作为转运蛋白调节剂的双环羧酸酯及其用途的制作方法

作为转运蛋白调节剂的双环羧酸酯及其用途
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求在2019年9月25日提交的美国临时申请第62/905,606号的优先权，其整体并入本文用于所有目的。
3.关于在联邦资助的研发下进行的发明的权利的声明
4.不适用
5.对“序列表”、表格或计算机
6.程序列表附录的引用以光盘形式提交
7.不适用
技术领域
8.本发明涉及用作转运蛋白调节剂的化合物。本发明还提供了包含本发明的化合物的药学上可接受的组合物以及使用所述组合物治疗各种疾病的方法。


背景技术：

9.已经充分证明，肿瘤表现出改变的细胞代谢，其中与未转化的正常细胞相比，癌细胞表现出高葡萄糖消耗率。肿瘤含有充分氧合(有氧)和氧合不足(缺氧)的区域。与正常细胞相比，某些癌细胞严重依赖于有氧糖酵解(warburg effect，1956年)或无氧糖酵解(尤其是在缺氧区域)来产生能量(atp)，同时维持一定水平的氧化磷酸化。这种通过高度增殖和缺氧癌细胞的糖酵解转换为癌细胞生存提供了能量和生物合成需求。为了维持这种代谢表型，癌细胞上调一系列蛋白质，包括糖酵解酶和ph调节剂；单羧酸转运蛋白(mct)，该单羧酸转运蛋白将促进与质子共同转运的乳酸流出。正常细胞和癌细胞之间的这种根本差异先前并未应用于癌症治疗。
10.mct介导单羧酸(诸如乳酸、丙酮酸、酮体(乙酰乙酸和β-羟基丁酸))跨细胞膜的流入和流出。这些单羧酸在哺乳动物细胞的碳水化合物、氨基酸和脂肪代谢中起着重要作用，并且必须跨细胞质膜进行快速转运。mct经由需要质子共转运的促进扩散机制来催化这些溶质的转运。单羧酸(诸如乳酸、丙酮酸和酮体)在细胞代谢和组织间的代谢通信中起着重要作用。乳酸是有氧糖酵解的终产物。乳酸最近已成为癌症发展、侵入和癌细胞转移的关键调节剂。肿瘤乳酸水平与癌细胞转移、肿瘤复发和预后不良密切相关《临床研究杂志(j clin.invest)》(2013年)。
11.mct是在胞质结构域中具有n-末端和c-末端的12-跨跨膜蛋白，并且是溶质载体slc16a基因家族的成员。mct家族包含14个成员，并且迄今为止mct1、mct2、mct3和mct4被充分表征[《生物化学杂志(biochemical journal)》(1999)，343：281-299]。
[0012]
恶性肿瘤包含有氧区域和缺氧区域，并且缺氧增加了癌症侵入和癌细胞转移的风险。肿瘤缺氧导致治疗失败、复发和患者死亡，因为这些缺氧细胞通常耐受标准化疗和放疗。在缺氧区域，癌细胞将葡萄糖代谢为乳酸，而附近的有氧癌细胞则经由mct1吸收该乳酸用于氧化磷酸化(oxphos)。在缺氧条件下，癌细胞上调葡萄糖转运蛋白并且消耗大量葡萄
糖。癌细胞还上调糖酵解酶并且将葡萄糖转化为乳酸，然后该乳酸经由mct4流出细胞。附近的有氧癌细胞经由mct1吸收该乳酸用于通过oxphos产生能量。因此，肿瘤有限的葡萄糖可用性经由协同代谢共生得到了最有效的利用。这种利用乳酸作为生存的能量替代物阻止了有氧细胞消耗大量的葡萄糖。


技术实现要素：

[0013]
在第一方面，本发明提供了由式(i)表示的化合物：
[0014][0015]
或其药学上可接受的盐，其中本文提供了下标n，每个a、b、w、x、y、z每个r1和r2。
[0016]
在第二方面，本发明提供了包含式(i)化合物或本文所述的化合物，或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体的药物组合物。
[0017]
在第三方面，本发明提供了用于调节单羧酸转运的方法。该方法包括使单羧酸转运蛋白与治疗有效量的本文所述的式(i)化合物、化合物或它们的组合物接触。
[0018]
在第四方面，本发明提供了用于治疗与单羧酸转运相关的疾病的方法。该方法包括给药治疗有效量的本文所述的式(i)化合物、化合物或它们的组合物。
[0019]
在第五方面，本发明提供了用于制备式(viii)化合物的方法：
[0020][0021]
或其药学上可接受的盐，其中本文提供了下标n，b、w、x、z和r2。
附图说明
[0022]
示出了用于根据方案1的制备式(i)化合物的示例性通用方法。
[0023]
图2示出了用于根据方案2的制备某些双环烯酮羧酸化合物的示例性通用方法。
[0024]
图3示出了用于根据方案3的制备式(i)化合物和某些双环烯酮羧酸酯化合物的示例性通用方法。
[0025]
示出了根据方案4的式(i)中的核心结构的制备。
具体实施方式
[0026]
i.概述
[0027]
本发明提供作为转运蛋白调节剂(例如，单羧酸转运蛋白抑制剂)的式(i)化合物和相关化合物。具体地，本发明提供了新的双环烯酮羧酸酯化合物及其制备，以及这些化合物和它们的药物组合物在治疗、调节和/或预防与单羧酸转运蛋白活性相关的生理病状中的用途，诸如在治疗癌症和其他肿瘤疾病、组织和器官移植排斥中的用途。
[0028]
ii.定义
[0029]
如本文所用，除非另外指明，否则应适用下列定义。对于本发明而言，化学元素是根据元素周期表cas版本，《化学和物理手册(handbook of chemistry and physics)》第75版确定的。另外，有机化学的一般原理在《有机化学(organic chemistry)》(thomas sorrell，大学科学书籍，索萨利托，1999年)和《march高等有机化学(march
′
s advanced organic chemistry)》(第5版，smith，m.b.和march，j.编辑，约翰威利，纽约，2001年)中有所描述，这些书籍的全部内容以引用方式并入本文。
[0030]
除非在本说明书内另外指明，否则本说明书中使用的命名法通常遵循《有机化学命名法(nomenclature of organic chemistry)》(帕加马出版社，牛津，1979年)的a、b、c、d、e、f和h章节中所述的示例和规则，其示例性化学结构名称和命名化学结构的规则以引用方式并入本文。任选地，化合物的名称可使用化学命名程序：acd/chemsketch(版本5.09/2001年9月，高级化学发展股份有限公司，加拿大，多伦多)来生成。
[0031]
本发明的化合物可具有不对称中心、手性轴和手性平面(例如，如下所述：《碳化合物立体化学(stereo-chemistry of carbon compounds)》(e.l.eliel和s.h.wilen，约翰威立，纽约，1994年第1119-1190页)，并且以外消旋物、外消旋混合物存在和以单个非对映体或对映体存在，所有可能的异构体及其混合物(包括旋光异构体)都被包括在本发明中。
[0032]
通常，提及某种元素(诸如氢或h)是指(如果适用)包括该元素的所有同位素，例如氢的氘和氚。
[0033]
如本文所用的术语“烷基”是指具有一至八个碳原子的直链或支链烃，并且包括但不限于例如甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基等。取代的烷基包括但不限于例如卤代烷基、羟基烷基、氰基烷基等。这适用于本文所提及的任何基团，诸如取代的“烯基”、“炔基”、“芳基”等。
[0034]
如本文所用的术语“烯基”是指具有至少一个双键的直链或支链脂族烃。烯烃可具有二至八个碳原子，并且包括但不限于例如乙烯基、1-丙烯基、1-丁烯基等。术语“烯基”涵盖具有“顺式”和“反式”取向，或者“e”和“z”取向的基团。
[0035]
如本文所用的术语“环烷基”是指含有一个或多个环的脂族碳环体系(其可以是不饱和的)，其中此类环可以悬垂方式连接在一起或可稠合。在一个方面，该环可具有三至七个碳原子，并且包括但不限于例如环丙基、环己基、环己烯基等。当环烷基是饱和c
3-8
环烷基时，示例性基团包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
[0036]
如本文所用的术语“杂环烷基”是指具有至少一个选自n、s和/或o的杂原子并且含有一个或多个环的杂环体系(其可以是不饱和的)，其中此类环可以悬垂方式连接在一起或可稠合。在一个方面，该环可具有三至七元环状基团，并且包括但不限于例如哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基等。
[0037]
术语“杂原子”是指氧、硫、氮、磷或硅中的一种或多种。
[0038]
如本文所用的术语“不饱和”是指具有一个或多个不饱和单元的部分。4sr
°
；-(ch2)
0-4
ph，可以用r
°
取代；-(ch2)
0-4
o(ch2)
0-1
ph，可以用r
°
取代；ch＝chph，可以用r
°
取代；-(ch2)
0-4
o(ch2)
0-1-吡啶基，可以用r
°
取代；-no2；-cn；n3；-(ch2)
0-4
n(r
°
)2；-(ch2)
0-4
n(r
°
)c(o)r
°
；-n(r
°
)c(s)r
°
；-(ch2)
0-4
n(r
°
)c(o)nr
°2；-n(r
°
)c(s)nr
°2；-(ch2)
0-4
n(r
°
)c(o)or
°
；-n(r
°
)n(r
°
)c(o)r
°
；-n(r
°
)n(r
°
)c(o)nr
°2；-n(r
°
)n(r
°
)c(o)or
°
；—(ch2)
0-4
c(o)r
°
；c(s)r
°
；-(ch2)
0-4
c(o)or
°
；-(ch2)
0-4
c(o)sr
°
；-(ch2)
0-4
c(o)osir
°3；-(ch2)
0-4
oc(o)r
°
；-oc(o)(ch2)
0-4
sr-；sc(s)sr
°
；-(ch2)
0-4
sc(o)r
°
；-(ch2)
0-4
c(o)nr
°2；-c(s)nr
°2；-c(s)sr
°
；-sc(s)sr
°
；-(ch2)
0-4
oc(o)nr
°2；-c(o)n(or
°
)r
°
；-c(o)c(o)r
°
；-c(o)ch2c(o)r
°
；-c(nor
°
)r
°
；-(ch2)
0-4
ssr
°
；-(ch2)
0-4
s(o)2r
°
；-(ch2)
0-4
s(o)2or
°
；-(ch2)
0-4
os(o)2r
°
；-s(o)2nr
°2；-(ch2)
0-4
s(o)r
°
；-n(r
°
)s(o)2nr
°2；-n(r
°
)s(o)2r
°
；-n(or
°
)r
°
；-c(nh)nr
°2；-p(o)2r
°
；-p(o)r
°2；-op(o)r
°2；-op(o)(or
°
)2；sir
°3；-(c
14
直链或支链亚烷基)o-n(r
°
)2；或(c
1-4
直链或支链亚烷基)c(o)o-n(r
°
)2，其中每个r
°
可以如下所限定的被取代并且独立地为氢、c
1-6
脂族、-ch2ph、-o(ch2)
0-1
ph、-ch
2-(5-6元杂芳基环)，或5-6元饱和、部分不饱和，或具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基环，或者，尽管有上述定义，两个独立出现的r
°
与它们的中间原子合在一起以形成3-12元饱和、部分不饱和或具有0-4个独立地选自氮、氧、和硫的杂原子的芳基单环或双环，该单环或双环，可以如下所限定的被取代。
[0049]r°
上的合适单价取代基(或通过将两个独立出现的r
°
与它们的中间原子合在一起形成的环)独立地为卤素、-(ch2)
0-2r·
、-(卤素r
·
)、-(ch2)
0-2
oh、-(ch2)
0-2
or
·
、-(ch2)
0-2
ch(or
·
)2；-o(卤素r
·
)、-cn、-n3、-(ch2)
0-2
c(o)r
·
、-(ch2)
0-2
c(o)oh、-(ch2)
0-2
c(o)or
·
、-(ch2)
0-2
sr
·
、-(ch2)
0-2
sh、-(ch2)
0-2
nh2、-(ch2)
0-2
nhr
·
、-(ch2)
0-2
nr
·2、-no2、-sir
·3、-osir
·3、-c(o)sr
·
、-(c
1-4
直链或支链亚烷基)c(o)or
·
，或ssr
·
，其中每个r
·
是未取代的或在“卤素”前面仅被一个或多个卤素取代，并且独立地选自c
1-4
脂族、-ch2ph、-o(ch2)
0-1
ph，或5-6元饱和、部分不饱和或具有0个至4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基环。r
°
的饱和碳原子上的合适二价取代基包括＝o和＝s。
[0050]“任选地取代的”基团的饱和碳原子上的合适二价取代基包括以下：＝o、＝s、＝nnr*2、＝nnhc(o)r*、＝nnhc(o)or*、＝nnhs(o)2r*、＝nr*、＝nor*、-o(c(r*2))
2-3
o-或-s(c(r*2))
2-3
s-，其中每个独立出现的r*选自氢、可以如下所限定的被取代的c
1-6
脂族，，或5-6元饱和、部分不饱和或具有0个至4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的未取代的芳基环。与“任选地取代的”基团的邻位可取代碳结合的合适二价取代基包括：o(cr*2)
2-3
o-，其中，每个独立出现的r*独立地选自氢、可以如下所限定的被取代的c
1-6
脂族，或未取代的5-6元饱和、部分不饱和或具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基环。
[0051]
r*的脂族基团上的合适取代基包括卤素、-r
·
、-(卤素r
·
)、-oh、-or
·
、-o(卤素r
·
)、-cn、-c(o)oh、-c(o)or
·
、-nh2、-nhr
·
、-nr
·2或-no2，其中每个r
·
是未取代的或在“卤素”前面仅被一个或多个卤素取代，并且独立地为c
1-4
脂族、-ch2ph、-o(ch2)
0-1
ph，或5-6元饱和、部分不饱和或具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基环。
[0052]“任选地取代的”基团的可取代氮上的合适取代基包括基团的可取代氮上的合适取代基包括基团的可取代氮上的合适取代基包括或其中每个独立地为氢、可以如下所限定的被取代的c
1-6
脂族、未取代的oph，或未取代的5-6元饱和、部分不饱和或具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基环，或者，尽管有上述定义，两个独立出现的与它们的中间原子合在一起以形成未取代
的3-12元饱和、部分不饱和或具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基单环或双环。
[0053]
的脂族基团上的合适取代基独立地为卤素、-r
·
、-(卤素r
·
)、-oh、-or
·
、-o(卤素r
·
)、-cn、-c(o)oh、-c(o)or
·
、-nh2、_nhr
·
、-nr
·2或-no2，其中每个r
·
是未取代的或在“卤素”前面仅被一个或多个卤素取代，并且独立地为c
1-4
脂族、-ch2ph、-o(ch2)
0-1
ph，或5-6元饱和、部分不饱和或具有0-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基环。
[0054]
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内，适合用于与人类和低等动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的效益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是本领域熟知的。本发明的化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适的无机酸、有机酸、无机碱和有机碱的那些盐。
[0055]
术语“立体异构体”是用于所有单个分子的异构体的通用术语，这些异构体仅在其原子的空间取向上不同。该术语“立体异构体”包括镜像异构体(对映异构体)、几何(顺式/反式)异构体以及具有多于一个手性中心的彼此非镜像的化合物的异构体(非对映异构体)。
[0056]
术语“治疗”(treat)或“治疗”(treating)是指暂时或永久地减轻症状、消除该症状的起因，或用于抑制或减缓所述疾病或病状的症状的出现。
[0057]
术语“治疗有效量”是指化合物有效治疗疾病或病状的一种或多种症状或减轻这些症状的严重性的量。
[0058]
术语“药学上可接受的载体”是指无毒的溶剂、分散剂、赋形剂、佐剂或其他与活性成分混合以便允许形成药物组合物的材料，即，能够给药于患者的剂型。此类载体的一个示例是通常用于肠胃外给药的药学上可接受的油。
[0059]
当介绍本文所公开的元素时，冠词“一”(a)、“一”(an)、“该”(the)和“所述”(said)都旨在表示存在一个或多个这些元素。术语“包括”、“具有”、“包含”都旨在是开放式的，并且表示除了所列元素之外还可以存在的附加元素。
[0060]
iii.化合物
[0061]
在第一方面，本发明提供了由式(i)表示的化合物：
[0062][0063]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0064]
下标n为0、1或2；
[0065]
w为o、nh或nr”；
[0066]
x为o或nr”；
[0067]
y为o或nr”；
[0068]
z为键，ch2、c＝o、so2；
[0069]
为
[0070]
每个a独立地选自n、nr”、s、o、cr”和chr”；
[0071]
每个r1独立地为不存在或选自氢、卤素、c
1-6
烷基、chf2、cf3、cn、-c(o)r”、-c(o)or”、-so2r”、-c(o)nr”2
、-c(o)n(or”)r”和
[0072]
r2选自：
[0073]
氢；
[0074]-c(o)r”；
[0075]-(ch2)
0-4
c(o)r”；
[0076]
(ch2)
0-4
c(o)or”；
[0077]
任选地取代的c
1-6
烷基；
[0078]
任选地取代的3-8元饱和或部分不饱和环烷基环；
[0079]
任选地取代的3-8元饱和或部分不饱和杂环烷基环，该杂环烷基环具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；
[0080]
任选地取代的苯基；以及
[0081]
任选地取代的5-6元杂芳基环，该杂芳基环具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；
[0082]
b为选自以下的环：
[0083]
3-8元饱和或部分不饱和单环碳环，
[0084]
苯基，
[0085]
8-10元双环芳基环，
[0086]
3-8元饱和或部分不饱和单环或双环杂环，该单环或双环杂环具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子，
[0087]
5-6元单环杂芳基环，该单环杂芳基环具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子，以及
[0088]
8-10元双环杂芳基环，该双环杂芳基环具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子，
[0089]
其中b任选地被选自r’和r”的一个或多个取代基取代；
[0090]
r’选自oh、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基和任选地被卤素、
1-6
烷基或
1-6
烷氧基取代的o-苯基；
[0091]
r”选自：
[0092]
r1；
[0093]
3-8元饱和或部分不饱和环烷基环，该环烷基环任选地被卤素或c
1-6
烷基取代；
[0094]
3-8元饱和或部分不饱和杂环烷基环，该杂环烷基环具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子，所述环任选地被卤素或c
1-6
烷基取代；
[0095]
苯基，该苯基任选地被卤素、c
1-6
烷基或c
1-6
烷氧基取代；以及
[0096]
5-6元杂芳基环，该杂芳基环具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子，所述环任选地被卤素或c
1-6
烷基取代。
[0097]
在一些实施方案中，本发明提供了由式(i)表示的化合物：
[0098][0099]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0100]
下标n为0、1或2；
[0101]
w为o、nh或nr”；
[0102]
x为o或nr”；
[0103]
y为o或nr”；
[0104]
z为键，ch2、c＝o、so2；
[0105]
为
[0106]
每个a独立地选自n、nr”、s、o、cr”和chr”；
[0107]
r1，如果存在，选自氢、卤素、c
1-6
烷基、chf2、cf3、cn、-c(o)r”、-c(o)or”、-so2r”、-c(o)nr”2
、-c(o)n(or”)r”和
[0108]
r2选自：
[0109]
氢；
[0110]-c(o)r”；
[0111]-(ch2)
0-4
c(o)r”；
[0112]-(ch2)
0-4
c(o)or”；
[0113]
任选地取代的c
1-6
烷基；
[0114]
任选地取代的3-8元饱和或部分不饱和环烷基环；
[0115]
任选地取代的3-8元饱和或部分不饱和杂环烷基环，该杂环烷基环具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；
[0116]
任选地取代的苯基；以及
[0117]
任选地取代的5-6元杂芳基环，该杂芳基环具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；
[0118]
b为选自以下的环：
[0119]
3-8元饱和或部分不饱和单环碳环；
[0120]
苯基；
[0121]
8-10元双环芳基环；
[0122]
3-8元饱和或部分不饱和单环或双环杂环，该单环或双环杂环具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；
[0123]
5-6元单环杂芳基环，该单环杂芳基环具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子；以及
[0124]
8-10元双环杂芳基环，该双环杂芳基环具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原
子，
[0125]
其中b任选地被一个或多个r”取代基取代；
[0126]
r”选自：
[0127]
r1：
[0128]
3-8元饱和或部分不饱和环烷基环，该环烷基环任选地被卤素或c
1-6
烷基取代；
[0129]
3-8元饱和或部分不饱和杂环烷基环，该杂环烷基环具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子，所述环任选地被卤素或c
1-6
烷基取代；
[0130]
任选地被卤素或c
1-6
烷基取代的苯基；以及
[0131]
5-6元杂芳基环，该杂芳基环具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子，所述环任选地被卤素或c
1-6
烷基取代。
[0132]
在一些实施方案中，当a为＝n-、s、o、nr”、＝cr
’‑
或chr”时，不存在与a连接的r1。
[0133]
在一些实施方案中，一个a是cr”，并且另一个a是s，条件是不存在连接到每个a上的每个r1。在一些实施方案中，一个a是ch，并且另一个a是s，条件是不存在连接到每个a上的每个r1。
[0134]
在一些实施方案中，式(i)化合物由式(ia)表示：
[0135][0136]
其中下标n、b、w、x、y、z和r2如本文所限定和描述。
[0137]
在式(i)或(ia)的一些实施方案中，下标n为0。
[0138]
在式(i)或(ia)的一些实施方案中，y为o。
[0139]
在式(i)或(ia)的一些实施方案中，r2为氢。
[0140]
在式(i)或(ia)的一些实施方案中，下标n为0；y为o；并且r2为氢。
[0141]
在式(i)或(ia)的一些实施方案中，z为c＝o。
[0142]
在式(i)或(ia)的一些实施方案中，下标n为0并且z为c＝o。在一些实施方案中，式(i)或(ia)化合物由式(ib)表示：
[0143][0144]
其中b、w、x、y和r2如本文所限定和描述。
[0145]
在式(i)、(ia)和(ib)中任一项的一些实施方案中，y为o。
[0146]
在式(i)、(ia)和(ib)中任一项的一些实施方案中，r2为氢。
[0147]
在一些实施方案中，式(i)、(ia)和(ib)中任一项的化合物由式(ii)表示：
[0148][0149]
其中b、w和x如本文所限定和描述。
[0150]
在式(i)或(ia)的一些实施方案中，z为so2。在一些实施方案中，下标n为0，z为so2。在一些实施方案中，下标n为0，z为so2，并且y为o。在一些实施方案中，下标n为0，z为so2，y为o，并且r2为氢。在一些实施方案中，式(i)或(ia)化合物由式(iii)表示：
[0151][0152]
其中b、w和x如本文所限定和描述。
[0153]
参考式(i)、(ia)、(ib)、(ii)和(iii)中的任一项式，在一些实施方案中，x为o。在一些实施方案中，x为nr”。在一些实施方案中，r”为氢。在一些实施方案中，r”为c
1-6
烷基。在一些实施方案中，r”为甲基。在一些实施方案中，x为o、nh或nme。在一些实施方案中，x为nh或nme。在一些实施方案中，x为nme。
[0154]
参考式(i)、(ia)、(ib)、(ii)和(iii)中的任一项式，在一些实施方案中，w为nh或nr”。在一些实施方案中，r”为c
1-6
烷基。在一些实施方案中，r”为甲基。在一些实施方案中，w为nh或nme。在一些实施方案中，w为nh。在一些实施方案中，w为nme。
[0155]
在一些实施方案中，式(i)、(ia)、(ib)和(ii)中任一项的化合物由式(iia)或(iib)表示：
[0156][0157]
其中b和每个r”如本文所限定和描述。
[0158]
在式(iia)的一些实施方案中，一个r”为氢，并且另一个r”为c
1-6
烷基。在一些实施方案中，每个r”独立地为c
1-6
烷基。在式(iia)的一些实施方案中，一个r”为氢，并且另一个r”为甲基。在一些实施方案中，每个r”为甲基。
[0159]
在式(iib)的一些实施方案中，r”为c
1-6
烷基。在式(iib)的一些实施方案中，r”为甲基。
[0160]
在一些实施方案中，式(iia)或(iib)化合物选自：
[0161]
[0162]
其中b如本文所限定和描述。
[0163]
参考如本文所述的式中的任一项式，在一些实施方案中，b为选自以下的环：
[0164]
5-6元饱和或部分不饱和单环碳环，
[0165]
苯基，
[0166]
8-10元双环芳基环，
[0167]
5-8元饱和或部分不饱和单环或双环杂环，该单环或双环杂环具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子，
[0168]
5-6元单环杂芳基环，该单环杂芳基环具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子，以及
[0169]
8-10元双环杂芳基环，该双环杂芳基环具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子，
[0170]
其中b任选地被选自r’和r”的一个或多个取代基取代。
[0171]
在如本文所限定和描述的b环的一些实施方案中，b任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、苯基和o-苯基，其中每个苯基任选地独立地被卤素、c
1-6
烷基或c
1-6
烷氧基取代。在一些实施方案中，b任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基。在一些实施方案中，b任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环丙基、cf3、ome、oet、ocf3和c(o)me。在一些实施方案中，b任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、cf3、ome、oet和ocf3。
[0172]
在一些实施方案中，b环为苯基，该苯基任选地被选自r’和r”的一个或多个取代基取代，其中r’和r”如本文所限定和描述。在一些实施方案中，b环为苯基，该苯基任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基和任选地被卤素取代的o-苯基。在一些实施方案中，b为苯基，该苯基任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基。在一些实施方案中，b为苯基，该苯基任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环丙基、cf3、ome、oet、ocf3和c(o)me。在一些实施方案中，b为苯基，该苯基任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、cf3、ome、oet和ocf3。
[0173]
在一些实施方案中，b环选自：
[0174][0175][0176]
在一些实施方案中，b环为具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环，该单环杂芳基环任选地被选自r’和r”的一个或多个取代基取代，其中r’和r”如本文所限定和描述。在一些实施方案中，b环为具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环，该单环杂芳基环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基和任选地被c
1-6
烷氧基取代的苯基。在一些实施方案中，b环为具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环，该单环杂芳基环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基。在一些实施方案中，b环为具有1-4
个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环，该单环杂芳基环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环丙基、cf3、ome、oet、ocf3、c(o)me。在一些实施方案中，b环为具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元单环杂芳基环，该单环杂芳基环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、cf3、ome、oet和ocf3。
[0177]
在一些实施方案中，b环选自：
[0178][0179]
在一些实施方案中，b环为具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环，该双环杂芳基环任选地被选自r’和r”的一个或多个取代基取代，其中r’和r”如本文所限定和描述。在一些实施方案中，b环为具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环，该双环杂芳基环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基。在一些实施方案中，b环为具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环，该双环杂芳基环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基。在一些实施方案中，b环为具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环，该双环杂芳基环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环丙基、cf3、ome、oet、ocf3和c(o)me。在一些实施方案中，b环为具有1-4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的8-10元双环杂芳基环，该双环杂芳基环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、cf3、ome、oet和ocf3。
[0180]
在一些实施方案中，b环选自：
[0181][0182]
在一些实施方案中，b环为环戊基或环己基，该环戊基或环己基任选地被选自r’和r”的一个或多个取代基取代，其中r’和r”如本文所限定和描述。在一些实施方案中，b环为
环戊基或环己基，该环戊基或环己基任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基。在一些实施方案中，b为环戊基或环己基，该环戊基或环己基任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基。在一些实施方案中，b为环戊基或环己基，该环戊基或环己基任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环丙基、cf3、ome、oet、ocf3和c(o)me。在一些实施方案中，b为环戊基或环己基，该环戊基或环己基任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、cf3、ome、oet和ocf3。
[0183]
在一些实施方案中，b环选自：
[0184][0185]
在一些实施方案中，b环为具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元饱和单环杂环，该单环杂环任选地被选自r’和r”的一个或多个取代基取代，其中r’和r”如本文所限定和描述。在一些实施方案中，b环为具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元饱和单环杂环，该单环杂环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基。在一些实施方案中，b环为具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元饱和单环杂环，该单环杂环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、oh、cn、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基。在一些实施方案中，b环为具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元饱和单环杂环，该单环杂环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环丙基、cf3、ome、oet、ocf3和c(o)me。在一些实施方案中，b环为具有1-2个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的5-6元饱和单环杂环，该单环杂环任选地被选自以下的一个或多个取代基取代：f、cl、oh、cn、甲基、cf3、ome、oet和ocf3。
[0186]
在一些实施方案中，b环选自：
[0187][0188]
示例性的式(i)化合物或双环烯酮羧酸化合物列于表1中。
[0189]
在一些实施方案中，本发明提供了根据表1的式(i)化合物或双环烯酮羧酸化合物。
[0190]
在一些实施方案中，该化合物选自：
[0191]
[0192]
[0193][0194]
或它们的药学上可接受的盐。
[0195]
在一些实施方案中，该化合物选自：
[0196][0197]
或它们的药学上可接受的盐。
[0198]
在一些实施方案中，该化合物选自：
[0199][0200]
或它们的药学上可接受的盐。
[0201]
在一些实施方案中，该化合物选自：
[0202][0203]
或它们的药学上可接受的盐。
[0204]
在一些实施方案中，该化合物选自：
[0205][0206]
或它们的药学上可接受的盐。
[0207]
如本文所用，并且如本领域技术人员所理解，对“化合物”的表述-除非明确地进一步限制-旨在包括该化合物的盐。例如，因此如上所述的其中r2为h的“式(i)化合物”的表述将包括其中羧酸为式coo-m

