一种厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体的检测方法与流程

1.本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体检验方法。


背景技术：

2.厄贝沙坦（irbesartan），化学名称为：3-（（2
’-
(1h-四氮唑-5-基)-[1,1
’-
联苯]-4-基）甲基）-2-丁基-1,3-二氮杂螺环[4,4]壬-1-烯-4-酮，结构式为：，是一种血管紧张素ii受体拮抗剂，由赛诺菲研发，最早于1997年在英国上市。
[0003]
目前，厄贝沙坦的制备方法主要是是以2-丁基-1,3-二氮杂螺环[4,4]壬-1-烯-4-酮盐酸盐与溴联苯在相催化剂作用下，进行烃化反应，制得联苯咪唑啉，联苯咪唑啉再与叠氮化钠反应生成厄贝沙坦，在反应过程中，可能会生成联苯咪唑啉同分异构体。
[0004]
联苯咪唑啉同分异构体化学名为：2-氰基-4
’-
(2-丁基-4-酮-1,3-二氮杂螺[4.4]壬-1-烯-3-基)甲基-1,1
’-
联苯，结构式为：，是合成厄贝沙坦过程中可能存在的杂质。
[0005]
目前，少有报道厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体的检测方法，仅在专利文献cn111175385a中公开了厄贝沙坦同分异构体的检测方法，该方法检测厄贝沙坦同分异构体
使用的流动相的比例为：磷酸溶液：乙腈=65：35（v/v），经试验，该流动相不能检测联苯咪唑啉同分异构体。本发明首次公开了厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体的检测方法，为解决厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体的含量，从而有效保障用药安全，便于厄贝沙坦原料药的质量控制。


