不可降解的栓塞微球的制作方法

1.本发明涉及包含交联聚合物基质的不可生物降解的栓塞微球，这些栓塞微球有利地用于注射到个体中，并且任选地用于活性物质或大分子的控制释放。


背景技术：

2.治疗性血管阻塞(即栓塞)用于阻止身体区域中的血流，这导致局部缺血。它可以通过导管施用，使微粒阻塞剂置于循环系统中。它有多种医学应用，如治疗血管畸形、出血过程或肿瘤，包括例如子宫纤维瘤、原发性或继发性肝肿瘤。例如，血管阻塞可能导致肿瘤坏死，并避免了更具侵入性的手术。这种阻塞技术也可以在化学栓塞的情况下与抗癌剂的递送相结合。这使得能够通过靶向注射增加药物的局部浓度及其在肿瘤中的停留时间。在血管畸形的情况下，血管阻塞可以使到正常组织的血流正常化，并通过限制出血风险来辅助手术。在出血过程中，血管阻塞可能导致流速降低，从而促进动脉伤口的愈合。
3.用于血管阻塞的商业栓塞剂包含栓塞液体(丙烯酸胶、凝胶)、机械装置和栓塞颗粒。特定材料的选择取决于许多因素，如要治疗的病变类型、要使用的导管类型以及临时或永久栓塞的需要。
4.这些栓塞剂通常通过导管，特别地微导管引入血管，该导管直径小于待治疗血管的直径。在固体栓塞剂如颗粒的情况下，它们的形状因此必须允许它们在所述导管内循环，然后一旦释放，占据足够的体积以在其整个直径上产生血管阻塞。
5.栓塞剂的形状和尺寸是影响目标区域精度方面的因素。在颗粒的情况下，已经发现当它们是球形并且具有适合血管腔的尺寸时，它们会产生完全栓塞并且仅存在于目标组织中。
6.在现有技术中，微球的发展与越来越细的微导管的发展同时进行，这些微导管允许更多的远端动脉通路。根据所使用的微球的尺寸，医生可以继续进行血管靶向，进行或多或少的远端阻塞。可以在选定的水平上设置栓塞。例如，在肿瘤的情况下，通往肿瘤的血管也可以更容易地被阻塞，同时避开通往正常组织的血管。
7.出于进行临时栓塞的目的，这些微球可以是可生物降解的。这些可生物降解的微球遇到的主要困难是：
[0008]-控制降解速度的困难，降解可能在几个小时到几个月之间，这取决于微球；
[0009]-微球的受控消失，没有碎片或对生物体无毒性，和
[0010]-在这些微球上装载治疗剂的困难。
[0011]
此外，聚合物微球内不希望的链转移反应可能导致不可逆交联，可能导致形成不可吸收的聚合物。
[0012]
因此，在申请wo 2012/120139和wo 2012/120138中，描述了在可生物降解的微球的制备过程中向单体溶液中添加转移剂使得可以避免这些不希望的副反应并因此保持栓塞微球的降解特性。
[0013]
与这些具有获得临时栓塞的优点的可生物降解的栓塞微球相反，不可生物降解的
栓塞微球允许栓塞用于永久目的。
[0014]
二十世纪六十年代测试了各种不可生物降解的微球，目的是进行栓塞(铅、不锈钢和硅酮珠)。然而，这些微球的小尺寸和健康器官中相当大的非靶向反流增加了患者的并发症水平。
[0015]
存在基于聚合物、三丙烯基(n-丙烯酰基-2-氨基-2-羟甲基丙烷-1,3-二醇)和可能来源于猪的明胶的不可生物降解的微球。这是产品(生物圈医疗公司(biosphere medical))，其缺点之一是存在可能来源于猪的明胶。
[0016]
基于丙烯酸共聚物和pva的不可生物降解的微球也已被提议用于永久栓塞(osuga等人,(2002)j.vase interv radiol.[血管与介入放射学杂志]13:929-34)。这些是例如，来自生物圈医疗公司的微球，该微球以干燥形式提供，然后在通过导管注射前与生理盐水溶液和/或碘化造影剂混合后溶胀。溶胀后它们的最终尺寸随介质的离子电荷而变化(在盐水溶液或造影剂中，相对于初始尺寸分别为x2或x4)。然而，微球的溶胀没有得到控制，最终尺寸变化太大，无法在植入后控制其体积，这限制了其在栓塞中的应用。事实上，已经证明微球的尺寸和阻塞血管的直径之间存在对应关系。为了精确靶向要栓塞的血管，最好使用适当尺寸的微球(laurent等人,2007)。
[0017]
因此，栓塞微球必须是球形的并且必须是经过校准的。“校准的”意指微球必须可以根据其溶胀后的尺寸进行分类。然后，医生选择与要栓塞的血管或畸形的尺寸相对应的微球(laurent等人,2007)。这些栓塞微球的任何形态学缺陷都可能导致导管阻塞或可能对其栓塞特性产生不利影响。
[0018]
栓塞微球的抗压性和弹性也很重要。事实上，当它们被注射到血管中时，它们必须能够通过直径小于其直径的微导管注射，同时在从微导管中排出时它们会恢复形状和初始尺寸。已经证明，低弹性和低抗压性会降低体内的阻塞水平(laurent等人,2007)。
[0019]
杨氏模量表示抗压性或可压缩性。已经证明，微球的杨氏模量值与它们将被定位在注射它们的血管的或多或少远端的部分的事实直接相关(laurent a.,agents d'embolisation[栓塞剂].emc-radiologie et imagerie m
é
dicale-principes et technique-radioprotection[emc-放射学和医学成像-原理和技术-辐射防护]2014；9(1):1-11)。
[0020]
低可压缩性微球将在注射部位附近提供栓塞，而高可压缩性微球将在远离注射部位提供栓塞。
[0021]
体外试验表明，来自生物圈医疗公司的微球具有低可压缩性，可在其中注射它们的血管的近端区域级别形成栓塞。相反，来自波士顿科学公司(boston scientific)的contour微球容易变形，可以栓塞远离注射部位的血管区域。
[0022]
可压缩性太强并因此太可变形的微球遇到的问题之一是它们可能在血流压力下在血管内移动，这使得它们的定位不确定。然而，低可压缩性、并且因此不太容易变形的微球可能难以注射，或者注射后可能无法恢复其初始形状。
[0023]
为了靶向特定的栓塞部位，必须控制微球的可压缩性。
[0024]
此外，为了便于注射，通常将微球悬浮在非离子碘化造影剂和缓冲溶液的混合物中。为此，放射科医师通常使用50％的造影剂与50％的生理盐水溶液、碳酸氢盐缓冲液或磷
酸盐缓冲液的混合物。为了保证它们的可注射性，微球必须均匀悬浮在该50/50的溶液中。如果微球沉积或相反地漂浮到溶液表面，则所得悬浮液不均匀且不稳定，因此不能注射到患者体内。
[0025]
因此，有利的是微球具有合适的密度，以允许其在包含50％的造影剂和50％的生理盐水、碳酸氢盐缓冲液、磷酸盐缓冲液或tris缓冲液(三(羟甲基)氨基甲烷)的混合物中均匀悬浮。
[0026]
因此，非常需要不可生物降解的栓塞微球，这些不可生物降解的栓塞微球：
[0027]-具有校准的尺寸、
[0028]-由没有过敏风险的生物相容性材料组成、
[0029]
以及具有机械特性，特别地一定程度的溶胀、弹性和可压缩性，适合通过导管或微导管注射，并且能够在注射后恢复其原始形状，同时避免远离目标部位的栓塞。
[0030]
此外，有必要使它们在保持其机械特性的同时能够装载活性物质。


技术实现要素：

[0031]
本发明通过提出包含亲水性交联聚合物基质的栓塞微球来满足这些需求，这些栓塞微球是不可生物降解的、固体的、校准的、弹性的、可压缩的并且具有足以用于永久性靶向栓塞的受控溶胀程度。
[0032]
本发明微球的机械性能(溶胀、弹性、坚固性、抗压性)使其适于注射，并且当它们被注射到哺乳动物(优选人类)的脉管系统中时，能够提供足够和永久水平的栓塞。
[0033]
本发明主要涉及包含交联聚合物基质的不可生物降解的栓塞微球，所述交联基质基于至少以下：
[0034]
a)20％至95％的选自n-乙烯吡咯烷酮和具有下式(i)的单体的亲水性单体：
[0035]
(ch2＝cr1)-co-d(i)
[0036]
其中：
[0037]
·
d代表o-z或nh-z，z代表(c
1-c6)烷基、-(cr2r3)
m-ch3、-(ch
2-ch
2-o)
m-h、-(ch
2-ch
2-o)
m-ch3、-c(r4oh)m或-(ch2)
m-nr5r6，其中m代表从1至30的整数；
[0038]
·
r1、r2、r3、r4、r5和r6彼此独立地代表h或(c
1-c6)烷基；
[0039]
b)1％至15％的具有下式(iia)或(iib)的不可生物降解的、直链或支链亲水性交联单体：
[0040]
(ch2＝cr7)co-nh-a-hn-oc(cr8＝ch2)(iia)、或
[0041]
(ch2＝cr7)co-o-a-o-oc(cr8＝ch2)(iib)，
[0042]
其中r7和r8彼此独立地代表h或(c
1-c6)烷基；
[0043]
并且
[0044]
a单独或与至少一个与其键合的原子一起代表(c
1-c6)亚烷基、聚乙二醇(peg)、聚硅氧烷、聚(二甲基硅氧烷)(pdms)、聚甘油酯(pge)或双酚a。
[0045]
以及
[0046]
c)1.5％至少于6％的转移剂，该转移剂选自烷基卤化物和环脂肪族硫醇或脂肪族硫醇，特别地这些烷基卤化物和环脂肪族硫醇或脂肪族硫醇具有2至24个碳原子，并且任选地具有选自氨基、羟基和羧基基团的另一种官能团，
[0047]
单体a)与b)的百分比以相对于单体的总摩尔数的摩尔数给出，并且化合物c)的百分比以相对于亲水性单体a)的摩尔数的摩尔数给出。
[0048]
在本发明的上下文中，在根据本发明的微球的交联基质的聚合过程中添加转移剂可以增加微球的溶胀度。溶胀度的增加导致给定体积的微球干提取物减少，因此水的比例增加，这有利于它们的注射。令人惊讶地，该转移剂的存在改善了弹性特性以及溶胀特性和抗压性。发明人已经发现，在反应混合物中添加相对于亲水性单体a)的摩尔数而言1.5mol％至少于6mol％，优选地1.5％至4.5％，优选地3％的选自上述那些的转移剂用于包含亲水性聚合物的交联基质的聚合可以改善不可生物降解的栓塞微球的机械特性，即增加它们的溶胀性、弹性、坚固性并改善它们的抗压性。
[0049]
这些特征允许使用导管或微导管将本发明的微球注射到个体中，并产生完全且确定的靶向栓塞。
[0050]
特别地，发明人已经发现，必须严格控制添加到反应混合物中的转移剂的量以满足上述需要。
[0051]
因此，从相对于亲水性单体a)的摩尔数而言在反应混合物中存在1.5％转移剂(以摩尔数计)开始，微球的溶胀度、弹性和压缩性都是最佳的。在低于1.5％的水平下，获得的微球不够柔韧，无法通过微导管注射。