的盐，其中m为任何平衡离子。在一个具体实施方案中，术语“式(i)化合物”是指化合物或其药学上可接受的盐。衍生自适当碱的盐包括碱金属、碱土金属、铵和n

(c
1-4
烷基)4盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。另外的药学上可接受的盐包括(如果适用)无毒的铵、季铵和使用平衡离子(诸如卤化物、氢氧化物、羧酸酯、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐)形成的胺阳离子。
[0208]
在一些实施方案中，碱加成盐由钠、钾、镁或钙形成。
[0209]
除非另外指明，本文所述的结构还指包括该结构的所有异构体(例如，对映异构体、非对映异构体和几何(或构象))形式；例如，每个不对称中心的r构型和s构型、z双键异构体和e双键异构体，以及z构象异构体和e构象异构体。因此，本发明的化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体和几何的(或构象)混合物在本发明的范围内。除非另外指明，本发明的化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围内。另外，除非另外指明，本文所述的结构还指在包括仅一个或多个同位素富集原子的存在下不同的化合物。例如，具有本发明结构(包括用氘或氚替代氢，或用富含
13
c或
14
c的碳替代碳)的化合物在本发明的范围内。此类化合物可用作例如分析工具、生物学分析中的探针或根据本发明的治疗剂。
[0210]
iv.组合物
[0211]
在第二方面，本发明提供了包含式(i)化合物或本文所述的化合物，或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体的药物组合物。
[0212]
本发明的组合物可被制备成各种口服、肠胃外和局部剂型。口服制剂包括片剂、丸剂、粉剂、糖锭剂、胶囊剂、液体剂、锭剂、扁囊剂、凝胶剂、糖浆剂、膏剂、混悬剂等，适于患者摄取。本发明的组合物还可以通过注射给药，即静脉内、肌内、皮内、皮下、十二指肠内或腹膜内注射。此外，本文所述的组合物可通过吸入给药，例如鼻内给药。另外，本发明的组合物可以透皮给药。本发明的组合物还可以通过眼内、阴道内和直肠内途径给药，包括栓剂、吹入剂、粉剂和气雾剂制剂(例如类固醇吸入剂，参见《临床药效学杂志(j.clin.pharmacol.)》(rohatagi，1995年第35卷第1187-1193页)；《过敏性哮喘和免疫学年鉴(ann.allergy asthma immunol.)》(tiwa，1995年第75卷第107-111页)。因此，本发明还提供了包含一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂，以及式(i)化合物或式(i)化合物的药学上可接受的盐的药物组合物。
[0213]
为了从本发明的化合物制备药物组合物，药学上可接受的载体可以是固体或液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒剂。固体载体可以是一种或多种物质，该固体载体还可以作为稀释剂、调味剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。关于制剂和给药技术的细节在科学文献和专利文献中有详细描述，参见例如最新版《雷氏药学大全(remington
′
s pharmaceutical sciences)》(“remington
′
s”)(宾夕法尼亚州，伊斯顿，麦克出版公司)。
[0214]
在粉剂中，该载体是细分的固体，该载体与细分的活性组分混合。在片剂中，该活性组分与具有必要粘合性质的载体以合适的比例混合，并且压制成所需的形状和大小。
[0215]
粉剂、胶囊剂和片剂优选含有5％或10％至70％的活性化合物。合适的载体为碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”旨在包括活性化合物和作为载体的包封材料的制剂，从而提供被载体包围的其中含或不含其他赋形剂的活性成分的胶囊剂，因此该载体与活性成分相连。类似地，包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊剂、丸剂、扁囊剂和锭剂可用作适于口服给药的固体剂型。
[0216]
合适的固体赋形剂包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、果胶、糊精、淀粉、黄蓍胶、低熔点蜡、可可脂、、碳水化合物、糖(包括但不限于乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇、淀粉
(来自玉米、小麦、水稻、马铃薯或其他植物))、纤维素(诸如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠)和树胶(包括阿拉伯树胶和黄蓍胶)，以及蛋白质(包括但不限于明胶和胶原)。如果需要，可以加入崩解剂或增溶剂，诸如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、藻酸或它们的盐，诸如藻酸钠。
[0217]
糖衣丸核具有合适的包衣，诸如浓缩的糖溶液剂，这些糖溶液剂也可以包含阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液剂以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。可将染料或色素加入片剂或糖锭剂包衣中，以用于产物识别或表征活性化合物的量(即，剂量)。本发明的药物制剂也可以口服使用，例如使用由明胶制成的推入配合式胶囊剂，以及由明胶和包衣(诸如甘油或山梨醇)制成的密封软胶囊剂。推入配合式胶囊剂可以包含与填充剂或粘合剂(诸如乳糖或淀粉)、润滑剂(诸如滑石或硬脂酸镁)以及任选的稳定剂混合的式(i)化合物。在软胶囊剂中，式(i)化合物可以溶解或混悬于合适的液体剂中，诸如脂肪油、液体石蜡或含或不含稳定剂的液体聚乙二醇。
[0218]
为了制备栓剂，首先将低熔点蜡(诸如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物)熔化，并且通过搅拌将式(i)化合物均匀地分散在该低熔点蜡中。然后将熔融的均匀混合物倒入大小合适的模具中，使其冷却并由此固化。
[0219]
液体形式的制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂，例如水或水/丙二醇溶液。对于肠胃外注射，液体制剂可以在水性聚乙二醇溶液中配制成溶液。
[0220]
适于口服使用的水性溶液剂可以通过将式(i)化合物溶解在水中并根据需要加入合适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。适于口服使用的水性混悬剂可以通过将细分的活性组分分散在水中来制备，水中含有粘性物质(诸如天然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶)和分散剂或润湿剂(诸如天然存在的磷脂(例如，卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如，十七亚乙基氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯))。该水性混悬剂还可以包含一种或多种防腐剂(诸如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂以及一种或多种甜味剂(诸如蔗糖、阿斯巴甜或糖精)。这些配方可以根据克分子渗透压浓度来调整。
[0221]
还包括固体形式的制剂，其旨在于使用前不久被转化为液体形式制剂用于口服给药。此类液体形式包括溶液、混悬剂和乳剂。除了活性组分之外，这些制剂还可以含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
[0222]
油混悬剂可通过将式(i)化合物混悬在植物油(如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)中来配制，或混悬在矿物油(如液体石蜡)或这些的混合物中来配制。油混悬剂可以包含增稠剂，如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可以加入甜味剂以提供适口的口服制剂，诸如甘油、山梨醇或蔗糖。这些制剂可以通过加入抗氧化剂诸如抗坏血酸来保存。作为可注射油溶媒的示例，参见《药理学与实验治疗学杂志(j.pharmacol.exp.ther.)》(minto，1997年第281卷第93-102页)。本发明的药物制剂还可以为水包油乳剂的形式。油相可以是如上所述的植物油或矿物油，或这些油的混合物。合适的乳剂包括天然存在的树胶，诸如阿拉伯胶和黄蓍胶；天然存在的磷脂，如大豆卵磷脂；衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，诸如脱水山梨糖醇
单油酸酯；以及这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物，诸如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。该乳剂还可以包含甜味剂和调味剂，如糖浆剂和酏剂制剂中的那些。此类制剂还可以包含缓和剂、防腐剂或着色剂。
[0223]
本发明的组合物可以通过任何合适的方式递送，包括口服、肠胃外和局部方法。通过局部途径的透皮给药方法可以配制成涂抹棒、溶液剂、混悬剂、乳剂、凝胶剂、乳膏剂、软膏剂、糊剂、胶冻剂、涂抹剂、粉剂和气雾剂。
[0224]
本发明的组合物还可以作为微球递送以在体内缓慢释放。例如，微球可以被配制用于经由皮内注射含有药物的微球给药，这些微球在皮下缓慢地释放(参见《生物材料科学聚合物版(j.biomater sci.polym.ed)》(rao，1995年第7卷第623-645页)；作为可生物降解的和可注射的凝胶制剂(参见例如《药学研究(pharm.res)》(gao，1995年第12卷第857-863页)；或作为口服给药微球(参见例如《药学与药理学杂志(j.pharm.pharmacol.)》(eyles，1997年第49卷第669-674页)。透皮和皮内途径二者都提供持续数周或数月的恒定递送。
[0225]
在另一个实施方案中，本发明的组合物可以被配制用于肠胃外给药，例如静脉内(iv)给药或给药到体腔或器官内腔中。用于给药的制剂通常包括溶解在药学上可接受的载体中的本发明的组合物的溶液。可使用的可接受的溶媒和溶剂是水和林格氏溶液(等渗氯化钠溶液)。此外，无菌的不挥发性油通常可用作溶剂或混悬介质。为此目的，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成的单甘油酯或双甘油酯。此外，脂肪酸(诸如油酸)可同样用于制备注射剂。这些溶液剂是无菌的并且通常不含不期望的物质。这些制剂可以通过常规的、熟知的灭菌技术来灭菌。这些制剂可以包含接近生理病状所需的药学上可接受的辅助物质，诸如ph调节剂和缓冲剂、毒性调节剂，例如，醋酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。本发明的组合物在这些制剂中的浓度可以广泛地变化，并且将主要基于流体体积、粘度、体重等，根据所选择的特定给药模式和患者的需求来选择。对于iv给药，该制剂可以是无菌可注射制剂，如无菌可注射水性或油性混悬剂。该混悬剂可根据已知技术使用那些合适的分散剂或润湿剂和混悬剂来配制。该无菌可注射制剂还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或混悬剂，诸如作为1，3-丁二醇中的溶液。
[0226]
在另一个实施方案中，本发明的组合物的制剂可以通过使用与细胞膜融合或被胞吞的脂质体来递送，即通过用与脂质体连接，或直接与寡核苷酸连接的配体，这些配体与细胞的表面膜蛋白受体结合，形成胞吞。通过使用脂质体，特别是在脂质体表面携带对靶细胞特异的配体或另外优先地针对特定器官的情况下，人们可以集中将本发明的组合物递送到体内的靶细胞中。(参见例如《微胶囊杂志(j.microencapsul.)》(al-muhammed，1996年第13卷第293-306页)；《生物技术当前观点(curr.opin.biotechno1.)》(chonn，1995年第6卷第698-708页)；《美国医院药学杂志(am.j.hosp.pharm.)》(ostro，1989年第46卷第1576-1587页)。
[0227]
基于脂质的药物递送系统包括脂质溶液剂、脂质乳剂、脂质分散体、自乳化药物递送系统(sedds)和自微乳化药物递送系统(smedds)。具体地，sedds和smedds是脂质、表面活性剂和助表面活性剂的各向同性混合物，这些各向同性混合物可以自发地分散在水性介质中并且形成细乳剂(sedds)或微乳剂(smedds)。可用于本发明的制剂的脂质包括任何天然或合成的脂质，包括但不限于芝麻油、橄榄油、蓖麻油、花生油、脂肪酸酯、甘油酯、任何天然或合成的脂质，包括但不限于芝麻油、橄榄油、蓖麻油、花生油、脂肪酸酯、甘油酯、和
[0228]
本发明式(i)化合物的药物制剂可以盐的形式提供，并且可用许多酸来形成，这些酸包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐倾向于更易溶于相应游离碱形式的水性或其他质子溶剂中。在其他情况下，该制剂可以是在ph范围为4.5至5.5的1mm-50mm组氨酸、0.1％-2％蔗糖、2％-7％甘露醇中的冻干粉剂，该冻干粉末在使用前与缓冲液混合。
[0229]
本发明式(i)化合物的药物制剂可以盐的形式提供，并且可用碱来形成，即阳离子盐(诸如碱金属和碱土金属盐；诸如钠、锂、钾、钙、镁；以及铵盐(诸如铵、三甲基-铵盐、二乙基铵盐和三-(羟甲基)-甲基-铵盐))。
[0230]
v.方法
[0231]
在第三方面，本发明提供了用于调节单羧酸转运的方法。该方法包括使单羧酸转运蛋白与治疗有效量的本文所述的式(i)化合物、化合物或它们的组合物接触。
[0232]
在第四方面，本发明提供了用于治疗与单羧酸转运相关的疾病的方法。该方法包括给药治疗有效量的本文所述的式(i)化合物、化合物或它们的组合物。
[0233]
在一些实施方案中，疾病选自癌症、肿瘤疾病、异常组织生长疾病、免疫系统疾病以及组织和器官排斥。
[0234]
在一些实施方案中，本发明提供了用于治疗受试者的肿瘤或代谢疾病的方法。该方法包括给药药学有效量的本文所述的化合物、药物前体或组合物。在一些实施方案中，该方法包括给药药学有效量的本文所述的式(i)化合物、化合物或它们的组合物。
[0235]
本文还提供治疗受试者与mct1、mct2、mct3、mct4、cd147、nfkb、p53的表达或活性相关的疾病的方法，其包括向患者给药治疗有效量的本文所述的化合物。例如，本文提供治疗哺乳动物各种癌症的方法，哺乳动物具体包括人类、狗、猫和农场动物；癌症具体包括血液恶性肿瘤(白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生综合征)和实体瘤(恶性肿瘤诸如前列腺、乳腺、肺、结肠、胰腺、肾、脑、cns、皮肤、宫颈、卵巢以及软组织和骨肉瘤和基质瘤)；炎性疾病，诸如类风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、系统性硬化、血管炎综合征(小、中和大血管)、动脉粥样硬化、银屑病和其他皮肤炎性疾病(如类天疱疮、变应性皮炎)和荨麻疹综合征，并且该方法包括给药由式(i)表示的化合物。
[0236]
还提供了由式i表示的化合物，其用于治疗受试者与mct1、mct2、mct3、mct4、cd147、nfkb、p53的表达或活性相关的疾病和/或用于制备药物。
[0237]
在一些实施方案中，化合物或组合物可静脉内和/或腹膜内和/或口服给药。
[0238]
在一些实施方案中，本发明涉及包含本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体、佐剂或溶媒的组合物。本发明的组合物中化合物的量为使得其有效于在生物样品或患者中可测量地抑制单羧酸转运。在某些实施方案中，本发明的组合物中化合物的量为使得其有效于在生物样品或患者中可测量地抑制单羧酸转运。在某些实施方案中，本发明的组合物被配制用于向需要这种组合物的患者给药。在一些实施方案中，本发明的组合物被配制用于口服给药、静脉内、皮下、腹膜内或皮肤给药至患者。
[0239]
如本文所用，术语“患者”是指动物。在一些实施方案中，该动物是哺乳动物。在某些实施方案中，该患者是兽医患者(即，非人类哺乳动物患者)。在一些实施方案中，该患者
是狗。在其他实施方案中，该患者是人类。
[0240]
本文所述的化合物和组合物通常用于抑制单羧酸转运。可以在体外、体内或在细胞系中分析本发明中用作单羧酸转运抑制剂的化合物的活性。用于分析本发明中用作单羧酸转运抑制剂的化合物的详细条件在以下示例中列出。
[0241]
本文所述的化合物和组合物可给药于培养中的细胞(例如体外或离体给药)，或给药于受试者(例如体内给药)，以治疗、预防和/或诊断多种疾病。
[0242]
本文所用的术语“治疗”被限定为将化合物单独或与第二化合物组合地施用或给药至受试者(例如，患者)，或将化合物施用或给药于从受试者(例如，患有疾病(例如，本文所述的疾病)的患者、疾病的症状或倾向疾病的素因)分离的组织或细胞(例如，细胞系)，目的是治好、治愈、缓解、减轻、改变、补救、改善、改进或影响疾病、倾向疾病的素因或疾病的一种或多种症状(例如，预防疾病的至少一种症状或延迟发作疾病的至少一种症状)。
[0243]
如本文所用，有效治疗疾病的化合物的量或“治疗有效量”是指化合物的量，其在单此或多剂量给药于受试者后、在治疗细胞时，或在治好、缓解、减轻或改善患有超出未进行此类治疗时预期的疾病的受试者时，是有效的。
[0244]
如本文所用，术语“受试者”旨在包括人类和非人类动物。示例性人类受试者包括患有疾病(例如，本文所述的疾病)的人类患者或正常受试者。本发明的术语“非人类动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(诸如鸡、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物(诸如非人灵长类)驯养和/或农业上有用的动物(例如，绵羊、牛、猪等)，以及伴侣动物(狗、猫、马等)。
[0245]
提供的化合物是单羧酸转运的抑制剂，因此可用于治疗一种或多种与单羧酸转运活性相关的疾病。因此，在某些实施方案中，本发明提供了用于治疗单羧酸转运蛋白介导的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的患者给药本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
[0246]
如本文所用，术语“单羧酸转运介导的”疾病或病状，如本文所用，是指其中已知单羧酸转运起作用的任何疾病或其他有害病状。因此，本发明的另一个实施方案涉及治疗已知单羧酸转运在其中起作用的一种或多种疾病或减轻这些疾病的严重性。具体地，本发明涉及治疗选自增殖性疾病的疾病或病状或减轻这些疾病或病状的严重性的方法，其中所述方法包括向对其有需要的患者给药根据本发明的化合物或组合物。此类疾病在下面详细列出。
[0247]
肿瘤疾病
[0248]
