CXCR2抑制剂和肺癌化疗药的组合物在制备抗肺癌药物中的用途

cxcr2抑制剂和肺癌化疗药的组合物在制备抗肺癌药物中的用途
技术领域
1.本发明涉及cxcr2抑制剂和肺癌化疗药的组合物在制备抗肺癌药物中的用途，属于医药领域。


背景技术：

2.肺癌是全世界第一大癌症，肺癌患者占所有癌症患者的11.6％，同时在癌症致死率中排名首位(18.4％)。肺癌在我国也是致死率最高的癌症之一。非小细胞肺癌占了肺癌80％以上，五年生存率小于20％，其中治疗一年以内产生耐药性是造成低生存率的主要原因之一。以铂类药物为基础的化疗方案，尤其是顺铂，是目前治疗肺癌的主要化疗方案。顺铂通过和dna链中的嘌呤碱基相互作用，干扰dna的修复，造成dna的损伤，从而诱导肿瘤细胞的凋亡。但是铂类药物的耐药性和对部分患者有限的疗效限制了药物的使用。传统观点认为，肿瘤耐药性是因为肿瘤细胞本身产生适应性，对化疗不再敏感。


技术实现要素：

3.本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的目的在于提供cxcr2抑制剂和肺癌化疗药的组合物在制备抗肺癌药物中的用途。
4.本发明提供了cxcr2抑制剂和肺癌化疗药的组合物在制备抗肺癌药物中的用途。
5.进一步地，所述的肺癌化疗药为铂类化疗药。
6.进一步地，所述的肺癌化疗药为顺铂。
7.进一步地，所述的cxcr2抑制剂为sb225002。
8.进一步地，所述组合物中cxcr2抑制剂：肺癌化疗药的配比为(1～8)：(1～8)。
9.进一步地，所述组合物中cxcr2抑制剂：肺癌化疗药的配比为4：1。
10.进一步地，所述的组合物含有同时或者分别给药的cxcr2抑制剂和肺癌化疗药。
11.进一步地，所述的抗肺癌药物为口服制剂或者注射制。
12.有益效果：本发明创造性地利用cxcr2抑制剂提高化疗药物的疗效，改善化疗药物引起的肿瘤微环境的改变。实验证明，sb225002可以通过阻断顺铂诱导的肺癌细胞cxcls/cxcr2信号，减少n2型中性粒细胞浸润，有效调节顺铂引起的肿瘤微环境变化，和顺铂起到明显的协同治疗效果。以上结果表明cxcr2抑制剂和化疗药物的联用是具有前景的肺癌治疗策略。
附图说明
13.图1为实施例1sb225002联合顺铂化疗对肺转移模型的治疗效果分析图；
14.图2为实施例1sb225002联合顺铂对皮下异位移植瘤模型的协同治疗效果图；
15.图3为实施例2顺铂诱导ll/2细胞分泌cxcr2相关的趋化因子增多数据图；
16.图4为实施例2顺铂引起ll/2细胞表面的cxcr2表达升高数据图；
culture collection，atcc)；
43.3、实验动物
44.雌性spf级c57bl/6小鼠(6～7周龄、18～20g)购自北京维通利华实验动物技术有限公司和北京华阜康生物科技股份有限公司，饲养于四川大学生物治疗国家重点实验室spf级动物房。
45.实施例1 sb225002联合顺铂明显抑制肿瘤的生长
46.铂类药物，尤其是顺铂，作为肺癌化疗的一线用药，是治疗肺癌最有效的药物之一，但针对晚期患者有限的疗效和肿瘤的耐药性，使得顺铂的使用受到限制。鉴于利用sb225002阻断cxcls/cxcr2轴后，可以抑制肺癌细胞增殖和emt，促进其凋亡和老化，同时还可以调控肺癌的肿瘤微环境，具有一定治疗肿瘤的效果。在本研究中我们将sb225002联合顺铂治疗小鼠肺癌模型，观测两者联合的治疗效果。为了探究sb225002是否可以提高顺铂对肺癌的治疗效果，我们将sb225002(10mg/kg)联合顺铂(2.5mg/kg，腹腔给药，一周一次)应用在小鼠ll/2肺转移模型和皮下异位移植瘤模型中，sb225002第一次给药时间如前述，顺铂在sb225002给药后第三天开始给药，实验设置了(1)空白组(blank)，即接瘤不处理组；(2)溶剂组(vehicle)；(3)sb225002单药组；(4)顺铂(ddp)组；(5)sb225002 ddp联合治疗组。在肺转移模型中，于接瘤后23-25天处死小鼠后，明显观察到，sb225002和ddp单药均有一定治疗效果，而治疗效果最佳的是联合治疗组，如图1a所示。计数肿瘤结节数和肺部重量后，联合治疗组的肺部结节数目(4.750
±
2.250)少于ddp单药组(10.75
±
