TRPV4激动剂在制备治疗和/或预防男性不育症的药物中的应用

trpv4激动剂在制备治疗和/或预防男性不育症的药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及生物技术领域，特别涉及trpv激动剂在制备治疗和/或预防男性不育症的药物中的应用。


背景技术：

2.目前，全球约有15％的育龄夫妇结婚1年内不能怀孕而需干预性治疗，其中男性因素约占50％。不育男性精液检查主要表现为少精子症、弱精子症或少弱精子症。男性的精液质量下降可以导致暂时或永久性的不育，或者胎儿质量下降，给个人造成巨大的精神压力，给家庭带来极大的痛苦，甚至酿成生活悲剧，成为必须重视的社会问题。在诊疗过程中，大部分患者并不能找到明确的病因，目前尚缺乏特效治疗药物。
3.糖尿病是一种严重影响人民健康的全球性公共卫生问题，并且其患病率在全球范围内呈上升趋势预测到2040年全球范围内的糖尿病患者将达6.42亿，其中中国占1.51亿。ⅰ型和ⅱ型糖尿病都可能出现少精或弱精，引起男性不育症。
4.gsk1016790a属于trpv4激动剂，其化学结构如下所示，分子式为 c
28h32cl2
n4o6s2；分子量为655.61；cas号为942206-85-1，为白色粉末。其化学式为：
5.目前，未见报道gsk1016790a治疗和缓解糖尿病所致的少精、精子活率下降和精子畸形，并据此对男性不育症治疗方面的相关研究。


