一种头孢地尼有关物质的高效液相色谱检测方法与流程

1.本发明涉及药品检测分析技术领域，尤其涉及一种头孢地尼有关物质的高效液相色谱检测方法。


背景技术：

2.头孢地尼，化学名为(6r,7r)-7-[(z)-2-(2-氨基-4-噻唑基)-2-羟基亚胺基乙酰氨基]-8-氧代-3-乙烯基-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸，其结构式如下：
[0003][0004]
头孢地尼(cefdinir)是一种第三代的口服头孢菌素类的抗生素，是广谱的抗菌药物，对部分革兰氏阳性菌以及多数革兰氏阴性菌都有很好的抗菌活性。
[0005]
在药物分析中，所称的“有关物质(related substances)”是指在原料药生产过程中带入的起始原料、试剂、中间体、副产物和异构体等物质，也可能是制剂在生产、贮藏和运输过程中产生的降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。有关物质的种类与药物的合成路线和制剂工艺密切相关，药物在合成和制剂过程中的任何一个因素的改变都可能导致其有关物质的种类不同，因此有关物质的检测和控制过程相对复杂，且有关物质的检测是控制药品质量的重要指标。
[0006]
头孢地尼作为β-内酰胺类抗生素，合成工艺路线比较复杂，药物自身存在一定不稳定性因素。为了患者用药安全，降低杂质带来的有关副作用，需要对头孢地尼中的有关物质进行检测分析。现有的头孢地尼质量标准中，美国药典的检测方法中，最终色谱图中杂质t和杂质u的峰无法完全分离，影响其检测结果。中国药典的检测方法中，最终色谱图中，杂质m和杂质n不能完全分离，同样导致最终头孢地尼有关物质最终检测结果不够精准，影响其有关杂质含量的监控分析。
[0007]
因此，如何提供一种头孢地尼检测方法，其可以同时精确检测分析头孢地尼中的有关物质成为了本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

