一种雾化吸入用解酒护肝功能性提取物制备方法与流程

1.本发明涉及保健品制药领域，具体涉及一种雾化吸入用解酒护肝功能性提取物制备方法。


背景技术：

2.酗酒和酒精中毒是长期存在的全球性公共健康问题，醉酒属于急性酒精中毒现象，能够引起一系列病理变化甚至死亡，因此，对解酒保肝药物的研制迫在眉睫。而酒精基本是通过肝脏乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶进行代谢，因此增强乙醇脱氢酶、乙醛脱氢酶的活性，是解酒制品的主要药理依据。
3.cn 102579958a公开了一种解酒护肝组合物、组合物及其制备方法，其原料按重量份计由葛根 1～5 份、葛花 1～5 份、枳椇子 1～5 份、甘草0.1～0.5份、砂仁01～0.5份和人参叶0.1～0.5份组成。具体步骤为：a取葛根，切块加水，粉碎，然后将温度升至90～120℃，保温30～90min后冷却，调节ph，加入淀粉酶，在温度为50℃条件下酶解 4～8 h，然后加入糖化酶，在温度为60℃条件下酶解 6～24 h，得提取物a；b.按配方分别称取葛花、枳棋子、砂仁、人参叶和甘草，分别粉碎，依次加入回流提取罐中，再向回流提取罐中加入体积分数为60～80%的乙醇，回流提取3次，合并3次回流提取液，除乙醇，得提取物b。将步骤a所得提取物a和步骤b所得提取物b混合，得解酒护肝提取物。能够延该方法能延迟醉酒时间，在解酒同时还具有护肝功能。
4.但上述文献还存在以下不足：（1）未披露具体的解酒护肝机理，也未披露对于酒精性肝损伤是否有修复作用；（2）产品为口服液体或固体冲剂, 服用时，挥发性物质会影响鼻黏膜对活性物质的吸收率。