技术实现要素：

6.有鉴于此，本发明提供了trpv4激动剂在制备治疗和/或预防男性不育症的药物中的应用。
7.本发明首次通过药理实验证明，trpv4激动剂gsk1016790a能够有效缓解链脲佐菌素(streptozotocin，stz)所致的少精、精子活率下降和精子畸形，因此其具有较高的临床应用价值和开发前景。通过精子计数及畸形分析， trpv4激动剂gsk1016790a能够明显升高stz小鼠的精子数量，增强精子活率，减少精子畸形率；通过观察睾丸形态，trpv4激动剂gsk1016790a 能够改善stz小鼠睾丸的损伤；通过检测血清睾酮含量，trpv4激动剂 gsk1016790a能够增加stz小鼠血清睾酮含量；上述结果表明，trpv4激动剂gsk1016790a对链脲佐菌素(streptozotocin，stz)所致糖尿病小鼠生精障碍具有明显的保护作用。
8.基于以上结果，本发明提供了trpv4激动剂可用于预防和/或治疗制备治疗男性不育症的药物中的应用。
9.一些实施方案中，所述的男性不育症是链脲佐菌素所致的少精或弱精引起的男性不育症。
10.一些实施方案中，trpv4激动剂能够提高精子数量，增强精子活率，减少精子畸形率。
11.一些实施方案中，trpv4激动剂能够增加血清睾酮含量。
12.本发明中，所述trpv4激动剂为gsk1016790a。
13.一些实施方案中，所述trpv4激动剂为gsk1016790a，给药浓度为 0.125mg/kg。
14.一些实施方案中，所述gsk1016790a的给药方式为全身给药。
15.本发明还提供一种预防、改善和/或治疗男性不育症的药物，包括trpv4 激动剂和药学上可接受的载体。
16.其中，所述trpv4激动剂为gsk1016790a，结构如式i所示：
[0017][0018]
本发明提供了trpv4激动剂在制备治疗和/或预防男性不育症的药物中的应用。通过药理实验证明，trpv4激动剂gsk1016790a能够有效缓解链脲佐菌素(streptozotocin，stz)所致的少精、精子活率下降和精子畸形，因此其具有较高的临床应用价值和开发前景。通过精子计数及畸形分析，trpv4 激动剂gsk1016790a能够明显升高stz小鼠的精子数量，增强精子活率，减少精子畸形率；通过观察睾丸形态，trpv4激动剂gsk1016790a能够改善stz小鼠睾丸的损伤；通过检测血清睾酮含量，trpv4激动剂 gsk1016790a能够增加stz小鼠血清睾酮含量；上述结果表明，trpv4激动剂gsk1016790a对链脲佐菌素(streptozotocin，stz)所致糖尿病小鼠生精障碍具有明显的保护作用。
附图说明
[0019]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0020]
图1为本发明实施例2中trpv4激动剂gsk1016790a对链脲佐菌素 (streptozotocin，stz)所致糖尿病小鼠睾丸形态的影响；
[0021]
图2为本发明实施例提供的实施例2trpv4激动剂gsk1016790a对链脲佐菌素(streptozotocin，stz)所致糖尿病小鼠血清睾酮含量的影响。
具体实施方式
[0022]
本发明公开了trpv4激动剂在制备治疗和/或预防男性不育症的药物中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技
术。
[0023]
本发明所用原料及试剂均可由市场购得。
[0024]
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
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实施例1考察trpv4激动剂gsk1016790a对stz诱导的糖尿病小鼠生精功能的影响
[0026]
动物：36只雄性icr雄性小鼠，3月龄，体重30-40g左右。动物饲养在室温(22
±
2)℃，湿度(45％～65％)和明暗交替(12h:12h)的环境中，自由摄食和饮水。动物分组与处理小鼠按随机数字表法分为3组：溶媒对照组(ns dmso，n＝12)、糖尿病生精障碍模型组(stz dmso，n＝12)、gsk1016790a 组(stz gsk，n＝12)，小鼠每日禁食6h(8:30-14:30)后给予腹腔注射链脲佐菌素(stz，55mg/kg)，连续五天，建立糖尿病小鼠模型。ns dmso 组小鼠按同样方法注射等体积的生理盐水。gsk1016790a(0.125mg/kg)或其溶媒dmso于stz末次注射后第50-56天即第8周连续腹腔注射7天。
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各组小鼠末次gsk1016790a注射后取材，进行精子计数、活力分析和畸形率统计：精子数量及活力检测取小鼠左侧附睾尾，去除脂肪组织，称重，置于含有1ml 37℃生理盐水的ep管中，剪碎附睾于37℃水浴箱中孵育30min，使附睾尾中精子充分游出。将血球计数板提前置于37℃温箱中预热，吸取ep 管中混匀悬液10μl，稀释至含有990μl生理盐水的ep中，吹打均匀，将稀释后的精液加于血球计数板的计数池中，在400
×
倍光学显微镜下进行精子计数；取所制的精子悬液一滴于载玻片上，其上覆盖玻片，在高倍镜下计数5个视野精子数(至少评估200个精子)，另取5微升精子悬液，与伊红混匀制成精子涂片，光镜下观察，死精子着色呈粉色，计数100个精子，计算精子活率。将精子与伊红溶液混合后涂在载玻片上自然晾干，在镜下观察两百个精子并计数畸形率。为减小实验误差，精子计数及活力检测由1人操作完成。结果见表1。
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表1
[0029][0030]
注：与ns组比较，
*
p《0.05，
**
p《0.01；
#
与stz组比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01
[0031]
结果：trpv4激动剂gsk1016790a能够有效缓解链脲佐菌素 (streptozotocin，stz)所致的少精、精子活率下降和精子畸形。
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实例2睾丸组织形态学检测
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取睾丸放入4％多聚甲醛溶液固定24h以上。采用梯度乙醇脱水、二甲苯透明，浸入蜡中准备包埋。将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋处理，于-20℃冰箱冷却，蜡块凝固后切片，片厚5μm。切片入苏木紫染色3～8min，流水冲洗，1％盐酸乙醇分化数秒，流水冲洗，0.6％氨水返蓝，流水冲洗。切片放入伊红染液中染色1～3min。脱水封片，置于显微镜下观察。结果如图1所示：
[0034]
小鼠睾丸组织形态学结果：ns组小鼠睾丸生精小管中生精细胞排列整齐，各级生
精细胞层次分明，生精小管管腔中见大量精子。stz组小鼠睾丸组织形态学可见生精小管中精子数目明显减少，管壁生精细胞脱落，生精细胞排列不齐，生精细胞阻滞，未能发育为正常精子。gsk1016790a处理组小鼠睾丸生精小管细胞较stz组增多，排列基本整齐，层次清晰，管腔内可见成熟精子。
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实例3 elisa法检测血清睾酮水平
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临床上常常检测不育症患者的生殖激素水平，用来作为治疗不育症的重要参考，其中最常用的是睾酮(testosterone，t)。各组动物取血，采用elisa 法检测血清睾酮水平。结果如图2所示。
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结果：与ns组小鼠相比，stz组小鼠血清睾酮含量显著降低， gsk1016790a处理组小鼠血清睾酮含量恢复至对照组水平。表明， gsk1016790a能够有效地增加stz小鼠的血浆睾酮含量。
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上述结果表明，trpv4激动剂gsk1016790a对链脲佐菌素 (streptozotocin，stz)所致糖尿病小鼠生精障碍具有明显的保护作用。
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以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。