性肌肉骨骼疾病相关的肌肉痉挛及其伴随的疼痛、触痛和活动受限等症状或体征。本品为化学原料药，根据《化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则》、《化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》，并参考 usp32-nf27盐酸环苯扎林及片的标准，对本品的外观、引湿性、溶解度、熔点、鉴别、酸度、硫酸盐、有关物质、残留溶剂、干燥失重、炽灼残渣、重金属及含量测定等质量指标进行了系统研究，最终确定了质量标准中各项质量指标，为今后有效控制产品质量提供了科学依据。
[0005]
基于此，本发明提供一种用于盐酸环苯扎林的质量检测方法。


技术实现要素：

[0006]
针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种用于盐酸环苯扎林的质量检测方法。
[0007]
本发明解决技术问题采用如下技术方案：
[0008]
本发明提供了一种用于盐酸环苯扎林的质量检测方法，包括以下步骤：
[0009]
步骤一，样品来源选择：选择盐酸环苯扎林；
[0010]
步骤二，高效液相色谱测定：
[0011]
s1，确定流动相为：水-乙腈-甲醇-甲磺酸(48∶28∶24∶0.2)，用二乙胺调ph值至3.6；
[0012]
s2，检测波长的选择：
[0013]
盐酸环苯扎林、起始原料ⅰ及中间体的紫外测定；
[0014]
取盐酸环苯扎林1.02mg、起始原料ⅰ[二苯并(a,d)环庚烯-5-酮]1.12mg 及中间体[5-(3-二甲氨基丙基)-5-羟基二苯并(a,d)环庚烯]1.03mg，分别置100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0015]
s3，强制降解杂质紫外光谱分析：
[0016]
由各强制降解试验产生杂质的光谱图可知：高温、酸、碱、氧化及光照强制降解试验产生的杂质大部分在约290nm处有最大吸收；
[0017]
在290nm波长处，各种降解条件下主成分峰面积的降低与各杂质峰面积的增加基本一致，即物料基本平衡；
[0018]
步骤三，溶剂干扰、峰确认及分离度试验：分别取二甲基甲酰胺、冰醋酸与二甲基甲酰胺的混合液，溴乙烷、冰醋酸与二甲基甲酰胺的混合液各1 μl，注入气相色谱仪，记录色谱图；
[0019]
步骤四，盐酸环苯扎林质量标准的含量测定。
[0020]
优选地，所述强制降解杂质紫外光谱分析中的强制降解试验包括以下步骤：
[0021]
s1：取盐酸环苯扎林，进行高温、酸、碱、氧化及光照破坏试验，用二极管阵列检测器考察主峰纯度、物料平衡，研究本品的降解途径并对主要降解杂质进行归属。
[0022]
s2：破坏前，精密称取本品6.25mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0023]
s3：高温破坏，精密称取本品6.21mg，置10ml试管中，置电炉上加热至熔化，变为红棕色液体，放冷，用流动相溶解并转移至50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0024]
s4：酸破坏，精密称取本品6.25mg，置50ml量瓶中，加稀盐酸3ml，水浴加热1小时，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0025]
s5：碱破坏，精密称取本品6.30mg，置50ml量瓶中，加5mol/l氢氧化钠溶液3ml，水浴加热1小时，放冷，用稀盐酸调ph值至中性，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0026]
s6：氧化破坏，精密称取本品6.09mg，置50ml量瓶中，加30％过氧化氢水溶液0.5ml，水浴加热30分钟，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0027]
s7：光照破坏，精密称取本品6.55mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，密封，在照度为4500lx的光照箱内放置6天，滤过，取 20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0028]
优选地，所述溴乙烷线性范围及回归方程为：精密量取贮备液0.6、0.8、 1.0、1.2、1.4ml，分别置10ml量瓶中，分别加入冰醋酸1ml，加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。以峰面积对浓度作曲线，用最小二乘法计算回归方程和相关系数；
[0029]
回归方程：y＝0.7493x(μg/ml)－1.3
[0030]
相关系数：r＝0.9978。
[0031]
优选地，所述盐酸环苯扎林质量标准的含量测定中：
[0032]
精密称取盐酸环苯扎林对照品0.2619g，加冰醋酸40ml使溶解，再加醋酸汞试液5ml，照电位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/l)滴定，并将滴定的结果用空白校正，每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/l)相当于31.19mg的 c
