一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器的制作方法

1.本实用新型涉及移液器技术领域，尤其是涉及一种适用于连接玻璃玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器。


背景技术：

2.冷冻保存卵母细胞和胚胎是一个复杂的过程，卵母细胞和胚胎经过低温降低生物活性，到达-196℃几乎完全停止生物活性，达到长时间保存的目的，细胞经过冷冻、解冻过程后必须保持结构完整、功能正常，放回正常的生理环境中能够正常发育。根据冷冻速度把冷冻方法进行分类：1慢速冷冻/快速解冻：采用0.5～1.5m的冷冻保护剂，0.3～2.0℃/min的冷冻速率；2快速冷冻/快速解冻：采用5～8m冷冻保护剂，500℃/min的冷冻速率；3超快速冷冻(玻璃化冷冻)：冷冻和解冻速度必须大于2000℃/min。
3.冷冻过程中冷冻保护剂浓度对卵母细胞或胚胎的后续发育潜能影响很大，特别是高浓度的冷冻保护剂对后续发育的影响很大，实践中放弃使用高浓度的冷冻保护剂，不再使用快速冷冻，而是使用慢速冷冻和超快速冷冻，也就是现在常用的程序化冷冻方法和玻璃化冷冻方法。
4.冷冻过程中对细胞造成的损伤主要有两个方面，一个是冷冻保护剂伤害，冷冻保护剂可对细胞造成毒性伤害，冷冻保护剂快速进出会对细胞膜形成渗透压打击，影响细胞膜的功能。第二个是冰晶的伤害，大的冰晶会破坏细胞的膜结构，造成功能性损伤或者直接导致细胞死亡。程序化冷冻是利用冷冻保护剂置换细胞内部的水分，然后缓慢降温，细胞内会形成小冰晶，在-7℃的时候人工植冰，避免形成大的冰晶损伤细胞。1972年mazur提出冷冻损伤的两因素假说，一个是过快冷冻形成冰晶，冷冻速率越快损伤越大，另一个是溶液损伤，细胞在高浓度的液体中暴露的时间越长损伤越大(冷冻速率越慢损伤越大)。
5.玻璃化冷冻，是指当物质处于低于或等于该物质的“玻璃转换温度”时会形成玻璃化，例如水在足够的降温速率，且温度降低到-130℃会形成玻璃化。冷冻过程中温度快速降低，细胞内的液体不会形成冰晶，而是处在一种介于固体和液体之间的玻璃态。第三天卵裂期胚胎程序化冷冻的冷冻复苏率不断提高，目前维持在70％以上。而玻璃化的胚胎冷冻复苏率可高达90％以上，因此玻璃化冷冻成为目前临床上主要使用的冷冻方法。
6.玻璃化冷冻技术是快速冷冻与高浓度冷冻保护剂相结合的方法。快速冷冻，低温时形成透明的玻璃状固体，冷却过程中黏度很高，但无冰晶形成，避免冰晶形成对细胞脂质膜及细胞骨架结构的损伤，保留细胞内外液体正常的分子和离子分布。玻璃化冷冻主要操作包括高浓度冷冻保护剂置换细胞内外的溶液，快速降温，使溶液粘稠度提高并固化，放置液氮保存。
7.玻璃化形成的两个要素是溶液浓度和冷冻速度，溶液浓度越高越容易形成玻璃化，降温速率越快越容易形成玻璃化，但是由于冷冻保护剂浓度高对胚胎有毒性作用，所以需要尽力提高冷冻速率。提高冷冻速率的方法有两种，一种是减少冷冻的液体体积，体积越小冷冻速率越快；另一种是增加室温和冷冻媒介之间的温差，温差越大冷冻速率越高。
8.目前，通常用于卵母细胞或胚胎冷冻的方法是玻璃化冷冻法。玻璃化冷冻操作步骤简单，包括高浓度冷冻保护剂置换细胞内外的溶液，快速降温，使溶液粘稠度提高并固化，放置液氮保存这几个步骤。
9.实现快速降温，一个重要的操作步骤就是需要含有卵母细胞或胚胎的冷冻保护剂加载到冷冻载杆上的体积尽可能少。这项操作无法在操作者间，以及同一操作者的不同操作间实现标准化，即冷冻操作加载胚胎至载杆是无质量控制标准的。
10.现有吸取卵母细胞或胚胎的方法是采用拉细的玻璃巴斯德吸管，手动按压吸管头部的塑料吸头，从而控制吸入到玻璃巴斯德吸管内的液体量。可以手动的控制将含冷冻保护剂的卵母细胞或胚胎吸入到玻璃巴斯德吸管，然后吐出到冷冻载杆上，但是，现有方法无法定量，吹吸费力，需要经过大量训练，耗费成本。
11.目前在卵母细胞或胚胎的冷冻过程中，存在如下问题：
12.1.卵母细胞或胚胎进行冷冻保存时，要求装载含冷冻保护剂的卵母细胞或胚胎在装载到冷冻载杆时，体积应尽量小，由于通过人为手动控制拉细的玻璃巴斯德吸管完成装载过程，所以没有具体标准，不同操作人员进行冷冻操作时存在人为误差，冷冻效果无法在这一步进行质量控制。
13.2.同一操作人员进行多次冷冻保存操作时，装载卵母细胞或胚胎到冷冻载杆上时，无法控制冷冻保护剂加样量的标准化。