[0052]
当转移剂以6％或更多的量存在于反应混合物中时，不可生物降解的栓塞微球的可压缩性太强，它们不够坚固，且会破裂。
[0053]
弹性也是一个重要参数。低弹性的微球不会因血管壁的压力而发生太大的变形，并将保持在其中注射它们的血管的近端区域。
[0054]
本发明还涉及装载活性物质的栓塞微球，因此可以将血管阻塞与活性物质的递送组合起来。
[0055]
本发明进一步涉及包含与有利地用于通过注射施用的药学上可接受的媒介物联合的如上定义的不可生物降解的栓塞微球的药物组合物。
[0056]
本发明还涉及包含如上定义的药物组合物和用于肠胃外施用所述组合物的至少一种注射所述组合物的手段的试剂盒。
[0057]
本发明还涉及试剂盒，该试剂盒一方面包含如上定义的药物组合物，另一方面包含用于通过x射线、磁共振或超声检查成像的造影剂，以及任选地用于肠胃外施用的至少一种注射手段。
具体实施方式
[0058]
表述“基于
…
的基质”当然意指为包含用于该基质的非均相聚合的基础成分之间的混合物和/或反应产物的基质，优选地仅包括用于该基质的不同基础成分之间的反应产物，其中某些基础成分可能会在基质制造方法的不同步骤中，特别地在聚合步骤中，至少部分地彼此或与其紧密的化学环境发生反应或可能发生反应。因此，基础成分是旨在在基质聚合过程中彼此反应的反应物。因此将基础成分添加至反应混合物中，任选地该反应混合物进一步包含溶剂或溶剂的混合物和/或其他添加剂，如至少一种盐和/或至少一种聚合引发剂和/或至少一种稳定剂，如pva。在本发明的上下文中，反应混合物至少包含本说明书中提到的单体a)、b)和转移剂c)作为基础成分以及至少一种溶剂，优选地包含水性溶剂和有
机溶剂(如非极性非质子溶剂)的溶剂的混合物，例如水/甲苯混合物。任选地，反应混合物包含聚合引发剂，例如像叔丁基过氧化物、过氧化苯甲酰、偶氮双氰基戊酸(也称为4,4'-偶氮双(4-氰基戊酸)酸)、aibn(偶氮双异丁腈)、1,1'-偶氮双(环己烷腈)或一种或多种热引发剂，如2-羟基-4'-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯丙酮(106797-53-9)；2-羟基-2-甲基苯丙酮(1173，7473-98-5)、2,2-二甲氧基-2-苯基苯乙酮(24650-42-8)、2,2-二甲氧基-2-苯基苯乙酮(24650-42-8)或2-甲基-4'-(甲基硫代)-2-吗啉代苯丙酮(71868-10-5)。
[0059]
因此，根据本发明，基质至少基于本说明书中提到的单体a)、b)和转移剂c)，因此这些化合物是基础成分。
[0060]
因此，在本说明中，类似于“将[基础成分x]特别地以yy％至yyy％的量添加到反应混合物中”和“交联基质特别地基于以yy％至yyy％的量的[基础成分x]”的表述类似地被解释。此外，类似于“反应混合物至少包含[基础成分x]”和“交联基质至少基于[基础成分x]”的表述类似地被解释。
[0061]
在本发明的意义上，反应混合物的“有机相”意指包含有机溶剂和可溶于所述有机溶剂的化合物(特别地是单体、转移剂和聚合引发剂)的相。
[0062]
在本发明的意义上，“(c
x-cy)烷基”基团意指直链或支链的饱和的包含x至y个碳原子的单价含烃链，x和y为1与36，优选地1与18，特别地1与6之间的整数。作为示例，可以提及甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基或己基基团。
[0063]
在本发明的意义上，“(c
x-cy)芳基”意指含有芳香烃的基团，该基团优选地包含x至y个碳原子，并且包含一个环或几个稠合的环，x和y是5与36，优选地5与18，特别地5与10之间的整数。作为示例，我们可以提及苯基或萘基基团。
[0064]
在本发明的意义上，“(c
x-cy)杂芳基”意指包含x至y个环原子的芳香族基团，这些环原子包括一个或多个杂原子，有利地1至4个，甚至更有利地1个或2个，例如像硫、氮或氧原子，其他环原子是碳原子。x和y是5与36，优选地5与18，特别地5与10之间的整数。杂芳基基团的实例是呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基或吲哚基基团。
[0065]
在本发明的意义上，“(c
x-cy)亚烷基基团”意指直链或支链的包含x至y个碳原子的二价含烃链，x和y为1与36，优选地1与18，特别地1与6之间的整数。作为示例，可以提及亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基或亚己基基团。
[0066]
在本发明的意义上，“(c
x-cy)环亚烷基基团”意指包含x至y个环碳原子的饱和二价环状含烃基团，x和y为3与36之间，优选地3与18之间，特别地3与6之间的整数。作为示例，可以提及环亚丙基、环亚己基或环亚戊基基团。
[0067]
在本发明的意义上，“(c
x-cy)亚烯基基团”意指直链或支链的包含x至y个碳原子和至少一个双键的二价含烃链，x和y为2与36，优选地2与18，特别地2与6之间的整数。作为示例，我们可以提及亚乙烯基(vinylene/ethenylene)或亚丙烯基基团。
[0068]
在本发明的意义上，“(c
x-cy)环亚烯基基团”意指包含x至y个环碳原子和至少一个双键的饱和二价环状含烃基团，x和y为3与36之间，优选地3与18之间，特别地3与6之间的整数。
[0069]
在本发明的意义上，“(c
x-cy)亚炔基基团”意指直链或支链的包含x至y个碳原子和至少一个三键的二价含烃链，x和y为2与36，优选地2与18，特别地2与6之间的整数。
[0070]
在本发明的意义上，“(c
x-cy)环亚炔基基团”意指包含x至y个环碳原子和至少一个三键的饱和二价环状含烃基团，x和y为3与36之间，优选地3与18之间，特别地3与6之间的整数。
[0071]
在本发明的意义上，“(c
x-cy)亚芳基”意指二价含芳香烃的基团，该基团包含x至y个碳原子，并且包含一个或多个稠合的环，x和y是5与36之间，优选地5与18之间，特别地5与10之间的整数。作为示例，可以提及亚苯基基团。
[0072]
在本发明的意义上，“(c
x-cy)杂亚芳基”意指包含x至y个环原子的二价芳香族基团，这些环原子包括一个或多个杂原子，有利地1至4个，甚至更有利地1个或2个，例如像硫、氮或氧原子，其他环原子是碳原子。x和y是5与36，优选地5与18，特别地5与10之间的整数。
[0073]
在本发明的意义上，“二价基团”意指具有2价的基团，即具有两个共价键、极性共价键或离子化学键。所述基团可以包含例如碳原子和/或氧原子。
[0074]
在本发明的意义上，“干提取物”意指1ml的水溶胀微球中所含有的干微球的质量。
[0075]
在本发明的上下文中，“转移剂”意指具有至少一个弱化学键的化学化合物。该药剂与正在生长的聚合物链的自由基位点发生反应，并阻止链的生长。在链转移过程中，自由基被暂时转移到转移剂，该转移剂通过将自由基转移到另一种聚合物或单体来重新开始生长。
[0076]
有利地，所述链转移剂选自由单官能或多官能硫醇、和烷基卤化物组成的组。
[0077]
特别地，可作为转移剂的烷基卤化物包括溴三氯甲烷、四氯甲烷和四溴甲烷。
[0078]
特别有利地，所述链转移剂是环脂肪族硫醇或脂肪族硫醇，该硫醇通常具有从2至约24个碳原子，优选地2至12个碳原子，更优选地6个碳原子，并且任选地具有选自氨基、羟基和羧基基团的另外的官能团。
[0079]
链转移剂的特别优选的示例是巯基乙酸、2-巯基乙醇、十二烷硫醇、己烷硫醇、及其混合物，优选地己烷硫醇。
[0080]
在本发明的上下文中，特别地转移剂以以下量存在于反应混合物中：相对于亲水性单体a)的摩尔数，以摩尔计从1.5％至少于6％，优选地从1.5％至4.5％，并且特别地3％。因此，在本发明的上下文中，特别地基质基于以以下量的转移剂：相对于亲水性单体a)的摩尔数，以摩尔计从1.5％至少于6％，优选地从1.5％至4.5％，并且特别地3％。
[0081]
在优选的实施例中，根据本发明的不可生物降解的栓塞微球的基质基于以相对于亲水性单体a)的摩尔数从1.5至4.5mol％的量转移剂。
[0082]
有利地，根据本发明的微球包含基于1.5％至3％，优选地3％的转移剂的交联基质。
[0083]
以上述量，特别地相对于亲水性单体a)的摩尔数1.5与3mol％之间的量向反应混合物中添加转移剂，特别地可以避免本发明的微球在溶胀和灭菌后出现形态学缺陷。
[0084]
在本发明的上下文中，不存在形态学缺陷被定义为不存在以下：双或孪生微球(twinned microsphere)；包含在其他微球中的微球本身(或珠中珠)；断裂的微球或断裂的微球的残留物；微球的堆叠或簇；破裂的微球；变形的微球(非球形的形状)；在放大高达100倍下，表面不光滑或具有聚合物碎片的微球；微球中有内含物；水滴被捕获在微球中。
[0085]
有利地，本发明的栓塞微球的杨氏模量值通常在3000pa与30 000pa之间，优选地3000pa与25 000pa之间，更优选地3000pa与10 000pa之间，优选地5000pa与10 000pa之间，这表明微球具有相当大的抗压性，与所述微球的最佳溶胀度和弹性有关。
[0086]
有利地，根据本发明，不可生物降解的栓塞微球包含均匀的交联基质。
[0087]
在本发明的意义上，“均匀的交联基质”意指由三维聚合物网络组成的基质，其中组分均匀分布。这限制了结构缺陷的存在，并增强了所述网络的坚固性。事实上，典型地，在不存在均匀的交联基质的情况下，聚合物网络将在压缩力的作用下在其不均匀的区域水平处断裂。
[0088]
在本发明的上下文中，将球体定义为表面，其所有点与一个称为中心的点的距离相等。
[0089]
在本发明的意义上，“微球”意指球形颗粒，这些球形颗粒在溶胀后的直径为从20至1200μm，例如从20至100μm、从40至150μm、从100至300μm、从300至500μm、从500至700μm、从700至900μm或从900至1200μm，其由光学显微镜确定。微球有利地具有足够小的直径以使用内径在数百微米至超过一毫米的范围内的针头、导管或微导管注射。