本文所述的化合物或组合物可用于治疗肿瘤疾病。“肿瘤疾病”是以具有自主生长或复制能力的细胞为特征的疾病或疾病，例如以增殖性细胞生长的异常状态或病状为特征。示例性肿瘤疾病包括：上皮癌、恶性肉瘤、转移性疾病(例如，由前列腺、结肠、肺、乳腺、宫颈、卵巢、肝脏、黑色素瘤、脑、cns、头颈部、骨肉瘤、胃肠道、胰腺引起的肿瘤，造血肿瘤疾病(例如，白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和其他恶性浆细胞疾病)以及转移性肿瘤)。常见癌症包括：乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、肝癌和胰腺癌。用化合物进行治疗的量可以是有效改善肿瘤性疾病的至少一种症状，例如减少的细胞增殖、减少的肿瘤数量等。
[0249]
所公开的方法可用于预防和治疗癌症，包括例如实体瘤、软组织肿瘤及其转移，以及用于家族性癌症综合征，如li fraumeni综合征、家族性乳房-卵巢癌(brca1或brac2突变)综合征等。这些所公开的方法还可用于治疗非实体癌症。示例性实体瘤包括各种器官系
统的恶性肿瘤(例如恶性肉瘤、腺癌和上皮癌)，例如肺、乳腺、淋巴样、胃肠(例如结肠)和泌尿生殖(例如肾、尿道上皮或睾丸肿瘤)系统、咽、前列腺和卵巢的恶性肿瘤。示例性腺癌包括结肠直肠癌、肾细胞上皮癌、肝癌、非小细胞肺上皮癌和小肠癌。
[0250]
由国家癌症研究所描述的示例性癌症包括：急性成淋巴细胞性白血病，成人；急性淋巴细胞白血病，儿童期；急性骨髓性白血病，成人；肾上腺皮质癌；肾上腺皮质癌，儿童期；aids相关淋巴瘤；aids相关恶性肿瘤；肛门癌；星形细胞瘤，儿童小脑；星形细胞瘤，儿童脑；胆管癌，肝外；膀胱癌；膀胱癌，儿童期；骨癌，骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；脑干胶质瘤，儿童期；脑肿瘤，成人；脑肿瘤，脑干神经胶质瘤，儿童期；脑肿瘤，小脑星形细胞瘤，儿童期；脑肿瘤，脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤，儿童期；脑肿瘤，室管膜瘤，儿童期；脑瘤，成神经管细胞瘤，儿童期；脑瘤，幕上原始神经外胚层肿瘤，儿童期；脑肿瘤，视觉途径和下丘脑神经胶质瘤，儿童期；脑肿瘤，儿童期(其他)；乳腺癌；乳腺癌和妊娠；乳腺癌，儿童期；乳腺癌，男性；支气管腺瘤/类癌，儿童期；类癌瘤，儿童期；类癌瘤，胃肠；恶性肿瘤，肾上腺皮质；恶性肿瘤，胰岛细胞；原发性未知恶性肿瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；小脑星形细胞瘤，儿童期；脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤，儿童期；宫颈癌；儿童癌症；慢性淋巴细胞白血病；慢性骨髓性白血病；慢性骨髓增生性疾病；腱鞘透明细胞肉瘤；结肠癌；结肠直肠癌，儿童期；皮肤t-细胞淋巴瘤；子宫内膜癌；室管膜瘤，儿童期；上皮癌，卵巢；食道癌；食道癌，儿童期；尤因氏族肿瘤；颅外生殖细胞肿瘤，儿童期；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；眼癌，眼内黑色素瘤；眼癌，视网膜母细胞瘤；胆囊癌；肠胃(胃)癌；肠胃(胃)癌，儿童期；胃肠类癌瘤；生殖细胞肿瘤，颅外，儿童期；生殖细胞肿瘤，性腺外；生殖细胞肿瘤，卵巢；妊娠滋养细胞肿瘤；胶质瘤，儿童脑干；胶质瘤，儿童视觉通路和下丘脑；毛细胞白血病；头颈癌；肝细胞(肝)癌，成人(原发性)；肝细胞癌(肝)癌，儿童期(原发性)；霍奇金淋巴瘤，成人；霍奇金淋巴瘤，儿童期；怀孕期间的霍奇金淋巴瘤；下咽部癌症；下丘脑和视觉途径神经胶质瘤，儿童期；眼内黑色素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤；肾癌；喉癌；喉癌，儿童期；白血病，急性成淋巴细胞，成人；白血病，急性成淋巴细胞性，儿童期；白血病，急性骨髓，成人；白血病，急性骨髓，儿童期；白血病，慢性淋巴细胞；白血病，慢性髓性白血病；白血病，毛细胞；唇和口腔癌；肝癌，成人(原发性)；肝癌，儿童期(原发性)；肺癌，非小细胞；肺癌，小细胞；成淋巴细胞性白血病，成人急性；成淋巴细胞性白血病，儿童急性；慢性淋巴细胞性白血病；淋巴瘤，aids相关；淋巴瘤，中枢神经系统(原发性)；淋巴瘤，皮肤t-细胞；霍奇金淋巴瘤，成人；霍奇金淋巴瘤，儿童期；怀孕期间的霍奇金淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤，成人；非霍奇金淋巴瘤，儿童期；妊娠期非霍奇金淋巴瘤；淋巴瘤，原发性中枢神经系统；华氏巨球蛋白血症；男性乳腺癌；恶性间皮瘤，成人；恶性间皮瘤，儿童期；恶性胸腺瘤；成神经管细胞瘤，儿童期；黑色素瘤；黑色素瘤，眼内的；默克尔细胞恶性肿瘤；恶性间皮瘤；原发性隐匿的转移性鳞状颈癌；多发性内分泌瘤形成综合征，儿童期；多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤；真菌病；骨髓增生异常综合征；慢性骨髓性白血病；急性骨髓性白血病，儿童期；骨髓瘤，多发性骨髓瘤；慢性骨髓增生性疾病；鼻腔和鼻旁窦癌；鼻咽癌；鼻咽癌，儿童期；成神经细胞瘤；非霍奇金淋巴瘤，成人；非霍奇金淋巴瘤，儿童期；妊娠期非霍奇金淋巴瘤；非小细胞肺癌；口腔癌，儿童期；口腔和唇癌；口咽癌；骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤；卵巢癌，儿童期；卵巢上皮癌；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，儿童期；胰腺癌，胰岛细胞；鼻窦和鼻腔癌症；甲状旁腺癌；阴茎癌；嗜铬细胞瘤；松果体和幕上原始神经外胚层肿瘤，儿童期；
垂体肿瘤；浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺母细胞瘤；妊娠和乳腺癌；妊娠和霍奇金淋巴瘤；妊娠和非霍奇金淋巴瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；原发性肝癌，成人；原发性肝癌，儿童期；前列腺癌；直肠癌；肾细胞(肾)癌；肾细胞癌，儿童期；肾盂和输尿管，移行细胞癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童期；唾液腺癌；唾液腺癌，儿童期；肉瘤，尤因氏肿瘤家族；卡波济氏肉瘤；肉瘤(骨肉瘤)/骨的恶性纤维组织细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童期；软组织肉瘤，成人；软组织肉瘤，儿童期；危险综合征；皮肤癌；皮肤癌，儿童期；皮肤癌(黑色素瘤)；皮肤癌，默克尔细胞；小细胞肺癌；小肠癌；软组织肉瘤，成人；软组织肉瘤，儿童期；鳞状颈癌，伴隐匿性原发性转移性；胃(肠胃)癌；胃(肠胃)癌，儿童期；幕上原始神经外胚层肿瘤，儿童期；，皮肤t-细胞淋巴瘤；睾丸癌；胸腺瘤，儿童期；恶性胸腺瘤；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童期；肾骨盆和输尿管的移行细胞癌；妊娠滋养层肿瘤；未知原发性部位癌症，儿童期；异常癌症，儿童期；输尿管和肾盂，移行细胞癌；尿道癌；子宫肉瘤；阴道癌；视觉途径和下丘脑瘤，儿童期；外阴癌；华氏巨球蛋白血症；以及维尔姆斯肿瘤。上述癌症的转移也可根据本文所述的方法来治疗或预防。
[0251]
癌症联合疗法
[0252]
在一些实施方案中，本文所述的化合物与另外的癌症治疗一起给药。示例性癌症治疗包括，例如：化学疗法、靶向疗法(诸如抗体疗法)，激酶抑制剂法、免疫疗法、免疫检查点抑制剂法、癌症代谢疗法、激素疗法和抗血管生成疗法。
[0253]
肿瘤微环境中的免疫激活
[0254]
在一些实施方案中，本文所述的化合物可用于激活肿瘤中的免疫细胞，导致了癌细胞杀伤作用。乳酸是由癌细胞代谢产生的代谢物，其抑制局部肿瘤微环境中的免疫系统。本文所述的化合物可以降低肿瘤微环境中的乳酸含量，从而预防和免疫抑制。
[0255]
抗血管生成疗法
[0256]
本文所述的化合物和方法可用于预防或治疗与血管发生相关的疾病或病症。与血管生成相关的疾病包括癌症、心血管疾病和黄斑变性。血管生成是涉及从预先存在的血管中生长出新血管的生理过程。血管生成是生长和发育以及伤口愈合和颗粒组织中的正常和重要过程。然而，血管生成还是肿瘤从休眠状态向恶性状态转变的基本步骤。血管生成可以是对抗以血管形成差或脉管系统异常为特征的疾病的靶标。
[0257]
施用可抑制体内新血管生成的特定化合物，从而可有助于对抗这些疾病。在本来应该没有血管的情况下，血管的存在可能影响组织的正常性质，增加衰竭的可能性。修复或代谢活性组织中血管的缺失可抑制修复或其他基本功能。一些疾病(诸如缺血性慢性伤口)是血管形成失败或不足的结果，并且可以通过血管的局部扩张来治疗，从而将新的营养物带到该位点，促进了修复。其他疾病(诸如与年龄相关的黄斑变性)可能由血管的局部扩张而产生，干扰了正常的生理过程。
[0258]
血管内皮生长因子(vegf)已被证明是血管生成的主要贡献因素，增加了给定网络中的毛细血管的数量。vegf的上调是运动生理反应的主要组成部分，并且怀疑vegf在血管生成中的作用是可能治疗血管损伤。体外研究清楚地证明，vegf是血管生成的有效刺激物，因为在该生长因子的存在下，接种的内皮细胞将增殖和迁移，最终形成类似于毛细管的管结构。
[0259]
肿瘤通过分泌各种生长因子(例如vegf)诱导血管生长。生长因子(诸如bfgf和
vegf)可以诱导毛细血管生长进入肿瘤，一些研究者怀疑这些生长因子提供了允许肿瘤扩展的所需营养物。
[0260]
血管生成代表了用于治疗癌症和心血管疾病的极好靶标。这是我们身体对生命器官供血减少(即产生新的侧支血管以克服缺血性损伤)作出反应的自然方式的基础的有效生理过程。
[0261]
vegf的过量表达除了刺激血管生成外，还会引起血管通透性增加。在湿性黄斑变性中，vegf引起毛细血管增殖进入视网膜。由于血管生成的增加也引起水肿，因此血液和其他视网膜流体渗漏到视网膜中，引起了视力丧失。
[0262]
抗血管生成疗法可包括靶向血管内皮生长因子(vegf)的激酶抑制剂，诸如舒替尼、索拉非尼、单克隆抗体、vegf的受体“诱饵”、vegf-trap、沙利度胺、其类似物(来那米特、泊利度胺)、靶向非vegf血管生成靶标的药剂(诸如成纤维细胞生长因子(fgf)、血管生成素、血管抑素或内皮抑制素)。
[0263]
免疫抑制
[0264]
身体的免疫系统检测外来物体和有机体，诸如细菌、病毒和其他病原体，并且通过消除这些有害物质来保护身体。有时，针对外源病原体或组织的那些免疫系统应答变得对宿主更有害，例如对食物和外源抗原(诸如花粉)过敏和呼吸系统疾病(诸如哮喘)。此外，发生针对移植组织或器官的强应答会导致对移植组织或器官的排斥。在此类情况下，需要免疫抑制药物来避免那些并发症。
[0265]
另外，在正常情况下，机体的免疫系统不产生针对自身组织或自身抗原的应答。然而，在一些情况下，身体对自身组织产生强烈的强免疫应答，从而导致各种自身免疫疾病，诸如类风湿性关节炎、多发性硬化症、i型糖尿病等。大多数免疫应答由应答抗原的t辅助淋巴细胞启动和控制。
[0266]
过去几十年来已经开发了许多免疫抑制疗法。这些疗法包括雷帕霉素，其通过干扰tor(雷帕霉素靶蛋白)功能而破坏细胞因子，诸如il-2驱动的t细胞增殖。然而，雷帕霉素已被证明会引起显著的副作用，包括高脂血症(《肾脏病学研讨会(semin.nephrol.)》(hong等人，2000年第10卷第2期第108-125页))。
[0267]
mct作为生物标记物和选择用于治疗的患者亚群
[0268]
本文所述的化合物和组合物也可用于选择性治疗表达mct1或mct4或两者的患者亚群。已知患者对药物的反应可能取决于患者的遗传概况和/或疾病的类型。已经证明，mct4是预测攻击性三阴性乳腺癌患者较差总体生存的生物标记物。
[0269]
上述公开内容概括地描述了本发明。通过参考以下具体示例可以获得更完整的理解。这些示例仅用于说明的目的，而不是限制本发明的范围。当情况可能建议或变得权宜时，考虑形式的改变和等效物的取代。尽管本文使用了特定术语，但是这些术语是描述性的，而不是为了限制的目的。
[0270]
vi.实施例
[0271]
缩略语：
[0272]
atm：大气
[0273]
aq.：水性
[0274]
binap：2，2
′‑
双(二苯基膦基)-1，1
′‑
联萘
[0275]
boc：叔丁氧羰基
[0276]
ch3cn：乙腈
[0277]
cdi：n，n
′‑
羰基二咪唑
[0278]
dcc：n，n-二环己基碳二亚胺
[0279]
dcm：二氯甲烷
[0280]
dbu：二氮杂(1，3)双环[5.4.0]十一烷
[0281]
dea：二乙胺
[0282]
diea：n，n-二异丙基乙胺
[0283]
dibal-h：二异丁基氢化铝
[0284]
dic：n，n
′‑
二异丙基碳二亚胺
[0285]
dmap：n，n-二甲基-4-氨基吡啶
[0286]
dmf：二甲基甲酰胺
[0287]
dmso：二甲基亚砜
[0288]
dppf：二苯基膦二茂铁
[0289]
ea：乙酸乙酯
[0290]
edci：n-[3-(二甲氨基)丙基]-n
′‑
乙基碳二亚胺盐酸盐
[0291]
edc：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
[0292]
et2o：二乙醚
[0293]
etoac：乙酸乙酯
[0294]
etoh：乙醇
[0295]
eti：碘乙烷
[0296]
et：乙基
[0297]
fcc：快速柱层析
[0298]
fmoc：9-芴基甲氧羰基
[0299]
h：小时
[0300]
hetar：杂芳基
[0301]
hobt：n-羟基苯并三唑
[0302]
hatu：1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1h-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐
[0303]
hbtu：o-(苯并三唑-1-基)-n，n，n
′
，n
′‑
四甲基脲六氟磷酸盐
[0304]
hplc：高效液相色谱
[0305]
k2co3：碳酸钾
[0306]
l：离去基团
[0307]
lah：氢化铝锂
[0308]
lcms：hplc质谱
[0309]
mcpba：间氯苯甲酸
[0310]
mecn：乙腈
[0311]
meoh：甲醇
[0312]
min：分钟
[0313]
mei：碘甲烷
[0314]
memgcl：甲基氯化镁
[0315]
me：甲基
[0316]
n-buli：1-丁基锂
[0317]
naoac：醋酸钠
[0318]
na2so4：硫酸钠
[0319]
nmr：单羧酸磁共振
[0320]
nmp：n-甲基吡咯烷酮
[0321]
nbuli：1-丁基锂
[0322]
o.n.：过夜
[0323]
rt、rt、r.t.：室温
[0324]
rbf：圆底烧瓶
[0325]
tea：三乙胺
[0326]
thf：四氢呋喃
[0327]
nbu：正丁基
[0328]
nm：纳摩尔
[0329]
oms：甲磺酸盐或甲磺酸酯
[0330]
ots：甲苯磺酸酯或4-甲基苯磺酸酯
[0331]
pcc：氯铬酸吡啶鎓
[0332]
ppts：对甲苯磺酸吡啶鎓
[0333]
tbaf：四丁基氟化铵
[0334]
tlc：薄层色谱
[0335]
tmsi：三甲基碘硅烷
[0336]
ptsoh：对甲苯磺酸
[0337]
spe：固相萃取(通常含有用于小型色谱的硅胶)
[0338]
sat.：饱和
[0339]
um：微摩尔
[0340]
pg：保护基团
[0341]
mins：分钟
[0342]
在以下对此类方法的描述中，应当理解，在适当情况下，将以有机合成领域的技术人员容易理解的方式向各种反应物和中间体中加入合适的保护基团，并且随后从各种反应物和中间体中除去这些合适的保护基团。使用此类保护基团的常规方法以及合适的保护基团的示例描述于例如《有机合成中的保护基团(protective groups in organic synthesis)》(t.w.green，p.g.m.wuts，威利跨学科，纽约，(1999))中。还应当理解，通过化学操作将一个基团或取代基转化为另一个基团或取代基可以在通往终产物的合成路径上的任何中间体或终产物上进行，其中可能的转化类型仅因该阶段分子携带的其他功能与转化中使用的条件或试剂的固有不相容性而受限。此类固有的不相容性，以及通过以合适的顺序进行适当的转化和合成步骤来避免它们的方法，对于有机合成领域的技术人员来说是容易理解的。下面给出了转化示例，并且应当理解，所描述的转化不仅限于举例说明转化的
通用基团或取代基。其他合适的转化的参考和描述在《全面的有机转化-官能团制备指南(comprehensive organic transformations-a guide to functional group preparations)》(r.c.larock，vhc出版商公司(1989))中给出。其他合适反应的参考和描述在有机化学教科书中有所描述，例如《高级有机化学(advanced organic chemistry)》(march，第4版，麦格劳希尔(1992))或《有机合成(organic synthesis)》(smith，麦格劳希尔(1994))(。纯化中间体和终产物的技术包括例如在柱或旋转板上的正相色谱法和反相色谱法、重结晶、蒸馏和液-液萃取或固-液萃取，这是本领域技术人员容易理解的。除非另外限定，取代基和基团的定义同式i。除非另外指明，术语“室温”和“环境温度”应指16℃至25℃之间的温度。除非另外指明，术语“回流”应指参考所用溶剂的温度等于或高于指定溶剂的沸点的温度。
[0343]
通用合成方法
[0344]
在以下方案和示例中描述了制备式i化合物的一些通用方法。在一些情况下，原料和必需的中间体可商购获得，或可以根据文献方法制备(《生物有机与药物化学(bioorg.med.chem.)》(2008年第16卷第9487-9497页)；《药物化学研究(med.chem.res.)》(2012年)；《亚洲化学(asian j.chem.)》(2004年第16卷第1374-1380页)，或如本文所示。在以异构体混合物形式获得产物的步骤中，可以使用文献中的色谱方法轻松地分离纯异构体。
[0345]
应当理解，如果适用，可以使用本领域技术人员可用的标准官能团转化技术进一步操纵以下方案中所述的化合物中存在的官能团，以提供本发明所述的所需化合物。对于本领域技术人员显而易见的其他变化或修改也在本发明的范围和教导内。
[0346]
式(i)的某些双环烯酮羧酸化合物，其中基团b选自任选地被一个或多个取代基取代的芳基和杂芳基，并且x为氮，n为0，并且r”基团为烷基基团，可根据的示例性方案1来制备。
[0347]
在图2的方案2中，描述了用于制备某些双环烯酮羧酸化合物的示例性通用方法。
[0348]
在图3的方案3中，描述了制备式(i)的某些双环烯酮羧酸化合物的示例性通用方法，其中y为提供酰胺部分的氮。
[0349]
在的方案4中，还提供了制备式(i)中的核心结构的方法。中间体(5)根据如下详述的步骤1-步骤5来制备。中间体(8)根据如下详述的步骤1-步骤8来制备。
[0350]
步骤1
[0351]
向三颈rbf中加入3-甲氧基噻吩(100g，877.19mmol，1.0当量)，加入n，n-二甲基甲酰胺(200ml)，然后在0℃滴加氧氯化磷(v)(98.4ml，1052mmol，1.2当量)。反应混合物在0℃搅拌1小时。完成后，将反应混合物倒入冰冷的水中，用水性氢氧化钠溶液碱化，将ph调节至约9-10。过滤沉淀的固体，用水洗涤，得到101g的3-甲氧基噻吩-2-甲醛(1)；产率：81.10％；ms(es)：m/z 143.01[m h]