技术实现要素：

5.为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种雾化吸入用解酒护肝功能性提取物制备方法。
6.本发明所提供的雾化吸入用解酒护肝功能性提取物，具体包括以下的步骤：（1）以茯苓、陈皮为原料，将它们分别超微粉碎后混合，或者是将两者混合后超微粉碎；获得混合粉；（2）取（1）中的混合粉，加入蒸馏水，再加入调节剂调节ph值，最后加入复合酶进行酶解，获得酶解液；（3）酶解液固液分离，获得第一上清液和第一沉淀物；（4）将（3）获得的第一沉淀中添加醇类溶剂，回流搅拌提取，并再次分离，获得第二上清液和第二沉淀；（5）合并（3）～（4）第一上清液和第二上清液，并减压浓缩，获得浓缩膏。
7.优选的，（1）中，茯苓、陈皮的重量比依次为3～8: 2～7。
8.优选的，（1）中，原料的复配重量比为4:6。
9.优选的，（1）中的复配原料超微破壁粉碎10～15min至细度≥1000目。
10.优选的，（1）中的复配原料超微破壁粉碎12min至细度≥1000目。
11.优选的，（2）中，加入混合粉重量8～12倍的蒸馏水。
12.优选的，（2）中，加入混合粉重量9倍的蒸馏水。
13.优选的，（2）中，调节剂为1～3%柠檬酸、0.05～2%山梨酸、2～5%乳酸、0.05～1%碳酸氢钠、0.02～2%磷酸氢二钠中的至少一种。
14.优选的，（2）中，调节剂为1.5%柠檬酸、0.05%碳酸氢钠、0.1%磷酸氢二钠。
15.优选的，（2）中，添加占混合粉0.05～1wt%的酸性纤维素酶、0.1～2%酸性果胶酶、0.1～3%酸性蛋白酶、0.05～3%淀粉酶、0.02～1.5%脂肪酶中的至少2种为复合酶，调节至ph 4.5～6.5。
16.优选的，（2）中，添加占混合粉重量0.1%酸性纤维素酶、0.1%酸性果胶酶为复合酶，调节至ph 5.5。
17.优选的，（2）中，酶解条件为：温度50～60℃，酶解搅拌2～3h，酶解后于90～95℃下灭酶。
18.优选的，（2）中，酶解条件为：温度55℃，酶解搅拌2h。
19.优选的，（3）中，酶解液在8000～10000r/min转速下离心10min～20min进行固液分离。
20.优选的，（3）中，酶解液在10000r/min转速下离心10min进行固液分离。
21.优选的，（4）中，加入混合粉重量9～12倍的50～70%乙醇溶剂，在80℃～100℃下回流2～4h。
22.优选的，（4）中，加入混合粉重量9倍的65%乙醇溶剂，在100℃下回流2h。
23.优选的，（4）中，再次分离条件为：在8000～10000r/min转速下离心时间10min～20min。
24.优选的，（4）中，再次分离条件为： 8000r/min转速下离心时间10min。
25.优选的，（5）中，合并的上清液的减压浓缩为减压旋转蒸发，在温度60～80℃下浓缩至波美度41.5～43.0。
26.优选的，（5）中，合并的上清液的减压浓缩为减压旋转蒸发，在温度70℃下浓缩至波美度42.0。
27.本发明的优点如下：1.本发明制备的制剂，在小鼠实验中雾化吸入后，显著降低酒精性肝损伤小鼠肝脏谷草转氨酶和谷丙转氨酶酶活，对于酒精性肝损伤有明显修复作用。
28.2. 本发明将药食同源原料、香氛类物质、新资源食品相结合，通过电子雾化创新形式，实现呼吸道与鼻腔双系统中血液、神经通路的双途径给药，显著提高功能成分的吸收效率与治疗效果，为脑部疾病治疗提供了新的思路。
29.3. 将功能组方与电子雾化装置相结合，开发安全高效、灵巧便携的电子雾化康养产品，解决传统雾化产品适用场景受限、给药途径单一、雾化成本高等行业难题，填补了我国雾化吸入治疗产品市场空白。
附图说明
30.图1为独木桥行为学评价；图2为解酒效果分析；图3为小鼠口鼻暴露系统吸入给药；图4为护肝效果分析。
具体实施方式
31.为了能使本领域技术人员更好的理解本发明，现结合具体实施方式对本发明进行更进一步的阐述。但本发明并不局限于此，凡是与本技术相同或相近的技术方案均属于本发明的内容。
32.本发明实验材料简介：（1）该解酒护肝提取物按照实施例1、2、3、4的制备方法得到；（2）60只c-57小鼠，雄性，6周，体重18-22g；（3）独木桥行为学装置；（4）抽吸机。
33.实施例1（1）取茯苓、陈皮，按4:6重量比进行复配，再超微破壁粉碎12min至细度≥1000目；（2）向混合粉中加入混合粉重量9倍蒸馏水，再加入1.5%柠檬酸、0.05%碳酸氢钠、0.1%磷酸氢二钠，调节至ph 5.5，再加入0.1%酸性纤维素酶和0.1%酸性果胶酶，在55℃下酶解搅拌2h，获得酶解液，酶解后于95℃下灭酶10min；（3）将获得的酶解液在10000r/min转速下离心10min，进行固液分离，分别获得酶解第一上清液和第一沉淀；（4）将（3）获得的第一沉淀中添加占混合粉重量9倍的65%乙醇溶剂，在100℃下回流2h，获得醇提液，并再次分离，再次分离条件为： 8000r/min转速下离心时间10min，获得第二上清液和第二沉淀；（5）合并（3）～（4）第一上清液和第二上清液，并进行减压旋转蒸发，在70℃下浓缩至波美度42.0，获得浓缩膏。