14.3.现有技术中手动或者电动移液器是分子生物学所使用工具，使用的是塑料吸头。但塑料吸头对于冷冻操作是不妥当的。原因是：第一，未处理的塑料吸头对卵母细胞或胚胎是有毒性的，无法使用；第二，塑料吸头管壁不光滑，可能会造成卵母细胞或者胚胎吸附在吸头管壁上，吹洗不下来；第三，塑料吸头不透明，导致无法准确掌握吸取的卵母细胞或胚胎在什么位置，因此加载到冷冻载杆时无法控制胚胎是否全部加载，还是黏附在塑料吸头上。
15.目前临床实践中，通常采用灭菌的玻璃巴斯德吸管拉细尖端的方式进行卵母细胞或胚胎的转移。但是现有技术中可定量的移液器与玻璃巴斯德吸管无法直接连接。
16.4.卵母细胞或胚胎冷冻操作技术要求操作人员进行大量的练习，花费较长的培训时间和培训费用，成本过高。
17.因此，为了解决现有技术中玻璃巴斯德吸管无法与移液器直接连接使用将卵母细胞或胚胎加载到冷冻载杆上的问题，需要一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器。


技术实现要素：

18.本实用新型提供一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，以解决现有技术中使用玻璃巴斯德吸管装载含卵母细胞或胚胎到冷冻载杆上时，无法控制冷冻保护剂加样量标准化的技术问题。
19.本实用新型的一个方面在于提供一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件，所述连接部件包括：
20.用于插入玻璃巴斯德吸管的开口，
21.在所述开口内，阵列多个具有弹性的螺旋叶片，
22.环形密封垫片，当所述开口内旋入玻璃巴斯德吸管时，所述玻璃巴斯德吸管远离吸头的端部，通过所述环形密封垫片与移液器的移液管密封，
23.并且，所述螺旋叶片挤压玻璃巴斯德吸管外表面，使所述连接部件与玻璃巴斯德吸管外表面紧密结合。
24.在一个优选的实施例中，所述连接部件呈锥形结构，还包括用于插入移液器的移液管的插口。
25.在一个优选的实施例中，所述连接部件为中空的圆柱结构，包括第一段结构和第二段结构，
26.所述第一段结构，具有用于插入玻璃巴斯德吸管的开口，
27.所述第二段结构，具有插入移液器的移液管的插口。
28.在一个优选的实施例中，所述连接部件的开口的内表面呈弧形结构。
29.在一个优选的实施例中，所述螺旋叶片采用硬质塑料制备，所述环形密封垫片采用软质塑料制备。
30.本实用新型的另一个方面在于提供一种具有连接玻璃巴斯德吸管连接部件的移液器，所述移液器包括移液控制部件，移液管，
31.所述连接部件包括：
32.用于插入玻璃巴斯德吸管的开口，
33.在所述开口内，阵列多个具有弹性的螺旋叶片，
34.环形密封垫片，当所述开口内旋入玻璃巴斯德吸管时，所述玻璃巴斯德吸管远离吸头的端部，通过所述环形密封垫片与移液器的移液管密封，
35.并且，所述螺旋叶片挤压玻璃巴斯德吸管外表面，使所述连接部件与玻璃巴斯德吸管外表面紧密结合。
36.在一个优选的实施例中，所述连接部件呈锥形结构，还包括用于插入移液器的移液管的插口。
37.在一个优选的实施例中，所述连接部件为中空的圆柱结构，包括第一段结构和第二段结构，
38.所述第一段结构，具有用于插入玻璃巴斯德吸管的开口，
39.所述第二段结构，具有插入移液器的移液管的插口。
40.在一个优选的实施例中，所述连接部件的开口的内表面呈弧形结构。
41.在一个优选的实施例中，所述螺旋叶片采用硬质塑料制备，所述密封垫片采用软质塑料制备。
42.在一个优选的实施例中，所述移液器还包括支架。
43.本实用新型提供的一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，将移液器与玻璃巴斯德吸管完美结合，避免使用现有的移液器对卵母细胞或胚胎有毒性的塑料吸头。
44.本实用新型提供的一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，将移液器与玻璃巴斯德吸管完美结合，利用移液器能够实现定量控制的优势和玻璃巴斯德吸管加载含冷冻保护剂的卵母细胞或胚胎的优势，实现可控制可定量的将卵母细胞或胚胎转移到冷冻载杆上。
45.本实用新型提供了一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，加载到载杆上的冷冻保护剂的体积小且能定量(比如固定为0.3μl)；减少操作人员对胚胎冷冻操作的人为误差。