；lcms：100％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)：δ8.66(s，1h)，8.21(d，j＝6，1h)，8.04(d，j＝9.2，1h)，4.21-4.27(m，4h)，2.10-2.13(m，1h)，1.27-1.31(m，3h)，0.88-0.90(m，6h)。
[0352]
步骤2
[0353]
向3l四颈rbf中加入三溴化硼(1.0m的dcm溶液，1500ml)，然后在0℃滴加中间体(1)(101g，711.26mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液。反应完成后，将反应混合物在室温搅拌1
小时，将反应混合物转移到冰冷的水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(10％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到78.0g的3-羟基噻吩-2-甲醛(2)；产率：85.68％；ms(es)：m/z 129.0[m h]；lcms纯度：100％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)：δ8.66(s，1h)，8.21(d，j＝6，1h)，8.04(d，j＝9.2，1h)，4.21-4.27(m，4h)，2.10-2.13(m，1h)，1.27-1.31(m，3h)，0.88-0.90(m，6h)。
[0354]
步骤3
[0355]
向5l四颈rbf中加入中间体(2)(78.0g，609.37mmol，1.0当量)的二氯甲烷(3900ml)溶液，然后在室温滴加甲基丙二酰氯(77.6ml，731.24mmol，1.2当量)。将反应混合物回流1.5小时，然后逐渐冷却至室温。将三乙胺(128ml，914.05mmol，1.5当量)滴加到反应混合物中，并在室温搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩得到粗产物。向该粗产物中加入乙酸乙酯(80ml)，将混合物搅拌20分钟，得到沉淀，过滤收集沉淀。将该固体混悬于水中并搅拌10分钟，然后进行第二次过滤，得到42.6g的5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(3)；产率：33.29％；ms(es)：m/z 211.09[m h]；lcms：100％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)：δ8.98(s，1h)，8.31-8.30(d，j＝5.2，1h)，7.31-7.30(d，j＝5.2，1h)，3.80(s，3h)。
[0356]
步骤4
[0357]
向三颈rbf中加入中间体(3)(31.0g，147.61mmol，1.0当量)的硫酸(186ml，6t)溶液，然后在0℃滴加硝酸(15.3ml，369.02mmol，2.5当量)，再将所得的混合物搅拌30分钟。反应完成后，将混合物转移到冰冷的水中，并用二氯甲烷萃取混合物几次。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将该粗产物通过硅胶柱层析(100％二氯甲烷)纯化，得到16.1g的2-硝基-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(4)；产率：53.14％；ms(es)：m/z 255.20[m h]；lcms纯度：100％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)：δ9.01(s，1h)，8.38(s，1h)，3.84(s，3h)。
[0358]
步骤5
[0359]
向三颈rbf中加入中间体(4)(20.0g，78.43mmol，1.0当量)的乙酸(300ml)溶液，然后在室温分批加入铁粉剂(fe)(30.6g，549.01mmol，7.0当量)。将反应混合物在50℃至55℃搅拌30-40分钟。反应完成后，过滤混合物并用己烷洗涤，得到湿滤饼。将湿滤饼在己烷中进一步搅拌以除去fe金属，得到13g的2-氨基-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(5)；产率：73.65％；ms(es)：m/z 225.22[m h]；lcms纯度：100％；1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ9.08(s，1h)，8.42(s，1h)，7.35(s，2h)，3.85(s，3h)。
[0360]
步骤6
[0361]
向三颈rbf中加入中间体(5)(18g，80mmol，1.0当量)的dmf(360ml)溶液，然后在0℃加入4-二甲基氨基吡啶(dmap)(4.8g，40mmol，0.5当量)和二碳酸二叔丁酯(20.928g，96mmol，1.2当量)。将反应混合物在室温搅拌5小时。完成后，将反应混合物转移到冰冷的水中，通过过滤收集生成的沉淀，并用水和己烷洗涤，得到14.4g的2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(6)；产率：55.38％；ms(es)：m/z 325.34[m h]