[0008]
有鉴于此，本发明提供了一种头孢地尼有关物质的高效液相色谱检测方法，该检测方法可以同时精确检测分析头孢地尼中的有关物质。
[0009]
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0010]
一种头孢地尼有关物质的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤：
[0011]
将头孢地尼和有关杂质溶于流动相a中，得到分析溶液；将分析溶液注入液相色谱
仪进行检测；
[0012]
流动相包括流动相a和流动相b，采用梯度洗脱方式进行分离；
[0013]
所述流动相a为四甲基氢氧化铵溶液；流动相b为四甲基氢氧化铵溶液-乙腈-甲醇，其体积比为50～60:25～30:15～20。
[0014]
进一步的，所述流动相a和流动相b中的四甲基氢氧化铵溶液的质量百分浓度独立的为0.1～0.25％。
[0015]
进一步的，所述检测的条件如下：
[0016]
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，150mm
×
4.6mm，5μm；
[0017]
色谱柱温度：35～45℃；
[0018]
进样体积：10μl；
[0019]
流动相流速：0.8～1.2ml/min；
[0020]
流动相的初始ph值为6；
[0021]
检测波长：220～260nm。
[0022]
进一步的，所述梯度洗脱方式为：0～2min，流动相a占流动相总体积的95％；2～22min，流动相a占流动相总体积的95～75％；22～52min，流动相a占流动相总体积的75～50％；52～53min，流动相a占流动相总体积的50～95％，53～65min，流动相a占流动相总体积的95％。
[0023]
进一步的，所述每1000ml的流动相a或流动相b中加入0.3～0.5ml乙二胺四乙酸二钠溶液，所述乙二胺四乙酸二钠溶液的浓度为0.05～0.15mol/l。
[0024]
进一步的，所述有关物质的名称及结构如下：
[0025]
[0026]
[0027][0028]
进一步的，所述头孢地尼、杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质g、杂质i、杂质j、杂质k、杂质l、杂质m、杂质n、杂质o、杂质p、杂质q、杂质r、杂质s、杂质t、杂质u、usp-杂质l、usp-杂质a、usp-杂质m与流动相a的质量体积比独立的为9.5～10.5μg：1ml。
[0029]
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
[0030]
(1)通过本发明的检测方法，可以有效全面的检测头孢地尼中usp-杂质a，杂质a～杂质g，杂质i～杂质u，usp-杂质l，usp-杂质m，且各个杂质峰之间分离度高，可精确分析各个杂质的含量。
[0031]
(2)本发明能够有效的测定头孢地尼溶液中各种相关杂质的存在，尤其实现了谱图中头孢地尼特征峰与头孢地尼杂质以及杂质特征峰之间的分离。同时本发明的方法还可用于头孢地尼制剂的有关物质检测，可以确保产品的质量可控。
附图说明
[0032]
图1为本发明实施例1检测方法得到的色谱图；
[0033]
图2为本发明实施例2检测方法得到的色谱图；
[0034]
图3为本发明实施例3检测方法得到的色谱图。
具体实施方式
[0035]
本发明提供了一种头孢地尼有关物质的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤：
[0036]
将头孢地尼和有关杂质溶于流动相a中，得到分析溶液；将分析溶液注入液相色谱仪进行检测；
[0037]
流动相包括流动相a和流动相b，采用梯度洗脱方式进行分离；
[0038]
所述流动相a为四甲基氢氧化铵溶液；流动相b为四甲基氢氧化铵溶液-乙腈-甲醇，其体积比为50～60:25～30:15～20，优选为52～58:26～29:16～18，进一步优选为55：28：17；
[0039]
在本发明中，所述流动相a中的四甲基氢氧化铵溶液的质量百分浓度为0.1～0.25％，优选为0.15～0.22％，进一步优选为0.2％；
[0040]
所述流动相b中的四甲基氢氧化铵溶液的质量百分浓度为0.1～0.25％，优选为0.15～0.22％，进一步优选为0.2％；
[0041]
所述四甲基氢氧化铵溶液的溶剂为水。
[0042]
在本发明中，所述检测的条件如下：
[0043]
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，150mm
×
4.6mm，5μm；
[0044]
色谱柱温度：35～45℃；
[0045]
进样体积：10μl；
[0046]
流动相流速：0.8～1.2ml/min；
[0047]
流动相的初始ph值为6；
[0048]
检测波长：220～260nm。
[0049]
所述色谱柱温度优选为38～42℃，进一步优选为40℃；
[0050]
所述流动相流速优选为0.9～1.1ml/min，进一步优选为1.0ml/min。
[0051]
在本发明中，所述梯度洗脱方式为：0～2min，流动相a占流动相总体积的95％；2～22min，流动相a占流动相总体积的95～75％；22～52min，流动相a占流动相总体积的75～50％；52～53min，流动相a占流动相总体积的50～95％，53～65min，流动相a占流动相总体积的95％。
[0052]
在本发明中，所述每1000ml的流动相a或流动相b中加入0.3～0.5ml乙二胺四乙酸二钠溶液，优选为每1000ml的流动相a或流动相b中加入0.35～0.45ml乙二胺四乙酸二钠溶液，进一步优选为每1000ml的流动相a或流动相b中加入0.4ml乙二胺四乙酸二钠溶液；
[0053]
所述乙二胺四乙酸二钠溶液的浓度为0.05～0.15mol/l，优选为0.08～0.12mol/l，进一步优选为0.1mol/l；乙二胺四乙酸二钠溶液的溶剂为水。
[0054]
在本发明中，所述有关物质的名称及结构如下：
[0055]
[0056]
[0057][0058]
在本发明中，所述头孢地尼、杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质g、杂质i、杂质j、杂质k、杂质l、杂质m、杂质n、杂质o、杂质p、杂质q、杂质r、杂质s、杂质t、杂质u、usp-杂质l、usp-杂质a、usp-杂质m与流动相a的质量体积比独立的为9.5～10.5μg：1ml，独立的优选为9.8～10.2μg：1ml，独立的进一步优选为10μg：1ml。
[0059]
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0060]
实施例1
[0061]
仪器与色谱条件
[0062]
高效液相色谱仪：u3000高效液相色谱系统及工作站；
[0063]
色谱柱：ymc-pack ods-am的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，150mm
×
4.6mm，5μm；
[0064]
色谱柱温度：40℃；
[0065]
进样体积：10μl；
[0066]
流动相流速：1.0ml/min；
[0067]
流动相的初始ph值为6；
[0068]
检测波长：254nm。
[0069]
配置流动相a：0.1％四甲基氢氧化铵溶液(用磷酸调节ph值至6.0)1000ml，加入0.1mol/l乙二胺四乙酸二钠溶液0.4ml，
[0070]
流动相b：0.1％四甲基氢氧化铵溶液(用磷酸调节ph值至6.0)-乙腈-甲醇(500：300：200)，每1000ml中加入0.1mol/l乙二胺四乙酸二钠溶液0.4ml。
[0071]
梯度洗脱方式为：0～2min，流动相a占流动相总体积的95％；2～22min，流动相a占流动相总体积的95～75％；22～52min，流动相a占流动相总体积的75～50％；52～53min，流动相a占流动相总体积的50～95％，53～65min，流动相a占流动相总体积的95％。
[0072]
具体检测的操作步骤如下：
[0073]
取头孢地尼、杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质g、杂质i、杂质j、杂质k、杂质l、杂质m、杂质n、杂质o、杂质p、杂质q、杂质r、杂质s、杂质t、杂质u、usp-杂质l、usp-杂质a、usp-杂质m各10μg一起溶于1ml的流动相a中，制成分析溶液。取10μl的分析溶液注入液相色谱仪进行检测，记录色谱图，结果见图1。由图1可得，头孢地尼主峰和其他杂质峰完全分离，杂质m与杂质n可完全分离，杂质t与杂质u未完全分离，杂质r与杂质s完全分离。
[0074]
实施例2
[0075]
仪器与色谱条件
杂质a、usp-杂质m各10μg一起溶于1ml的流动相a中，制成分析溶液。取10μl的分析溶液注入液相色谱仪进行检测，记录色谱图，结果见图3。由图3可得，头孢地尼主峰和其他杂质峰完全分离，杂质m与杂质n、杂质t与杂质u、杂质r与杂质s均能达到完全分离。
[0102]
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
[0103]
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。