技术实现要素：

[0006]
本发明提供一种厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体的检测方法，为解决厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体的含量，从而有效保障用药安全，便于厄贝沙坦原料药的质量控制，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于厄贝沙坦原料药的质量控制。
[0007]
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体检验方法，所述检测方法包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、参比溶液和测试溶液。
[0008]
（2）测定方法：采用液相色谱法测定厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体的含量，待系统稳定后，分别进空白溶液，参比溶液和测试溶液，记录色谱图；色谱条件如下: 色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速：1.0ml/min；检测波长：220nm；进样量：10μl；柱温：25℃；运行时间：15min，流动相以磷酸：乙腈体系为流动相。
[0009]
进一步的，所述空白溶液为甲醇；所述流动相为：以磷酸溶液（取85%磷酸5.5ml，加水950ml，用三乙胺调节ph值至3.2）：乙腈=55：45（v/v）；所述参比溶液：取适量联苯咪唑林同分异构体对照品置于容量瓶中，加入适量空白液溶解并稀释至刻度，摇匀；所述测试溶液：取适量厄贝沙坦供试品，置于容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0010]
所述色谱柱为thermoacclaim
tm 120 c18，5μm，4.6
×
150mm。
[0011]
更优选的，本发明所述的测定方法，包括以下步骤：（1）配制溶液：空白溶液：甲醇；参比溶液：取联苯咪唑林同分异构体对照品约10mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取1.0ml，置100ml容量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1μg/ml）测试溶液：取厄贝沙坦供试品约25mg，精密称定，置25ml容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。（浓度：1mg/ml）（2）色谱条件：仪器：高效液相色谱仪配置紫外检测器、电子分析天平，ph计色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；（如：thermoacclaim
tm 120 c18，5μm，4.6
×
150mm或效能相当的色谱柱）；
流速：1.0ml/min；
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检测波长：220nm；进样量：10μl；
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柱温：25℃；运行时间：15min；流动相：以磷酸溶液（取85%磷酸5.5ml，加水950ml，用三乙胺调节ph值至3.2）：乙腈=55：45（v/v）。
[0012]
（3） 测定方法：待系统稳定后，进空白溶液1针，参比溶液5针，测试溶液1针，记录色谱图。
[0013]
结果%=(ru/rs)
ꢀ×
(cs/cu)
ꢀ×
100其中：ru：测试溶液图谱中联苯咪唑林同分异构体峰面积；rs：5针参比溶液图谱中联苯咪唑林同分异构体的平均峰面积； cs：参比溶液中联苯咪唑林同分异构体的浓度(mg/ml)；cu：测试溶液的浓度(mg/ml)。。
[0014]
限度：所述的厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体的检测方法还包括在检测之前的方法验证，该方法验证为按照正式检测的色谱条件，测定结果为：
本发明首次公开了厄贝沙坦中联苯咪唑啉的检测方法，本发明为解决厄贝沙坦中联苯咪唑啉的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测厄贝沙坦中联苯咪唑啉的含量，从而有效保障用药安全。
附图说明
[0015]
图1为使用cn111175385a检测联苯咪唑啉空白溶液图谱图2为使用cn111175385a检测联苯咪唑啉参比溶液图谱图3为使用cn111175385a检测联苯咪唑啉测试溶液图谱图4为厄贝沙坦中联苯咪唑啉空白溶液图谱图5为厄贝沙坦中联苯咪唑啉参比溶液图谱图6为厄贝沙坦中联苯咪唑啉测试溶液图谱
具体实施方式
[0016]
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
[0017]
实施例1：使用cn111175385a检测厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体（1）配制溶液：空白溶液：甲醇；联苯咪唑啉同分异构体储备液：取联苯咪唑啉同分异构体对照品约10mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，精密移取5.0ml，置100ml容量瓶中，加空白溶液摇匀；（浓度：5μg/ml）对照品溶液：精密移取联苯咪唑啉同分异构体储备液5.0ml，置50ml容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。（浓度：0.5μg/ml）供试品溶液：取厄贝沙坦供试品约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。（浓度：0.5mg/ml）；（2）色谱条件：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；（如：thermoacclaim
tm 120 c18，5μm，4.6
×
150mm或效能相当的色谱柱）；流速：1.0ml/min；
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检测波长：220nm；进样量：10μl；
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柱温：25℃；运行时间：20min；流动相：以磷酸溶液（取85%磷酸5.5ml，加水950ml，用三乙胺调节ph值至3.2）：乙腈=65：45（v/v）。（3）测定方法：待系统稳定后，进空白溶液1针，对照品溶液5针，供试品溶液1针，记录色谱图。
[0018]
结果按外标法计算。
[0019]
经试验比对，使用cn111175385a检测方法检测厄贝沙坦中的联苯咪唑啉同分异构体，该方法不能将厄贝沙坦样品中联苯咪唑啉同分异构体分离开，该方法并不能检测厄贝沙坦中联苯咪唑啉同分异构体。
[0020]
实施例2：（2）配制溶液：空白溶液：甲醇；联苯咪唑啉同分异构体储备液：取联苯咪唑啉同分异构体对照品约10mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；（浓度：100μg/ml）参比溶液：取联苯咪唑林同分异构体对照品约10mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取1.0ml，置100ml容量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1μg/ml）测试溶液：取厄贝沙坦供试品约25mg，精密称定，置25ml容量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。（浓度：1mg/ml）选择性溶液：取厄贝沙坦供试品约100mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量空白溶液溶解，精密移取联苯咪唑啉同分异构体储备液1.0ml置该瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：厄贝沙坦：1mg/ml；联苯咪唑啉同分异构体：1μg/ml）测试溶液a：精密移取上述联苯咪唑啉同分异构体储备溶液8.0ml，置25ml容量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。
[0021]
loq溶液：根据测试溶液a所得图谱的s/n值，调整稀释比例至联苯咪唑啉同分异构体 s/n≈10；同法配制6份该溶液。
[0022]
lod溶液：精密移取loq溶液3.0ml置10ml容量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。
[0023]
（2） 色谱条件：仪器：高效液相色谱仪配置紫外检测器、电子分析天平，ph计色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；（如：thermoacclaimtm 120 c18，5μm，4.6
×
150mm或效能相当的色谱柱）；流速：1.0ml/min；
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检测波长：220nm；进样量：10μl；
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柱温：25℃；运行时间：15min；流动相：以磷酸溶液（取85%磷酸5.5ml，加水950ml，用三乙胺调节ph值至3.2）：乙腈=55：45（v/v）。（3） 测定方法：待系统稳定后，进空白溶液1针，参比溶液5针，测试溶液1针，记录色谱图。
[0024]
结果%=(ru/rs)
ꢀ×
(cs/cu)
ꢀ×
100其中：ru：测试溶液图谱中联苯咪唑林同分异构体峰面积；rs：5针参比溶液图谱中联苯咪唑林同分异构体的平均峰面积； cs：参比溶液中联苯咪唑林同分异构体的浓度(mg/ml)； cu：测试溶液的浓度(mg/ml)。
[0025]
限度：实施例3：系统适用性系统适用性是通过测定5针参比溶液中联苯咪唑林同分异构体峰面积的rsd而实现的；要求5针参比溶液中联苯咪唑林同分异构体峰面积的rsd应不大于2.0%。
[0026]
实施例4：专属性专属性是通过测定空白溶液对联苯咪唑林同分异构体检测的干扰；选择性溶液中选择性溶液中联苯咪唑林同分异构体与相邻色谱峰间的分离度而实现的；要求空白溶液对联苯
咪唑林同分异构体检测应无干扰；选择性溶液中联苯咪唑林同分异构体与相邻色谱峰间的分离度应不小于1.5；加样前后，联苯咪唑林同分异构体的回收率应在90.0%~110.0%之间。
[0027]
实施例5：选择性选择性目的是为考察在加样前后，对联苯咪唑林同分异构体的检测是否产生影响，要求加样前后，联苯咪唑林同分异构体的回收率应在90.0%～110.0%之间。
[0028]
备注：带入峰面积=测试溶液峰面积
×
供试品取样量
÷
测试溶液中供试品取样量实施例5：重复性重复性是通过测定6份加标测试溶液中联苯咪唑林同分异构体测定结果的rsd而实现的，要求6份加标测试溶液中联苯咪唑林同分异构体测定结果的rsd应不大于10.0%。
[0029]
实施例6：定量限和检测限
实施例7：耐用性考察参比溶液和测试溶液分别在室温下放置0天、1天、2天后进样，检测结果随时间变化的规律，为检测时参比溶液和测试溶液的放置时间提供依据。与0天相比较，参比溶液在室温下放置2天，联苯咪唑林同分异构体的回收率应在90.0%～110.0%之间，测试溶液在室温下放置2天，联苯咪唑林同分异构体测定结果的变化值在限度的20%以内，则溶液稳定。