一种检测液态乳制品中农药残留量的方法与流程

1.本发明涉及食品检测领域，具体涉及一种检测液态乳制品中农药残留量的方法。


背景技术：

2.农药残留是因农药使用而残留在人类或动、植物体中的混合物。由于部分农药特别是有机氯农药的高残留性和富集性,使得居于食物链末端的哺乳动物甚至人体体内积累农药,积累到一定的程度就会危害生物体的神经系统、破环内脏功能,造成生理障碍,影响生殖和遗传,严重危害生物体的健康并影响后代生存。
3.检测乳制品中各类残留农药的含量，既有利于严格把关乳制品的质量，又可以侧面反映动物生存环境的优劣，具有重要意义。
4.目前，《gb/t 5009.162-2008动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定》、《gb/t 5009.19-2008食品中有机氯农药多组分残留量的测定》以及《gb/t 23210-2008牛奶和奶粉中511种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法》中对于多组分残留农药的检测方法以及检出限均作出了明确规定。其中，气相色谱被广泛应用于各类残留农药含量的检测中。
5.然而，目前检测乳制品中农药残留量的方法仍有待改进。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种检测液态乳制品中农药残留量的方法，该方法相比于现有的检测方法检测效率更高，且降低了人为因素对结果的影响，提高了检测结果的准确性。
7.具体地，本发明提供以下技术方案：
8.本发明提供一种检测液态乳制品中农药残留量的方法，包括对所述液态乳制品进行提取以获得气相色谱检测待测品的步骤，所述提取步骤具体包括：
9.按液固比为(14～16)ml:10g计，以乙腈对所述液态乳制品进行提取以获得乙腈提取液，向其中加入水和正己烷进行萃取，获得正己烷有机相。
10.现有技术中，待测样品一般都需要经过有机溶剂提取、旋转蒸发浓缩、净化柱净化、定容等过程，从而获得气相色谱检测进样。但是，旋转蒸发浓缩时样品需要转移、浓缩、再转移等，对人员技术要求高、转移损失大，而且一次只能旋转蒸发浓缩一个样品，耗时较长。本发明研究发现，通过调整提取过程中乙腈的用量以及后续加入水和正己烷进行萃取，可以尽可能地将残留的农药转入正己烷有机相中，从而实现省略旋转蒸发操作，并且对检测结果没有负面影响，降低了人为因素对结果的影响，提高了检测效率。
11.优选地，所述水与所述乙腈提取液的体积比为(5～6):3。本发明研究发现，将水与乙腈提取液的体积比控制在上述范围内，准确性更高。
12.优选地，以乙腈对所述液态乳制品进行提取的同时添加无机盐。所述无机盐包括硫酸镁和氯化钠。
13.优选地，以乙腈对所述液态乳制品进行两次提取，第一次与第二次提取中乙腈的
用量比为(1.8～2.2):1。采用上述操作有利于将残留农药尽可能地从待测液态乳制品中提取出来。
14.在本发明的一个优选实施方式中，获得所述乙腈提取液的具体步骤包括：
15.向每10g所述液态乳制品中加入9～11ml乙腈、3.5～4.5g硫酸镁和1.0～1.5g氯化钠，涡旋，离心，获得第一有机相和第一水相；
16.向所述第一水相中再加入剩余的乙腈，涡旋，离心，获得第二有机相；
17.合并所述第一有机相和所述第二有机相，获得所述乙腈提取液。
18.其中，涡旋时间优选为1分钟，离心优选以4000～5000r/min离心4～6分钟。
19.在本发明的一个优选实施方式中，获得所述正己烷有机相的具体步骤包括：
20.向所述乙腈提取液中加入水和正己烷，涡旋，离心，获得第三有机相和第三水相；
21.以正己烷对所述第三水相进行至少2次涡旋和离心，合并有机相，获得第四有机相；
22.合并所述第三有机相和所述第四有机相，获得所述正己烷有机相。
23.进一步优选地，所述正己烷的加入量每次均为4～6ml。即向每15ml所述乙腈提取液中加入25～30ml水和4～6ml正己烷，涡旋，离心，获得第三有机相和第三水相；向所述第三水相中加入4～6ml正己烷，涡旋，离心，获得第四有机相和第四水相；向所述第四水相中加入4～6ml正己烷，涡旋，离心，获得第五有机相，合并所述第三有机相、所述第四有机相和所述第五有机相，获得所述正己烷有机相。
24.其中，涡旋时间优选为1分钟，离心优选以4500～5500r/min离心1～2分钟。
25.经过上述操作，原先在乙腈提取液中的残留农药几乎可以全部转移至正己烷有机相中。
26.根据本发明提供的检测液态乳制品中农药残留量的方法，获得所述正己烷有机相后，对其进行吹干、净化、二次吹干、定容，以获得所述气相色谱检测待测品。