2.056)，p＝0.0483；联合治疗组的肺部重量(0.1550
±
0.01190g)也明显轻于ddp单药组(0.2200
±
0.02677g)，p＝0.0342，如图1b和1c所示。
47.图1为sb225002联合顺铂化疗对肺转移模型的治疗效果。在6-8周c57bl/6小鼠尾静脉接种ll/2小鼠肺癌细胞5
×
10^5个/只，接种后随机分为5个组：空白对照组(接瘤不处理组)、溶剂对照组(25％peg 400 5％tween 80 69％ddh2o 1％dmso)、sb225002单药组(10mg/kg，每天一次)、顺铂单药组(ddp，2.5mg/kg，每周一次)和sb225022与ddp联合组。接瘤后第三天开始给sb225002，第五天开始给ddp。接瘤第23-25天处死小鼠后，计数肺部结节数和肺重量。a.各组肺部结节的大体图片；b.肺部结节数目；c.肺重量。n＝5-7，结果以均数
±
标准差表示，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，ns无统计学差异。
48.在皮下异位移植瘤模型中，处死小鼠后，分离皮下瘤，联合治疗组也显示了优于单药组的治疗效果，如图2a所示。联合治疗组的肿瘤结节大小(382.8
±
29.76mm3)小于ddp单药组(578.8
±
33.27mm3)，p＝0.0012；联合治疗组肿瘤结节的重量(0.36
±
0.052g)也明显轻于ddp单药组(0.54
±
0.05g)，p＝0.0193，如图2b和2c所示。sb225002单药时显示出了一定治疗ll/2肺癌模型的效果，同时可以联合ddp，增强后者对肿瘤的抑制作用。
49.图2sb225002联合顺铂对皮下异位移植瘤模型的协同治疗效果。在6-8周c57bl/6小鼠右侧背部接种ll/2小鼠肺癌细胞2
×
10^6个/只，接种后随机分为5个组：空白对照组、溶剂对照组、sb225002单药组(10mg/kg，每天一次)、顺铂单药组(ddp，2.5mg/kg，每周一次)和sb225022与ddp联合组。接瘤后第五天开始给sb225002，第7天开始给ddp，每隔3天测一次瘤大小。接瘤第27天处死小鼠后，称瘤重量。a.各组肿瘤结节的大体图片；b.肿瘤结节的生长曲线；c.肿瘤重量。n＝5-7，结果以均数
±
标准差表示，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，ns无统计学差异。
50.实施例2顺铂处理肿瘤细胞会引起cxcls/cxcr2信号增加
51.体内实验的结果观察到sb225002和ddp治疗后的小鼠肿瘤微环境中的中性粒细胞均减少了，但两者剩余的tans表型上有着较大区别，推测ddp处理后，肿瘤微环境产生了一定变化。为了探究ddp对cxcls/cxcr2信号轴以及中性粒细胞表型的影响，我们首先用ddp(2.5μm，5μm)处理ll/2肿瘤细胞后，通过提取细胞总rna进行qrt-pcr，结果显示，ddp处理后，肿瘤细胞表达的趋化因子cxcl1，cxcl2，cxcl5都有所增加，而mif变化不明显，如图3所示。
52.图3顺铂诱导ll/2细胞分泌cxcr2相关的趋化因子增多。用顺铂处理ll/2细胞24小时后，收集细胞的总rna进行qrt-pcr检测，cxcl1,cxcl2和cxcl5在处理后都明显升高。a.cxcl1的mrna相对表达水平；b.cxcl2的mrna相对表达水平；c.cxcl5的mrna相对表达水平；d.mif的mrna相对表达水平。qrt-pcr以gapdh作为内参，结果以均数
±
标准差表示，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，ns无统计学差异。
53.进一步，通过流式细胞术检测肿瘤细胞表面的cxcr2受体表达，结果显示，ddp(2.5μm)处理后的ll/2肿瘤细胞表面cxcr2的表达(58.94
±
1.666％)明显高于未处理组(22.90
±
3.819％)，p＝0.0001，如图4a和4b所示。
54.图4顺铂引起ll/2细胞表面的cxcr2表达升高。顺铂处理ll/2细胞24小时后，检测表面cxcr2表达情况。a.对ll/2细胞表面cxcr2表达的流式细胞分析图；b.图a的柱状统计图。结果以均数