[0090]
表述“溶胀后”表示微球的尺寸是在制备过程中涉及的聚合和灭菌步骤之后考虑的。灭菌步骤涉及例如聚合步骤后，在高压釜中在高温下，通常在高于100℃的温度下，优选地在110℃与150℃之间的温度，优选地121℃下，微球的通过。在该灭菌步骤中，微球继续溶胀。根据本发明，微球的整体溶胀度是受控的。将溶胀度定义为：
[0091][0092]
其中mw是以克为单位的1ml沉积微球的重量，并且md是以克为单位的1ml已被冻干的沉积微球的重量。
[0093]
在本发明的意义上，“受控的溶胀度”意指溶胀度随批次变化是可再现的，特别地一个批次与另一个批次的差异小于15％。
[0094]
在本发明的意义上，“沉积微球”意指将微球放入容器中的溶液中，然后在不搅拌的情况下放置足够长的时间以使它们沉到含有它们的容器的底部，从而可以去除上清液。
[0095]
在本发明的意义上，“冻干微球”意指经过冷冻随后升华脱水的微球。
[0096]
在本发明的意义上，“亲水性单体”意指对水具有强亲和力，即倾向于溶解于水中、与水混合、或者通过水润湿或聚合后能够在水中溶胀的单体。
[0097]
本发明的亲水性单体a)选自n-乙烯吡咯烷酮、和具有下式(i)的单体：
[0098]
(ch2＝cr1)-co-d(i)
[0099]
其中：
[0100]
d代表o-z或nh-z，z代表(c
1-c6)烷基、-(cr2r3)
m-ch3、-(ch
2-ch
2-o)
m-h、-(ch
2-ch
2-o)
m-ch3、-c(r4oh)m或-(ch2)
m-nr5r6，其中m优选地代表1与10之间的整数，更优选地m等于4或5。
[0101]
有利地，根据本发明的亲水性单体a)选自由以下组成的组：n-乙烯吡咯烷酮、乙烯醇、2-羟乙基甲基丙烯酸酯、丙烯酸仲丁酯、丙烯酸正丁酯、丙烯酸叔丁酯、甲基丙烯酸叔丁酯、甲基丙烯酸甲酯、n-二甲基氨基乙基(甲基)丙烯酸酯、n,n-二甲基氨基丙基-(甲基)丙烯酸酯、叔丁基氨基乙基(甲基)丙烯酸酯、n,n-二乙基氨基丙烯酸酯、聚(环氧乙烷)(甲基)
丙烯酸酯、甲氧基聚(环氧乙烷)(甲基)丙烯酸酯、丁氧基聚(环氧乙烷)(甲基)丙烯酸酯、聚(乙二醇)(甲基)丙烯酸酯、甲氧基聚(乙二醇)(甲基)丙烯酸酯、丁氧基聚(乙二醇)(甲基)丙烯酸酯、聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯(m-pegma)、及其混合物。
[0102]
更有利地，亲水性单体a)是聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯(m-pegma)。
[0103]
在本发明的上下文中，特别地亲水性单体a)以以下量存在于反应混合物中：相对于单体的总摩尔数，以摩尔计从20％至95％，优选地30％至95％，更优选地从45％至95％，优选地从45％至75％，特别地从45％至70％，更特别地从45％至65％。
[0104]
在本发明的意义上，“交联单体”意指在每个可聚合末端处具有双键的至少双官能但也多官能的单体。交联单体与混合物中的其他单体组合，允许形成交联网络。本领域技术人员可以容易地选择单体混合物中一种或多种交联单体的结构和量以提供所需的交联密度。交联剂对微球的稳定性也是有利的。交联剂防止微球溶解于无论任何溶剂中。交联剂还能够改善微球的可压缩性，这对栓塞是有利的。
[0105]
在本发明的意义上，“不可生物降解的亲水性交联剂”意指如上定义的交联剂，该交联剂对水具有强亲和力并且在哺乳动物体内，特别是人体的生理条件下不能被降解。事实上，当分子含有足够的功能位点时，允许分子的生物降解，这些功能位点可以在生理条件下，特别地被哺乳动物体内的特别地人体内的内源性酶切割和/或在生理ph(通常约7.4)下被内源性酶切割。在生理条件下可切割的功能位点特别是酰胺键、酯键和缩醛。因此，包含不足数量的所述功能位点的分子将被视为不可生物降解的。在本发明的上下文中，交联单体含有少于20个在生理条件下可被切割的功能位点，优选地少于15个位点、更优选地少于10个位点、甚至更优选地少于5个位点。
[0106]
特别地，根据本发明的不可生物降解的直链或支链亲水性交联剂是可溶于有机溶剂并包含二丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、和/或甲基丙烯酰胺可聚合基团的不可生物降解的交联剂。
[0107]
有利地，交联剂具有以下通式(iia)或(iib)：
[0108]
(ch2＝cr7)co-nh-a-hn-oc(cr8＝ch2)(iia)、
[0109]
(ch2＝cr7)co-o-a-o-oc(cr8＝ch2)(iib)，
[0110]
其中
[0111]
r7和r8彼此独立地代表h或(c
1-c6)烷基，如甲基基团，优选地r7和r8代表h；并且
[0112]
a优选地单独或与至少一个与其键合的原子一起代表(c
1-c6)亚烷基、聚乙二醇(peg)、聚硅氧烷、聚(二甲基硅氧烷)(pdms)、聚甘油酯(pge)或双酚a。
[0113]
甚至更有利地，a单独或与至少一个与其键合的原子一起代表(c
1-c6)亚烷基或聚乙二醇(peg)，优选地聚乙二醇(peg)。
[0114]
在以上a的定义的上下文中，聚乙二醇的长度范围为从200至10 000g/mol，优选地从200至2000g/mol，更优选地从500至1000g/mol。
[0115]
作为在本发明的上下文中可用的交联单体的示例，我们可以提及(但不限于)：1,4-丁二醇二丙烯酸酯、季戊四醇四丙烯酸酯、亚甲基双丙烯酸酰胺、甘油1,3-二甘油酸酯二丙烯酸酯和聚(乙二醇)二甲基丙烯酸酯(pegdma)。
[0116]
有利地，交联单体是聚(乙二醇)二甲基丙烯酸酯(pegdma)，该聚乙二醇单元的长度范围为从200至10 000g/mol，优选地从200至2000g/mol，更优选地从500至1000g/mol。
[0117]
在本发明的上下文中，交联单体特别地以以下量存在于反应混合物中：相对于单体的总摩尔数，从1％至15％，优选地从2％至10％，特别地2％至7％，更特别地2％至5％，特别地5mol％。
[0118]
在本发明的特定实施例中，微球的交联聚合物基质仅基于以上述比例的如上定义的基础成分a)、b)和c)，未向反应混合物中添加其他基础成分。因此明显的是，上述单体a)和b)的比例之和必须等于100％。
[0119]
根据本发明的特定方面，根据本发明的微球的交联基质进一步基于具有下式(iii)的至少一种已电离的或可电离的单体：
[0120]
(ch2＝cr9)-m-e(iii)
[0121]
其中：
[0122]
·
r9代表h或(c
1-c6)烷基；
[0123]
·
m代表单键或具有1至20个碳原子的二价基团，优选地单键；
[0124]
·
e代表已电离的或可电离的基团，有利地，e选自由以下组成的组：-cooh、-coo-、-so3h、-so
3-、-po4h2、-po4h-、-po
42-、-nr
10r11
、-nr
12r13r14
，
[0125]
·r10
、r
11
、r
12
、r
13
和r
14
彼此独立地代表h或(c
1-c6)烷基。
[0126]
在本发明的意义上，“已电离的或可电离的基团”意指带电或可能带电的基团(以离子的形式)，即根据介质的ph值，带有至少一个正电荷或负电荷。例如，cooh基团可以以coo-形式电离，并且nh2基团可以呈电离的nh
3
形式。
[0127]
将已电离的或可电离的单体引入反应混合物中可以增加所得微球的亲水性，从而增加所述微球的溶胀度，使得它们更容易通过导管和微导管注射。已电离的或可电离的单体的存在特别地促进在微球内装载活性物质。
[0128]
优选地，已电离的或可电离的单体是阳离子单体，该阳离子单体有利地选自由以下组成的组：(甲基丙烯酰基氧基)乙基磷酰基胆碱、2-(二甲基氨基)乙基(甲基)丙烯酸酯、2-(二乙基氨基)乙基)(甲基)丙烯酸酯和2-((甲基)丙烯酰基氧基)乙基)-三甲基氯化铵；有利地，阳离子单体是(二乙基氨基)乙基(甲基)丙烯酸酯。有利地，根据本发明的微球的交联基质可以通过向反应混合物中添加基于单体总量的1与40mol％之间的上述阳离子单体而获得。优选地，当所得微球不旨在装载活性物质时，相对于单体的总摩尔数通过向反应混合物中添加以摩尔计5％与15％之间的已电离的或可电离的单体，优选地通过添加10％的已电离的或可电离的单体，获得根据本发明的交联基质。根据另一个实施例，当微球旨在装载活性物质时，相对于单体的总摩尔数通过向反应混合物中添加20％与40％之间的已电离的或可电离的单体，优选地通过向反应混合物中添加20％至30％，优选地30mol％的已电离的或可电离的单体，获得根据本发明的交联基质。
[0129]
在另一个有利的实施例中，已电离的或可电离的单体是阴离子单体，该阴离子单体有利地选自由以下组成的组：丙烯酸、甲基丙烯酸、2-羧乙基丙烯酸酯、羧乙基丙烯酸酯的2-寡聚物、3-磺丙基(甲基)丙烯酸酯、2-((甲基丙烯酰基氧基)乙基)二甲基-(3-磺丙基)铵的钾盐和氢氧化物。有利地，根据本发明的不可生物降解的栓塞微球的交联基质可以通过向反应混合物中添加基于单体总量的1与40mol％之间，更有利地10与30mol％之间的上述阴离子单体而获得。
[0130]
特别有利地，已电离的或可电离的单体是甲基丙烯酸。有利地，根据本发明的交联
基质基于以10与30mol％之间的量(基于单体的总量)的甲基丙烯酸(ma)。
[0131]
根据本发明的优选的实施例，根据本发明的微球的交联基质进一步基于至少一种卤化单体，优选地碘化单体。
[0132]
引入卤化单体，优选地碘化单体，具有增加所得微球密度的作用。令人惊讶地，发明人发现当在反应混合物中以有利地为相对于单体的总数在1与15mol％之间的量使用卤化单体(典型地碘化单体)以获得本发明的交联基质时，所得栓塞微球在包含50％的生理盐水溶液和50％的造影剂的混合物中形成最佳稳定悬浮液。换句话说，以上述量引入卤化单体，特别地碘化单体，可以防止微球漂浮到所述混合物的表面。
[0133]
