一种防治高原低氧所致雌性生理周期紊乱的组合物及应用

1.本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于防治高原低氧所致雌性生理周期紊乱的组合物。


背景技术：

2.目前，全世界居住在高原高山地区人口约5亿多，而我国高原面积辽阔，海拔3000m以上的地区约占全国总面积的1/6，而居住在青藏高原的人口约1000万，是世界上居住高原高山地区人口最多的国家。高原是一个特殊环境，有很多对人体不利的因素，如低气压、低氧分压、寒冷、干燥和阳光辐射强等，其中低氧是最大的威胁，海拔4600米高原吸入气氧分压几乎只到海平面地区的一半，高原特有的自然环境因素对机体健康的影响凸显，相关医学保障的问题亟待解决。高原环境可对人全身各个系统(神经内分泌免疫、循环、呼吸、消化、泌尿生殖、能量代谢)的生理功能造成明显影响。研究发现高原低氧可导致女性激素分泌功能减弱，女性第二性征推迟，女性激素分泌紊乱，雌激素与促性腺释放激素水平下降，卵泡发育迟缓，卵子成熟率降低，月经初潮推迟，月经周期紊乱(痛经、闭经和月经周期提前)，难以怀孕和孕期胎儿发育不良等，有的可能造成长期不孕不育。前期调研数据也显示，在高原低氧环境下，紧急入藏的女性出现了显著的月经失调。而且高原现场问卷调查也显示平原移居高原(海拔4000米)初期女性月经紊乱率高达70.40％。因此，寻求干预防治高原低氧雌性生理周期紊乱的干预措施势在必行。
3.前期研究发现补气养血的中药有效成分黄芪、茯苓、首乌藤、丹参、当归、党参组方具有良好的抗缺氧抗疲劳功效。而抗缺氧是否可以改善高原低氧雌性生理周期紊乱仍未见报道。5-羟色胺最早是从血清中发现的，又名血清素，5-羟基色氨酸是血清素的前驱物质，在动物和人体实验中，5-羟基色氨酸可以促进儿茶酚胺的新陈代谢，特别是对多巴胺和去甲肾上腺素有促进作用，已有研究表明5-羟基色氨酸具有调节情绪及睡眠的作用，此外，同时前期实验研究发现高原低氧暴露雌性大鼠生理周期紊乱伴随黄体生成素分泌异常，5-羟基色氨酸对改善高原低氧雌性生理周期紊乱是否有作用仍未见报道。