20h21n·
hcl；
[0033]
以电位测量值(e)为纵坐标，以消耗滴定液体积(v)为横坐标，绘制 e-v曲线；以δ
e/δv为纵坐标，以消耗滴定液体积(v)为横坐标，绘制δ e/δv-v曲线。
[0034]
优选地，所述盐酸环苯扎林质量标准的线性范围及回归方程为：
[0035]
取盐酸环苯扎林对照品约0.15、0.20、0.25、0.30、0.35g各一份，精密称定，加冰醋酸40ml溶解后，加醋酸汞试液5ml，照电位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/l)滴定，以高氯酸滴定液消耗的体积对盐酸环苯扎林的称样量作曲线，并用最小二乘法计算回归方程及相关系数；回归方程：y(ml)＝31.715x (g) 0.0188；相关系数：r＝1。
[0036]
优选地，所述称样量为0.1564～0.3542g范围内，盐酸环苯扎林称样量与所消耗的滴定液体积呈良好的线性关系。
[0037]
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
[0038]
本发明通过试验，结果表明：本品为白色或类白色结晶性粉末；无引湿性；在水、乙醇、甲醇或三氯甲烷中易溶，在二氯甲烷中溶解；熔点为215～ 219℃；可通过紫外-可见分光光度法、红外分光光度法和理化法进行鉴别。
[0039]
通过高效液相色谱法和薄层色谱法的有关物质测定对比得知：薄层色谱法主要对254nm下有较强紫外吸收的杂质，有一定的检出能力，对其他杂质检出能力较弱，采用薄层色谱法测定三批盐酸环苯扎林供试品及对照品的有关物质，均未检出杂质斑点。而高效液相色谱法在专属性、灵敏度及对杂质有效控制能力上明显强于薄层色谱法，故标准中规定采用高效液相色谱法、在290nm波长下测定本品的有关物质。采用高效液相色谱法测定有关物质，三批盐酸环苯扎林供试品的单个最大杂质及总杂质均小于0.1％；三批盐酸环苯扎林供试品与美国上市制剂的杂质谱基本一致，杂质个数明显少于上市制剂，杂质含量明显低于上市制剂的含量。
[0040]
采用气相色谱法对合成过程中使用的6种有机溶剂进行了详细研究，采用顶空进样法测定叔丁基甲基醚、丙酮、二氯甲烷、四氢呋喃及乙醇，采用直接进样法测定溴乙烷，结果三批盐酸环苯扎林供试品均检出乙醇，且含量均低于中国药典2010年版规定的限度0.5％；其他5种溶剂(叔丁基甲基醚、溴乙烷、丙酮、二氯甲烷及四氢呋喃)均未检出。因二氯甲烷、四氢呋喃及溴乙烷为合成中第一步用到的溶剂，故仅将叔丁基甲基醚、丙酮与乙醇订入标准。
[0041]
采用容量法测定本品的含量，滴定终点突跃明显，线性关系、重复性、溶液稳定性良好。经检测，三批盐酸环苯扎林供试品及对照品按干燥品计算，含c20h21n
·
hcl均在99.0％以上，另外，通过试验对本品的酸度、硫酸盐、干燥失重、炽灼残渣、重金属进行了检测，最终确定了质量标准。试验表明，该标准可较好地控制本品的质量。
附图说明
[0042]
图1是本发明的叔丁基甲基醚时间-峰面积曲线图；
[0043]
图2是本发明的溴乙烷、丙酮及乙醇时间-峰面积曲线图；
[0044]
图3是本发明的四氢呋喃与二氯甲烷时间-峰面积曲线图；
[0045]
图4是本发明的盐酸环苯扎林电位滴定曲线图。
具体实施方式
[0046]
下面结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显
然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0047]
(一)实施例1
[0048]
本实施例中，
[0049]
本实施例的一种用于盐酸环苯扎林的质量检测方法，包括以下步骤：
[0050]
步骤一，样品来源选择：选择盐酸环苯扎林；
[0051]
步骤二，高效液相色谱测定：
[0052]
s1，确定流动相为：水-乙腈-甲醇-甲磺酸(48∶28∶24∶0.2)，用二乙胺调ph值至3.6；
[0053]
s2，检测波长的选择：
[0054]
盐酸环苯扎林、起始原料ⅰ及中间体的紫外测定；
[0055]
取盐酸环苯扎林1.02mg、起始原料ⅰ[二苯并(a,d)环庚烯-5-酮]1.12mg 及中间体[5-(3-二甲氨基丙基)-5-羟基二苯并(a,d)环庚烯]1.03mg，分别置100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；
[0056]
s3，强制降解杂质紫外光谱分析：
[0057]
由各强制降解试验产生杂质的光谱图可知：高温、酸、碱、氧化及光照强制降解试验产生的杂质大部分在约290nm处有最大吸收；
[0058]
在290nm波长处，各种降解条件下主成分峰面积的降低与各杂质峰面积的增加基本一致，即物料基本平衡；
[0059]
步骤三，溶剂干扰、峰确认及分离度试验：分别取二甲基甲酰胺、冰醋酸与二甲基甲酰胺的混合液，溴乙烷、冰醋酸与二甲基甲酰胺的混合液各1 μl，注入气相色谱仪，记录色谱图；
[0060]
步骤四，盐酸环苯扎林质量标准的含量测定。
[0061]
本实施例强制降解杂质紫外光谱分析中的强制降解试验包括以下步骤：
[0062]
s1：取盐酸环苯扎林，进行高温、酸、碱、氧化及光照破坏试验，用二极管阵列检测器考察主峰纯度、物料平衡，研究本品的降解途径并对主要降解杂质进行归属。