；lcms纯度：98.87％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)：δ9.92(s，1h)，8.39(s，1h)，7.89(s，1h)，3.86(s，3h)，1.51(s，9h)。
[0362]
步骤7
[0363]
向三颈rbf中加入中间体(6)(14.4g，44.26mmol，1.0当量)的dmf(290ml)溶液，然后加入碳酸钾(12.2g，88.52mmol，2.0当量)，在0℃滴加甲基碘(31.42g，221.3mmol，5.0当量)。将反应混合物在80℃搅拌5小时。完成后，将反应混合物转移到冰冷的水中，通过过滤收集沉淀，并用水和己烷洗涤，得到8.4g的2-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(7)；产率：55.92％；ms(es)：m/z 339.36[m h]

；lcms纯度：99.95％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)：68.39(s，1h)，7.93(s，1h)，3.88(s，3h)，3.32(s，3h)，1.49(s，9h)。
[0364]
步骤8
[0365]
向三颈rbf中加入中间体(7)(8.4g，24.75mmol，1.0当量)的二氯甲烷(80ml)溶液，冷却至0℃，加入三氟乙酸(8ml)。将反应混合物在该温度搅拌2小时-3小时。完成后，将反应混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与乙酸乙酯和乙醚一起研磨，得到4.2g的2-(甲氨基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(8)；产率：70.92％；ms(es)：m/z 239.25[m h]

；lcms：100％；hplc：99.72％；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.72(s，1h)，8.46(s，1h)，6.10(s，1h)，3.81(s，3h)，2.90(s，3h)。
[0366]
实施例1
[0367][0368]
步骤9
[0369]
向三颈rbf中加入来自方案4的中间体(8)(0.300g，1.25mmol，1.0当量)的四氢呋喃(25ml)溶液，加入1-氯代-2-异氰酸根合苯(0.289g，1.88mmol，1.5当量)。将反应混合物回流16小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取几次。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.2％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到0.189g的2-(3-(2-氯苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：38.37％；ms(es)：m/z 392.81[m h]

；lcms纯度：97.85％；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.90(s，1h)，8.10-8.08(d，j＝8hz，2h)，7.85(s，1h)，7.57-7.7.55(d，j＝8hz，1h)，7.41-7.40(d，j＝4hz，1h)，7.24-7.20(m，1h)，3.71(s，3h)，3.32(s，3h)。
[0370]
步骤10
[0371]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.189g，0.482mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液并加入三甲基碘硅烷(0.5ml，2.41mmol，5.0当量)。将反应混合物在室温搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.118g的2-(3-(2-氯苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例1)；产率：64.75％；ms(es)：m/z378.78[m h]

；lcms纯度：96.86％；hplc纯度：95.04％；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.52(s，1h)，9.45(s，lh)，8.79(s，1h)，7.58-7.48(m，2h)，7.41-7.32(m，2h)，6.95(s，1h)，3.74(s，3h)。
[0372]
实施例2
6.60(d，j＝8.4hz，1h)，3.70(s，3h)，3.65(s，3h)，3.30(s，3h)。
[0381]
步骤10
[0382]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.190g，0.489mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.35ml，2.44mmol，5.0当量)。将反应混合物在室温搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.122g的2-(3-(3-甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例3)；产率：66.62％；ms(es)：m/z 375.25[m h]

；lcms纯度：99.31％；hplc纯度：96.39％；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.52(s，1h)，9.42(s，1h)，8.80(s，1h)，7.27-7.23(d，j＝8hz，1h)，7.17-7.125(m，2h)，6.93(s，1h)，6.70-6.68(d，j＝8hz，1h)，3.75(s，3h)，3.67(s，3h)。
[0383]
实施例4
[0384][0385]
步骤9
[0386]
向三颈rbf中加入4-氯苯胺(0.5g，3.90mmol，1.0当量)的二氯甲烷(30ml)溶液，然后在0℃加入三光气(0.273g，1.36mmol，0.35当量)。15分钟后，加入来自方案4的中间体(8)(0.286g，1.2mmol，0.3当量)，然后滴加三乙胺(1.64ml，1.17mmol，3.0当量)，并将反应混合物在室温搅拌3小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.6％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.140g的2-(3-(4-氯苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：30.45％；ms(es)：m/z392.81[m h]；lcms纯度：95.89％；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.78(s，1h)，8.04(s，1h)，7.80(s，1h)，7.68-7.67(d，j＝6hz，2h)，7.38-7.37(d，j＝6.4hz，2h)，3.65(s，3h)，3.25(s，3h)。
[0387]
步骤10
[0388]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.140g，0.356mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.29ml，1.786mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.085g的2-(3-(4-氯苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例4)；产率：62.96％；ms(es)：m/z 379.05[m h]

；lcms纯度：96.24％；hplc纯度：95.10％；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.53(s，1h)，9.56(s，1h)，8.807(s，1h)，7.58-7.56(d，j＝8hz，2h)，6.957-6.934(d，j＝8hz，2h)，6.95(s，1h)，3.602(s，3h)。
[0389]
实施例5
[0390][0391]
步骤9
[0392]
向三颈rbf中加入来自方案4的中间体(8)(0.200g，1.25mmol，1.0当量)的四氢呋喃(25ml)溶液和1-氟代-4-异氰酸根合苯(0.23g，1.69mmol，2.0当量)。将反应混合物回流16小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.2％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.110g的2-(3-(4-氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：34.96％；ms(es)：m/z376.36[m h]

；lcms纯度：96.91％；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.70(s，1h)，8.04(s，1h)，7.78(s，1h)，7.10-7.08(d，j＝8hz，2h)，6.84-6.82(d，j＝7.6hz，2h)，3.72(s，3h)，3.67(s，3h)。
[0393]
步骤10
[0394]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.110g，0.292mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.3ml，1.46mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.080g的2-(3-(4-氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例5)；产率：75.54％；ms(es)：m/z 362.33[m h]

；lcms纯度：95.21％；hplc纯度：95.95％；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.52(s，1h)，9.49(s，1h)，8.79(s，1h)，7.55-7.51(m，2h)，7.22-7.17(m，2h)，6.94(s，1h)，3.75(s，3h)。
[0395]
实施例6
[0396][0397]
步骤9
[0398]
向三颈rbf中加入来自方案4的中间体(8)(0.300g，1.25mmol，1.0当量)的四氢呋喃(25ml)溶液和4-异氰酸根合-1，2-二甲氧基苯(0.288g，1.80mmol，1.5当量)。将反应混合物回流16小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.7％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.140g的2-(3-(3，4-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：26.18％；ms(es)：m/z 418.42[m h]

；lcms纯度：97.69％；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.72(s，1h)，8.02(s，1h)，7.77(s，1h)，7.15-7.13
(d，j＝8hz，2h)，6.87-6.85(d，j＝6.8hz，2h)，3.81(s，3h)，3.68(s，3h)。
[0399]
步骤10
[0400]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.140g，0.3345mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.22ml，1.67mmol，5.0当量)，并在该温度将反应混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.098g的2-(3-(3，4-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例6)；产率：72.43％；ms(es)：m/z 404.39[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.51(s，1h)，9.32(s，1h)，8.79(s，1h)，7.17(s，1h)，7.07-7.05(d，j＝8.8hz，1h)，6.94-6.92(d，j＝9.2hz，2h)，3.75(s，3h)，3.74(s，3h)，3.59(s，3h)。
[0401]
实施例7
[0402][0403]
步骤9
[0404]
向三颈rbf中加入来自方案4的中间体(8)(0.200g，0.8368mmol，1.0当量)的四氢呋喃(25ml)溶液和异氰酸环己烷(0.523g，4.184mmol，5当量)，并将反应混合物回流16小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将该粗产物通过硅胶柱层析(2.6％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.120g的2-(3-环己基-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：39.39％；ms(es)：m/z 364.42[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.10(s，1h)，7.83(s，1h)，6.43(s，1h)，3.70(s，3h)，3.54-3.53(m，1h)，3.29(s，3h)，1.74-1.69(m，4h)，1.46-1.42(m，1h)，1.21-1.11(m，4h)。
[0405]
步骤10
[0406]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.189g，0.482mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.5ml，2.41mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.118g的2-(3-环己基-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例7)；产率：78.87％；ms(es)：m/z350.39[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.52(s，1h)，8.74(s，1h)，7.37-7.35(d，j＝7.2hz 1h)，6.78(s，1h)，3.40(s，1h)，1.80-1.73(q，2h)，1.61-1.58(q，3h)，1.51-1.49(m，2h)，1.29-1.22(m，4h)，1.11-1.02(m，2h)。
[0407]
实施例8
403.42[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.70(s，1h)，8.62(s，1h)，7.77(s，1h)，7.30-7.20(m，3h)，6.66-6.64(d，j＝8hz，1h)，4.07-4.03(m，2h)，3.62(s，3h)，3.22(s，3h)，1.36-1.30(m，3h)。
[0417]
步骤10
[0418]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.130g，0.323mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.29ml，1.6165mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.07g的2-(3-(3-乙氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例9)；产率：55.79％；ms(es)：m/z389.39[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.55(s，1h)，9.406(s，1h)，8.810(s，1h)，7.26-7.24(t，j＝8hz，1h)，7.17(s，1h)，7.12-7.10(d，j＝8hz，1h)，6.94(s，1h)，6.69-6.67(d，j＝8hz，1h)，4.04-4.02(q，j＝8hz，2h)，3.602(s，3h)，1.34-1.32(d，j＝8hz，3h)。
[0419]
实施例10
[0420][0421]
步骤9
[0422]
向三颈rbf中加入2-乙氧基苯胺(0.17g，0.6276mmol，1.5当量)的二氯甲烷(30ml)溶液，在0℃加入三光气(0.065g，0.2197mmol，0.35当量)。15分钟后，加入来自方案4的中间体(8)(0.2g，0.4184mmol，1.0当量)，然后将三乙胺(0.253g，1.2552mmol，3.0当量)滴加到反应混合物中并在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将该粗产物通过柱层析(2.2％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.112g的2-(3-(2-乙氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：33.29％)；ms(es)：m/z 402.42[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.85(s，1h)，8。15(s，1h)，7.80(s，1h)，7.101-7.08(m，4h)，4.97-4.96(m，2h)，3.71(s，3h)，3.32(s，3h)，1.34-1.32(t，j＝8mhz，3h)。
[0423]
步骤10
[0424]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.140g，0.3482mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.22ml，1.67mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.112g的2-(3-(2-乙氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例10)；产率：82.89％)；ms(es)：m/z 388.39[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.506(s，1h)，8.7969(s，2h)，7.521-7.502(d，j＝7.6mhz 1h)，7.210-7.171(t，j＝7.6mhz，1h)，7.101-7.081(d，j＝8mhz，1h)，6.979-6.944(t，j＝7.6mhz，2h)，4.116-4.065(m，2h)，3.612(s，3h)，1.354-1.319(t，j＝6.8mhz，3h)。
[0425]
实施例11
[0426][0427]
步骤9
[0428]
向三颈rbf中加入3-(三氟甲基)苯胺(0.222g，1.3807mmol，1.5当量)的二氯甲烷(30ml)溶液。在0℃加入三光气(0.150g，1.378mmol，0.35当量)。15分钟后，加入来自方案4的中间体(8)(0.220g，0.9205mmol，1.0当量)，然后将三乙胺(0.6ml，4.81mmol，5.0当量)滴加到反应混合物中并在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.2％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.132g的2-(1-甲基-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：83.52％；ms(es)：427.27m/z[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.90(s，1h)，8.09(s，1h)，7.97(s，1h)，7.85(m，1h)，7.56-7.49(m，2h)，7.40(s，1h)，3.69(s，3h)，3.29(s，3h)。
[0429]
步骤10
[0430]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.130g，0.305mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.3ml，1.5255mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.105g的2-(1-甲基-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例11)；产率：83.36％；ms(es)：m/z 413.34[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.56(s，1h)，9.78(s，1h)，8.83(s，1h)，7.80-7.72(m，4h)，6.99(s，1h)，3.64(s，3h)。
[0431]
实施例12
[0432][0433]
步骤9
[0434]
向三颈rbf中加入4-(三氟甲基)苯胺(0.250g，1.5687mmol，1.50当量)的二氯甲烷(30ml)溶液。在0℃加入三光气(0.160g，0.549mmol，0.35当量)。15分钟后，加入来自方案4的中间体(8)(0.250g，1.0458mmol，1.0当量)，然后将三乙胺(0.7ml，5.229mmol，5.0当量)滴加到反应混合物中，并将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.2％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.140g的2-(1-甲基-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：31.42％；ms(es)：m/z 427.37[m h]

