一种提高染色效率的苏木素染液及其制备方法与流程

1.本发明涉及生化领域，尤其涉及一种提高染色效率的苏木素染液及其制备方法。


背景技术：

2.苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining)，简称he染色法，其为石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。he染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
3.苏木精—伊红染色法中的操作步骤主要包括切片—烤片—脱蜡—水化—苏木素染色—分化—返蓝—伊红染色—脱水—透明—封片；其中，苏木素染色操作中主要用到苏木素染色液，目前常见有以下问题：
4.1)苏木素染色液表面产生容易金属膜，或者有染料沉淀，容易导致苏木素染色后片子表面存在污迹，难以除去，导致出现染色不均、无法读片的现象。
5.2)对于苏木素染色液产生的金属膜，需要过滤除去，增加了技术人员的工作量，同时浪费时间和试剂。
6.3)容易出现核质共染现象，染色效果不佳。
7.4)染色稳定性差，容易褪色，不能满足保存30年的使用需求。
8.5)500ml的苏木素染液一般染不到2000张片子，利用率较差。
9.6)在不同的季节、温度对染色时间有不同的要求，需要先探索合适的染色时间才能开始临床应用，增加了工作量，降低了效率。


技术实现要素：

10.本发明目的是针对上述问题，提供一种提高细胞核染色效果的苏木素染液及其制备方法。
11.为了实现上述目的，本发明的技术方案是：
12.一种提高染色效率的苏木素染液，所述苏木素染液的成分包括苏木素、无水乙醇、硫酸铝、蒸馏水、氧化剂、丙三醇、ph调节剂、乙二醇、乙二胺四乙酸二钠、磷钨酸；各成分的质量百分比为：苏木素0.2％、无水乙醇15～20％、硫酸铝1％、蒸馏水65～70％、氧化剂0.01～0.02％、丙三醇5％、ph调节剂0.2％、乙二醇7.7～7.9％、乙二胺四乙酸二钠2.5～3.5％、磷钨酸0.5～1.2％。
13.进一步的，所述苏木素染液中各成分的质量百分比为：苏木素0.2％、无水乙醇16.79％、硫酸铝1％、蒸馏水65％、氧化剂0.01％、丙三醇5％、ph调节剂0.2％、乙二醇7.8％、乙二胺四乙酸二钠3％、磷钨酸1％。
14.进一步的，所述氧化剂为碘酸钾、碘酸钠中的一种或两种混合。
15.进一步的，所述ph调节剂为柠檬酸、冰醋酸、酒石酸中的一种或多种混合。
16.一种苏木素染液的制备方法，包括以下步骤：
17.s1、按计量称取苏木素、无水乙醇、硫酸铝、蒸馏水、氧化剂、丙三醇、ph调节剂、乙二醇、乙二胺四乙酸二钠、磷钨酸；
18.s2、在烧杯中依次加入无水乙醇、乙二醇、苏木素，以200～300r/min的转速进行搅拌，直至苏木素完全溶解，得到苏木素溶液；
19.s3、在容器中依次加入蒸馏水、硫酸铝，缓慢搅拌直至硫酸铝完全溶解，然后加入乙二胺四乙酸二钠，搅拌均匀后得到硫酸铝溶液；
20.s4、将硫酸铝溶液加入到苏木素溶液中，搅拌均匀后依次加入氧化剂、丙三醇、磷钨酸，充分混匀后得到混合溶液，在混合溶液中加入ph调节剂，将ph值调节为2～3.5；
21.s5、静置12～24小时后，将混合溶液进行过滤，得到的滤液即为苏木素染液。
22.进一步的，所述步骤s5中进行过滤时使用1000～2000目的过滤网进行过滤。
23.与现有技术相比，本发明具有的优点和积极效果是：
24.1)本发明中的苏木素染液通过调节成分中金属盐的比例，在使用过程中无金属膜产生，大大减少了技术人员的工作量，提高了染色效率。
25.2)本发明中的苏木素染液配合稳定剂使用，从而使得苏木素染液对细胞核的选择性更强，染色效果更清晰鲜明，可保存时间也更长，经老化测试(60摄氏度，24h*7)，可满足长时间的保存需求。
26.3)本发明中的苏木素染液每500ml至少可以染3000张片子，有效提高了苏木素染液的利用率。
27.4)本发明中的苏木素染液对温度的敏感性大大下降，不需要因温度变化而摸索调整染色时间，提高了工作效率。
28.5)本发明中的苏木素染液无氧化膜形成，可使用较长时间，同时细胞核染色质着染较深而细致，增强了染色效果。
具体实施方式
29.下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
30.实施例1、本实施例公开了一种提高染色效率的苏木素染液，所述苏木素染液的成分包括苏木素、无水乙醇、硫酸铝、蒸馏水、碘酸钾、丙三醇、柠檬酸、乙二醇、乙二胺四乙酸二钠、磷钨酸；各成分的质量百分比为：苏木素0.2％、无水乙醇17％、硫酸铝1％、蒸馏水65.69％、碘酸钾0.01％、丙三醇5％、柠檬酸0.2％、乙二醇7.9％、乙二胺四乙酸二钠2.5％、磷钨酸0.5％。