46.本实用新型提供的一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，移液器的定量优势和玻璃巴斯德吸管可顺利转移卵母细胞或胚胎的优势，改进了玻璃巴斯德吸管无法稳定定量的缺点，有效实现附在卵母细胞或胚胎周围的冷冻保护剂定量标准化且无毒的目的。
47.本实用新型提供的一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，可以有效的改善不同操作人员进行冷冻操作时，以及同一个操作者的不同操作间存在的人为误差，实现冷冻操作这一步的质量控制。
48.本实用新型提供的一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，采用固定架结构，可以协助新手操作，实现操作的稳定性，极大的减少培训时间和培训费用。
49.本实用新型提供的一种适用于连接巴斯德吸管的连接部件及移液器，移液器连接玻璃巴斯德吸管，避免了塑料吸头的有毒，不光滑，不透明的缺点，实现稳定有效的转移和加载胚胎的目的。
附图说明
50.为了更清楚地说明本实用新型具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本实用新型的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
51.图1为本实用新型实施例1中移液器的示意图。
52.图2为本实用新型实施例1中适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件的示意图。
53.图3为图2中的a-a剖视图。
54.图4为本实用新型实施例2中移液器的示意图。
55.图5为本实用新型实施例2中适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件的示意图。
56.图6为图5中的b-b视图。
57.图7为本实用新型实施例3中适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件的示意图。
58.图8为图7中的c-c剖视图。
具体实施方式
59.为了使本实用新型的上述以及其他特征和优点更加清楚，下面结合附图进一步描述本实用新型。应当理解，本文给出的具体实施例是出于向本领域技术人员解释的目的，仅是示例性的，而非限制性的。在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本实用新型的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或
示例的特征进行结合和组合。
60.为了解决现有技术中卵母细胞或胚胎冷冻加载到冷冻载杆时，玻璃巴斯德吸管无法稳定定量的缺点，本实用新型提出一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器。下文中将通过具体的实施例对本实用新型给出详细的说明。
61.实施例1。
62.如图1所示本实用新型实施例1中移液器的示意图，图2所示本实用新型实施例1中适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件的示意图，图3所示图2中的a-a剖视图。结合图1至图3，本实用新型提供的一种移液器，所述移液器具有适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件3，以及移液器本体1。
63.移液器本体1具有移液控制部件，具体的实施例中的移液器控制部件包括上样显示界面106和洗涤显示界面107，通过上样界面106和洗涤界面107上的调节按钮(图中未示出)设置上样或者洗涤操作。具体地，实施例中上样量可以调节为0-2.5μl，洗涤量可以调节为2-20μl。说明书中所陈的上样是指，吸入定量(比如：0.3μl)含冷冻保护剂的卵母细胞或者胚胎，吐出在冷冻载杆上。洗涤是指吸入和吐出含冷冻保护剂的卵母细胞或胚胎(比如：20μl)，充分置换冷冻保护剂。