[0063]
s2：破坏前，精密称取本品6.25mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0064]
s3：高温破坏，精密称取本品6.21mg，置10ml试管中，置电炉上加热至熔化，变为红棕色液体，放冷，用流动相溶解并转移至50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0065]
s4：酸破坏，精密称取本品6.25mg，置50ml量瓶中，加稀盐酸3ml，水浴加热1小时，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0066]
s5：碱破坏，精密称取本品6.30mg，置50ml量瓶中，加5mol/l氢氧化钠溶液3ml，水浴加热1小时，放冷，用稀盐酸调ph值至中性，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0067]
s6：氧化破坏，精密称取本品6.09mg，置50ml量瓶中，加30％过氧化氢水溶液0.5ml，水浴加热30分钟，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取20μl注入液相色谱仪，
记录色谱图。
[0068]
s7：光照破坏，精密称取本品6.55mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，密封，在照度为4500lx的光照箱内放置6天，滤过，取 20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0069]
本实施例溴乙烷线性范围及回归方程为：精密量取贮备液0.6、0.8、1.0、 1.2、1.4ml，分别置10ml量瓶中，分别加入冰醋酸1ml，加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。以峰面积对浓度作曲线，用最小二乘法计算回归方程和相关系数；
[0070]
回归方程：y＝0.7493x(μg/ml)－1.3
[0071]
相关系数：r＝0.9978。
[0072]
本实施例盐酸环苯扎林质量标准的含量测定中：
[0073]
精密称取盐酸环苯扎林对照品0.2619g，加冰醋酸40ml使溶解，再加醋酸汞试液5ml，照电位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/l)滴定，并将滴定的结果用空白校正，每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/l)相当于31.19mg的 c
20h21n·
hcl；
[0074]
以电位测量值(e)为纵坐标，以消耗滴定液体积(v)为横坐标，绘制e-v曲线；以δe/δv为纵坐标，以消耗滴定液体积(v)为横坐标，绘制δ e/δv-v曲线。
[0075]
本实施例盐酸环苯扎林质量标准的线性范围及回归方程为：
[0076]
取盐酸环苯扎林对照品约0.15、0.20、0.25、0.30、0.35g各一份，精密称定，加冰醋酸40ml溶解后，加醋酸汞试液5ml，照电位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/l)滴定，以高氯酸滴定液消耗的体积对盐酸环苯扎林的称样量作曲线，并用最小二乘法计算回归方程及相关系数；回归方程：y(ml)＝31.715x (g) 0.0188；相关系数：r＝1。
[0077]
本实施例称样量为0.1564～0.3542g范围内，盐酸环苯扎林称样量与所消耗的滴定液体积呈良好的线性关系。
[0078]
(二)实施例2
[0079]
本实施例中，残留溶剂
[0080]
本品合成过程中用到的有机溶剂有：叔丁基甲基醚、溴乙烷、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷及乙醇，乙醇为最后成品精制用溶剂；
[0081]
在采用顶空气相色谱法进行回收率试验时，发现由于盐酸环苯扎林的作用，溴乙烷极不稳定，可能脱溴转化为响应值更高的物质，其他溶剂较为稳定，三批供试品残留溶剂测定色谱图中在溴乙烷及溴乙烷转化的物质出峰处均未检出峰；后又采用直接进样法对溴乙烷单独进行了研究，并采用经验证的方法测定三批供试品中溴乙烷的残留量，亦均未检出溴乙烷。
[0082]
叔丁基甲基醚、溴乙烷、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷及乙醇
[0083]
仪器：agilent technologies 7890a gc system
[0084]
agilent 7694e headspace sampler
[0085]
色谱柱：hp-ffap(25m
×
0.32mm
×
0.5μm)
[0086]
进样口温度：200℃
[0087]
柱温：40℃，维持6分钟，以每分钟30℃的速率升温至180℃，维持3 分钟
[0088]
检测器：fff 250℃
[0089]
顶空瓶：20ml，溶液体积：5ml
[0090]
顶空平衡温度：80℃，平衡时间为10分钟
[0091]
氮气柱流量：1.0ml/min；分流比：1∶1
[0092]
样品溶剂选择
