饲料添加剂、制备方法及其在预防畜禽肠道感染中的应用

1.本发明涉及饲料添加剂，尤其涉及一种饲料添加剂、制备方法及其在预防畜禽肠道感染中的应用。


背景技术：

2.植物精油香芹酚、肉桂醛、百里香酚和丁香酚对常见动物消化道内的大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等有害菌具有较好的抑菌效果。植物精油抗微生物的作用机制包括：萜类化合物和酚类物质对细胞膜破坏作用；酚类和黄酮类化合物的金属螯合作用；香豆素和生物碱对遗传物质的作用等。植物精油的促消化作用与刺激消化液的分泌，增强肠道消化酶的活性有关。研究显示，植物精油可以提高胰蛋白酶、淀粉酶活性，减少病原微生物对肠壁的黏附作用。
3.专利号cn201911307085.7一种具有防止腹泻的饲料添加剂及其制备方法，采用百里香酚、香芹酚、肉桂醛、丁香酚、柠檬烯、甜橙油、丁香油、肉桂油、丁酸组分中的固体原料和溶剂在恒温下搅拌混合，充分溶解后冷却至室温，其次，将物料混合、混合吸附，再添加发酵菌种进行混合发酵，而后烘干，最后进行控温提取。可以提高免疫力，同时可以防止动物腹泻。
4.专利号cn201810540190.4一种提高仔猪肠道健康的肠道营养包及应用，通过复合益生菌，抗菌肽，植物精油改善肠道微生物菌群平衡，改善小肠吸收功能弱，解决免疫力差等问题；通过谷氨酰胺二肽，胆汁酸的使用降低肠道的损伤，加速肠道的修复。从而提高肠道健康，增强免疫力。但现有技术中缺少对于畜禽肠道感染的预防功效，因此，关于畜禽肠道的饲料添加剂有待进一步的提高。