64.移液器控制部件还包括充电接口105，加油口108和旋转旋钮109。充电接口105用于给移液器充电，加油口108用于给移液器添加油量。旋转旋钮109通过旋钮来推动油的运动，采用油压控制拉细的巴斯德吸管前端定量吸入和吐出含冷冻保护剂的卵母细胞或胚胎，装载到冷冻载杆上。需要说明的是，本实用新型的上述移液器是可定量控制巴斯德吸管内微量液体吸吐的移液器。
65.根据本实用新型的实施例连接部件3包括：用于插入玻璃巴斯德吸管的开口和环形垫片302。用于插入玻璃巴斯德吸管的开口内，阵列多个具有弹性的螺旋叶片301。
66.环形密封垫片302，当插入巴斯德吸管的开口内旋入玻璃巴斯德吸管2的远离吸头的端部202时，玻璃巴斯德吸管2远离吸头的端部202通过环形密封垫片302与移液器的移液管102密封。
67.本实施例中，连接部件3呈锥形结构，还包括用于插入移液器的移液管的插口，移液管102插入到插口内，通过环形密封垫片302密封。
68.螺旋叶片301挤压玻璃巴斯德吸管2的远离吸头的端部202的外表面，使连接部件3与玻璃巴斯德吸管2的远离吸头的端部202的外表面紧密结合。
69.在一些优选的实施例中，为了实现连接部件3与玻璃巴斯德吸管2紧密结合，并且与移液管102具有更高的密封性，螺旋叶片301采用硬质塑料制备，环形密封垫片302采用软质塑料制备。在另一些实施例中，连接部件3的外壳可以采用金属材质制备。
70.根据本实用新型的实施例，通过旋转旋钮109使油量进入移液管102，移液管内形成压强差，从而使玻璃巴斯德吸管2的吸头201吸入或吐出卵母细胞或胚胎。
71.根据本实用新型的实施例，移液器本体1还设有过滤片101，防止油液进入到玻璃巴斯德吸管2的吸头201。
72.根据本实用新型的实施例，移液器本体还设有支架104，通过支架104将移液器固定，方便了新手操作的稳定性。在另一些实施例，支架104能够旋转，在360
°
方向实现旋转调节支架的方向。
73.下面对本实用新型实施例中的适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器的使用过程进行说明。
74.通过移液器控制部件包括上样显示界面106和洗涤显示界面107来设定上样或洗涤的具体吸入量，显示界面上具有刻度，可以显示具体的上样量和洗涤量。实施例中上样量可以调节为0-2.5μl，洗涤量可以调节为2-20μl。
75.洗涤过程：
76.在对卵母细胞或胚胎冷冻前，对卵母细胞或胚胎进行洗涤(液体置换)。将玻璃巴斯德吸管2的吸头201接触卵母细胞或胚胎，通过洗涤显示界面107设置洗涤量为2-20μl，例如设置为20μl，且按下洗涤按钮。正向旋转旋钮109，使油液从移液管102内回流，从而在玻璃巴斯德吸管2的吸头201形成压强差，将含冷冻保护剂的卵母细胞或胚胎(20μl)吸入到玻璃巴斯德吸管2的吸头201。再反向旋转旋钮109，使油液进入移液管102，在玻璃巴斯德吸管2内形成压强差，将玻璃巴斯德吸管2的吸头201内的卵母细胞或胚胎吐出至1号冷冻剂中，静置5分钟。重复上述过程从1号冷冻液中吸取卵母细胞或胚胎，再吹入到2号冷冻保存剂，反复多次对卵母细胞或胚胎进行洗涤(液体置换)。
77.经过多次洗涤后，进行卵母细胞或胚胎的冷冻加载。
78.上样过程：
79.上样显示界面106设置上样量0-2.5μl，例如设定定量为0.3μl，且按下上样按钮。正向旋转旋钮109，使油液从移液管102内回流，从而在玻璃巴斯德吸管2的吸头201形成压强差，将含卵母细胞或胚胎的冷冻保护剂(0.3μl)吸入到玻璃巴斯德吸管2的吸头201。再反向旋转旋钮109，使油液进入移液管102，在玻璃巴斯德吸管2内形成压强差，将玻璃巴斯德吸管2的吸头201内含冷冻保护剂的卵母细胞或胚胎吐出至冷冻载杆顶部叶片或凹槽中，或者吐出至平皿5的一干净位置处，采用空心麦杆4(类似于一次性实用无菌末梢采血管，可手动或者机械拉制该麦杆)的虹吸作用，将0.3μl含卵母细胞或胚胎的冷冻保护剂吸入到麦杆内，迅速投入到-196℃液氮中保存。解冻时，如果是冷冻载杆，可以直接投入到解冻液1(1m蔗糖溶液)中；如果是空心麦杆，堵住空心麦杆4顶部，将含冷冻保护剂的部分插入到解冻液1(1m蔗糖溶液)中，松开顶部，卵母细胞或胚胎被释放到解冻液1中。
80.实施2。
81.本实施例与实施例1的区别在于，本实施例的连接部件直接嵌入到移液器本体内。如图4所示本实用新型实施例2中移液器的示意图，图5所示本实用新型实施例2中适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件的示意图，图6所示图5中的b-b视图。