[0093]
根据盐酸环苯扎林的溶解性及上述6种溶剂的沸点，选择二甲基甲酰胺作为样品溶剂。
[0094]
气相色谱条件的选择及分离度试验
[0095]
分别采用fb-624(30m
×
0.53mm
×
3.0μm)或hp-ffap (25m
×
0.32mm
×
0.5μm)色谱柱，在起始温度40℃，维持7分钟，以每分钟 30℃的速率升温至180℃，维持3分钟，进样口温度200℃，fff检测器温度 250℃的色谱条件下，取上述6种溶剂的混合液5ml，置20ml的顶空瓶中，密封，平衡温度85℃，平衡时间10分钟，顶空测定。
[0096]
结果表明：采用色谱柱fb-624(30m
×
0.53mm
×
3.0μm)测定，除丙酮色谱峰与溴乙烷色谱峰之间的分离度为1.25外，其他各峰之间的分离度均大于 1.5，理论板数均大于6000。
[0097]
采用色谱柱hp-ffap(25m
×
0.32mm
×
0.5μm)测定，二氯甲烷色谱峰与乙醇色谱峰之间的分离度为1.40，基本实现分离，其他各峰之间的分离度均大于2.0，理论板数均大于30000。
[0098]
对比以上试验结果得知：在柱温条件相同的情况下，hp-ffap (25m
×
0.32mm
×
0.5μm)色谱柱在理论板数、分离性能方面均优于fb-624 (30m
×
0.53mm
×
3.0μm)色谱柱，另外各溶剂峰均能在6分钟之前出峰，故确定本品残留溶剂检查的色谱条件为：采用hp-ffap(25m
×
0.32mm
×
0.5μm) 色谱柱；起始温度40℃，维持6分钟，以每分钟30℃的速率升温至180℃，维持3分钟，进样口温度200℃，fff检测器温度250℃。
[0099]
残留溶剂峰确认及空白溶剂干扰试验
[0100]
分别取丙酮、二氯甲烷、叔丁基甲基醚、四氢呋喃、溴乙烷、乙醇的二甲基甲酰胺溶液、上述各溶剂的混合液及空白溶剂各5ml，置20ml的顶空瓶中，密封，在平衡温度为85℃，平衡时间为10分钟的条件下，顶空进样测定。
[0101]
结果表明：结果表明：
①
叔丁基甲基醚峰保留时间为2.143分钟，溴乙烷峰保留时间为2.515分钟、丙酮峰保留时间为2.981分钟、四氢呋喃峰保留时间为3.466分钟、二氯甲烷峰保留时间为4.747分钟、乙醇峰保留时间为4.885 分钟，其中溴乙烷的色谱图中在2.070分钟有一杂质峰。
[0102]
②
空白溶剂二甲基甲酰胺在1.764、4.112分钟有较小的杂质峰，在7分钟之后亦有杂质峰，但均不影响各残留溶剂的测定。
[0103]
顶空测定条件的选择
[0104]
在气相色谱条件确定的条件下，对顶空测定条件平衡时间进行选择。
[0105]
各溶剂贮备液ⅰ配制：分别精密称取乙醇129.8mg、丙酮137.1mg、叔丁基甲基醚127.8mg、溴乙烷121.6mg、四氢呋喃24.3mg、二氯甲烷19.6mg，分别置六个100ml量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀。
[0106]
分别精密量取各溶剂的贮备液ⅰ2ml，置同一50ml量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置20ml顶空瓶中，密封，在平衡温度80℃，分别在平衡时间5、
10、15、25、35分钟时，顶空进样测定，以时间为横坐标，各溶剂峰面积为纵坐标绘制曲线。
[0107]
盐酸环苯扎林顶空平衡时间测定结果(表1)
[0108]
表1
[0109][0110]
见图1-3：
[0111]
结果表明：平衡时间在10分钟时，各溶剂的峰面积达到平台，说明在10 分钟时，气液相达到平衡，故确定平衡时间为10分钟。
[0112]
各溶剂贮备液ⅱ配制：分别精密称取叔丁基甲基醚128.1mg、溴乙烷 123.2mg、丙酮127.5mg、四氢呋喃26.8mg、二氯甲烷19.3mg、乙醇130.7mg，分别置六个100ml量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀。
[0113]
分别精密量取各贮备液ⅱ4ml，置同一50ml量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml，分别置5个10ml量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置20ml顶空瓶中，密封，分别顶空进样，记录色谱图。以各溶剂的峰面积对浓度作曲线，用最小二乘法计算回归方程和相关系数。
[0114]
叔丁基甲基醚的不同浓度及其相应的峰面积(表2)
[0115]
表2
[0116][0117][0118]
回归方程：y＝2.5055x(μg/ml)－3.9692
[0119]
相关系数：r＝0.9995
[0120]
结果表明：叔丁基甲基醚在30.744～71.736μg/ml的浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系。
[0121]
溴乙烷的不同浓度及其相应的峰面积(表3)
[0122]
表3
[0123][0124]
回归方程：y＝0.819x(μg/ml)－1.1919
[0125]
相关系数：r＝0.9997
[0126]