技术实现要素：

5.为了解决上述现有技术存在的饲料中缺少饲料添加剂预防畜禽肠道感染的功效，本发明提出了一种饲料添加剂、制备方法及其在预防畜禽肠道感染中的应用。
6.本发明的技术方案是这样实现的：一种饲料添加剂，其特征在于，包括香芹酚、百里香酚、肉桂醛、耐受枯草芽孢杆菌sx3411，该耐受枯草芽孢杆菌sx3411经植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛的驯化处理。
7.在本发明的这种中饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：驯化枯草芽孢杆菌sx3411获得耐受枯草芽孢杆菌sx3411；耐受枯草芽孢杆菌sx3411经发酵处理后与植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛混配，获得饲料添加剂。
8.在本发明的这种中饲料添加剂的制备方法，在植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛混合液中培养枯草芽孢杆菌sx3411，逐步增加植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛混合液的总浓度至浓度阈值，获得耐受枯草芽孢杆菌sx3411菌株。
9.在本发明的这种中饲料添加剂的制备方法，混配植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛后微囊化处理，发酵培养耐受枯草芽孢杆菌sx3411后经高温、喷雾以及微囊化处理，混
配微囊化处理的植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛复合植物精油和耐受枯草芽孢杆菌sx3411，获得饲料添加剂。
10.在本发明的这种中饲料添加剂在预防畜禽肠道感染中的应用，将该饲料添加剂用于预防畜禽肠道感染。
11.实施本发明的这种饲料添加剂、制备方法及其在预防畜禽肠道感染中的应用，具有以下有益效果：通过对耐受植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛的驯化处理，获得耐受枯草芽孢杆菌sx3411。对植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛以及耐受枯草芽孢杆菌sx3411进行微囊化处理，再将耐受枯草芽孢杆菌sx3411与植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛进行混配应用于家畜家禽的饲料中，达到预防胃肠道中病原菌感染的作用，同时提高免疫力的效果。
具体实施方式
12.下面将对本发明实施例中的技术方案进行精楚、完整地描述。
13.本发明的这种饲料添加剂、制备方法及其在预防畜禽肠道感染中的应用。这种饲料添加剂中包括产羊毛硫细菌素subtilomycin的益生菌枯草芽孢杆菌sx3411（菌种保藏号cgmccno.14396）与植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛。枯草芽孢杆菌sx3411可以作为动物自然生命周期的一部分在胃肠道定居，其中，可以产生多种抗菌物质，并使得细菌不容易产生抗药性。香芹酚（carbvacrol）具有抗感染、提高免疫力和杀死肠道寄生虫的作用。百里香酚具有杀菌、防腐等活性。肉桂醛具有抗溃疡和加强胃肠道运动作用，对肠胃有缓和的刺激作用，增强消化功能，解除胃肠平滑肌痉挛，缓解肠道痉挛性疼痛。肉桂醛还有抗病毒和抗癌作用等。
14.实施例1耐受枯草芽孢杆菌sx3411的制备方法，包括以下步骤；步骤1，将植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛分别溶解在40%的酒精溶液中，使每个样品的含量为20mg/ml做为母液，并将这三种植物精油按1:1:1进行混配，即得到三种植物精油的混配液。
15.步骤2，每支试管中加入3.5ml的lb培养液，通过加入lb培养液使得菌种成倍扩增。再而进行灭菌，灭菌后按一定比例加入三种植物精油的混配液和50μl枯草芽孢杆菌sx3411，该浓度用od
600
表示，此时od
600
=1。试管中加入不同浓度的植物精油和枯草芽孢杆菌sx3411后，最终体积为4ml。该步骤进行3-5个重复操作，以此达到最佳效果。
16.步骤3，将步骤2中加入的三种植物精油的混配液和枯草芽孢杆菌sx3411在各试管温度为37℃，转速180rpm摇菌培养4小时。
17.步骤4，培养结束后测每支试管的od
600
，结果如下表：
步骤5，枯草芽孢杆菌sx3411在应用之前必须进行耐受植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛的驯化处理。根据步骤4中植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛抑菌浓度的临界值，以植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛比例为1:1:1，总浓度为144-288μg/ml作为枯草芽孢杆菌sx3411进行驯化的初始浓度范围。第一次驯化时培养基中植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛比例1:1:1，总浓度具体为160μg/ml，获得第一次驯化培养的枯草芽孢杆菌sx3411菌种。
18.步骤6，枯草芽孢杆菌sx3411进行分阶段驯化处理，以适应一定浓度的植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛对枯草芽孢杆菌sx3411的共同影响。将枯草芽孢杆菌sx3411在一定浓度的植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛混合液中进行培养，而后逐渐增加植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛混合液的总浓度，直至植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛混合液的总浓度达到一个极限。如此多次驯化培养以后获得复合耐受香芹酚、百里香酚和肉桂醛共同影响的枯草芽孢杆菌sx3411菌株，文中简称为耐受枯草芽孢杆菌sx3411。按照前述步骤进行第二次和第三次的驯化培养，最终百里香酚浓度达到288μg/ml时获得的枯草芽孢杆菌sx3411菌种做为最终的百里香酚耐受菌而被应用。
19.第一次的驯化时培养基中植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛比例1:1:1，其总浓度为160μg/ml，在37℃振荡培养48h，而后在37℃振荡培养48h进行第二次驯化，最后进行第三次驯化培养。其中，驯化过程可以提高其耐受胃酸环境的能力，保证足量活菌进入肠道发挥益生作用。经过驯化后获得的菌株，其活菌数对比未受驯化的原始菌株存活率要高出36％至44％，生长的周期也明显延长。
20.实施例2饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤；步骤1，将植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛按1:1:1进行混配，混配后进行微囊
化处理。
21.步骤2，将耐受枯草芽孢杆菌sx3411发酵培养，耐受枯草芽孢杆菌sx3411的发酵培养基为蛋白胨10.0g/l，酵母提取物5.0g/l，nacl5.0g/l，葡萄糖11.4g/l，znso40.00056g/l，cacl20.0595g/l，初始ph8.25，加水定容至1l，121℃灭菌20min。培养条件为转速170r/min，温度30.0℃，培养24h。
22.步骤3，将步骤2中获得的耐受枯草芽孢杆菌sx3411发酵液进行高温处理，以获得较多的芽孢，而后喷雾干燥处理，并进行微囊化处理。高温的处理温度50-70℃，时间10min。将经高温处理含较多耐受枯草芽孢杆菌sx3411的芽孢以及耐受枯草芽孢杆菌sx3411发酵产物和菌体再经过低温真空干燥处理或者进行喷雾干燥处理，而后在一定比例混配以后进行微囊化处理。微囊化处理可以掩盖不良气味及口味，更好运用在畜禽上，同时，通过微囊化处理可以提高药物的稳定性，并防止药物在胃内失活以及减少对胃的刺激性。进行微囊化处理时，培养时间应为15h-25h为宜，培养的温度应控制在35
°‑
38
°
之内，ph不同发酵生成的量则不同，在进行微囊化处理时ph值为6.0-8.0之间。
23.步骤4，将微囊化处理的植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛和耐受枯草芽孢杆菌sx3411加入饲料中，其中每1000kg饲料中加入植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛的量为400-600g，加入耐受枯草芽孢杆菌sx3411的量为1000g。微囊化处理得到的耐受枯草芽孢杆菌sx3411和微囊化处理的植物精油香芹酚、百里香酚和肉桂醛混配物按一定比例再行混配可直接作为饲料添加剂应用于饲料，并由此达到预防畜禽胃肠道感染病原菌，同时有助于促进肠道的蠕动及其消化。
24.以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改，等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。