82.根据实用新型的实施例，连接部件3a直接嵌入到移液器本体1a内，连接部件3a包括用于插入玻璃巴斯德吸管的开口和环形密封垫片302a。用于插入玻璃巴斯德吸管的开口内，阵列多个具有弹性的螺旋叶片301a。本实施例中，连接部件3a用于插入巴斯德吸管的开口的内表面呈弧形结构。
83.环形密封垫片302a，当用于插入巴斯德吸管的开口内旋入玻璃巴斯德吸管时，玻璃巴斯德吸管远离吸头的端部，通过环形密封垫片302a与移液器的移液管密封。螺旋叶片301a挤压玻璃巴斯德吸管外表面，使连接部件与玻璃巴斯德吸管外表面紧密结合。
84.本实施例中，过滤片101设置于玻璃巴斯德吸管内，防止移液管内的油液进入到巴斯德吸管的吸头。
85.实施例3。
86.本实施例中与实施例1的区别在于：连接部件为中空的圆柱结构，如图7所示本实用新型实施例3中适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件的示意图，图8所示图7中的c-c剖视图。
87.本实施例中，连接部件3b为中空的圆柱结构包括第一段结构和第二段结构。第一段结构，具有用于插入玻璃巴斯德吸管的开口305b，第二段结构，具有插入移液器的移液管的插口304b。
88.根据实用新型的实施例，连接部件3b包括用于插入玻璃巴斯德吸管的开口和环形密封垫片302b。用于插入玻璃巴斯德吸管的开口内位于第一段结构，内部阵列多个具有弹性的螺旋叶片301b。
89.环形密封垫片302b，当用于插入巴斯德吸管的开口内旋入玻璃巴斯德吸管时，玻璃巴斯德吸管远离吸头的端部302b，通过环形密封垫片302b与移液器的移液管密封。螺旋叶片301b挤压玻璃巴斯德吸管外表面，使连接部件3b与玻璃巴斯德吸管外表面紧密结合。
90.本实施例中，连接部件3b还具有一个卡头303b，通过卡头303b卡入移液器，将移液器的移液管插入到插口304b内。具体地，卡头303b卡入移液器的方式，本领域技术人员可以选择合适的连接方式，这里不再赘述。
91.本实用新型提供的一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，将移液器与玻璃巴斯德吸管完美结合，避免使用现有的移液器对卵母细胞或胚胎有毒性的塑料吸头。
92.本实用新型提供的一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，将移液器与玻璃巴斯德吸管完美结合，利用移液器能够实现定量控制的优势和玻璃巴斯德吸管可以吹吸含冷冻保存剂的卵母细胞或胚胎的优势，实现可控制可定量的将含冷冻保存剂的卵母细胞或胚胎转移到冷冻载杆上。
93.本实用新型提供的一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，加载到载杆上的冷冻保护剂的体积小且能定量(比如固定为0.3ul)；减少操作人员对胚胎冷冻操作的人为误差。
94.本实用新型提供的一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，移液器的定量优势和玻璃巴斯德吸管可顺利转移卵母细胞或胚胎的优势，改进了玻璃巴斯德吸管无法稳定定量的缺点，有效实现附着在卵母细胞或胚胎周围的冷冻保护剂定量标准化且无毒的目的。
95.本实用新型提供的一种适用于连接巴斯德吸管的连接部件及移液器，可以有效的改善不同操作人员进行冷冻操作时，以及同一个操作者的不同操作间存在的人为误差，实现冷冻操作这一步的质量控制。
96.本实用新型提供的一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，采用固定架结构，可以协助新手操作，实现操作的稳定性，极大的减少培训时间和培训费用。
97.本实用新型提供的一种适用于连接玻璃巴斯德吸管的连接部件及移液器，移液器连接玻璃巴斯德吸管，避免了塑料吸头的有毒，不光滑，不透明的缺点，实现稳定有效的转移和加载胚胎的目的。
98.尽管上面已经示出和描述了本实用新型的实施例，可以理解的是，上述实施例是
示例性的，不能理解为对本实用新型的限制，本领域的普通技术人员在本实用新型的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。