；lcms纯度：97.55％；1hnmr(dmso-d6，400mhz)：8.73(s，1h)，8.02(s，1h)，7.78(s，1h)，7.552-7.532(d，j＝8hz，2h)，7.431-7.418(d，j＝5.2hz，2h)，3.65(s，
3h)，3.27(s，3h)。
[0435]
步骤10
[0436]
向三颈rbf中加入中间体(9)(0.140g，0.3283mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液。在室温加入三甲基碘硅烷(0.23ml，1.6415mmol，5.0当量)，并将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.102g的2-(1-甲基-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例12)；产率：75.34％；ms(es)：m/z 413.34[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.562(s，1h)，9.771(s，1h)，8.8.17(s，1h)，7.792-7.712(m，4h)，6.982(s，1h)，3.631(s，3h)。
[0437]
实施例13
[0438][0439]
步骤9
[0440]
向三颈rbf中加入2，5-二甲氧基苯胺(0.220g，1.44mmol，1.50当量)的二氯甲烷(30ml)溶液。在0℃加入三光气(0.150g，0.505mmol，0.35当量)。15分钟后，加入来自方案4的中间体(8)(0.23g，0.962mmol，1.0当量)，然后将三乙胺(0.6ml，4.81mmol，5.0当量)滴加到反应混合物中。将反应混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.2％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.140g的2-(3-(2，5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：34.80％；ms(es)：m/z 418.42[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.90(s，1h)，8.10(s，1h)，7.85(s，1h)，7.51-7.50(d，j＝8.8hz，1h)，7.03-7.01(d，j＝8hz 1h)，6.791-6.761(m，1h)，3.85(s，3h)，3.74(s，3h)，3.71(s，3h)，3.32(s，3h)。
[0441]
步骤10
[0442]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.140g，0.334mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.22ml，1.67mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.107g的2-(3-(2，5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例13)；产率：79.08％；ms(es)：m/z404.39[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.516(s，1h)，8.860-8.777(m，2h)，7.165-7.158(d，j＝2.8hz 1h)，7.036-7.014(d，j＝8.8hz，1h)，6.939(s，1h)，6.791-6.761(m，1h)，3.825(s，3h)，3.775(s，3h)，3.600(s，3h)。
[0443]
实施例14
[0444][0445]
步骤9
[0446]
溶液三颈rbf中加入2，4-二甲氧基苯胺(0.192g，1.25mmol，1.5当量)的二氯甲烷(30ml)溶液。在0℃加入三光气(0.130g，0.439mmol，0.35当量)。15分钟后，加入来自方案4的中间体(8)(0.200g，0.836mmol，1.0当量)，然后将三乙胺(0.6ml，4.184mmol，5.0当量)滴加到反应混合物中，并将得到的混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.4％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.121g的2-(3-(2，4-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：34.59％；ms(es)：m/z 418.42[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.85(s，1h)，8.10-8.09(d，j＝4hz，2h)，7.82(s，1h)，6.62(s，1h)，6.49-6.46(m，1h)，3.90(s，3h)，3.80(s，3h)，3.65(s，3h)，3.35(s，3h)。
[0447]
步骤10
[0448]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.121g，0.289mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.2ml，1.44mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.103g的2-(3-(2，4-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例14)；产率：88.08％)；ms(es)：m/z 404.39[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.484(s，1h)，8.844(s，1h)，8.8775(s，1h)，7.252-7.231(d，j＝8.4hz，1h)，6.898(s，1h)，6.665-6.659(d，j＝2.4，1h)，6.552-6.525(m，1h)，3.796(s，3h)，3.787(s，3h)，3.579(s，3h)。
[0449]
实施例15
[0450][0451]
步骤9
[0452]
向三颈rbf中加入4-氟代-2-甲氧基苯胺(0.170g，0.627mmol，1.5当量)的二氯甲烷(30ml)溶液。在0℃加入三光气(0.065g，0.219mmol，0.35当量)。15分钟后，加入来自方案4的中间体(8)(0.255g，1.0626mmol，0.3当量)，然后将三乙胺(0.253g，1.2552mmol，3.0当量)滴加到反应混合物中，并将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产
物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.3％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.142g的2-(3-(4-氟代-2-甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：32.78％；ms(es)：407.38m/z[m h]

；lcms纯度：96.07％；1hnmr(dmso-d6，400mhz)：8.82(s，1h)，8.10(s，1h)，7.85(s，1h)，7.63-7.61(t，j＝8.8hz，1h)，7.23-7.20(m，1h)，6.89-6.85(m，1h)，3.84(s，3h)，3.75(s，3h)，3.29(s，3h)。
[0453]
步骤10
[0454]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.107g，0.359mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.3ml，1.293mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.107g的2-(3-(4-氟代-2-甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例15)；产率：78.05％；ms(es)：393.2m/z[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.50(s，1h)，9.95(s，1h)，8.78(s，1h)，7.40-7.438(t，j＝8.8hz，1h)，7.05-7.03(d，j＝8hz，1h)，6.92(s，1h)，6.80(s，1h)，3.78(s，3h)，3.59(s，3h)。
[0455]
实施例16
[0456][0457]
步骤9
[0458]
在三颈rbf中加入4-氟代-3-甲氧基苯胺(0.5g，3.54mmol，1.0当量)的二氯甲烷(30ml)溶液。在0℃加入三光气(0.370g，1.24mmol，0.35当量)。15分钟后，加入来自方案4的中间体(8)(0.254g，1.06mmol，0.3当量)，然后将三乙胺(1.6ml，10.63mmol，3.0当量)滴加到反应混合物中并在室温搅拌3小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.8％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.121g的2-(3-(4-氟代-3-甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：28.05％；ms(es)：m/z 407.38[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.85(s，1h)，8.10-8.09(d，j＝4mhz，1h)，7.83(s，1h)，7.30-7.28(t，j＝8mhz，3h)，3.81(s，3h)，3.71(s，3h)，3.29(s，3h)。
[0459]
步骤10
[0460]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.120g，0.295mmol，1.0当量)的二氯甲烷(25ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.26ml，1.47mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.079g的2-(3-(4-氟代-3-甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例16)；产率：68.19％；ms(es)：m/z 392.15[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.55(s，1h)，9.44(s，1h)，8.79-8.77(d，j＝8mhz，1h)，7.38-7.36(d，j＝8mhz，1h)，7.21-7.19(t，j＝8mhz，1h)，7.11(s，1h)，6.90(s，1h)，3.83(s，3h)，3.59(s，3h)。
[0461]
实施例17
[0462][0463]
步骤9
[0464]
向三颈rbf中加入3-乙氧基-4-氟苯胺(0.3g，1.93mmol，2.1当量)的二氯甲烷(30ml)溶液。在0℃加入三光气(0.2g，0.6755mmol，0.35当量)。15分钟后，加入来自方案4的中间体(8)(0.22g，0.9205mmol，1.0当量)，然后将三乙胺(0.975，9.65mmol，5.0当量)滴加到反应混合物中并在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.5％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.12g的2-(3-(3-乙氧基-4-氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：31.04％；ms(es)：m/z 420.41[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.886(s，1h)，8.196(s，1h)，7.889(s，1h)，7.775-7.432(m，3h)，4.156-4.010(m，2h)，3.796(s，3h)，3.321(s，3h)，1.396-1.214(m，3h)。
[0465]
步骤10
[0466]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.12g，0.2857mmol，1.0当量)的二氯甲烷(80ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.2ml，1.428mmol，5当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.078g的2-(3-(3-乙氧基-4-氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例17)；产率：81.17％；ms(es)：m/z 406.38[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：9.441(s，1h)，8.802(s，1h)，7.367-7.351(d，j＝6.4mhz，1h)，7.321-7.162(t，j＝8.8mhz，1h)，7.096(s，，1h)，6.994(s，1h)，4.115-4.080(t，j＝6.8mhz，2h)，3.599(s，3h)，1.393-1.358(t，j＝6.8mhz，3h)。
[0467]
实施例18
[0468][0469]
步骤9
[0470]
向三颈rbf中加入4-氯代-2-甲氧基苯胺(0.197g，1.2552mmol，1.5当量)的二氯甲烷(30ml)溶液。在0℃加入三光气(0.130g，0.4391mmol，0.35当量)。15分钟后，加入来自方案4的中间体(8)(0.2g，0.836mmol，1.0当量)，然后将三乙胺(0.633，6.276mmol，5.0当量)
滴加到反应混合物中并在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(1.9％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.140g的2-(3-(4-氯代-2-甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：39.61％；ms(es)：m/z422.84[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.889(s，1h)，8.196(s，1h)，7.889(s，1h)，7.765-7.745(d，j＝8hz，1h)，7.389(s，1h)，7.156-7.148(d，j＝5.2hz，1h)，3.996(s，3h)，3.881(s，3h)，3.196(s，3h)。
[0471]
步骤10
[0472]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.14g，0.331mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.23ml，1.67mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.096g的2-(3-(4-氯代-2-甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例18)；产率：70.92％；ms(es)：m/z 408.81[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.504(s，1h)，8.491(s，1h)，8.787(s，1h)，7.469-7.448(d，j＝8.4mhz，1h)，7.197(s，1h)，7.048-7.027(d，j＝8.4mhz，1h)，6.933(s，1h)，3.853(s，3h)，3.594(s，3h)。
[0473]
实施例19
[0474][0475]
步骤9
[0476]
向三颈rbf中加入中间体(8)(0.300g，1.25mmol，1.0当量)的四氢呋喃(25ml)溶液，并加入1-异氰酸根合-4-(三氟甲氧基)苯(0.331g，1.88mmol，1.5当量)。将反应混合物在90℃-100℃搅拌16小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.2％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.170g的2-(1-甲基-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：30.65％；ms(es)：m/z442.37[m h]；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.970(s，1h)，8.210(s，1h)，7.986(s，1h)，7.328-7.221(m，2h)，6.996-6.834(m，2h)，3.802(s，3h)3.389(s，3h)。
[0477]
步骤10
[0478]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.170g，0.384mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.27ml，1.92mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.105g的2-(1-甲基-3-(4-(三氟甲氧基)苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例19)；产率：63.79％；ms(es)：m/z 428.34[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.491(s，1h)，9.642(s，1h)，8.826(s，1h)，7.671-7.648(d，j＝8.8hz，2h)，7.396-7.374(d，j＝8.8hz，2h)，6.976(s，1h)3.624(s，3h)。
[0479]
实施例20
[0480][0481]
步骤9
[0482]
向三颈rbf中加入中间体(8)(0.250g，1.04mmol，1.0当量)的四氢呋喃(25ml)溶液，以及(1r，4r)-1-异氰酸根合-4-甲基环己烷(0.727g，5.22mmol，5当量)。将反应混合物在90℃-100℃搅拌16小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.6％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.125g的2-(1-甲基-3-((1r，4r)-4-甲基环己基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：32.37％；ms(es)：m/z379.44[m h]；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：7.996(s，1h)，7.775(s，1h)，7.102(s，1h)，3.696(s，3h)，3.449(m，，1h)，3.201(s，3h)，1.881-1.502(m，4h)，1.496-1.392(m，5h)，0.912-0.882(d，j＝8hz，3h)。
[0483]
步骤10
[0484]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.125g，0.330mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.24ml，1.653mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.098g的2-(1-甲基-3-((1r，4r)-4-甲基环己基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例20)；产率：81.43％；ms(es)：m/z 364.42[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.49(s，1h)，8.76(s，1h)，7.38-7.36(d，j＝8hz，1h)，6.80(s，，1h)，3.56(s，3h)，1.84-1.81(m，1h)，1.76-1.72(m，2h)，1.37-1.32(m，3h)，1.05-0.99(m，3h)，0.90-0.87(m，4h)。
[0485]
实施例21
[0486][0487]
步骤9
[0488]
向三颈rbf中加入中间体(8)(0.250g，1.046mmol，1.0当量)的四氢呋喃(25ml)溶液，加入1-乙氧基-4-异氰酸根合苯(0.852g，5.23mmol，5当量)。将反应混合物在90℃-100℃搅拌16小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.1％二氯甲烷的甲醇溶液)进一步纯化，得到0.095g的2-(3-(4-乙氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：22.59％；ms(es)：m/z 402.42[m h]