在本发明的上下文中，特别地将卤化单体以以下量添加到反应混合物中：相对于单体的总摩尔数，以摩尔计从5％至15％，优选地5％至10％，更特别地从5％至7％。
[0134]
此外，使用相对于单体的总摩尔数以摩尔计15％或更少的卤代单体，所得微球不是不透射线的。以不足以赋予微球不透射线性的量引入卤化单体。
[0135]
有利地，卤化单体具有以下通式(iv)：
[0136]
(ch2＝cr
15
)-co-y(iv)
[0137]
其中
[0138]
·
y代表o-w、(o-r
16
)
p-w、(nh-r
16
)
p-w或nh-w，w代表ar、l-ar，并且p是1与10之间，优选地1与4之间的整数，其中：
[0139]
·
ar代表(c
5-c
36
)芳基或(c
5-c
36
)杂芳基基团，所述基团被碘和/或溴的一个、两个或三个原子取代，并且任选地被选自以下的一个至四个，优选地两个或三个基团取代：(c
1-c
10
)烷基、-nrarb、-nrccord、-coore、-orf、-ocorg、-conrhri、-oconr
jrk
、-nr
l
cooro、-nrrconr
srt
、-ocooru、和-corv；
[0140]
·
l代表-(ch2)
n-、-(hcch)
n-、-o-、-s-、-so-、-so
2-、-oso
2-、-nr
17-、-co-、-coo-、-oco-、-ocoo-、-conr
18-、-nr
19
co-、-oconr
20-、-nr
21
coo-或-nr
22
conr
23-，n是从1至10的整数；
[0141]
·r17
至r
23
以及ra至rv彼此独立地代表氢原子、(c
1-c
10
)烷基、或基团-(ch
2-ch
2-o)
q-r'，所述(c
1-c
10
)烷基任选地被1至10个oh基团取代，r'是氢原子或-(c
1-c6)烷基，并且q是1与10之间，优选地1与5之间的整数；
[0142]
·r15
代表h或(c
1-c6)烷基；
[0143]
·r16
代表选自以下的基团：(c
1-c
36
)亚烷基、(c
3-c
36
)环亚烷基、(c
2-c
36
)亚烯基、(c
3-c
36
)环亚烯基、(c
2-c
36
)亚炔基、(c
3-c
36
)环亚炔基、(c
5-c
36
)亚芳基和(c
5-c
36
)杂亚芳基。
[0144]
在本发明的上下文中，卤化单体更有利地是具有如上定义的通式(iv)的单体，其中y代表nh-w、o-w或(o-r
16
)
p-w，有利地nh-w或(o-r
16
)
p-w，更有利地(o-r
16
)
p-w，w代表ar或l-ar，p、r
16
、l和ar如上定义。优选地，r
16
是(c
1-c
36
)亚烷基，特别地(c
1-c
18
)亚烷基，更特别地(c
1-c6)亚烷基；l代表-oco-；并且ar代表(c
5-c
36
)芳基，特别地(c
5-c
10
)芳基，更特别地苯基，其被碘和/或溴的、优选地碘的一个、两个或三个原子，以及任选地选自以下的两个或三个基团取代：-nrarb、-nrccord、-coore、-ocorg、-conrhri、-oconr
jrk
、-nr
l
coor
o-和-nrrconr
srt
，优选地-nrarb、-nrccord。
[0145]
有利地，卤化单体是具有如上定义的通式(iv)的单体，其中y代表nh-w或(o-r
16
)
p-w，更有利地(o-r
16
)
p-w，w代表ar或l-ar，并且p、r
16
、l和ar如上定义。优选地，r
16
是(c
2-c
36
)亚烷基，特别地(c
2-c
18
)亚烷基，更特别地(c
2-c6)亚烷基；l代表-oco-、-c(o)nr
17-、或-nr
18c(o)-；并且ar代表(c
5-c
36
)芳基，特别地(c
5-c
10
)芳基，更特别地苯基，其被碘和/或溴的、优选地碘的一个、两个或三个原子，以及任选地选自以下的两个或三个基团取代：-nrarb、-nrccord、-coore、-ocorg、-conrhri、-oconr
jrk
、-nr
l
coor
o-和-nrrconr
srt
，优选地-nrarb、-nrccord和-c(o)nrhri。
[0146]
有利地，ar代表(c
5-c
10
)芳基，更特别地苯基，其被碘和/或溴的、优选地碘的三个原子，以及任选地选自以下的两个基团取代：(c
1-c
10
)烷基、-nrarb、-nrccord、-coore、-ocorg、-conrhri、-oconr
jrk
、-nr
l
coor
o-和-nrrconr
srt
。
[0147]
有利地，ar代表苯基，该苯基被碘和/或溴的、优选地碘的三个原子，以及任选地选自以下的两个基团取代：(c
1-c
10
)烷基、-nrarb、-nrccord、-coore、-ocorg、-conrhri、-oconr
jrk
、-nr
l
coor
o-和-nrrconr
srt
，有利地选自(c
1-c
10
)烷基、-nrarb、-nrccord、-coore、-conrhri、-nr
l
coor
o-和-nrrconr
srt
。
[0148]
有利地，卤化单体是具有如上定义的通式(iv)的单体，其中y代表o-c6h4i、o-c6h3i2、o-c6h2i3、nh-c6h4i、nh-c6h3i2、nh-c6h2i3、o-ch
2-ch
2-c(o)-c6h4i、o-ch
2-ch
2-o-c(o)-c6h3i2、o-ch
2-ch
2-o-c(o)-c6h2i3、nh-ch
2-ch
2-c(o)-c6h4i、nh-ch
2-ch
2-o-c(o)-c6h3i2、或nh-ch
2-ch
2-o-c(o)-c6h2i3，特别地o-c6h2i3、nh-c6h2i3、o-ch
2-ch
2-o-c(o)-c6h2i3、或nh-ch
2-ch
2-o-c(o)-c6h2i3。
[0149]
在另一个实施例中，卤化单体具有以下通式(vi)：
[0150]
(ch2＝cr
29
)-co-y'(vi)
[0151]
其中
[0152]
·r29
代表h或(c
1-c6)烷基；
[0153]
·
y'代表(o-r
30
)
t-w'-ar'、或nh-w'-ar'，t是1与10之间，优选地1与4之间的整数；
[0154]
·r30
代表选自(c
2-c
36
)亚烷基的基团；
[0155]
·
w'代表单键、-conr
31-、或-nr
32
co-；
[0156]
·
ar'代表(c
5-c
36
)芳基基团，所述基团被碘和/或溴的一个、两个或三个原子取代，并且任选地被选自以下的一个至四个，优选地两个或三个基团取代：(c
1-c
10
)烷基、-nr
33r34
、-nr
35
cor
36
、-coor
37
、-or
38
、-ocor
39
、-conr
40r41
、-oconr
42r43
、-nr
44
coor
45
、-nr
46
conr
47r48
、-ocoor
49
、和-cor
50
；
[0157]
·r31
和r
32
彼此独立地代表氢原子或(c
1-c6)烷基；
[0158]
·r33
至r
50
彼此独立地代表氢原子、(c
1-c
10
)烷基、或基团-(ch
2-ch
2-o)
t'-r"，所述(c
1-c
10
)烷基任选地被1至10个oh基团取代，r"是氢原子或-(c
1-c6)烷基，并且t'是1与10之间，优选地1与5之间的整数。
[0159]
有利地，r
29
代表(c
1-c6)烷基，更有利地(c
1-c3)烷基，更有利地甲基。
[0160]
有利地，r
30
代表(c
2-c
18
)亚烷基，更特别地(c
2-c6)亚烷基，更有利地亚乙基。
[0161]
有利地，r
31
和r
32
彼此独立地代表氢原子。因此，w'有利地代表单键、-c(o)nh-、或-nhc(o)-。
[0162]
有利地，ar'代表(c
5-c
10
)芳基，更特别地苯基，其被碘和/或溴的、优选地碘的一个、两个或三个原子，以及任选地选自以下的两个或三个基团取代：(c
1-c
10
)烷基、-nr
33r34
、-nr
35
c(o)r
36
、-c(o)or
37
、-or
38
、-oc(o)r
39
、-c(o)nr
40r41
、-oc(o)nr
42r43
、-nr
44
c(o)or
45
、-nr
46
c(o)nr
47r48
、-oc(o)or
49
、和-c(o)r
50
。
[0163]
有利地，ar'代表(c
5-c
10
)芳基，更特别地苯基，其被碘和/或溴的、优选地碘的三个原子，以及任选地选自以下的两个基团取代：(c
1-c
10
)烷基、-nr
33r34
、-nr
35
c(o)r
36
、-c(o)or
37
、-or
38
、-oc(o)r
39
、-c(o)nr
40r41
、-oc(o)nr
42r43
、-nr
44
c(o)or
45
、-nr
46
c(o)nr
47r48
、-oc(o)or
49
、和-c(o)r
50
。
[0164]
有利地，ar'代表苯基，该苯基被碘和/或溴的、优选地碘的三个原子，以及任选地选自以下的两个基团取代：(c
1-c
10
)烷基、-nr
33r34
、-nr
35
c(o)r
36
、-c(o)or
37
、-or
38
、-oc(o)r
39
、-c(o)nr
40r41
、-oc(o)nr
42r43
、-nr
44
c(o)or
45
、-nr
46
c(o)nr
47r48
、-oc(o)or
49
、和-c(o)r
50
，有利地选自(c
1-c
10
)烷基、-nr
33r34
、-nr
35
c(o)r
36
、-c(o)or
37
、-or
38
、-c(o)nr
40r41
、-nr
44
c(o)or
45
、-nr
46
c(o)nr
47r48
、-oc(o)or
49
、和-c(o)r
50
。
[0165]
有利地，卤化单体选自具有以下通式(vi)的化合物：
[0166][0167]
有利地，卤化单体选自以下化合物：
[0168][0169]
更有利地，卤化单体选自具有下式(iva)的(三碘苯甲酰基)氧代乙基甲基丙烯酸酯(maoetib)：
[0170][0171]