结果表明：溴乙烷在29.568～68.992μg/ml的浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线
性关系。
[0127]
丙酮的不同浓度及其相应的峰面积(表4)
[0128]
表4
[0129][0130]
回归方程：y＝0.7312x(μg/ml)－1.3551
[0131]
相关系数：r＝0.9997
[0132]
结果表明：丙酮在30.600～71.400μg/ml的浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系。
[0133]
四氢呋喃的不同浓度及其相应的峰面积(表5)
[0134]
表5
[0135][0136]
回归方程：y＝0.4965x(μg/ml)－0.2404
[0137]
相关系数：r＝0.9995
[0138]
结果表明：四氢呋喃在6.432～15.008μg/ml的浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系。
[0139]
二氯甲烷的不同浓度及其相应的峰面积(表6)
[0140]
表6
[0141][0142]
回归方程：y＝0.2033x(μg/ml)－0.1193
[0143]
相关系数：r＝0.9949
[0144]
结果表明：二氯甲烷在4.632～10.808μg/ml的浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系。
[0145]
乙醇的不同浓度及其相应的峰面积(表7)
[0146]
表7
[0147][0148]
回归方程：y＝0.2566x(μg/ml)－0.6443
[0149]
相关系数：r＝0.9990
[0150]
结果表明：乙醇在31.368～73.192μg/ml的浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系。
[0151]
定量限、检测限
[0152]
定量限取叔丁基甲基醚、溴乙烷、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷及乙醇的二甲基甲酰
胺适量，用二甲基甲酰胺稀释制成含溴乙烷2.464μg/ml、丙酮 2.550μg/ml、四氢呋喃2.680μg/ml、二氯甲烷7.720μg/ml、乙醇5.228μg/ml的溶液，作为溴乙烷、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷及乙醇的定量限溶液；分别精密量取5ml，置顶空瓶中，依法测定，记录色谱图。
[0153]
结果表明：溴乙烷、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷及乙醇峰的响应值均约为噪音信号的10倍，故定量限分别为溴乙烷2.464μg/ml(0.025％)、丙酮 2.550μg/ml(0.026％)、四氢呋喃2.680μg/ml(0.027％)、二氯甲烷7.720μg/ml (0.077％)、乙醇5.228μg/ml(0.052％)。
[0154]
精密量取上述溴乙烷、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷及乙醇的定量限溶液 3ml，置10ml量瓶中，加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为叔丁基甲基醚的定量限溶液，精密量取5ml，置顶空瓶中，依法测定，记录色谱
[0155]
结果表明：叔丁基甲基醚峰的响应值约为噪音信号的10倍，故叔丁基甲基醚的定量限为0.277μg/ml(0.0028％)。
[0156]
检测限取叔丁基甲基醚的定量限溶液，作为溴乙烷、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷及乙醇的检测限溶液；分别精密量取5ml，置顶空瓶中，依法测定，记录色谱图。
[0157]
结果表明：溴乙烷、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷及乙醇峰的响应值均约为噪音信号的3倍，故检测限分别为溴乙烷0.739μg/ml(0.0074％)、丙酮0.765μg/ml(0.0076％)、四氢呋喃0.804μg/ml(0.0080％)、二氯甲烷2.316μg/ml (0.0232％)及乙醇1.568μg/ml(0.0157％)。
[0158]
精密量取叔丁基甲基醚的定量限溶液3ml，置10ml量瓶中，加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为叔丁基甲基醚的检测限溶液，精密量取5ml，置顶空瓶中，依法测定，记录色谱图。
[0159]
结果表明：叔丁基甲基醚峰响应值约为噪音信号的3倍，故叔丁基甲基醚的定量限为0.083μg/ml(0.0008％)。
[0160]
分别取各溶剂贮备液ⅱ2ml，置同一50ml量瓶中，加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5ml，置六个顶空瓶中，密封，顶空测定，记录色谱图，计算各溶剂峰面积的相对标准偏差。
[0161]
盐酸环苯扎林残留溶剂检查重复性试验结果(表8)
[0162]
表8
[0163][0164][0165]