；1h nmr
(dmso-d6，400mhz)：8.970(s，1h)，8.210(s，1h)，7.986(s，1h)，7.328-7.221(m，2h)，6.996-6.834(m，2h)，4.118-4.015(m，2h)，3.802(s，3h)3.389(s，3h)，1.412-1.318(m，3h)。
[0489]
步骤10
[0490]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.095g，0.236mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.17ml，1.18mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.032g的2-(3-(4-乙氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例21)；产率：34.90％；ms(es)：m/z388.39[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.490(s，1h)，8.334(s，1h)，7.291-7.270(d，j＝8.4hz，1h)，6.810-6.789(d，j＝8.4hz，1h)，6.098(s，1h)，5.876(s，1h)，5.725(s，1h)，3.981-3.931(m，2h)，2.948(s，3h)，1.323-1.288(t，j＝6.8hz，3h)。
[0491]
实施例22
[0492][0493]
步骤9
[0494]
向三颈rbf中加入3，5-二甲氧基苯胺(0.240g，1.5673mmol，1.50当量)的二氯甲烷(30ml)溶液。在0℃加入三光气(0.150g，0.5485mmol，0.35当量)。15分钟后，加入来自方案4的中间体(8)(0.220g，0.9205mmol，1.0当量)，然后将三乙胺(0.7ml，5.2245mmol，5.0当量)滴加到反应混合物中并在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.2％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.123g的2-(3-(3，5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：28.59％；ms(es)：m/z 419.42[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.969(s，1h)，8.156(s，1h)，7.969(s，1h)，6.969(s，2h)，6.126(s，1h)，3.969(s，6h)，3.812(s，3h)，3.126(s，3h)。
[0495]
步骤10
[0496]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.120g，0.2867mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.22ml，1.4335mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.101g的2-(3-(3，5-二甲氧基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例22)；产率：87.90％)；ms(es)：m/z 405.39[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.541(s，1h)，9.369(s，1h)，8.807(s，1h)，6.942(s，1h)，6.815(s，1h)，6.276(s，1h)，3.741(s，5h)，3.595(s，1h)。
[0497]
实施例23
[0498][0499]
步骤9
[0500]
向三颈rbf中加入来自方案4的中间体(8)(0.250g，1.046mmol，1.0当量)的四氢呋喃(25ml)溶液和1-(苄氧基)-4-异氰酸根合苯(1.176g，5.23mmol，5当量)。将反应混合物在90℃-100℃搅拌16小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.4％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到0.143g的2-(3-(4-(苄氧基)苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：29.46％；ms(es)：m/z464.49[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：9.316(s，1h)，9.250(s，lh)，8.785(s，，1h)，7.512-7.428(m，3h)，7.401-7.321(m，2h)，7.156-7.6996(m，2h)，6.881-6.712(m，2h)，5.181(s，2h)，3.591(s，3h)，3.339(s，3h)。
[0501]
步骤10
[0502]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.143g，0.3078mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.22ml，1.539mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.031g的2-(3-(4-羟基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例23)；产率：29.94％；ms(es)：m/z 360.34[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.490(s，1h)，9.316(s，1h)，9.250(s，1h)，8.785(s，1h)，7.260-7.250(d，j＝7.2hz，2h)，6.909(s，1h)，6.755-6.737(d，j＝7.2hz，2h)，3.574(s，3h)。
[0503]
实施例24
[0504][0505]
步骤9
[0506]
向三颈rbf中加入2-氟苯胺(0.25g，1.046mmol，1.0当量)的二氯甲烷(15ml)溶液。在0℃加入三光气(0.130g，0.418mmol，0.4当量)。15分钟后，加入中间体(8)(0.175g，1.569mmol，1.5当量)，然后将三乙胺(0.5ml，3.138mmol，3.0当量)滴加到反应混合物中并在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.2％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.140g的2-(3-(2-氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，
2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：35.60％；ms(es)：m/z 377.06[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.81(s，1h)，8.09(s，1h)，7.96-7.89(m，1h)，7.83-7.82(t，j＝4hz，1h)，7.19-7.11(m，3h)，3.72(s，3h)，3.22(s，3h)。
[0507]
步骤10
[0508]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.140g，0.372mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.5ml，3.72mmol，10.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.105g的2-(3-(2-氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例24)；产率：77.90％；ms(es)：m/z 363.00[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.53(s，1h)，9.44(s，1h)，8.81(s，1h)，7.47-7.43(t，j＝8hz，1h)，7.33-7.30(m，2h)，7.26-7.22(m，1h)，6.96(s，1h)，3.62(s，3h)。
[0509]
实施例25
[0510][0511]
步骤9
[0512]
向三颈rbf中加入3-氟苯胺(0.175g，1.567mmol，1.50当量)的二氯甲烷(30ml)溶液。在0℃加入三光气(0.165g，0.5484mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体(8)(0.220g，0.9205mmol，1.0当量)，然后将三乙胺(0.6ml，4.81mmol，5.0当量)滴加到反应混合物中并在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.2％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.155g的2-(3-(3-氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：39.41％；ms(es)：m/z 377.36[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.80(s，1h)，8.09(s，1h)，7.83(s，1h)，7.74-7.71(m，1h)，7.40-7.35(m，j＝8hz，2h)，6.90(s，1h)，3.69(s，3h)，3.29(s，3h)。
[0513]
步骤10
[0514]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.130g，0.305mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.3ml，1.5255mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.105g的2-(3-(3-氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例25)；产率：70.36％；ms(es)：m/z 363.33[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.546(s，1h)，9.619(s，1h)，8.820(s，1h)，7.476-7.384(m，3h)，6.968-6.948(d，j＝8hz，2h)，3.611(s，3h)。
[0515]
实施例26
[0516][0517]
步骤9
[0518]
向三颈rbf中加入4-甲氧基-3-甲基苯胺(0.5g，3.64mmol，1.0当量)的二氯甲烷(30ml)溶液。在0℃加入三光气(0.37g，1.27mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体(8)(0.17g，0.728mmol，0.2当量)，然后将三乙胺(2.5ml，18.2mmol，5.0当量)滴加到反应混合物中并在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.2％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.120g的2-(3-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：29.36％；ms(es)：m/z 402.42[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.991(s，1h)，8.210(s，1h)，7.996(s，1h)，7.892(s，lh)，7.556-7.534(d，j＝8.8hz，1h)，7.213-6.884(m，1h)，3.889(s，6h)，3.412(s，3h)，2.098(s，3h)。
[0519]
步骤10
[0520]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.120g，0.298mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.29g，1.49mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨并通过制备型hplc纯化(0.1％甲酸水的100％乙腈溶液)得到级分，将级分冻干得到0.015g的2-(3-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例26)；产率：12.95％；ms(es)：m/z 388.39[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.497(s，1h)，9.205-9.19l(d，j＝5.6，1h)，8.795-8.770(d，j＝10，lh)，7.215-7.181(m，1h)，7.111-7.088(m，1h)，6.960-6.869(m，1h)，6.764-6.742(m，1h)，3.766(s，3h)，3.579(s，3h)，2.136(s，3h)。
[0521]
实施例27
[0522][0523]
步骤9
[0524]
向三颈rbf中加入来自方案4的中间体(8)(0.250g，1.046mmol，1.0当量)的四氢呋喃(25ml)溶液和异氰酸环戊烷(1.176g，5.23mmol，5当量)。将反应混合物在90℃-100℃搅拌16小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用二氯甲烷萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.1％二氯甲烷的甲
醇溶液)纯化，得到0.18g的2-(3-环戊基-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)；产率：49.16％；ms(es)：m/z 350.36[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.757(s，1h)，7.775(s，1h)，6.796(s，，1h)，3.696(s，3h)，3.591(m，1h)，3.339(s，3h)，1.887(s，2h)，1.692(s，2h)，1.528(s，4h)。
[0525]
步骤10
[0526]
在室温向三颈rbf中加入中间体(9)(0.18g，0.5137mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.5137g，2.5684mmol，5.0当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.095g的2-(3-环戊基-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例27)；产率：54.98％；ms(es)：m/z 336.36[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.495(s，1h)，8.757(s，1h)，7.437-7.423(d，j＝5.6hz，1h)，6.800(s，，1h)，4.015-4.001(d，j＝5.6hz，1h)，1.887(s，2h)，1.692(s，2h)，1.528(s，4h)。
[0527]
实施例28
[0528][0529]
步骤6
[0530]
向三颈rbf中加入在[1，l
′‑
联苯]-4-羧酸(0.275g，1.59mmol，1.0当量)的n，n-二甲基甲酰胺(12ml)溶液，并在0℃加入1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1h-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(0.911g，2.39mmol，1.5当量)。15分钟后，在反应混合物中加入中间体(5)(0.287g，1.27mmol，0.8当量)和n，n-二异丙基乙胺(0.8ml，4.79mmol，3.0当量)，并在室温搅拌0.5小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(1.8％二氯甲烷的甲醇溶液)进一步纯化，得到0.2g的2-([1，1
′‑
联苯]-4-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(6)；产率：38.71％；ms(es)：m/z 405.42[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：10.2(s，1h)，7.68(s，1h)，7.62-7.60(d，j＝8mhz，2h)，7.31-7.24(m，5h)，7.20-7.12(m，3h)，3.62(s，3h)。
[0531]
步骤7
[0532]
向三颈rbf中加入中间体(6)(0.2g，0.493mmol，1.0当量)的n，n-二甲基甲酰胺(12ml)溶液。向该溶液中加入碳酸钾(k2co3)(0.136g，0.986mmol，2.0当量)，然后在0℃滴加甲基碘(0.70g，4.93mmol，10当量)，将反应混合物在70℃搅拌2小时。反应完成后，将混合物转移到冰冷的水中，过滤沉淀，用水和己烷洗涤，得到0.205g的2-([1，1
′‑
联苯]-4-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸酯(7)；产率：99.07％；ms(es)：m/z419.45[m
h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：7.89(s，1h)，7.65(s，2h)，7.43-7.32(m，5h)，7.21-7.12(m，3h)，3.65(s，3h)，3.26(s，3h)。
[0533]
步骤8
[0534]
向三颈rbf中加入中间体(7)(0.205g，0.488mmol，1.0当量)的二氯甲烷(12ml)溶液。向该溶液中加入三甲基碘硅烷(0.244g，1.22mmol，2.5当量)，并将反应混合物在室温搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.118g的2-(n-甲基-[1，1
′‑
联苯]-4-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例28)；产率：59.55％；ms(es)：m/z 405.42[m h]

；lcms纯度：98.48％；hplc纯度：95.43％；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.71(s，1h)，8.90(s，1h)，8.29(s，1h)，8.09-8.02(m，3h)，7.75-7.73(d，j＝8.4mhz，1h)，7.67-7.64(t，j＝6mhz，2h)，7.19(s，1h)，3.58(s，3h)。
[0535]
实施例29
[0536][0537]
步骤6
[0538]
在0℃向三颈rbf中加入6-氟代-2-萘甲酸(0.395g，2.08mmol，1.1当量)的dmf(15ml)溶液和hatu(1.07g，2.83mmol，1.5当量)。15分钟后，将中间体(5)(0.425g，1.89mmol，1.0当量)加入到反应混合物中，然后加入n，n-二异丙基乙胺(0.73g，5.67mmol，3.0当量)，并将混合物在室温搅拌0.5小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(1.8％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.3g的2-(6-氟代-2-萘胺)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(6)；产率：40.01％；ms(es)：m/z 397.38[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：11.41(s，1h)，8.32(s，1h)，8.13-8.02(m，3h)，7.70(s，2h)，7.55(s，1h)，7.28-7.26(d，j＝8mhz，1h)，3.61(s，3h)。
[0539]
步骤7
[0540]
将混合物的中间体(6)(0.3g，0.755mmol，1.0当量)的dmf(15ml)溶液和碳酸钾(0.26g，1.88mmol，2.5当量)冷却至)℃，用甲基碘(1.072g，7.55mmol，10当量)处理。添加完成后，将混合物加热至70℃并在该温度搅拌2小时。将混合物转移到冰冷的水中，过滤沉淀，用水和己烷洗涤，得到0.310g的2-(6-氟代-n-甲基-2-萘胺)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(7)；产率：99.81％；ms(es)：m/z 411.40[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.33(s，1h)，8.11-8.02(m，3h)，7.79(s，2h)，7.55(s，1h)，7.315-7.302(d，j＝5.2hz，1h)，
3.58(s，3h)，3.20(s，3h)。
[0541]
步骤8
[0542]
在室温向三颈rbf中加入中间体(7)(0.31g，0.753mmol，1.0当量)的二氯甲烷(15ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.376g，1.88mmol，2.5当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.125g的2-(6-氟代-n-甲基-2-萘胺)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例29)；产率：41.75％；ms(es)：m/z405.42[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.69(s，1h)，8.92(s，1h)，8.36(s，1h)，8.19-8.16(t，j＝6mhz，1h)，8.09-8.07(d，j＝8.4mhz，1h)，7.87-7.79(m，2h)，7.59-7.55(t，j＝6.8mhz，1h)，7.21(s，1h)，3.58(s，3h)。
[0543]
实施例30
[0544][0545]
步骤6
[0546]
向三颈rbf中加入[1，1
′‑
联苯]-3-羧酸(0.2g，1.010mmol，1.0当量)的dmf(10ml)溶液并冷却至0℃。加入hatu(0.575g，1.5151mmol，1.5当量)。15分钟后，加入中间体(5)(0.18g，0.808mmol，0.8当量)，然后加入n，n-二异丙基乙胺(0.8ml，4.04mmol，4.0当量)，将混合物在室温搅拌0.5小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(1.8％二氯甲烷的甲醇溶液)进一步纯化，得到0.150g的2-([1，l
′‑
联苯]-3-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(6)；产率：46.29％；ms(es)：m/z405.42[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：11.85(s，1h)，8.55(s，1h)，8.06(s，2h)，7.71-7.65(m，5h)，7.46-7.32(m，3h)，3.62(s，3h)。
[0547]
步骤7
[0548]
向三颈rbf中加入中间体(6)(0.150，0.3699mmol，1.0eq)的dmf(10ml)溶液和碳酸钾(0.127g，0.9247mmol，2.5当量)并冷却至0℃。滴加甲基碘(0.525g，3.703mmol，10.0当量)。添加完成后，将混合物加热至70℃并在该温度搅拌2小时。反应完成后，将混合物倒入冰冷的水中，过滤沉淀，用水和己烷洗涤，得到0.120g的2-(n-甲基-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(7)；产率：77.32％；ms(es)：m/z419.45[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.55(s，1h)，8.04(s，1h)，7.81(s，1h)，7.70-7.59(m，4h)，7.42-7.31(m，3h)，3.65(s，3h)，3.28(s，3h)。
[0549]
步骤8
[0550]
在室温向三颈rbf中加入中间体(7)(0.120g，0.286mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.244g，1.22mmol，2.5当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.075g的2-(n-甲基-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例30)；产率：64.66％；ms(es)：m/z405.42[m h]

；lcms纯度：97.13％；hplc纯度：96.37％；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.644(s，1h)，8.90(s，1h)，7.952(s，1h)7.898(s，1h)，7.761-7.743(d，j＝7.2mhz，2h)，7.649(s，2h)，7.517-7.482(t，j＝6.8mhz，2h)，7.430-7.413(d，j＝6.8mhz，1h)，7.163(s，1h)，3.555(s，3h)。
[0551]
实施例31
[0552][0553]
步骤6
[0554]
向三颈rbf中加入4
′‑
氟代-[1，1
′‑
联苯]-3-羧酸(0.3g，1.3875mmol，1.0当量)的dmf(10ml)溶液并冷却至0℃。加入hatu，将混合物搅拌15分钟。加入中间体(5)(0.250g，1.11mmol，0.8当量)和dipea(1.0ml，5.55mmol，4.0当量)，将混合物升温至室温并搅拌0.5小时。反应完成后，将混合物转移到水中，用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析(2.8％二氯甲烷的甲醇溶液)纯化，得到0.220g的2-(4
′‑
氟代-[1，l
′‑
联苯]-3-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(6)；产率：39.01％；ms(es)：m/z 424.41[m h]

；1hnmr(dmso-d6，400mhz)：11.21(s，1h)，8.54(s，1h)，8.03(s，2h)，7.81(s，1h)，7.68-7.60(m，2h)，7.47-7.46(d，j＝8hz 2h)，7.11-7.09(d，j＝8hz，2h)，3.62(s，3h)。
[0555]
步骤7
[0556]
向三颈rbf中加入中间体(6)(0.220g，0.5195mmol，1.0当量)的dmf(10ml)溶液和碳酸钾(0.180g，1.3mmol，2.5当量)。将混合物冷却至0℃并滴加甲基碘(0.370g，2.5975mmol，5.0当量)处理。将反应混合物加热至70℃并在该温度搅拌2小时。反应完成后，将混合物倒入冰冷的水中，过滤沉淀，用水和己烷洗涤，得到0.165g的2-(4
′‑
氟代-n-甲基-[1，1
′‑
联苯]-3-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(7)；产率：72.60％；ms(es)：m/z 438.44[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.80(s，1h)，7.99(s，2h)，
438.44[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：8.80(s，1h)，8.05(s，2h)，7.82(s，1h)，7.79-7.72(m，2h)，7.42-7.40(d，j＝8hz 2h)，7.06-6.95(m，2h)，3.63(s，3h)，3.20(s，3h)。
[0565]
步骤8
[0566]
在室温向三颈rbf中加入中间体(7)(0.105g，0.24mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液和三甲基碘硅烷(0.1ml，0.6mmol，2.5当量)。将反应混合物在该温度搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到0.82g的2-(4
′‑
氟-n-甲基-[1，1
′‑
联苯]-2-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例32)；产率：80.68％；ms(es)：m/z 424.41[m h]

；1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.679(s，1h)，8.870(s，1h)，7.675-7.56(m，4h)，7.381(s，2h)，7.252，7.231，7.211(t，j＝16hz，2h)，6.964(s，1h)，3.105(s，3h)。
[0567]
实施例33
[0568][0569]
步骤9
[0570]
在0℃下向搅拌的对甲苯胺(0.380g，3.546mmol，1.0当量)的二氯甲烷(15ml)溶液中加入三光气(0.368g，1.241mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体8(0.254g，1.063mmol，0.30当量)，然后加入三乙胺(1.5ml，10.63mmol，3.0当量)，并将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到纯的2-(1-甲基-3-(对甲苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)。(0.190g，产率：48.06％)。ms(es)：373.20m/z[m h]

。
[0571]
步骤10
[0572]
在室温向中间体(b)(0.190g，0.510mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(20ml)中加入三甲基碘硅烷(0.18ml，1.275mmol，2.5当量)，并在该温度将反应混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到2-(1-甲基-3-(对甲苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例33)。(0.116g，产率：63.44％)，ms(es)：359.0m/z[m h] ，lcms纯度：97.67％，hplc纯度：97.62％，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.51(s，1h)，9.38(s，1h)，8.80(s，1h)，7.42-7.40(d，j＝8hz，2h)，7.18-7.16(d，j＝8hz，2h)，6.94(s，1h)，3.61(s，3h)，2.30(s，3h)。
[0573]
实施例34
[0574][0575]
步骤9
[0576]
在0℃下向搅拌的3-氯苯胺(1a)(0.430g，3.385mmol，1.0当量)的二氯甲烷(15ml)溶液中加入三光气(0.350g，1.179mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体8(0.242g，1.011mmol，0.30当量)，然后加入三乙胺(1.42ml，10.11mmol，3.0当量)，并将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到2-(3-(3-氯苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.170g，产率：42.79％)。ms(es)：393.0m/z[m h]

。
[0577]
步骤10
[0578]
在50ml的2颈rbf中，在室温向中间体(b)(0.170g，0.432mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(20ml)中加入三甲基碘硅烷(0.21ml，1.081mmol，2.5当量)，并在该温度将反应混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到纯2-(3-(3-氯苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例34)。(0.103g，产率：62.83％)，ms(es)：379.4m/z[m h] ，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.55(s，1h)，9.59(s，1h)，8.81(s，1h)，7.68(s，1h)，7.52-7.50(d，j＝8hz，1h)，7.40-6.96(m，3h)，3.60(s，3h)。
[0579]
实施例35
[0580][0581]
步骤9
[0582]
在0℃向搅拌的邻甲苯胺(0.190g，1.77mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入三光气(0.184g，0.620mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体8(0.127g，0.531mmol，0.3当量)，然后加入三乙胺(0.7ml，5.31mmol，3.0当量)，并将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到2-(1-甲基-3-(邻甲苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.080g，产率：40.47％)。ms(es)：373.05m/z[m h]

。
[0583]
步骤10
[0584]
在室温向中间体(b)(0.080g，0.215mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(20ml)中加入三甲基碘硅烷(0.08ml，0.537mmol，2.5当量)，并在该温度将反应混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到2-(1-甲基-3-(邻甲苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例35)。(0.035g，产率：45.46％)，ms(es)：359.05m/z[m h]