或具有下式的2-(2-(2-(2,3,5-三碘苯甲酰胺)乙氧基)乙基甲基丙烯酸酯：
[0172][0173]
在本发明的上下文中，根据本发明的微球的交联基质进一步基于至少一种着色的单体，用于使微球肉眼可见。这特别地使得能够在注射前验证微球悬浮液在注射器中是适当均匀的，并监测注射速率。
[0174]
因此，根据特定实施例，根据本发明的微球的交联基质进一步基于具有以下通式(v)的至少一种着色的单体：
[0175]
[0176]
其中，
[0177]
·
z1和z2彼此独立地代表h或or
26
，r
26
代表h或(c
1-c6)烷基，有利地z1和z2代表h；
[0178]
·
x代表h或卤素如cl，有利地h；
[0179]
·r24
代表选自以下的基团：直链或支链(c
1-c6)亚烷基、(c
5-c
36
)亚芳基、(c
5-c
18
)亚芳基-o-r
27
、(c
5-c
18
)杂亚芳基和(c
5-c
18
)杂亚芳基-o-r
28
，r
27
和r
28
代表(c
1-c6)烷基或(c
1-c6)亚烷基，有利地r
24
代表基团-c6h
4-o-(ch2)
2-或-c(ch3)
2-ch
2-。
[0180]
·r25
代表h或(c
1-c6)烷基，有利地(c
1-c6)烷基，特别地甲基。
[0181]
有利地，着色的单体具有下式(va)或(vb)：
[0182][0183]
在本发明的上下文中，特别地将着色的单体以以下量添加到反应混合物中：相对于单体的总摩尔数，以摩尔计从0％至1％，优选地从0％至0.5％，更特别地从0.01％至0.2％，更优选地从0.02％至0.2％，并且甚至更特别地从0.04％至0.1％。
[0184]
磁共振成像(mri)用于医疗环境中，用于提供患者身体内部结构的二维截面图像，而不会将其暴露于有害辐射。此外，根据本发明的栓塞微球的交联基质可以进一步基于用于使微球在来自磁共振成像的扫描中可见的颗粒。
[0185]
因此，有利地，根据本发明的微球的交联基质进一步基于在磁共振成像(mri)中可见的试剂，如氧化铁、钆螯合物或镁螯合物的纳米粒子，有利地氧化铁的纳米颗粒如uspio(超小型超顺磁性氧化铁或超小型顺磁性氧化铁＝基于展示出使它们在mri中可见的超顺磁性特性的铁化合物的磁性颗粒)。
[0186]
在本发明的上下文中，有利地，将在mri中可见的颗粒以按有机相体积计从0％至10％，优选地从0.1％至10％的量添加到反应混合物中。
[0187]
在本发明的上下文中，当微球的交联基质不包含作为基础成分的已电离的或可电离的单体时，其有利地基于：
[0188]-94.5％至98％，优选地94.5％至96％，优选地94.96％的亲水性单体a)；
[0189]-2％至5％，优选地3％至5％，优选地5％的不可生物降解的亲水性交联单体b)；
[0190]-1％至3％，优选地3％的转移剂c)；
[0191]-0％至0.5％，优选地0.02％至0.1％，优选地0.04％的着色的单体；以及
[0192]-0％至10％，优选地0％至5％，优选地1％的在mri中可见的颗粒，
[0193]
上述单体中的每一种及其相关百分比的性质如本说明书中以上所定义。明显的是，上述单体的百分比之和必须等于100％。
[0194]
根据本发明的另一个实施例，根据本发明的未装载活性物质的微球包含交联基质，该交联基质有利地基于：
[0195]-79.5％至93％，优选地80％至90％，优选地84.96％的亲水性单体a)；
[0196]-2％至5％，优选地3％至5％，优选地5％的不可生物降解的亲水性交联单体b)；
[0197]-1％至3％，优选地3％的转移剂c)；
[0198]-5％至15％，优选地8％至12％，优选地10％的已电离的或可电离的单体；
[0199]-0％至0.5％，优选地0.02％至0.1％，优选地0.04％的着色的单体；以及
[0200]-0％至10％，优选地0％至5％，优选地1％的在mri中可见的颗粒，
[0201]
上述单体中的每一种及其相关百分比的性质如本说明书中以上所定义。明显的是，上述单体的百分比之和必须等于100％。
[0202]
根据本发明的优选的实施例，根据本发明的未装载活性物质的微球包含交联基质，该交联基质有利地基于：
[0203]-63％至95％，优选地70％至90％，优选地75％至80％，优选地79.96％的亲水性单体a)；
[0204]-2％至5％，优选地3％至5％，优选地5％的不可生物降解的亲水性交联单体b)；
[0205]-1％至3％，优选地3％的转移剂c)；
[0206]-5％至15％，优选地8％至12％，优选地10％的已电离的或可电离的单体；
[0207]-5％至7％，优选地5％至6％，优选地5％的卤化单体；
[0208]-0％至0.5％，优选地0.02％至0.1％，优选地0.04％的着色的单体；以及
[0209]-0％至10％，优选地0％至5％，优选地1％的在mri中可见的颗粒，
[0210]
上述单体中的每一种及其相关百分比的性质如本说明书中以上所定义。明显的是，上述单体的百分比之和必须等于100％。
[0211]
在本发明的上下文中，根据本发明的装载活性物质的微球包含交联基质，该交联基质有利地基于：
[0212]-45％至65％，优选地50％至65％，优选地55％至65％，优选地64.96％的亲水性单体a)；
[0213]-2％至5％，优选地3％至5％，优选地5％的不可生物降解的亲水性交联剂b)；
[0214]-1％至3％，优选地3％的转移剂c)；
[0215]-20％至40％，优选地30％至40％，优选地30％的已电离的或可电离的带电荷单体；
[0216]-0％至0.5％，优选地0.02％至0.1％，优选地0.04％的着色的单体；以及
[0217]-0％至10％，优选地0％至5％，优选地1％的在mri中可见的颗粒，
[0218]
上述单体中的每一种及其相关百分比的性质如本说明书中以上所定义。明显的是，上述单体的百分比之和必须等于100％。
[0219]
优选地，根据本发明的装载活性物质的微球包含交联基质，该交联基质有利地基于：
9)；2-羟基-2-甲基苯丙酮(1173，7473-98-5)、2,2-二甲氧基-2-苯基苯乙酮(24650-42-8)、2,2-二甲氧基-2-苯基苯乙酮(24650-42-8)或2-甲基-4'-(甲基硫代)-2-吗啉代苯丙酮(71868-10-5)。
[0248]
在该反向悬浮的方法中，表面活性剂可以选自由以下组成的组：山梨聚糖酯，如山梨聚糖单月桂酸酯(20)、山梨聚糖单棕榈酸酯(40)、单油酸山梨聚糖(80)、和山梨聚糖三油酸酯(85)，羟乙基纤维素，硬脂酸甘油酯和peg硬脂酸酯的混合物以及醋酸纤维素。
[0249]
上述方法中使用的油可以选自石蜡油、硅油和有机溶剂，如己烷、环己烷、乙酸乙酯或乙酸丁酯。
[0250]
当根据本发明的交联基质由至少一种已电离的或可电离的单体的聚合获得时，药物、活性物质、诊断剂或大分子也可装载在微球上，即通过非共价相互作用吸附在交联基质上，任选地存在本领域技术人员熟悉的一种或多种药学上可接受的赋形剂。这种捕获药物或活性物质的特别方式称为物理封装。对要装载的药物或活性物质没有特别要求。
[0251]
装载可以通过本领域技术人员熟悉的许多方法进行，如被动吸附(交联基质在药物溶液中的溶胀)或通过离子相互作用。这些方法例如在国际申请wo 2012/120138中描述，特别是从第22页第20行到第26页第7行。封装的效率主要取决于两种结构之间的相容性和/或有利的相互作用。
[0252]
在本发明的上下文中，微球可装载有药物、活性物质或诊断剂，并且从而允许其在目标部位释放，所述目标部位位于哺乳动物体内，特别地人体内。因此，根据本发明的微球的交联基质可装载有有利地具有低于5000da，通常低于1000da的分子量的药物或活性物质或诊断剂，该药物或活性物质有利地选自由以下组成的组：抗炎剂、局部麻醉剂、止痛药、抗生素、抗癌剂、类固醇、防腐剂及其混合物。
[0253]
优选地，根据本发明的聚合物可装载有抗癌剂。
[0254]
抗癌剂优选地选自蒽环类，如阿霉素、表柔比星或伊达比星、铂复合物，与蒽环类相关的化合物，如米托蒽醌和奈莫柔比星，抗生素，如丝裂霉素c博来霉素和放线菌素d，其他抗肿瘤化合物，如伊立替康、5-氟-尿嘧啶索拉非尼舒尼替尼瑞戈非尼、布立尼布、奥安替尼、林斯替尼、埃罗替尼、卡博替尼、福瑞替尼(foretinib)、替范替尼(tivantinib)、福莫司汀、牛磺莫司汀(tcnu)、卡莫司汀、胞嘧啶c、环磷酰胺、阿糖胞苷(cytosine arabinoside或cytarabine)、紫杉醇、多西他赛、甲氨喋呤、依维莫司peg-精氨酸脱亚氨基酶、喃氟啶/吉美拉西/奥替拉西组合muparfostat、培维a酸(peretinoine)、吉西他滨、贝伐单抗雷莫芦单抗、氟尿苷、免疫刺激剂，如gm-csf(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)以及重组形式：莫拉司亭(molgramostim)或沙莫司亭(sargramostim)ok-432白介素-2、白介素-4和肿瘤坏死因子-α(tnfalpha)、抗体、放射性元素、这些放射性元素与螯合物的复合物、核酸序列和这些化合物中的一种或多种的混合物(优选地
一种或多种蒽环类的混合物)。
[0255]
优选地，抗癌剂选自蒽环类、免疫刺激剂、铂复合物、抗肿瘤药及其混合物。
[0256]
甚至更优选地，抗癌剂选自蒽环类、抗体、抗肿瘤药及其混合物。
[0257]
抗体例如选自抗pd-1、抗pd-l1、抗ctla-4、抗cea(癌胚抗原)或其混合物。
[0258]
抗pd-1例如是纳武单抗或派姆单抗。
[0259]
抗pd-l1例如是阿维鲁单抗、度伐鲁单抗或阿特珠单抗。
[0260]
抗ctla-4例如是伊匹单抗或曲美利木单抗。
[0261]
甚至更有利地，抗癌药物选自由以下组成的组：紫杉醇、阿霉素、表柔比星、伊达比星、伊立替康、gm-csf(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)、肿瘤坏死因子-α(tnfalpha)、抗体、及其混合物。
[0262]