结果表明：盐酸环苯扎林残留溶剂检查重复性试验结果良好。
[0166]
稳定性试验
[0167]
分别取各溶剂贮备液ⅱ2ml，置同一50ml量瓶中，加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，室温放置，分别于0、2、4、6、8小时，取溶液5ml，置顶空瓶中，密封，顶空测定，记录色谱
图，计算各溶剂峰面积的相对标准偏差。
[0168]
盐酸环苯扎林残留溶剂检查溶液稳定性考察结果(表9)
[0169]
表9
[0170][0171][0172]
结果表明：盐酸环苯扎林残留溶剂检查溶液在8小时内稳定。
[0173]
回收率试验
[0174]
取盐酸环苯扎林(批号：20100201，经测定其含乙醇约0.066％，其他溶剂未检出)约50mg九份，精密称定，分别置20ml顶空瓶中；精密量取各溶剂贮备液ⅱ2ml，置同一25ml量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，配制三份，再分别精密量取4、5、6ml，分别置10ml量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，每个浓度的各三份，分别精密量取5ml，依次置装有样品的20ml顶空瓶中，密封，振摇使溶解，作为供试品溶液。精密称取叔丁基甲基醚、溴乙烷、丙酮、无水乙醇各约125mg，二氯甲烷约15mg，四氢呋喃约18mg，置同一100ml量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置25ml量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。
[0175]
测定法分别取对照品溶液和供试品溶液，依法测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算加样回收率。
[0176]
叔丁基甲基醚回收率试验结果(表10)
[0177]
表10
[0178][0179]
溴乙烷回收率试验结果(表11)
[0180]
表11
[0181][0182][0183]
注：供试品溶液的色谱图中溴乙烷峰面积急剧减小，而与其相对应的2.06 分钟出现一杂质，峰面积迅速增加，说明在加入盐酸环苯扎林原料后，促使溴乙烷转化为另一种物质；分析其原因应是溴乙烷在加热且碱性条件下不稳定，因此溴乙烷不适宜采用顶空方法测定，后单独采用直接进样法进行了研究。在计算溴乙烷回收率时，暂按2.06分钟的峰面积与溴乙烷峰面积之和进行计算。溴乙烷回收率为188.55％，明显偏高，这是由于在溴乙烷回收率计算时，按溴乙烷峰面积及其转化成另一种物质的峰面积之和进行计算，而其转化成另一种物质的响应值较大造成。
[0184]
丙酮回收率试验结果(表12)
[0185]
表12
[0186][0187][0188]
四氢呋喃回收率试验结果(表13)
[0189]
表13
[0190][0191]
二氯甲烷回收率试验结果(表14)
[0192]
表14
[0193]
[0194][0195]
乙醇回收率试验结果(扣除本底值)(表15)
[0196]
表15
[0197][0198]
结果表明：叔丁基甲基醚、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷及乙醇残留溶剂的回收率试验结果良好。对溴乙烷单独采用直接进样法进行了研究。
[0199]
样品残留溶剂测定
[0200]
取盐酸环苯扎林约50mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，加二甲基甲酰胺5ml，溶解，密封，作为供试品溶液；精密称取叔丁基甲基醚、溴乙烷、丙酮、无水乙醇各约125mg，二氯甲烷约15mg，四氢呋喃约18mg，置同一100ml 量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置25ml量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。
[0201]
取对照品溶液和供试品溶液，分别顶空测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算各残留溶剂的含量。
[0202]
盐酸环苯扎林残留溶剂检查结果(表16)
[0203]
表16
[0204][0205]
结果表明：三批盐酸环苯扎林供试品均检出乙醇，且含量均低于中国药典2010年版规定的限度0.5％；其他5种溶剂(叔丁基甲基醚、溴乙烷、丙酮、二氯甲烷及四氢呋喃)均未检出。
[0206]
溴乙烷
[0207]
仪器：agilent technologies 7890a gc system
[0208]
agilent 7694e headspace sampler
[0209]
色谱柱：hp-ffap(25m
×
0.32mm
×
0.5μm)
[0210]
进样口温度：200℃
[0211]
柱温：60℃，维持4分钟，以每分钟50℃的速率升温至200℃，维持4 分钟
[0212]
检测器：fff 250℃
[0213]
氮气柱流量：1.0ml/min；分流比：5∶1
[0214]
贮备液配制：精密称取溴乙烷51.7mg，置100ml量瓶中，加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀。
