用于生物纳米孔的组装的方法和组合物与流程

技术特征：
1.一种制备包含一种或多种天然纳米孔蛋白质的检测装置的方法，所述方法包括以下步骤：(a)形成包含纳米孔蛋白质、膜支架蛋白质(msp)和第一脂质的水性混合物以产生纳米盘-纳米孔蛋白质复合物的样品，其中所述样品中的所述纳米盘-纳米孔蛋白质复合物的群体各自包含天然纳米孔蛋白质；(b)提供包含一个或多个孔口的固体支持物，其中在所述孔口中的每一个孔口之上形成膜，其中所述膜包含第二脂质，并且其中所述膜在所述检测装置中将顺式腔室与反式腔室分隔；以及(c)将一个或多个膜与包含所述天然纳米孔蛋白质的纳米孔-纳米盘复合物的群体接触，以使天然纳米孔蛋白质同化到所述膜中的每一个膜中。2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在将所述一个或多个膜与包含所述天然纳米孔蛋白质的所述纳米孔-纳米盘复合物的群体接触的步骤之前，从所述水性混合物中纯化包含所述天然纳米孔蛋白质的所述纳米孔-纳米盘复合物的群体的步骤。3.根据权利要求2所述的方法，其中纯化包含所述天然纳米孔蛋白质的所述纳米孔-纳米盘复合物的群体的所述步骤包含尺寸排阻色谱和亲和色谱中的一者或两者。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述水性混合物进一步包含洗涤剂，其中所述洗涤剂的最终浓度为约14mm至约40mm。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述第一脂质为1，2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dphpc)，所述msp为msp1d1或其变体，所述纳米孔蛋白质为α-溶血素(α-hl)或其变体，所述洗涤剂为胆酸盐，并且所述第二脂质为1，2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dphpe)。6.根据权利要求5所述的方法，其中脂质与msp与纳米孔蛋白质的摩尔比为约101∶6∶1或约120∶6∶1。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述固体支持物包含多个孔口，其中在所述多个孔口中的每一个孔口之上形成膜，并且其中所述膜中的每一个膜与包含所述天然纳米孔蛋白质的所述纳米孔-纳米盘复合物接触。8.一种对聚合物测序的方法，所述方法包括使用根据权利要求1至7中任一项所述的检测系统。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述聚合物为xpandomer。10.一种在膜中形成天然纳米孔蛋白质的方法，所述方法包括以下步骤：(a)形成包含纳米孔蛋白质、膜支架蛋白质(msp)和第一脂质的水性混合物以产生纳米盘-纳米孔蛋白质复合物的样品，其中所述纳米盘-纳米孔蛋白质复合物的群体各自包含天然纳米孔蛋白质；(b)提供包含第二脂质的膜；以及(c)将所述膜与包含所述天然纳米孔蛋白质的纳米孔-纳米盘复合物的群体接触，以使天然纳米孔蛋白质同化所述膜。11.根据权利要求10所述的方法，其进一步包括在将所述膜与包含所述天然纳米孔蛋白质的所述纳米孔-纳米盘复合物的群体接触的步骤之前，从所述水性混合物中纯化包含所述天然纳米孔蛋白质的所述纳米孔-纳米盘复合物的群体的步骤。
12.根据权利要求11所述的方法，其中纯化所述纳米孔-纳米盘复合物的群体的所述步骤包含尺寸排阻色谱和固定化金属亲和色谱中的一者或两者。13.根据权利要求11所述的方法，其中所述水性混合物进一步包含洗涤剂，其中所述洗涤剂的最终浓度为超过14mm至40mm。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述第一脂质为1，2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dphpc)，所述msp为msp1d1或其变体，所述纳米孔蛋白质为α-溶血素(α-hl)或其变体，所述洗涤剂为胆酸盐，并且所述第二脂质为1，2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dphpe)。15.根据权利要求14所述的方法，其中脂质与msp与纳米孔蛋白质的摩尔比为约101∶6∶1或约120∶6∶1。16.一种在水性缓冲液中包含纳米孔-纳米盘复合物的组合物，其中所述纳米孔-纳米盘复合物包含天然纳米孔蛋白质、膜支架蛋白质(msp)和脂质，并且其中所述水性缓冲液包含洗涤剂。17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述天然纳米孔蛋白质为α-溶血素(α-hl)或其变体，所述msp为msp1d1或其变体，所述脂质为1，2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dphpc)，并且所述洗涤剂为胆酸盐。18.根据权利要求17所述的组合物，其中脂质与msp与纳米孔蛋白质的摩尔比为约101∶6∶1或约120∶6∶1，并且胆酸盐的浓度为超过14mm至40mm。19.一种包含冻干粉末的组合物，所述冻干粉末包含纳米孔-纳米盘复合物，其中所述纳米孔-纳米盘复合物包含天然纳米孔蛋白质、膜支架蛋白质(msp)和脂质。20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述天然纳米孔蛋白质为α-溶血素(α-hl)或其变体，所述msp为msp1d1或其变体，并且所述脂质为1，2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dphpc)。21.根据权利要求20所述的组合物，其中脂质与msp与纳米孔蛋白质的摩尔比为约101∶6∶1或约120∶6∶1。

技术总结
本发明提供了用于制造和使用基于一种或多种天然生物纳米孔的检测装置的方法和组合物。使用包括但不限于核酸的检测和测序。本发明总体上涉及用于制备基于蛋白质的纳米孔传感器的新的方法和组合物，更具体地，涉及在脂质纳米盘中组装天然纳米孔蛋白质的方法，所述脂质纳米盘用作载体以将所述纳米孔递送至传感器系统的脂质膜组分，以及涉及使用它们特别是在基于纳米孔的核酸测序方法中使用它们的方法。方法。方法。


技术研发人员：R
受保护的技术使用者：斯特拉托斯基因公司
技术研发日：2020.10.29
技术公布日：2022/6/15