优选地局部麻醉剂选自利多卡因、布比卡因及其混合物。
[0263]
抗炎剂可以选自：布洛芬、尼氟酸、地塞米松、萘普生及其混合物。
[0264]
在本发明的上下文中，特别地通过临时吸附，聚合物可以装载大分子，这些大分子选自由以下组成的组：酶、抗体、细胞因子、生长因子、凝血因子、激素、质粒、反义寡核苷酸、sirna、核酶、dna酶(也称为dnazyme)、适配体、抗炎蛋白、骨形态发生蛋白(bmp)、促血管生成因子、血管内皮生长因子(vegf)和tgf-β，以及血管生成抑制剂或抗酪氨酸激酶及其混合物。
[0265]
抗炎蛋白例如是英利昔单抗或列洛西普(rilonacept)及其混合物。
[0266]
促血管生成因子例如是成纤维细胞生长因子(fgf)及其混合物。
[0267]
血管生成抑制剂例如是贝伐单抗、雷莫芦单抗、奈伐苏单抗(nesvacumab)、奥拉木单抗、伐努赛珠单抗(vanucizumab)、利妥木单抗(rilotumumab)、依玛妥珠单抗(emibetuzumab)、阿柏西普(aflibercept)、菲拉妥珠单抗、哌加他尼及其混合物。
[0268]
抗酪氨酸激酶例如是乐伐替尼、索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、凡德他尼、阿昔替尼、瑞戈非尼、卡博替尼、呋喹替尼、尼达尼布、安罗替尼、莫特塞尼、西地尼布、索凡替尼、多韦替尼(dovetinib)、利尼法尼(linifanib)及其混合物。
[0269]
有利地，聚合物可以装载大分子，这些大分子选自抗酪氨酸激酶、tgf-β、血管生成抑制剂及其混合物。
[0270]
在第二方面，本发明涉及包含与有利地用于通过注射施用的药学上可接受的媒介物联合的根据本发明的不可生物降解的栓塞微球的药物组合物。
[0271]
药学上可接受的媒介物的示例包含但不限于：注射用水、盐水溶液(也称为生理盐水溶液)、淀粉、水凝胶、聚乙烯吡咯烷酮、多糖、透明质酸酯、血浆、用于x射线、磁共振或超声检查成像的造影剂、缓冲剂、防腐剂、胶凝剂和/或表面活性剂。有利地，药学上可接受的媒介物是生理盐水溶液、注射用水、用于x射线、磁共振或超声检查成像的造影剂或其混合物。更有利地，药学上可接受的媒介物是生理盐水溶液、用于x射线、磁共振或超声检查成像的造影剂、或盐水溶液与用于x射线、磁共振或超声检查成像的造影剂的混合物。
[0272]
根据本发明，造影剂优选地是用于通过x射线成像的造影剂。它有利地是非离子碘化水溶性造影剂，例如像碘比醇碘帕醇碘美普尔碘佛醇碘海醇碘喷托
碘昔兰碘普罗胺甲泛葡胺碘沙考碘曲仑碘克沙醇碘美醇(iosimenol)和碘西胺及其混合物。
[0273]
根据另一个实施例，造影剂是用于磁共振成像(mri)的造影剂。其有利地是钆螯合物
[0274]
根据另一个实施例，造影剂是用于通过超声检查成像的造影剂。其有利地是六氟化硫
[0275]
在本发明的特定实施例中，药物组合物包含与生理盐水溶液联合的根据本发明的不可生物降解的栓塞微球，所述组合物旨在与如上定义的至少一种用于通过x射线、磁共振或超声检查成像的造影剂，特别地用于通过x射线成像的造影剂混合，然后通过注射施用，所述混合涉及制备根据本发明的微球的悬浮液。
[0276]
药物组合物有利地具有可接受的注射粘度。
[0277]
在根据本发明的特定实施例中，根据本发明的药物组合物包含与如上定义的生理盐水溶液与造影剂的混合物联合的根据本发明的不可生物降解的栓塞微球，生理盐水溶液和造影剂以从70/30至20/80，有利地从50/50至20/80，优选地50/50的比例存在。
[0278]
有利地，当根据本发明的药物组合物包含通过反应混合物(该反应混合物包含如在本发明说明书中描述的从5％至10％，更优选地从5％至7％的卤化单体)的聚合而获得的微球时，所述药物组合物包含与生理盐水溶液与造影剂的混合物联合的所述微球，生理盐水溶液与造影剂的比例是80/20与0/100之间、优选地70/30与40/60之间，特别地50/50。优选地，所述微球的尺寸为500至700μm、700至900μm或900至1200μm。以这种方式，微球在溶液中的悬浮液在注射所需时间内是均匀且稳定的。
[0279]
在根据本发明的另一个实施例中，当根据本发明的药物组合物包含通过反应混合物(该反应混合物不包含如在本发明说明书中描述的卤化单体)的聚合而获得的微球时，所述药物组合物包含与生理盐水溶液与造影剂的混合物联合的所述微球，生理盐水溶液与造影剂的比例是80/20与0/100之间。
[0280]
根据本发明的不可生物降解的栓塞微球的应用领域特别地包含血管栓塞，特别地在子宫纤维瘤和化学栓塞的情况下，例如在肝癌(也称为肝细胞癌(hcc)或原发性肝癌)的情况下，它包括通过将血管阻塞与装载于栓塞微球中的一种或多种活性物质或大分子的递送相组合来消除肿瘤。这种技术可以将药物装载集中在肿瘤水平，从而降低全身浓度，同时减少任何不良反应。
[0281]
如上所述，根据本发明的不可生物降解的栓塞微球可以用于各种生物医学目的，这意指它必须与人体或哺乳动物的身体相容。更特别地，合适的生物医学材料不具有溶血特性。
[0282]
本发明进一步涉及转移剂在包含在不可生物降解的栓塞微球中的交联基质的聚合中的特定用途，以允许注射所述微球，特别是在内径范围在几百微米到超过一毫米的导管或微导管中注射。本发明还涉及转移剂在交联基质的聚合中的特定用途，以改善机械特性(溶胀、弹性、坚固性、抗压性)。所述转移剂特别地选自环脂肪族硫醇或脂肪族硫醇，特别地这些环脂肪族硫醇或脂肪族硫醇具有2至24个碳原子，并且任选地具有选自氨基、羟基和
羧基基团的另一种官能团。
[0283]
本发明还涉及包含如上定义的药物组合物和用于肠胃外施用所述组合物的至少一种注射所述组合物的手段的试剂盒。根据本发明，“注射手段”意指允许肠胃外途施用的任何手段。有利地，所述注射手段是一个或多个注射器和/或一个或多个可预填充的注射器和/或一个或多个导管或微导管，用于通过注射施用所述组合物。
[0284]
有利地，所述试剂盒中存在的药物组合物包含与生理盐水溶液、造影剂、或其混合物联合的根据本发明的微球。更有利地，所述药物组合物包含与生理盐水溶液与造影剂的混合物联合的根据本发明的微球，生理盐水溶液与造影剂的比例是80/20与0/100之间，有利地70/30与40/60之间，优选地50/50。
[0285]
有利地，当根据本发明的微球通过反应混合物(该反应混合物包含如在本发明说明书中描述的从5％至10％，更优选地从5％至7％的卤化单体)的聚合而获得时，所述药物组合物包含与生理盐水溶液与造影剂的混合物联合的所述微球，生理盐水溶液与造影剂的比例是60/40与0/100之间、有利地50/50。
[0286]
根据本发明的另一个实施例，当根据本发明的微球通过反应混合物(该反应混合物不包含如在本发明说明书中描述的卤化单体)的聚合而获得时，所述药物组合物包含与生理盐水溶液与造影剂的混合物联合的所述微球，生理盐水溶液与造影剂的比例是80/20与0/100之间。
[0287]
有利地，存在于根据本发明的试剂盒中的注射手段适合于肠胃外施用根据本发明的药物组合物。因此，一种或多种注射器或(微)导管的尺寸将基于根据本发明的微球的尺寸和为栓塞而注射的体积而调整。本领域的技术人员将能够选择合适的注射手段。
[0288]
本发明还涉及试剂盒，该试剂盒一方面包含如上定义的药物组合物，另一方面包含至少一种用于x射线、磁共振或超声检查成像的造影剂，以及任选地用于肠胃外施用的至少一种注射手段。注射手段如上定义。
[0289]
在所述试剂盒中，药物组合物和造影剂分开包装，并旨在在通过注射施用前混合。
[0290]
在所述试剂盒中，至少一种造影剂如上说明书中定义。特别地，至少一种造影剂是如上说明书中定义的用于通过x射线成像的造影剂。
[0291]
在所述试剂盒中，药物组合物有利地包含与用于通过注射施用的药学上可接受的媒介物联合的根据本发明的微球。所述药学上可接受的媒介物可以是例如，但不限于注射用水、生理盐水溶液、淀粉、水凝胶、聚乙烯吡咯烷酮、多糖、透明质酸酯和/或血浆。优选地，在所述试剂盒中，药物组合物有利地包含与生理盐水溶液或注射用水联合的根据本发明的微球。
[0292]
在所述试剂盒中，药物组合物有利地直接包装在适合通过肠胃外途径注射栓塞微球的注射手段中，特别地是注射器中。
[0293]
在所述试剂盒中，造影剂有利地包装在小瓶或直接包装在特别地适合通过肠胃外途径注射栓塞微球的注射手段中，特别地注射器中。
[0294]
在所述试剂盒中，药学上可接受的媒介物与造影剂的比率为80/20与0/100之间，有利地70/30与40/60之间，优选地50/50。有利地，当根据本发明的微球通过反应混合物(该反应混合物包含如在本发明说明书中描述的从5％至10％，优选地从5％至7％的卤化单体)的聚合而获得时，药学上可接受的媒介物与造影剂的比率为70/30与0/100之间，有利地60/
40与20/80之间，优选地50/50。根据本发明的另一个实施例，当根据本发明的微球通过反应混合物(该反应混合物不包含如在本发明说明书中描述的卤化单体)的聚合而获得时，药学上可接受的媒介物与造影剂的比率为80/20与0/100之间。
附图说明
[0295]
图1：灭菌后微球(ms)的平均直径与转移剂浓度的关系。
[0296]
图2：无缺陷微球的百分比与转移剂浓度的关系。
[0297]
图3：微球的示例。a：无缺陷，具有0％的己烷硫醇；b：断裂的，具有0％的己烷硫醇；c：变形的，具有0％的己烷硫醇；d：无缺陷，具有6％的己烷硫醇；e：断裂的，具有6％的己烷硫醇。
[0298]
图4：干提取物与转移剂浓度的关系。
[0299]
图5：溶胀度与转移剂浓度的关系。
[0300]
图6：杨氏模量与转移剂浓度的关系。
[0301]
以下呈现的实例旨在说明本发明。下文中，“微球”一词，无论是单数还是复数，通常将缩写为ms。
[0302]
实例
[0303]-材料与方法
[0304]
·
材料
[0305]
2,2'-偶氮双(2-甲基丙腈)(aibn)、聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯(mn＝300g.mol-1