[0215]
溶剂干扰、峰确认及分离度试验
[0216]
分别取二甲基甲酰胺、冰醋酸与二甲基甲酰胺的混合液，溴乙烷、冰醋酸与二甲基甲酰胺的混合液各1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。
[0217]
结果表明：溴乙烷峰保留时间约为1.92分钟，冰醋酸与二甲基甲酰胺均不干扰溴乙烷的检测。
[0218]
按溴乙烷峰计算理论板数为13523，与后面相邻一杂质峰的分离度为 3.05；
[0219]
定量限、检测限
[0220]
定量限取贮备液用二甲基甲酰胺稀释至2.6
×
10-3mg/ml时，测得响应值约为噪音信号的10倍高，故定量限约为2.6μg/ml(0.026％)。
[0221]
检测限取贮备液用二甲基甲酰胺稀释至5.0
×
10-4mg/ml时，测得响应值约为噪音信号的2倍高，故检测限约为0.5μg/ml(0.005％)。
[0222]
溴乙烷线性范围及回归方程
[0223]
精密量取贮备液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml，分别置10ml量瓶中，分别加入冰醋酸1ml，加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。以峰面积对浓度作曲线，用最小二乘法计算回归方程和相关系数；
[0224]
溴乙烷的不同浓度及其相应的峰面积(表17)
[0225]
表17
[0226]
[0227]
回归方程：y＝0.7493x(μg/ml)－1.3
[0228]
相关系数：r＝0.9978
[0229]
结果表明：溴乙烷在31.02～72.38μg/ml的浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系。
[0230]
重复性试验
[0231]
精密量取贮备液1ml，置10ml量瓶中，加入冰醋酸1ml，加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图，连续测定六次，计算峰面积的相对标准偏差。
[0232]
溴乙烷重复性试验结果(表18)
[0233]
表18
[0234][0235]
结果表明：盐酸环苯扎林中溴乙烷残留量检查重复性试验结果良好。
[0236]
稳定性试验
[0237]
称取盐酸环苯扎林(20100102批)0.1g，分别置两个10ml量瓶中，分别加二甲基甲酰胺适量使溶解，再分别加入0.1、1.0ml的冰醋酸，摇匀，精密量取贮备液1ml分别加入上述量瓶中，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，分别于0小时与2小时精密量取1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。
[0238]
溴乙烷稳定性试验结果(表19)
[0239]
表19
[0240][0241][0242]
结果表明：溴乙烷峰面积在2小时内有明显下降，说明溴乙烷在盐酸环苯扎林作用下不稳定，故在样品溶液配制后应立即进样。
[0243]
回收率试验
[0244]
样品：盐酸环苯扎林，批号：20100102，未检出溴乙烷。
[0245]
称取盐酸环苯扎林0.1g，分别置9个10ml量瓶中，精密量取贮备液0.8、 1.0、1.2ml各三份，分别置上述量瓶中，再分别加冰醋酸1ml及二甲基甲酰胺使溶解并稀释至刻度，摇匀，立即精密量取1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图；另精密量取贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加冰醋酸1ml及二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，同法测定，按外标法以峰面积计算回收率。
[0246]
溴乙烷回收率试验结果(表20)
[0247]
表20
[0248][0249][0250]
结果表明：盐酸环苯扎林中溴乙烷残留溶剂的回收率试验结果良好。
[0251]
样品中溴乙烷残留量测定
[0252]
称取盐酸环苯扎林0.1g，置10ml量瓶中，加冰醋酸1ml及二甲基甲酰胺使溶解并稀释至刻度，摇匀，立即精密量取1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图；另精密量取贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加冰醋酸1ml及二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，同法测定，按外标法以峰面积计算。
[0253]
盐酸环苯扎林溴乙烷残留量检查结果(表21)
[0254]
表21
[0255][0256]
结果表明：三批盐酸环苯扎林样品均未检出溴乙烷。
[0257]
干燥失重
[0258]
取本品，在105℃干燥至恒重，依法测定(中国药典2010年版二部附录
ⅷ
l)。
[0259]
盐酸环苯扎林的干燥失重测定结果(表22)
[0260]
表22
[0261][0262]