±
标准差表示，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，ns无统计学差异。
55.ddp处理后，小鼠肿瘤细胞cxcls分泌增多，表面cxcr2受体表达水平升高，肿瘤细胞的cxcls/cxcr2信号增强；同时在肿瘤影响下，中性粒细胞表面cxcr2受体表达增加，浸润至肿瘤微环境后，与高水平的cxcls相互作用，可能影响中性粒细胞的表型，导致tnf-α分泌减少。另外，通过流式细胞术进一步检测了ddp处理对肿瘤细胞的影响。结果显示，ddp处理后，肿瘤细胞表达的免疫抑制标志因子明显升高，如pd-l1，il-10和tgf-β，其中tgf-β升高尤为显著(82.01
±
2.479％vs 4.387
±
0.6974％)，p《0.0001，如图5所示。同时，我们提取处理后的ll/2细胞的总rna进行检测，qrt-pcr结果与流式细胞术结果一致，如图5所示。随着tgf-β升高，进一步将浸润的tans极化为n2型，从而抑制机体免疫反应，促进肿瘤生长。
56.图5顺铂上调ll/2细胞分泌的免疫抑制因子。顺铂处理ll/2细胞24小时后，ll/2细胞表达的pd-l1,il-10和tgf-β明显升高。a.对ll/2细胞表面pd-l1表达的流式细胞分析图(左侧)和其柱状统计图(右侧)；b.对ll/2细胞表达的il-10的流式细胞分析图(左侧)和其柱状统计图(右侧)；c.对ll/2细胞表达的tgf-β的流式细胞分析图(左侧)和其柱状统计图(右侧)。结果以均数
±
标准差表示，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，ns无统计学差异。
57.图6顺铂引起ll/2细胞表达的免疫抑制因子的mrna水平升高。顺铂处理ll/2细胞后，ll/2细胞表达的pd-l1、il-10和tgf-β的mrna相对水平明显升高。a.pd-l1的mrna相对表达水平；b.il-10的mrna相对表达水平；c.tgf-β的mrna相对表达水平。qrt-pcr以gapdh作为内参，结果以均数
±
标准差表示，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，ns无统计学差异。
58.实施例3 sb225002联合顺铂可诱导肺癌细胞凋亡增加
59.在体外实验中，sb225002可以诱导ll/2肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，而顺铂通过抑制细胞dna复制，杀伤肿瘤细胞。为了探究sb225002联合ddp可以联合抑制肿瘤细胞，通过cck8和流式细胞术检测，结果显示，sb225002 ddp联合治疗组诱导的ll/2细胞凋亡比
β、tnf-α和trail的mrna相对表达水平。qrt-pcr以gapdh作为内参，结果以均数
±
标准差表示，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，ns无统计学差异。
67.sb225002联合顺铂对于小鼠ll/2肺癌模型的治疗效果优于sb225002单药和顺铂单药，在进一步探究联合用药的抗肿瘤机制的实验中，我们发现，顺铂本身可以减少肿瘤微环境中中性粒细胞的浸润，但流式细胞术分析，顺铂治疗后的肺癌模型中肿瘤微环境中的中性粒细胞明显呈现为n2型，即tgf-β升高伴随tnf-α降低，而sb225002可以显著改善顺铂引起的n2型中性粒细胞增加；体外实验中，联用sb225002可以增强顺铂对肿瘤细胞杀伤作用。同时对ddp处理后的肿瘤细胞分析，发现其表面和分泌的免疫抑制标志都明显上调，cxcls/cxcr2信号也明显增强，提示抑制cxcls/cxcr2信号成为顺铂联合治疗的一个潜在靶点。通过qrt-pcr检测，发现用dpp处理肿瘤细胞后的肿瘤上清刺激原代中性粒细胞后，中性粒细胞表现为n2型表型。以上结果提示，sb225002可以减少顺铂引起的n2型中性粒细胞浸润，调控化疗后的肿瘤微环境，同时和顺铂起到协同杀伤肿瘤细胞的效果。
68.需要说明的是，本说明书中描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例以及不同实施例的特征进行结合和组合。