31.上述苏木素染液的制备方法，包括以下步骤：
32.s1、按计量称取苏木素、无水乙醇、硫酸铝、蒸馏水、碘酸钾、丙三醇、柠檬酸、乙二醇、乙二胺四乙酸二钠、磷钨酸；
33.s2、在烧杯中依次加入无水乙醇、乙二醇、苏木素，以200r/min的转速进行搅拌，直至苏木素完全溶解，得到苏木素溶液；
34.s3、在容器中依次加入蒸馏水、硫酸铝，缓慢搅拌直至硫酸铝完全溶解，然后加入
乙二胺四乙酸二钠，搅拌均匀后得到硫酸铝溶液；
35.s4、将硫酸铝溶液加入到苏木素溶液中，搅拌均匀后依次加入碘酸钾、丙三醇、磷钨酸，充分混匀后得到混合溶液，在混合溶液中加入柠檬酸，将ph值调节为2；
36.s5、静置12小时后，使用1000目的过滤网对混合溶液进行过滤，得到的滤液即为苏木素染液。
37.实施例2、本实施例公开了一种提高染色效率的苏木素染液，所述苏木素染液的成分包括苏木素、无水乙醇、硫酸铝、蒸馏水、碘酸钠、丙三醇、冰醋酸、乙二醇、乙二胺四乙酸二钠、磷钨酸；各成分的质量百分比为：苏木素0.2％、无水乙醇16.79％、硫酸铝1％、蒸馏水65％、碘酸钠0.01％、丙三醇5％、冰醋酸0.2％、乙二醇7.8％、乙二胺四乙酸二钠3％、磷钨酸1％。
38.上述苏木素染液的制备方法，包括以下步骤：
39.s1、按计量称取苏木素、无水乙醇、硫酸铝、蒸馏水、碘酸钠、丙三醇、冰醋酸、乙二醇、乙二胺四乙酸二钠、磷钨酸；
40.s2、在烧杯中依次加入无水乙醇、乙二醇、苏木素，以250r/min的转速进行搅拌，直至苏木素完全溶解，得到苏木素溶液；
41.s3、在容器中依次加入蒸馏水、硫酸铝，缓慢搅拌直至硫酸铝完全溶解，然后加入乙二胺四乙酸二钠，搅拌均匀后得到硫酸铝溶液；
42.s4、将硫酸铝溶液加入到苏木素溶液中，搅拌均匀后依次加入碘酸钠、丙三醇、磷钨酸，充分混匀后得到混合溶液，在混合溶液中加入冰醋酸，将ph值调节为3；
43.s5、静置18小时后，使用1500目的过滤网对混合溶液进行过滤，得到的滤液即为苏木素染液。
44.实施例3、本实施例公开了一种提高染色效率的苏木素染液，所述苏木素染液的成分包括苏木素、无水乙醇、硫酸铝、蒸馏水、碘酸钾、丙三醇、酒石酸、乙二醇、乙二胺四乙酸二钠、磷钨酸；各成分的质量百分比为：苏木素0.2％、无水乙醇15.68％、硫酸铝1％、蒸馏水65.3％、碘酸钾0.02％、丙三醇5％、酒石酸0.2％、乙二醇7.9％、乙二胺四乙酸二钠3.5％、磷钨酸1.2％。
45.上述苏木素染液的制备方法，包括以下步骤：
46.s1、按计量称取苏木素、无水乙醇、硫酸铝、蒸馏水、碘酸钾、丙三醇、酒石酸、乙二醇、乙二胺四乙酸二钠、磷钨酸；
47.s2、在烧杯中依次加入无水乙醇、乙二醇、苏木素，以300r/min的转速进行搅拌，直至苏木素完全溶解，得到苏木素溶液；
48.s3、在容器中依次加入蒸馏水、硫酸铝，缓慢搅拌直至硫酸铝完全溶解，然后加入乙二胺四乙酸二钠，搅拌均匀后得到硫酸铝溶液；
49.s4、将硫酸铝溶液加入到苏木素溶液中，搅拌均匀后依次加入碘酸钾、丙三醇、磷钨酸，充分混匀后得到混合溶液，在混合溶液中加入酒石酸，将ph值调节为3.5；
50.s5、静置24小时后，使用2000目的过滤网对混合溶液进行过滤，得到的滤液即为苏木素染液。
51.本发明中的成分分析：
52.苏木素为天然的染料，它本身不是一种染料(只有助色团羟基)，没有染色性能，需
要经过氧化后成为氧化苏木精(苏木红)后，既有助色团羟基，又有发色团醌式，才有染色能力。
53.无水乙醇、乙二醇主要作为溶剂，用于溶解苏木素，并可抑制霉菌生长。
54.硫酸铝主要作为媒染剂，铝离子与苏木红螯合形成蓝色沉淀(带正电荷)，蓝色沉淀与细胞核核酸的磷酸根(带负电荷)极性结合，使得细胞核最终着色。
55.碘酸钾或碘酸钠主要作为氧化剂，可以人工加速苏木素的氧化。
56.丙三醇主要作为稳定剂，避免了苏木素出现过度氧化的状况。
57.柠檬酸或冰醋酸用于平衡氧化剂的氧化作用，增加细胞核的选择性染色效果。
58.蒸馏水主要作为溶剂使用，用于溶解硫酸铝。
59.本发明具有以下有益效果：
60.1、本发明中的苏木素染液通过调节成分中金属盐的比例，在使用过程中无金属膜产生，大大减少了技术人员的工作量，提高了染色效率。
61.2、本发明中的苏木素染液配合稳定剂使用，从而使得苏木素染液对细胞核的选择性更强，染色效果更清晰鲜明，可保存时间也更长，经老化测试(60摄氏度，24h*7)，可满足长时间的保存需求。
62.3、本发明中的苏木素染液每500ml至少可以染3000张片子，有效提高了苏木素染液的利用率。
63.4、本发明中的苏木素染液对温度的敏感性大大下降，不需要因温度变化而摸索调整染色时间，提高了工作效率。
64.5、本发明中的苏木素染液无氧化膜形成，可使用较长时间，同时细胞核染色质着染较深而细致，增强了染色效果。