技术实现要素：

4.本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种防治高原低氧所致雌性生理周期紊乱的组合物。
5.本发明的第二个目的是提供一种防治高原低氧所致雌性生理周期紊乱的组合物的应用。
6.本发明的技术方案概述如下：
7.一种防治高原低氧所致雌性生理周期紊乱的组合物，按质量份包括：24份黄芪提取物、16份茯苓提取物、18份首乌藤提取物、21份党参提取物、8份当归提取物、11份丹参提取物和2份5-羟色氨酸。
8.上述一种防治高原低氧所致雌性生理周期紊乱的组合物在制备防治高原低氧雌
性生理周期紊乱保健品或药物中的应用。
9.实验证明，本发明的组合物可以显著提高雌性小鼠常压密闭缺氧存活时间，并且可以显著改善高原低氧暴露所致的雌性生理周期紊乱。
附图说明
10.图1为本发明组合物对雌性小鼠摄食量的影响。
11.图2为本发明组合物对雌性小鼠体重的影响。
12.图3为本发明组合物对雌性小鼠常压密闭缺氧存活时间的影响(*p《0.05与空白对照组相比较)。
13.图4为本发明组合物对低氧暴露雌性大鼠摄食量的影响(*p《0.05与空白对照组相比较)。
14.图5为本发明组合物对低氧暴露雌性大鼠体重的影响(*p《0.05与空白对照组相比较)。
15.图6为本发明组合物对低氧暴露雌性大鼠生理周期的影响(*p《0.05与空白对照组相比较，
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p《0.05与低氧对照组相比较)。
具体实施方式
16.黄芪提取物、茯苓提取物、党参提取物、首乌藤提取物、丹参提取物、当归提取物购自西安小草植物科技有限责任公司。
17.5-羟色氨酸购自swanson。
18.上述各原料的来源并不对本发明有任何的限制。
19.以下通过实施例对本发明进一步说明。
20.以下实施例中的方法中如无特别说明，所有的方法均为常规方法，所用的生化试剂均为市售试剂。
21.实施例1
22.一种防治高原低氧所致雌性生理周期紊乱的组合物，按质量份包括：24份黄芪提取物、16份茯苓提取物、18份首乌藤提取物、21份党参提取物、8份当归提取物、11份丹参提取物和2份5-羟色氨酸。
23.组合物的制备：将上述各个原料混匀。
24.实施例2
25.实施例1的组合物对雌性小鼠常压密闭缺氧存活时间的影响
26.1.实验动物
27.spf级昆明雌性小鼠20只，体重18～20g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
28.2.实验药物
29.取羧甲基纤维素钠粉末5g，加超纯水至1000ml，用磁力搅拌器加速溶解制成0.5％羧甲基纤维素钠作为溶剂；根据大鼠的体重称取实施例1的组合物(615mg/kg)，溶解在0.5％羧甲基纤维素钠溶液中制成组合物溶液。
30.3.实验动物分组及给药
31.20只18-20g的雌性小鼠适应性饲养7天。7天后根据小鼠的体重进行随机分组，每组10只，分别为空白对照组(control，0.5％羧甲基纤维素钠)、组合物组(615mg/kg)。标准条件下饲养，实验过程中动物自由摄食和饮水。每天早上8：30给小鼠进行灌胃给药，每只给药0.5ml，连续给药15天。
32.4.常压密闭缺氧实验
33.在250ml磨砂广口瓶的瓶盖上抹上凡士林，防止空气透过瓶口进入瓶中，制造严格的缺氧环境，同时在每个实验用的广口瓶底铺上5g碱石灰，其作用是吸收实验过程中小鼠在瓶中呼吸产生的水和二氧化碳，碱石灰上盖上一张圆形的滤纸，防止碱石灰遇水放热烫伤小鼠。最后一次灌胃给药30分钟后，将小鼠放入广口瓶中，迅速扭转瓶盖到不漏气，同时立刻用计数器开始计时，以小鼠最后一次呼吸(小鼠强烈挣扎后忽然瘫痪，胸部也不在发生起伏)为死亡特征，记录每只小鼠的存活时间。
34.5.结果
35.实验期间，各组动物均无咬伤现象，毛色正常。统计学分析结果表明，组合物组小鼠的摄食量与空白对照组小鼠的摄食量无明显差别(p》0.05)，说明组合物对雌性小鼠摄食量没有不良影响(图1)，同时研究发现在实验的中期和实验的末期，上述干预雌性小鼠的体重与空白对照组小鼠的体重相比无显著的统计学差异(p》0.05)，说明组合物干预对雌性小鼠的体重没有不良影响(图2)。灌胃给药两周后，检测雌性小鼠常压密闭缺氧条件下的存活时间，统计学分析结果显示，与空白对照组相比，组合物组的雌性小鼠在常压密闭缺氧条件下的存活时间显著延长(p《0.05)，表明组合物可显著提高雌性小鼠的抗缺氧能力(图3)。
36.实施例3
37.实施例1的组合物对低氧暴露雌性大鼠生理周期的调控作用
38.1.实验动物
39.spf级雌性sd大鼠36只，体重180～200g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
40.2.实验药物
41.取羧甲基纤维素钠粉末5g，加超纯水至1000ml，用磁力搅拌器加速溶解制成0.5％羧甲基纤维素钠作为溶剂；根据大鼠的体重称取实施例1的组合物(415mg/kg)，溶解在0.5％羧甲基纤维素钠溶液中制成组合物溶液。
42.3.实验动物分组及给药
43.雌性sd大鼠适应性饲养7天，随后根据大鼠的体重随机为空白对照组(control，0.5％羧甲基纤维素钠)、低氧对照组(control，0.5％羧甲基纤维素钠)，低氧 组合物组(410mg/kg)，每组12只，实验过程中动物自由摄食和饮水，低氧 组合物组灌胃给予410mg/kg的5-羟色氨酸，空白对照组及低氧对照组给予等量的溶剂，1周后，低氧对照组与低氧 组合物组随后置于低压舱内(模拟海拔6000m)暴露2周，期间继续灌胃给药，空白对照组整个实验过程置于正常标准条件下饲养。
44.4.动情周期观察
45.每天上午8：00－9：00、下午19∶00－20：00进行阴道脱落细胞涂片检查，根据阴道脱落细胞的形态学变化确定大鼠的动情周期。固定大鼠，暴露阴道后，用移液枪吸取100μl无菌生理盐水，打入雌性大鼠阴道内部并来回抽吸两次，均匀平铺到载玻片中央，自然风
干，95％乙醇固定15min，室温下自然晾干，进行he染色15min，蒸馏水冲洗干净后镜检。按照大鼠性周期阴道涂片的细胞变化特点来划分大鼠性周期的各个阶段：
①
动情前期:可见大量有核上皮细胞、少量角化上皮细胞；
②
动情期：可见满视野角化上皮细胞、少量有核上皮细胞；
③
动情后期：可见有核上皮细胞、角化上皮细胞及白细胞；
④
动情间期：可见大量白细胞和少量黏液。
46.5.实验结果
47.实验期间，各组动物均无咬伤现象，毛色正常。统计学分析结果表明，组合物组大鼠的摄食量在第一周与第二周时与低氧对照组雌性大鼠的摄食量无明显差别(p》0.05)，说明组合物干预对雌性大鼠摄食量没有不良影响(图4)，同时研究发现在实验的中期和实验的末期，组合物干预雌性大鼠的体重与低氧对照组雌性大鼠的体重相比无显著的统计学差异(p》0.05)，说明组合物对雌性大鼠的体重没有不良影响(图5)。
48.雌性哺乳动物的动情周期一般分为4个阶段：动情前期、动情期、动情后期和动情间期。在雌性的非妊娠期间，动情状态呈周期性变化，卵子的形成和性激素的分泌也呈周期性波动，雌性大鼠的动情周期常被作为体内激素水平变化以及生殖器官如卵巢和子宫病理生理状态的重要标志物。雌性大鼠正常的生理周期约为4-5天，动情前期持续时间约12小时。动情期持续时间9-15小时；动情后期，以白细胞和角质化细胞为特征，持续时间14-18小时；动情间期持续时间60-70小时；与空白对照组相比，高原低氧暴露大鼠生理周期紊乱率显著升高(p《0.05％)，而组合物干预可以显著改善高原低氧暴露导致的雌性大鼠生理周期紊乱，差异有统计学差异(图6、表1)。
49.表1.组合物对低氧暴露大鼠雌性生理周期的影响
[0050][0051]
*p《0.05vs空白对照组，
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p《0.05vs低氧对照组
[0052]
本发明的组合物与药学可接受的辅料，按常规技术手段，可以制备成片剂，胶囊剂，颗粒剂，散剂等，方便服用。