34.实施例2（1）取茯苓、陈皮，按7:3重量比进行复配，再超微破壁粉碎10min至细度≥1000目；（2）向混合粉中加入占混合粉重量9倍的蒸馏水，再加入1.5%乳酸、0.05%碳酸氢钠、0.1%磷酸氢二钠，调节至ph 5.5，再加入0.1%酸性纤维素酶和0.1%酸性蛋白，在55℃下酶解搅拌2h，获得酶解液，酶解后于95℃下灭酶5min；（3）将获得的酶解液在10000r/min转速下离心10min，进行固液分离，分别获得酶解第一上清液和第一沉淀；（4）将（3）获得的第一沉淀中加入混合粉重量10倍的65%乙醇溶剂，在100℃下回流2h，获得醇提液，并再次分离，再次分离条件为：10000r/min转速下离心时间10min，获得第二上清液和第二沉淀；（5）合并（3）～（4）第一上清液和第二上清液，并进行减压旋转蒸发，在70℃下浓缩至波美度42.0，获得浓缩膏。
35.实施例3（1）取茯苓、陈皮，按5:5重量比进行复配，再超微破壁粉碎12min至细度≥1000目；（2）向混合粉中加入占混合粉重量9倍的蒸馏水，再加入1.5%山梨酸、0.05%碳酸氢钠、0.1%磷酸氢二钠，调节至ph 5.5，再加入0.1%酸性纤维素酶和0.1%淀粉酶，在55℃下酶解搅拌2h，获得酶解液，酶解后于95℃下灭酶5min；（3）将获得的酶解液在10000r/min转速下离心10min，进行固液分离，分别获得酶解第一上清液和第一沉淀；（4）将（3）获得的第一沉淀中加入占混合粉重量 9倍的58%乙醇溶剂，在100℃下回流2h，获得醇提液，并再次分离，再次分离条件为： 8000r/min转速下离心时间10min，获得第二上清液和第二沉淀；（5）合并（3）～（4）第一上清液和第二上清液，并进行减压旋转蒸发，在70℃下浓缩至波美度42.0，获得浓缩膏。
36.实施例4（1）取茯苓、陈皮，按6:4重量比进行复配，再超微破壁粉碎12min至细度≥1000目；（2）向混合粉中加入占混合粉重量9倍的蒸馏水，再加入1.5%柠檬酸、0.05%碳酸氢钠、0.1%磷酸氢二钠，调节至ph 5.5，再加入0.5%酸性蛋白酶和0.1%酸性果胶酶，在55℃下酶解搅拌2h，获得酶解液，酶解后于95℃下灭酶5min；（3）将获得的酶解液在10000r/min转速下离心10min，进行固液分离，分别获得酶解第一上清液和第一沉淀；（4）将（3）获得的沉淀物中加入混合粉重量 9倍的65%醇类溶剂，在100℃下回流2h，获得醇提液，并再次分离，再次分离条件为： 8000r/min转速下离心时间10min，获得第二上清液和第二沉淀；（5）合并（3）～（4）第一上清液，并进行减压旋转蒸发，在温度70℃下浓缩至波美度42.0，获得浓缩膏。
37.实验例1：本发明的实验分组：浓缩膏先溶解后再进行雾化实验，将小鼠随机分为6组，每组10只，每组的吸入治疗用药方法如下:实施例1的制剂每天雾化吸入1h，连续7天；实施例2的制剂每天雾化吸入1h，连续7天；实施例3的制剂每天雾化吸入1h，连续7天；实施例4的制剂每天雾化吸入1h，连续7天；溶剂组：空白溶剂雾化吸入1h；空白组：无任何雾化吸入。为测定其解酒功效，各实施例及溶剂组、空白组分别吸烟30min；灌胃酒精40%浓度至建模所需剂量；灌胃后立即放回集毒箱，吸烟15、30、60min；构建酒精性肝损伤动物模型，各样本吸入7天后，每天观察小鼠饮食、大便、毛发、呼吸、精神状态等一般状态及行为表现。
38.禁食16h后处死动物。每个时间节点取出小鼠评价其行为学指标。（图2）。
39.评价方法为：分析灌胃酒精不同时间点小鼠行为学指标，以独木桥实验为标准，建
立行为学评分标准，汇总数据形成实验结果。
40.0分：小鼠处于深度醉酒状态，无法停立于独木桥上；1分：小鼠处于中度醉酒状态，无法独立走完独木桥行程；3分：小鼠处于轻度醉酒状态，可在步态不稳的状态下独立过桥；5分：小鼠处于基本清醒状态，可自由过桥。
41.评分越高说明小鼠醉酒程度越轻，也反应产品解酒效果越好。
42.实验动物为6周龄的c57/bl6雄性小鼠，体重18～22g ，适应性饲养一周后启动酒精灌胃，共分为空白组、对照组、建模组以及配方1、配方2、配方3、配方4（分别对应实施例1、实施例2、实施例3、实施例4），每组每日灌胃一次，连续灌胃10天后取血清，测定血清ast和alt指标，确定最佳灌胃剂量（图4）。
43.由图2研究结果表明，实施例1-4组药物可显著提高小鼠行为学指标，与溶剂组和空白组有显著性差异。
44.从图4酒精性脂肪肝第一轮测定结果可知，在小鼠实验中，实施例1-4的样品可以显著降低酒精性肝损伤小鼠肝脏谷草转氨酶和谷丙转氨酶酶活，说明其对于酒精性肝损伤有明显修复作用。