)(peg)、1-己烷硫醇(95％)、甲基丙烯酸(99％)、聚乙烯醇(mn＝30 000-70 000g.mol-1
)(pva)、巯基乙酸(99％)、1-十二烷硫醇(98％)购自西格玛奥德里奇公司(sigma-aldrich)。甲苯和丙酮购自vwr公司。nacl购自默克公司(merck)。聚乙二醇二甲基丙烯酸酯(mn＝1000g.mol-1
)(pegdma-1000)购自聚合科学公司(polysciences inc.)。紫色染料和碘化单体在加柏公司(guerbet)的研发中心合成。使用如所接收的所有材料，无需另外的纯化。
[0306]
·
方法
[0307]
形态学
[0308]
用morphologi 4仪器(马尔文仪器公司(malvern instruments)，英国)对获得的ms的形态特性进行表征。morphologi 4仪器可用于生成ms图像数据库。它能够显示测量的ms的尺寸分布。通过morphologi 4仪器可以确定26个不同的形态学参数。直径(μm)是要研究的主要参数。
[0309]
将ms放置在morphologi 4仪器的样品架上。对500个ms进行成像并存储在软件的数据库中，用于进行更彻底的分析。在成像过程中使用标准操作程序(sop)，以确保测量的一致性。
[0310]
每次测量后，将有缺陷的ms从ms总数(500个ms)中排除。最可靠的方法包括目视检查每个ms，然后根据它们的缺陷与完整性将它们移除或存储在图像数据库中。还获得了完整ms的直方图、直径平均值和标准偏差。
[0311]
缺陷分析：
[0312]
这里列出了微球(ms)的各种缺陷类别：
[0313]-1类：无缺陷ms
[0314]-2类：连体-孪生(siamese-twin)ms
[0315]-3类：双芯ms
[0316]-4类：孤立的断裂ms
[0317]-5类：残余物或断裂ms的残余物
[0318]-6类：灭菌后的ms堆
[0319]-7类：无uspio的ms芯
[0320]-8类：非常透明的ms(幻影ms)
[0321]-9类：聚合物片段中的ms堆叠
[0322]-10类：破裂的ms
[0323]-11类：含有几个小ms的椭圆形物体
[0324]-12类：变形的ms
[0325]
在基于所研究的500个ms的缺陷调查中，消除有缺陷的ms。因此计算无缺陷ms的百分比：
[0326][0327]
干提取物，按重量计的溶胀度
[0328]
干提取物如下确定：将1ml的沉积ms置于5-ml eppendorf小瓶中，在-80℃下冷冻，并且在冻干机(heto powerdry ll 1500，赛默飞世尔科技公司)中冻干过夜。然后测量冻干后ms的重量。
[0329]
对三个样品进行测量，取平均值作为ms干重的最终值。
[0330]
溶胀度：使用与上述相同的样品制备来计算以ms的重量计的溶胀度：
[0331][0332]
其中(mw)是以克为单位的1ml沉积ms的重量，并且(md)是以克为单位的1ml已被冻干的沉积微球的重量。对三个样品进行测量，取平均值作为以重量计的最终溶胀度值。
[0333]
流变性和可压缩性
[0334]
在hr2 discovery流变仪(ta仪器公司，美国)上测量ms的流变特性。使用单轴压缩模式测量杨氏模量。
[0335]
使用了具有直径为50mm、初始间距为1600μm的板的平面类型几何体。通过珀尔帖(peltier)效应，样品的温度保持在25℃。在测量之前，通过软件将法向力设置为零。然后将具有单层微球的均匀床沉积在板上。
[0336]
进行第一次测量以确定与ms的接触点以及线性变形条件。
[0337]
为此，以16.7μm/s(1mm/min)的速度将板之间的间隙从1600μm减小到700μm，并测量法向力。接触点对应于开始施加法向力的板之间的间隙。在继续减小板之间的间隙时，法向力遵循随所施加变形而变化的线性状态，直到某一点。在这个发散过程中，板之间的间隙对应于从线性状态中退出。
[0338]
然后连续进行3次第二测量，以测量杨氏模量的平均值和测量误差。第二测量包括将上板直接放置在接触点并施加轴向应变，直至从线性状态退出的最大值。然后测得的法
向力随施加的应变呈线性变化。这条曲线的斜率对应于杨氏模量。
[0339]
用于测量杨氏模量的其他方法(方法编号2)
[0340]
使用直径为15.3mm的3d打印活塞，使用压缩机(synergy 800，mts公司，法国)对单个微球进行压缩测试。使用2n力传感器测量施加的力，该传感器可提供从1mn开始的准确、可重复的测量。软件testworks4是用于控制活塞和记录通过传感器测量的数据的界面。有必要使用灯(100w灯泡)照亮含有待分析微球的室，并允许相机清楚地看到微球和活塞。图像处理软件imagej用于通过测量图像中的像素数来测量微球的精确尺寸。活塞的速度固定为1mm/min，测试开始时，活塞位于微球上方约100μm处。
[0341]
通过收集到的数据(力、时间和位移的测量值)，使用赫兹模型计算杨氏模量，赫兹模型适用于两个平板之间的球体压缩。
[0342]
注射ms
[0343]
通过微导管注射ms，以测试注射期间的它们的机械性能。制备了由30vol％的造影剂350mg碘/ml和70vol％的生理盐水溶液构成的溶液。使用20-ml注射器抽取20ml的该溶液，平行地使用3-ml注射器从如上所述的灭菌瓶中抽取2ml的沉积ms。
[0344]
将两个注射器(3ml和20ml)连接到三通龙头。通过在两个注射器之间来回移动约15次，将ms悬浮在上述混合物中。
[0345]
3-ml注射器用于将ms悬浮液溶液注射到2.8f(泰尔茂株式会社(terumo))或4f或5f(泰尔茂株式会社)型微导管中。
[0346]
实例1：通过直接悬浮聚合合成根据本发明的微球(ms)(900-1200μm)
[0347]
将水解的聚乙烯醇和氯化钠的水溶液倒入反应器，然后加热至50℃。然后将含有溶解于甲苯中的聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯(m-pegma)(亲水性单体)、聚(乙二醇)二甲基丙烯酸酯(pegdma)(交联剂)、着色的单体、甲基丙烯酸(已电离的或可电离的单体)、转移剂和aibn(引发剂)的有机相送入反应器中。使用螺旋桨式搅拌器以合适的速度进行搅拌，以获得所需直径的液滴。然后将温度增加至80℃，并且继续搅拌12小时。然后将混合物在40μm筛上过滤以收集ms。然后将由所述筛保留的ms用丙酮洗涤3次，然后用水洗涤3次。然后将这些洗涤后的ms在900μm筛与710μm筛之间筛分。然后将在这两个筛之间收集的ms在高压釜中在121℃下灭菌20分钟，这将具有使ms溶胀并获得所需尺寸的ms(即在这种情况下为900到1200μm)的效果。
[0348]
通过上述方法合成的微球具有以下组成(表1和1bis)：
[0349][0350]
表1
[0351][0352]
ht：1-己烷硫醇，tga：巯基乙酸，dodec：1-十二烷硫醇，btcm：溴三氯甲烷
[0353]
表1bis
[0354]
实例2：来自实例1的微球的尺寸
[0355]
灭菌后测量批次1至9和l9中的每一个的微球的平均直径，以评估转移剂浓度对ms尺寸的影响。
[0356]
将ms根据以上描述的程序来杀菌。
[0357]
图1显示了每批经校准的ms(900-1200)灭菌后的平均直径。
[0358]
随着ht浓度的增加(批次1、2、3、4、5、6和7)，灭菌后ms的直径从923μm增加到1259μm。微球中含有的转移剂越多，其尺寸越大。
[0359]
实例3：来自实例1的无缺陷微球的百分比
[0360]
通过上述方法，在包含不同浓度ht作为转移剂或不同种类转移剂(批次1至9和l9)的尺寸为900-1200μm的ms样品上计算缺陷ms的百分比。结果显示于图2中。
[0361]
从0％到1.5％的ht(批次1到4)，无缺陷ms的百分比从89％到91％变化。从1.5％的转移剂开始，该百分比增加并在3％的转移剂(批次5、8、9和l9)达到最大(超过95％)。
[0362]
缺陷的类型取决于微球中转移剂的浓度而不同。图3显示了最常观察到的形态学缺陷的两个示例。在ht浓度在ht的0％与1.5％之间时，ms最常见的是破裂(b)或变形(c)。
[0363]
当ms中ht的浓度为6％或更高时，会有大量具有爆裂的ms(参见图3)。
[0364]
实例4：来自实例1的微球的干提取物
[0365]
图4显示了通过上述方法计算的随转移剂浓度或性质而变化的ms干提取物(mg/ml)。
[0366]
当ht浓度增加时(批次1、2、3、4、5、6和7)时，给定体积的ms的干提取物(mg)线性降低。批次l9的ms的干提取物为约101mg/ml。无转移剂时，1ml的沉积ms的干质量为约159mg。
在6％的ht下，该干提取物仅为约52mg。
[0367]
实例5：来自实例1的微球的溶胀度
[0368]
通过上述方法对批次1至9和l9测定微球的溶胀度，以评估转移剂的浓度和性质的影响。结果显示于图5中。可以看到随着ht浓度的增加，所获得的溶胀度增加。
[0369]
对于0％与6％之间的ht浓度，按重量计的溶胀度从7增加至26g/g。对于批次l9的ms，溶胀度为约8.88％。
[0370]
因此，不含转移剂的ms溶胀较小并且具有非常高的干质量。这些数据表明，所测试的各种转移剂给出了合适的溶胀度。
[0371]
实例6：来自实例1的微球的流变性和可压缩性
[0372]
微球的可压缩性可以通过用上述方法测量杨氏模量来表征。图6示出了批次1至9的杨氏模量。用方法编号2测量杨氏模量得到的结果非常相似。
[0373]
可以看出，随着ht的浓度从0％增加到3％，杨氏模量从约13kpa下降到约6kpa，然后在较高的浓度(4.5％和6％)下达到约6kpa的平稳状态。
[0374]
含有0％与0.5％之间的ht(批次1至4)的ms更加坚固和坚硬，不适合注射。从1.5％的ht开始，ms的杨氏模量值低于本发明的目标极限10kpa，因此更软、更柔性。从3％的浓度开始，ms变得更软、更柔性。
[0375]
在转移剂浓度相等(此处为3％)的情况下，所有的ms都有约6kpa的相同的平稳值。
[0376]
当转移剂的浓度在1.5％与小于6％之间时，ms的可压缩性使其适合通过微导管注射。