27.其中，吹干具体包括：将所述正己烷有机相用氮气在50
±
2℃水浴中吹干。
28.净化具体包括：向弗罗里硅藻土spe净化柱加入3ml正己烷，然后加入3ml洗脱溶剂进行活化；将上一步吹干所得样品用1ml洗脱溶剂溶解，涡旋30秒，转移至已经活化的弗罗里硅藻土spe净化柱，加入3ml洗脱溶剂进行洗脱，重复3次，收集全部洗脱液；所述洗脱溶剂为体积比为9:1的正己烷和丙酮。
29.采用上述净化步骤，通过吸附可以去除脂肪等杂质，从而提高样品的纯度。
30.二次吹干具体包括：将洗脱液用氮气在50
±
2℃水浴中吹干。
31.定容具体包括：向吹干的样品中加入1ml正己烷，涡旋混匀。
32.优选地，定容后还包括将样品经0.45μm有机系滤膜过滤的步骤，然后将所得样品作为气相色谱检测待测品。
33.优选地，所述液态乳制品为牛乳或牛奶。当检测对象为牛乳或牛奶时，使用上述检测方法所得结果更为准确。
34.优选地，所述农药为有机氯类农药。进一步优选地，包括以下农药中的至少一种：α-666，β-666，γ-666，δ-666，p,p
’‑
dde，p,p
’‑
ddd，o,p
’‑
ddt，p,p
’‑
ddt，七氯，环氧七氯，顺式氯丹，反式氯丹，氧化氯丹，α-硫丹，β-硫丹，硫丹硫酸盐以及狄试剂以及艾氏剂。
35.有机氯类农药是用于防治植物病虫害的组成成分中含有有机氯元素的有机化合
物，在牛乳的生产过程中存在有机氯污染的风险。本发明的方法检测有机氯类农药残留量准确度较高，有较好地适用性。
36.在本发明的一个优选实施方式中，进行气相色谱检测时，条件如下：
37.进样口温度：260℃～280℃，检测器温度：300℃，载气：高纯氮气(纯度≥99.999％)，分流比：关；
38.db-1701p毛细管色谱柱(30m
×
0.25mm
×
0.25μm)程序升温：初始温度85℃，保持1min，以20℃/min升至150℃，保持2min，以5℃/min升至205℃，保持8min,以40℃/min升至280℃，保持10min，总时间为37.13min；柱流速：1.5ml/min。
39.本发明的有益效果在于：本发明提供了一种检测液态乳制品中农药残留量的方法，通过调整提取过程中乙腈的用量以及后续加入水和正己烷进行萃取，尽可能地将残留的农药转入正己烷有机相中，从而实现省略旋转蒸发操作，并且对检测结果没有负面影响，降低了人为因素对结果的影响，而且可批量检测，提高了检测效率。
具体实施方式
40.以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
41.以下实施例所涉及的原料，若无特别说明，均可市购获得。
42.实施例1
43.本实施例提供一种检测牛乳中有机氯类农药残留量的方法，包括以下步骤：
44.提取：准确称取10g牛乳样品于50ml离心管中，加入10ml乙腈，然后加入4g硫酸镁和1g氯化钠，涡旋1分钟，4000r/min离心5分钟，将乙腈有机相(上清液)全部转移到另一干燥的50ml离心管中，下层残留物用5ml乙腈重复提取一次，涡旋1分钟，4000r/min离心5分钟，转移上清液并合并于50ml离心管中，得到乙腈提取液；
45.向乙腈提取液中加入25ml水和5ml正己烷，涡旋1分钟，5000r/min离心1分钟，将正己烷层转移到玻璃试管中，然后残留液中加入5ml正己烷，涡旋1分钟，5000r/min离心1分钟，转移并合并正己烷层，残留液中再加入5ml正己烷，涡旋1分钟，5000r/min离心1分钟，转移并合并正己烷层(共15ml)，得到正己烷有机相；
46.吹干：将正己烷有机相用氮气在50
±
2℃水浴中吹干；
47.净化：
①
弗罗里硅藻土spe净化柱活化：加入约3ml正己烷，然后再加入约3ml洗脱溶剂(正己烷:丙酮＝9:1，体积比，下同)；
②
弗罗里硅藻土spe净化柱上样：将吹干后的样品加入约1ml洗脱试剂(正己烷:丙酮＝9:1)溶解，然后涡旋30秒，将弗罗里硅藻土spe净化柱转移到玻璃试管上，然后加入溶解好的样品溶液；
③
弗罗里硅藻土spe净化柱洗脱：待样品溶液快要流干时，加入约3ml洗脱溶剂(正己烷:丙酮＝9:1)冲洗盛放样品的玻璃试管，再倒入弗罗里硅藻土spe净化柱，重复3次洗脱后(洗脱溶液共9ml)，待洗脱溶剂流干后，弃去弗罗里硅藻土spe净化柱，收集全部洗脱液；
48.二次吹干：将洗脱液用氮气在50
±
2℃水浴中吹干；
49.定容：向二次吹干后的样品中准确加入1.00ml正己烷，在涡旋混合器上充分振荡溶解残留物，经0.45μm有机系滤膜过滤后，得到气相色谱检测进样；