结果表明：三批盐酸环苯扎林供试品及对照品在105℃干燥至恒重，干燥失重均小于1.0％，符合usp32-nf27盐酸环苯扎林标准[1]的规定。
[0263]
炽灼残渣
[0264]
取本品，依法测定(中国药典2010年版二部附录
ⅷ
n)。
[0265]
盐酸环苯扎林的炽灼残渣测定结果(表23)
[0266]
表23
[0267][0268]
结果表明：三批盐酸环苯扎林供试品及对照品的炽灼残渣均小于0.1％，符合usp32-nf27盐酸环苯扎林标准[1]的规定。
[0269]
重金属
[0270]
取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法测定(中国药典2010年版二部附录
ⅷꢀ
h第二法)
[0271]
盐酸环苯扎林的重金属测定结果(表24)
[0272]
表24
[0273][0274]
结果表明：三批盐酸环苯扎林供试品及对照品的重金属均小于百万分之十，符合usp32-nf27盐酸环苯扎林标准[1]的规定。
[0275]
含量测定
[0276]
参照usp32-nf27盐酸环苯扎林质量标准[1]的含量测定法，对本品的含量测定法进行研究。
[0277]
仪器：mettler tolefo t50电位滴定仪
[0278]
滴定终点的确定
[0279]
精密称取盐酸环苯扎林对照品0.2619g，加冰醋酸40ml使溶解，再加醋酸汞试液5ml，照电位滴定法(中国药典2010年版二部附录ⅶa)，用高氯酸滴定液(0.1mol/l)滴定，并将滴定的结果用空白校正，每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/l)相当于31.19mg的c20h21n
·
hcl。以电位测量值(e)为纵坐标，以消耗滴定液体积(v)为横坐标，绘制e-v曲线；以δe/δv为纵坐标，以消耗滴定液体积(v)为横坐标，绘制δe/δv-v曲线。
[0280]
盐酸环苯扎林滴定曲线结果(表25)
[0281]
表25
[0282][0283]
注：f＝0.9988，v0＝0.030ml
[0284]
盐酸环苯扎林电位滴定曲线图
[0285]
由上图可以看出：高氯酸滴定液消耗体积8.417ml时，突跃明显，为滴定终点；计算含量为99.94％。
[0286]
故确定用高氯酸滴定液(0.1mol/l)，以电位指示终点，作为本品含量测定方法，以此方法测得盐酸环苯扎林对照品含量的平均值为99.97％。
[0287]
线性范围及回归方程
[0288]
取盐酸环苯扎林对照品约0.15、0.20、0.25、0.30、0.35g各一份，精密称定，加冰醋酸40ml溶解后，加醋酸汞试液5ml，照电位滴定法(中国药典2010 年版二部附录ⅶa)，用高氯酸滴定液(0.1mol/l)滴定，以高氯酸滴定液消耗的体积对盐酸环苯扎林的称样量作曲线，并用最小二乘法计算回归方程及相关系数。
[0289]
盐酸环苯扎林含量线性关系试验结果(表26)
[0290]
表26
[0291][0292]
回归方程：y(ml)＝31.715x(g) 0.0188
[0293]
相关系数：r＝1
[0294]
结果表明：在称样量为0.1564～0.3542g范围内，盐酸环苯扎林称样量与所消耗的滴定液体积呈良好的线性关系。
[0295]
重复性试验
[0296]
取盐酸环苯扎林对照品约0.25g，精密称定，照含量测定项下的方法平行测定6次含量，计算6次含量的相对标准偏差
[0297]
盐酸环苯扎林含量测定重复性试验结果(表27)
[0298]
表27
[0299][0300]
结果表明：盐酸环苯扎林含量测定重复性试验结果良好。
[0301]
稳定性试验
[0302]
取盐酸环苯扎林对照品约0.25g，五份，精密称定，分别加冰醋酸40ml 溶解后，加醋酸汞试液5ml，于室温放置，分别于0、2、4、6、8小时取一份，照含量测定项下的方法测定含量，并计算含量的相对标准偏差。
[0303]
盐酸环苯扎林含量测定溶液的稳定性试验结果(表28)
[0304]
表28
[0305][0306]
结果表明：盐酸环苯扎林含量测定溶液的稳定性试验结果良好。
[0307]
含量测定
[0308]
取本品约0.25g，精密称定，加冰醋酸40ml溶解，再加醋酸汞试液5ml，照电位滴定法(中国药典2010年版二部附录ⅶa)，用高氯酸滴定液 (0.1mol/l)滴定，并将滴定的结果用空白校正，每1ml高氯酸滴定液 (0.1mol/l)相当于31.19mg的c20h21n
·
hcl。依法测定供试品及对照品的含量；
[0309]
盐酸环苯扎林的含量测定结果(表29)
[0310]
表29
[0311][0312]
结果表明：三批盐酸环苯扎林供试品及对照品按干燥品计算，含 c20h21n
·
hcl均在99.0％以上，符合usp32-nf27盐酸环苯扎林标准[1]的规定。容量法测定盐酸环苯扎林的含量，滴定终点突跃较为明显，精密度、线性关系良好，溶液稳定，故选用此方法作为本品含量测定方法。
[0313]
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论
从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
[0314]
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。