[0377]
实例7：将来自实例1的微球注射到微导管中
[0378]
将ms的批次1至9和l9中的每一个注射到4fr和5fr微导管中。未观察到阻塞。
[0379]
对于批次7(6％的ht)，ms不耐受制备用于注射，它们都破裂了。因此，使用6％的转移剂获得的ms的机械特性与微导管注射不兼容。
[0380]
实例8：通过直接悬浮聚合合成旨在根据本发明装载的微球(100-300μm)
[0381]
将水解的聚乙烯醇和氯化钠的水溶液倒入反应器，然后加热至50℃。然后将含有溶解于甲苯中的聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯(m-pegma)(亲水性单体)、聚(乙二醇)二甲基丙烯酸酯(pegdma)(交联剂)、甲基丙烯酸(ma)(可电离的单体)、己烷硫醇(ht)(转移剂)、紫色染料(1-(4-((2-甲基丙烯酰基氧基乙基)氧基)苯基氨基)蒽醌)、铁纳米颗粒悬浮液和aibn(引发剂)的有机相送入反应器中。使用螺旋桨式搅拌器以合适的速度进行搅拌，以获得所需直径的液滴。然后将温度增加至80℃，并且继续搅拌8小时。然后将混合物过滤，并且将微球用丙酮洗涤，然后用水洗涤，然后筛分，并且高压灭菌。
[0382]
下表2呈现了有机相和水相的主要参数和组成：
[0383][0384]
表2
[0385]
实例8bis：通过直接悬浮聚合合成根据本发明的不含可电离单体的微球(ms，900-1200μm)以及装载能力的评估
[0386]
合成900-1200μm微球
[0387]
将水解的聚乙烯醇和氯化钠的水溶液倒入反应器，然后加热至50℃。然后将含有溶解于甲苯中的聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯(m-pegma)(亲水性单体)、聚(乙二醇)二甲基丙烯酸酯(pegdma)(交联剂)、着色的单体、己烷硫醇(转移剂)和aibn(引发剂)的有机相送入反应器中。使用螺旋桨式搅拌器以合适的速度进行搅拌，以获得所需直径的液滴。然后将温度增加至80℃，并且继续搅拌12小时。然后将混合物在40μm筛上过滤以收集微球。然后将由所述筛保留的微球用丙酮洗涤3次，然后用水洗涤3次。然后将这些洗涤后的微球在900μm筛与710μm筛之间筛分。然后将在这两个筛之间收集的微球在高压釜中在121℃下灭菌20分钟，这将具有使微球溶胀并获得所需尺寸的微球(即在这种情况下为900到1200μm)的效果。通过上述方法合成的微球具有以下组成：
[0388]
下表3呈现了有机相和水相的主要参数和组成：
[0389][0390]
表3
[0391]
表征：
[0392]
干提取物(干重)如下确定：将1ml的沉积ms置于5-ml eppendorf小瓶中，在-80℃下冷冻，并且在冻干机(hetoll 1500，赛默飞世尔科技公司(thermo scientific))中冻干过夜。然后测量冻干后微球的重量。对三个样品进行测量，取平均值作为ms干质量的最终值。
[0393]
通过分析2000个微球(morphologi 4，马尔文公司)的显微镜图像来测量平均直径。
[0394]
使用预先悬浮在10ml的碘化造影剂(70％的300，加柏公司，30％的生理盐水溶液)中的1ml的微球沉淀物进行微导管中可注射性的测试。然后将3-ml注射器中的微球的均匀悬浮液注入微导管。选择由泰尔茂株式会社公司提供的微导管，使其内径略大于微球的平均直径。记录微球注入微导管期间的阻力(表3bis)。注射过程中的阻塞将表明注射失败。注射后，用显微镜观察微球，以验证微球是否恢复其球形。
[0395]
表征的结果：
[0396][0397]
表3bis
[0398]
还合成了不含甲基丙烯酸的100-300μm微球(与实例8中的微球组成相同，其中甲基丙烯酸(ma)为0％，m-pegma为94.96％)，然后通过高压灭菌。评估它们装载阿霉素的能力，并将其与根据实例8合成的微球进行比较。
[0399]
装载阿霉素：装载的目标是37.5mg阿霉素/ml微球。为此，将3.8ml的阿霉素-hcl(辉瑞公司(pfizer))水溶液以2.5mg/ml添加至250μl的湿微球沉积物中。通过倒置混合后，用碳酸氢钠(lavoisier公司)将悬浮液补足至6mm。在室温下进行装载，伴随搅拌一小时。测量上清液中阿霉素的残留量(490nm处的吸光度)，以确定微球上的药物装载
量。
[0400]
结果(表4)：
[0401][0402]
表4
[0403]
通过以下公式计算装载效率：
[0404][0405][0406]
lc：装载能力
[0407]
le：装载效率
[0408]m药物初始
：药物溶解量
[0409]c药物_上清液
：装载后上清液中的药物浓度
[0410]v上清液
：上清液的体积
[0411]vms
：微球的体积
[0412]
无甲基丙烯酸的装载效率为82.6％，相比之下在30％的甲基丙烯酸存在下装载效率为99.6％。无可电离的单体的微球装载阿霉素的能力可以通过疏水或范德华键的建立来解释。在可电离的单体的存在下，除这些键外，阿霉素还通过静电键装载。动力学和负载能力由此得到改善。
[0413]
实例9：通过直接悬浮聚合合成根据本发明的含有5％maoetib的呈尺寸为700-900μm的微球形式的聚合物
[0414]
将水解的聚乙烯醇和氯化钠的水溶液倒入反应器，然后加热至50℃。然后将含有溶解于甲苯中的聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯(m-pegma)(亲水性单体)、聚(乙二醇)二甲基丙烯酸酯(pegdma)(交联剂)、甲基丙烯酸(ma)(可电离的单体)、maoetib(卤化单体)、己烷硫醇(转移剂)、紫色染料(1-(4-((2-甲基丙烯酰基氧基乙基)氧基)苯基氨基)蒽醌)和aibn(引发剂)的有机相送入反应器中。使用螺旋桨式搅拌器以合适的速度进行搅拌，以获得所需直径的液滴。然后将温度增加至80℃，并且继续搅拌12小时。然后将混合物过滤，并且将微球用丙酮洗涤，然后用水洗涤，然后筛分，并且高压灭菌。
[0415]
下表5呈现了有机相的主要参数和组成。
[0416][0417]
表5.
[0418]
实例10：将来自实例9的微球悬浮在造影剂与生理盐水溶液的50/50混合物中，并与不含maoetib的等效微球进行比较
[0419]
将2ml的珠沉积物添加到10ml的50/50生理盐水溶液/造影剂(5ml的300mgl/ml和5ml的生理盐水溶液)的混合物中。使用20-ml注射器将混合物通过三通龙头5次。
[0420]
然后将含有混合物的注射器竖直放置，观察到混合物的不稳定情况；微球上升到表面。测量到达注射器中间高度的不稳定界面所对应的时间。
[0421]
对于尺寸为700-900μm的不含maoetib的颗粒，该时间为20秒，而对于含有5％的maoetib的颗粒为120秒。如果添加7％的maoetib，该不稳定时间甚至增加到220秒。
[0422]
maoetib的存在使得能够稳定悬浮液。
[0423]
实例11：通过直接悬浮聚合合成各种类型的呈尺寸为700-900μm的微球形式的聚合物
[0424]
合成
[0425]
将水解的聚乙烯醇和氯化钠的水溶液倒入反应器，然后加热至50℃。然后将含有溶解于甲苯中的亲水性单体、交联剂、着色的单体、转移剂、卤化单体(如果适用)、可电离的单体(如果适用)和aibn(引发剂)的有机相送入反应器中。使用螺旋桨式搅拌器以合适的速度进行搅拌，以获得所需直径的液滴。然后将温度增加至80℃，并且继续搅拌12小时。然后将混合物在40μm筛上过滤以收集微球。然后将由所述筛保留的微球用丙酮洗涤3次，然后用水洗涤3次。然后将这些洗涤后的微球在900μm筛与710μm筛之间筛分。然后将在这两个筛之间收集的微球在高压釜中在121℃下灭菌20分钟，这将具有使微球溶胀并获得所需尺寸的微球(即在这种情况下为700到900μm)的效果。下表6呈现了有机相的主要参数和组成。
[0426][0427]
表6
[0428]
表征和结果：
[0429]
以与实例8bis中相同的方式进行表征，结果列于表7中。
[0430][0431]
表7.
[0432]
实例12：通过直接悬浮聚合合成根据本发明的含有不同量的maoetib的呈尺寸为100-300μm的微球形式的聚合物
[0433]
合成：
[0434]
将水解的聚乙烯醇和氯化钠的水溶液倒入反应器，然后加热至50℃。然后将含有溶解于甲苯中的聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯(m-pegma)(亲水性单体)、聚(乙二醇)二甲基丙烯酸酯(pegdma)(交联剂)、甲基丙烯酸(ma)(可电离的单体)、maoetib(卤化单体)、己烷硫醇(转移剂)、紫色染料(1-(4-((2-甲基丙烯酰基氧基乙基)氧基)苯基氨基)蒽醌)和aibn(引发剂)的有机相送入反应器中。使用螺旋桨式搅拌器以合适的速度进行搅拌，以获得所需直径的液滴。然后将温度增加至80℃，并且继续搅拌12小时。然后将混合物过滤，并且将微球用丙酮洗涤，然后用水洗涤，然后筛分，并且高压灭菌。
[0435]
下表8呈现了有机相的主要参数和组成。
[0436][0437]
表8.
[0438]
实例13：将来自实例12的含有不同水平maoetib的微球悬浮在造影剂与生理盐水溶液的50/50混合物中
[0439]
将2ml的珠沉淀物添加到10ml的50/50生理盐水溶液/造影剂(5ml的350mgl/ml和5ml的生理盐水溶液)的混合物中。使用20-ml注射器将混合物通过三通龙头5次。然后将含有混合物的注射器竖直放置，基于maoetib的浓度，通过起泡或通过沉积观察混合物的不稳定情况。测量到达注射器中间高度的不稳定界面所对应的时间。结果呈现在表9中。
[0440]
微球maoetib％中间高度的不稳定时间不稳定类型l1306min起泡l14512min起泡l15202.5min沉积
[0441]
表9.
[0442]
添加少量maoetib可以通过使微球的密度更接近悬浮介质的密度来延迟起泡。然而，超过一定浓度后，微球的密度变得太高，并迅速沉积。