，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.50(s，1h)，9.20(s，1h)，8.79(s，1h)，7.28-7.22(m，4h)，6.94(s，1h)，3.63(s，3h)，2.23(s，3h)。
[0585]
实施例36
[0586][0587]
步骤9
[0588]
在0℃向搅拌的间甲苯胺(0.190g，1.77mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入三光气(0.184g，0.620mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体8(0.127g，0.531mmol，0.3当量)，然后加入三乙胺(0.7ml，5.31mmol，3.0当量)，并将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到纯2-(1-甲基-3-(间甲苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.075g，产率：37.94％)。ms(es)：373.04m/z[m h]

。
[0589]
步骤10
[0590]
在室温向中间体(b)(0.075g，0.201mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(20ml)中加入三甲基碘硅烷(0.08ml，0.503mmol，2.5当量)，并在该温度将反应混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到纯2-(1-甲基-3-(间甲苯基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例36)。(0.025g，产率：34.64％)，ms(es)：359.2m/z[m h]

，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.52(s，1h)，9.39(s，1h)，8.80(s，1h)，7.36-7.21(m，3h)，6.95-6.94(d，2h)，3.60(s，3h)，2.31(s，3h)。
[0591]
实施例37
[0592][0593]
步骤9
[0594]
在0℃向搅拌的2，4-二氟苯胺(1a)(0.220g，1.70mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入三光气(0.177g，0.596mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体8
(0.122g，0.511mmol，0.3当量)，然后加入三乙胺(0.7ml，5.11mmol，3.0当量)。将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将反应混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到2-(3-(2，4-二氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.056g，产率：27.85％)。ms(es)：395.05m/z[m h]

。
[0595]
步骤10
[0596]
在室温向中间体(b)(0.056g，0.142mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(20ml)溶液中加入三甲基碘硅烷(0.05ml，0.355mmol，2.5当量)，并在该温度将混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到纯2-(3-(2，4-二氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例37)。(0.015g，产率：27.77％)，ms(es)：381.0m/z[m h]

，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.52(s，1h)，9.43(s，1h)，8.79(s，1h)，7.49-7.35(m，2h)，7.16-7.11(t，1h)，6.95(s，1h)，3.60(s，3h)。
[0597]
实施例38
[0598][0599]
步骤9
[0600]
在0℃向搅拌的5，6，7,8-四氢萘-1-胺(1a)(0.210g，1.427mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入三光气(0.148g，0.499mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体8(0.102g，0.428mmol，0.3当量)，然后加入三乙胺(0.6ml，4.282mmol，3.0当量)。将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到2-(1-甲基-3-(5，6，7，8-四氢萘-1-基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.095g，产率：54.02％)。ms(es)：413.1m/z[m h]

。
[0601]
步骤10
[0602]
在室温向中间体b(0.095g，0.230mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(20ml)中加入三甲基碘硅烷(0.08ml，0.576mmol，2.5当量)，并在该温度将反应混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到2-(1-甲基-3-(5，6，7，8-四氢萘-1-基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例38)。(0.030g，产率：32.69％)，ms(es)：399.2m/z[m h]

，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.50(s，1h)，9.08(s，1h)，8.78(s，1h)，7.14-7.02(m，3h)，6.93(s，1h)，3.62(s，3h)，2.78(s，2h)，2.62(s，2h)，1.73(s，4h)。
[0603]
实施例39
[0604][0605]
步骤9
[0606]
在0℃向搅拌的3，4-二氯苯胺(0.270g，1.67mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入三光气(0.174g，0.58mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体8(0.120g，0.503mmol，0.3当量)，然后加入三乙胺(0.7ml，5.03mmol，3.0当量)，并将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到纯2-(3-(3，4-二氯苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.074g，产率：34.53％)。ms(es)：427.0m/z[m h]

。
[0607]
步骤10
[0608]
在室温向中间体(b)(0.074g，0.173mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液中加入三甲基碘硅烷(0.06ml，0.433mmol，2.5当量)。将混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到纯2-(3-(3，4-二氯苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例39)。(0.024g，产率：33.53％)，ms(es)：413.01m/z[m h]

，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.55(s，1h)，9.67(s，1h)，8.81(s，1h)，7.87(s，1h)，7.63-7.54(m，2h)，6.97(s，1h)，3.60(s，3h)。
[0609]
实施例40
[0610][0611]
步骤9
[0612]
在0℃向搅拌的3，4-二氟苯胺(0.220g，1.703mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入三光气(0.177g，0.596mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体8(0.122g，0.511mmol，0.3当量)，然后加入三乙胺(0.7ml，5.11mmol，3.0当量)，并将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到纯2-(3-(3，4-二氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.060g，产率：29.84％)。ms(es)：395.05m/z[m h]

。
[0613]
步骤10
[0614]
在室温向中间体(b)(0.060g，0.152mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(20ml)中加入三甲基碘硅烷(0.05ml，0.380mmol，2.5当量)，并在该温度将反应混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到纯2-(3-(3，4-二氟苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例40)。(0.008g，产率：13.83％)，ms(es)：381.20m/z[m h]

，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.53(s，1h)，9.63(s，1h)，8.82(s，1h)，7.68-7.63(m，1h)，7.48-7.37(m，2h)，6.84(s，1h)，3.61(s，3h)。
[0615]
实施例41
[0616][0617]
步骤9
[0618]
在0℃向搅拌的4-(2-氯苯氧基)苯胺(1a)(0.36g，1.67mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入三光气(0.17g，0.58mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体(8)(0.12g，0.503mmol，0.3当量)，然后加入三乙胺(0.7ml，5.03mmol，3.0当量)，并将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到纯2-(3-(4-(2-氯苯氧基)苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.070g，产率：28.78％)。ms(es)：485.9m/z[m h]

。
[0619]
步骤10
[0620]
在50ml的2颈rbf中，在室温向中间体(b)(0.070g，0.14mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(20ml)中加入三甲基碘硅烷(0.05lml，0.36mmol，2.5当量)，并在该温度将混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到纯2-(3-(4-(2-氯苯氧基)苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例41)。(0.027g，产率：39.72％)，ms(es)：471.8m/z[m h]

，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.52(s，1h)，9.50(s，1h)，8.81(s，1h)，7.63-7.62(m，1h)，7.61-7.60(m，2h)，7.55-7.36(m，1h)，7.25-7.21(m，1h)，7.10-7.07(m，1h)7.00-6.95(m，3h)，3.36(s，3h)。
[0621]
实施例42
[0622][0623]
步骤9
[0624]
在0℃向搅拌的3，5-双(三氟甲基)苯胺(1a)(0.380g，1.68mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入三光气(0.17g，0.58mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体(8)(0.120g，0.503mmol，0.3当量)，然后加入三乙胺(0.7ml，5.03mmol，3.0当量)。将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到2-(3-(3，5-双(三氟甲基)苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.065g，产率：26.21％)。ms(es)：495.3m/z[m h]

。
[0625]
步骤10
[0626]
在室温向中间体(b)(0.065g，0.13mmol，1.0当量)的二氯甲烷(20ml)溶液中加入三甲基碘硅烷(0.050ml，0.32mmol，2.5当量)。将混合物在室温搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到2-(3-(3，5-双(三氟甲基)苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例42)。(0.022g，产率：34.83％)，ms(es)：481.3m/z[m h]

，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.59(s，1h)，10.01(s，1h)，8.83(s，1h)，8.30(s，2h)，7.84(s，1h)，7.03(s，1h)，3.34(s，3h)。
[0627]
实施例43
[0628][0629]
步骤9
[0630]
在0℃向搅拌的四氢-2h-吡喃-4-胺(1a)(0.17g，1.68mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入三光气(0.174g，0.58mmol，0.35当量)。15分钟后，加入中间体(8)(0.120g，0.50mmol，0.3当量)，然后加入三乙胺(0.7ml，5.03mmol，3.0当量)。将混合物在室温搅拌2小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到2-(1-甲基-3-(四氢-2h-吡喃-4-基)脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(9)(0.065g，产率：35.37％)。ms(es)：367.3m/z[m h]

。
[0631]
步骤10
[0632]
在室温向中间体(b)(0.065g，0.17mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(20ml)中加入三甲基碘硅烷(0.063ml，0.44mmol，2.5当量)，并在该温度将混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到2-(3-(3，5-双(三氟甲基)苯基)-1-甲基脲基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例43)。(0.015g，产率：24.0％)，ms(es)：353.36m/z[m h]

，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.47(s，1h)，8.77(s，1h)，7.48-7.48(d，1h)，6.83(s，1h)，3.90-3.80(m，2h)，3.79-3.76(m，1h)，3.36(s，3h)，3.34-3.24(m，2h)，1.78-1.75(m，2h)，1.63-1.53(m，2h)。
[0633]
实施例44
[0634][0635]
步骤9
[0636]
在0℃向搅拌的中间体8(0.100g，0.417mmol，1.0当量)的二二氯甲烷(10ml)溶液中加入dmap(0.005g，0.041mmol，0.1当量)和三乙胺(0.17ml，1.253mmol，3.0当量)。10分钟后，加入吗啉-4-碳酰氯(la)(0.094g，0.626mmol，1.5当量)并将所得的混合物在室温搅拌12小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到纯2-(n-甲基吗啉-4-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.107g，产率：72.65％)。ms(es)：353.08m/z[m h]

。
[0637]
步骤10
[0638]
在室温向中间体b(0.107g，0.303mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(20ml)中加入三甲基碘硅烷(0.1ml，0.759mmol，2.5当量)，并在该温度将反应混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到纯2-(n-甲基吗啉-4-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例44)。(0.060g，产率：58.40％)，ms(es)：339.2m/z[m h]

，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.51(s，1h)，8.78(s，1h)，6.80(s，1h)，3.64-3.63(t，4h)，3.41(s，3h)，3.37-3.36(t，4h)。
[0639]
实施例45
[0640][0641]
步骤9
[0642]
在0℃向搅拌的中间体8(0.100g，0.417mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入dmap(0.005g，0.041mmol，0.1当量)和三乙胺(0.17ml，1.253mmol，3.0当量)。10分钟后，加入哌啶-1-碳酰氯(1a)(0.092g，0.626mmol，1.5当量)并将得到的混合物在室温搅拌12小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并
以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到纯2-(n-甲基哌啶-1-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.110g，产率：75.11％)。ms(es)：351.10m/z[m h]

。
[0643]
步骤10
[0644]
在室温向中间体(b)(0.110g，0.314mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(20ml)中加入三甲基碘硅烷(0.1ml，0.785mmol，2.5当量)，并在该温度将反应混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到2-(n-甲基哌啶-1-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例45)。(0.036g，产率：34.09％)，ms(es)：337.2m/z[m h]

，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.49(s，1h)，8.77(s，1h)，6.75(s，1h)，3.39(s，4h)，3.31-3.30(t，3h)，1.57(s，6h)。
[0645]
实施例46
[0646][0647]
步骤9
[0648]
在0℃下向搅拌的中间体(8)(0.120g，0.50mmol，1.0当量)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入dmap(0.006g，0.050mmol，0.1当量)和三甲胺(0.20ml，1.50mmol，3.0当量)。10分钟后，将吡咯烷-1-碳酰氯(1a)(0.10g，0.75mmol，1.5当量)加入反应混合物中。将混合物在室温搅拌12小时。反应完成后，将混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(2ml
×
50ml)。合并有机层，用盐水(2ml
×
25ml)洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析纯化，并以1.8％meoh的dcm溶液洗脱所需产物，得到纯2-(n-甲基吡咯烷-1-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸甲酯(b)(0.023g，产率：13.63％)。ms(es)：337.35m/z[m h]

。
[0649]
步骤10
[0650]
在室温向中间体(b)(0.023g，0.068mmol，1.0当量)的二氯甲烷溶液(10ml)中加入三甲基碘硅烷(0.025ml，0.171mmol，2.5当量)，并在该温度将混合物搅拌16小时。反应完成后，将混合物减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物与甲醇一起研磨，得到2-(n-甲基吡咯烷-1-甲酰胺基)-5-氧代-5h-噻吩并[3，2-b]吡喃-6-羧酸(实施例46)。(0.008g，产率：36.30％)，1h nmr(dmso-d6，400mhz)：12.47(s，1h)，8.78(s，1h)，6.78(s，1h)，3.43-3.25(m，7h)，1.85-1.75(m，4h)。
[0651]
实施例47：mts细胞增殖分析
[0652]
确定本发明的单羧酸转运蛋白抑制的细胞毒性并示于表1中。在一组实体和血液肿瘤细胞系中研究了mct抑制的抗增殖作用。以常规方式将细胞培养在其适当的生长培养基中。在第1天，以10,000个细胞/孔-25,000个细胞/孔(例如，hs578t：15,000个细胞/孔，siha：10,000个细胞/孔，以及mda-mb-231：25,000个细胞/孔)接种到96孔板中。将100μl磷酸盐缓冲盐水溶液加入到外部孔中以防止培养基蒸发。平板在5％co2的存在下，在37℃生长培养基中培养过夜。在第2天，将干重化合物原液溶解于浓度为10mm的100％dmso中。化合物进一步在分析培养基中稀释；10mm乳酸培养基(不含葡萄糖、丙酮酸盐和谷氨酰胺)或rpmi 1640培养基(不含丙酮酸和谷氨酰胺)，以生成1nm至10μm的最终剂量范围。用分析培
养基(10mm乳酸培养基或rpmi培养基或适当的培养基)替换96孔板中的生长培养基，并经由系列稀释度或在分析培养基中预先制备的溶液将化合物以不同浓度加入到该板的每个孔中。然后在37℃和5％co2的存在下将平板进一步温育72小时-96小时。在第2天至第5天，将分析培养基换成100μl dmem/f12，并将20μl celltiter96aq mts试剂加入到每个孔中，并将该板放回培养箱中1小时-2小时。mts被代谢活性细胞中的脱氢酶产生的nadph或nadh生物还原成可溶于组织培养基的有色甲臜产物。有色甲臜产物的量与培养物中活细胞的数量成正比。在spectramax m5e读板器上使用490nm测量波长读取这些板的吸光度。绘制剂量反应曲线并使用graphpad prism计算ic
50
值。ic
50
值等于从化合物处理的信号到溶媒处理的信号计算化合物浓度，该浓度引起50％生长抑制。
[0653]
所选化合物的细胞毒性列于表1，其中ic
50
：a＝＜1μm；b＝iμm-10μm；c＝＞10μm；并且nt＝未检测。
[0654]
表1：化合物和分析结果
[0655]
[0656]
[0657]
[0658]
[0659]
[0660]
[0661]
[0662]
[0663]
[0664]
[0665]
[0666]
[0667]
[0668]
[0669]
[0670][0671]
ic
50
；a＝＜1μm；b＝1μm-10μm；c＝＞10μm；nt＝未检测
[0672]
实施例48：肿瘤细胞系中的乳酸检测分析
[0673]
测量本发明的单羧酸转运蛋白的抑制，数据示于表ii中。将细胞维持在其适当的生长培养基(含有2g/l葡萄糖、2mm l-谷氨酰胺并补充有10％fbs和p/s的rpmi培养基(生长培养基))中。将15,000个-25,000个细胞接种到白色96孔板的生长培养基中，并在37℃和5％co2下孵育24h。还接种了重复的平板，用于通过mts分析进行标准化。将干重化合物原液溶解于浓度为10mm的100％dmso中。化合物进一步在分析培养基(乳酸培养基：10mm乳酸、5％fbs和1
×
p/s；葡萄糖培养基：rpmi，5％fbs和1
×
p/s)中稀释。24小时后将生长培养基更
换为含有10μm化合物或溶媒(dmso)对照的分析培养基，并孵育24小时。收集条件培养基，并在200μl冰冷的pbs中洗涤细胞。将细胞在37.5μl失活溶液(25μl pbs 12.5μl 0.6n hcl；0.25％dtab)中裂解，该溶液快速抑制细胞代谢、破坏还原的nad(p)h二核苷酸并抑制内源蛋白的活性。孵育5分钟后，将12.5μl中和溶液(1mtrizma)孵育1分钟。使用lactate-glo试剂盒(promega)进行细胞内乳酸测量。简言之，在使用前立即混合乳酸检测试剂，并将50μl移液至各孔中，并在室温孵育1小时乳酸通过酶促反应被氧化而生成光。使用spectramax m5e读板器记录发光值，并使用graphpad prism使用pbs中已知浓度的加标乳酸确定乳酸浓度。
[0674]
所选化合物的分析数据列于表2中，其中ic
50
：a＝＜1μm。
[0675]
表2：乳酸检测分析结果
[0676][0677]
ic
50
：a＝＜1μm
[0678]
尽管为了清楚理解的目的，已经通过说明和示例的方式对前述发明进行了一些详细的描述，但本领域技术人员将理解在所附权利要求的范围内可以实施某些改变和修改。此外，本文提供的每篇参考文献全文以引用方式并入本文，其程度与每篇参考文献以引用方式单独并入相同。在本技术与本文提供的参考文献之间存在冲突的情况下，本技术将占主导地位。