50.气相色谱检测：设置气相色谱参数如下：进样口温度：260℃～280℃，检测器温度：300℃，载气：高纯氮气(纯度≥99.999％)，分流比：关；
51.db-1701p毛细管色谱柱(30m
×
0.25mm
×
0.25μm)程序升温：初始温度85℃，保持1min，以20℃/min升至150℃，保持2min，以5℃/min升至205℃，保持8min，以40℃/min升至280℃，保持10min，总时间为37.13min；
52.柱流速：1.5ml/min。
53.进样1μl。
54.计算结果：农药组分的含量(mg/kg)：
55.式中：
56.(1)ai：待测样品中各个农药的峰面积；
57.(2)c：标准品的浓度，单位是μg/ml；
58.(3)v：样品的定容体积，1.00ml；
59.(4)as：标准品的峰面积；
60.(5)m：样品的质量，g。
61.计算结果保留三位有效数字。
62.1、检出限
63.实施例1中的方法对18种有机氯类农药的检出限如表1所示。
64.表1方法中18种有机氯类农药的检出限
65.[0066][0067]
2、回收率及平行样偏差验证
[0068]
在正常牛乳(即不含上述18种有机氯类农药的牛乳)中掺入不同浓度的18种有机氯类农药，分别按上述方法检测，结果见表2和表3。
[0069]
表2回收率验证结果
[0070]
[0071][0072]
表3平行样偏差验证结果
[0073][0074]
[0075]
3、精密度验证
[0076]
依据gbt6379.2-2016《测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法》计算重现性标准偏差与再现性相对标准偏差，结果见表4。
[0077]
表4精密度验证结果(mg/kg)
[0078][0079]
由上述结果可以看出，本发明实施例提供的检测方法可以准确测定牛乳中18种有机氯类农药的残留量，且测试速度快，方便快捷。
[0080]
对比例1
[0081]
本对比例提供一种检测牛乳中有机氯类农药残留量的方法，与实施例1的区别在于提取步骤：
[0082]
准确称取10g牛乳样品于50ml离心管中，加入10ml乙腈，然后加入4g硫酸镁和1g氯化钠，涡旋1分钟，4000r/min离心5分钟，将乙腈有机相(上清液)全部转移到另一干燥的50ml离心管中，下层残留物用5ml乙腈重复提取一次，涡旋1分钟，4000r/min离心5分钟，转移上清液并合并于50ml离心管中，得到乙腈提取液；
[0083]
向乙腈提取液中加入10ml水和5ml正己烷，涡旋1分钟，5000r/min离心1分钟，将正己烷层转移到玻璃试管中，然后残留液中加入5ml正己烷，涡旋1分钟，5000r/min离心1分钟，转移并合并正己烷层，残留液中再加入5ml正己烷，涡旋1分钟，5000r/min离心1分钟，转移并合并正己烷层(共15ml)，得到正己烷有机相。
[0084]
本对比例与实施例1的回收率与平行样偏差结果比对如表5所示。
[0085]
表5对比例1与实施例1回收率和平行样偏差对比数据
[0086][0087][0088]
对比例2
[0089]
本对比例提供一种检测牛乳中有机氯类农药残留量的方法，与实施例1的区别在于提取步骤：
[0090]
准确称取10g牛乳样品于50ml离心管中，加入20ml乙腈，然后加入4g硫酸镁和1g氯化钠，涡旋1分钟，4000r/min离心5分钟，将乙腈有机相(上清液)全部转移到另一干燥的50ml离心管中，下层残留物用10ml乙腈重复提取一次，涡旋1分钟，4000r/min离心5分钟，转移上清液并合并于50ml离心管中，得到乙腈提取液；
[0091]
向乙腈提取液中加入25ml水和5ml正己烷，涡旋1分钟，5000r/min离心1分钟，将正己烷层转移到玻璃试管中，然后残留液中加入5ml正己烷，涡旋1分钟，5000r/min离心1分钟，转移并合并正己烷层，残留液中再加入5ml正己烷，涡旋1分钟，5000r/min离心1分钟，转移并合并正己烷层(共15ml)，得到正己烷有机相。
[0092]
本对比例与实施例1的回收率与平行样偏差结果比对如表6所示。
[0093]
表6对比例2与实施例1回收率和平行样偏差对比数据
[0094][0095][0096]
由以上结果可以看出，采用本发明实施例的检测方法可以更准确地检测牛乳中18种有机氯类农药的残留量，特别是针对硫丹硫酸盐、δ-六六六、β-六六六。
[0097]
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。